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Agradecimientos
A nuestros padres, quienes nos han apoyado con esfuerzo y abnegacin para
el emprendimiento de nuestros estudios.

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Dedicatoria
El presente trabajo est dedicado a nuestros amigos, familiares y personas
involucradas en el campo de la biotecnologa.

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Contenido
1.

Introduccin............................................................................................. 5

2.

Generalidades.......................................................................................... 5

3.

CAPTULO 1: Extraccin enzimtica.........................................................7

3.1.

3.1.1.

Uso de enzimas hidrolticas.........................................................7

3.1.2.

Alteracin del pH de la solucin..................................................7

3.1.3.

Uso de detergentes.....................................................................7

3.1.4.

Uso de solvente orgnicos...........................................................8

3.1.5.

Uso de soluciones hipotnicas.....................................................8

3.2.

4.

Mtodos fsicos.................................................................................. 9

3.2.1.

Vibraciones ultrasnicas..............................................................9

3.2.2.

Homogenizacin con abrasivos...................................................9

3.2.3.

Homogenizacin con homogenizador Potter-Elvehjem..............10

3.2.4.

Largos periodos de mezclado....................................................10

3.2.5.

Adicin de perlas de vidrio durante el mezclado.......................11

3.2.6.

Congelacin-Descongelacin.....................................................11

CAPTULO 2: Purificacin enzimtica......................................................12

4.1.

Mtodos dependientes del tamao o masa.....................................12

4.1.1.

Centrifugacin...........................................................................12

4.1.2.

Filtracin en gel.........................................................................13

4.1.3.

Dilisis o ultrafiltracin..............................................................13

4.2.

Mtodos dependientes de la carga..................................................14

4.2.1.

Cromatografa de intercambio inico........................................14

4.2.2.

Electroforesis............................................................................. 15

4.2.3.

Enfoque isoelctrico..................................................................15

4.3.

Mtodos dependientes de la solubilidad..........................................16

4.3.1.

Cambio en el pH........................................................................16

4.3.2.

Cambio en la fuerza inica........................................................16

4.3.3.

Decremento en la constante dielctrica....................................16

4.4.

5.

Mtodos qumicos.............................................................................. 7

Mtodos dependientes de sitios de unin especficos.....................17

4.4.1.

Cromatografa de afinidad.........................................................17

4.4.2.

Elucin de afinidad....................................................................17

CAPTULO 3: Inmovilizacin enzimtica.................................................18

5.1.

Adsorcin......................................................................................... 18

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5.2.

Formacin de enlaces inicos..........................................................18

5.3.

Formacin de enlaces covalentes....................................................19

5.4.

Formacin de enlaces cruzados.......................................................20

5.5.

Atrapamiento................................................................................... 20

5.6.

Encapsulacin.................................................................................. 21

6.

Conclusiones.......................................................................................... 21

7.

Bibliografa............................................................................................. 23

1. Introduccin

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Las enzimas se encuentran distribuidas ampliamente en los sistemas vivos y

son un factor importante en el crecimiento, el mantenimiento y la propagacin
del sistema vivo. De hecho, cualquier alteracin en las enzimas puede conducir
a una condicin patolgica e incluso la muerte. Los primeros das de desarrollo
de la enzimologa estaban llenos de controversias relacionadas con su
estructura, naturaleza qumica y funciones (Kulkarni y Deshpande, 2007).
Una vez que se entiende que las enzimas tienen la capacidad de trabajar en
sistemas libres de clulas, se comienza con los intentos para su aislamiento y
purificacin. Willsttter y sus colegas entre 1920 y 1928 llevaron a cabo los
primeros intentos de purificacin de enzimas. Dixon y Kodama intentaron la
purificacin de la xantina oxidasa.
La primera enzima para cristalizar la ureasa fue en 1926 por Sumner. Esto fue
seguido por la purificacin y cristalizacin de proteasas como tripsina y pepsina
por Northrop.

2. Generalidades
En general la extraccin y purificacin de enzimas es requerida por las
siguientes razones:

Para el estudio de varios aspectos de una enzima en particular.

Para la identificacin de sustratos y el sustrato especfico de la enzima.
Para evaluar el papel de diversas coenzimas/cofactores en la velocidad
de reaccin.
Para investigaciones como componentes de diagnstico.
Para propsitos terapeticos.
Para el desarrollo de sistemas de enzimas inmovilizadas
comercialmente
explotables
para
aplicaciones
industriales,
fermentaciones y procesos de valor agregado.
Para la lixiviacin de minerales de importancia comercial.
Las enzimas puras tambin se emplean en el procesamiento de
alimentos.
Los estudios de inhibicin de enzimas pueden indicar inhibidores
potenciales, que pueden ser utilizados para tratar trastornos metablicos
y heredables.

Las enzimas extracelulares son ms fciles de aislar que las enzimas

intracelulares
Independientemente de la fuente de tejido, es decir, plantas o animales, las
enzimas extracelulares
son ms fciles de recolectar. Su recoleccin

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generalmente no requiere la destruccin de los tejidos y por lo tanto se reducen

los gastos y tiempo requerido para procesos tales como homogeneizacin o
cualquier otro tipo de procesos (Cordero y Verdugo, 2006).
Las enzimas vegetales y microbianas son generalmente ms baratas
Los tejidos animales son una fuente ms costosa para la produccin comercial
de enzimas. Esto es principalmente debido a que muchas veces el animal
completo tiene que ser comprado y sacrificado antes de que un tejido u rgano
especfico pueda ser aislado y utilizado como una fuente de la enzima (Castillo
et al., 2005).
Una amplia gama de mtodos est disponible para el aislamiento y
purificacin de enzimas
Estos varan de acuerdo con muchos criterios, que incluyen la fuente de la
enzima, su disponibilidad, el costo de los procesos, el factor tiempo involucrado
y la disponibilidad de los equipos (Strayer, et al., 2008). El aislamiento y
purificacin enzimtica generalmente sigue el siguiente proceso:

Identificacin de la fuente de enzimas.

Procedimientos de manejo generales para extractos de origen y crudo.
Mtodos para la extraccin.
Mtodos para la purificacin.
Desarrollo de ensayos: cualitativos y cuantitativos.
Estabilizacin y cristalizacin.
Criterios de pureza.
Mtodos para la preservacin de enzimas aisladas.

3. CAPTULO 1: Extraccin enzimtica

Los mtodos de extraccin enzimtica pueden ser divididos en dos grupos:
mtodos qumicos y mtodos fsicos.

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3.1. Mtodos qumicos

3.1.1.Uso de enzimas hidrolticas

Se utilizan deferentes tipos de enzimas como lisozimas, proteasas y lipasas

para remover partculas localizadas en la membrana produciendo la formacin
de agujeros a travs del cual el lquido intracelular y orgnulos pasan a la
solucin (Funke y Case, 2007).

3.1.2.Alteracin del pH de la solucin

Someter las clulas a un entorno de pH alterado provoca que las protenas de

la membrana celular se coagulen conduciendo a la formacin de poros a travs
de los cuales el lquido intracelular salga como un homogeneizado (Durks y
Gokel, 2007).
3.1.3.Uso de detergentes

Los detergentes rompen la barrera lipdica solubilizando las protenas e

interrumpiendo la interaccin lpido-lpido, lpido-protena y protena-protena.
Los detergentes inicos desnaturalizan la protenas y si dividen en detergentes
aninicos (lauril sulfato sdico, colato sdico, SDS), y catinicos (bromuro de
cetil-trimetil-amonio), por otro lado los detergentes no inicos preservan
estructura nativa e interacciones de la enzima (Tween, Spam, Triton) (Koolman
y Rohm, 2004).
Los inconvenientes que se manifiestan con el uso de los detergentes es que
pueden provocar la desnaturalizacin total de las protenas, y adems se los
debe remover despus de la extraccin.
3.1.4.Uso de solvente orgnicos

Las membranas son bicapas lipdicas y los solventes orgnicos apropiados

como acetona, cloroformo, ter, etc., son a menudo empleados para disolver

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los lpidos conduciendo a la formacin de poros, entonces el citoplasma de la

clula fluye hacia fuera como un homogeneizado crudo (Lodish, et al., 2006).

3.1.5.Uso de soluciones hipotnicas

La suspensin de clulas en soluciones hipotnicas conduce a la absorcin de

agua y su inflamacin que conduce a una presin de turgencia que es lo
suficientemente grande para hacer que las clulas estallen. Por lo general, se
emplean soluciones de sacarosa o soluciones de KCI (Surez, 2008).

3.2. Mtodos fsicos

3.2.1.Vibraciones ultrasnicas

Las clulas se someten a vibraciones ultrasnicas que resultan en su

destruccin y la formacin de un homogeneizado.

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3.2.2.Homogenizacin con abrasivos

Los tejidos vegetales o tejidos microbianos con pared celular son a menudo
sometidos a homogenizacin con un material abrasivo tal como almina o
arena. El cizallamiento y la tensin provocan la ruptura de la pared celular que
conduce a la coleccin del lquido clular como un homogeneizado crudo.
Sistemas de mortero mano de mortero simples o mezcladores y molinos se
utilizan para lograr los resultados deseados (Kulkarni y Deshpande, 2007).

3.2.3.Homogenizacin con homogeneizador Potter-Elvehjem

El homogeneizador Potter-Elvehjem se compone de un tubo de vidrio que

encaja perfectamente en un pistilo de tefln que est conectado a un motor de
alta velocidad. El tejido para ser homogeneizado se pica y mezcla con la
cantidad apropiada de solucin isotnica y despus se somete a

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homogeneizacin a una velocidad muy alta (aproximadamente 600 rpm)

durante aproximadamente 5 a 10 minutos (Kulkarni y Deshpande, 2007).

3.2.4.Largos periodos de mezclado

Las clulas, cuando son sometidas a largos perodos de mezclado se rompen

debido a las fuerzas mecnicas de choque contra las paredes de la batidora
generando un crudo (Surez, 2008).

3.2.5.Adicin de perlas de vidrio durante el mezclado

La adicin de perlas de vidrio o arena se emplea a menudo para aumentar el

cizallamiento mecnico que hace el proceso ms eficaz. A menudo se utilizan
mezcladores Waring en el proceso. A veces tambin se emplean instrumentos
con los ajustes de velocidad (Surez, 2008).

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3.2.6.Congelacin-Descongelacin

Esto se basa en el hecho de que al congelarse las molculas de agua forman

el hielo que se expanden en mltiples tamaos y causan tensin en la
membrana celular que conduce a su destruccin. La descongelacin que
provoca la fusin del hielo que conduce a la formacin de un homogeneizado
crudo (Muoz, 2001).

4. CAPTULO 2: Purificacin enzimtica

Una vez que se obtiene el homogeneizado crudo, el objetivo de un
procedimiento de purificacin debera ser para aislar una enzima de inters con
el mximo rendimiento posible. Adems, la preparacin debe poseer la

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capacidad mxima de la catlisis. En otras palabras, debe estar libre de

contaminacin de otras protenas inactivas y activas.
Los mtodos de purificacin enzimtica pueden ser clasificados de acuerdo a
diferentes propiedades de la enzima de inters como el tamao o masa, carga,
solubilidad y sitios de unin especficos (Kulkarni y Deshpande, 2007).

4.1. Mtodos dependientes del tamao o masa

Estos mtodos dependen del principio general de que las molculas
sedimentan a diferentes velocidades dependiendo de su tamao o masa.
Algunos de los mtodos empleados con frecuencia incluyen:
4.1.1.Centrifugacin

Las grandes molculas tales como enzimas pueden ser sedimentadas por las
altas velocidades (hasta 300,000g) generadas por una ultracentrfuga. Aunque
la velocidad a la que cualquier enzima en particular se sedimenta depende de
una variedad de factores, incluyendo el tamao y la forma de la molcula y la
viscosidad de la solucin, se encuentra que en general, cuanto mayor sea el
peso molecular, mayor es la tasa de sedimentacin. Este mtodo no se utiliza
ampliamente en procedimientos de purificacin para separar una enzima de
otra porque slo un volumen pequeo (unos pocos mL) puede ser tratado
dentro de una ultracentrifugadora. Sin embargo la centrifugacin es
ampliamente utilizada para eliminar el material insoluble precipitado en el curso
de aislamiento, por ejemplo, para eliminar los desechos de clulas despus de
la homogeneizacin o para recoger la enzima que ha sido precipitada por la
adicin de sales (Strayer, et al., 2008).

4.1.2.Filtracin en gel

Filtracin en gel o cromatografa de permeacin en gel es un mtodo de

separacin que depende del tamao molecular. El mtodo tambin se conoce
como tamiz molecular, o cromatografa de exclusin molecular. Su excelente

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reproducibilidad, comparativamente corto tiempo y equipo relativamente barato

hace que sea el mtodo de separacin ms ampliamente utilizado
En una columna con perlas de gel o grnulos de vidrio poroso se pone un
solvente para que las molculas sean separadas. Si la mezcla de molculas de
diferente tamao se coloca en la parte superior de una columna, las molculas
grandes pasan a travs de los espacios intersticiales entre las perlas. Esto es
porque los poros del gel tienen un dimetro ms pequeo de lo que se necesita
para que las molculas grandes puedan entrar. Por lo tanto, las molculas
grandes se mueven hacia debajo de la columna con poca resistencia. Las
molculas pequeas sin embargo pueden entrar en los poros y son por lo tanto
eliminadas de manera efectiva del flujo del disolvente de elucin (Lodish, et al.,
2006).
Las tcnicas utilizadas son la cromatografa de columna o cromatografa en
capa fina.

4.1.3.Dilisis o ultrafiltracin

Una membrana de dilisis, tal como el celofn puede ser usado para separar
las protenas o molculas globulares con un peso molecular de alrededor de
20, 000 Dalton. El tamao de poro puede ser cambiado por diversos
tratamientos mecnicos y qumicos. El mtodo se utiliza de manera rutinaria
para separar pequeas molculas orgnicas, sales y disolventes orgnicos a
partir de los extractos crudos. La capacidad de manejo de volumen es
generalmente baja. El proceso no se puede emplear para separar una enzima
de otra (Strayer, et al., 2008).
La ultra filtracin por otro lado es una modificacin del procedimiento de
dilisis en la que pequeas molculas y iones pasan a travs de una
membrana de dilisis bajo la influencia de la presin aplicada (por lo general
gas nitrgeno a 4 atm. de presin). Esto conduce a la concentracin de la

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solucin de enzima, que es til en la reduccin del volumen de la muestra de

extracto durante el procedimiento de purificacin.

4.2. Mtodos dependientes de la carga

Estos mtodos dependen del hecho de que las enzimas puedan tener cadenas
laterales cargadas que dan a la molcula una carga neta y que la movilidad de
la molcula cargada bajo un campo elctrico depende de las cargas estas
llevan. Algunos de los mtodos utilizados habitualmente incluyen los siguientes:
4.2.1.Cromatografa de intercambio inico

El intercambio de iones puede ser definido como el intercambio reversible de

iones en solucin, con iones, electrostticamente unidos a un medio de soporte
inerte. La fuerza de la atraccin electrosttica a su vez depende de la carga
relativa, el radio de los iones hidratados, y el grado de las interacciones no
enlazantes.
La tcnica emplea generalmente columnas de intercambio inico. Hay dos tipos
de intercambiadores de iones, intercambiadores de aniones e intercambiadores
de cationes. El medio es un medio de soporte inerte que est unido
covalentemente a un grupo funcional positivo (intercambiador de aniones) o a
un grupo funcional negativo (intercambiador catinico). Los iones
electrostticamente unidos al intercambiador se conocen como contraiones
(Durks y Gokel, 2007).
Esta tcnica es muy til en la separacin de compuestos cargados e incluso
compuestos no cargados que se pueden marcar con un grupo cargado o una
varianza de pH.
4.2.2.Electroforesis

La electroforesis es la migracin de partculas o molculas cargadas en un

medio bajo la influencia de un campo elctrico aplicado. Tras la suspensin en
un disolvente acuoso casi todas las partculas incluyendo biomolculas tales

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como enzimas adquieren cargas positivas o negativas. La adquisicin de tales

cargas depende de la naturaleza de la partcula/molcula y el disolvente.
Estos grupos determinan la densidad de carga neta de la molcula proteica, lo
que hace que se mueva en un campo elctrico en una direccin, y a una
velocidad dependiente de la seal y la cantidad de esta densidad de carga
neta. Incluso si dos molculas tienen la misma carga, no pueden migrar juntos
porque si hay diferencia en sus pesos moleculares tendrn diferente cargo:
relacin en masa (Lodish, et al., 2006).

4.2.3.Enfoque isoelctrico

En la tcnica del enfoque isoelctrico, por otro lado, un gradiente de pH estable

est dispuesto, el pH aumenta gradualmente de nodo a ctodo. Una protena
se introduce en este sistema en un punto donde el pH es inferior a su punto
isoelctrico, la cual poseer una carga neta positiva y migrar en la direccin
del ctodo. Debido a la presencia del gradiente de pH, la protena migrar a un
ambiente de valores de pH sucesivamente ms altos, que a su vez, influenciar
en la ionizacin y carga neta de la molcula. Finalmente la protena se
encontrar con un pH en el que su carga es cero y se detendr la migracin.
Este es el punto isoelctrico de la protena (Kulkarni y Deshpande, 2007).

4.3. Mtodos dependientes de la solubilidad

La solubilidad de un compuesto en un disolvente dado depende del equilibrio
de las fuerzas entre soluto y soluto y aquellas entre soluto y disolvente. Si el
primer caso predomina, el compuesto ser insoluble en cambio si el segundo

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caso es predominante, el compuesto ser soluble. En el curso de la purificacin

de la enzima es posible alterar el equilibrio entre estas fuerzas y, por tanto
precipitar la enzima de inters o eliminar enzimas contaminantes. Tres de las
formas ms importantes de cambiar la solubilidad de las enzimas son, (1)
cambiar el pH, (2) cambiar la fuerza inica, (3) disminuir la constante dielctrica
(Kulkarni y Deshpande, 2007). Estos mtodos se pueden aplicar a gran escala
y se utilizan a menudo en la etapa inicial de un procedimiento de purificacin.
4.3.1.Cambio en el pH

Una enzima es menos soluble en su punto isoelctrico ya que en este pH las

fuerzas electrostticas repulsivas dentro de las molculas de la enzima dejan
de existir. Bajo tal condicin las molculas de enzima tienden a precipitar. Por
lo tanto, el ajuste del pH al valor adecuado se puede utilizar para precipitar la
enzima (Koolman y Rohm, 2004).
4.3.2.Cambio en la fuerza inica

Las protenas se precipitan a menudo con la adicin de alta cantidad de sales.

La base terica para esto no est claramente entendida, sin embargo, se
supone que a altas concentraciones de sal, la concentracin de agua se reduce
en gran medida lo que conduce a una disminucin en las interacciones solutosolvente y a su vez la solubilidad de las protenas. Muchas sales se han
empleado para "el fraccionamiento en sal" o salificacin de enzimas (Durks y
Gokel, 2007).
4.3.3.Decremento en la constante dielctrica

La adicin de agua-disolventes orgnicos miscibles disminuir la constante

dielctrica de una solucin y por lo tanto aumentar las fuerzas electrostticas.
Esto conduce a la alteracin en la interaccin soluto-soluto y soluto-disolvente,
produciendo generalmente la precipitacin de grandes molculas tales como
enzimas. La eleccin del disolvente es crucial, ya que muchas enzimas se
vuelven inactivas debido a la accin de disolventes orgnicos. Es aconsejable
trabajar a temperaturas bajas, ya que muchos disolventes son voltiles y
peligrosos a altas temperaturas. Los disolventes comnmente usados incluyen
etanol, butanol, acetona etc. (Kulkarni y Deshpande, 2007).

4.4. Mtodos dependientes

especficos

de

sitios

de

unin

La propiedad caracterstica de especificidad asociada con las enzimas se

puede emplear para purificarlas. Hay dos mtodos basados en la etapa de uso

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de afinidad: (1) la cromatografa de afinidad utiliza la afinidad, en la etapa de

adsorcin de la enzima de inters, a un intercambiador de iones y (2) la elucin
de afinidad utiliza la especificidad en la etapa de desorcin, las cuales son
descritas brevemente a continuacin:
4.4.1.Cromatografa de afinidad

La tcnica explota la capacidad de especificidad, la unin no covalente de

enzimas con otras molculas llamadas ligandos. La mayora de las veces un
sustrato anlogo (una molcula que se asemeja al sustrato pero no causa
reaccin fructfera) especfico para la enzima de inters se une a una matriz
slida e inerte (como agarosa). Cuando la mezcla se carga en la parte superior
de la columna, slo la enzima deseada se unir al anlogo de sustrato
inmovilizado y deber retardar. Todas las otras enzimas y protenas pasarn
abajo y hacia fuera de la columna (Durks y Gokel, 2007).

4.4.2.Elucin de afinidad

Es una tcnica complementaria a la cromatografa de afinidad. Se utiliza con

mezclas de enzimas parcialmente purificadas y es ms ventajosa que la
cromatografa de afinidad pues: se eliminan las reacciones complejas de unin
del anlogo de sustrato y las columnas son ms baratas porque los
intercambiadores de iones son ms baratas que las matrices de afinidad (Durks
y Gokel, 2007).

5. CAPTULO 3: Inmovilizacin enzimtica

Una nueva dimensin se aadi al desarrollo de enzimologa con los avances
en las tcnicas que permiten la inmovilizacin enzimtica en una matriz
insoluble sin ningn efecto adverso sobre sus actividades.

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Existen varias ventajas al usar enzimas inmovilizadas por ejemplo, las enzimas
pueden reutilizarse y usarse de manera continua, reduce el costo de
procesamiento, mejor recuperacin del producto, eficiencia del tiempo,
estabilidad de la enzima, mejor control de catlisis, eficiencia en los procesos y
sistemas de diagnstico rpidos (Arroyo, 1998).
Muchos mtodos han sido usados para la inmovilizacin de enzimas, algunos
mtodos importantes son descritos a continuacin.

5.1. Adsorcin
La adsorcin est mediada por enlaces inicos, enlaces hidrofbicos o puentes
de hidrgeno. La agitacin de la enzima con una resina de intercambio inico
puede causar su adsorcin. Tambin se puede hacer mediante cambios en el
pH, fuerza inica de la solucin o alterando la concentracin.
El proceso es ventajoso ya que, es simple y de bajo costo, requiere
tratamientos suaves, se puede aplicar en clulas enteras, as como enzimas
aisladas; sin embargo, hay algunas desventajas que incluyen, la enzima unida
se puede lixiviar durante el cambio en el pH, y si el sustrato tiene una carga
similar puede interferir con la unin de la enzima (Garca, et al., 2004).

5.2. Formacin de enlaces inicos

Se utiliza una matriz de soporte que tenga un grupo inico adecuado o, a su
vez las molculas inertes son etiquetadas con un residuo inico adecuado que
permite la unin de la enzima con la matriz. (Si la enzima lleva una carga
positiva, entonces la matriz debe llevar cargas negativas para asegurar la unin
inica). Esta es tambin una tcnica de superficie.
Las ventajas de la tcnica incluyen, mayor especificidad, menor contaminacin,
incluso mejor distribucin a lo largo de la superficie o seccin transversal de la
columna. Las desventajas son, requerimiento de materiales de soporte
especfico, alto costo de las columnas, la susceptibilidad de las molculas
cargadas puede interferir con la unin inica (Ochoa, et al., 2011).

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5.3. Formacin de enlaces covalentes

Es la tcnica ms ampliamente utilizada. La enzima se une a las molculas de
soporte a travs de enlaces covalentes, mediante la activacin del polmero
con un grupo reactivo. Los materiales utilizados como matriz incluyen, celulosa,
agar, agarosa, u otros polmeros. Las cadenas laterales de aminocidos
contienen grupo hidroxilos y aminos que se unen con el soporte o el reactivo
utilizado como puente.
La tcnica tiene las siguientes ventajas: la unin es especfica, hay poco o
nada de elucin, hay una amplia variedad de soportes, materiales de matriz y
agentes puente. Las desventajas de la tcnica incluyen: el procedimiento
requiere de mucho trabajo, los costos son altos, los procedimientos son
complicados, requieren ambientes severos y son difciles de replicar (Ochoa, et
al., 2011).

5.4. Formacin de enlaces cruzados

Las enzimas pueden unirse alternadamente a un soporte mediante el uso de un
reactivo bifuncional que se une al polmero por un lado y la enzima de inters
en el otro. El reactivo acta como un puente entre el polmero y la enzima. El
agente preferido es el glutaraldehdo sin embargo tambin se utilizan otros

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reactivos como adipimato de dimetilo. Tambin se ha utilizado alternativamente

la copolimerizacin con protena inerte como la albmina (Kulkarni y
Deshpande, 2007).

5.5. Atrapamiento
El mtodo se basa en el atrapamiento de las enzimas o clulas completas
dentro de los polmeros de matrices insolubles. La enzima se incorpora dentro
de la matriz, a diferencia de la unin superficial en la tcnica de adsorcin. La
enzima se mezcla inicialmente con la solucin del monmero y luego se activa
la polimerizacin durante la cual la enzima queda atrapada dentro de la matriz
formada. La polimerizacin puede efectuarse mediante reacciones qumicas,
cambio en el pH, o cambio en la temperatura (Arroyo, 1998).
Las ventajas del atrapamiento son: es un procedimiento sencillo, requiere poca
instrumentacin, se basa en tratamientos leves, no inactiva la enzima, no crea
ninguna restriccin en las enzimas. Las desventajas del mtodo son: se
pueden crear impedimentos estricos para grandes sustratos que interfieren
con la velocidad de reaccin, en los casos en que los geles se compacten
puede afectar a la actividad en un grado menor, en algunos casos los poros de
la matriz son lo suficientemente grandes y se puede producir la elucin de la
enzima.

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5.6. Encapsulacin
Las enzimas son muchas veces encerradas dentro de estructuras
membranosas que permiten la entrada de sustratos y la salida de productos, y
adems las enzimas no son capaces de pasar a travs de ellas. Diversos
materiales como el nylon, silicatos, nitrato de celulosa, fosfolpidos o liposomas
se pueden utilizar para la fabricacin de materiales de encapsulacin.
La tcnica tiene las ventajas siguientes: el proceso es simple, es barato,
proporciona un rea superficial grande con respecto a volumen, no requiere
aparatos costosos e instrumentacin. Las desventajas son las siguientes: las
enzimas pueden no ser estables, no se puede utilizar en gran escala (Arroyo,
1998).

6. Conclusiones
Las enzimas se encuentran en todos los sistemas vivos y se las ha utilizado
desde que se encontr que pueden funcionar fuera de las clulas.
El uso de enzimas tiene diversas aplicaciones entre las principales tenemos:
diagnstico de enfermedades, propsitos teraputicos, aplicaciones
industriales, fermentaciones procesamiento de alimentos, entre otros.
La extraccin de enzimas extracelulares es ms sencilla porque la enzima es
excretada al medio y no se necesita de procesos para la destruccin de tejidos.
Generalmente las enzimas vegetales y microbianas son ms baratas que las
enzimas de origen animal.
Para la produccin de una determinada enzima generalmente se usa el
siguiente proceso: identificacin de la fuente de enzimas, procedimientos de
manejo generales para extractos de origen y crudo, mtodos para la extraccin,
mtodos para la purificacin, desarrollo de ensayos: cualitativos y cuantitativos,

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estabilizacin y cristalizacin, criterios de pureza y mtodos para la

preservacin de enzimas aisladas.
Los mtodos de extraccin enzimtica pueden ser divididos en mtodos
qumicos (uso de enzimas hidrolticas, detergentes, disolventes orgnicos,
soluciones hipotnicas y alteracin de pH) y mtodos fsicos (vibraciones
ultrasnicas, homogenizacin, congelacin).
Los mtodos de purificacin enzimtica pueden dividirse dependiendo de las
propiedades de la enzima de inters como el tamao o masa, carga, solubilidad
y sitios de unin especficos.
Entre los mtodos de inmovilizacin enzimtica ms comunes tenemos a la
adsorcin, formacin de enlaces inicos, covalentes y cruzados, atrapamiento y
encapsulacin, que incrementan el nmero de aplicaciones del uso de
enzimas.

7. Bibliografa

Arroyo, M. (1998). Inmovilizacin de enzimas. Fundamentos, mtodos y

aplicaciones. Articulo recuperado 18 de septiembre 2013 de:
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