Sunteți pe pagina 1din 83

Biologie celular i molecular

CAPITOLUL 1
INTRODUCERE N BIOLOGIA CELULAR I MOLECULAR
Importana disciplinei
Celula- definiie, etape importante n evoluia celular
Comparaii ntre celulele procariote i eucariote
Repere istorice

n ultimele decenii biologia celular s-a conturat ca o disciplin de sine stttoare i


ofer posibilitatea de a ntelege att diversitatea ct i unitatea proceselor moleculare ce
se desfoara n celula vie, ct i masura n care structura i infrastructura organitelor
celulare condiioneaz aceste procese moleculare.
Biologia celular i molecular, s-a constituit ca disciplin fundamental biomedical pe
plan internaional, n ultimele 3-4 decenii ale secolului nostru, ca rezultat al revoluiei
tehnico-tiintifice.
Ea constituie astzi, fundamentul tuturor disciplinelor care au ca obiect de studiu, viaa.
Cunotinele acumulate n domeniul biologiei celulare i moleculare se rsfrng asupra
tuturor celorlalte discipline medicale, de aceea n cadrul studiului universitar nsuirea lor
este foarte important n procesul de formare a gndirii medicale.
nelegerea mecanismelor celulare i moleculare precum i modul n care
modificrile acestora produc diverse afeciuni umane, va permite prevenirea,
tratamentul i vindecarea acestor afeciuni.
Disciplina biologie celular, ramur a biologie s-a dezvoltat pe fundalul mai multor
discipline de baz, ca o necesitate obiectiv n explicarea fenomenelor biologice
fundamentale (naturale sau patologice) de o complexitate deosebit. Aceasta face ca
metodologia acestei discipline s fie comun s-au s interfereze n mod evident cu cea a altor
discipline: chimia, fizica, biochimia.
Ca i importan biologia celular i molecular este o tiin cu numeroase aplicaii
practice n mai multe domenii de baz, n afar de cel medical, cum ar fi biotehnologia,
agricultura, biologia.
Celula este unitatea structural i funcional a unui organism. Cea mai simpl definiie
ar fi:
Celula = o unitate de dimensiuni foarte mici, nvelit n membran, plin cu o soluie
apoas n care sunt concentrate substane chimice. Aceast unitate posed capacitatea de a
se autoreproduce, capacitate care confer acestei structuri statutul de structur vie.
Cea mai simpl form de existen a vieii este un organism al crui corp este format
dintr-o singura celul care ndeplinete toate funciile de baz ale unui organism complex.
[note curs]

Page 1

Biologie celular i molecular

Trecerea ctre formele complexe actuale s-a fcut n cursul evoluiei de la simplu la
complex, n condiiile diversificrii modului de hrnire ct i prin extinderea mediilor de
via.
Primele organisme vii au aprut acum 3,8-3,5 miliarde de ani, cu aproximativ un
miliard de ani dup ce a fost format Pamntul. Primele etape au constat n formarea
moleculelor organice, n condiiile speciale cnd n atmosfer nu exista oxigen. Se pare c
amestecul de CO2, N2, H2, SH2 i CO, n prezena unei surse electrice ar fi permis formarea
de molecule organice (aminoacizi) care ulterior au polimerizat formndu-se macromolecule
de acizi nucleici i proteine.
Existena vieii este condiionat de posibilitatea unor macromolecule organice de tipul
acizilor nucleici, de a nregistra informaia genetic. Ca urmare caracteristica esenial a
organismelor vii, de tip acelular sau celular, este existena unui program genetic
alctuit dintr-un numr variabil de uniti ereditare de baz numite gene
Teoria lui Muller, 1923 numit teoria genotipului, conform
creia viata a aprut odat cu formarea abiotic a uneia sau mai
multor gene. Dup Muller proprietile minimale ale unui sistem
biologic i n primul rnd activitatea metabolic i capacitatea de
replicare sunt potenial nscrise n structura genelor, care plasate
intr-un mediu molecular propice, cum ar celula pot codifica procesul
de cretere i multiplicare.
n aceste gene este codificat
biochimic informaia necesar realizrii
caracteristicilor anatomo-morfologice, fiziologice i biochimice ale tuturor formelor de
via de pa Pmnt.
Formele cele mai simple sunt de tip acelular, cum sunt virusurile i viroizii, acestea au
un program genetic alctuit din numai cteva gene sau zeci de gene (virusul MS 2 are 4 gene
ce formeaz o molecul de acid nucleic, bacteriile au n jur de 3000 de gene dispuse ntr-un
cromozom circular, plantele au n jur de 15.000 de gene, iar mamiferele zeci de mii, la om
sunt se pare, 25.000).
Viroizii sunt o categorie de structuri subvirale cu aciune patogen descoperii recent, a
cror informaie genetic e stocat ntr-o molecul de ARN ( ex. viroidul cu 359 nucleotide
produce boala stelrii la cartof similari sunt i viroizii care produc maladiile Kuru i
Kreutzfeld Jacob a cror efect este degenerescena sistemului nervos).
O alt categorie de structuri simple (forme acelulare) de via este reprezentat de
plasmide, care sunt macromolecule de ADN bicatenar circular sau linear, acestea au fost
descoperite de J. Lederberg (1952) la bacterii. Plasmidele au program genetic n care se
gsete informaia necesar autoreplicrii lor n interiorul celulei gazd, precum i diverse
gene care determin, de pild capacitatea bacteriilor de rezisten la antibiotice, la compui ai
metalelor grele sau la diverse toxine.
Aceste forme au capacitatea de a se replica independent de materialul genetic al celulei
gazd i au capacitate de autoreglare i autodezvoltare, pstrndu-se legtura cu genomul
celulei gazd, printr-un flux informativ, care permite adaptarea la mediu i respectiv
evoluie. Cel mai clar exemplu este adaptarea la antibiotice a bacteriilor, aspect mult discutat
n ultimul timp ca urmare a implicaiilor medicale.

[note curs]

Page 2

Biologie celular i molecular

Descoperirea i acestor tipuri acelulare a contribuit la nelegerea importanei acizilor


nucleici n stocarea, nregistrarea, conservarea i transmiterea informaiei ereditare n evoluia
sistemelor biologice.
Exist cteva etape importante care pot sintetiza sensul evoluiei lumii vii:
1- Macromolecula de ARN (acid ribonucleic) a nsemnat cheia succesului n
formarea unor structuri reproductibile. Aceast ARN primitiv avea posibilitatea
de a cataliza anumite reacii chimice ceea ce a dus la repetarea i ntreinerea
unor anumite sinteze. Astfel, s-a ajuns la autoreplicare, la formarea de molecule
asemntoare. Acest stadiu este denumit lumea ARN (Lazcano, Miller, 1996).
2- O alt etap important a fost apariia membranei care a delimitat
macromolecula de ARN, membran format din asocierea de fosfolipide.
Aceasta fiind schema cea mai simpl a apariiei celulei primitive.
3- apariia ADN- proteinele preiau rolul de catalizatori, iar ARN rmne
intermediarul dintre proteine i ADN. Achiziia ADN (acid dezoxiribonucleic) a
permis stocarea i transmiterea de informaie. A fost creat o demonstraie
experimental a lui Orgel, 1971.
4- Odata cu perfecionarea acestor elemente a fost necesar crearea de mecanisme
proprii pentru a genera energie i pentru a sintetiza moleculele necesare
autoreplicrii. Astfel, generarea i utilizarea controlat a energie metabolice
este o alt etap deosebit de important pentru activitile celulare.
Sursa de energie metabolic pentru toate celulele este adenozin 5-trifosfat (ATP),
indiferent c este o celul vegetal sau animal.
Se pare c mecanismele utilizate de celule pentru a genera ATP au evoluat n trei
direcii care corespund evoluiei glicolizei, fotosintezei i metabolismului oxidativ.
Dezvoltarea acestor trei ci metabolice au schimbat atmosfera i a modificat direcia de
evoluie ulterioar.
Glicoliza
Glucoza (C6H12O6)

2 C3H6 O3 (ac. lactic) + 2 ATP

Fotosinteza
6CO2 +6H2O

C6H12O6 +6O2
Metabolismul oxidativ

C6H12O6 +6O2

6CO2 +6H2O + 36-38 ATP

Eliberarea de oxigen prin procesul fotosintezei a schimbat total mediul i a dus la


apariia metabolismului oxidativ. Acest metabolism oxidativ a furnizat un avantaj selectiv
organismelor capabile s utilizeze oxigenul n reaciile care produc energie. Acest mecanism
este mult mai eficient dect glicoliza anaerob.

Comparaii ntre celulele procariote i eucariote


Procariotele sunt forme de tipul archebacteria i eubacteria. Corpul este format dintr-o
celul (1m) al crui nucleu nu este individualizat, lipsesc anumite organite celulare

[note curs]

Page 3

Biologie celular i molecular

specializate i citoscheletul, au n jur de 3000 de ribozomi, iar cromozomii sunt reprezentai


de 1 singura molecul de ADN circular (Tabel 1.1).
Anumite archebacterii triesc n condiii de mediu extreme cum ar fi apele sulfuroase,
termale (800C) a cror aciditate este sub 2.
Eubacteriile sunt forme comune de bacterii care triesc n toate mediile, inclusiv n
corpul altor organisme, cu efect patogen sau nu, de exemplu, la animalele ierbivore prezena
bacteriilor n tubul digestiv asigur digestia celulozei.
O bacterie, n condiii optime de hran i temperatur, se poate diviza n 20 minute. n
cteva ore, prin repetarea diviziunilor, se pot forma 5 miliarde de celule (ct populaia
Globului).
Aceast capacitate de nmulire permite pe de o parte capacitatea de a evolua n sensul
uzitrii de noi surse de hran, ct i pentru a-i dezvolta noi mecanisme de rezisten (de pild
la antibiotice).
Eucariotele sunt restul organismelor, care prezint o organizare mai complex (Tabel
1.1). Ceea ce d i denumirea lor este prezena unui nucleu individualizat, n care ADN este
dispus liniar i nu circular. La acest nivel este realizat replicarea ADN, sinteza ARN i mai
departe informaia este transmis ctre proteine de la ARN (n ribozomi) la nivelul
citoplasmei.
Eucariotele au aprut cu doua miliarde de ani n urm, la aproximativ 1,5 miliarde de
ani dup apariia procariotelor. Chiar mai mult, se crede c, au evolut din asocierea cu celule
procariote prin endosimbioz (mitocondrii, plastide).
Mitocondriile se pare c sunt bacterii endosimbionte, pentru celule primitive eucariote,
care s-au specializat i transformat n organite celulare. Un lucru foarte simplu susine acest
lucru, prezena ADN mitocondrial separat de cel nuclear. i cloroplastele din celula vegetal
au acelai ADN propriu i aceeai origine simbiotic (provin din simbioza cu bacterii
fotosintetizante de tipul cianobacteria), doar c nu apar la fungi i animale.
Teoria bacterian a plastidelor i mitocondriilor a fost
postulat pentru prima dat de ctre Schimper, 1883 i respectiv
Altman (1890), descoperitorii acestor organite.
L. Segan, Margulis (1967, 1981) consider c celula eucariot
apare ca o unitate ecologic n care coexist dou genomuri (nuclear
i mitocondrial), n celula animal i trei genomuri, n cea vegetal
(nuclear, mitocondrial i plastidial) care interacioneaz i formeaz
un sistem biologic integrat.
Multe din organismele eucariote sunt forme unicelulare, care asemntor bacteriilor,
(procariote) au posibilitatea autoreplicrii. Cele mai simple dintre eucariotele unicelulare sunt
drojdiile (fungi unicelulari), care sunt mai complexe dect bacteriile, dar mult mai
simplificate i mai mici dect animalele i plantele.
Un alt grup, care are i statut de intermediar ntre lumea animal i cea vegetal este
grupul euglenelor. Acestea sunt protozoare (dup zoologi) sau protofite (dupa botaniti) care,

[note curs]

Page 4

Biologie celular i molecular

dei foarte simple, fiind unicelulare, au un ADN cu 3000 de milioane de perechi de baze, ca
i ADN uman, ceea ce indic o complexitate funcional.
Tabel 1.1 Elemente comparative ntre celula procariot i cea eucariot
(Zamfirescu, 1999)
Diferente la
nivel structural
i funcional

Celula procariot

Nucleu

Nu au nucleu tipic, materialul


nuclear (nucleoidul) nu este
delimitat de o membran nuclear
i este constituit dintr-o singur
molecul circular nchis de
ADN, care reprezint un
cromozom unic

Organite
celulare

Ribozomi

Perete celular

Diviziunea
celular

Unele celule posed sisteme


membranoase mai mult sau mai
puin dezvoltate (mezozomi,
lamele fotosintetizante) provenite
din membrana citoplasmatic.
Absente
70s (subuniti 50s i 30s)
n general este prezent (lipsete
la micoplasme i formele L)
avnd o component
caracteristic, peptidoglicanul, n
compoziia cruia intr acidul Nacetil muramic (cu unele excepii)
Diviziunea direct (amitoza).
nmulirea sexuat este foarte rar,
situaie n care zigotul (merozigot)
se formeaz prin recombinare
genetic
Nu prezint fenomenul de
endocitoz i nu au vacuole
digestive intercelulare.

Alte diferene

Nu au capacitatea de difereniere
celular dect foarte rar i limitat.
Nu au capacitate de a forma
organisme pluricelulare.

Celula eucariot
Au nucleu tipic cu nucleol i
membran nuclear.
Cromozomii sunt mai muli,
numrul lor fiind constant pentru
o specie dat.
n timpul diviziunii se formeaz
aparatul mitotic.
Sunt prezente mitocondriile,
lizozomii, reticulul
endoplasmatic, aparatul Golgi,
etc.
80s (subuniti 60s i 40s)
Este prezent la levuri i plante
(avnd structur distinct de a
procariotelor) i absent la
celulele animale.
Diviziune indirect (mitoz,
cariokinez) cu faze
caracteristice.
nmultirea sexuat este
frecvent, zigotul formndu-se
prin meioz.
Pot prezenta endocitoz, i pot
avea vacuole digestive
intracelulare.
Au capacitate de difereniere
celular.Formeaz frecvent
organisme pluricelulare.
Dimensiuni mari.

Dimensiuni foarte mici

[note curs]

Page 5

Biologie celular i molecular

Organismele pluricelulare au evoluat, cu aproximativ 1 miliard de ani n urm, din


eucariote unicelulare, prin formarea de structuri multicelulare, care ulterior au trecut la
diferenierea morfofuncional a celulelor din agregatul respectiv, ceea ce a nsemnat un pas
decisiv n evoluia pluricelularelor.
Specializarea celular a nsemnat un proces continuu. Azi se cunosc, de pild, la om
200 de tipuri de celule, care au forme, funcii i structuri diferite. Aceste modificri de
specializare fac ca o celul de acest tip s-i piard ansa de supravieuire n condiii solitare.
n organismul pluricelular exist o distribuie specific a activitilor pe care trebuie s le
ndeplineasc celulele, iar acestea devin dependente de restul corpului.
Cu toate acestea exist o unitate structural i funcional, indiferent de grupul i
de stadiul evolutiv al organismului respectiv eucariot i anume prezena ADN. Acesta
are acelai cod chimic, acelai mecanism de duplicare, aceleai subuniti chimice
(moleculare). ADN dirijeaz producia de proteine, care la rndul lor induc comportamentul
celular servind ca i material structural, catalizatori chimici, ori molecule motorii.
O alt categorie ce confer unitate lumii vii este prezena unui set de 20 aminoacizi
care formeaz proteinele. Diversitatea proteinelor fiind dat doar de modul diferit de
legare ntre aminoacizi.

Scurt istoric
SCHLEIDEN I SCHWANN n 1838, descoper celula i impune
doctrina celular, nceputul biologiei celulare.
ALBERT VON KLLIKER, 1857, descrie prima dat mitocondria n
muchi, dar abia n 1890, RICHARD ALTMANN evideniaz
mitocondria n limfocite si identific autonomia genetic i funcional.
Denumirea este introdus de CARL BENDA pe baza morfologiei (mitos
gr=fir, kondrion gr.= granul).
Aparatul Golgi (sau dictiozomul) este un organit celular gsit la
majoritatea eucariotelor, situat n centrul celulei. A fost identificat, n
1898, de ctre doctorul italian Camillo Golgi.
GEORGE EMIL PALADE (n. 19 noiembrie 1912, Iai d. 8 octombrie
2008) a fost un medic i om de tiin american de origine romn,
specialist n domeniul biologiei celulare, Laureat al Premiului Nobel
pentru Fiziologie i Medicin n anul 1974.
De asemenea, Dr. George E.Palade a fost premiat n 1986, n Statele
Unite, cu Medalia Naional pentru tiin -- n biologie (National Medal
of Science) pentru: "descoperiri fundamentale ('pioneering') a unei serii
eseniale de structuri supercomplexe, cu nalt organizare, prezente n
toate celulele vii", (inclusiv cele umane), descoper ribozomii numii
astfel i corpusculii lui Palade (corpusculi generai de nucleoli i
constituii din ARN), evideniaz exocitoza i endocitoza, descifreaz
sinteza proteinelor.

[note curs]

Page 6

Biologie celular i molecular

coala romneasc de biologie i medicin, are o bogat contribuie la


cunoaterea structurilor histologice i citologice, actualul obiect de studiu
al biologiei celulare i moleculare.
CREULESCU N. (1812-1900), fondatorul colii medicale romneti,
care a predat la Scoala de microscopie din Bucureti. In cadrul acestei
coli au activat nume mari ale medicinii romneti printre care amintim:
LUDOVIC F. (1831-1918), POLIZU G. (1881-1868), OBEDERANU
M. (1839-1880), PETRINI GALATZ M. (1879-1893).
colile de citologie de la Facultile de Medicin Uman, de tiine, de
Medicin Veterinar din Bucureti au contribuit cu realizri tiinifice
memorabile, care s-au nscris n circuitul mondial de idei. In acest sens,
cele mai reprezentative personaliti tiinifice sunt: V. BABE (18541923), I. CANTACUZINO (1863-1934), GHE. MARINESCU (18631938) i alii.

[note curs]

Page 7

Biologie celular i molecular

CAPITOLUL 2
COMPOZIIA CHIMIC A CELULEI
Substanele organice
Bazele moleculare ale organizrii biochimice a celulelor
Apa i ionii anorganici
Celulele sunt alctuite dintr-un numr limitat de elemente chimice dintre acestea
C,N,H,O,P,S reprezint un procent de 99%. De asemenea, elementul cel mai important din
celul este apa care se gsete n proporie de 70% sau chiar mai mult. Tinnd cont c
reaciile chimice se desfoar la acest nivel sunt foarte importante interaciunile dintre ap i
ali compui chimici.
Apa dei are un echilibru dintre protoni i electroni este o molecul polar deoarece
nucleul atomului de oxigen atrage parial electronii atomilor de hidrogen lsnd nucleul
acestora cu ncarcare slab pozitiv, iar densitatea excesiv a electronilor atomilor de oxigen
creaz o regiune opus slab negativ. Doarece sunt dou legturi O-H, molecula de ap este
un dipol electrostatic (Figure 2.1) ce formeaz interaciuni noncovalente cu alte molecule.

Figura 2.1 Evidentierea caracterului polar al moleculei de ap prin diferenierea


celor 2 zone (electropozitiva i electronegativa)

Din cauza naturii polare a moleculelor de ap, se pot forma legturi de hidrogen att
ntre moleculele de ap ct i cu alte tipuri de molecule polare, ele interacionnd cu ioni
ncrcai pozitiv sau negativ.
Ca rezultat al acestor interaciuni, ionii i moleculele polare sunt uor solubile n ap
(hidrofile). n schimb, moleculele nepolare care nu pot interaciona cu apa nu sunt solubile
sau slab solubile n mediul apos (hidrofobe). Moleculele nepolare au tendina s reduc ct
mai mult contactul cu apa asamblndu-se ntre ele.
Legturile de hidrogen confer apei o cretere a capacitii calorice care realizeaz
fenomenul ecranrii termice, si apr structurile celulare de efectul reaciilor exotermice.
Moleculele de ap formeaz nveliurile de hidratare a ionilor.

[note curs]

Page 8

Biologie celular i molecular

Apa se afl n proporie de 5% ca i ap legat chimic de alte molecule proteine,


lipide, glucide. Restul este ap liber care reprezint mediul de dispersie i sediul
numeroaselor procese metabolice.
Ionii anorganici din celul (de sodiu, potasiu, magneziu, calciu, fosfat, clor, anionul
bicarbonic) constituie 1% sau chiar mai puin din masa celular. Aceti ioni sunt implicai n
metabolismul celular i au roluri importante n funcionarea celulei.
In soluiile apoase, ionii cu semnificaie biologic (Na+, K+, Ca2+, Mg2+ , Cl-) nu
exist liberi, ca entiti izolate. Fiecare este hidratat, nconjurat de molecule de ap, ca urmare
a interaciunilor dintre ionul central i dipolul apei.
Parial sau total nveliul de hidratare se poate ndeprta de lng ioni cnd acetia
interacioneaz cu proteinele.
Apa de hidratare este ndeprtat de la suprafaa ionilor
atunci cnd acetia trec prin porii membranei celulare, n timpul
transmiterii nervoase.
Ionii anorganici intervin n meninerea presiunii osmotice i echilibrul acido-bazic,
influeneaz activitatea enzimelor i a altor proces e celulare cum ar: permeabilitatea
periferiei celulare, excitabilitatea, vscozitatea citoplasmei, contractibilitatea i diviziunea
celular.
Carbonul este un element deosebit de important datorit capacitii sale de a forma
molecule mari. Atomii de carbon datorit dimensiunilor mici, dar i pentru c prezint patru
electroni de legtur pe orbitalul extern, pot realiza patru legturi covalente puternice cu ali
atomi. Pentru sistemele celulare, carbonul are capacitatea de a forma legturi covalente
strnse cu ali atomi de carbon formndu-se lanuri de carbon liniare, ramificate sau inelare.
Dac n interiorul unui inel de carbon apare fenomenul de rezonan, se regenereaz
un inel aromatic. Carbonul i hidrogenul, legai ntre ei prin legturi covalente formeaz
compui stabili numii hidrocarburi (substante nepolare, insolubile n ap).
Prin legarea carbonului cu azotul se formeaz ali compui: aminele i amidele. n
ap, aminele se combin cu H+ , iar n combinaia cu un acid carboxilic se formeaz o amid.
Azotul se poate intercala i ntre atomii de carbon care formeaz moleculele ciclice. n
acest fel se formeaz constituieni importani pentru celul, cum sunt bazele azotate ale
acizilor nucleici- purinele i pirimidinele.

Moleculele organice cu importana n structurarea celulelor


Moleculele organice sunt constituienii cei mai importani ai celulei. Trei categorii
sunt considerate cele mai importante macromolecule: proteinele, acizii nucleici si
polizaharidele. Toate sunt structuri polimere compuse din molecule mai mici (monomere)
legate prin legturi covalente. Aceste legturi sunt realizate prin reacii de deshidratare, n
urma crora se pierd molecule de ap (Tabel 2.1).
Proteinele
Proteinele constituie matricea proceselor vitale care au rol reglator asupra tuturor
activitilor celulare. Rolul plastic este ndeplinit de proteinele de structur, iar catalizarea

[note curs]

Page 9

Biologie celular i molecular

reaciilor chimice din sistemele biologice este asigurat de proteinele enzime. De asemenea,
particip la transportul i depozitarea unor molecule mici (hormoni) i intervin n aprarea
organismului (anticorpii).
Rolurile structurilor proteice sunt diverse:
-particip la organizarea i desfurarea proceselor vitale;
-particip la agregarea aminoacizilor, a lanurilor polipeptidice i a altor
prostetice dnd natere la microfilamente, microtubuli, membrane, ribozomi;

grupri

- particip la transportul gazelor (oxigen, dioxid de carbon) i reprezin suportul


molecular al transportului activ (Na+,K+, ATP-aza, Ca2+, Cl-, I-, etc.
- genereaz i transmit influxul nervos n fotorecepie (rodopsina), influeneaz
fotosinteza (clorofila);
- particip la diviziune, difereniere i specializare celular;
- sunt constituieni de baz ai anticorpilor, asigurnd aprarea organismului;
- asigur transmiterea informaiei genetice ARN-ARNm-ARNr- ARNt;
- ndeplinesc funcii de rezisten i susinere (elastin, cheratin, oscina);
-dispunde o specificitate prin care recunosc molecule, macromolecule, enzimele cu
substrat, mesagerul cu receptorul, antigenul cu anticorpul.
Se formeaz prin polimerizarea aminoacizilor. Polimerii formai pot include de la zece
pn la cateva mii de aminoacizi legai prin legturi peptidice.
Fiecare aminoacid este format dintr-un atom de carbon central numit C legat la patru
grupe chimice diferite: o grupare carboxil (COOH), una amino (NH2), grupri ionizate la un
ph normal, un atom de hidrogen (H) i o grupare variabil, o caten lateral distinct
(radical-R).
Deoarece carbonul , n toi aminoacizii exceptnd glicina, este asimetric aceste
molecule pot exista sub dou forme izomere (similare ca imaginea n oglind) numite dextro
(D) i levo (L).
Aminoacizii se clasific n grupe distincte, n funcie de proprietile gruprilor R:
1- aminoacizii hidrofilici, cu grupare R ionizat la un ph=7 (arginina, lizina, acidul
aspartic, acidul glutamic);
2- aminoacizi polari neutri ai cror radicali conin amide cu capacitatea de formare a
legturii de hidrogen (aspargina, glutamina) sau gruparea OH (hidroxil) la serina i
treonina.
3- aminoacizi hidrofobi care sunt insolubili sau sunt greu solubili n ap. n cazul
acestora, radicalii conin grupri hidrocarbonate (alanina, leucina, izoleucina, metionina)
excepie fcnd atomii de sulf ai metioninei i cei de azot ai triptofanului.
Fenilalanina, triptofanul, tirozina conin grupari R cu inel benzenic fiind puternic
hidrofobe.

[note curs]

Page 10

Biologie celular i molecular

Tabelul 2.1 Legaturile covalente din structura monomerilor i polimerilor


principalelor biomolecule
Monomeri

Aminoacid

Polimeri i deshidratarea in procesul de alungire a catenei

Polipeptid

Nucleotid

Polinucleotid

Monozaharid

Polizaharid

4- aminoacizi speciali (cisteina, glicina, prolina). Cisteina conine gruparea SH


(sulfhidril) reactiv, care poate fi oxidat formnd legturi covalente S-S- ntre
dou cisteine. Aceste tipuri de legturi sunt prezente n proteinele extracelulare.
Glicina are ca i grupare R un atom de hidrogen. Aceast structura confer
moleculei posibilitile de a ocupa spaii foarte nguste.
Prolina are n structur un inel format prin legtura dintre R i gruparea amino
ataat la carbonul .
Posibilitile de combinare a celor 20 de aminoacizi n diferite secvene sunt multiple,
ceea ce explic marea varietate a proteinelor din diferite celule, care ndeplinesc multiple
roluri.Fiecare protein are o secven de aminoacizi specific. Proteinele adopt de obicei
conformaii tridimensionale distincte ca rezultat al interaciunilor dintre aminoacizii care le
compun.
Structura proteinelor are 4 nivele:
Structura primar = este dat de secvena de aminoacizi din lanul polipeptidic.
Structura secundar= este determinat de dispoziia aminoacizilor n anumite regiuni
ale polipeptidului i poate fi helix sau pachete (planuri pliate). Aceste structuri secundare
[note curs]

Page 11

Biologie celular i molecular

sunt rezultatul legturilor de hidrogen dintre gruprile carboxil (electronegativ) i gruparea


amino (electropozitiv) ale legturilor peptidice. Structura secundar se refer la forma i la
lungimea lanurilor polipeptidice.
Structura teriar este indus de plierea lanului polipeptidic ca rezultat al
interaciunilor dintre radicalii aminoacizilor, care se afl n diferite regiuni ale secvenei
primare.
n majoritatea proteinelor combinaiile n helix i pachetele conectate prin regiuni
flexibile n form de bucl ale lanului polipeptidic, se pliaz n interiorul unor structuri
globulare compacte numite domenii. Aceste domenii sunt uniti de baz ale structurilor
teriare. Proteinele mici cum ar fi ribonucleaza au un singur domeniu, iar proteinele mari
conin mai multe domenii care sunt asociate frecvent cu funcii distincte.
Poriunile interne ale proteinelor pliate sunt alctuite din aminoacizi hidrofobi aranjai
n helix sau pachete .
Cel de-al 4-lea nivel este cel al structurii cuaternare, se refer la modul cum se unesc
subunitile proteice i este determinat de interaciunile dintre diferitele lanuri polipeptidice
prezente n proteinele compuse din mai mult de un polipeptid.
Enzimele care catalizeaz asamblarea acestor subuniti poart denumirea de
holoenzime, n care o parte poart denumirea de subuniti reglatoare i subuniti catalitice.
Proteine care au structura cuaternar: hemoglobina, ADN polimeraza i canalele ionice,
dar i nucleozomi i nanotubuli, care sunt complexe multiproteice
Hemoglobina care este alctuit din 4 lanuri polipeptidice meninute mpreun prin
aceleai tipuri de interaciuni care determin structura teriar.
Conformaiile tridimensionale diferite ale proteinelor corespund funciilor variate pe
care trebuie s le ndeplineasc n celul.
Glucidele (hidraii de carbon) sunt reprezentate de monozaharide, oligozaharide i
polizaharide.
Dintre monozaharide, glucoza este substana nutritiv esenial pentru activitatea
celulei. Glucoza poate fi o surs de energie sau poate constitui precursor pentru o serie de ali
constituieni celulari.
De asemenea, glucidele au rol n procesele de semnalizare celular. Oligozaharidele
sunt asociate frecvent cu proteinele servind drept markeri pentru proteinele int care vor fi
transportate la suprafaa celulei sau pentru proteinele care vor fi ncorporate n diferite
organite celulare.
Oligozaharidele i polizaharidele sunt markeri ai suprafeei celulare pentru
recunoaterea celular i pentru interaciunile dintre celulele care alctuiesc esuturile
organismelor pluricelulare.
Formula de baz a monozaharidelor este (CH2O)n de la aceasta a derivat i denumirea
de carbohidrai. Glucidele care au mai mult de 5 atomi de carbon formeaz structuri inelari
prin dispunerea lor ciclic.

[note curs]

Page 12

Biologie celular i molecular

Monozaharidele se pot asocia prin reacii de deshidratare, n urma crora se elimin


apa, aceste glucide simple rmn legate prin legturi glicozidice care se stabilesc ntre 2
atomi de carbon.
Oligozaharidele sunt formate din 2-10 monozaharide, iar cnd sunt asociate sute sau
mii de monozaharide se formeaz polizaharidele.

glucoza

formarea legturii glicozidice

Dou polizaharide glicogenul i amidonul sunt forme de depozit ale glucidelor simple
la animale i plante, ambele fiind compuse
integral din glucoz.

Acizii nucleici sunt principalele molecule


informaionale
din
celul.
Acidul
dezoxiribonucleic (ADN) are un rol unic de
material genetic.
Al doilea acid nucleic, acidul ribonucleic
este reprezentat de 3 categorii funcionale:
ARMm (mesager) cu rol de transport al
informaiilor de la ADN la ribozomi i servete
ca matri pentru sinteza proteinelor, ARNr
(ribozomal) i ARNt (de transfer) implicate n
sinteza proteinelor.
ADN i ARN sunt polimeri ai nucleotidelor
care sunt formate din baze purinice i
pirimidinice legate de monozaharide fosforilate
(Figura 2.2). ADN conine 2 purine (adenina i
guanina) i doua pirimidine (citozina i timina).
ARN ul conine adenin , guanin,
citozin i uracil (n loc de timin).
Bazele azotate se leag de 2 dezoxiriboza
n ADN sau la riboz n ARN pentru a forma
nucleozide (adenozina, guanozina, citidina,
uridina, timidina). Nucleotidele conin una sau
mai multe grupri fosfat legate la carbonul cinci
al nucleozidului.

[note curs]

Figura 2.2 Formarea catenei


de ADN prin polimerizarea
nucleotidelor, n direcia 5-3

Page 13

Biologie celular i molecular

Polimerizarea nucleotidelor pentru constituirea acizilor nucleici implic formarea


legturilor diesterice ntre fosfatul 5 al unui nucleotid i hidroxilul 3 al celui de-al doilea.

Figura 2.3. ADN caten dubl prin stabilirea legturilor de hidrogen ntre bazele
azotate
Ceea ce este interesat n modul de realizare a legturilor e faptul c se creaz o anumit
direcie a polimerizrii: o extremitate a lanului se termin cu o grupare 3 hidroxil, iar
cealalt cu o grupare 5 fosfat, ntotdeauna creterea se face n direcia 5-3.

Tabel 2.2 Terminologia nucleozidelor i nucleotidelor funcie de bazele azotate


Baze
Tipuri de nucleozide i
nucleotide

Purine
Adenina (A)

Guanina (G)

pirimidine
Citozina (C)

Timina (T)
Uracil (U)

In ARN

adenozina

In ADN

deoxiadenozina deoxiguanozina deoxicitidina

deoxitimidina

In ARN

adenilat

guanilat

citidilat

uridilat

In ADN

deoxiadenilat

deoxiguanilat

deoxicitidilat

deoxitimidilat

Nucleozid monofosfat

AMP

GMP

CMP

UMP

Nucleozid difosfat

ADP

GDP

CDP

UDP

Nucleozid trifosfat

ATP

GTP

CTP

UTP

Nucleozide

Nucleotide

guanozina

citidina

uracil

Consecina complementaritii create este c poate deveni ADN-ul i ARNul matri


pentru sinteza unui lan complementar, direcionndu-i propria autoreplicare. De asemenea,
informaia transportat de ADN i ARN direcioneaz sinteza proteinelor specifice, proteine
care sunt implicate n activitile celulare.
[note curs]

Page 14

Biologie celular i molecular

ADN este o molecul dublu helicoidal fiind alctuit din dou lanuri polinucleotidice
care sunt antiparalele (Figura 2.3). Bazele azotate sunt dispuse n interiorul macromoleculei i
cele dou lanuri sunt unite prin legturile de hidrogen dintre perechile de baze
complementare: A-T, G-C.
Nucleotidele au i alte roluri intracelulare. ATP este principala form de stocare a
energiei chimice n celul. Alte nucleotide funcioneaz ca transportori fie ai energiei, fie ai
unor grupri chimice reactive implicate n diferite reacii metabolice, alte grupe au rol n
semnalizarea celular (AMP= adenozinmonofosfat). n funcie de bazele azotate i de
gruprile fosfat sunt mprite n categorii cu terminologie adecvat componentelor
constitutive (Tabel 2.2).

Lipidele sunt elemente importante n structura i funcionarea celular.

rol de depozitare a energiei (produc o cantitate dubl de energie fa de greutatea


materialului clivat);
componentele cele mai importante ale membranelor celulare;
au rol important n semnalizarea celular, att ca hormoni steroizi (testosteronul i
estrogenii) ct i ca particule mesager care transmit semnalul de la receptorii de pe
suprafaa celulei la inta din interiorul celulei.
Cele mai simple lipide sunt acizii grai:

au numr par de atomi de carbon;


au caten liniar, fr ramificaii;
sunt monocarboxilici;
pot fi saturai sau nesaturai.

(ac palmitic)
Acizii grasi nesaturai conin una sau mai multe legaturi duble ntre atomii de carbon, n
acizii grai saturai toi atomii de carbon sunt legai la un numr maxim de atomi de hidrogen.

(ac oleic)
Lanurile lungi hidrocarbonate de acizi grai conin numai legturi nepolare C-H care
sunt incapabile s interacioneze cu apa. Natura hidrofob a acestor lanuri explic
comportamentul lipidelor complexe n formarea membranelor celulare.
Acizii grai servesc ca pri structurale ale membranei celulare i protejeaz astfel
celula de invazia toxinelor, bacteriilor, viruilor, substanelor cancerigene i alergenilor.
Este uor de neles de ce cercetrile au legat dezechilibrul acizilor grai de o varietate
de boli cronice printre care bolile de inima, cancerul, diabetul, artrita, alergiile, problemele
legate de sistemul nervos, inclusiv tulburrile de comportament, probleme dermatologice i
diferite tulburari imunologice.

[note curs]

Page 15

Biologie celular i molecular

Acizii grai sunt depozitai sub form de trigliceride sau grsimi care sunt alctuite din
trei acizi grai legai la o molecul de glicerol. Trigliceridele sunt insolubile n ap i de
aceea se acumuleaz ca picturi de grsime n citoplasm.
Acizii grai pot forma combinaii astfel:
Fosfolipidele sunt componentele principale ale membranelor celulare i sunt alctuite
din 2 acizi grai unii la extremitatea polar.
Fosfogliceridele sunt fosfolipide la care cei doi acizi grai sunt legai la atomii de
carbon din glicerol, iar al treilea atom de C din glicerol este legat la o grupare fosfat, care la
rndul ei este ataat la o alt molecul polar mic care poate fi colina, serina, inozitolul sau
etanolamina.
Sfingomielina este singurul fosfolipid fr glicerol din membranele celulare. Ea
conine 2 lanuri hidrocarbonate, legate la captul polar format din serin fosforilil colina.
Toate fosfolipidele au cozi hidrofobe formate din dou lanuri hidrocarbonate i o
extremitate polar hidrofil (constituit din gruparea fosfat ataat la diferite grupri polare).
Ca urmare fosfolipidele sunt molecule amfipatice parial solubile i parial insolubile n
ap. Aceast proprietate este fundamental pentru formarea membranelor biologice.

Structura fosfolipid

Structura glicolipidelor

Structura colesterolului

Figura 2.4 Organizarea principalelor tipuri de lipide ntlnite n structurile celulare


Alte structuri amfipatice prezente n membranele celulare sunt glicolipidele (2 lanuri
hidrocarbonate i glucoza) i colesterolul (inele hidrocarbonate cu aciune hidrofob,
gruparea OH este slab hidrofil) (Figura 2.4), al cror rol va fi prezentat n capitolele
urmtoare.

CAPITOLUL 3

[note curs]

Page 16

Biologie celular i molecular

MEMBRANA CELULAR
Generaliti
Rolul plasmalemei
Structura molecular i macromolecular a plasmalemei
Membrana eritrocitar-model de structura
Glicocalix

n organizarea celulei eucariote intr cteva elemente constitutive de baz: membrana


celular, citoplasma n care se afl organitele celulare i nucleul. Structura si functionarea
celulelor este in stransa dependenta de membrane, att cele care separa citoplasma de mediul
extracelular ct i cele care delimiteaza organitele celulare.
Membrana celular (plasmalema) este structura care delimiteaz i menine diferenele
dintre citoplasm i mediul extracelular, prezena acestei membrane permite controlul
interaciunilor dintre celul i moleculele sau celulele nvecinate, fiind o barier selectiv
pentru pasajul moleculelor.
Protecie mecanic

Funciile
membranei
celulare

Transportor (canale ionice,


transportoare, endo i exocitoz)

proteine

Semnalizare (receptori membranari)


Rspuns imun (antigene de membran)
Adezivitate prin care se
integralitatea intercelular.

realizeaz

n afara membranei celulare externe (plasmalema) exist i structuri interne care sunt
denumite endoplasme i care delimiteaz n principal organitele celulare.
Membrana celulara mpreun cu glicocalixul (un nveli de natur glicoproteic) i
citoscheletul membranar formeaz nveliul celular.
n poriunea de contact cu citoplasma formeaz o zon numit corticala celular
groas de 1-2 m, care are rolul s stabileasc relaii ntre plasmalem i citoscheletul celular.
La suprafaa nveliului celular sunt o serie de diferenieri numite jonciuni celulare
care au rol important n realizarea adeziunii celulare. Pe suprafa exist de asemenea cili,
microvili, flageli i pseudopode cu rol n motilitatea celular.
Concepia actual privind structura membranar susine c toate membranele biologice
au aceeai organizare structural. Formarea membranelor biologice este bazat pe
proprietile lipidelor ct i de asocierea dintre lipide i proteine
Plasmalema are o compoziie lipidic bistratificat n care sunt inserate moleculele de
protein (glicoproteine) i colesterol.
[note curs]

Page 17

Biologie celular i molecular

Modelul este denumit mozaic fluid.

Lipidele membranare
Lipidele membranare reprezint o categorie larg de substane organice relativ
insolubile n ap, solubile n cei mai muli solveni organici, cu caracter amfifil i (molecul
care este att hidrofil ct i lipofil) solubil, multe dintre ele fiind esteri ai unor alcooli
polihidroxilici cu acizi grai (acizi carboxilici cu lan alifatic liniar, adic o caten liniar
coninnd mai muli atomi de carbon). Aa cum stipuleaz modelul n mozaic fluid al
organizrii membranelor, lipidele sunt structurate n membrane, sub form de bistrat, cu
capetele hidrofile la exterior i cozile hidrofobe n interior, bistrat care prezint proprieti
fluide, manifestate bidimensional.
Lipidele reprezint 40-50% din materialul organic al membranelor, aceasta proportie
variaza n funcie de tipul membranei. Sub aspect molecular ele reprezint componenta
structural de baza a membranelor celulare (raportul molecular lipide/proteine fiind de
~50/1).
La mamifere membranele plasmatice sunt complexe i conin patru fosfolipide
fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina i sfingomielina, care mpreuna
formeaza cele 50 de procente, i care difer de la o membrane la alta (Tabel 3.1).
n bistrat lipidele au o dispunere asimetric (stratul extern conine n special
fosfatidilcolin i sfingomielina, iar cel intern fosfatidiletanolamin i fosfatidilserin,
precum i fosfatidilinozitolul, care are rol in semnalizare celular) i sunt de o mare
eterogenitate (Figura 3.1).

fosfatidiletanolamin

fosfatidilserin

fosfatidilcolin

sfingomielina

Figura 3.1 Patru fosfolipide principale din structura membranelor de la mamifere. Toate
sunt derivate din glicerol, cu excepia sfingomielinei care este derivat din serin.
Asadar, membranele celulare sunt structurate pe un bistrat lipidic bidimensional,
asimetric si eterogen.

[note curs]

Page 18

Biologie celular i molecular

Caracterele fizico-chimice ale lipidelor le


definesc drept molecule ideale pentru
structurarea de membrane, a cror principal
menire este aceea de a separa dou
compartimente apoase (interiorul celulelor de
mediul nconjurtor).
Structura i caracterul lor amfipat induce
proprieti amfifile arhitecturii pe care o
organizeaz, partea hidrofob putnd creea o
barier, iar partea hidrofil conferind
capacitatea de a acomoda mediile apoase aflate
de o parte i de cealalt, adic interiorul,
respectiv exteriorul celulei.

- Lipidele sunt molecule mici cu


posibiliti mari de mobilitate (fluiditate),
astfel nct structurile pe care le pot
asambla nu sunt rigide.
- Sunt molecule relativ insolubile n
medii apoase, prezentnd tendin de
asociere spontan (autoasamblare), ceea ce
confer structurilor pe care le formeaz
tenacitatea de a-i pastra integritatea, sau
de a se reface rapid, atunci cnd sunt
agresate mecanic.
- Tendina spontan de asociere
implic un consum energetic minim, ceea ce
reprezint un avantaj n economia celular.
Aceast complexitate chimic vom
realiza c este exploatat fericit de celul.
n membranele celulare ntlnim numai
trei tipuri de lipide pe care le putem clasifica,
n funcie de structura lor chimic global
(enumerarea este n funcie de abundena n
care apar) n:

fosfolipide
colesterol
glicolipide

Rolul lipidelor membranare


1.
Lipidele
membranare
organizeaz structura de baz a
biomembranelor-bistratul
lipidic,
structur
cu
proprieti
fluide,
manifestate
bidimensional
i
caracterizat att prin eterogenitate
compoziional, ct i prin asimetrie;
2. Bistratul lipidic asigur funcia de
barier a membranelor, fr a-i conferi
caracter de barier absolut, adic
fr a mpiedica selectivitatea acestei
structuri n interaciunea celulei cu
mediul;
3. lipidele membranare particip la
funcia
metabolic a membranei
celulare n procese de semnalizare.

Figura 3. 2 Bistratul lipidicfosfolipidele formeaz spontan bistratul


stabil cu capete polare expuse la
exterior si cozile hidrofobe n interiorul
membranei

Fosfolipidele reprezint 70-75%


dintre
lipidele
membranare,
colesterolul 20-25%, iar glicolipidele
1-10%.

[note curs]

Page 19

Biologie celular i molecular

Bistratul este cea mai simpl structurare a lipidelor care poate nchide un volum mare
de mediu hidrofil, spre a-l separa de un altul tot hidrofil (capetele hidrofile la exterior, putnd
acomoda structura celor dou medii hidrofile; cozile hidrofobe n interior, n adncimea
structurii, conferind rolul de barier) (Figura 3.2).
Aadar este o structur care poate corespunde dezideratelor celulelor de a fi separate de
mediul nconjurtor i de a-i menine ntr-o manier eficient homeostazia intern.
Asamblarea n bistrat se poate face spontan, fiind deci favorizat energetic, iar bistratul
nu poate prezenta, din considerente termodinamice, capete libere. Acest lucru confer
membranelor tenacitate n pstrarea integritii structurale i refacerea rapid a acesteia chiar
n cazul unor distrugeri datorate agresiunilor mecanice.
Structurarea sub form de bistrat i dispunerea asimetric a componentelor acestuia
confer proprieti fizico-chimice diferite celor dou fee ale membranei. Mai mult,
asigur comportament independent celor dou fee ale membranei, dar i solidar, atunci cand
nevoile celulei o cer (Tabel 3.1).
Manifestarea bidimensional a fluiditii bistratului lipidic d membranei celulare
caracterul de structur cu proprieti mezomorfe, proprieti specifice cristalelor lichide.
Tabel 3.1 Compoziia n lipide a membranelor celulare (exprimat n procente)
Date dupa P.L. Yeagle, 1993 citat de Geoffrey M. Cooper 2009
Lipide

Plasmalema
eritrocitar

Fosfatidilcolina
Fosfatidilserina
Fosfatidiletanolamina
Sfingomielina
Glicolipide
Colesterol

17
6
16
17
2
45

Membrana
reticulului
endoplasmatic
55
3
16
3
0
6

Membrana
externa
mitocondrian
50
2
23
5
0
5

Acest comportament mezomorf este accentuat de capacitatea lipidelor de a structura


microdomenii bogate n sfingolipide, parte dintre ele glicolipide, colesterol i anumite
proteine membranare.
Aceste microdomenii sunt denumite plute lipidice (lipid rafts) (numite vezicule
plasmalemale n celula endotelial) i au deosebit importan att structural (organizeaz
structuri specializate ale membranei, cum ar fi caveolele), ct i metabolic innd laolalt
molecule i macromolecule destinate a funciona mpreun n complexe supramoleculare.

[note curs]

Page 20

Biologie celular i molecular

Lanurile acizilor grasi hidrofobi,


prezente n interiorul bistratului, fac
membrana impermeabil pentru ioni i
pentru majoritatea moleculelor biologice
Acizii
grasi
din
structura
fosfolipidelor naturale au una sau mai
multe legaturi duble care fac dificil
mpachetarea lanurilor hidrocarbonate.
O mare parte a proprietilor
bistraturilor lipidice a fost elucidat ca
urmare a studiului membranelor
artificiale.
Astfel, se pot sintetiza pe cale
artificial dou tipuri de bistraturi
lipidice:
1- bistraturi care formeaz
vezicule sferice numite liposomi (pot
avea un diametru cuprins ntre 25nm i
1m, n funcie de procedura de
separare)
2-membrane
negre
(black
membranes), care sunt bistraturi plane
formate pe suprafata unui mic orificiu
dispus n asa fel nct s separe dou
medii apoase.

Fluiditatea bistratului lipidic

Aplicatii in farmacologie
Veziculele fosfolipidice numite liposomi
(descrise n 1965) sunt intens folosite n
domeniul
farmacologiei.
Deoarece
delimiteaz un compartiment apos, liposomii
pot fi vezicule considerate ca veritabile
capsule farmacologice.
n momentul preparrii, n veziculele
liposomale se pot ncapsula diferite substante
cu efect terapeutic. Deoarece lipozomii sunt
mrginii de o membran reprezentat de
bistratul fosfolipidic, cu aceeasi structur ca
si membranele biologice naturale, ei nu sunt
toxici daca sunt administrati n organism.
Liposomii interactioneaz specific cu
celulele, fiind captati de ctre acestea prin
endocitoza sau fuziune.
Toate aceste argument experimentale
stau la baza speranelor c liposomii vor fi
folositi
ca vectori farmacologici n
administrarea dirijat a preparatelor
terapeutice catre anumite celule tinta
(Mixich & Ardelean, 2002).

O importanta proprietate a
bistratului lipidic este aceea c se
comporta ca un fluid bidimensional, dar
moleculele component sunt libere s execute miscri de rotatie sau difuzie lateral. Aceast
fluiditate este o caracteristica ce depinde n egal msura att de factorii intrinseci
(compozitia n lipide a bistratului) ct i de o serie de factori extrinseci (temperatura,
presiune, substane chimice)
Lipidele membranare pot executa urmtoarele tipuri de micri:
1. Micri intramoleculare
de rotaie, cnd sunt generate de capacitatea lanurilor acizilor grai de a se roti n
jurul legturilor C-C (Figura 3.3), capacitate care se rsfrnge asupra comportamentului
ntregii molecule prin cuplurile de fore pe care le induc. Se realizeaz cu o frecven de 109
rotaii/s.
de flexie a cozilor hidrofobe (vibraie ), aceste micri trebuie nelese tot ca rezultat
al micrilor din interiorul moleculelor de lipide, la nivelul cozilor hidrofobe ale acizilor grai
nesaturai, care, nu pot executa dect micri asemntoare tergtorului de parbriz; efectul la
nivelul ntregii molecule este acela al micrii de flexie a cozii, cu o frecven de 108 flexii/s.
2. Micri intermoleculare (Figura 3.3) - difuzie lateral implic schimbarea poziiei
moleculelor de lipide unele n raport cu altele.

[note curs]

Page 21

Biologie celular i molecular

Acestea pot fi:


Micri de translaie, micri ale lipidelor n planul membranei, n aceiai foi a
bistratului, unele printre altele; frecvena acestei micri este de 107 schimbri de
direcie/s,(distanta D= 10-8 cm/s);
Micri flip-flop, adic micri de trecere a lipidelor dintr-o foi a bistratului n
cealalt, micarea de flip-flop are loc frecvent doar n membrana reticulului endoplasmic si
se realizeaz rar, se aproximeaz la 1/lun.

Figura 3. 3 Schema principalelor tipuri de micri ale fosfolipidelor membranare


Fluiditatea membranelor poate fi modulat (modificat, reglat) de mai muli factori.
Aceti factori pot fi de natur fizic, sau chimic.
Ca factori fizici amintim temperatura i presiunea. Fluiditatea membranelor este
direct proporional cu temperature i invers proporional cu presiunea.
n funcie de temperatur, colesterolul poate influena fluiditatea membranei. La
temperaturi mari, colesterolul interacioneaz cu lanurile de acizi grai ale fosfolipidelor n
micare, scznd fluiditatea stratului extern al membranei i permeabilitatea acestuia pentru
moleculele mici.
La temperaturi sczute, are efect invers intervenind n interaciunile dintre acizii grasi,
previne rigiditatea membranei i i menine fluiditatea.
Colesterolul este o important component a membranei plasmatice din structura
celulei animale, n timp ce la bacterii i plante nu exist colesterol n structur, ci componente
de tipul sterolilor, asemntoare funcional colesterolului.
Factorii chimici implicai n modularea fluiditii membranei se pot clasifica, n
funcie de provenien, n factori chimici intrinseci sau extrinseci.

Importana medical
Multe analgezice, ca i unele anestezice, fiind compui
liposolubili, acioneaz i prin modificarea fluiditii membranelor
neuronale.
n membranele biologice exist o mixtur de tipuri de acizi
grai care au rolul de a menine fluiditatea la 370C.
Meninerea fluiditii bistratului membranar este esenial
pentru creterea i reproducerea celular normal.

[note curs]

Page 22

Biologie celular i molecular

Importana evolutiv
n cazul organismelor poikiloterme, a cror temperatur
variaz cu cea a mediului, membranele celulare i schimb
compoziia n acizi grai, n aa fel nct, fluiditatea se menine n
limite constante, indiferent de temperatura mediului ambient.
Dac temperatura scade, se sintetizeaz n membrane
fosfolipide, n care predomin acizii grai nesaturai (cu duble
legturi), astfel c, descreterea fluiditii, odat cu scderea
temperaturii este evitat.
1-Factorii chimici intrinseci, pe care celula i folosete n modularea fluiditii
membranei n funcie de necesiti, sunt cantitatea de acizi grai nesaturai din structura
fosfolipidelor, sau a glicolipidelor, i/sau cantitatea de colesterol din structura bistratului.
Fluiditatea membranei este direct proporional cu procentul de acizi grai nesaturai
din structura lipidelor bistratului (crete cantitatea de acizi grai nesaturai, crete i
fluiditatea), n timp ce creterea procentului de colesterol duce la rigidizarea membranei
(micorarea fluiditii) datorit structurii sale inelar rigide. Aadar fluiditatea membranei este
invers proporional cu cantitatea de colesterol din bistrat.
2- Factorii chimici extrinseci se clasific la randul lor n:
fiziologici (hormoni sau mediatori chimici liposolubili),
patologici (metabolii liposolubili ai unor ageni patogeni, substane chimice
toxice liposolubile),
terapeutici (medicamente liposolubile).

Proteinele membranare
Proteinele sunt de asemenea, o alt component major a membranelor celulare.
Majoritatea membranelor plasmatice conin 50% lipide i 50% proteine. Deoarece
proteinele sunt mai mari dect lipidele 1 molecul de proteine corespunde la 50-100
de molecule lipidice. Dac lipidele reprezint elementele structurale de baz din
organizarea membranelor celulare, proteinele constituie componenta care se ocup de
funciile specifice ale membranelor celulare.
Exista o coresponden ntre raportul lipide/proteine dintr-o membran i importana
funcional a acesteia:

[note curs]

cu ct funciile metabolice ale unei membrane (sau poriuni ceea ce se


definete ca microdomeniu, sau domeniu dintr-o membran) sunt mai
accentuate, cu att coninutul de proteine al acelei membrane este mai ridicat;
cu ct rolul de barier al unei membrane trebuie s se manifeste mai pregnant,
cu att coninutul n lipide este mai crescut;

Page 23

Biologie celular i molecular

n legatur cu aceste aspecte se pot constata i diferene semnificative. Astfel, la


nivelul tecii de mielin procentul de mas pentru lipide este de ~80, iar cel al proteinelor de
numai ~20.
De evideniat, pentru situaia diametral opus, compoziia de la nivelul membrane
mitocondriale interne unde lipidele reprezint ~20%, iar proteinele ~80%.
Proteinele membranare sporesc eterogenitatea i asimetria
compoziional ale membranelor i moduleaz proprietile fluide
ale acestora, adic accentueaz i modeleaz caracterisaticile
induse de bistratul lipidic. Altfel spus, proteinele membranare
coopereaz cu lipidele att n structurarea membranei ct i n
perfectarea funcionalitii acesteia, prin rolul lor metabolic, cel
care asigur integrarea celulei cu mediul extracelular.

Clasificarea proteinelor membranare


O prim clasificare a proteinelor membranare se face n funcie de poziia lor fa de
bistratul lipidic, care permite mprirea acestora dou mari categorii:
1. Proteine periferice, sau extrinseci: acele proteine care se afl ataate de o parte i
de alta a bistratului lipidic, interacionnd n principal cu capetele hidrofile ale lipidelor, sau
cau alte proteine;
2. Proteine integrale (transmembranare) sau intrinseci: acele proteine care sunt
cufundate n bistratul lipidic, strbatndu-l complet, sau parial. Reprezint aproximativ
75% din proteinele unei membrane.
Proteinele periferice reprezint, n general, ~25% din proteinele unei membrane, sunt
extractibile cu soluii saline, sau ageni chelatori, au caracter hidrofil (dup extragere nu sunt
asociate cu lipide i i pstreaz solubilitatea n ap).
n funcie de foia bistratului lipidic creia i sunt asociate se clasific n:
1. Ectoproteine (proteine periferice asociate foiei externe a bistratului, aadar expuse
la exteriorul membranei celulare sau pe faa luminal a membranelor organitelor)
2. Endoproteine (proteine periferice asociate foiei interne a bistratului, aadar expuse
pe versantul citoplasmatic al membranelor i endomembranelor).
Au fost evideniate atari mai ferme ale proteinelor periferice la bistratul lipidic, prin
conjugri (stabilirea de legturi covalente) cu componente lipidice sau glicolipidice Figura
3.4 (3 i 4).
Altele sunt in legturi necovalente cu alte proteine transmembranare i sunt numite
proteine periferice, Figura 3.4 (5 i 6).

[note curs]

Page 24

Biologie celular i molecular

Figura 3.4 Modul de asociere a proteinelor cu bistratul lipidic al


membranei celulare
1-proteina transmembranar cu un singur helix single- pass; 2protein transmembranar cu mai multe helixurimultipass3-protein ataat
prin legturi covalente de un lipid (in foia citoplasmatic) 4- protein legat
prin intermediul unui oligozaharid (n foia noncitoplasmatic) 5 i 6- proteine
ataate de membrane prin interaciuni noncovalente cu alte proteine din
membrane (Dup Alberts)
La proteinele transmembranare se definesc trei domenii structurale:
1.
ectodomeniu (poriunea expus pe versantul extern al membranei),
2.
endodomeniu (poriunea expus pe versantul intern al membranei) i
3.
domeniu transmembranar (poriunea ce strbate bistratul lipidic).
n ceea ce privete modul de organizare structural a ecto- i endodomeniilor lanurile
proteice se pot mpacheta, n aceste zone, att n poriuni de -helixuri (aminoacizi cu radicali
nepolari).
Parile hidrofobe ale aminoacizilor interactioneaz cu lanurile acizilor grai ale
lipidelor membranare i formeaz modelul de -helix, se neutralizeaz astfel, caracterul polar
al legaturilor peptidice. Unele dintre proteine formeaz -pliuri, acestea se gsesc la anumite
proteine transmembranare ale bacteriilor , cloroplastelor i mitocondriilor (Cooper, 2009).
n funcie de numrul de treceri ale lanului polipeptidic prin planul membranei
proteinele transmembranare se mpart n proteine unipas (o singur trecere) i proteine
multipas (mai multe treceri).
Ca i fosfolipidele proteinele transmembranare sunt molecule amfipatice a cror
poriune hidrofil se afl pe partea expus n mediul apos.

[note curs]

Page 25

Biologie celular i molecular

n acelai timp existena ecto- i


endoproteinelor
sporete
asimetria
structural a organizrii moleculare a
membranelor, accentuat i de prezena
proteinelor
transmembranare
cu
ectodomeniul diferit de endodomeniu.
Mobilitatea proteinelor
membranare
Mobilitatea
proteinelor
membranare const n micri de rotaie
i micri de translaie.
Micarea de rotaie a proteinelor
membranare, n jurul propriei axe,
denumit i difuzie rotaional, este de
cel puin 1000 de ori mai lent dect a
lipidelor. Este de neles acest lucru
gndindu-ne la diferenele de mrime
ntre lipide i proteine.
Micarea de translaie, denumit i
difuzie lateral, este i ea mult mai lent
dect a lipidelor, fiind n medie de
1m/s.
Astfel, aceeai protein, n
aceleai condiii de fluiditate a bistratului
lipidic, se poate mica mai repede, sau
mai ncet n funcie de situaia ei
funcional de moment. Pe de alt parte,
migrarea
lateral
a
proteinelor
membranare poate fi limitat, din
considerente
impuse
de
nevoile
funcionale ale celulelor, numai la
anumite domenii ale membranei.
Celula posed mecanisme de
dirijare a moleculelor proteice n zonele
necesare unei anumite activiti.

Proteomica=analiza pe scar larg


a proteinelor celulare

Este considerat o nou etap n


studiul sistemelor biologice. Acest
abordare este mult mai complicat dect
genomica, deoarece genomul ( setul de
gene) este mai mult sau mai puin constant
pentru ntreg organismul, n timp ce
proteomul (setul de proteine) difer de la o
celul la alta i de la un moment la altul.

Proteinele nu acioneaz i nu se
manifest singure, ci funcionarea acestora
este guvernat de interaciile cu alte
proteine, vorbindu-se astfel, de o reea de
proteine ce intervine n reglarea unei
funcii celulare.

Rolul proteinelor membranare


Ca i n cazul lipidelor membranare, proteinele au att rol structural, ct i rol
metabolic.
1- rolul structural al proteinelor membranare este evident n cazul unor proteine
transmembranare (aderine, integrine) care intervin n stabilirea jonciunilor dintre
celule, la nivelul esuturilor, ct i dintre acestea i matricea extracelular (proteine
i/sau glicoproteine ce structureaz diverse componente tisulare ntre celule). Rolul
acestora este de a menine celulele ntr-o ordonare coerent n structurarea
esuturilor, dar i de a permite acestora s schimbe informaii pentru o integrare
eficient.
[note curs]

Page 26

Biologie celular i molecular

2- rolul metabolic al
proteinelor membranare
se manifest sub form de
schimburi de informaii i
Proteinele
membranelor
sunt
substane dintre celule, sau
purificate prin electroforez n gel de
dintre acestea i mediu.
poliacrilamid, n prezen de dodecilsulfat
Astfel,
proteinele
de sodiu (SDS-PAGE).
Avantajele
membranare pot fi receptori,
acestui tip de electroforez constau n faptul
transportori
prin
membran
c detergentul (dodecilsulfatul de sodium
(canale ionice, pompe ionice), sau
numit i laurilsulfat de sodiu) pe de o parte
transportori
cu
membran
elibereaz toate proteinele (att pe cele
(clatrin, caveolin: proteine ce
periferice, ct i pe cele integrale) din
structureaz nveliuri ale unor
arhitectura membranei, solubilizndu-le, iar
microdomenii din membran pentru a
pe de alt parte se adsoarbe unitar pe
permite invaginarea acestora i
lanurile polipeptidice, conferindu-le o
detaarea sub form de vezicule, sau
densitate de sarcin negativ unitar.
fuzionarea
unor
vezicule
cu
n
aceste
condiii
migrarea
membrane celular pentru a realiza
proteinelor se face numai n funcie de
procese
denumite
endocitoz,
greutatea lor molecular.
respectiv exocitoz;
Proteinele membranare mai
pot
funciona
ca
enzime
(metaloproteinaze
pentru
componente de matrice extracelular,
fosfolipaze, kinaze, fosfataze), sau ca proteine implicate n semnalizare (proteine platform,
sau schel, proteine G).
n toate aceste funcii asimetria structurrii membranei este deosebit de important.
Astfel, receptorii, dar i proteinele de adeziune (aderinele i integrinele) prin asimetria lor
structural permit interaciunea prin ectodomenii cu liganzii specifici, iar prin endodomenii
asigur transmiterea informaiei ctre interiorul celulei i declanarea unor procese celulare
care se constituie n rspuns celular la semnalizrile receptate.
Organizarea proteinelor din structura membranelor eritrocitare
Primele i cele mai detaliate informaii asupra proteinelor membranare au fost
obinute din studiul membranelor eritrocitare.
Motivaia este simpl: materialul biologic este uor de obinut, n cantitate suficient;
populaia celular omogen este uor de asigurat, membranele se obin fr dificultate printrun simplu oc hipoton urmat de centrifugare, iar membranele obinute (numite i fantome
eritrocitare) nu sunt impurificate cu endomembrane (membrane ale organitelor celulare),
inexistente n acest caz.
Rezultatele unei asemenea abordri pentru descrierea proteinelor membranei
eritrocitare se nfiaz sub forma unui spectru de benzi proteice distribuite ntre 20 i 250
kD, benzi care iniial au primit denumiri sub form de cifre (banda 1, banda 2, etc.),
nuanndu-se cu, spre exemplu, banda 4.1, banda 4.2, acolo unde benzile apreau ca dublete.
Ulterior, unele dintre proteine au primit denumiri specifice.
Organizarea i funcionarea membranei eritrocitare poate fi discutat pe baza
informaiilor pe care le avem referitor la proteinele ei. Comentariile asupra proteinelor
membranei eritrocitare ne vor ajuta s nelegem mai aprofundat organizarea acestor

[note curs]

Page 27

Biologie celular i molecular

macromolecule n arhitectura biomembranelor, care este n strns legatur cu


funcionalitatea lor.
Cea mai bine cunoscut protein a membranei eritrocitare, sub aspectul structurii
biochimice este glicoforin (o glicoprotein ce este prezent din abunden n membrana
eritrocitului, care migreaz atipic i se dispune electroforetic undeva pe la 90kD, dei masa ei
molecular este de numai ~30kD).
Explicaie pentru migrarea electroforetic atipic este prezena n ectodomeniu, a 16
lanuri glucidice care practic dubleaz mrimea acestei molecule
Glicoforina este o protein transmembranar unipas, tip I (captul amino n
ectodomeniu) ce are n structur 131 aminoacizi, cunoscndu-i-se integral secvena;
Endodomeniul este mic purtnd captul carboxil al lanului polipeptidic.
Dei structural glicoforina pare a fi bine descifrat, nu i se cunoate funcia. Exist
eritrocite la care glicoforina lipsete din structura membranar fr ca funcionalitatea
globulelor roii s le fie afectat.
O situaie diametral opus o reprezint proteina banda 3, despre care avem mai puine
informaii structurale, dar a crei funcie este clar stabilit: este proteina care structureaz
canalul anionic de schimb ntre bicarbonat (HCO3 -) i clorur (Cl-). Aceasta este protein
transmembranar cu masa molecular de ~100kD (n jur de 930 aminoacizi).
Endodomeniul este mare (~400 din aminoacizii care o formeaz, ~40kD) i poart
captul amino (protein transmembranar de tip II). Ectodomeniul, mic, ~20 aminoacizi,
poart o mic ncrctur glucidic (se pare c doar 2 lanuri) i reprezint captul carboxil al
proteinei.
Cea de-a treia protein pe care o amintim este spectrina, care, mpreun cu celelalte
dou amintite mai sus, reprezint peste 60% (procente de mas) din proteinele membranei
eritrocitare.
Spectrina este o protein periferic situat pe peretele intern al membranei (aadar o
endoprotein) i reprezint componenta de baz a ceea ce numim citoschelet asociat
membranei.
Ea este un heterodimer format dintr-o subunitate (-spectrin, ~240kD) i o
subunitate (-spectrin, ~220kD). Cele dou subuniti cu geometrie fibrilar se rsucesc
uor una n jurul alteia ntr-o structur elicoidal (Figura 3.5), formnd bastonae flexibile, cu
lungimea de ~100nm.
Rsucirea este n contra-direcie (antiparalel), fiecare bastona avnd la capete
gruparea amino-terminal a unei subuniti i gruparea carboxi-terminal a celeilalte. Captul
coninnd gruparea amino-terminal a subunitii i gruparea carboxi-terminal a
subunitii este numit capul bastonaului, iar cellalt capt este coada acestuia.

Figura 3.5 Structura elicoidal a filamentelor de spectrin (dup Alberts)

[note curs]

Page 28

Biologie celular i molecular

Bastonaele au capacitatea de a interaciona cte dou, cap la cap, formnd tetrameri


lungi de ~200nm. Aceti tetrameri formeaz laturile reelei citoscheletului asociat
membranei. Capetele tetramerilor, ce reprezint cozile bastonaelor de spectrin, au
capacitatea de a se asocia, de regul cte 5 sau 6, prin interaciuni cu filamente scurte de
actin, formnd nodurile reelei.
Aadar, actina este o alt protein ce particip la structurarea citoscheletului asociat
membranei, asigurnd solidarizarea componentelor acestuia la nivelul nodurilor.
n forma sa monomeric actina este o protein globular cu masa de ~43kD i un
diametru de ~5nm. La nivelul citoscheletului asociat membranei formeaz fragmente mici,
filamentare, de 8-12 monomeri, cu rolul de a asigura asocierea cozilor tetramerilor de
spectrin n nodurile reelei.
Tot n noduri se localizeaz o alt protein periferic, banda 4.1, cu masa de ~80kD
i conformaie globular (diametrul ~6nm). Banda 4.1 interacioneaz dinamic, pe de o parte
cu spectrina i actina n nodurile reelei citoscheletale i, pe de alt parte, cu endodomeniile
benzii 3, sau glicoforinei, contribuind la ataarea citoscheletului de membran.
Ataarea citoscheletului la membrane este datorat n principal unei alte proteine
globulare, ankirina (masa molecular ~210kD, diametrul ~9nm), care se leag att la
spectrina ct i la domeniul benzii 3, asigurnd ancorarea la membran a citoscheletului, la
nivelul ochiurilor (Figura 3.6).

Figura 3.6. Structura citoscheletului asociat membranei (la eritrocite) (dup Alberts,
2005)

[note curs]

Page 29

Biologie celular i molecular

Interaciunile fine dintre elementele citoscheletului asociat membranei sunt ntr-o


dinamic permanent, astfel nct aceast structur nu este rigid, ci ntr-o continu modelare,
care s satisfac nevoile celulei.
Citoscheletul asociat membranei nu este doar o caracteristic a membrane eritrocitare.
El se gsete n toate celulele i este structurat asemntor, chiar dac unele dintre
componente au fost denumite diferit (spre exemplu echivalenta spectrinei n celulele nervoase
este numit fodrin).

Componenta glucidic a membranei


n afar de lipide i proteine, n structurarea membranelor se ntlnesc i glucide. Sunt
inserate pe un element lipidic, sau proteic, ca structuri oligozaharidice, mai rar polizaharidice
formnd ceea ce denumim glicocalix (glicolipidele, glicoproteinele i proteoglicanii)
(Figura 3.7).

Figura 3. 7 Glicocalixul-modul de ataare a glucidelor la bistratul lipidic


(dup Alberts)
Grosimea glicocalixului este, n medie, ntre 20 i 50 nm, variind de la un tip de
celul, la altul, dar i pentru aceiai celul de la un domeniu membranar, la altul (spre
exemplu la celulele epiteliilor unistratificate ntre polul apical i cel latero-bazal).
De menionat este faptul c, grosimea glicocalixului este cu atat mai mare, cu ct
celulele sunt mai puin implicate n interaciuni cu alte celule, sau cu substrate din matricea
extracelular. Ca urmare, glicocalixul cel mai gros l prezint celulele sanguine. Pe de alt

[note curs]

Page 30

Biologie celular i molecular

parte, la celulele epiteliilor monostratificate, polul apical are un glicocalix mai abundent, fa
de polul latero-bazal.
Legarea monozaharidelor ntre ele se poate face n mai multe moduri, ntruct exist
mai multe grupri hidroxil disponibile, dar aceste legturi sunt limitate de tipurile de
glicoziltransferaze (enzimele ce acioneaz n biosinteza structurilor glucidice prezente n
reticulul endoplasmic i n complexul Golgi). Aceste enzime sunt stereospecifice, astfel c,
legarea glucidelor nu este ntmpltoare.

Rolul glicocalixului
1- Modul n care el este structurat, confer membranei rezisten mecanic, controlnd
accesul ctre straturile profunde ale sale, deci ctre bistratul lipidic i ctre
componentele proteice ale acesteia.
2- Prin componentele acide din structura lor (acizii sialici, acizii uronici, gruprile
sulfat), lanurile oligo-(poli-) zaharidice ale glicocalixului particip la sarcina negativ
a suprafeei celulare. ncrctura negativ a suprafeei celulare, o caracteristic
general valabil tuturor celulelor, face ca interaciunile dinte acestea s nu se poat
realiza dect sub control celular, n zone (microdomenii) ale membranelor nalt
specializate n realizarea acestei funcii. n aceste zone se formeaz ceea ce numim
jonciuni celulare, structuri specializate ale membranelor cu organizri i funcii
diverse.

Implicaiile elementelor glucidice ale glicocalixului

procesele inflamatorii

Extravazarea celulelor sanguine (leucocitelor) n zonele de inflamare tisular are loc


printr-un proces al crui efect este trecerea lor printre celulele endoteliale, din fluxul
sanguin n esuturi, fenomen denumit diapedez.
Recrutarea leucocitelor aflate marginal n fluxul sanguin din vasele de snge ale
zonelor inflamatorii, implic structurile glucidice ale glicocalixului acestora.
Procesele inflamatorii duc la eliberarea de stimuli care acioneaz asupra unor
receptori din membranele celulelor endoteliale, conducnd la expunerea pe suprafaa
luminal a acestora (n ariile inflamate) a unor glicoproteine cu activitate lectinic,
denumite P selectine (Figura 3.8).

[note curs]

Page 31

Biologie celular i molecular

Figura 3.8 Recunoaterea i interaciunea dintre componentele glicocalixului unui


neutrofil i Pselectinele celulei endoteliale(dup Alberts)

compatibilitile sistemelor sanguine

Pe fenomene de recunoatere celular care


implic structurile glucidice ale glicocalixului se
bazeaz i compatibilitile de grup sanguin ale
sistemului ABO. Purttoarele antigenelor de grup
sanguin sunt glicolipidele aflate n membranele
celulelor sanguine
fertilizare
Fertilizarea
este
procesul
prin
care
spermatozoidul fuzioneaz cu ovocitul.
Pentru realizarea acestui proces, spermatozoizii
trebuie s ajung n tractul reproductor feminin,
unde sufer un fenomen de capacitare ce dureaz, la
om, 5-6 ore.
Spermatozoidul astfel capacitat poate traversa
stratul celulelor foliculare ce nconjoar ovocitul,
pentru a ajunge la zona pelucida, un nveli
glicoproteic al ovocitului, format din trei
glicoproteine denumite ZP1, ZP2 i ZP3.
Ajuns aici, el se lega de structuri O-glicozidice
ale ZP3, printr-o component a membranei zonei
acrozomale, care prezint, dup toate probabilitile,
[note curs]

Capacitarea
const
n
modificri ale compoziiei lipidice i
glicoproteice ale suprafeei capului
spermatozoidului, ca i n creterea
metabolismului i motilitii acestuia.
Mecanismele
acestor
transformri
structurale
i
funcionale sunt declanate de
ptrunderea anionului bicarbonat
printr-un
canal
specific
din
membrana
spermatozoidului
i
activarea unei adenilat ciclaze.

nveliul membranar glicoproteic al


ovocitului prezint importan n
separarea interspecific

Page 32

Biologie celular i molecular

activitate galactozil-transferazic.
Zona pelucida acioneaz ca o barier ce confera specificitate de specie fertilizrii,
astfel nct aceasta nu se poate realiza ntre elemente ale unor specii diferite. Eliminarea
zonei pelucida a ovocitului permite fertilizarea elementelor aparinnd unor specii diferite,
ns zigoii hibrizi astfel obinui nu sunt viabili, nu se dezvolt. Interaciunea descris mai
sus ntre spermatozoid i ZP3, declanaz ceea ce se numete reacie acrozomal.

MEMBRANA CELULAR ACTIVITI FIZIOLOGICE


Transportul ionilor i moleculelor
Transportul transmembranar al macromoleculelor
Meninerea compoziiei citoplasmatice la un nivel funcional normal se datoreaz
permeabilitii selective a membranei plasmatice. Majoritatea moleculelor biologice nu pot
difuza prin bistratul lipidic, astfel nct, membrana plasmatic formeaz bariera care
mpiedic schimbul liber dintre citoplasm i mediul extracelular, dar n acelai timp
regleaz schimbul funcie de necesarul intracelular al moleculelor respective.
Moleculele de ap strbat membrana mai rapid dect ionii sau moleculele organice
polare din soluie. Datorit diferenei de permeabilitate pentru ap i solvii, membranele mai
sunt numite semipermeabile. Apa va trece cu uurin prin membrane din partea cu
concentraia solviilor mai mic n partea n care concentraia solviilor este mai mare.
Acest proces este denumit osmoz. Cnd dou compartimente cu concentraii diferite
de solvii sunt separate printr-o membran semipermeabil, compartimentul cu concentraia
mai mare se numete hiperton, iar cel cu concentraia mai mic hipoton.
Cnd celulele sunt plasate ntr-o soluie hipoton, apa intr rapid n celule prin osmoz
i celulele se umfl. Plasate n soluii hipertone, celulele i vor micora volumul, pierznd
apa prin osmoz.
Atunci cnd concentraia intern a solviilor este egal cu cea din compartimentul
extern, cele dou fluide sunt numite izotone i nu se produce o deplasare net a apei ntre cele
dou compartimente.
Membranele celulare ale celulelor cu rol n reabsorbie (celulele tubilor uriniferi) conin
proteine numite aquaporine, care sunt proteine canal specifice pentru ap, prin care
transportul apei se face cu o rat mult mai mare dect prin difuziunea simpl.
Transportul ionilor, a moleculelor prin membran se face prin mai multe mecanisme.
Clasificarea acestora este funcie de: consumul de energie (transport pasiv sau activ), dup
natura substanelor transportate (ioni, molecule mici, macromolecule), dup modul cum trec
substanele (transport prin bistratul lipidic sau transport mediat de peptide sau proteine de
transport).
Dup modul cum se realizeaz i funcie de implicaiile funcionale ale membranei,
transportul prin membrana celular poate fi de 2 tipuri:
1transportul prin membrane - transportul ionilor i moleculelor mici care este
determinat de proprietile de permeabilitate ale membranei.

[note curs]

Page 33

Biologie celular i molecular

2transportul cu membrane-transportul macromoleculelor i proteinelor, care


se face prin vezicule de endocitoz i exocitoz.
Transportul prin membrane se face prin intermediul proteinelor de transport membranar
care sunt: proteine carrier, care leag specific o molecul de transportat, suferind apoi o
modificare conformaional n aa fel nct, vor elibera molecula pe faa opus a membranei.
De asemenea, sunt implicate proteine canal care formeaz pori hidrofili ce traverseaz
bistratul lipidic, cnd aceti pori sunt deschii, ei permit trecerea unor molecule specifice (de
obicei ioni anorganici) de pe o parte n cealalt a membranei.
Toate proteinele canal i o parte din cele carrier permit trecerea substanelor n mod
pasiv, adic n sensul gradientelor de concentraie sau electrice (gradient electrochimic)
procesul se numete transport pasiv (include difuziunea simpl i difuziunea facilitat).

Difuziunea simpl a moleculelor prin membrane


Difuziunea simpl sau pasiv este cel mai simplu mecanism de transport prin
membrana plasmatic. n timpul acestui proces, o molecul se dizolv n bistratul lipidic
difuznd prin el i apoi se dizolv n soluia apoas de cealalt parte a membranei.
Direcia transportului este determinat de concentraiile relative ale moleculei din
interiorul i din exteriorul celulei. astfel, transzitul se face n sensul gradientului de
concentraie, de la un compartiment cu concentraie mare la unul cu concentraie mic, fr
implicarea unei proteine membranare. Deci difuziunea pasiv este un proces nesectiv. Prin
acest mecanism pot traversa bistratul numai moleculele mici hidrofobe, cum sunt gazele (O2
i CO2) benzenul, apa, etanolul i moleculele polare fr sarcin electric.
Moleculele cu sarcin electric, de orice dimensiune, chiar i ionii mici (H+, Cl-, Na+,
+
K ) nu traverseaz membrana, deoarece necesit un transportor specific.

Transportul mediat de proteine carrier


Difuziunea facilitat
Pentru c nu folosete o surs extern de energie, difuziunea facilitat realizeaz tot un
transport pasiv. Pasajul moleculelor, care nu se dizolv n bistratul lipidic, este mediat de
proteine ce transport moleculele prin membran. Fenomenul are la baz legarea moleculei
ce urmeaz a fi transportat de o protein transmembranar.
Prin acest mecanism se transport molecule polare i cu sarcin electric cum sunt
monozaharidele, aminoacizii, nucleotidele i ionii.
Difuziunea facilitat este mediat de dou clase de proteine distincte: proteine carrier
(transportoare) i proteine canal.
O protein de tip carrier are un situs specific de legare a substanei de transport cu rol
de substrat. Dac apar inhibitori competitivi care se leag specific de situsurile active atunci
transportul poate fi blocat. Dei este un transport pasiv, n direcia gradientului de
concentraie, el este selectiv deoarece situsurile de legare ale transportorului leag numai
anumite molecule. De pild, glucoza D este legat de situsuri speciale pe care nu le pot
ocupa molecule de glucoz L.
Sistemele de transport pot fi:
1 - sistem uniport- transport un singur tip de molecul de pe o faa pe alta a
membranei (Figura 6.1).
2 - sistemul de transport cuplat- cnt transportul unei molecule depinde de
transportul simultan al alteia. Dac intr n acelai sens = simport, daca se face n
direcii opuse = antiport (Figura 6.2).
[note curs]

Page 34

Biologie celular i molecular

Figura 6.1 Schema transportului mediat de proteine


Proteinele carrier se pare c sunt proteine transmembranare care i modific
conformaia n mod reversibil, schimbarea conformaiei fiind generat de legarea de
molecula de transportat.
Exemplu: transportul glucozei/ transportul unor ioni (banda 3 din structura
membranei eritrocitare funcioneaz ca un sistem antiport pentru ionii de Cl- i HCO3-).
Transportul glucozei (sursa principal de energie metabolic) este asigurat de o
protein carrier bine studiat.
n eritrocite transportorul de glucoz este o protein de 55kd, care funcioneaz
alternnd 2 stri funcionale. n starea A situsul de legare este orientat spre exteriorul celulei,
legarea glucozei de acest situs induce schimbarea conformaiei transportorului, care trece n
starea B i elibereaz glucoza n celul (Figura 6.2). Aceast modificare a conformaiei
transportorului are loc n celulele hepatice dup un prnz bogat.
Cnd nivelul glucozei din snge scade, glucagonul stimuleaz hepatocitele s produc
mari cantiti de glucoz prin glicogenoliz, ca urmare concentraia glucozei din celule este
mai mare dect n exterior i are loc transportul.
Astfel, glucoza este preluata din spaiile extracelulare, unde concentratia este mare, de
ctre celulele animale, prin transport pasiv cu ajutorul proteinelor carrier. Acest transport
este uniport i se numete difuziune facilitat.

Figura 6.2 Transportul pasiv al glucozei (difuziunea facilitat) cu ajutorul proteinelor


carrier

[note curs]

Page 35

Biologie celular i molecular

Canale ionice
Formeaz pori deschisi prin care moleculele cu dimensiuni i sarcin adecvate pot trece
liber prin bistratul lipidic (Figura 6.3).

Figura 6.3 Schema general unui canal ionic (nchis deschis)


Exemplu:
Porinele din membranele bacteriilor
Jonciunile gap sunt proteine care delimiteaz canalele prin care sunt transportate
molecule ntre dou celule vecine.
Aquaporine proteine canal pentru ap
Canalele ionice sunt cele mai bine studiate din categoria proteinelor canal, n special n
celule nervoase i musculare, unde deschiderea i nchiderea lor asigur transmiterea
semnalelor electrice.
Au fost descrise pn n prezent 50 de canale cu poart care
sunt responsabile n special de excitabilitatea electric nervoase i
musculare i mediaz toate formele de semnalizare electric din
sistemul nervos.
Pentru c funcioneaz tranzitoriu, la comanda modificrilor de membran se numesc
canale cu poart.
Prezint 3 caracteristici funcionale:
1- Transportul prin canale este extrem de rapid- printr-un canal deschis trec mai
mult de 1 milion de ioni/sec. (de 1000 x mai muli dect prin prot. Carrier)
2- Permit un transport selectiv
3- Majoritatea canalelor nu sunt deschise permanent (unele se deschid ca rspuns
la legarea neurotransmittorilor= canale cu poart dependent de ligand, iar
altele se deschid ca rspuns la schimbarea potenialului transmembranar =
canale cu poart dependent de voltaj.
Tipuri de canale (Figura 6.4) cu poart:
1- Comandate de voltaj (deschiderea e cauzat de modificarea potenialului de
membran)- canale de K+, de Na+ i Ca2+

[note curs]

Page 36

Biologie celular i molecular

2- Comandate de un stimul mecanic de la suprafaa celulei (canale de K+ din


membranele celulelor senzoriale din urechea intern a vertebratelor).
3- Comandate de un ligand sau molecul semnal care este mediator extracelular
(un neurotransmitor, receptorul pentru acetilcolin) sau un mediator intracelular
(ioni Ca2+; nucleotide GMP-ciclic; proteine reglatoare, G).

Figura 6.4 Principalele tipuri de canale ionice


Toate celulele conin pompe ionice ce folosesc energia obinut prin hidroliza ATP
pentru a transport activ ioni prin membrana plasmatic. De aceea compoziia ionic a
citoplasmei este diferit de cea a lichidelor extracelulare.
De exemplu, Na+ este pompat activ din celule, pe cnd K+ este pompat activ n
celule. Deoarece ionii sunt ncrcai electric, transportul lor prin membran conduce la
stabilirea unui gradient electric transmembranar. Foarte important n transmiterea
semnalelor electrice n celula nervoas ct i n timpul sinapselor.
n repaus membrana este mai permeabil pentru K+ dect pentru Na+ sau pentru ali
ioni, fluxul de K+ avnd cea mai mare contribuie la stabilirea potenialului membranar de
repaus.
Pe msur ce impulsurile nervoase (potenialul de aciune) se propag de-a lungul
axonului, membrana se depolarizeaz. Potenialul de membran creste de la -60mv la +30
mv, n mai puin de o milisecund, dup care devine din nou negativ, revenind la valoare de
repaus.
Aceste schimbri rezult din deschiderea rapid i secvenial a canalelor de Na+ i K+,
dependente de voltaj.
Intrarea brusc a Na+ duce la o cretere rapid a potenialului de membran pn la
+30mV (apropiindu-se de potenialul de echilibru al Na+= +50mV). n acest moment se
inactiveaz canalele de Na+ i se deschid cele de K+, crescnd permeabilitatea pentru K+.
Depolarizarea regiunilor adiacente ale membranei plasmatice permite conducerea
potenialului de aciune de-a lungul axonului neuronului ca semnale electrice, impulsurile
nervoase fiind transmise rapid la distane mari (de peste 1m, la motoneuronii umani).
[note curs]

Page 37

Biologie celular i molecular

Figura 6.5 Canal comandat de voltaj


Sosirea potenialului de aciune la nivelul butonului terminal determin deschiderea
canalelor de Ca2+ dependente de voltaj (Figura 6.5), creterea concentraiei Ca2+ i eliberarea
neurotransmitorului (acetilcolina), care transport semnalele ntre celule i sinapse. Astfel,
semnalul electric este transformat n semnal chimic.
Acetilcolina se leag de receptorii de pe membranele postsinaptice i deschide canalele
pentru Na+ i K+dependente de ligand.
Intrarea rapid a sodiului depolarizeaz membrana celulei musculare, declannd
potenialul de aciune, care deschide canalele de Ca2+, dependente de voltaj din reticulul
endoplasmatic determinnd contracia. Deci, semnalul chimic este reconvertit n semnal
electric.

Transportul activ cuplat cu gradiente ionice


Exist molecule care pot fi transportate mpotriva gradientelor electrochimice fr
utilizarea direct a energiei rezultate din hidroliza ATP. n acest caz este folosit energia
rezultat din transportul cuplat cu a doua molecul care circul ntr-o direcie favorabil
energetic.
Gradientul de concentraie al Na+ realizat de pompa Na+/K+ reprezint o surs de
energie utilizat frecvent n celulele mamiferelor, pentru transportul activ al monozaharidelor,
aminoacizilor i ionilor.
Gradientele de H+ stabilite de pompele de H+ din celulele bacteriilor i drojdiilor au
roluri asemntoare.
Transportul activ al glucozei, dup principiul simport, mpreun cu Na+
Celulele renale i cele intestinale trebuie s preia glucoza din lumenul intestinal i
respectiv tubii uriniferi, unde concentraia este sczut. Aceste celule transport activ
glucoza, dup principiul simport, mpreun cu Na+, a crui concentraie extracelular este
foarte mare.
Fluxul de Na+ n sensul gradientului electrochimic furnizeaz energia necesar pentru a
prelua glucoza rezultat din digestia alimentelor i a o acumula n celule pn la concentraii
mari.

[note curs]

Page 38

Biologie celular i molecular

Figura 6.6 Transport activ glucoza, dup principiul simport, mpreun cu Na+
Apoi, glucoza este transportat prin difuziune facilitat, prin suprafaa bazolateral a
epiteliului intestinal n capilarele sanguine ale esutului conjunctiv subiacent.
Deci, enterocitele sunt polarizate funcional (n domeniul apical are loc transportul
activ, iar n cel bazolateral are rol difuziunea facilitat) Figura 6.6.

Transportul activ cuplat cu hidroliza ATP


n transportul activ energia furnizat de hidroliza ATP este folosit pentru a dirija
transportul moleculelor mpotriva gradientului electrochimic, ntr-o direcie nefavorabil
energetic.
O mare parte din energia celular este folosit pentru meninerea gradientelor de
concentraie a unor ioni cum ar fi Na+, K+, H+, Ca2+.
Au fost descrise trei clase principale de enzime care cupleaz hidroliza ATP cu
transportul ionilor mpotriva/ in sensul gradientului electrochimic (vezi tabel).
Citoplasma are o concentraie mare de molecule osmotice cum ar fi glucoza,
aminoacizii i nucleotidele. Din aceast cauz, n lipsa unui echilibru osmotic, apa tinde s
intre n celul prin osmoz ceea ce ar provoca umflarea i chiar spargerea celulei.
Un exemplu de transport activ cuplat direct cu hidroliza ATP, l furnizeaz pompele
ionice care asigur meninerea gradientelor transmembranare ale ionilor.
n cazul ionilor Na+ i K+, echilibrul osmotic necesar este furnizat de gradiente de ioni,
stabilite de ctre pompa Na+/K+. Astfel pompa stabilete o concentraie mare de Na+ n
afara celulei. Iar pasajul K+ prin canalele deschise stabilete un potenial electric
transmembranar.
Proteina care formeaz pompa de sodiu si potasiu funcioneaz dup sistemul
antiport, ea pompeaz ionii ca urmare a unor schimbri conformaionale ciclice. Aceste

[note curs]

Page 39

Biologie celular i molecular

schimbri sunt analoage cu cele de la difuziunea facilitat, dar sunt induse de un ciclu de
fosforilare-defosforilare.
Ionii de Na+ se leag cu mare afinitate la situsuri situate n interiorul celulei. Aceast
legare stimuleaz hidroliza ATP i fosforilarea pompei. Apoi are loc o schimbare
conformaional a pompei ce i expune situsurile pentru Na+ la exteriorul celulei dup care,
afinitatea situsurilor pentru Na+ scade, i ca urmare acesta este eliberat n spaiul extracelular.
n mod similar este introdus K+ n celul. Pompa are trei situsuri pentru Na+ i dou pentru
K+, astfel nct la fiecare ciclu se transport prin membrana plasmatic trei ioni de Na+ i doi
de K+, i se consum o molecul de ATP.
Tabel 6.1 Categoriile de enzime ATP-aze implicate n funcionarea echilibrului
osmotic prin activarea pompelor ionice
Enzime care cupleaz hidroliza sau
sinteza ATP cu transportul ionilor
Tipul transportului
mpotriva/n sensul gradientului
electrochimic
Na+, K+-ATPaz
ATP-azele din clasa P
= polipeptide transmembranare care se Ca2+ -ATPaz
ATP-aze transportoare de protoni
fosforileaz n timpul transportului
ATP-azele din clasa V
=monomeri polipeptidici care dei
hidrolizeaz ATP ul nu se fosforileaz
n timpul transportului
ATP-azele din clasa F= ATP-sintetaze
Se afl n membrana mitocondriilor

Transportori de protoni (H+) localizai


n membrana lizozomilor, meninnd
ph sczut n interiorul acestora.
Transportul
se
face
contra
gradientelor de concentraie (activ)
Transport
protoni
n
sensul
gradientului de concentraie, transport
cuplat cu sinteza ATP din ADP i
fosfat

Pompa Na+/ K+-ATP az este cea mai studiat i are 3 roluri de baz:
-

[note curs]

Determin potenialul de membran cu rol n propagarea semnalelor electrice


n celula muscular i cea nervoas
Controleaz volumul celular i echilibrul osmotic
ntreine transportul cuplat cu gradiente ionice
Pentru fiecare molecul de ATP hidrolizat, se transport spre exterior 3 ioni
de sodiu i spre interior 2 ioni de potasiu.

Page 40

Biologie celular i molecular

Figura 6.7 Reprezentare schematic a sistemului de schimb Na+/K+ ntre spaiul


extracelular i citosol prin funcionarea pompei de Na+/ K+-ATP az
Echilibrul osmotic necesar este furnizat de gradientele de ioni, stabilite de ctre pompa
Na /K . Astfel pompa stabilete o concentraie mare de Na+ n afara celulei, iar pasajul K+
prin canalele deschise stabilete un potenial electric transmembranar. Potenialul membranar
determin ieirea Cl extracelular (ca i a Na+) astfel c, se ajunge la o concentraie de 10 ori
mai mare dect cea din citoplasm. Aceste diferene n concentraii ionice echilibreaz
concentraia mare a moleculelor organice intracelulare, egalnd presiunile osmotice i
prevenind intrarea apei.
+

Figura 6.8 Model pentru pompa Na+/ K+-ATP az

[note curs]

Page 41

Biologie celular i molecular

Ca2+ -ATP-az
Pompa de calciu menine concentraia
intracelular a calciului la un nivel foarte
sczut. n majoritatea celulelor animale i n
eritrocite Ca2+ -ATP-az se afl n membrana
plasmatic i are rolul de a transporta Ca2+ n
afara celulei. Aceast pomp are rolul de a
menine o concentraie foarte mic a calciului
n citoplasm (0,1M), fa de mediul
extracelular (1M). De aceea creterile foarte
mici de calciu au rol n semnalizarea celular.
n celula muscular - Ca2+ -ATP-az
e localizat n membrana RE i transport ionii
de calciu din citosol n interiorul RE (organit
care are rolul de a depozita si concentra Ca2+;
calsequestrina este o molecul proteic ce
fixeaz 43 mol. Ca2+).
Eliberarea ionilor de calciu din RE ctre citosol
determin contracia, iar reintroducerea lor
determin relaxarea muscular.
Ca2+ -ATP-az transport cte 2 ioni
de Ca2+ pentru fiecare molecul de ATP
hidrolizat i necesit prezenta Mg2+.

Medicamentele ouabaina i
digoxina au o foarte mare semnificaie
clinic, ele cresc fora contraciei
miocardului n afeciuni cardiace
congestive.
Efectul acestor medicamente
const n blocarea funcionrii Na+, K+ATP az ducnd, n consecin, la
creterea concentraiei intracelulare a
ionilor de Na, scznd gradientul de
sodiu, sistemul antiport Na+- Ca2+
funcioneaz mai puin eficient, sunt
exportai mai puini ioni de calciu, iar
concentraia intracelular a Ca2+
crete, iar celulele cardiace se contract
mai frecvent i mai puternic.

Implicaii farmacologice

H+- ATP-azele din clasa V (ATPaz lizozomal)


Sunt abundente n membrana lizozomal avnd rolul de a menine interiorul acestor
organite foarte acid (pH= 4,5-5) gradientul protonilor fiind mai mare fa de citosol de 100 de
ori.
Se gsesc i n membranele unor celule acid-secretorii (exp: celule epiteliale care
mrginesc vezica urinar la broasc).

ATP-azele membranare din clasa F


Se afl n membranele mitocondriale i este analoag celor descrise mai sus,
funcioneaz folosind un gradient de protoni, realizat de ctre lanul transportor de electroni
din mitocondrie.
ATP sintetaza poate funciona n ambele direcii: poate hidroliza ATP i prin aceasta
pompeaz H+ prin membran, sau poate sintetiza ATP, fiind pus n funciune de fluxul de
protoni ce are loc n sensul gradientului.
ATP sintetaza este responsabil pentru producia ATP din celul.

[note curs]

Page 42

Biologie celular i molecular

Transportul ntreinut de gradientele ionice


Unele sisteme de transport activ sunt ntreinute de energia stocat n gradientul ionic,
creat de ctre pompele ionice ATP dependente i nu de energia eliberata de hidroliza ATP.
Exemplu: influxul de Na+ n citosol determinat de potenialul de membran i de
gradientul ionic, poate fi cuplat cu transportul moleculelor de glucoz, care va intra in celul
mpotriva gradientului de concentraie.
Acest sistem, n care un ion, n deplasarea n sensul gradientului, determin
transportul simultan al unei alte molecule (glucoza) mpotriva gradientului, se numete
cotransport (simport = n acelai sens, antiport = n direcii opuse).
Sistemul antiport Ca2+/ Na+
Funcionarea unui astfel de sistem antiport asigur reducerea contraciilor miocardice.
Na+, K+-ATP az din membrana plasmatic a celulei cardiace creaz un gradient al
concentraiei de Na+ care susine exportul ionilor de Ca2+. Doi ioni de Na+ care intr n celul,
pot exporta cte un ion de Ca2+ mpotriva unui gradient de concentraie de aproximativ 1000
de ori mai mare.
Sistemul antiport de anioni (Cl-, HCO3 -)
n membrana eritrocitar proteina benzii 3 este un important antiport de anioni ce
transporta n sens opus ioni negativi de clor i bicarbonat, transport esenial pentru
funcionarea eritrocitului ca transportor de dioxid de carbon. Permeabilitatea benzii 3 la Cleste de 100.000 de ori mai mare dect n alte celule.
CO2 dup ce este eliberat de celule ajunge n capilarele sanguine, difuzeaz prin
membrana eritrocitului, iar aici sub aciunea anhidrazei carbonice, se transform n anionul
bicarbonic (H2O+CO2=H-+ HCO3-). Anionul bicarbonic este transportat la exteriorul
eritrocitului de ctre sistemul antiport, prin schimb cu un ion de Cl-.
Sistemul antiport Na+ /H+
Sistemul deine o importan foarte mare n ndeprtarea excesului de protoni generai
n metabolismul celulei animale. Asigura ridicarea pH-lui n celule dac acesta scade sub
limitele normale. Acest lucru este datorat unei proteine similare cu banda 3 din membrana
eritrocitului, care expulzeaz bicarbonatul din citosol prin schimb cu Cl-.
n citosol, pH-ul trebuie meninut ntre limite foarte strnse (7,2-7,4), condiie necesar
creterii i diviziunii celulare.
Problema meninerii constante a acestor valori este foarte important deoarece,
majoritatea produilor care rezult din metabolismul glucozei, sunt acizi. Metabolismul
anaerob al glucozei produce acid lactic, iar metabolismul aerob, CO2, care este hidratat la
acid carbonic (H2CO3). Aceti acizi slabi se disociaz genernd protoni. Dac aceti protoni
nu sunt exportai din celule, ei produc o scdere rapid a pH-lui.
Ph citosolic contribuie la activarea cilor metabolice necesare pentru creterea i
diviziunea celular. (diferente mici exp: 7,4 la7,2 pot induce rapid stoparea mai multor
funcii: sinteza ADN, sinteza ARN, catabolismul glucozei i sinteza proteinelor).

[note curs]

Page 43

Biologie celular i molecular

Secreia de acid clorhidric n stomac


Stomacul mamiferelor conine o soluie de 0.1 M de acid clorhidric. Acest mediu foarte
acid, denatureaz proteinele ingerate, facilitnd digestia lor de ctre enzimele proteolitice,
cum este pepsina care este activ la ph acid. Acidul clorhidric este secretat n stomac de ctre
celulele parietale numite i celule oxintice, localizate n mucoas. Aceste celule conin H+,
K+-ATP-az n membrana apical, dinspre lumenul stomacului. Enzima (ATPaz) din clasa
P, este similar ca structur i funcie cu Na+, K+- ATPaz i export protoni, n schimbul
unui ion de K+.
Transportul activ de H+ din celul n lumen, este acompaniat de transportul pasiv al
ionului de Cl-, rezultatul este o concentrare a acidului clorhidric n lumenul stomacului la un
milion de ori mai mult dect n citosol (pH=1, fa de pH=7).
Deoarece exportul de protoni din celulele parietale duce la creterea concentraiei n
citosol a ionilor OH- i deci o alcalinizare marcat a citosolului, se pune ntrebarea: cum
poate citosolul s-i menin ph-ul neutru n aceste condiii?
Excesul de OH- din citosol se combin cu CO2, pentru a forma HCO3- n reacia
catalizat de anhidraza carbonic. Anionul HCO3- este expulzat prin membrana bazolateral
a celulei, printr-un schimb cu ionii de Cl- de ctre o protein antiport Cl- -HCO3-.

Implicaii patologice
Dezechilibrele transporturilor ionici se pot produce n diferite
situaii patologice. De exemplu, n etapa de debut al unei ischemii
sau n criza epileptic intens crete progresiv K+ extracelular.
Dac ionul de K+ depete un anumit prag, urmeaz un transport
intracelular de Cl- n funcie de nivelul K+ extracelular.
Unul din mecanismele apariiei edemului cerebral citotoxic
este legat de excesul de Na+ ceea ce induce un exces intracelular de
ap.
Mutaiile genelor responsabile de sinteza i funcionarea
proteinelor membranare ce formeaz pompele ionice sau canale
transmembranare genereaz boli genetice grave.
Exemplu:
n cazul mutaiilor genei CLCNI ( care codific canalul de clor
de la nivelul muchilor scheletici) apare miotonia congenital cu
forma recesiv (Tip Becker) sau forma dominant ( Tip Thomsen).
mutaiile subunitilor beta sau gamma ale canalului renal
epitelial de sodiu implicate n producerea sindromului Liddle
(hipertensiune, alcaloz hipopotasemic, pierderi renale de K).
Dintre bolile genetice cu transmitere autozomal recesiv, una
dintre cele mai frecvente, este fibroza chistic sau mucoviscidoza

[note curs]

Page 44

Biologie celular i molecular

(OMIM 219700). Prevalena estimata din populaia caucazian


este de 1:2.500, iar incidena purttorilor sntoi este de 1:25.
Gena responsabil de producerea bolii a fost identificat prin
clonare, n 1989 i denumit CF (cystic fibrosis). Analizele
funcionale au demonstrat c, proteina codificat de gena CF,
acioneaz ca un canal de clor localizat la nivelul polului apical al
celulelor epiteliale afectate n cadrul acestei boli.
Simptomatologie: principalele manifestri clinice ale bolii
sunt determinate de afectarea plmnilor i a pancreasului exocrin.
Afectarea acestor organe este rezultatul secreiilor vscoase ale
glandelor exocrine care determin obstrucia
structurilor
canaliculare. La nivel pulmonar, aceasta determin infecii
recurente cu evoluie spre insuficien pulmonar, iar obstrucia
canalelor pancreatice are drept consecin deficiena enzimelor
pancreatice, cu afectarea digestiei.

Implicaii farmacologice
Modul de aciune al diureticelor i clasificarea lor are la baz
cunoaterea mecanismelor molecular de la nivelul unor canale
ionice.
Astfel, se poate vorbi despre:
- diuretice care inhib mecanismul simport Na+- K+-2Cl- diuretice care inhib mecanismului simport Na+-Cl- diuretice care inhib canalele de Na+ de la nivelul epiteliului
renal

Transportul transmembranar al macromoleculelor


Exocitoz i endocitoz
Macromoleculele precum i formaiunile celulare sau acelulare simple ca bacteriile i
virusurile, nu pot ptrude n celule cu ajutorul proteinelor membranare de transport. De
asemenea, celula produce o serie de compui macromoleculari pe care i elimin la exterior.
Transferul complexelor macromoleculare de pe o parte pe lata a plasmalemei este asigurat
de mecanisme prin care se formeaz vezicule membranare care au capacitatea de a fuziona
sau de a se desprinde de plasmalem.
Transportul transmembranar al macromoleculelor i particulelor prin vezicule, este
clasificat n funcie de sensul de desfurare i de tipul substanelor implicate:
1- Exocitoza =consecin n cele mai frecvente cazuri a secreiei celulare, const din
mpachetarea materialului ce urmeaz a fi secretat n vezicule care vor fi eliberate
n mediul extracelular.
2- Endocitoza =const n ingerarea de ctre celule a materialului extracelular prin
formarea de invaginatii ale membranei, care apoi se desprind de plasmalem sub
form de vezicule intracelulare.

[note curs]

Page 45

Biologie celular i molecular

3- Transcitoza= implic ambele procese, att endo cat i exo si se caracterizeaz prin
transportul macromoleculelor prin citoplasm celular, de la un pol la cellalt.

Endocitoza
Este orice proces prin care membrana plasmatic nvelete o particul extracelular sau
o poriune din mediul extracelular, formnd astfel vezicule intracelulare.
Procesul de internalizare a macromoleculelor i particulelor implic mai multe
posibiliti:
1-Pinocitoza = captarea nespecific de ctre celul a unor picturi mici din lichidul
extracelular, prin vezicule. Orice material dizolvat n lichidul extracelular poate fi
internalizat ntr-o cantitate proporional cu concentraia sa.
Experimental au fost urmrite pe traseu vezicule de pinocitoz care conin peroxidaz,
veziculele foarte mici au fuzionat rezultnd vezicule mari care au fuzionat cu lizozomii.
2- Endocitoza mediat de receptori = proces in care receptorii specifici de pe
suprafaa membranei recunosc o molecul extracelular numit ligand de care se leag,
poriunea din plasmalem care conine complexe ligand- receptor este apoi endocitat.
3- Fagocitoza = const din captarea, ingerarea de particule de mrimi mari cum ar fi
fragmente celulare, bacterii. n corpul uman este comun macrofagelor, leucocitelor, care
distrug astfel bacteriile.
Veziculele formate prin fagocitoz au un diametru mai mare de de 1m. De asemenea,
o alt diferen fat de endocitoz const n faptul c, expansiunea membranei plasmatice n
jurul particulei fagocitate necesit participarea filamentelor de actin din imediata apropiere a
plasmalemei.
Materialele introduse n celul prin endocitoz fau fagocitoz pot fi depozitate n
vezicule intracelulare. De obicei, materialul ingerat intr n compartimentul lizozomal, unde
este degradat.
Fuziunea membranelor n procesul de endocitoz
Procesul de fuziune al membranelor este implicat, n afar de exocitoz, endocitoz i
fagocitoz, i n alte procese celulare importante. Separarea celulelor la sfritul mitozei,
fuziunea mioblatilor la formarea celulelor musculare scheletice multinucleate.
Procesul de fuziune a membranelor este un proces foarte complex pentru c
membranele nu pot fuziona spontan. Unul din obstacole l reprezint ncrctura intens
negativ a suprafeei celulare, dat de acidul sialic prezent n glicolipidele suprafeei celulare,
care determin ca membranele s se resping.
O alt problem o reprezint absena capetelor libere de membran, pentru ca fuziunea
s aib loc, bistraturile sau sferele membranare trebuie s se deschid.
Fuziunea membranar poate s fie indus artificial. Prin aceste metode s-a scos n
eviden c etapa importanta este apropierea ct mai strans dintre membrane sau aglutinarea
dup care are rol fuziunea propriu-zis.
Problemele fuziunilor sunt nc contradictorii. Exist ipoteza care sugereaz c
regiunile membranare ce vin n contact sunt lipsite de proteine membranare i astfel se
presupune c fuziunea are loc la nivelul lipidelor.
Fagocitoza este caracteristic mai ales formelor unicelulare de eucarioate. Acest proces
asigur protozoarelor glucidele, aminoacizii, lipidele precum i alte substane nutritive.

[note curs]

Page 46

Biologie celular i molecular

La om i alte mamifere, fagocitoza este ntlnit la fagocite


(celule
care formeaz sistemul reticulo-endotelial).
Funcia
primordial este de a nltura celulele btrne sau de a apra
organismul de infecii bacteriene sau virale.
La mamifere exist 2 tipuri de fagocite: macrofagele i
leucocitele neutrofile. Unele macrofage mrginesc
capilarele
sanguine foarte permeabile din ficat, splin i alte organe i au
proprietatea de a ingera eritrocitele btrne precum i alte particule
existente din snge.
O alt categorie de celule sanguine monocitele pot migra n
esuturile infectate sau inflamate unde se difereniaz m macrofage
care inger i degradeaz celulele distruse i microorganismele
moarte.

Figura 6.9 Macrofag ce fagociteaz dou eritrocite, sgeile


indic pliurile membranare (pseudopodele)
Macrofagele fagociteaz doar anumite particule, ingestia
depinde de compoziia chimic i de proprietile suprafeei
particulei.
Unele structuri de suprafa glucidice, numite capsule, de la o
serie de bacterii, cum ar fi Streptococcus, inhib interaciunea cu
macrofagele i deci ingestia. Tulpinile nepatogene ale acestor
bacterii sunt lipsite de asemenea capsule i pot fi ingerate.
Ca rspuns la infectii cu bacterii patogene organismul produce
anticorpi care se leag specific de proteinele sau glicoproteinele de
pe suprafaa bacteriilor. nveliul de anticorpi format pe suprafata
unei bacterii sau a unei particule, stimuleaz ingestia lor de ctre
macrofage deoarece macrofagele posed receptori care reunesc o
regiune molecular comun la toi anticorpii numit regiune FC.
Alte proteine serice numite complement, se leag nespecific pe suprafaa particulelor
strine i stimuleaz ingestia lor ca urmare a legrii la receptorii de suprafaa, specifici de pe
macrofage, receptori numii receptori pentru complement.
Legarea particulei pe suprafaa macrofagului induce un proces secvenial de ingestie,
printr-o nvelire a suprafeei particulei de ctre membrana celular.

[note curs]

Page 47

Biologie celular i molecular

n urma procesului de fagocitoz, se formeaz vacuole numite fagozomi, care apoi


fuzioneaz cu lizozomii. Dup aceast fuziune se formeaz lizozomii secundari, n care are
loc procesul de digestie a particulei ingerate.
O parte a materialului ingerat, cum e peretele celular al microroganismelor, este
rezistent la aciunea hidrolazelor lizozomale i se acumuleaz n aceti lizozomi secundari,
formnd corpii reziduali. Acesta poate fi unul din motivele pentru care macrofagele au un
timp de via foarte scurt (1-2 zile).
Pe lng setul normal de hidrolaze lizozomale, lizozomii macrofagelor conin i enzime
care genereaz ap oxigenat, alte substane toxice care omoar bacteriile. Cand anticorpii se
leag de receptorii FC ai macrofagelor, se produce activarea acestor enzime.

Endocitoza mediat de receptori


Prin acest tip este fcut o selecie a proteinelor i a particulelor mici din mediul
extracelular. Endocitoza acestor complexe moleculare specifice se produce de obicei la
nivelul unor adncituri nvelite (coated pits), care apar la suprafaa celular. Ulterior aceste
vezicule se transform n endozomi.
Cel mai cunoscut model este cel al procesului de endocitoz mediat de receptori este
reprezentat de receptorul pentru asialoglicoproteinele hepatice i receptorul pentru
lipoproteinele cu densitate joas (LDL).
O serie de celule leag i apoi endociteaz proteine extracelulare care pot avea efecte
distructive sau toxice, cum sunt proteazele, aceste proteine sunt apoi distruse n lizozomi.
Astfel, hepatocitele, conin un receptor care leag glicoproteinele a cror grupare glucidic se
termin cu galactoza. n cazul proteinelor serice, reziduurile de galactoz sunt acoperite de
acidul sialic.
Glicoproteinele anormale crora le lipsete acidul sialic i deci au reziduurile de
galactoz libere, se leag la receptorii de pe hepatocite i astfel, prin endocitoz, sunt
ndeprtate din circulaie n mod rapid (5 minute). Dup endocitoz mediat de receptori,
asialoglicoproteinele sunt distruse n lizozomii hepatocitelor.
Structura veziculelor cu nveli
n procesul endocitozei mediate de receptori, complexele ligand-receptor formate pe
suprafaa celulei, sunt nghesuite pe zone mici de pe suprafaa extern a membranei, n timp
ce n aceeai zon, pe faa citoplasmatic, plasmalema apare tapetat cu proteine speciale.
Au fost descrise 3 vezicule cu nveli care particip la transportul vezicular:
1- vezicule acoperite cu clatrin, care transport prin endocitoz molecule extracelulare,
precum i moleculele de la reeaua Golgi trans la lizozomi.
2 i 3 - vezicule acoperite, CoP (coat protein) - se formeaz fie prin nmugurire din aparatul
Golgi (coat -COPI) fie prin inmugurirea RE (coat -COPII).
Proteina major este clatrina i are proprietatea de a se asambla formnd o reea ca
o plas. Clatrina i celelalte proteine din structura nveliului interacioneaz cu componente
din citoscheletul celular, precum i cu receptori membranari. Din aceste interaciuni rezult

[note curs]

Page 48

Biologie celular i molecular

aglomerarea receptorilor n anumite regiuni ale plasmalemei i formarea structurilor


caracteristice.
Clatrina purificat are aspectul unei stele cu 3 brae (trischelion), care se combin sau
polimerizeaz n jurul veziculelor formnd un nveli ca i coul unei mingi de baschet. ntre
clatrin i membrana veziculei se intercaleaz proteine specifice numite particule de
asamblare sau proteine adaptor (AP2) (Figura 6.10).

Figura 6.10 Modul de formare a veziculelor nconjurate de clatrina


(dup Lorena Arancibia-Crcamo-modificat)
Endocitoza liganzilor, mediat de receptori, are o caracteristic important: receptorii
membranari endocitai sunt reciclai la membran.
Mecanismele de reciclare a receptorilor endocitai -Endozomii fuzioneaz cu o
categorie special de vezicule (compartimentul de decuplare a receptorului de ligand=
Compartiment of Uncoupling of Receptor and Ligand CURL) care au ph acid ce cauzeaz
disocierea complexelor ligand-receptor.

Endocitoza particulelor LDL


Colesterolul este insolubil n lichidele biologice. Indiferent dac este de provenien
alimentar sau dac este sintetizat n ficat el este transportat cu ajutorul unui vector protein
de transport. Lipoproteinele cu densitate joas (LDL) reprezint cel mai comun complex
care transport colesterolul prin snge. Celulele care au nevoie de colesterol produc receptori
care leag specific particulele de LDL.

Figure 6. 11 Recunoaterea i formarea veziculelor nconjurate de clatrina (Alberts, 2002,


modificat)
O particul de LDL are o form sferic cu diametrul de 20-25nm. Suprafata extern
este reprezentat de un monostrat membranar de fosfolipide i colesterol, n care se afl

[note curs]

Page 49

Biologie celular i molecular

inserat o singur molecul de protein (proteina apo B), iar n interior particulei se afl o
cantitate semnificativ de molecule de colesterol (1500).

Figura 6.12 Structura particulei de LDL (dup Alberts, 2002)


Particulele de LDL din serul sanguin reprezint sursa de colesterol pentru majoritatea
celulelor, dei toate pot produce colesterolul.
Ateroscleroza - principala cauz de mortalitate i morbiditate din
rile dezvoltate, const, n esena, n reducerea lumenului vascular
prin depuneri de lipide n pereii vaselor formnd plcile de aterom,
care micoreaz aportul de snge la esuturi, genernd suferine de
tip ischemic. Nivelul crescut al colesterolului seric este principalul
factor de risc al apariiei aterosclerozei, n special fraciunea LDL.
Preluarea particulelor de LDL de ctre celule se face prin endocitoza mediat de
receptori. Acesti receptori au ca ligand proteina apo-B de pe suprafaa particulelor LDL.
Dup endocitoz, particulele LDL sunt transportate la lizozomi, unde proteina Apo B
este degradata la aminoacizi, iar colesterolul esterificat este hidrolizat la colesterol i acizi
grasi. Colesterolul este ncorporat n membrane iar acizii grai sunt utilizai pentru sinteza de
noi fosfolipide.
De obicei particulele LDL ajung la lizozomi. n unele cazuri, aceste materiale
endocitate, traverseaz celula i sunt exocitate la polul opus prin procesul de transcitoz.
Transcitoza este ntlnit n cazurile:
-

Trecerea anticorpilor materni prin celulele sacului vitelin al mamiferelor la ft


Trecerea anticorpilor prin celulele epiteliale intestinale la oarecele nou nscut
(date experimentale)

Implicaii fiziologice i patologice


Transportul fierului n celule prin endocitoz mediat de receptori
Tranferina este o glicoprotein sanguin care transport fierul
de la ficat i de la intestin ctre celule.

[note curs]

Page 50

Biologie celular i molecular

Toate celulele n cretere conin pe suprafaa lor receptori


pentru transferin, care leag cu mare afinitate ferotransferina
(forma cu 2 Fe3+ ataai) la ph neutru, dup care complexul receptorferotransferin este endocitat.
Cei 2 ioni, legai iniial, vor rmne n celul, iar
apotransferina (forma fr fierul ataat) este reciclat.
n acest proces se pare c tot ph este cel care regleaz
ataarea sau ruperea legturilor ferotransferin-ionii de fier.

Iniierea infeciilor virale prin endocitoz


La unele virusuri animale, materialul viral i nveliul proteic
sunt nvelite de un bistrat fosfolipidic membranar. Virusul ptrunde
prin nmugurirea membranei plasmatice a celulei gazd, astfel c,
fosfolipidele virale provin din aceast membran. Dar membrana
viral conine i glicoproteine specifice virale fr de care virusul
nu este capabil s infecteze celulele int.
Infecia cu aceste tipuri de virusuri este exact reversul
exocitozei. Astfel, particula viral (vezicula) se apropie, din exterior,
de membran i fuzioneaz cu aceasta. n acest fel, materialul genetic
din interiorul virusului este eliberat n citoplasm. Mecanismul de
fuziune al membranei virale cu membrana celulei int este primul
sistem de fuziune membranar foarte bine cunoscut.
Grupul de mixovirusuri a fost folosit pentru studiul
mecanismelor moleculare ale fuziunilor membranare. Particulele
virale endocitate vin n contact cu mediul acid din endozomi, ceea ce
declaneaz fuziunea membranei virale cu membrana endozomului i
eliberarea acidului nucleic n citoplasm.
Unele virusuri cum sunt HIV ( virusul imunodeficienei umane),
paramixovirusul, fuzioneaz cu membrana celular fr a interveni
procesul de endocitoz.
Receptorul pentru virusul HIV este o glicoprotein de suprafata
numit CD4, care exist doar la un tip special de limfocite T ale
sistemului imun, la macrofage i la un grup special de celule din
creier. HIV infecteaz i omoar doar aceste celule, dar aceasta
cauzeaz blocarea ntregului sistem imunitar i eventual moartea
persoanei.
Infecia viral se poate extinde i direct, de la o celula la alta,
fr a fi implicate formele libere ale virusului. n cursul replicrii
virale ntr-o celul T, se produce o cantitate considerabil de
glicoprotein viral i pe suprafaa celulei gazd. Aceste proteine de
pe suprafaa celulei infectate se pot lega la proteinele CD4 existente
pe suprafaa celulelor T neinfectate ceea ce, n cele din urm, duce la
fuzionarea celor 2 celule. Rezult astfel o celul binucleat (sinciiu)
a crei activitate imunologic este defectuoas.

[note curs]

Page 51

Biologie celular i molecular

CAPITOLUL 7
ORGANITELE CELULARE CU ROL N TRANSPORTUL I
SELECTAREA INTRACELULAR A MOLECULELOR
Reticulul endoplasmatic
Aparatul Golgi
Lizozomii
Mecanismul transportului vezicular
Reticulul endoplasmic (RE) este un organit delimitat de endomembran, structurat sub
forma unor cisterne i/sau tubuli, cu numeroase anastomoze, a cror fa citoplasmatic
prezint, sau nu, rugoziti i a crui funcie de baz este aceea de a produce molecule i
macromolecule eseniale organizrii i funcionrii celulelor.
RE face parte din grupul organitelor implicate n biogeneza i traficul intracelular al
membranelor, alturi de aparatul Golgi, lizozomi i sistemul endosomal, fiind primul din
serie, adic cel care iniiaz procesele celulare care se desfoar n aceste organite.
Reticulul endoplasmic reprezint cea mai abundent structur delimitat de
endomembrane din celul, coninnd mai mult de jumtate din membranele acesteia.
Spaiul mrginit de aceste membrane formeaz lumenul reticulului endoplasmatic.
Exist dou tipuri de RE: RE rugos (RER) care este acoperit de ribozomi pe suprafaa
exterioar i are rolul de prelucrare a proteinelor.
REN (neted) care nu este asociat cu ribozomii, fiind implicat mai ales n metabolismul
lipidic.
RE i sinteza proteinelor
Biosinteza tuturor proteinelor ntr-o celul se iniiaz n citosol. Excepie fac proteinele
codificate de ADN-ul mitocondrial (puine; nu mai mult de 10% dintre proteinele necesare
funcionrii mitocondriei).
Reticulul endoplasmatic preia selectiv ptoteinele din citosol, nainte ca sinteza lor s se
fi terminat la acest nivel.
Se pune problema: cum tie RE care dintre complexele de biosintez proteic
(polisomi) trebuie s fie preluate la nivelul membranei sale? Informaia prin care se face
selecia se afl n nsui lanul polipeptidic n formare. Ea este o secven compact de 1530 aminoacizi hidrofobi .

n 1960, George Emil Palade (premiul Nobel 1974 pentru


descoperiri n domeniul biomedical) i colaboratori au demonstrat
pentru primaoar rolul RE n sortarea i prelucrarea proteinelor.
Calea secretorie a proteinelor este: RER- aparat Golgi- vezicule
secretorii- exteriorul celulei.

[note curs]

Page 52

Biologie celular i molecular

Exist dou tipuri de transport prin care circul proteinele sintetizate la nivelul
ribozomilor:
1- Transportul post-translaional proteinele destinate s rmn n citosol sau s fie
ncorporate n nucleu, mitocondrii, peroxizomi sunt sintetizate n ribozomii liberi
i eliberate n citosol cnd translaia lor s-a terminat, deci sinteza e finalizat.
2- Transportul co-translaional majoritatea proteinelor destinate secreiei sau
ncorporrii n RE, ap. Golgi, lizozomi sau membrane plasmatice, sunt sintetizate n
ribozomii legai la membran i transportate n RER pe msur ce translaia are loc.
n reticulul endoplasmatic, deoarece proteinele sunt translocate n timpul sintezei lor,
ribozomii responsabili pentru aceast sintez trebuiesc ataai pe membrana reticulului
endoplasmatic. Aceti ribozomi legai la membran, acoper suprafaa reticulului
endoplasmatic, formnd regiuni care delimiteaz reticulul endoplasmatic rugos (RER).

Deplasarea proteinelor de la un compartinent celular la altul:


1- Transport prin translocatori proteici, mecanism de transport care se face
n mod direct, prin bistratul lipidic, cu ajutorul unor proteine nserate n
membranele care separ cele 2 compartimente.
2- Transportul prin vezicule, veziculele nglobeaz macromolecule din
lumenul unui compartiment desprinzndu-se prin nmugurire de
membrane acestuia, pentru ca apoi s-i descarce coninutul n lumenul
altui compartiment, ca urmare a fuziunii cu acesta. Nu strbat nici o
membrana (Figura 7.1).

Figura 7.1 Transportul macromoleculelor prin vezicule


Orientarea proteinelor de secreie ctre RE este realizat de secvenele semnal care
au 15-30 aminoacizi, i reprezint o poriune ntins de resturi hidrofobe. Pe msur ce ies
din ribozomi, secvenele semnal sunt recunoscute i legate de o particul de recunoatere a
semnalului (SRP=semnal recognition particle). Particulele SRP sunt macromolecule
complexe, formate din proteine i ARN.

[note curs]

Page 53

Biologie celular i molecular

Figura 7.2 Sinteza de proteine secretorii (sau enzime lizozomale) la nivelul


ribozomilor de pe membrana RER (1-nceputul sintezei, n afara membranei, 2ataarea ribozomilor de membrana RE prin recunoaterea semnalului SRP de
receptorii membranari, 3-deschiderea canalului spre lumenul RE, 4-eliberarea SRP
n citoplasm i a polipeptidului prin canal n lumenul RE) dupa Karp,
Receptorul pentru SRP care este inserat n membrana RE i leag specific particulele de
SRP, n momentul n care ele s-au ataat la peptidul semnal de pe lanul polipeptidic n
cretere.
Legarea de receptor elibereaz SRP att de ribozom ct i de secvena semnal a lanului
polipeptidic care se nate.
Ribozomul, n continuare se leag la un complex de translocare proteic (din membrana
RE), secvena semnal este introdus ntr-un canal membranar (Figura 7.2). Translaia se poate
relua, iar lanul polipeptidic n cretere este translocat prin membran n RE.
Pe msur ce translocarea are loc, secvena semnal este clivat de o peptidaz semnal
i polipeptidul este eliberat n lumenul RE.
Proteinele care vor fi ncorporate n membrana plasmatic sau n membranele RE, ap.
Golgi sau lizozomilor sunt iniial inserate n membrana RE fr s fie eliberate n lumen. De
la membrana RE ele circul, ctre destinaia final ca i proteine de secreie pe aceeai cale
(RE-ap.Golgi- membrana plasmatic sau lizozomi). Transportul lor se face sub form de
componente membranare i nu proteine solubile.
REN i sinteza lipidelor
Este poriunea cea mai important pentru sinteza lipidelor.
Deoarece sunt extrem de hidrofobe, lipidele nu sunt sintetizate n mediul apos al
citosolului, ci n asociere cu alte membrane n RE, apoi sunt transportate din RE ctre
destinaiile finale, fie n vezicule, fie prin proteine carrier.
La acest nivel sunt sintetizate fie formele finale, fie precursori ai lipidelor. Cele mai
multe lipide sunt de tipul fosfolipide, glicolipide, colesterol. Cele mai multe deriv din
glicerol si sunt sintetizate pe faa citosolic a membranei RE din precursori citosolici.
Noile fosfolipide vor fi sintetizate numai pe faa membranar citosolic, de unde sunt
translocate cu ajutorul unei proteine denumite flippaze, ctre jumtatea luminal a
bistratului, ceea ce echilibreaz distribuia fosfolipidelor. Aceste flippaze sunt specifice
pentru fiecare tip de fosfolipid, asigurnd astfel i asimetria bistratului.

[note curs]

Page 54

Biologie celular i molecular

Colesterolul este produs n RE printr-un proces biologic


complex, bine elaborat i atent reglat, format din multe etape.
Materia prim este acetil-CoA (CoA coenzima A), iar intermediarul
de baz este acidul mevalonic, format prin activitatea HMG CoA
reductazei (HMG 3-hidroxi-3metilglutaril). n etapele urmtoare se
produc o serie de transformri la care particip enzimele ce fac parte
din bagajul molecular al RE.
Tot la nivelul RE sunt produse ceramidele, precursorii sfingomielinelor i
glicolipidelor. Ceramidele se obin prin amidarea sfingaminei, un aminodiol alifatic,
precursor al sfingozinei obinut din L-serin i palmitil-CoA. Dihidro-ceramidele, astfel
obinute, sunt dehidrogenate. Ceramidele sunt transformate n sfingomieline, sau glicolipide
(cerebrozide) la nivelul complexului Golgi.
Un aspect interesant, care merit punctat este faptul c, celula nu este nevoit s
sintetizeze fosfolipidele de novo, atunci cnd proporia dintre diferitele tipuri trebuie s
se schimbe la nivelul bistratului. Fosfolipidele pot suferi reacii de disproporionare,
adic acele reacii prin care ele pot trece dintr-una n alta.
Posibilitile de disproporionare nu sunt nici universale (adic oricare dintre ele s
poat trece n oricare dintre celelalte), nici ntotdeauna bidirecionale. Astfel sunt cunoscute
urmtoarele posibiliti de disproporionare:
La nivelul RE:
a. fosfatidiletanolamina poate trece n fosfatidilcolin (conversia implic reacii
de metilare pentru care exist enzima adecvat:fosfatidiletanolamin-N-metiltransferaza;
b. exist posibiliti de conversie n ambele sensuri ntre fosfatidilcolin,
respectiv fosfatidiletanolamin i fosfatidilserin (prin reacii de schimb la
nivelul capului hidrofil: colina, sau etanolamina sunt schimbate cu serin, sub
aciunea unor fosfatidilserin- sintaze);
La nivelul mitocondriei
a. fosfatidilserina poate trece n fosfatidiletanolamin (prin decarboxilare sub
aciunea fosfatidilserin-decarboxilazei)
Exportul proteinelor i lipidelor din RE
Moleculele sunt exportate n vezicule formate prin nmugurire din RE. Apoi veziculele
fuzioneaz cu membrana aparatului Golgi i de aici pot s ajung la lizozomi sau la
membrana plasmatic.
n timp ce sunt transportate prin vezicule, lipidele i proteinele, nu-i modific
orientarea spaial. Dac trebuie s rmn n RE proteinele sunt marcate prin secvene int
care mpiedic mpachetarea i transportarea lor n vezicule.

[note curs]

Page 55

Biologie celular i molecular

Figura 7.3 Schem transport vezicule prin compartimentele celulare


Metabolismul lipidelor-desaturarea acizilor grai i detoxifierea celular
Un alt proces care implic metabolismul lipidic, cu importan n capacitatea celulelor
de a modula proprietile fizico-chimice ale membranelor, este desaturarea acizilor grai.
Aceasta se face prin aciunea unui complex enzimatic ce conine: citocrom B5, NADHcitocrom B5-reductaz i acid gras desaturaze.
Procesul are loc adesea cu alungirea lanului alifatic. Nu exist dovezi c aceste
procese s-ar petrece direct pe fosfolipide, ci doar pe acizii grai esterificai, ca tioesteri, cu
CoA. Modularea cantitii de acizi grai nesaturai n fosfolipidele membranare permite
celulelor s-i regleze fluiditatea membranelor, n conformitate cu nevoile de moment.
Faptul c desaturarea se face pe acizi grai n afara lipidelor membranare, ar nsemna
c, modularea fluiditii se face prin sinteza de novo a fosfolipidelor. O problem care se
ridic este legat de eficiena rspunsurilor n modularea fluiditii pe aceast cale.
Detoxificarea celular
Procesele care rezolv aceast problem implic metabolizarea, pentru eliminarea din
celul, a compuilor liposolubili, care s-ar putea acumula n bistratul lipidic, afectndu-i
fluiditatea ntr-un mod necontrolat de celul.
Aceti produi pot fi fiziologici, patologici, sau farmacologici. La nivelul RE aceti
produi hidrofobi sunt mai nti hidroxilai prin aciunea unui complex enzimatic bazat pe
citocrom P450/NADPH-citocrom P450-reductaz. Ei sunt astfel transformai n structuri
hidrofile, uor de eliminat din celul. Dac este cazul, aceste prime modificri sunt urmate de
grefarea, la gruprile hidroxil astfel obinute, a unor structuri glucidice sau grupri sulfat, care
mresc hidrofilicitatea produilor rezultai.

[note curs]

Page 56

Biologie celular i molecular

Rolul n detoxificarea celular este spectaculos sugerat i de


fenomenul de hiperplazie (creterea cantitii, sau numrului de
structuri) a REN n hepatocitele indivizilor medicai, pentru o
perioad mai ndelungat, cu barbiturice.
La scurt timp dup nceperea perioadei de tratament, crete
semnificativ cantitatea de REN n celulele ficatului. Hiperplazia este
reversibil, cantitatea de REN revenind la normal la scurt timp dup
ncetarea medicaiei. De remarcat faptul c, n hepatocitele normale,
structurile de RE prezint o proporie de echilibru (~1:1) ntre RER i
REN, astfel nct modificrile acestui raport sunt uor de observat.
Reticulul endoplasmic depozit dinamic de Ca2+
Aceast funcie este pregnant manifest la celulele musculare striate. La aceste celule,
la care reticulul endoplasmic este denumit reticul sarcoplasmic (RS), funcia i dinamica ei
sunt realizate prin cooperarea mai multor componente moleculare. O prim component este
calsechestrina, protein cu mare afinitate pentru ionii de calciu, aflat n cantitate mare n
lumenul organitului.
Prezena calsechestrinei contribuie la controlul cantitii de
Ca liber din lumen (conform constantei sale de afinitate), n
condiiile unei concentraii totale de Ca2+ crescute. La stimularea
celulelor, se deschid n membrana RS canale de calciu controlate
chimic (prin inozitol tris-fosfat IP3), prin care ionii de calciu, aflai
liberi n lumen, ptrund n citosol i declanaz contracia.
Trecerea Ca2+ din lumenul RS n citosol are loc atta timp ct
canalele sunt deschise, pe baza deplasrii echilibrului dinspre calciul
legat pe calsechestrin, spre calciul liber. Ciclul se nchide prin
aciunea unor pompe de calciu din membrana RS, care reintroduc
Ca2+ n lumenul RS, unde calsechestrina l complexeaz, pentru a
pstra constant concentraia de ioni liberi.
2+

Abundena i distribuia intracelular a RE


Reticulul endoplasmic este un organit ubicuitar. Rolul su n biogeneza membranelor l
face indispensabil organizrii i funcionrii celulelor. Chiar i n cazul eritrocitului (lipsit de
organite), reticulul endoplasmic a fost prezent i a activat n timpul diferenierii precursorilor,
pn n momentul maturrii elementului circulant. Dac, de regul, RE conine cel puin
jumtate din membranele dintr-o celul, raportul dintre componenta rugoas i cea neted
variaz n funcie de tipul de celul.
Exist celule n care RER este preponderent (celule specializate n sinteza i secreia de
proteine: exemplul tipic l formeaz celulele acinare pancreatice), sau celule n care REN este
preponderant (celule specializate n sinteza i secreia de hormoni steroidici; de exemplu
celulele zonei corticale a glandei suprarenale, sau celulele Leydig din testicul).
Un alt caz (reprezentat prin hepatocite de exemplu) este acela al celulelor n care
raportul RER/REN este echilibrat. Ct privete distribuia intracelular a RE aceasta poate fi
difuz, cum ar fi n hepatocite, enterocite, sau polarizat, cum este n cazul celulelor acinare
pancreatice, unde RER este localizat n jumatatea bazal a celulelor, polul apical al acestora
fiind ocupat de vacuolele de secreie.

[note curs]

Page 57

Biologie celular i molecular

Aparatul Golgi
Dup ce au fost sintetizate n RE rugos, majoritatea proteinelor se deplaseaz prin
intermediul veziculelor de transport ctre aparatul Golgi (Figura 7.3). Veziculele aparatului
Golgi sunt dispuse ntre reticulul endoplasmatic i membrana plasmatic, sau ntre reticulul
endoplasmatic i alte organite celulare cum ar fi lizozomii.
Aparatul Golgi este alctuit din saci membranari turtii si din vezicule asociate i se
caracterizeaz printr-o polaritate morfofuncional distinct (Figura 7.4).Se consider c
aparatul Golgi are 3 compartimente distincte :
1. Reeaua (faa) Golgi cis este orientat spre elementele tranziionale ale RE fiind
strns asociat cu acestea.
2. Pachetul de cisterne (faa median) care este format din ansamblul de vezicule
aplatizate, suprapuse i dispuse ntre feele cis i trans.
3. Reteaua (faa) Golgi trans este orientat spre periferia celulei i care se continu cu o
serie de formaiuni veziculare.

Figura 7.4 Aparatul Golgi- structura A (schem) i B (microscopie electronic) (dup


Karp, 1999)
Proteinele i lipidele ajung prin intermediul veziculelor, de la nivelul RE, la faa cis a
aparatului Golgi, apoi de aici trec tot prin intermediul veziculelor pn la faa trans, de unde
se desprind alte vezicule care transport moleculele ctre alte destinaii.
Moleculele sunt supuse modificrilor pe parcursul acestui traseu, la fiecare nivel. Dup
ce au fost modificate, ele sunt mpachetate n vezicule care nmuguresc din sacii golgieni i
trec apoi la urmtorul nivel, fuzionnd cu urmtoarea serie de saci membranari.
Este structura care sorteaz i prelucreaz proteinele care urmeaz s fie
transportate ctre diferite destinaii: lizozomi (Figura 7.5), membrana plasmatic. Sunt
sintetizate glicolipide i sfingomielina.
Modul n care contribuie aparatul Golgi la funcionarea celular este complex fiind
implicat n transportul, concentrarea i prelucrarea biochimic a produilor de secreie,
stocarea, mpachetarea i expedierea materialelor ambalate. n cadrul prelucrrii biochimice a
compuilor, ce urmeaz a fi secretai, sunt de menionat cteva din procesele complexe care
au loc:

[note curs]

Page 58

Biologie celular i molecular

a. prelucrarea sfingolipidelor (biosinteza sfingomielinelor i glicolipidelor prin


modificarea ceramidelor produse n RE);
Sfingomielina este sintetizat prin transferul gruprii fosforilcolina din
fosfatidilcolin la ceramide. De asemenea, prin adiia carbohidrailor la
ceramide poate genera o serie de glicolipide diferite. Aceste molecule,
urmnd transportul vezicular, sunt localizate ulterior pe faa exterioar a
membranei plasmatice, gruprile polare ale acestor molecule fiind expuse
spre suprafaa celulei.
Oligozaharidele din structura glicolipidelor sunt importante elemente
(markeri) de recunotere ntre celule.
b. glicozilarea proteinelor ( n tranzitul prin complexul Golgi, proteinele de
secreie sunt modificate prin proteoliz parial sau glicozilare mai exact are
loc o tiere a unor poriuni din lanul polipeptidic, sau ndeprtarea unora
dintre monozaharidele care fuseser grefate pe lanul polipeptidic la nivelul
RER);

Figura 7.5 Transportul vezicular - marcarea enzimelor lizozomale cu manoza 6-fosfat


(dup Alberts, 2006)
a. producerea glicozaminoglicanilor cu asamblri ale proteoglicanilor
membranari, sau ai matricei extracelulare;
b. sulfatarea unor glucide (att din glicozaminoglicani, ct i din unele
glicoproteine); substratul de pe care sulfo-transferazele transfer sulfatul este
3-fosfoadenozin-5-fosfosulfatul;
c. marcarea enzimelor lizosomale prin eticheta manozo-6-fosfat (M6P) i
biogeneza lizosomilor (Figura 7.5);
d. maturarea proteinelor (proces ce implic att modificri enumerate la
punctele b e, ct i prelucrri proteolitice);

[note curs]

Page 59

Biologie celular i molecular

e. sortarea i transportul moleculelor i macromoleculelor la destinaia final n


celul, sau pentru secretarea (exocitarea) lor; proteinele i lipidele de
membran nou sintetizate sunt nchise n vezicule speciale, diferite de
veziculele de secreie i de cele cu enzime lizozomale. Aceste vezicule nou
create sunt expediate de la aparatul Golgi spre plasmalem sau alte membrane
celulare.
f. biogeneza i traficul intracelular al membranelor (proces care nu poate fi
separat de toate celelalte enumerate).
n celulele sexuale seminale, complexul Golgi se transform n formaiuni condensate
acrozomi, care se afl n capul spermatozoidului, fiind capabile s elibereze substane cu
aciune litic asupra nveliului ovulului, n scopul fecundrii acestuia i a formrii zigotului.

Lizozomii
Lizozomii sunt organite care conin o serie de enzime cu rol n degradarea intracelular.
Aceste structuri au n general form sferic i prezint o serie de variaii de mrime i form
ca rezultat al diferenei dintre coninutul n particule care au fost preluate pentru digestie.
Enzimele pe care le conin pot distruge toate tipuri de molecule polimer din celul: proteine,
acizi nucleici, carbohidrai i lipide.
Lizozomii funcioneaz ca un sistem digestiv al celulei, care fie degradeaz elemente
din afara celului endocitate, fie diger compui uzai din propria celul.
Lizozomii conin aproximativ 50 de enzime care pot hidroliza proteine, ADN, ARN,
polizaharide, lipide.
Enzimele hidrolitice acide sunt meninute n stare latent, n interiorul membranei,
activitatea lor nemanifestndu-se atta timp ct membrana lizozomal este integr.
Coninutul n enzime hidrolitice variaz n limite largi cu specia, tipul de esut, tipul de
celul, gradul de activitate sau momentul de activitate. Una din enzimele ubicviste, prezent
n toi lizozomii celulari, indiferent de specie, esut sau tipul celular este fosfataza acid,
enzim socotit marker a lizozomilor.
Membrana lizozomal este permeabil pentru produii de hidroliz (aminoacizi,
nucleotide) pe care iexcret n citoplasm unde sunt reutilizai. n structura acestei
membrane exist pompe de H+, care fac posibil ptrunderea protonilor (ATP dependent) ce
favorizeaz un pH acid (ph=5) n interiorul veziculelor. n restul citoplasmei pH este
meninut la 7,2
Lizozomii care au aspect omogen i sunt de talie mic (0,2-0,4 m) au un bogat
coninut de enzime hidrolitice i se numesc lizozomi primari sau de acumulare enzimatic.
Lizozomii cu matricea de aspect polimorf iau natere din lizozomi primari printr-un
proces de acumulare a unor materiale de provenien diferit i au fost denumii lizozomi
secundari.
Dup modul de formare i respectiv materialele incluse de vezicule lizozomii sunt
clasificai astfel:
A- endozomi sau heterolizozomi, n care sunt incluse materialele endocitate, aceste
vezicule se formeaz prin fuziunea lizozomilor primari (care conin enzime hidrolitice)
cu heterofagozomii (vezicule formate n urma fagocitozei, endocitozei sau pinocitozei).

[note curs]

Page 60

Biologie celular i molecular

Procesul de degradare a substanelor, n aceste vezicule, este


denumit heteroliz. Acest proces este ntlnit n: procesele de
aprare mpotriva bacteriilor i virusurilor, n distrugerea hematiilor
mbtrnite (macrofage din splin), catabolismul proteinelor n
hepatocite sau nefrocite.
B-autolizozomi, care nglobeaz particule din citoplasm (mitocondrii uzate, ribozomi,
fragmente de membrane) prin fuziunea dintre lizozomii primari cu veziculele denumite
autofagozomi.
Un organit ce urmeaz a fi digerat este nconjurat de membrane ale RE formnd
autofagozom.
Exp. n celula hepatic o mitocondrie trieste 10 zile dup care
trebuie distrus prin digestie lizozomal.
O form de autofagie este i crinofagia, proces ntlnit n glandele cu secreie intern i
extern, n care granulele de secreie n exces, ce nu sunt eliminate din celul, se unesc cu
lizozomii.
Factorii care iniiaz permeabilitatea membrane lizozomale i activarea enzimelor
hidrolitice sunt fie hormoni, vitamine, fie ageni chimici (detergeni, droguri) sau radiaii (X
sau UV).

Bolile incluziunilor celulare


Mutaiile genelor care codific enzimele lizozomale sunt
responsabile pentru mai mult de 30 de boli genetice la om. Acestea
pot fi generate de deficiene ale unei singure enzime sau mai multe i
const n acumularea diverselor material nedegradate n celule.
Una dintre cele mai comune boli lizozomale este boala Goucher
care este cauzat de mutaia genei care codific enzimele lizozomale
necesare degradrii glicolipidelor.
O alt situaie este n cazul bolii celulelor I, caz n care, apar
deficiene ale enzimelor care catalizeaz etapele de recunoatere i
marcare a moleculelor ce urmeaz s ajung n lizozomi cu
moleculele de manoz 6-fosfat (M6-P), etap ce are loc n aparatul
Golgi.
Enzimele lizozomilor din fibroblaste lipsesc, astfel c,
substraturile nedigerate se acumuleaz sub form de incluziuni.
Enzimele hidrolitice sunt absente n lizozomi, dar se regsesc n
snge n forma lor activ, ceea ce indic faptul c, anomalia (de
natur genetic) si are originea n defectul de sortare la nivelul
aparatului Golgi, ceea ce face ca hidrolazele s fie secretate n snge
i nu ncorporate n lizozomi (lipsete manoza 6-fosfat).

[note curs]

Page 61

Biologie celular i molecular

Mucopolizaharidozele MPZ
Rezulta din deficitul unei enzime lizozomale necesara pentru
catabolismul glicozaminoglicanilor. Glicozaminoglicanii (GAG),
care sunt constituenii majori ai esutului conjunctiv, reprezint
carbohidrai compleci cu lan lung care sunt de obicei atasati
proteinelor pentru a forma proteoglicanii.
Caracteristicile clinice ale muco-polizaharidozelor rezult din
acumularea lizozomal de GAG parial degradat i nedegradat i
includ tipic facies cu trsturi aspre, grosolane, opacifiere corneana,
organomegalie, ankiloza articulaiilor, anomalii osoase, hernii,
statura unica i, n unele afecuni, retardare mentala.
Produii de degradare ai dermatanului, keratanului i
condroitin sulfatului sunt asociai cu manifestrile viscerale, iar
acumularea produilor de degradare ai heparan sulfatului determina
deficiena
mentala.
Constatrile de laborator includ prezena limfocitelor vacuolare pe
frotiul periferic i prezena de GAG n urin.
Hurlers sindrom este din categoria muco-polizaharidozelor
de tip I (MPZ-I) i se datoreaz absenei sau insuficienei enzimei L-iduronidaz, responsabil de degradarea mucopolizaharidelor n
lizozomi.
Enzima
este
necesar
pentru
matabolizarea
glicozaminoglicanilor (GAG). n prezena deficitului enzimatic,
acetia se vor acumula n lizozomii celulelor macrofage, determinnd
o suferin multisistemic: visceral, osoas i neurologic.

[note curs]

Page 62

Biologie celular i molecular

CAPITOLUL 8

PROCESE I STRUCTURI IMPLICATE N SINTEZA ENERGIEI


CELULARE
Organizarea i funcionarea mitocondriei
Originea i sistemul genetic al mitocondriei
Importul de protein i asamblarea la nivel mitochondrial
Mecanismul de fosforilrii oxidative
Peroxizomii
Toate procesele care implic creterea i metabolismul celular necesit un aport de
energie. n majoritatea cazurilor, energia provine din hidroliza uneia din legturile
macroergice ale ATP.
Energia eliberata prin aceast hidroliz este utilizat direct pentru a declana alte
procese nefavorabile energetic :

Transportul moleculelor mpotriva gradientului de concentraie


Micarea cililor
Contracia muscular

n celulele eucariote energia necesar activitilor vitale celulare se obine prin


degradarea aeroba i complet a glucidelor, lipidelor, pn la stadiul de CO2 i ap; aceast
degradare este cuplat cu sinteza de ATP
Prima etapa a acestor degradri are loc n citoplasm prin glicoliza anaeroba, iar etapa
finala are loc n mitocondrii, unde energia eliberat prin oxidarea substanelor (glucidice si
lipidice) este transformat n energie chimic sub forma legturilor fosfodiesterice ale ATP.
Glicoliza anaerob din citoplasm este procesul prin care glucoza este degradat
numai pn la acid piruvic i prin care se formeaz doar dou molecule de ATP.
Prin oxidarea piruvatului, la nivel mitocondrial, de ctre oxigenul molecular, pn la
CO2 i ap, randamentul este mult superior producnd 34 molecule de ATP.
Mitocondriile sunt organite prezente n citoplasma tuturor celulelor animale sau
vegetale, cu excepia hematiei adulte. Fr mitocondrii, o celul ar fi total dependent de
glicoliza anaerob pentru a produce ATP necesar.
Mitocondria este organitul responsabil de producerea de energie rezultat n urma
scindrii moleculelor de glucide i lipide. Reprezint centrul respirator al celulei. La nivelul
ei sunt situate enzimele ciclului Krebs i ale lanului respirator.
[note curs]

Page 63

Biologie celular i molecular

Figura 8.1 Aspect general al mitocondriei-imagine microscop electronic


n majoritatea celulelor mitocondriile sunt rspndite n toat citoplasma. n celulele
cu activitate special sau n cele cu polaritate funcional, mitocondriile se concentreaz n
regiunea cea mai activ metabolic.
Astfel, la enterocit, mitocondriile sunt aglomerate ctre polul apical. n nefrocit
mitocondriile sunt aezate la polul bazal, n mici compartimente formate din pliurile
membranei bazale.
Aezarea lor n citoplasm nu este fix, ele pot s se deplaseze prin intermediul
curenilor citoplasmatici, sau pot fi animate de micri interne ce produc rsuciri ale
organitului n jurul axei sale, realiznd astfel, contacte strnse sau tranzitorii cu unele
structuri celulare.
Astfel, n celulele secretorii se observ adesea, n fazele de elaborare proteic,
alturarea mitocondriei la membrana nuclear sau la RER. Tinnd seama de faptul c
mitocondria este generatorul energetic celular, aceast micare este necesar pentru a pune la
dispoziia nucleului sau RE energia necesar declanrii proceselor de sintez n celul. Cnd
se instaleaz perioada de repaus mitocondriile se desprind de nucleu i se rspndesc n
citoplasm.
Numrul variaz de la o specie la alta, de la un tip celular la altul sau funcie de starea
funcional (nefrocit=300/cel; n hepatocit = 1000-2000/cel).

[note curs]

Page 64

Biologie celular i molecular

Forma mitocondriilor i structura mitocondriei


Microscopia optic a evideniat 3 forme sub denumirea de condriom.
1- Mitocondria sau forma granular este cea mai activ;
2- Condriomitele granule asezate n monom, sunt considerate forme mai puin
active dect mitocondriile, dar se pot reactiva prompt n cazul unei activiti
celulare crescute.
3- Condrioconii apar sub form de filamente sau bastonae reprezentnd forma de
repaus a condriomului, cu posibiliti de reactivarea mai lente.
Este constituit din dou membrane (una extern i una intern)
Membrana extern este neted i delimiteaz organitul la periferie, este lipoproteic,
asemntoare cu celelalte citomembrane, prezentnd o grosime de aproximativ 6-7 nm. Ea
este permeabil pentru ionii de Ca2+ i electrolii. De asemenea, trecerea moleculelor mici
prin aceast membran este facilitat de prezena proteinelor de tipul porinelor, care formeaz
canale membranare.
n membrana extern se gsesc proteine n proporie de 60%, ce reprezint aproximativ
4% din totalul proteinelor mitocondriei, iar lipidele se gsesc n proporie de 40%, cu un
procent ridicat de colesterol ce face ca membrana extern s fie permeabil, prin ea
realizndu-se schimburile ntre citosol i organit.
Pe membrana extern i desfoar activitatea o serie de enzime:
C0A-liganza
Citocrom B5
Kinureinhidroxilaza
Monoaminoxidaza (MAO) aceasta este enzima marker a acestei structuri.
Membrana intern- de o grosime de aproximativ 6 nm de natur lipoproteic.
Proteinele sunt n proporie de 80%, reprezentnd aproximativ 1/5 din totalul proteinelor
mitocondriale, lipidele se afl numai n proporie de 20% avnd colesterolul n procent
sczut, ceea ce face ca permeabilitatea membranei interne s fie redus, constituind un fel de
barier ntre matricea mitocondrial i restul organismului.
Prin membrana intern trec spre spaiul intern ionii de Ca2+ i Mg2+ necesari
desfurrii activitilor enzimelor cuprinse n matricea mitocondrial, de asemenea, trec
moleculele de ATP i ADP necesare desfurrii procesului de fosforilare oxidativ, acizii
grai i unii aminoacizi.
Aceti produi sunt transportai prin membrana intern cu ajutorul unor proteine aflate
n membran care servesc drept transportori sau translocatori. Din aceast grup fac parte
translocazele i permeazele.
Membrana intern prezint falduri, formeaz creste proeminente n lumenul
mitocondrial i prezint n cantitate mare un fosfolipid caracteristic, puternic hidrofob, numit
cardiolipin, care explic impermeabilitatea sa la ioni. Cardiolipina reduce permeabilitatea
pentru protoni i OH-.
Membrana intern i crestele sunt alctuite din formaiuni mai mici numite particule
elementare sau particule F sau subuniti de membran, oxizomi.
Existenta acestora a fost dovedit prin studii biochimice recente, care au reuit izolarea
i asamblarea lor cu formarea de citomembrane.
Fiecare particul elementar (oxizom), component lipoproteic caracteristic
citomembranelor este constituit de obicei din 3 piese:
- O pies bazal ( 40-110)
- O tij sau pies intermediar (50 lungime)
- Capul sau piesa cefalic (80-100 diametru).

[note curs]

Page 65

Biologie celular i molecular

Forma pieselor componente poate varia n cadrul membranei interne, ca i numrul lor.
n componenta lor poate s apar numai unul sau numai dou segmente n loc de 3.
n fiecare caz, membrana intern prezint o baz alctuit din citomembran n mozaic
sau trilaminat pe a crei fa intern se ataeaz segmentele izolate, de obicei cefalice, ale
subunitilor.
Particulele elementare s-au dovedit a conine fiecare lanul transportor de electroni
(lanul respirator) i enzimele respective (citocromoxidaza, succin coenzima Q reductaza,
NADH citocrom C reductaza, citocrom a, b, c) precum i enzimele procesului de fosforilare
oxidativ.
Proteinele majore din membrana intern sunt:
ATP-sintetaza care produce ATP n spaiul matriceal
Proteine specifice de transport
Enzimele reaciilor oxidative ale lanului respirator.
NADH constituie substratul cap de serie al transportului de electroni, spre oxigenul
molecular, de-a lungul lanului enzimatic respirator.
Cristele mitocondriale difer ca numr i poziie de la o celul la alta, n raport cu
diferitele condiii fiziologice sau patologice. Astfel, la o diet alimentar carenial, crestele
mitocondriale se terg, dispar, relundu-se dieta normal ele se refac dac starea precar nu a
depit limita metabolic fiziologic. Cristele mresc suprafaa membranei, crete capacitatea
mitocondriei de a genera ATP.
Cristele mitocondriale pot fi aezate perpendicular pe axul mare al mitocondriei, sau
paralel cu acesta. n hepatocit aria membranei interne a mitocondriei este de 5x mai mare
dect aria membranei externe, iar suprafaa membranei interne este de 15x mai mare dect
membrana plasmatic. n celulele musculare (scheletice, cardiace) de 3x mai multe criste
dect n celule hepatice.
ntre membrana extern i intern se afl compartimentul extern, iar compartimentul
intern (matricea mitocondrial) este delimitat de membrana intern i cristele mitocondriale.
Compartimentul extern- este cuprins ntre membrana extern i intern i are aspect
omogen. La acest nivel se realizeaz un schimb intens de ap i electrolii ntre mediul
extramitocondrial, pe de o parte i compartimentul intern pe de alt parte.
Aici se pot acumula unii ioni (Ca2+) care apar sub form de zone mai mari sau mai mici
izolate, sau conglomerate dense la fluxul de electroni. Ionii de calciu trebuie s se menin la
nivel sczut n citoplasm.
Compartimentul intern sau matricea mitocondrial poate prezenta la microscopul
electronic, fie aspect omogen fie granular. La nivelul ei se gsesc localizate o bun parte din
enzimele mitocondriale care sunt n numr de 200 de fiecare mitocondrie (ATP-aza, malat
dehidrogenaza).
Tot n matrice se gsesc i acizii nucleici mitocondriali.
Datorit permeabilitii ridicate a membranei externe, spaiul intermembranar este
ocupat de un fluid asemntor citosolului.
n spaiul intermembranar se afl enzimele fosforilate ale celorlalte nucleotide utiliznd
ATP ca donor de resturi pirofosfat. n acest spaiu sunt sintetizate formele trifosfat ale
ribonucleotidelor i dezoxiribonucleotidelor utilizate n sinteza acizilor nucleici i a GTP
implicat ca surs energetic n sinteza proteinelor i n sinteza de cGMP (guanozin 5,3
monofosfat ciclic).
Lumenul mitocondrial, delimitat de membrana intern, n care proemin crestele, este
ocupat de matricea mitocondrial. n matrice exist 5-10 molecule de ADN mitocondrial
circular, ribosomi mitocondriali de tip bacterial (70s), ARNm mitocondrial, ARNt i

[note curs]

Page 66

Biologie celular i molecular

complexele enzimatice ale replicrii i transcrierii ADN mitocondrial, ct i ale sintezei de


proteine de tip mitocondrial.
Ataate de crestele membranei interne, se gsesc complexe de enzime care catalizeaz
metabolizarea acizilor grai i a acidului piruvic i formarea acetil CoA; enzime care
oxideaz acetil Co-A n ciclul acizilor tricarboxilici al lui KREBS cu formare de CO2 i
NADH (nicotinamid-adenin-dinucleotid redus).
Principala surs de electroni folosit de enzimele lanului respirator incluse n
membrana intern este NADH-ul.

Figura 8. 2 Structura mitocondriei


La mitocondrie s-a difereniat un ciclu funcional mitocondrial, prezent n orice
celul. Acesta presupune formarea a trei aspecte ultrastructurale mitocondriale distincte i
reversibile:
Forma ortodoxa= cea mai rspndit sub care apar toate mitocondriile;
Forma condensat sau contractat = mitocondriile cu diametrul redus,
compartimentul intern ngustat, cristele mitocondriale nghesuite una n alta dnd n totalitate
un aspect dens la afluxul de electroni.
Starea contractat este un proces activ ce se realizeaz prin aciunea unor proteine
contractile numite mecano-enzime, evideniate n membranele mitocondriilor.
Aceste proteine sunt asemntoare proteinelor contractile din muchi, avnd ca i
acestea o intens activitate ATP-azic.
Starea umflat- se produce printr-un proces pasiv de acumulare a apei n
compartimentul intern, se realizeaz balonizarea mitocondriei, stergerea cristelor
mitocondriale, organitul apare ca o minge nconjurat de o dubl membran. n mod normal
exist o trecere permanent de la o stare la alta.
Compoziia chimic a mitocondriei
-60-64% proteine structurale, care sunt nlocuite, care sunt nlocuite la aproximativ 20
de zile
-34 % lipide, fiind alctuite din fosfolipide i colesterol n cantitate mare,

[note curs]

Page 67

Biologie celular i molecular

- 2-5% vitamine (A,C), protein-enzime (200), diferii ioni i acizi nucleici: ADN, ARN,
la care compoziia molecular este asemntoare acizilor nucleici nucleari i citoplasmatici,
dar aranjamentul structural al moleculei difer.
Prezenta acizilor nucleici n mitocondrie face ca organitul s cstige o parial
autonomie genetic care presupune:
Formarea de ctre organit de noi molecule de ADN prin acelai proces de duplicare
semiconservativ, ntlnit n nucleu.
Sintetizarea moleculelor de ARN mitocondrial dup mecanismul similar din nucleu.
Sintetizarea unor proteine structurale, n special cele destinate membranelor.
Acizii nucleici mitocondriali sunt localizati de obicei ntr-o singur zon a organitului
care se numeste zon nucleoid. n unele mitocondrii pot exista 2-6 zone nucleoide.
Genomul mitocondrial uman codific 13 proteine implicate n transportul electronilor i
fosforilarea oxidativ.
De asemenea, genele ADN mitocondrial codific i formarea ARN ribozomal (16S i
12S) ct i 22ARNt care sunt necesare pentru translaia proteinelor specifice.
Ca i ADN nuclear, cel mitocondrial poate suferi mutaii. Aceste modificri sunt
transmise pe linie matern. Mutaiile unei gene ce codific formarea ARNt mitocondrial sunt
asociate cu modificri metabolice ce cauzeaz obezitatea i diabetul.
Proteinele prezente n mitocondrii sunt mai puin cunoscute dect ADN mitocondrial.
La mamifere sunt n jur de 1000-1500 de astfel de proteine. Se consider c, mitocondriile
din esuturi diferite au proteine diferite ceea ce poate explica funcionarea specializat a
celulelor. Procesele de modificare a formei mitocondriale sau succesiunea acestor organite n
celule sunt asociate, de asemenea, cu diferenele biochimice ale acestor structuri, de la o
celul la alta.

Originea i genetica mitocondriei


Pe baza asemnrilor pronunate dintre acizii nucleici mitocondriali i cei bacterieni, sa emis de ctre unii cercettori, ipoteza c, mitocondriile sunt de fapt endosimbioni.
Se presupune c bacteria ar fi invadat celula i s-a adaptat noului metabolism,
constituindu-i dubl membran la periferie.
Mai exist i alte similitudini ntre mitocondrii i bacterii: ADN-ul bicatenar dublu
helicoidal este circular, ribozomii mitocondriali sunt din aceeai categorie cu ribozomii
bacterieni, mecanismele de replicare a ADN-ului i de sinteza a ARN sunt asemntoare.
Aceste asemnri cu bacteriile sprijin ipoteza c mitocondriile ar fi fost n trecutul
ndeprtat bacterii care au ptruns n citoplasma celulei eucariote ancestrale prin fagocitoz.
Prin selecie i o privire superioar ecosistemului n care convieuiau, starea
endosimbiotic a devenit vital (prin posibilitatea lor de a furniza ATP n citoplasma celulei
gazd i de a-i asigura capacitatea de combustie aerob, superioar energetic arderilor
anaerobe, incomplete).
Mitocondriile i pstreaz un grad ridicat de autonomie n cadrul celorlalte
compartimente, n sensul c, i sintetizeaz o parte din componentele de membran prin
determinism genetic propriu, se multiplic prin diviziune proprie i nu sunt dependente dect
n parte de compartimentele reticulo-endoplasmatice, Golgi i sintezele din citosol. Cu toate
acestea pot sintetiza doar 30% din proteinele necesare.
Se presupune c n celulele nou formate prin diviziune, exist trei posibiliti de genez
mitocondrial

[note curs]

Page 68

Biologie celular i molecular

a)- formarea de novo din molecule sintetizate de celula respectiv, molecule ce se


asambleaz formnd organitul;
b)- formarea prin condriodierez, n procesul diviziunii celulare, mitocondriile se pot
cliva n mod egal ntre dou celule fiice.
c)- formarea din alte citomembrane (RE, complex Golgi) sau din membrana plasmatic.

Figura 8.3 Formarea mitocondriilor prin diviziune (condriodierez)

Transportul metaboliilor prin membrana intern a mitocondriei


Principalele reacii de transformare a energiei metabolice ce are loc n mitocondrie
implic reactani care intr n organit (oxigenul, piruvatul, acizii grai, ADP i fosfat) i
reactani care ies din organit CO2 i ATP. Cum se realizeaz acest schimb?
1.
Transportul ADP i ATP prin membrana intern este mediat de o protein
membranar integral, translocatorul adenin nucleotid, care transport 1 molecul de ADP
din citosol n matricea mitocondrial, n schimbul unei molecule de ATP transferate din
mitocondrie n citosol. Deoarece ATP poart o sarcin mai negativ (-4) dect ADP (-3),
acest schimb este dirijat de componenta de voltaj a gradientului electrochimic.
ntruct gradientul de protoni stabilete o sarcin pozitiv pe faa citosolic a
membranei, exportul ATP n schimbul ADP este favorabil din punct de vedere energetic.
Sinteza ATP in mitocondrie necesit ioni fosfat (P) precum i ADP, astfel nct,
fosfatul trebuie importat din citosol.
Acest import este mediat de o alt protein membranar care import fosfat i export
ioni hidroxil (OH-). Acest schimb este neutru din punct de vedere energetic deoarece ionii
fosfat ca i ionii hidroxil au o sarcin -1. Totui schimbul este dirijat de gradientul de
concentraie protonic.
Ph mai mare din interiorul mitocondriei corespunde unei concentraii mai mari de ioni
hidroxil, ce favorizeaz translocarea lor ctre faa citosolic a membranei.
Energia gradientului electrochimic este folosit n mod similar pentru a dirija
transportul altor metabolii n mitocondrie.
Exportul piruvatului din citosol este mediat printr-un transportor care schimb piruvatul
pentru ionii hidroxil. De asemenea, acizii grai, acidul citric i izocitric sunt schimbai tot
prin transportori proteici.

[note curs]

Page 69

Biologie celular i molecular

Importul de proteine i asamblarea mitocondriei


Toate genele care codific proteinele necesare pentru replicarea, transcripia sau
translaia ADNmt (inclusiv componentele proteice ale ribozomilor) aparin genomului
nuclear.
Nucleul conine gene care codific majoritatea proteinelor necesare pentru fosforilarea
oxidativ i toate enzimele implicate n metabolismul mitocondrial.
Proteinele codificate de aceste gene sunt sintetizate n ribozomi liberi citosolici i
importante n mitocondrie sub form de lanuri polipeptidice complete.
Datorit celor 2 membrane mitocondriale, proteinele direcionate ctre matrice, trebuie
s traverseze ambele membrane, n timp ce alte proteine trebuie s fie sortate i dirijate ctre
spaiul intermembranar.
Majoritatea proteinelor sunt orientate ctre mitocondrie,
prin secvene
aminoterminale de 15-35 aminoacizi (presecvene) care vor fi nlturate dup proteoliz.
Presecvenele sunt recunoscute de receptori, apoi sunt inserate ntr-un complex proteic
care le direcioneaz translocarea prin membrana extern.
n urmtoarea etap, presecvenele sunt translocate ctre un complex proteic distinct
din membrana intern la nivelul unor poriuni n care cele 2 membrane sunt n contact strns
(Figura 8.4).
Translocarea proteic permanent necesit un potenial electrochimic stabilit prin
membrana intern a mitocondriei, n timpul transportului de electroni, ct i ATP.
Pentru a fi translocate prin membrana mitocondrial, proteinele trebuie s fie parial
depliate.
Proteinele ptrund iniial n matrice i de aici sunt transportate ctre membrana intern
sau extern.
O presecven ncrcat pozitiv direcioneaz transportul acestei proteine ctre matrice,
fiind urmat de o a doua secven semnal hidrofob, care este similar cu secvenele semnal
ale proteinelor bacteriene dirijate ctre RE sau destinate secreiei celulare.

Figura 8.4 Ptrunderea proteinelor prin membranele mitocondriene (1-membrana


extern,2- spaiul intermembranar, 3-membrana intern, 4-presecven, 5-receptor
membranar pentru secvena de aminoacizi, 6-ndeprtarea presecvenei)

[note curs]

Page 70

Biologie celular i molecular

Acest mecanism de sortare demonstreaz originea mitocondriilor din bacterii, pentru c


este similar cu cel al secreiei proteinelor la bacterii, al a fost numit mecanism de sortare
conservativ.
Ca i proteinele fosfolipidele sunt importate din citosol i transportate tot prin
membrana mitocondriei i tot prin interschimb lipidic (PIL).
Fosfolipidele de tipul fosfatidilcolin, fosfatidiletanolamina sunt sintetizate n RE, iar
proteinele implicate n transferul acestora extrag fosfolipidele respective din membrana
reticulului endoplasmatic, le transport prin mediul apos al citoscheletului i le elibereaz din
situsul hidrofob al PIL, n membrana mitocondrial.
Mitocondria poate sintetiza fosfatidilserin din fosfatidiletanolamin i poate cataliza
sinteza de cardiolipin, fosfolipid cu patru lanuri de acizi grai.

Activitile fiziologice ale mitocondriei Ciclul Krebs


Catabolismul celular are particularitatea de a elibera energia liber dintr-o substan
(nutrient) n etape. Toate organismele i procur energia prin degradarea alimentelor
(catabolism). Combustia alimentelor se face prin sute de reacii diferite, n schimb,
eliberarea energiei se realizeaz doar n cadrul ctorva.
Procesul prin care sunt sintetizate substantele necesare organismului este numit
anabolism.
Energia eliberat astfel este transformat ntr-o form special de energie chimic i
anume adenozintrifosfat (ATP), compus cu un nalt potenial de transfer al gruprii fosfat
(bogat n energie).
Energia potenial a dou legturi fosfatice ale ATP este reprezentat prin potenialul
lor de hidroliz.
F. Lipmann face o clasificare a legturilor astfel:
1- legturi bogate n energie- prin hidroliz degaj mai mult de 8.000 cal/mol
2- legturi srace n energie elibereaz mai puin de 3.000 cal/mol.
Molecula de ATP (adenozin trifosfat), conine 2 legturi cu energie mare i 1 legtur cu
energie sczut
Se cunosc ase tipuri de legturi bogate n energie, dintre care cinci sunt derivai
fosforilai:
- Pirofosfat (notat PPi)
- Trifosfat
- Acil-fosfat
- Enol-fosfat
- Amidin-fosfat
n cursul catabolismului produsele de combustie sunt incomplet arse, aa c produsele
terminale sunt diferitele forme ale acidului citric (acetil-coenzima A, acidul - cetoglutaric,
acidul oxaloacetic). Procesul prin care au loc aceste lanuri de reacii ale catabolismului sunt
denumite respiraie celular.
[note curs]

Page 71

Biologie celular i molecular

Aceti trei compui intr n cadrul ciclului tricarboxilic, etapa oxidrii terminale a
tuturor alimentelor.
Mitocondria este organitul la nivelul cruia se realizeaz aceste reacii complexe ale
catabolismului.
Izolarea primelor mitocondrii intacte de ctre G.E. Palade, care a stabilit structura lor
electronomicroscopic, a permis studiul activitii multienzimatice ale acestui organit,
denumit cicloforaz, deoarece n mitocondrie are loc oxidarea substraturilor n cadrul
ciclului Krebs i Lynen.
Membrana intern i matricea, reprezint situsul tuturor reaciilor de oxidare a
piruvatului i acizilor grai la CO2 i H2O, precum i sinteza cuplat a ATP din ADP i Pi.

PPi+ H2O
2ADP + 2Pi

2Pi
2 ATP

Aceste procese complexe cuprind mai multe etape i pot fi subdivizate n trei grupuri
de reacii, fiecare desfurndu-se n anumite compartimente ale mitocondriei.
1- Oxidarea piruvatului i a acizilor grai la CO2, cuplat cu reducerea transportorilor de
electroni NAD+ i FAD, la NADH+ H+ i FADH2.
Aceste reacii au loc la nivelul matricei mitocondriale.
2- Transferul electronilor de pe NADH + H+ i FADH2, la O2
Aceste reacii sunt desfurate la nivelul membranei interne i sunt cuplate cu
generarea unui gradient electrochimic de protoni de o parte i de alta a acesteia.
3- Utilizarea energiei nmagazinate n gradientul transmembranar de protoni, pentru
sinteza de ATP, de ctre ATP sintetaz, aflat la nivelul membranei interne.
Ultimele dou grupuri de reacii implic intervenia unor proteine complexe care sunt
orientate asimetric n membrana mitocondrial intern.
Cristele mitocondriale mresc mult suprafaa, ceea ce crete capacitatea mitocondriei
de a genera ATP. De exemplu, ntr-o mitocondrie din celulele hepatice, aria membranei
interne este de cinci ori mai mare dect aria membranei externe, iar suprafaa total a
membranelor interne mitocondriale dintr-o celul, este de 15 ori mai mare dect aria
membranei plasmatice.
n celulele musculare cardiace i scheletice, mitocondriile conin de trei ori mai multe
criste dect mitocondriile hepatice. Cristele mitocondriale din celulele diferitelor esuturi se
pliaz n moduri foarte variate, dar semnificaia acestor diferene morfologice este nc
inexplicabil.
Ansamblul cunotintelor privind respiraia au fost integrate graie lucrrilor lui A.
Szent-Gyrgyi, n teoria dublei activri. Prin dehidrogenarea substratului se pierd, datorit
dehidrogenazelor, unul sau mai muli hidrogeni care imediat sunt activai.
AH2

A+ 2H

2H+ + 2e-

igenul molecular este transformat n acest timp la oxigen activ de ctre


citocromoxidaz, care-i d unul sau mai muli electroni provenii de la hidrogen i
transportai de citocromi:
O2 +2e-

[note curs]

2 O-

Page 72

Biologie celular i molecular

Hidrogenul i oxigenul se unesc i formeaz apa sau ap oxigenat (descompus de


catalaz).
Formarea apei este o puternic reacie metabolic care se realizeaz prin oxidarea
hidrogenului.
Etapele procesului de respiraie celular:
1- Glicoliza (reacii anaerobe la nivel citoplasmatic)
Glucoza (6 molecule de C) este scindat n 2 molecule de lactat (3 molecule de C),
producnd 2 molecule ATP;

Glucose + 2 ADP + 2 NAD+ + 2 Pi > 2 Piruvat + 2 ATP + 2 NADH + 2 H+


2- Lactatul (C3H6O3) este convertit la piruvat care intr in mitocondrie (seriile
reaciilor aerobe) rezultnd grupul acetil (CH3CO) care se combin cu coenzima A
rezultnd acetil- CoA, reacia este catalizat de piruvat dehidrogenaz, prezent n
stare solubil n matricea mitocondrial.
3- Acetil-coenzima A intr n ciclul Krebs (au loc o serie de reacii prin care se
formeaz 2CO2, iar energia realizat este transferat la 4 molecule purttoare de
electroni
Acetil-CoA + 3 NAD + FAD + GDP + Pi + 2 H2O 2 CO2 + 3 NADH + FADH2
+ GTP + 2 H+ + CoA

Sinteza Acetil- CoA din piruvat


Piruvatul este generat n citosol prin glicoliz, apoi transportat prin membranele
mitocondriale. Formarea Acetil-CoA este o reacie puternic exergonic i ireversibil.
n ciuda aparentei sale simpliti, piruvat dehidrogenaza este una dintre cele mai
complexe enzime cunoscute. Este o molecul mare de 30 nm (aproape ct un ribozom), fiind
un complex enzimatic format din 5 coenzime.
Pentru a alimenta continuu reacia de formare a acetil CoA din glucoz, celula animal
depoziteaz glucoza n citosol, sub form de glicogen.
Glicogenul (polimer de glucoz) este coninut n granule citoplasmatice, sinteza i
degradarea sa este strict reglat n funcie de necesiti. Cnd necesitile o cer, glicogenul
este degradat, elibernd glucoza sub form de glucozo-1-fosfat. n continuare reaciile sunt
cele mai sus amintite de formare a piruvatului.
Sinteza Acetil-CoA din acizi grai
Cantitativ, grsimile sunt mult mai importante dect glicogenul, dac ne referim la
depozitele energetice ale unei celule. Aceasta deoarece oxidarea grsimilor n mitocondrii
elibereaz cel puin de 6 ori mai mult energie dect aceeai mas de glicogen n forma sa
hidratat.
Un organism uman adult poate depozita glicogen pentru doar o zi de activitate normal,
fa de grsimi care ar ajunge pentru aproximativ o lun. Dac rezervorul nostru energetic ar
fi reprezentat doar de glicogen, greutatea noastr ar trebui s creasc cu 30 kg.
Marea majoritate a lipidelor sunt depozitate n esutul adipos, de unde sunt eliberate n
snge pentru a fi preluate de celule. Necesitile cresc n perioadele dintre alimentaie.
n mod obinuit, noaptea energia se obine prin mobilizarea grsimilor, astfel c,
dimineaa, cea mai mare parte a acetil Co-A care intr n ciclul citric provine din acizi grai.
[note curs]

Page 73

Biologie celular i molecular

Dup alimentaie, cea mai mare parte a acetil Co-A provine din glucoz ingerat, iar
excesul de glucoz este folosit pentru completarea rezervelor de glicogen care au fost
consumate, sau pentru sinteza de lipide.

Oxidarea Acetil Co-A n ciclul Krebs


Stadiul final al reaciilor de oxidare a glucidelor i lipidelor este reprezentat de ciclul
Krebs sau ciclul citric, care const dintr-un set complex de 9 reacii enzimatice.
Ciclul citric este rspunztor pentru oxidarea a 2/3 din totalitatea compuilor de
carbon ai celulei, iar produi si majori sunt CO2 i NADH.
CO2 este eliminat, iar NADH + H+ transfer electronii de nalt energie pe care-i
poart, n lanul respirator, la captul acestui lan electronii sunt utilizai pentru a reduce O2 la
H2O.

Figura 8.5 Ciclul Krebs


Aceste reacii constituie ceea ce este cunoscut sub numele de ciclul acizilor
tricarboxilici, denumit i ciclul acidului citric, sau ciclul Krebs (Figura 8.5). Enzimele care
opereaz n ciclul acizilor tricarboxilici sunt localizate n matricea mitocondrial, cu excepia
succinat dehidrogenazei ce face parte integrant dintr-un complex proteic aparinnd
membranei mitocondriale interne.
Ciclul citric ncepe prin reacia dintre acetil Co-A, provenit din piruvat sau din acizii
grai i un compus cu patru atomi de C (oxalacetatul), pentru a produce o molecul cu 6
atomi de C (acidul citric).
Urmeaz alte reacii enzimatice, 2 atomi de C sunt eliminai sub form de CO 2,
regenerndu-se n cele din urm oxalacetatul, care i reia ciclul.
[note curs]

Page 74

Biologie celular i molecular

Cea mai important contribuie a ciclului Krebs este extracia electronilor de nalt
energie prin oxidarea celor 2 atomi de C ai radicalului acetil. Aceti electroni tranzitoriu
preluai de NADH i FADH2 (flavin-adenin-dinucleotid) sunt rapid transferai n lanul
respirator de pe membrana intern mitocondrial.
Majoritatea enzimelor ciclului Krebs sunt hidrosolubile, fiind localizate n matricea
mitocondrial. Sunt, de asemenea, localizate la nivelul membranei interne: succinat
dehidrogenaza i cetoglutarat dehidrogenaza.
n afar de calea descris, glucoz poate fi degradat pe ci accesorii, cum este calea
fosfogluconatului, o bucl metabolic de la nivelul glucozo-6-fosfatului, n care intervin o
serie de reacii metabolice intermediare.
n condiii normale, 30% din glucoza hepatic i 5% din cea muscular, sunt
metabolizate pe aceast cale, important att pentru sinteza lipidelor, ct i ca metabolism
suplimentar care asigur degradarea glucidelor n anumite anomalii enzimatice congenitale,
care efectueaz metabolizarea pe cale principal.
Pe aceast cale, o molecul de glucoz este consumat prin mai multe cicluri, genernd
dioxid de carbon i hidrogen.
Atomul de hidrogen eliberat nu este preluat de NAD, ca cel rezultat din calea
metabolic major, ci de NADP (coenzima II), fiind ulterior transferat de FAD cu ajutorul
unei transhidrogenaze.
Transferul electronilor de la NADH + H+ i FADH2 la O2
Degradarea complet a glucozei are ca rezultat formarea 6 molecule de CO2,
concomitent cu reducerea a 10 molecule de NAD la 10 NADH + H+ i a 2 FAD la 2 FADH2
Oxigenul molecular O2 este utilizat pentru a reoxida aceste coenzime reduse. La
nceput coenzimele i transfer perechea de electroni la molecule acceptor situate n
membrana intern a mitocondriei.
Pierderea electronilor regenereaz forma oxidat a coenzimelor (NAD i FAD),
reducnd acceptorul.
Energia care se elibereaz prin oxidarea unei singure molecule de de NADH sau
FADH2 de ctre O2 este suficient pentru a susine sinteza mai multor molecule de ATP.
De aceea, oxidarea NADH i sinteza de ATP nu pot avea loc ntr-o singur reacie, ci
transferul electronilor trept cu trept de la NADH la O2, prin intermediul proteinelor care
formeaz lanul transportor de electroni.
Protonii sunt pompai prin membrana mitocondrial intern n spaiul intermembranar,
generndu-se un gradient de concentraie protonic, n interior matricea devine negativ.
Deplasarea protonilor prin membrana intern, n sensul gradientului de concentraie, napoi n
matrice, se face prin punerea n micare a unei enzime ATP-sintetaz.
ATP- sintetaza este o protein membranar complex care realizeaz sinteza ATP din
ADP i Pi (fosfat anorganic).
Lanul transportor de electroni
Au fost identificate mai multe complexe enzimatice, respiratorii, implicate n transferul
electronilor de la NADH +H+ la O2.
1. Complexul I NADH-coenzima Q-reductaz sau NADH-dehidrogenaza este cel
mai mare complex enzimatic respirator, enzima coninnd 22 de lanuri
polipeptidice. Are rolul de a accepta electronii de la NADH i de a-i transfera prin
intermediul unei molecule mici liposolubile (ubiquinona= coenzima Q).

[note curs]

Page 75

Biologie celular i molecular

2. Complex II coenzima Q (electronii de la FADH2 ptrund n lanul de electroni).


3. Complexul III = succinat-coenzima Q-reductaza sau b-c1, este format din 8
lanuri polipeptidice i funcioneaz sub form de dimer. Complexul preia
electronii de la ubiquinon i i transfer la citocromul c, o protein membranar
periferic mobil.
4. Complexul IV citocrom-oxidaza (citocromul aa3) = coenzima Q-citocrom creductaz - complexul este tot un dimer, conine citocromi i atomi de Cu. Acest
complex transfer electroni la O2. Citocromoxidaz este acceptorul de electroni de la
citocromul c n stare redus pe care-i transfer la oxigenul molecular ca acceptor final.
Citocromii, proteinele fier-sulf i atomii de cupru pot transporta doar cte un singur
electron.

NADH+H+ cedeaz ns, cte 2 electroni, iar fiecare molecul de O2 trebuie s


primeasc 4 electroni pentru a produce ap. De aceea, exist mai multe puncte de colectare a
electronilor. Citocromoxidaza colecteaz patru electroni pe care i transfer apoi la O2.
Reacia la nivelul citocrom- oxidazei consum 90% din oxigenul captat de celule.
Tabel 8.1 Inhibitori ai fosforilrii oxidative
Compus
Rotenon
Amital
Antimicin A
Cianuri
Monoxid de carbon

Funcia
inhibitor transport e
inhibitor transport e
inhibitor transport e
inhibitor transport e
inhibitor transport e

Localizarea aciunii
Complex I
Complex I
Complex III
Complex IV
Complex IV

Azida
2,4,-dinitrofenol
Pentaclorofenol
Oligomicin

inhibitor transport e
Decuplani
Decuplani
Inhibitor ATP sintetaz

Complex IV
Transportor transmembranar de H+
Transportor transmembranar de H+
ATP sintetaz

Decuplani ai fosforilrii oxidative de catena de respiraie


Agenii capabili s stopeze utilizarea energiei eliberate n catena de respiraie pentru
fosforilarea ADP se numesc decuplani. Ca decuplani naturali amintim tiroxina n concentraii peste
limitele normale, care face ca energia n catena de respiraie s fie disipat sub form de cldur.
Animalele care hiberneaz au esuturi brune n care catena de respiraie este decuplat de fosforilarea
oxidativ (astfel de esuturi se gsesc i la animalele nou nscute sau la ft). Un alt decuplant este 2,4dinitrofenolul (Tabel care, fiind un transportor de protoni prin membran, duce la anularea
gradientului de pH implicat n cuplarea catenei de respiraie cu fosforilarea oxidativ.
Toxicitatea foarte mare a cianurilor i a azidei, const din capacitatea acestora de a se
lega la complexul IV, blocnd astfel transportul electronilor

[note curs]

Page 76

Biologie celular i molecular

Cuplarea fosforilrii cu transferul de electroni i protoni


(mecanismul chemiosmotic)
Energia liber provenit din pasajul electronilor prin complexele I, III, IV este
acumulat prin cuplarea la reaciile de sintez a ATP.
n timpul glicolizei i Ciclului Krebs, o grupare fosfat, cu energie nalt este transferat
direct ctre ADP de pe un alt substrat, care aparine unei reacii productoare de energie.
Spre exemplu, n etapa final a glicolizei,
fosfatul cu energie nalt al
fosfoenolpiruvatului este transferat ctre ADP, rezultnd piruvat i ATP. Un asemenea
transfer direct al gruprilor fosfat macroergice nu are loc n timpul transportului de electroni.
Ipoteza cuplrii chemiosmotice a fost sugerat, n 1961, de ctre Mitchell care a
propus c ATP este generat prin utilizarea energiei stocate sub form de gradiente
transmembranare de protoni i nu prin transferul direct al unei grupri cu energie nalt.
Transportul de electroni prin complexele I, III, IV, este cuplat cu transportul protonilor
din matricea mitocondrial, n spaiul intermembranar. n acest fel, reaciile care produc
energie, ca urmare a transportului de electroni sunt cuplate cu pomparea de protoni din
matrice n spaiul intermembranar, stabilindu-se un gradient de protoni prin membrana
intern.
Fiecare dintre complexele I i III pompeaz prin membrana intern cte 4 protoni
pentru fiecare pereche de electroni transferat, iar complexul IV pompeaz 2 protoni pentru
o pereche de electroni.
n total sunt transferai prin membran 10 protoni pentru fiecare pereche de electroni
provenit prin oxidarea NADH i numai 6 protoni pentru o pereche de electroni provenii din
oxidarea FADH2.
n timp ce un electron este transferat de-a lungul unui lan respirator, un transportor de
electroni poate lega i elibera un proton n fiecare etap. Deoarece protonii sunt particule
ncrcate electric, energia potenial stocat n gradientul de protoni este de natur
electrochimic.
Componenta electric corespunde diferenei de voltaj de o parte i de alta a membranei
interne mitocondriale, matricea avnd sarcini negative, iar spaiul intermembranar avnd
sarcini pozitive.
Energa liber corespunztoare este dat de reacia:
G = - FV
unde F= constanta Faraday
V = potenialul de membran
Energia liber suplimentar, corespunztoare diferenei
protoni transmembranari este dat de ecuaia:

[note curs]

concentraiilor

de

Page 77

Biologie celular i molecular

Figura Schema transferului de electroni la nivelul membranei interne mitocondriene


(CK=ciclul Krebs)
G= RT n [ H+]i / [ H+]e
n= numrul de electroni
[ H+]i= concentraia de protoni din interiorul
[ H+]= concentraia de protoni din exteriorul mitocondriei
R= constanta gazelor ideale
T = temperatura
n celulele metabolic active, protonii sunt pompai n afara matricei, astfel nct
gradientul de protoni de o parte i de alta a membranei interne mitocondriale corespunde la
aproximativ o unitate de pH sau unei concentraii de protoni de 10x mai mic n matrice. Din
aceast cauz pH-matricei este de aproximativ 8, comparativ cu ph neutru 7 al citosolului i
al spaiului intermembranar.
Acest gradient genereaz, un potenial electric transmembranar de aproximativ 0,14V.
Att gradientul de ph ct i potenialul electric dirijeaz protonii napoi dinspre citosol spre
matrice, astfel nct de o parte i de alta a membranei se formeaz un gradient electrochimic
corespunztor unei energii libere (G) de aproximativ -5 Kcal/mol/proton.
Deoarece bistratul fosfolipidic este impermeabil pentru ioni, protoni care se rentorc n
matrice, strbat membrana printr-un canal proteic. Acest canal este parte component a ATPsintetaz care constituie complexul numrul V al enzimelor respiratorii.

[note curs]

Page 78

Biologie celular i molecular

ATP-sintetaza este organizat n 2 componente structurale distincte F0 i F1 .


F0 este un transportor de protoni transmembranar, un canal, prin care protonii trec din
spaiul intermembranar n matrice.
F1 cupleaz ntoarcerea (favorabil energetic) protonilor n matrice, cu sinteza ATP din
ADP i fosfat.
Energia liber necesar pentru sinteza ATP corespunde unui G de aproximativ +12
Kcal/mol, astfel nct este necesar fluxul de 3 protoni care se ntorc, trecnd prin membran,
n matrice, pentru sinteza fiecrei molecule de ATP.
Deoarece pentru 1 pereche de electroni provenii din oxidarea NADH sunt pompai prin
membran 10 protoni, rezult c oxidarea unei singure molecule de NADH elibereaz energie
care permite sinteza a 3 molecule de ATP, iar oxidarea FADH2, care conduce la transferul a 6
protoni permite sinteza a 2 molecule ATP.
ATP-sintetaza este un dispozitiv de cuplare reversibil. Ea poate fie s utilizeze fluxul
de protoni scznd gradientul electrochimic pentru a sintetiza ATP, fie s utilizeze energia
rezultat din hidroliza ATP pentru a pompa protoni impotriva gradientului lor electrochimic
prin membrana.
Dac gradientul electrochimic de protoni scade sub un anumit nivel G, pentru
transportul H+ , n spaiul matriceal nu va fi suficient de mare pentru sinteza ATP. n schimb,
ATP va fi hidrolizat de ATP sintetaz pentru a reface gradientul.
Respiratia celular este un proces de o eficien uimitoare. Astfel, schimburile de
energie liber rezultate din degradarea lipidelor i glucidelor, direct in CO2 i H2O pot fi
comparate cu cantitatea total de energie generat i depozitat n legturile fosfat ale ATP
n cursul oxidrilor biologice corespunztoare.
Atunci cnd interschimbrile energetice au loc, se constant c eficiena, cu care
energia eliberat prin procese oxidative este transformat n energie depozitat (legaturi ATP)
este mai mare de 40%.
Acest eficient este mai mare dect cea a majoritii dispozitivelor nebiologice de
conversie a energiei. Dac celulele ar lucra numai cu eficiena unui motor electric sau cu
benzin (10-20%), un organism ar trebui s consume foarte mult hran pentru supravieuire.
Complexitatea interconversiilor din celule este necesar i pentru c oxidrile produc
cantiti uriae de energie liber care pot fi uzitate eficient numai n cantiti mici.
De aceea, energia eliberat poate fi acumulat n legturi fosfat macroergice care intr
n alctuirea unor molecule, cum ar fi ATP sau NADH prin intermediul unor reacii cuplate.

[note curs]

Page 79

Biologie celular i molecular

Peroxizomii
Sunt organite mici, de form sferic sau oval cu diametrul ntre 0,2-1,7 m,
considerate cu implicaii metabolice, inclusiv cele legate de metabolismul energetic.
Peroxizomii conin enzime implicate n diferite reacii metabolice. Aproximativ 85 de gene
sunt cunoscute, n genomul uman, ca fiind implicate n codificarea proteinelor peroxizomilor.
Aceste proteine numite peroxine (Pex 1, Pex2) sunt sintetizate la nivelul ribozomilor liberi i
apoi sunt importate n peroxizomi, ca i lanuti polipeptidice complete.
Peroxizomii sunt dispersai n citosol i uneori asociai la alte organite (mitocondrii) sau
incluziuni citoplasmatice.
Compoziia chimic i funciile peroxizomilor
Membrana peroxizomilor conine 30%
lipide i 70% proteine, compoziie
asemntoare cu a reticulului endoplasmatic (cele dou membrane sunt srace n colesterol,
iar fosfolipidele sunt n proporii similare).
Membrana peroxizomilor este permeabil pentru ap i molecule mici, dar este
impermeabil pentru NAD i NADP.
Peroxizomii conin n interiorul lor cel putin 50 de enzime, care sunt implicate n
diferite ci biochimice, specifice diferitelor tipuri de celule.
Enzimele peroxizomilor sunt oxidazele flavinice (cu grup prostetic FAD sau FMN)
care realizeaz n organit reaciile de oxidare.
Aceste enzime catalizeaz oxidarea unor substraturi, cum ar fi acidul uric, aminoacizii
i acizii grai, pornind de la oxigenul molecular.
Rezultatul acestor reacii de oxidare este producerea peroxidului de oxigen (H2O2).
Deoarece acesta este toxic pentru celule, intervine o alt enzim a peroxizomilor, catalaza,
care descompune peroxidul de hidrogen, fie prin transformarea sa n ap, fie prin utilizarea sa
la oxidarea altui compus organic (etanolul).
n peroxizomi au loc din oxidrile acizilor grai, restul se desfoar n mitocondrii.
Se consider c peroxizomii oxideaz acizii cu lan lung de atomi de carbon, dup ce lanul sa scurtat la 6 atomi de C, urmeaz oxidarea lui n mitocondrii.
Peroxizomii sunt implicai i n biosinteza lipidelor. n celulele animale, colesterolul i
dolicolul sunt sintetizai n peroxizomi, precum i n reticulul endoplasmatic. Tot rol n
sinteza este evideniat i n ficat unde peroxizomii sunt implicaii n sinteza acizilor biliari
care sunt derivai din colesterol.
Peroxizomii conin enzime necesare pentru sinteza plasmalogenilor (fosfolipide), n
care unul din lanurile hidrocarbonate este legat de glicerol printr-o legtur eteric i nu
esteric.
Plasmalogenii sunt componente prezente numai n membrana din celulele esutului
cardiac sau ale creierului.

[note curs]

Page 80

Biologie celular i molecular

Asamblarea peroxizomilor
Proteinele destinate peroxizomilor sunt sintetizate la nivelul ribozomilor liberi citosolici
i ajung la peroxizomi ca lanuri polipeptidice complete.
Fosfolipidele sunt de asemenea, importante n peroxizomi prin proteinele de
interschimb lipidic care transport de la nivelul situsului lor de sintez (reticulul
endoplasmatic). Importul de proteine i fosfolipide determin creterea peroxizomilor i apoi
noii peroxizomi se formeaz prin diviziunea vechilor peroxizomi, n acelai mod ca
mitocondriile i cloroplastele.
Sunt proteine de tipul Pex3, Pex19, care funcioneaz ca i receptori pentru alte
peroxine, care ptrund prin cel puin dou ci cunoscute.
Majoritatea proteinelor sunt orientate, ctre peroxizomi, printr-o secven simpl de
aminoacizi SER-LYS-LEU la nivelul extremitii carboxil (semnalul 1 de orientare
PTS1).
Alte proteine sunt orientate printr-o secvena de 9 aminoacizi (PTS 2) prezent la
extremitatea amino.
n cazul n care apar mutaii ale genelor care codific proteine
componente ale peroxizomilor, apar boli grave. Un exemplu este
sindromul Zellweger, care este letal, n primii 10 ani de via. Cauza
acestui sindrom este apariia unor mutaii ale genelor care codific
sinteza proteinelor cu rol de receptor pentru semnalele PTS1.

[note curs]

Page 81

Biologie celular i molecular

[note curs]

Page 82

Biologie celular i molecular

[note curs]

Page 83