MONOGRAFA SOBRE Phytophthora infestans

(MONT) DE BARY

S O N I A JA R A M I L L O V I L L E G A S

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Medelln, 2003

Tabla de Contenido

INTRODUCCIN ________________________________________________________ 1
CAPTULO I _____________________________________________________________ 4
TAXONOMA Y CLASIFICACIN _________________________________________ 4
1. POSICIN TAXONMICA DENTRO DE LOS ORGANISMOS VIVOS _________ 4
2. MORFOLOGA E IDENTIFICACIN DE LAS ESPECIES DE Phytophthora ______ 5
2.1. Micelio _____________________________________________________________ 6
2.2. Esporangios y Zoosporas _______________________________________________ 7
Morfologa de las Zoosporas ________________________________________________ 8
2.3. Presencia de Clamidosporas _____________________________________________ 8
2.4. rganos Sexuales _____________________________________________________ 8
3. FACTORES DEL AMBIENTE QUE INCIDEN EN LA CLASIFICACIN DE
LAS ESPECIES ___________________________________________________________ 8
4. TCNICAS MOLECULARES PARA DIFERENCIAR ESPECIES _______________ 9
5. CRITERIOS TILES PARA DESCRIBIR O IDENTIFICAR ESPECIES DE
PHYTOPHTHORA _________________________________________________________ 9
CAPITULO II ___________________________________________________________ 11
ORIGEN Y MIGRACIONES DEL PATOSISTEMA Phytophthora infestans/ Solanum
tuberosum _______________________________________________________________ 11
1. ORIGEN DEL PATGENO Phytophthora infestans (MONT) DE BARY _________ 11
2. ORIGEN DE LA PAPA CULTIVADA (Solanum tuberosum) __________________ 12
3. MIGRACIONES Y EVOLUCIN DE LA PAPA CULTIVADA _______________ 12
4. ANTECEDENTES HISTRICOS DEL ORIGEN Y MIGRACIONES DEL
PATGENO P. infestans ___________________________________________________ 14
4.1. Teora de Berkely (1845) y de Bary (1861). Origen en los Andes de Sur Amrica. _ 14
4.2. Origen en el Centro de Mxico. _________________________________________ 14
4.3. Evidencias que Soportan el Origen P. infestans en Papa en los Andes Suramericanos
_______________________________________________________________________ 15
4.4. Evidencias que Soportan la Teora del Origen de P. infestans en el Centro de Mxico
_______________________________________________________________________ 17
4.5. Teora de las Migraciones Fry et al. (1992-93) y Goodwin et al. (1994) a Estados
Unidos y Europa. _________________________________________________________ 18
4.6. Teora de las Migraciones de Bourke (1964), Tooley et al., (1989) y Andrivon (1996)
_______________________________________________________________________ 18
4.7. Migraciones Posteriores a 1970 _________________________________________ 19
4.8. Las Migraciones de 1980s: Mxico, Estados Unidos y Canad________________ 20
4.9. Migraciones al Este de Asia ____________________________________________ 21
4.10. Migraciones en Sur Amrica___________________________________________ 21
4.11. Una Nueva Migracin de Colombia al Ecuador ____________________________ 21
CAPTULO III___________________________________________________________ 22
CARACTERIZACIN POBLACIONAL_____________________________________ 22
1. Tipo de apareamiento __________________________________________________ 23
2. Razas Fisiolgicas_____________________________________________________ 25
3. Mtodos Moleculares para la Caracterizacin de las Poblaciones ________________ 30

3.1. Patrones de Electroforesis de Protenas Totales ____________________________ 30

3.2. Patrones isoenzimticos (Aloenzimas) ___________________________________ 31
3.3. Anlisis del Producto de la Trascripcin (Northern blot) y la Traduccin (Southern
blot)____________________________________________________________________ 33
3.4. Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restriccin RFLPs para anlisis de
los genomas nuclear y mitocondrial ___________________________________________ 34
3.5. Haplotipos Mitocondriales (RFLP-PCR)__________________________________ 35
3.6. Mtodo AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) __________________ 41
3.7. Marcadores Microsatlites _____________________________________________ 42
3.8. ITS Regiones espaciadoras transcritas ____________________________________ 43
3.9. Nuevos cebadores (primers) para la deteccin de Phytophthora infestans por PCR_ 43
3.10. Marcadores de polimorfismo del DNA amplificado al azar ( Random amplified
polymorphic DNA, RAPD) _________________________________________________ 44
POBLACIONES DE P. INFESTANS REPORTADAS A NIVEL MUNDIAL ________ 44
CAPTULO IV ___________________________________________________________ 55
BIOLOGA DE PHYTOPHTHORA INFESTANS_______________________________ 55
1. Reproduccin asexual __________________________________________________ 57
2. Reproduccin sexual ___________________________________________________ 58
3. Ciclo de Vida de Phytophthora infestans ___________________________________ 61
CAPTULO V____________________________________________________________ 63
FUENTES GENTICAS DE RESISTENCIA A LA GOTA CAUSADA POR P.
INFESTANS _____________________________________________________________ 63
1. Resistencia Especfica a Razas de P. infestans _______________________________ 65
2. Resistencia Parcial o Cuantitativa (Resistencia de Campo) _____________________ 68
3. Resistencia Sistmica Adquirida (SAR) ____________________________________ 72
4. Factores Posiblemente Involucrados en la Prdida de la Resistencia de las Plantas a la
Gota____________________________________________________________________ 74
CAPTULO VI ___________________________________________________________ 76
PATOGENICIDAD ______________________________________________________ 76
1. Interaccin de P. infestans con Plantas Altamente Susceptibles _________________ 81
2. Interaccin de P. infestans con Plantas Altamente Resistentes y con Resistencia
Intermedia _______________________________________________________________ 82
3. Interaccin de P. infestans con Plantas que Presentan Resistencia de Campo (sin genes
R) _____________________________________________________________________ 82
4. Desarrollo de la Interaccin de P. infestans con Plantas no Huspedes de P. infestans 83
5. Cmo Estimar la Resistencia de las Plantas a P. infestans? _____________________ 83
5.1. Pruebas moleculares para la deteccin de resistencia ________________________ 84
5.2. Pruebas de seleccin y evaluacin de resistencia en plntulas bajo condiciones
controladas. ______________________________________________________________ 85
5.3. Preparacin de las suspensiones de zoosporangios para la inoculacin __________ 86
5.4. Pruebas de evaluacin de resistencia en plantas bajo condiciones de campo ______ 87
Parmetros para estimar la resistencia de las plantas en el campo __________________ 88
CAPTULO VII __________________________________________________________ 92
CONTROL DE LA GOTA (TIZN TARDO) CAUSADA POR Phytophthora infestans
_______________________________________________________________________ 92
ELEMENTOS PARA EL MANEJO INTEGRADO DE LA GOTA DE LA PAPA ____ 93
1. Control Biolgico _____________________________________________________ 93

2. Saneamiento _________________________________________________________ 93
3. Escape ______________________________________________________________ 94
4. Prediccin ___________________________________________________________ 94
5. Otras prcticas de control cultural ________________________________________ 95
6. Control qumico ______________________________________________________ 96
6.1. Normatividad para el Registro de Productos con Accin Fungicida _____________ 97
6.2. Fungicidas utilizados para el Control Qumico de la Gota (tizn tardo) _________ 98
6.2.1. Protectantes _______________________________________________________ 98
6.2.1.1. Ditiocarbamatos __________________________________________________ 98
6.2.1.2. Phthalamidas ____________________________________________________ 98
6.2.1.3. Piridineaminas ___________________________________________________ 98
6.2.1.4. Compuestos trifeniltinas ___________________________________________ 99
6.2.2. Fungicidas Sistmicos_______________________________________________ 99
6.2.2.1. Carbamatos_____________________________________________________ 100
6.2.2.2. Derivados del cido Cinmico _____________________________________ 100
6.2.2.3. Cianoacetamidas-oximes (CYMOXANIL) ____________________________ 100
6.2.2.4. Fosfonatos _____________________________________________________ 101
6.2.2.5. Fenilamidas (METALAXYL) ______________________________________ 101
RESISTENCIA A FUNGICIDAS SISTMICOS CON NFASIS EN LAS
FENILAMIDAS _________________________________________________________ 102
MTODOS PARA EL MONITOREO DE LA RESISTENCIA___________________ 106
1. Evaluacin en discos de tubrculo (Tomado de Sedegui, et al., 1999 y basado en la
tcnica de Kadish y Cohen, 1988). ___________________________________________ 106
2. Evaluacin con discos de hoja flotando en la solucin fungicida (Tomado de Sedegui,
et al.,1999 y Basado en la tcnica descrita por Kadish et al., 1990). ________________ 106
3. Evaluacin con hoja flotando en la solucin fungicida (Tomado de Sedegui, et al, 1999
y Basado en la tcnica descrita por Goth y Kean, 1997). __________________________ 107
ESTRATEGIAS PARA EVITAR RESISTENCIA A FENILAMIDAS_____________ 108
SINERGISMO ENTRE DIFERENTES FUNGICIDAS PARA EL CONTROL DEL
TIZN TARDO ________________________________________________________ 108
UN PROGRAMA PARA EL CONTROL QUMICO DE LA GOTA O TIZN TARDO
DE LA PAPA Y EL TOMATE _____________________________________________ 110
1. Efectividad de los productos fenilamidas/mancozeb (Inculo natural) ___________ 110
2. Efectividad del control con propamocarb (Inculo artificial)___________________ 110
3. Efectividad del control con Dimetomorf (Inculo Natural) ____________________ 111
4. Efectividad del control con Fluazinam a intervalos de 10 das__________________ 111
5. Efectividad del control con Fluazinam a intervalos de 7 y 10 das_______________ 111
MEZCLAS DE FUNGICIDAS DE USO COMN PARA EL CONTROL DE LA GOTA
EN PAPA Y TOMATE EN COLOMBIA._____________________________________ 111
SISTEMAS EXITOSOS DE CONTROL QUMICO DE LA GOTA DE LA PAPA. __ 112
CONDICIONES PARA UNA ADECUADA APLICACIN DE FUNGICIDAS _____ 115
CAPTULO VIII ________________________________________________________ 116
PRONSTICO DE LA GOTA CAUSADA POR P. INFESTANS_________________ 116
BIBLIOGRAFIA ________________________________________________________ 120

MONOGRAFA SOBRE Phytophthora infestans

(MONT) DE BARY

Sonia Jaramillo Villegas I. A., M. Sc.

Profesora Asociada
Universidad Nacional de Colombia, sede Medelln.
Departamento de Ciencias Agronmicas.
E mail: sjaramal@perseus.unalmed.edu.co

INTRODUCCIN
El Oomycete Phytophthora infestans, agente causante de la gota (tizn tardo) de la papa, ha
sido reconocido desde las pocas precolombinas, pero slo a partir de 1845, se tom conciencia
de su magnitud, dado que arras los cultivos que eran la base de la alimentacin del pueblo
Irlands, causando una gran hambruna que desencaden en la muerte y la migracin de una
cuarta parte de la poblacin.
El control qumico de la gota tiene efectos significativos en la rentabilidad del cultivo y la
contaminacin del medio ambiente. Sin embargo, hasta el presente, es una de las herramientas
mas utilizadas y estratgicas, pues no se han establecido otros sistemas de control eficaces, ya
que la resistencia gentica de las variedades de papa mas cultivadas comercialmente, no ha sido
estable y el patgeno evoluciona permanentemente, hacia poblaciones cada vez mas agresivas y
resistentes a los fungicidas de tipo sistmicos.
Es posible que su ubicacin dentro del reino de los hongos, durante tantos aos, haya retrazado
el proceso del conocimiento de la biologa y el diseo de productos qumicos mas apropiados
para el control de los oomycetes. Por otro lado, a partir de los aos 1950s, se estableci el Valle
de Toluca (Mxico), como centro de origen del patosistema P. infestans / S. tuberosum, dado que
all se report inicialmente la presencia de los dos tipos de apareamiento A1 y A2, lo cual permite
la propagacin sexual y conduce a una mayor diversidad gentica de P. infestans. Fue as como
Mxico se constituy en el centro de atencin de los investigadores, descuidando el estudio de
este limitante patgeno en otros ecosistemas y cultivos.
A partir de los aos 1980s, el programa de tizn tardo de la papa (gota) del CIP (Centro
Internacional de la Papa), inici actividades de investigacin en los Andes Suramericanos. All
se encontr gran cantidad de huspedes en el Per, (Abad, 1983), Ecuador (Ordoez, 2000) y una
gran diversidad y agresividad del patgeno en Rionegro, Colombia, razn por la cual, se
consider este lugar como el segundo sitio de diversidad de P. infestans, trasladando al Centro
Regional de Investigacin La Selva del ICA, el programa de evaluacin de los clones obtenidos
por los mejoradores de dicho centro.
1

El hallazgo reciente del tipo de apareamiento A2 de P. infestans, en especies silvestres de

solanceas, en papa en Bolivia y ambos tipos de apareamiento en pepino (Solanum muricatum
(Alder et al. 2002) en el Ecuador, da indicios de que tanto el patgeno como las especies
huspedes han coevolucionado en los Andes Suramericanos, razn por la cual es importante
hacer estudios detallados de aislamientos y caracterizacin de P. infestans procedentes de
diferentes zonas ecolgicas y huspedes, dado el amplio rango de adaptacin de las especies
Solanum, donde la reproduccin sexual pudiera ser parte importante del ciclo de vida en el
ecosistema andino.
Existe una gran preocupacin mundial por el resurgimiento de nuevas poblaciones de P.
infestans, por el desconocimiento de los agricultores sobre las estrategias del control integrado y
la inestabilidad de la resistencia de las variedades, que podra conducir a epidemias de mayor
magnitud incluso que la de Irlanda. Esto es especialmente cierto para los pases en desarrollo,
por lo que Turkensteen y Flier (2002) expresaron que tanto el Centro Internacional de la Papa
(CIP), como la comunidad Internacional que investiga en el tizn tardo, representada por el
GILB (Global Inititive on Late Blight) deberan realizar acciones que mejoren las estrategias de
manejo integrado del tizn tardo y faciliten los esfuerzos de los mejoradores, para en un futuro
contar con nuevas variedades, que tengan altos niveles de resistencia estables, que puedan
contrarrestar el incremento de los niveles de patogenicidad exhibidos por P. infestans.
Entre los componentes epidemiolgicos se destaca el abandono de campos de cultivos sin
cosechar, lo cual se da por bajos rendimientos ocasionados por diferentes factores, las pilas de
tubrculos abandonados a la intemperie en vecindades a los campos de cultivos de papa, al igual
que los campos de cultivos de papa orgnica, como lo indican Zwankhuizen et al., (1998), con un
menor grado para los tubrculos-semilla y las socas o tubrculos que quedan en el campo. Sin
embargo, la dinmica de la gota de la papa y el tomate en las zonas templadas, es muy diferente a
la de las regiones paperas y/o tomateras en los pases tropicales, razn por la cual se hace
necesario la investigacin a nivel de ecoregiones.
Los cultivos de papa y tomate son muy importantes para Colombia, no slo por lo que
representan para la seguridad alimentaria del pas, ya que son bsicos en la canasta familiar, sino
por la generacin de mano de obra para las labores del cultivo, transporte, comercializacin y
transformacin industrial, que se traduce en mejor calidad de vida para las personas vinculadas de
manera directa o indirecta a dichas actividades y mayor desarrollo de los municipios, ya que
ambos cultivos hacen parte de las cadenas agroalimentarias (papa y hortalizas respectivamente),
lo que amerita todos los esfuerzos encaminados a entender la biologa y el control del patgeno
P. infestans, que causa la principal enfermedad de estos cultivos, gota o tizn tardo, entre otras
denominaciones regionales.
Los avances en los conocimientos de la bioqumica, fisiologa y morfologa de las plantas
huspedes y los estudios genticos y moleculares del patgeno, han proporcionado una
informacin sobre las relaciones husped-patgeno en este patosistema, especialmente en lo
relacionado con la identificacin de genes elicitores y el establecimiento de rutas metablicas
involucradas en las reacciones de defensa de las plantas al ataque de P. infestans, dando la
oportunidad segn Kamoun (2002), de entrar a la era posgenmica, para ligar una secuencia
gentica a un fenotipo, usando herramientas computacionales, para planear ensayos con alta
efectividad, que permitan el uso de nuevos genes de Phytophthora que disparen una variedad de
respuestas celulares y moleculares en las plantas y se empiece a establecer conexiones
funcionales, entre los genes de Phytophthora y sus procesos en las plantas.
2

En tal sentido es necesario impulsar la investigacin sobre la interaccin husped-patgeno, que

incluyan tanto los huspedes de uso comercial, como los alternos (Alder et al., 2002) en
diferentes zonas ecolgicas, para entender los mecanismos involucrados en dicha relacin e
interpretar el comportamiento del patgeno en el campo, a su vez con el anlisis de los factores
epidemiolgicos, con el fin de desarrollar programas de manejo integrado de la gota de la papa, el
tomate, el lulo y el pepino, en las diferentes regiones donde se cultivan para evitar el desarrollo
de las epidemias.
El presente trabajo es producto de la investigacin que se ha venido realizando en la
universidad por mas de ocho aos y una amplia revisin bibliogrfica de las investigaciones que
se han venido realizando a nivel nacional e internacional. Se expresa los agradecimientos por los
aportes financieros a la Universidad Nacional de Colombia, COLCIENCIAS, FEDEPAPA,
CORPOICA, CIBA GEIGY (hoy SYNGENTA) y CEVIPAPA. Se destaca la asesoria de
investigadores del programa de fitopatologa del Centro Internacional de la Papa (CIP) y el apoyo
de profesores y estudiantes de la Universidad Nacional de Colombia y de la Universidad de
Antioquia, en la ejecucin de sus trabajos de grado y tesis, algunos de los cuales han sido objeto
de reconocimiento por la Asociacin de Fitopatologa Colombiana (ASCOLFI).

CAPTULO I

TAXONOMA Y CLASIFICACIN
1. POSICIN TAXONMICA DENTRO DE LOS ORGANISMOS VIVOS
En la presente sesin me permito presentar una discusin basada en los textos preparados por
Raven, Evert y Eichhorm (1999) y Erwin y Ribeiro (1996), con la siguiente ubicacin:
REINO

Cromista (grupo Stramenophyle)

PHYLUM

Oomycota

CLASE

Oomycete

SUBCLASE

Peronosporomycetidae

ORDEN

Pythiales

FAMILIA

Pythiaceae

GNERO

Phytophthora

ESPECIE

infestans

El Phyllum Oomycota, perteneciente al reino Cromista, comprende mas de 700 especies, las
cuales no tienen pigmentos fotosintticos, poseen dos flagelos en las zoosporas y los gametos
masculinos, con paredes formadas por celulosa o polmeros similares a celulosa y tienen hbitos
acuticos y terrestres, aunque siempre necesitan la presencia del agua.
Por sus formas filamentosas parecidas a hifas, se agruparon originalmente como hongos.
(Raven, Evert y Eichhorm, 1999), lo que luego fue confirmado por las filogenias moleculares,
basadas en las secuencias del RNA ribosomal, datos de los aminocidos compilados para las
protenas de la mitocondria y cuatro protenas que codifican para los genes cromosmicos,
evidenciando que los Oomycetes adquirieron la habilidad de infectar las plantas de manera
independiente de los hongos verdaderos (Kamoun, 2002).
Los Oomycetes, estn mas relacionados con las algas, dado que presentan meiosis en los
gametangios, por lo tanto sus ncleos vegetativos son de naturaleza diploide. Son conocidos
como organismos heterocontes, lo que significa que poseen flagelos en las zoosporas con
longitud y ornamentacin diferente. Los flagelos se presentan en pares, un flagelo largo y
adornado con nastigonemas (pelos) distintivos (plumosos) y un flagelo mas corto, delgado,
cilndrico y en forma de ltigo o flecha.
Las caractersticas que diferencian el gnero Phytophthora de los hongos se basan en la
morfologa de las crestas mitocondriales (tubulares) y la bioqumica de las paredes celulares, las
4

cuales contienen microfibrillas de celulosa con una matriz amorfa de B 1-3 glucano en vez de
quitina, carencia de hipoxidacin del esqualene a esteroles y diferencias en las vas metablicas,
como resultado de un sistema gentico nico (Griffith et al. 1992, cit. por Erwin y Ribeiro, 1996).
Los anlisis de las secuencias moleculares de la subunidad 18S del rDNA (ribosomal) han
confirmado que los Oomycetes, estn estrechamente relacionados con las
Crhysophytas,
Diatomeas y algas cafs, pero se separaron relativamente temprano de las formas pigmentadas.
(Raven, Evert y Eichhorm, 1999). Foster (1990) observ que las secuencias de la subunidad 18S
del rDNA son similares entre las algas fotosntticas heterocontes y miembros del gnero
Phytophthora. Al comparar las secuencias de la subunidad 28S rDNA, encontraron poca
sustitucin de nucletidos entre los seis grupos de Phytophthora, mostrando gran homogeneidad
y por lo tanto poca utilidad de esta regin para los anlisis filogenticos. (Briand, 1995, citado
por Smart et al., 2000).
Al analizar el gen de la familia actina Bhattacharia y Stickel (1994) citados por Smart et al.,
(2000), encontraron que todos los miembros de Oomycota contienen dos tipos de actina, los
cuales probablemente surgieron por una duplicacin del gen, que ocurri despus de la
divergencia de los Oomycetes y las algas cromofitas.
La mayora de las especies de Oomycetes se reproducen sexual y asexualmente: la
reproduccin asexual, es por medio de las zoosporas mviles cuyos flagelos son caractersticos y
distintivos de las especies. La reproduccin sexual es oogmica. El gameto femenino (oogonio)
es relativamente grande, en forma de huevo no flagelado y es fecundado por el gameto masculino
(anteridio) que es notablemente mas pequeo y flagelado.
En los Oomycetes, uno o muchos huevos se producen en una estructura denominada Oogonio.
El anteridio contiene numerosos ncleos masculinos. La fertilizacin resulta en la formacin de
un zigoto con paredes gruesas (la Oospora, que le da el nombre al Phyllum Oomycota) que
puede entrar en estado de reposo y tolerar condiciones de estrs, permaneciendo inactiva o en
reposo, cuando las condiciones no son favorables para la germinacin.
Las esporas asexuales (zoosporas) son producidas en el esporangio, de manera mas precisa el
zoosporangio. Los esporangios se desarrollan sobre los esporangiforos, los cuales son similares
en dimetro a las hifas. En algunas especies emergen nuevos esporangiforos a travs de las
bases de esporangiforos viejos, de las cuales se han liberado zoosporas uninucleadas.
Un grupo grande de este Phyllum son acuticos, algunos saprfitos y otros son
causan enfermedades en peces y sus huevos. Otros son terrestres como los gneros
y Pythium estrechamente relacionados y pertenecen a la familia Pythiaceae, los
enfermedades en las plantas, pero requieren del agua lquida para la movilidad de
en el suelo o en el follaje.

parsitos, que
Phytophthora
cuales causan
las zoosporas

2. MORFOLOGA E IDENTIFICACIN DE LAS ESPECIES DE Phytophthora

La identificacin de algunas especies de Phytophthora, parece ser relativamente simple, pero
las diferencias morfolgicas con otras especies del mismo gnero son tan pequeas y algunas
caractersticas tan variables, que incluso los expertos consideran que el gnero es difcil de
clasificar, mas an para los que no estn relacionados con la taxonoma de este grupo. Por esta
5

razn es necesario acudir a las tcnicas de patrones isoenzimticos y RFLPs de DNA nuclear y
mitocondrial, para diferenciar las especies. (Waterhuose et al. 1983, citado por Erwin y Ribeiro,
1996).
Rosenbaum (1917) citado por Erwin y Ribeiro (1996), estableci una primera clave para
separar 11 especies de Phytophthora, utilizando caractersticas como el tipo de anteridio, la
prominencia de las papilas sobre el esporangio, el tamao y la relacin longitud y ancho del
esporangio, la presencia y tamao de las clamidosporas y el tamao y abundancia de las
oosporas: El tamao de los esporangios no parece ser relevante, dado que ste vara con las
condiciones de crecimiento (Leonian y Geer,1929, citados por Erwin y Ribeiro,1996).
Tucker, 1930, (Citado por Erwin y Ribeiro, 1996), adems de la morfologa, utiliz la fisiologa
y la patologa, en las que incluy la habilidad para crecer en ciertos medios, el tipo de anteridio,
la presencia o ausencia de rganos sexuales, la naturaleza de las papilas (especie de trompo
compuesto de un material hidratado, con un ndice de refraccin diferente al material de la pared
celular de las hifas), la presencia de clamidosporas, la patogenicidad, el tamao de la oospora, la
presencia de hinchamientos hifales, las temperaturas mnima, ptima, y mxima para el
crecimiento y la especificidad patognica.
Posteriormente, se publicaron muchas otras claves sobre especies de Phytophthora, pero la
clave taxonmica producida por Waterhouse (1963) (citado por Erwin y Ribeiro, 1996), fue la
primera en ubicar las categoras de las especies en grupos morfolgicos y parmetros
fisiolgicos, lo que signific un gran avance en la taxonoma de Phytophthora, la cual es muy til
y an aceptada.
Dichos parmetros incluyeron patrones de ramificacin de los esporangiforos; pice del
esporangio; abundancia de esporangios sobre medio slido; la caducidad del esporangio; la
proliferacin interna de esporangios; la produccin de oogonios y oosporas en un solo cultivo
(homotlico) o en diferentes cultivos (heterotlico); naturaleza del anteridio; abundancia o
ausencia de oosporas en los tejidos huspedes o en el cultivo y para ciertas especies, forma del
esporangio y sus dimensiones. Otras caractersticas incluidas en la identificacin de ciertas
especies son: relacin longitud-ancho, esporangiforos, hinchamientos hifales, presencia o
ausencia de clamidosporas, tamao del oogonio, ornamentacin de la pared del oogonio,
especificidad del husped y rangos de temperatura mnima, ptima y mxima para el crecimiento.
2.1. Micelio
Las estructuras somticas (talos) de Phytophthora son llamadas micelio y estn compuestos de
filamentos, hialinos (hifas) ramificados y cenocticos (no septados), excepto en cultivos viejos,
en los cuales algunas veces se pueden observar septas. En cultivos jvenes, el citoplasma fluye
libremente dentro del micelio. El dimetro del micelio (5-8 micras) es variable y depende de la
naturaleza fsica y qumica del medio y de si el micelio est sobre la superficie area, sumergido
o dentro de las clulas huspedes. En ocasiones el micelio se esponja, se vuelve nudoso o
tuberculado y raras veces crece simtricamente (Erwin y Ribeiro, 1996).
Las hifas se ramifican en ngulos aproximados de 90 grados y algunas veces se constrien en la
base. Aunque hay especies que tienen patrones de micelio caractersticos, stos no son lo
6

suficientemente tiles para diferenciar especies; como tampoco lo son el crecimiento y la forma
de la colonia y el hinchamiento de las hifas (Erwin y Ribeiro, 1996).
2.2. Esporangios y Zoosporas
Los esporagios son esporas asexuales que se producen sobre pednculos llamados
esporangiforos, los cuales difieren ligeramente de las hifas vegetativas, su desarrollo es
indeterminado y se ramifican simpodialmente, lo cual es propio de Phytophthora infestans. Los
esporangios se diferencian porque en Phytophthora cada uno tiene un pednculo, cuya longitud
vara con la especie, en rangos de medio a corto como en P. infestans, en el cual pueden liberar
hasta 36 zoosporas (Sansome 1976, citado por Abad, 1983).
Los esporangios varan en forma y tamao. Las formas son algo diferentes para una especie en
particular, pero son a menudo variables en el rango: De esfricas, subesfricas, ovoides,
ovalovoides, elipsoides, limoniformes (P. infestans), periformes, obperiformes (en forma de pera
invertida), turbinadas (como un trompo), obturbinadas (trompo invertido). La diferencia de
tamao puede estar afectada por la luz, los esteroles y los medios nutritivos. Los esporangios
miden entre 29x19 a 59x31 micras (Waterhause, 1963, citado por Erwin y Ribeiro, 1996).
El patgeno P. infestans, produce hinchamientos caractersticos arriba de la zona donde se
desprende el esporangio. En algunas especies el esporangiforo reinicia el crecimiento a travs
de la base de los esporangios evacuados; el nuevo esporangio puede proliferar adentro de las
paredes de uno vaco (proliferacin interna) o el esporangiforo puede crecer hacia afuera y salir
por el poro de esporangios anteriores y formar el prximo esporangio a alguna distancia del
ltimo (proliferacin extendida).
El engrosamiento apical sobre el esporangio, el cual tiene forma de limn, se denomina papila,
de cuyo extremo emergen las zoosporas. El espesor de esta estructura vara entre especies. La
especie P. infestans es semipapilada o sea con una cavidad superficial, cuyo poro es
generalmente estrecho.
Es difcil interpretar la diferencia entre un esporangio semipapilado de uno no papilado. Los
esporangios coloreados con azul de algodn (0.01%) en lactofenol, o rojo de bengala (50 mg/ml)
podran diferenciar el engrosamiento apical del protoplasma. Las coloraciones basadas en
lactofenol son utilizadas debido a la conservacin de los montajes que pueden ser preservados en
un herbario para futuros estudios, pero a menudo se encogen los protoplasmas que estn dentro
de los esporangios, lo que puede evitarse por el uso de azul de algodn o azul-tripano en cloruro
de sodio al 0.85%; sin embargo, estas coloraciones no preservan el espcimen (Erwin y Ribeiro,
1996).
Los eventos de una secuencia bsica que conduce a una formacin de zoosporas dentro
esporangio y la disolucin de la boca apical, antes de la emisin de las zoosporas a partir de
esporangios, es igual para todas las especies. La caducidad del esporangio y la longitud
pedicelo son factores importantes y nicos para ciertas especies. Las especies no papiladas
son caducas o deciduas (Erwin y Ribeiro, 1996).

del
los
del
no

P. infestans y P. phaseoli son las nicas especies con esporangios que se desprenden y son
arrastrados por el aire o el agua. En el aire seco los esporangiforos de P. infestans, se retuercen
7

y doblan, para descargar los esporangios en el aire, como sucede con los esporangios de
Peronospora, lo que les da una ventaja epidemiolgica.
Morfologa de las Zoosporas
El aparato flagelar tpico de las zoosporas posee dos flagelos uno en forma de ltigo y el otro en
forma de pluma. La zoospora est conformada por varias partes: el kinetosoma (cuerpo basal de
la zoospora), la zona de transicin que une el flagelo con el kinetosoma, y el sistema del
microtbulo, que permite anclar el flagelo a la zoospora.
Los anclajes (como raicillas) de los flagelos de P.infestans, son significativamente diferentes,
pues slo tiene cinco raicillas, mientras que otras especies tienen seis. Una de las raicillas de
las zoosporas de P. infestans contiene seis microtbulos en comparacin con otras especies que
slo presentan cuatro. Esta caracterstica podra ser til para diferenciar P. infestans, ya que
parece ser nica en el gnero (Erwin y Ribeiro,1996).
2.3. Presencia de Clamidosporas
Muchas especies no producen clamidosporas, incluyendo P. infestans. Adems la morfologa
de la clamidospora no es muy til para diferenciar especies, por lo tanto, no es una caracterstica
importante, excepto en P. macrochlamydospora, en la cual las clamidosporas son grandes y
caractersticas (Erwin y Ribeiro, 1996).
2.4. rganos Sexuales
Los procesos sexuales involucran la produccin del oogonio y el anteridio, los cuales surgen de
las puntas del micelio que se contactan. Si el oogonio crece sobre el anteridio, ste se denomina
anfiginio y si el anteridio rodea al oogonio, en su parte basal cerca al pedicelo, se conoce como
paraginio. En Pythium el anteridio rodea completamente el oogonio. La posicin del anteridio
(paraginio o anfiginio) es una caracterstica importante de diagnstico.
En Phytophthora
infestans el anteridio es anfiginio (Erwin y Ribeiro, 1996).
3. FACTORES DEL AMBIENTE QUE INCIDEN EN LA CLASIFICACIN DE
LAS ESPECIES
Dentro de los factores fisiolgicos la temperatura, la humedad relativa y la luz son importantes
para diferenciar ciertas especies de Phytophthora, entre las cuales est incluida P. infestans, que
crece bien a temperaturas promedio de 18 C, con 1.300 microwatios por cm2 de luz en medio
agar-centeno y alta humedad relativa. En general se ha reportado que la radiacin solar es el
factor que mas afecta la germinacin de los esporangios, posiblemente por los efectos de la luz
ultravioleta (Erwin y Ribeiro , 1996; Sunseri y Johnson, 2002).

4. TCNICAS MOLECULARES PARA DIFERENCIAR ESPECIES

La adaptacin de la tecnologa de biologa molecular, se ha constituido en una herramienta
importante para confirmar la validez de las especies determinadas utilizando caractersticas
morfolgicas porque permiten detectar posibles diferencias genticas que se desarrollan por la
evolucin relativamente rpida del patgeno, debido a la eficacia patognica en muchos
huspedes, que en ocasiones no son acompaadas de cambios morfolgicos.
Al comparar las secuencias de los ITSI e ITSII (regiones espaciadoras internas transcritas) de
los seis grupos morfolgicos descritos por Waterhouse en 1993, se demuestra que el
agrupamiento propuesto, coincide con las caractersticas morfolgicas establecidas (Cooke y
Duncan,1997, citados por Smart et al, 2002). Sin embargo, dentro de un mismo grupo, como es
el caso del grupo IV, las especies P. infestans, P. mirabilis y P. phaseoli son indiferenciables por
la tcnica de los ITSII, pero s por anlisis de haplotipos mitocondriales. Los otros miembros del
grupo: P. elicis, P. colocasiae y P. hibernalis se pueden diferenciar directamente utilizando
marcadores ITS (Tooley et al, 1998, citados por Smart, 2002).
5. CRITERIOS TILES PARA DESCRIBIR O IDENTIFICAR ESPECIES DE
PHYTOPHTHORA
Los criterios que se citan a continuacin han sido tomados casi textualmente de Erwin y
Ribeiro, 1996, por considerarlos de gran utilidad en la presente monografa.
Esporangios: no papilados, semipapilados ( P. infestans) o papilados.
El ancho del poro de salida sobre el esporangio.
La persistencia o caducidad (P. infestans) del esporangio y la longitud del pedicelo corto
(menos de 5 micras) para P. infestans.
Forma y tamao del esporangio.
La relacin longitud-ancho del esporangio.
El esporangiforo: no ramificado, irregularmente ramificado, en un simpodio simple (con
ramificacin compuesta simpodial nudoso; Ho 1992; Ho et al.1995 para P. infestans, citados por
Erwin y Ribeiro, 1996) complejo o en umbela; Se forman nuevos esporangios internamente
(proliferan).
Oogonio: tamao y forma.
Oogonio: ornamentacin de la pared.
Oosporas: dimetro y espesor de la pared celular.
Oosporas: plerticas o aplerticas.
Anteridio: Anfiginio, paraginio o ambos.
9

Anteridio: unicelular y/o bicelular.

Anteridio: tamao y forma.
Homotlico: produce oosporas en un solo cultivo.
Heterotlico: produce oosporas solamente o principalmente cuando se une con un tipo de
apareamiento opuesto, tipo de apareamiento A1 o A2 (P. infestans).
Temperaturas adecuadas para el crecimiento:
grados centgrados).

ptima, mnima y mxima (por debajo de 30

Hinchamiento hifal: simple, catenulado o closterado.

Clamidosporas: terminal, intercalar, lateral o ssil.
Patrn de crecimiento en cultivo con agar: petaloide, arrosetado, en estrella,irregular, denso o
ligero.
Hifas: lisas, onduladas, enrolladas o coraloides.
Sistema de ramificacin hifal (Ho, 1978, citado por Erwin y Ribeiro, 1996).
Produccin de pigmentos. En un medio con casena tirosina-hidrolizada (Sheperd, 1976, citado
por Erwin y Rtibeiro, 1996).
Patogenicidad: un solo husped o muchos huspedes.
Perfiles de protena (Gill y Zentmyer, 1878; Erselius y Shaw, 1982; Erselius y de Vallavielle,
1984; citados por Erwin y Ribeiro, 1996). No reportado para P. infestans
Patrones isoenzimticos: para P. infestans (Spielman et al., 1989, 1991, citados por Erwin y
Ribeiro, 1996).
Patrones de Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP) del DNA.
Para P. infestans (Goodwin, 1990, 1992, citado por Erwin y Ribeiro, 1996).

10

CAPITULO II

ORIGEN Y MIGRACIONES DEL PATOSISTEMA Phytophthora infestans/

Solanum tuberosum
1. ORIGEN DEL PATGENO Phytophthora infestans (MONT) DE BARY
Phytophthora significa destructor de plantas y la especie infestans, es el agente que causa el
tizn tardo (gota) de la papa, el cual tiene varios sinnimos. Erwin y Ribeiro (1996), hacen una
amplia discusin sobre la historia de este patgeno y la enfermedad que afecta la papa.
Segn los autores antes indicados, Matius de Prusia en 1842, lo llam Gangraena tuberum
solani, cuando por primera vez describi el hongo que caus la enfermedad que devast el follaje
y los tubrculos de papa en casi toda Europa. Informa Bourke, 1993 (citado por Peterson, 1995)
que los reportes de Matius de Prusia fueron considerados como una hereja y que el Reverendo
Berkeley de Inglaterra interesado en el estudio de la patologa de las plantas, revis el reporte
inicial de Prusia, lo tradujo y lo public en el Gardeners Chronicle, dado que sus estudios
coincidieron con el punto de vista de dicho investigador.
Segn Bourke (1991) citado por Erwin y Ribeiro (1996), hubo muchas teoras para explicar la
nueva enfermedad que apareci en la papa en Europa Continental, las islas Britnicas, pero la
mayora de los comentarios se basaban en el mal clima (tiempo lluvioso y polucin industrial).
Hacia 1845, Morren de Blgica escribi varias cartas en las que sostena que un hongo era la
causa del tizn en la papa, teora fuertemente controvertida.
Despus de algunas dudas Montagne acept la teora de Morren y con la informacin que tena
decribi el gnero Botrytis infestans, el cual conocemos hoy como Phytophthora infestans, que
fue confirmada posteriormente por Antony de Bary 1876. (Erwin y Ribeiro, 1996).
Los europeos ya conocan otros males que afectaban la produccin de la papa
(encrespamientos y pudriciones secas) desde 1760s, que los condujo a reemplazar las semillas
degeneradas, introduciendo nuevos materiales importados por distintos puertos de manera oficial
o extraoficial, ingresando nuevas variedades de Norte y Sur Amrica, utilizadas en ensayos de
campo entre 1843-1845, posibilitando el ingreso del agente causal de la gota, enfermedad
observada en dichos campos (Daly, 1996).
P. infestans es la especie mas conocida por causar la enfermedad denominada como tizn tardo
(gota) que produjo una tremenda destruccin de los cultivos de papa en Irlanda hacia los aos
1840s, con efectos inmediatos de pobreza y hambruna, que condujeron a profundos cambios
sociales y econmicos en ese pas, a la reduccin de la cuarta parte de su poblacin por la muerte
de un milln de personas y la migracin de otro tanto. Ninguna otra enfermedad de plantas ha
causado tan amplia dispersin humana e impacto social (Erwin y Ribeiro, 1996; Daly, 1996).
Desde entonces se han propuesto varias teoras en torno al origen del patgeno P. infestans,
puesto que la gota fue observado por primera vez en cultivos de papa cerca a Filadelfia alrededor
11

de 1843 y para 1845 estaba esparcido por casi todo el noreste de Norte Amrica y en el verano de
ese ao apareci en el noroeste de Europa (Daly, 1996).
Dado que el patgeno fue asociado inicialmente con la papa, cultivo bsico en la alimentacin a
escala mundial, tom gran importancia el estudio del patosistema Phytophthora infestans/
Solanum tuberosum, dentro de un contexto de coevolucin.
2. ORIGEN DE LA PAPA CULTIVADA (Solanum tuberosum)
El antroplogo Engel (1964) citado por Estrada (2000) encontr fsiles de papa con una
antiguedad verificada de aproximadamente 10.000 aos, al sureste de Per y noroeste de Bolivia,
alrededor del Lago Titicaca, coincidiendo con la conclusin de Hawkes, sobre su domesticacin
en dicha regin a partir de Solanum leptophyes, que origin la primera especie cultivada Solanum
stenotomum (2x=2n) diploide.
Lujn (1996) afirma que la papa se origin a 3.800 msnm, 17 94 de latitud sur y 68 03 de
longitud oeste.
Las condiciones climticas actuales corresponden a un clima seco con
deficiencias de lluvia en todas las estaciones. Temperatura promedio de 13,1 C. Precipitacin
promedio (seis aos) anual de 376,1 mm.
Alta luminosidad a cualquier hora del da,
especialmente en las tardes cuando soplan vientos fuertes y helados.
Dichas condiciones son desfavorables para el desarrollo del patgeno P. infestans causante de
la enfermedad, conocida como tizn tardo o gota de la papa, especialmente por la alta
lumimosidad, puesto que se ha encontrado que los esporangios reducen en un 95% la
germinacin, con una hora de exposicin a alta intensidad de la luz solar (Sunseri y Johnson,
2002).
Segn Hawkes, citado por Estrada (2000), otras papas silvestres comenzaron a evolucionar en
Mxico, y algunas migraron a Suramrica cuando se form el puente terrestre en la poca
geolgica del plioceno, hace tres millones de aos. Luego ocurrieron migraciones de regreso a
Mxico en forma de grupos de especies tetraploides (2n=4x=48) y hexaploides (2n=6x=72).
3. MIGRACIONES Y EVOLUCIN DE LA PAPA CULTIVADA
Dado que la migracin de la papa est asociada a la posible migracin del patgeno P.
infestans, se ha considerado importante, presentar las rutas de migracin de dicho tubrculo.
Hawakes y Ortega (1992), citados por Estrada (2000), indican que el primer registro de
exportacin de papa a Europa fue encontrado en Sevilla (Espaa), el cual indica que la papa
lleg en 1570, procedente de tubrculos de la subespecie andigena, recolectados en la parte
central de Colombia (Bogot o pramos cercanos) y transportados por el Ro Magdalena hasta
Cartagena y de all a las Islas Canarias. Se compraba en el mercado de Sevilla en 1580 y fue
llevada por Drake o Roberg a Inglaterra en 1590.
Segn Robertson (1991, citado por Abad y Abad (1995), la papa fue introducida a
Norteamrica a travs de las Islas Bermudas en 1663, en tubrculos procedentes de Inglaterra,
pero slo se volvi cultivo importante en 1718 con la llegada de los irlandeses presbiterianos.
Hay reportes sobre su cultivo en la India en 1772-1775 (Mc Intosh, 1927) en Formosa en 1650 y
12

en China en 1700 (Laufer, 1938). Inicialmente se introdujo la subespecie Solanum tuberosum

ssp. andigena, la cual slo tuberiza en das cortos, condicin que se presenta al final del ao en
Europa (Abad y Abad, 1995).
Entre el descubrimiento, la introduccin y el cultivo de la papa en Europa, pasaron por lo
menos dos siglos a travs de los cuales, se desarroll la subespecie Solanum tuberosum ssp.
tuberosum, adaptada a las condiciones de la zona templada de Europa, caracterizadas por das
largos en el verano, con altas temperaturas e intensidades luminosas y das cortos en el otoos
con bajas temperaturas que favorecen el proceso de tuberizacin. Hoy se sabe que con los
mtodos genticos modernos, es posible lograr el cambio de una subespecie a otra en pocos aos
(Estrada, 2000).
Las diferencias entre las dos subespecies condujeron recientemente a conformar dos especies:
S. tuberosum y S. andigena, separadas geogrficamente por latitud y altitud, diferencias
morfolgicas de los tallos (menor nmero de brotes secundarios, el tamao y nmero de los
estolones en S. tuberosum) y follaje (reduccin de la diseccin foliar) y diferencias fisiolgicas,
en cuanto a fotoperodo y temperatura. La especie tuberosum posee, adems, por lo menos siete
factores de esterilidad citoplasmtica (Estrada, 2000).
Daly (1996) indica que hubo movimientos de semilla entre los pases europeos e importaciones
de norte y sur Amrica alrededor de 1840s, para reemplazar los materiales que estaban
presentando reduccin en las producciones. Grun et al. (1977), citados por Estrada (2000) tienen
evidencia de que los clones cultivados en Amrica del Norte y Europa, descendieron de nuevas
importaciones de Solanum tuberosum de Chile, en los cuales ocurri el cambio de los materiales
movilizados por las civilizaciones indgenas de los Andes hacia el Sur de Chile. Dichas
importaciones se realizaron debido a la prdida de materiales de papa como consecuencia de la
epidemia de tizn tardo (gota) que se present en Europa entre 1843-1845.
Una nueva fuente de diversidad gentica se present en Europa por la posterior introduccin de
la especie Solanum demissum, por su resistencia a la gota y porque produce mayores
rendimientos, cuando se cruza con S. phureja. Cerca del 83% de las variedades alemanas tienen
genes de S. demissum y 26% de otras especies silvestres. Igualmente el Reino Unido, Escocia y
Estados Unidos hicieron cruces con S. demissum (Estrada,2000).
La aparicin de nuevas razas de P. infestans que vencieron la resistencia conferida por Solanum
demissum, condujo a la bsqueda de nuevas fuentes de resistencia, con nfasis en resistencia de
campo (por genes menores o cuantitativa) proporcionada por especies silvestres o nativas de la
zona andina. La variedad Monserrate, obtenida por los doctores Julia Guzmn y Nelson Estrada
en 1955, por un cruzamiento entre un cultivar de S tuberosum y S. andigena, es uno de los casos
mas representativos y de gran importancia a nivel mundial.
Estrada (2000) opina que la contribucin de las especies de papas silvestres procedentes de
Colombia, Venezuela, Amrica Central y Mxico a la evolucin de las papas cultivadas fue
menor, por la escasa resistencia al tizn tardo (Phytophtora infestans) y a la marchites bacteriana
(Pseudomonas solanacearum hoy ubicada en el gnero Ralstonia) del material suramericano.
Esto da indicios de que el origen del patgeno puede ubicarse en especies solanceas, originadas
en zonas ecolgicas diferentes a la zona de domesticacin de la papa.

13

Sin embargo, Abad et al. (1995) consideran que un alto nmero de formas de papas de la
especie Solanum andigena ssp andigena del Per han sido utilizadas para obtener resistencia
durable, al igual que otras especies con resistencia parcial como S. phureja, S. stenotomun,
S.acaule, S. Bukasovii. Adems con resistencia vertical se han reportado las siguientes especies
silvestres del gnero Solanum: S. chiquidenum, S. chomatofillum, S. irosinum, S.leptophyes,
S.marinasense, S. mochiquence, S. piurae, S. paucissectum, S. sparcipilum. Igualmente reportan
resistencia parcial en varias especies de tomates silvestres, originarias del Per.
Se han reportado mas de 200 especies silvestres de papa, de las cuales por lo menos 140
pertenecen a Sur Amrica. Estas con sus variantes y clones de cada una, constituyen mas de
2.105 clones. El Centro Internacional de la Papa (CIP) conserva mas de 5.000 variedades nativas
y 1.500 colecciones de papas silvestres, y todas se pueden cruzar con las ocho especies
cultivadas, debido a que no tienen diferencias bsicas estructurales en los cromosomas y las
convierten en un reservorio de genes de valor incalculable por su resistencia y adaptacin a
factores biticos y abiticos (Estrada, 2000; Abad et al., 1995).
4. ANTECEDENTES HISTRICOS DEL ORIGEN Y MIGRACIONES DEL
PATGENO P. infestans
4.1. Teora de Berkely (1845) y de Bary (1861). Origen en los Andes de
Sur Amrica.
Esta teora supone que el patgeno se haba originado en los Andes como centro de origen de la
papa y desde all fue introducido a Europa. Esta teora se bas en los documentos del Padre
Jesuita Jos Acosta en 1590, quien en su libro Historia Natural y Moral de las Indias, se refiri
al trmino aublo (brand melthaw) de las papas en las montaas de Per y Bolivia.
Abad y Abad (1995) sealan que el coronel Acosta (1845) en carta a Boussingault, indica que
las papas son nativas de los Andes, pero jams los indios se alarmaron con los daos causados
por el mal de la papa, el cual se presenta en la sabana de Bogot en los aos lluviosos, y es una
especie de champin que se desarrolla en diferentes puntos y que corroe mas o menos
profundamente los tubrculos, reduciendo la produccin en un 8% y la prdida de un 33% en el
almacenamiento por un rpido contagio. Dicho mal, es endmico en las cordilleras.
La teora es reforzada desde 1995-2002 por Abad y el grupo de trabajo en tizn tardo (gota) de
la papa del CIP, gracias a las investigaciones bibliogrficas y de campo que empezaron a realizar
a partir de 1977. En estos trabajos se reportaba un incremento en el nmero de especies (106)
afectadas por dicho patgeno de manera natural o artificial (por inoculaciones), las cuales tienen
su origen en los Andes del Per y pertenecen principalmente a los gneros Solanum y
Lycopersicon de la familia Solanaceae (Abad, 1983; Abad et al., 1995).
4.2. Origen en el Centro de Mxico.
Segn Abad y Abad (1995), Reddick (1928), cuestion la veracidad de los registros histricos
arriba sealados, basado en la carencia de trminos tcnicos y por ende en la posible confusin
generada en la interpretacin de la palabra aublo, especialmente por parte de Acosta Coronel
de la Armada. A su vez Andrivon (1996), considera que hay muchos factores que interactan y
14

que pueden presentarse sntomas de pudriciones de tubrculos o muerte del follaje, en los cuales
la gota es apenas un componente de los diversos factores complejos.
Abad y Abad, (1995), sealan que el primer reporte de gota en Sur Amrica se hizo en Solanum
muricatum (pepino) por Lagerhein (1890) en el Ecuador, situacin interpretada como una
introduccin de Europa, puesto que no se conocan reportes de la enfermedad en esta zona. Esta
enfermedad fue observada en dicho pas, en ese mismo ao en Solanum caripense y Petunia
hybrida. Luego Pachano (1919-1920) la report en papa y pepino.
Esta teora ha sido ampliamente apoyada por varios grupos de trabajo destacados a nivel
mundial en la investigacin de este patgeno, que incluye las Universidades de Cornell,
Washington, Wageningen, Sunchon, la USDA_ARS y el Instituto de Investigaciones de la papa
en Polonia, quienes de manera conjunta prepararon el documento Historical and Recent
Migrations of Phytophthora infestans Chronology, Pathhways, and Implications (Fry et al.
1993).
La primera evidencia cronolgica reportada en el Noreste de Estados Unidos en 1843 y los
datos genticos de las poblaciones son consistentes con la hiptesis de que P. infestans sufri el
fenmeno gentico denominado cuello de botella al pasar de Mxico a Estados Unidos y de all
hacia Europa, generndose poblaciones muy simples dominadas prcticamente por un solo linaje
clonal, aunque en Estados Unidos se han reportado varios linajes clonales despus de los aos
1990s.
Los estudios del grupo de Niederhauser en los aos 1950s, registraron la reproduccin sexual
en las zonas altas del Centro de Mxico, al descubrir una nueva forma del patgeno que la
denominaron A2, la cual se poda aparear con la forma A1 originalmente conocida. Hacia los
aos 1980s se report la forma A2 en Suiza y posteriormente en varios pases de Europa y otros
continentes, posiblemente introducida desde Mxico en un cargamento de 25.000 toneladas de
papa en 1976 (Fry y Goodwin,1995).
4.3. Evidencias que Soportan el Origen P. infestans en Papa en los Andes
Suramericanos
Segn Abad (1983); Abad y Abad (1995), dicha enfermedad fue observada durante la
dominacin espaola en 1762-1767 de acuerdo con el reporte Trasactions of the Viceroy of
Santaf de Bogot, reportado a la Asociacin Americana de Agricultura, en The Gardners
Chronicle,1847. Posteriormente informado por el Consul Pazos de Bolivia en Londres en
comunicacin a la Academy of Royal Society of Bruxelles, indica que las fuertes lluvias
provocan en las plantas una sustancia parsita, que segn l, es un hongo o animal o zoofito, pero
que mantiene los sntomas idnticos a los observados en Europa en ese ao y que causan el
decrecimiento de las plantas.
D Orbigny explorador en Suramrica en comunicacin a The Society Centrale dAgriculture
de France (Roze, 1898) dice que los Aymaras que viven en la vecindad de La Paz, conocen desde
tiempos remotos la enfermedad que atac las papas en el ao de 1845. En 1878, Garca Merino
report que una gran epidemia de hielo, haba afectado los cultivos de papa, tomate y pepino de
agua en los valles costeros de Lima y Lurn, en 1868, la cual haba sido observada en aos
anteriores sin causar daos severos. (Abad y Abad, 1995)
15

Lujn (1996) indica que el agricultor Pedro Pardo inform en 1861, que los tubrculos de la
variedad tuquerrea, nativa de Colombia, fueron afectados con gota, en Chipaque Cundinamarca.
En 1864 se observ por primera vez un campo de papa criolla (Solanum phureja) devastado por
la gota antes de floracin; y en 1865 la enfermedad se difundi a toda Cundinamarca de manera
agresiva, excepto en Usme (con alturas superiores a 3.000 msnm).
Tales observaciones coinciden con Acosta (1845) citado por Abad y Abad (1995) quien indica
que los cultivos de papa se realizan en las partes altas de los Andes, donde se practica el
principio de escape a la enfermedad. Es posible que esta condicin hubiese demorado las
apariciones de esta enfermedad en los tiempos de la conquista y la colonizacin espaola.
Se deca que la gota haba llegado a Colombia en 1861 con un material introducido de Holanda,
y de all haba pasado a Ecuador en 1865 y a Per y Bolivia en 1947. Esta creencia desconoce los
registros histricos de la enfermedad en Sur Amrica y las descripciones realizadas por indgenas
Aymars, los cuales son conocidos como los domesticadores de la papa en las montaas
peruano-bolivianas.
Abad (1983) observ que 17 (de los 19) cultivares de papa del Per evaluados, fueron
extremadamente susceptibles a P. infestans, los dos restantes presentaron alta susceptibilidad a
cuatro aislamientos, mientras que la variedades Mexicanas Rosita y Atzimba, presentaron alta
resistencia a todos los aislamientos.
El pepino (Solanum muricatum) present la raza 1,4,10,11 de P. infestans, la cual fue detectada
posteriormente en cuatro aislamientos colectados en papa a la par con las razas 0, 10,11; 1,3,7 y
1,4,11 (no patognicas a pepino) pero se desconocen las causas de tal variacin (Abad,1983,
Abad et al., 1995).
Marn y Mira 1998 y Jaramillo et al. (1998), observaron gran diversidad de razas en los
aislamientos procedentes de plantas de pepino (Solanum muricatum), tomate (Lycopersicum
esculentum), papa criolla (Solanum phureja) que crecan de manera silvestre en las orillas de los
caminos o en huertas caseras en el departamento de Antioquia, Colombia. Cada aislamiento
constitua una raza, poco compleja (con pocos diferenciales afectados), mientras que aislamientos
procedentes de monocultivos de papa, en zonas frecuentemente cultivadas, presentaron pocas
razas, pero mas complejas (vase tablas 1 y 2 mas adelante).
Phytophthora infestans ha sido endmico de las zonas paperas de los Andes Suramericanos por
miles de aos, y la confusin se debe a la semntica de los nombres locales. Se encontr una
gran variabilidad del patgeno en la Sierra del Per, posiblemente debida a cambios somticos
generados por parasexualidad, puesto que solo encontraron el tipo A2 en dos aislamientos. Dado
que la papa, el pepino, posiblemente el tomate y muchas solanceas silvestres tuberferas tienen
su origen en el Per, el origen de este patgeno debe estar en algn lugar de los Andes Peruanos
(Abad, 1983) o suramericanos puesto que en Ecuador se han reportado nuevas poblaciones en
otras solanceas silvestres (Oyarzn et al., 1998).
Por otro lado Abad et al., 1995, indican que de las seis formas de DNA mitocondrial
reportadas, la forma C slo ha sido observada en un aislamiento del Per, el cual corresponde al
haplotipo denominado I-c por Ordoez et al., (2000) en el Ecuador y se presenta en la poblacin
EC-3 de S. betaceum (tomate de rbol).
16

Los aislamientos peruanos son muy simples en diversidad de marcadores moleculares

incluyendo aloenzimas (Gpi 86/100, Pep 92/100) y finger printing (huellas dactilares) del DNA
nuclear (25 loci), similares a las poblaciones viejas de Europa y Estados Unidos. Igualmente los
aislamientos colectados en 1983 y 1987 (26 en el Norte, 33 en el Sur) presentaron pocas razas
patognicas con predominio de la raza cero (r0) en las partes altas del sur en ambos aos, lo que
indica la ausencia de genes de resistencia de la especie S. demissum en las variedades de papa
nativas de dicha zona.
Slo dos aislamientos del Norte de los Andes se autofertilizaron. La rareza del tipo de
apareamiento A2 en el Per, puede ser explicada por la seleccin estabilizante que es
favorecida por un balance perfecto entre el husped y el patgeno en los Andes. (Abad et al.,
1995).
Puesto que la aparicin de ambos tipos de apareamiento, se reportaron en Japn desde 1937, Ko
(1994) citado por Abad et al., (1995), sugiere que la aparicin del tipo A2 en diferentes pases, se
puede deber a que un aislamiento tipo A1 que emigr, puede autorevertirse a A2 para producir
una oospora, o por un cambio de su forma original A1 a la forma A2, inducida por el
envejecimiento, exposicin a fungicidas o por estrs del medio ambiente.
4.4. Evidencias que Soportan la Teora del Origen de P. infestans en el
Centro de Mxico
Fry y Goodwin (1995), Andrivon (1996) presentan un resumen crtico sobre la historia y
evidencias cientficas que apoyan el origen de dicho patgeno en el Centro de Mxico.
La aparicin de la forma sexual del patgeno, reportada por Niederhauser en 1953, la cual no
haba sido observada en ningn otro lugar. (En Japn en 1937, Ko citado por Abad et al., 1995).
La presencia de las dos formas A1 y A2 en igual frecuencia.
La poblacin del patgeno, especialmente en el Valle de Toluca Mxico, presenta diversas
caractersticas de virulencia.
Se han detectado todos los alelos enzimticos conocidos hasta el presente
Las poblaciones de dicha localidad contienen todas las bandas de finger printing del DNA
Los genes de resistencia especficos a razas son ms frecuentes en el Centro de Mxico que en
los Andes de Suramrica, ejemplo que se presenta en Solanum demisum.
Segn Fry et al. 1993, Matuszac y su grupo de trabajo, en 1988, observaron que aislamientos
procedentes de fololos de papas sin asperjar con fungicidas, en el Valle de Toluca Mxico,
tenan un 50% de individuos con genotipos nicos, a pesar de la predominancia de la
reproduccin asexual durante la epidemia. Sin embargo, Abad (1983) encontr 15 razas
diferentes en aislamientos procedentes de papas cultivadas en Per, de los cuales 13 procedan de
la Sierra, cuatro de San Ramn (pie de la cordillera) y cinco de la Costa. El 55% de los 47
aislamientos fueron patognicos a tomate y 15% a pepino.

17

El Centro de Mxico, es el segundo lugar en diversidad de especies del gnero Solanum,

muchas de las cuales son endmicas y tuberizan, mientras que la papa (S. tuberosum ssp
tuberosum), solo se cultiva de manera intensiva en dicha zona a partir de los aos 1950s (Fry et
al., 1993). Esto sera una evidencia de que la papa no es la planta en la cual se pudo originar el
patosistema con Phytophthora infestans, pues adems las condiciones climticas sealadas por
Viet (1997) en la zona de origen de la papa cultivada hace 10.000 aos, poca de domesticacin
de esta especie, al parecer eran adversas al desarrollo del patgeno.
4.5. Teora de las Migraciones Fry et al. (1992-93) y
(1994) a Estados Unidos y Europa.

Goodwin et al.

La teora de las migraciones considera que P. infestans pudo haber sido transportado de
Mxico a Estados Unidos y de all a Europa, o que fue llevado directamente de Mxico a Europa,
y una vez introducido all, fue dispersado por el resto del mundo con los tubrculos-semilla,
indicando que al menos hubo tres eventos de migracin.
La primera migracin ocurri cerca de 1840, presentndose un primer reporte en Filadelfia
USA en 1843, luego en localidades distantes de ese sitio, reportndose en la provincia martima
de Canad, en la parte Noreste de Estados Unidos y luego en el medio Oeste de dicho pas.
Los primeros reportes en Europa se hicieron en Blgica (junio de 1845). A mediados de
octubre se present en Irlanda y luego se esparci por el Oeste de Alemania. Bourke citado por
Daly (1996), indica que lo mas probable fue que P. infestans lleg a Europa en un embarque de
papas importadas a Blgica a finales de 1843 o comienzos de 1844, para restablecer las
existencias de papas que haban sido afectadas por enfermedades virales y pudricin seca por
Fusarium. Pero no se registra el origen de dichos materiales. Es posible que hubiesen sido
llevados de Norte y Sur Amrica (Andrivon, 1996, Daly,1996).
4.6. Teora de las Migraciones de Bourke (1964), Tooley et al., (1989) y
Andrivon (1996)
Esta teora postula la migracin tambin en tres pasos. Primero de Mxico a Sur Amrica, de
ah a Norte Amrica y de este lugar a Europa.
Teniendo en cuenta varios acontecimientos histricos y la presencia de genes especficos a
razas de. P infestans en especies de papas silvestres de los Andes, indican que la introduccin fue
por lo menos varios siglos atrs, desde su lugar de origen en el Centro de Mxico, causada por
varias migraciones humanas antes y despus de la conquista y desde el Norte hacia el Sur.
Adems es posible que P. infestans hubiese sido introducido con otras especies de plantas
diferentes a papa, aunque no se ha obtenido ninguna evidencia arqueolgica o histrica
(Andrivon, 1996).
Una vez introducidas las poblaciones de P. infestans a Sur Amrica, prcticamente
evolucionaron aisladamente a pesar de que las comunicaciones y el intercambio han sido activos,
encontrndose el predominio del Linaje Clonal US-1, el cual fue ampliamente distribuido en todo
el mundo, facilitado por el comercio del guano, lo que conduce a un flujo limitado de genes de
18

las poblaciones andinas, o que la introduccin original fue limitada a unos cuantos genotipos
(Andrivon, 1996).
Segn Andrivon (1996) la base gentica estrecha del patgeno, combinada con la frecuencia
reducida de la incidencia de tizn tardo en ciertas regiones de los Andes, redujo el tamao
absoluto de las poblaciones, y con las altas tasas de extincin observadas, en los linajes de P.
infestans, se lleg a la fijacin rpida de un slo linaje clonal, el US-1, el cual posiblemente
migr de Sur Amrica a Estados Unidos y Europa en la dcada de 1840.
4.7. Migraciones Posteriores a 1970
Durante el largo intervalo de 1840s-1970s no se encontraron evidencias de migraciones, dado
que los datos de evaluacin de las poblaciones de P. infestans, fueron consistentes con un solo
linaje clonal, el US-1 introducido por migracin de localidades de mayor diversidad a zonas de
menor diversidad. Por ejemplo, de Mxico a Estados Unidos y de all a Europa y de este
continente a Asia, Africa y Sur Amrica (Fry et al., 1993, Goodwin et al.,1994).
Al parecer grandes cantidades de papa para el consumo domstico fueron llevadas de Mxico al
Oeste de Europa a finales de los aos 1970s. De una pila de compost o de algunos tubrculos
que fueron almacenados y luego sembrados en el campo, pudo escaparse el patgeno P. infestans,
el cual habra podido sobrevivir el invierno sobre los tubrculos, de los cuales surgieron las hojas
en la primavera, donde creci el patgeno y se pudo dispersar a plantas de papa y de tomate, en
campos vecinos, muchos posiblemente destinados a la produccin de semilla (Fry et al .,1993).
La semilla de papa es una fuente permanente de comercio a lo largo y ancho del mundo, con
la cual se pudieron haber transportado nuevas poblaciones del patgeno que incluan el tipo de
apareamiento A2, el cual an no est reportado en algunos pases como Colombia, Filipinas,
Taiwn y Per, pero se teme su dispersin con el comercio de los tubrculos semillas, pues
para 1987, ya estaba presente en Pensilvania (US-7 en papa) y en 1989 en Columbia Britnica
(US-8 en papa y tomate), posiblemente procedentes de papas del Este de Washington o tomates
de la Florida (Fry et al., 1993; 1995).
Las nuevas poblaciones desplazaron a las viejas, puesto que no se han descubierto
recombinaciones de genotipos nuevos y viejos; y los alelos aloenzimticos caractersticos de los
linajes viejos, estn ausentes en las poblaciones presentes actualmente: Esto indica que las
poblaciones que llegaron recientemente estn mas adaptadas, pues mostraron una mayor
agresividad, en Europa Central durante la dcada de 1980 (Fry et al.,1993).
Segn el grupo de Fry et al.(1993), la seleccin por genes de resistencia (R), no es una
explicacin satisfactoria para indicar el desplazamiento de esta poblacin por las siguientes
razones:
La mayora de las variedades de papa de Europa Occidental no contienen genes R.
Existi una virulencia adecuada en las poblaciones viejas.
No ha habido cambios mayores en al composicin de los genes R de las variedades Europeas
que coincidan con el desplazamiento
19

Adems, el desplazamiento de P. infestans tambin ocurri en otros continentes: en Japn se

redujo la frecuencia del linaje clonal viejo; y la representatividad de nuevas poblaciones de P.
infestans, predomin en las colecciones recientes en diferentes reas de Corea.
Una implicacin prctica de la migracin puede estar relacionada con la sensibilidad o
resistencia del patgeno al fungicida especfico de Oomycetes, Metelaxyl, cuya resistencia no fue
ampliamente distribuida entre los aislamientos que pertenecan a las poblaciones viejas,
indicando que el problema se debi a la migracin y seleccin de individuos resistentes, o por
una mutacin y seleccin de novo (Fry et al., 1993).
Estas observaciones son confirmadas por la FRAC (2002) que indica que al comienzo de la
estacin en Europa, los aislamientos sensibles al fungicida son mas abundantes, con un cambio
significativo al final de la estacin donde predominan los aislamientos resistentes. Igualmente en
Colombia se ha observado una mayor frecuencia de aislamientos resistentes a dicho fungicida en
los aislamientos de zonas con monocultivos de papa de variedades con un reducido nmero de
genes R.
4.8. Las Migraciones de 1980s: Mxico, Estados Unidos y Canad
Segn Fry y Goodwin (1995) hasta finales de los 1980s y comienzos de los 1990s, las
poblaciones de P. infestans en Estados Unidos constaban de un solo linaje clonal antiguo (US-1)
con el tipo de apareamiento A1 y unos pocos diferentes (US-6), pero la situacin fue cambiante
puesto que se encontraron poblaciones con el tipo de Apareamiento A2, en Pensilvania en 1987
y en Columbia Britnica en 1989, procedentes de tomate de la Florida, papa y tomate del Oeste
de Washington, y papa del Este de Washington con linajes clonales antes no observados en
Estados Unidos o en Canad, los cuales se denominaron US-7 altamente patognico en papa y
tomate y US-8 especialmente patognico en papa.
Para 1994 el genotipo US-8 de P. infetans fue el predominante en amplias zonas de cultivos de
papa en Estados Unidos y Canad, causando una de las epidemias mas severas en dicha regin,
por ser resistente al fungicida Metalaxyl, al igual que los genotipos US-6 y US-7, los cuales
fueron producto de una migracin clonal, dado que fueron inicialmente detectados en el Norte de
Mxico y su resistencia al fungicida fue previamente detectada en dicha zona. (Fry y Goodwin,
1995).
Para desarrollar una estrategia de manejo del patgeno, es necesario tener en cuenta la
capacidad de migracin de manera rpida a grandes distancias, como se observa por la presencia
de un solo clon en los extremos continentales de Estados Unidos. Es posible que operen varios
mecanismos de migracin, pero se sugiere que la nueva poblacin lleg del Noroeste Pacfico de
Mxico sobre tomates sembrados en la zona o en frutos de tomate infectados, los cuales fueron
comercializados en la zona continental de Estados Unidos.
La amplia y rpida distribucin de P. infestans, junto con el desarrollo de la resistencia al
Metalaxyl en dichas poblaciones, y los mecanismos diversos para el proceso de dispersin,
indican que para hacer un control eficiente se debe establecer un sistema de alerta, que permita
conocer de manera oportuna, las condiciones favorables para el desarrollo de epidemias.

20

4.9. Migraciones al Este de Asia

Fry y Goodwin (1995) opinan que las migraciones al Asia tuvieron caractersticas diferentes a
las migraciones a Europa, por cuanto slo se detectaron aislamientos de P. infestans con el tipo
de apareamiento A2 en 1989 en Japn y Korea, con un genotipo aloenzimtico y finger printing
del DNA, distintas a las de la poblacin nativa y con marcada resistencia al metalaxyl, la cual ha
venido sustituyendo a la poblacin originalmente establecida en dicha zona.
Segn Fry y Goodwin (1995) la poblacin nativa caracterizada por el tipo de apareamiento A1
y susceptible al metalaxyl, produjo oosporas con los aislamientos A2 introducidos bajo las
condiciones de laboratorio, las cuales no germinaron fcilmente, razn por la cual se considera
que la reproduccin sexual, ha tenido muy poco efecto sobre la estructura gentica de P. infestans
en el Este del Asia y por que no decirlo a nivel mundial.
4.10. Migraciones en Sur Amrica
Las colecciones en el Per realizadas por Abad (1983-1985) presentaron el linaje clonal
predominante a nivel mundial hasta entonces (US-1) con el tipo de apareamiento A1, con un
amplio rango de especies huspedes (107) que son afectadas de manera natural o artificial. Las
colecciones de Bolivia han sido reportadas como tipo A2 y con un solo linaje clonal, mientras en
Brasil se han detectado dos clones con tipo de Apareamiento A1 y A2 respectivamente y en
Argentina se descubrieron aislamientos con el tipo de apareamiento A2 ( Fry y Goodwin, 1995).
4.11. Una Nueva Migracin de Colombia al Ecuador
Reportes recientes de Forbes et al. 1997, indican que la estructura poblacional del patgeno P.
infestans en cultivos de papa en el Ecuador, est conformada principalmente (mas del 95%) por
un solo linaje clonal, EC-1, definido por anlisis de marcadores como las isoenzimas glucosa
fosfato isomerasa (Gpi 90/100) y peptidasa (Pep 96/100), el tipo de apareamiento A1 y una
dactiloscopia del DNA nuclear no reportada previamente.
Tales observaciones condujeron al grupo de Forbes a sugerir una hiptesis sobre la introduccin
reciente de un nuevo linaje clonal al Ecuador, que se estableci y desplaz el antiguo US-1(Gpi
86/100 y Pep 92/100), dando la idea de que esta poblacin proceda de Colombia, refutando la
hiptesis de que exista una barrera dentro del Ecuador, entre las poblaciones peruanas US-1
evaluadas en 1980s y una poblacin diferente que haba sido detectada posteriormente en
Colombia (Forbes et al., 1997). Posteriormente detectaron las poblaciones EC-2, EC-2.1 y EC-3
en especies solanceas silvestres las primeras y la ltima.
El grupo de investigacin del patosistema Phytophthora/Solanum de la Universidad Nacional
de Colombia, ha encontrado que los aislamientos colectados y evaluados entre 1995-2002,
exhiben caractersticas de las poblaciones EC-1 descritas por Forbes et al., 1997, como tipo de
apareamiento A1, los fenotipos de las isoenzimas Pep (96/100) y Gpi (90/100), resistencia al
fungicida Metalaxyl y los haplotipos mitocondriales II-a con mayor frecuencia en papa y I-b en
tomate.

21

CAPTULO III

CARACTERIZACIN POBLACIONAL
Los estudios poblacionales de Phytophthora infestans se iniciaron casi paralelamente con los
programas de mejoramiento de la papa, para buscar e incorporar la resistencia a este patgeno.
Existen marcadores moleculares, bioqumicos y fenotpicos que han posibilitado la identificacin
de aislamientos distintos en una poblacin, producto de un organismo que tiene la posibilidad de
reproducirse sexual y asexualmente, conduciendo a cambios en las poblaciones que pueden ser
introducidas a otras regiones por procesos de migracin.
Desde que se report el tipo de apareamiento A2 en el Oeste de Europa en 1984, se esperaba un
dramtico desarrollo de nuevas poblaciones del patgeno, lo que condujo a los patlogos a
realizar anlisis locales de las poblaciones, dado que el tipo A1 era el nico tipo de apareamiento
reportado fuera de Mxico, considerado como el centro de origen de P. infestans (Fry et al.,
1993).
Una poblacin se refiere a un grupo de individuos (aislamientos) de una misma especie que se
encuentra estructurada o delimitada por barreras geogrficas, por lo tanto, el primer indicio de
cambios importantes en la poblacin lo constituy la presencia del tipo de apareamiento A2. La
determinacin de los alelos isoenzimticos de glucosa-6- fosfato isomerasa (Gpi), enzima mlica
(Me) y peptidasa (Pep) proporcionaron la primera evidencia gentica de la diploida de P.
infestans y permiti hacer las primeras comparaciones de las poblaciones. Mas recientemente se
establecieron marcadores como la sonda G57 para huella del DNA nuclear y cebadores
especficos para la amplificacin del DNA mitocondrial.
Al comparar las poblaciones de Polonia de 1985-1991, con los 153 aislamientos colectados en
Holanda en 1989, se observaron
diferentes, aunque tuvieron en comn muchos alelos
isoenzimaticos y similitud en el perfil electrofortico del DNA nuclear. En contraste los
aislamientos de Rusia fueron muy similares a los de Polonia y Alemania, lo que indica que la
poblacin fundadora de Polonia migr con los vientos predominantes de Oeste a Este a travs de
Europa. Dicha poblacin tuvo mayor eficacia biolgica, rompiendo la resistencia a genes
especficos de una variedad local (Bronka), debido posiblemente a la recombinacin sexual, que
favoreci el desarrollo de los experimentos, patognicamente mas agresivos.
En las dos ltimas dcadas se han estudiado las poblaciones alrededor del mundo, para lo cual
se han evaluado miles de aislamientos, utilizando caractersticas fenotpicas (tipo de
apareamiento, virulencia/agresividad de
razas y sensibilidad a Metalaxyl), marcadores
bioqumicos (isoenzimas Gpi y Pep) y moleculares (RFLPs nuclear y mitocondrial y el anlisis
de finger printing usando la sonda RG57, PCR especfico para detectar el tipo de apareamiento
A1 con un cebador especfico para A1 y anlisis de ITS y microsatlites.
En algunas poblaciones de P. infestans, se pueden encontrar aislamientos diploides y
poliploides; por lo tanto los aislamientos diploides en su estado vegetativo, podran presentar
factores heterocigticos que gobiernan la expresin fenotpica, de tal forma que en los
cromosomas homlogos se pueden presentar alelos dominantes y recesivos en un solo gen. Esto
22

explica por qu en ciertas mutaciones que generan resistencia a un fungicida, (Metalxyl), la

expresin de la resistencia est condicionada por uno o dos genes (ver texto de la FRAC, GISI
2002) con dominancia incompleta.
La utilizacin de marcadores de resistencia a fungicidas permite determinar si se da o no una
recombinacin de factores genticos, que puede resultar de la ocurrencia de procesos sexuales
que involucra cambios en el DNA nuclear o a nivel del DNA mitocondrial en el caso de la
reproduccin asexual.
1. Tipo de apareamiento
Ha sido un factor importante en la variacin de las poblaciones, aunque el tipo de apareamiento
y sus marcadores no presentan una segregacin mendeliana, es posible establecer los del tipo A1
por la tcnica basada en PCR con un primer especfico, la cual establece una regin S1
adyacente al locus del tipo de apareamiento A1 (Lee et al, 1997).
El tipo de apareamiento A2 tiene gran tendencia a la autofertilizacin (96%, n=47), mientras
que A1 es escasa ( 6%, n=69). Smarth, (2002). Prez et al., (1997-1998) evaluaron 287
aislamientos de Puno y Cusco en el Per, observando que ninguno presentaba el tipo de
apareamiento A2, tanto por ausencia de oosporas en cruces con un aislamiento testigo
previamente caracterizado como A1, como por la tcnica de PCR con primers especficos, la cual
puede estar relacionada como un signo o consecuencia de anormalidades estructurales
adicionales, cercanas a dicha regin y que podran ser responsables de la segregacin no
mendeliana del tipo de apareamiento ( Judelson, 1996).
El locus S1 fue previamente identificado por Judelson et al ., (1995) muestra una secuencia
monomrica de 1,35 Kb que evolucion por repeticiones sucesivas a 300 Kb y que es bien
conservada en el estado hemicigtico del tipo A1: Esta tcnica ha sido utilizada por Gilchrist
(2001) y Caldern y Castro (2002) para la determinacin del tipo de apareamiento de
aislamientos colombianos de P. infestans.
Varios investigadores han venido evaluando los tipos de apareamiento presentes en diferentes
pases. Shaw et al. (1985), opinan que el tipo de apareamiento A2 pudo haber estado presente,
pero no se detectaba por bajas frecuencias, en diferentes pases por fuera de Mxico durante
varios aos. Garca et al., (2000) encontraron al noroeste de Mxico que el tipo de apareamiento
predominante en 1994-1995 fue el A2, el cual estaba prcticamente desaparecido en 1996-1997.
La presencia de ambos tipos de apareamiento de manera simultnea slo se observ en unos
pocos campos donde crecan simultneamente papa y tomate.
Spielman et al., (1991) caracterizaron por diferentes juegos de alelos los aislamientos de los
pases que tenan estrictamente el tipo de apareamiento A1 y los que incluan ambos tipos de
apareamiento. En las colecciones estrictamente A1, se encontraron los alelos Gpi (86 y 100) y
Pep ( 92 y 100), las cuales fueron procedentes de Estados Unidos/Canad, Holanda entre 19511978, Polonia entre 1985-1987, Per 1989, dos aislamientos de Suiza, cinco de UK y fueron
designados como genotipos viejos.
En las colecciones con ambos tipos de apareamiento (excepto Japn) no se observaron los
alelos Gpi 86 y Pep 92 o fueron menos frecuentes, pero se presentaron dos alelos adicionales Gpi
23

90 y Pep 83, cuyos genotipos fueron Gpi 90/100 o 100/100 y Pep 83/100 o 100/100 o en
combinacin con los genotipos del primer grupo. La reproduccin fue predominantemente
asexual en dichas poblaciones.
En el Japn cada tipo de apareamiento estuvo fuertemente asociado con un genotipo diferente,
el A1 con condiciones heterocigotas: Gpi 86/100 y Pep 92/100 y el A2 homocigoto con Gpi:
100/100 y Pep 100/100, aunque la muestra no fue representativa, pero parece que est
conformada por individuos de nuevas y viejas poblaciones.
Es as como en Estados Unidos y Canad, se tomaron aislamientos de campos de cultivos de
papa y tomate entre 1983-1989 a los cuales se les determin el tipo de apareamiento por cruces
en medios de habas, avena y granos de arroz. Se cruzaron consigo mismos y con aislamientos ya
conocidos como del tipo de apareamiento A1, procedentes de Mxico (A1 y A2), Estados Unidos
y Europa. Un aislamiento A2 de Mxico, junto con un aislamiento de Vancouver (A1) y otro de
Pensilvania (A1), presentaron formacin de oosporas en 15 das. Las pruebas de patogenicidad
mostraron que dichos aislamientos producan sntomas tpicos de tizn tardo en hojas y tallos,
con virulencia similar a la de los aislamientos con tipo de apareamiento A1. Al mezclar
esporangios de A1+A2 produjeron oosporas en los tejidos del husped de color marrn ms
oscuro que las formadas in vitro, lo que sugiere la posibilidad de formacin de oosporas en el
campo. (Dehal, et al.,1991).
Drenth (1994) seala la presencia del tipo de apareamiento A2 en 22 pases incluido Mxico
pas en el cual se report desde 1956. Fry et al., (1993), sealan la presencia del tipo de
apareamiento A2 en Colombia, en 1990. Sin embargo, en las evaluaciones que se han realizado
por los grupos de investigacin de la Universidad Nacional de Colombia sedes Bogot y
Medelln, sobre este patgeno, no se ha detectado la presencia del tipo A2, lo cual no es
descartable si se ampla el muestreo a otras especies y zonas ecolgicas.
Sujkouski, et al., (1994) evaluaron los cambios genticos en la poblacin de P. infestans de
Polonia entre 1985-1990 y encontraron que los aislamientos colectados entre 1985-87,
presentaban slo el tipo de apareamiento A1, que constaba de un slo linaje clonal dominado por
el genotipo PO-1, basados en las aloenzimas y las huellas del DNA determinadas por la sonda
RG57, con genotipos idnticos a los de la poblacin predominante en 1980s, en los diferentes
pases por fuera de Mxico, pero la cual desapareci despus de 1988, como un posible resultado
de la introduccin inicial de P. infestans a Europa en 1845.
La aparicin del tipo A2 en Polonia, se detect a partir de 1988, con un nuevo genotipo (PO-4),
posiblemente introducido por una migracin y se increment la frecuencia hasta 1990,
alcanzando casi el 50% de los aislamientos colectados. Para 1991, el genotipo PO-4 slo
representaba el 12%. Sin embargo, a partir de los aos 1990s se present una gran diversidad de
genotipos nicos (69%) que correspondan al 39% de la poblacin muestreada, lo que indica el
aporte de la recombinacin gentica, debido a la posible reproduccin sexual, pero no hubo
diferencia gentica entre los aislamientos A1 y A2 (Sujkouski, et al., 1994).
En las oosporas obtenidas por cruces A1xA2 in vitro, en japn y Korea (Fry y Goodwin, 1995),
se han tenido dificultades para hacerlas germinar y las que lo han logrado como se observ en el
Ecuador, no fueron patognicas al husped parental ( Oliva, et al 2002), lo que indica que la
reproduccin sexual, no es un mecanismo imprtate en la patogenicidad de P. infestans.
24

Por otro lado, Miller y Johnson (2000), al inocular y llevar al campo plantas de papa, con la
misma cantidad de lesiones de tizn producidas por US-1 y US-8, no encontraron oosporas en los
tejidos lesionados, las cuales s fueron observadas en cruzamientos en el laboratorio, pero no
detectaron evidencia de recombinacin de genotipos, por el sistema de huellas digitales por
RFLP, mantenindose la diferencia de cuatro bandas entre el genotipo US-8 y US-1.
Sin embargo, observaron cambios a nivel de isoenzimas, los cuales no siempre se presentan
(Shattock, et al.,1987, citados por Miller y Johnson, 2000), que sugieren la posibilidad de una
recombinacin meitica por autofertilizacin de US-8 inducida por la cercana de US-1, dando
origen a una solo oospora que puede continuar su multiplicacin asexual.
Las poblaciones viejas del Noroeste y Este de Europa han sido desplazadas por la diversidad
gentica derivada de la reproduccin sexual de P. infestans, evidenciada por la mezcla de
poblaciones A1/A2, tambin presentes en importantes regiones productivas de papa y tomate en
Asia y posiblemente en frica y Sur Amrica (Flier, et al. 2002).
No ha sido posible responder si las viejas poblaciones vienen siendo reemplazadas por las
nuevas, debido a una migracin (Fry et al., 1993, citado por Knapova, et al.,2002) o por la
ocurrencia local de la recombinacin sexual (Drenth et al ,1994, cit por Knapova et al, 2002), la
cual algunos investigadores han tenido dificultad de obtener en condiciones in vitro y otros bajo
condiciones de campo. Miller y Johnson (2000) indujeron ms fcilmente la formacin de
oosporas en el laboratorio que en el campo al igual que Oliva et al., (2002)
En el Per no ha sido reportado el tipo de apareamiento A2, aunque, Prez et al., (1997-1998),
reportan cinco poblaciones, incluida la US-1, la cual es la mas antigua con distribucin mundial.
Esto indica que el cambio de las poblaciones no se debe a la recombinacin sexual, pues en el
Ecuador, donde existen ambos tipos de apareamiento, Oliva et al., (2002) no lograron la
formacin de oosporas patognicas a las especies parentales de los aislamientos A1 vs. A2.
Oyarzn et al., (1998) opinan que en el Ecuador las poblaciones estn separadas por huspedes
y en Colombia Gilchrist (2001) observ diferencias por haplotipos mitocondriales, en los
aislamientos procedentes de papa frente a los aislamientos de tomados en otras especies
huspedes.
2. Razas Fisiolgicas
El desarrollo de patotipos o razas fisiolgicas, fue posible a partir de los aos 1950s, cuando
Black et al, (1953) desarrollaron una serie de clones de papa diferenciales a partir de la especie
mexicana Solanum demissum con genes de resistencia vertical a Phytophthora infestans, los
cuales son utilizados mundialmente para la caracterizacin de las razas y la determinacin de los
genes que confieren la resistencia, con base en la respuesta de compatibilidad de los aislamientos
con los clones diferenciales.
Abad, (1983) encontr la mayor especializacin de razas del patgeno y alta frecuencia de
patotipos no slo en papa, sino en tomate y pepino en los cuales determin los genes para
virulencia 1,2,3,4,7,10 y 11, en las razas 1.3.7 y 2.4.10.11 y Turkesteen (1997) seal que el
pepino es portador de la raza especializada 1.4.10.11, la cual es altamente patognica a papa,
mientras que la raza 0, no esporula en dicha especie.
25

Prez et al., (1997-1998) evaluaron 114 aislamientos procedentes de Puno y Cusco al sur de
Per y encontraron un aislamiento que infectaba 10 clones diferenciales, excepto el R9. En
Colombia en el oriente de Antioquia, se han evaluado aislamientos con igual cantidad de
diferenciales afectados, excepto el R5. Esto demuestra la complejidad de virulencia de los
aislamientos en ambos pases, la cual se ha venido incrementando, pues segn Abad en 1983, la
raza mas compleja afectaba 7 diferenciales.
En Colombia, para 1995 (Mazo y Patio, 1995) reportaron que el 57% de la poblacin evaluada
infectaba 7 clones diferenciales (tabla 1), mientras que para la coleccin realizada en 1997-98,
(Marn y Mira,1998), reportaron la mayor frecuencia de los aislamientos colectados con 10 genes
de virulencia (tabla 2).
Gisi et al., (1995) en Suiza, encontraron 11 patotipos (razas fisiolgicas) con 3,4,5,6,7 y 8
genes de virulencia. El 65% de los aislamientos evaluados, presentaron los genes de virulencia
1,3,4,7,10 y 11. Se observ que los aislamientos con menos genes de virulencia (5 y 6)
presentaron el mayor porcentaje de resistencia a las fenilamidas, lo que indica que no hay una
relacin directa entre la resistencia a fenilamidas y la complejidad del patgeno, mientras que
Prez et al., (1998) en el Per observaron mayor resistencia en los aislamientos con mas genes de
virulencia.
Tabla 1. Frecuencia de razas fisiolgicas de Phytophthora infestans colectadas en el
departamento de Antioquia, Colombia, entre 1994-1995. Mazo y Patio,1995, Lpez et al,1997.
Aislamiento
Patotipo
N octal
P. infestans
U1, U2, C4, G5
1-2-3-4-7-10-11
7446
E9, E10, SP11, SP12, ER13,
1-3-4-7-10-11
5446
SR14, SR15, UN6, SS16, SS17
U3, UN3, UN8
1-2-3-4-7-8-10-11
7466
SV7
1-2-3-4-6-7-10-11
7546
P18
3-4-7-10-11
1446
T19
1-2-3-7-10-11
7046

Factores de
virulencia
7

Frecuencia
(%)
55.5

15

8
8
5
6

15
5
5
5

P= pepino (Solanum muricatum), T = tomate (Lycopersicon esculentum). U,G,SP,C,ER;SS, UN,SV,E= papa

distintas variedades

La variedad mas cultivada Bintje fue la mas muestreada y la vez la que present el mayor
nmero de patotipos (9 de los 11 presentes). Los genes de virulencia mas frecuentes fueron de
mayor a menor frecuencia: 4; 1=3; 7=10=11; 6; 8; 2 y 5. El gen de virulencia expresado en el
diferencial R4 estuvo presente y en el R4 siempre estuvo ausente. Cabe resaltar que Bintje es una
variedad susceptible en la cual se observ que aislamientos simples (IPO-O raza 0) y complejos
(90128, raza compleja) rpidamente mostraron una reaccin biotrfica (Vleehouwers et al, 2000).
Sujkowski et al., (1994) sealan que antes de los 1970s, las poblaciones de P. infestans
desarrollaron poca virulencia para las variedades de papa que posean los genes R7, R10 y R11,
lo cual fue muy comn, luego de los aos 1980s. Spielman et al., (1990), evaluaron el efecto de
la descendencia F1 del patgeno frente a los genes R2 y R4 de la papa y observaron que la
virulencia contra R2 est controlada por un solo locus, mientras que la virulencia contra el R4,
puede estar determinada por uno o dos locus.
26

Segn Schber-Butin, et al., (1995), en Alemania se observ que para los 1950s solo se
presentaban dos patotipos de P. infestans denominados como 0 y 1, para los 20 aos siguientes se
presentaron los patotipos 0, 1, 4, 1.4, 1.2.3.4 y 1.3.4 presentndose hasta 4 genes de virulencia.
Aunque Spielman et al., (1991) indican que los cultivares haban tenido los mismos genes R1,
R3, R4 y R10 durante dicho perodo.
En los aos 1980s se presentaron 7 razas una de las cuales present 7 genes de virulencia y en
todas se destaca la presencia del gen 1 y prevaleca los genes 3 y 4, lo que demuestra el
incremento en la complejidad del patgeno a travs del tiempo en Alemania, lo que condujo a
evaluaciones mas frecuentes. A partir de los aos 1985, se not un incremento en el nmero y
complejidad de patotipos del patgeno (20), llegndose a observar un patotipo con nueve genes
de virulencia, con ausencia de los genes 6 y 9 (Schber-Butin, et al.,1995).
Condiciones similares han sido observadas en aislamientos procedentes del Departamento de
Antioquia Colombia, (Mazo y Patio, 1995; Lpez et al.,1997) en donde slo han estado ausentes
los genes 5 y 9, tabla 1. El patotipo mas frecuente (55.5%) segn la nomenclatura octal
(Goodwin et al., 1995) fue el 7446 con 7 genes de virulencia.
En los 20 aislamientos evaluados por Mazo y Patio (1995) siempre se presentaron los genes de
virulencia 10 y 11, el gen 6 slo se present en un patoptipo de los seis establecidos, los cuales
presentaron entre 5 y 8 factores de virulencia (tabla 1), con un promedio de 6.6, valor superior a
los registrados en el mundo, segn Fry y Spielman (1991), que en orden descendente
corresponden al valle de Toluca, Mxico con 5,6 factores de virulencia, como promedio de 16
aislamientos evaluados, Holanda con 4,1/14, Reino Unido 3,7/61, Per 1,0/33 y USA-Canad
1,9/14. El denominador indica el nmero de aislamientos evaluados.
Los aislamientos colectados dos aos despus mostraron una mayor complejidad en zonas con
monocultivos de papa, presentando slo ausencia del gen 5, mientras que en zonas de mayor
diversificacin de cultivos o especies silvestres, se presentaba un mayor nmero de razas
fisiolgicas, pero menos complejas o virulentas por el menor nmero de genes compatibles con
los clones diferenciales, como en el tomate segn se muestra en la tabla 2 (Marn y Mira, 1998).
En dicha investigacin se detect el gen de virulencia 9 que no haba sido detectado en los
aislamientos evaluados por Mazo y Patio (1995) y el 38% de los patotipos correspondieron a la
mayor complejidad (10 y 9 genes de virulencia) tomados de papa y pepino de agua, mientras que
los aislamientos procedentes de tomate, pimentn, papa criolla y uno de papa Diacol Capiro,
presentaron 5 o menos factores de virulencia, incluso un aislamiento de tomate slo presentaron
compatibilidad con la variedad Alfa de papa, que no presenta genes mayores de resistencia al
patgeno.

27

Tabla 2. Frecuencia de razas fisiolgicas de Phytophthora infestans colectadas en el

departamento de Antioquia, Colombia, entre 1997-1998. Marin y Mira, 1998.
Aislamiento
P. infestans
A13, B12, B14
B21, D22, 20E, A3, B6, D9
B11, D23, A7, B13
A1
A5
B1
B4
B7
B9
B15
B16
B18
B19
C2
D3
D26
D11
E4
D19

Patotipo

N octal

1-2-3-4-6-7-8-9-10-11
1-2-3-4-7-8-9-10-11
1-2-3-4-7-8-9-10
1-3-4-7-8-9
1-2-3-4-6-7-8-9-10
1-3-7-9-11
3-4-6-7-9-10-11
3-4-7
3-7
1-2-3-4-6-7-8-10-11
3-4-7-10-11
1-3-4-6-7-10-11
3-4-6-7-8-9-10
3-7-10-11
1-3-4-6-7-8-9-10-11
0
3-9
1-3-4-7
1-2-3-4-7-8-10-11

7576
7476
7474
5470
7574
5052
1556
1410
1040
7566
1446
5546
1574
1046
5576
0000
1010
5440
7466

Factores de
virulencia
10
9
8
6
9
5
7
3
2
9
5
7
7
4
9
0
2
4
8

Frecuencia
(%)
20.7
17.24
6.9
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44
3.44

B1=Pimentn (Capsicum sp.)

C2, D26, D11=Tomate(Lycopersicon esculentum) D3 D22=Pepino (Solanum
muricatum). Las restantes son diferentes variedades de papa.

Forisekov et al (2002) evaluaron la presencia de razas de P. infestans en el laboratorio y

campo, observando el incremento en los factores de virulencia, a medida que va pasando el
tiempo, pues para los aos de 1996-1997 los aislamientos tuvieron mximo 6 factores de
virulencia, con ausencia de respuesta compatible en los diferenciales R2; R5 y R11. Para 19992000, se confirm la presencia de aislamientos con compatibilidad hasta con 10 diferenciales,
especialmente al final del periodo vegetativo, al igual que las observaciones de Mazo y Patio
(1995), Marn y Mira (1997), Jaramillo y Gilchrist (2002) en Antioquia Colombia. Dichos
investigadores, no han observado el diferencial R5 afectado en invernadero y/o campo y con
compatibilidad pero poco agresiva sobre el R9.
La variedad ALVA altamente resistente a gota, fue completamente destruida en 1999, cuando el
gen presente en el diferencial R2 apareci al comienzo de la estacin, pero cuando surgi al final
de la estacin, la variedad permaneci sana hasta ese momento. Los investigadores opinan que
dicho gen (R2) puede estar asociado con la prdida de la resistencia en la variedad Alva a travs
del tiempo (Forisekov et al., 2002).
En Bangladesh, Hossain et al., (2002) observaron que de un alto nmero de progenies y
variedades de papa evaluadas, slo tres clones del CIP (CIP-607, CIP -272 y CIP-616) mostraron
tolerancia al tizn tardo y se identificaron 18 razas simples y complejas del patgeno con
frecuencia variable, siendo el gen R2 el de mayor ocurrencia. A la vez observaron aislamientos
de P. infestans con resistencia al metalaxyl, razn por la cual recomiendan hacer mezclas con
28

otros fungicidas y otras prcticas culturales que conduzcan a evitar el desarrollo de dicha
resistencia. Resaltan la eficacia de las escuelas de campo.
Abad (1983) encontr la mayor diversidad de razas (13) en la Sierra Peruana, donde existe la
mas alta complejidad de especies huspedes de P. infestans, mientras en la Costa (5 razas) y la
Ceja de Selva (4 razas) la cantidad de razas fue mucho menor y son las zonas donde se hace una
produccin mas intensiva de la papa, con pocas variedades. En el muestreo realizado por Prez
et al., (1997-98) en Puno y Cusco, encontraron 18 razas diferentes, con alta frecuencia de
patotipos mas complejos (mayor nmero de clones diferenciales afectados) agrupados en 5
linajes clonales, mayor agresividad patognica y resistencia a Metalaxyl.
Esto da indicios de los mecanismos de variacin del patgeno (parasexualidad, heterocariosis,
mutaciones puntuales) cuando se somete a fuertes aplicaciones de fungicidas, poca diversidad de
especies huspedes, cultivos permanentes de papa en el campo con variedades cuya resistencia se
ha venido perdiendo, lo que se considera (Van der Plank, 1968, citado por Abad, 1983), la
seleccin estabilizante del patgeno.
Vale la pena destacar que en tomate variedad chonto procedente del Peol a 1.900 msnm, la
cual es una zona dedicada al cultivo del tomate y el pimentn, se observ una reaccin de
hipersensibilidad para los diferenciales R4 y R1, lo que indica una tpica reaccin de resistencia
como lo expresa Vleehouwers, et al. (1999) y una compatibilidad con la variedad Alfa, la cual
no posee genes de resistencia al patgeno. Se colectaron 12 muestras con sntomas similares a
los de gota en fololos de pimentn (Capsicum annum), pero slo el aislamiento B1 procedente
de plantas de esta especie cultivadas en Marinilla a 2.105 msnm, esporularon en rodajas de papa
y se reconocieron con 5 clones diferenciales de papa, correspondientes a los genes R1, R3, R7,
R9 y R11.
Hasta el presente slo se ha reportado gota en las hojas del pimentn rojo en Estados Unidos
(Cox, 1948, citado por Erwin y Ribeiro, 1996). Es conveniente hacer un seguimiento cuidadoso a
los cultivos de esta especie en la zona, dado que los agricultores vienen aplicando molculas
activas como Clorotalonil, Metalaxyl y Mancozeb, contra dicho patgeno, lo que da indicio de
que pueda existir sta u otra especie de Phytophthora como P. capsici, P. cactorum,
P.citrophthora o P. palmivora, reportadas en otros pases como patgenas del pimentn, porque
afectan las plntulas y los frutos pero ninguna de las cuales se ha registrado en dicha zona.
Segn Smart et al., 2000, han sido mapeados varios genes R en S. demissum. As R-1 en el
cromosoma 5; R-2 en el cromosoma 4; R-3; R-6; R-7 en el cromosoma 11 y recientemente se ha
encontrado un nuevo gen R en Solanum berthaultii en el cromosoma 10. En tomate se encontr
el gen Ph-1 en el cromosoma 7 y Ph-2 en el brazo largo del cromosoma 10. Los mapas genticos
de papa y tomate son colineales
La regin del cromosoma de P. infestans que contiene el grupo de genes Avr (avirulencia) est
presente en un estado hemicigtico, al igual que el locus para el tipo de apareamiento y otros loci
del genoma. Las regiones hemicigticas incrementan variabilidad y pueden conducir a la prdida
espontnea de caracteres fenotpicos particulares, como lo observ Al kherb et al., (1995) (cit por
Van der Lee et al., 2001a), quien descubri un cambio repentino en la virulencia de la raza 1.4 a
1.3.4.7.11 en uno de los parentales luego del almacenamiento en nitrgeno lquido.

29

Abad (1983) observ que algunos aislamientos de papa con razas 1.3.7, 10.11, 1.11 y 0 al ser
pasados por pepino, tomaron la raza 1.4.11, 1.2.4.11, 1.4.10.11 y 1.4.11, pero no se manifestaron
los genes 3 y 7, mientras que los patotipos de papa se adaptaron mas rpidamente en pepino,
presentando razas complejas al igual que para papa, dando indicios de la adaptacin del patgeno
no slo para atacar un husped, sino para originar nuevas razas ms complejas. Sin embargo, en
tomate y S. dulcamera, fue necesario realizar varias inoculaciones sucesivas o transferencias (al
menos 3-4) para lograr la adaptacin y esporulacin del patgeno.
Esto podra deberse a deleciones espontneas de los genes Avr. Adems en aislamientos del
linaje clonal US-1, se encontraron deleciones en el locus M 5.1, lo que soporta la hiptesis de la
inestabilidad de dicha regin. La posicin del telmero, el estado hemicigtico y el alto nmero
de fragmentos repetidos en el cromosoma, puede resultar en la tasa mas alta de mutaciones, para
los genes localizados en esta regin. (Van der Lee et al, 2001a)
3. Mtodos Moleculares para la Caracterizacin de las Poblaciones
Hasta el presente se han desarrollado varios mtodos moleculares para la caracterizacin de los
aislamientos de Phytophthora infestans, con diferentes grados de polimorfismo, los cuales se han
ido desarrollando y cada vez presentan una mayor posibilidad de discriminar los cambios en los
aislamientos por pequeos que sean.
Los marcadores moleculares son herramientas tiles para establecer o confirmar las hiptesis de
que las migraciones de P. infestans en el ltimo cuarto de siglo, fueron las responsables de
desbordar los problemas de gota (tizn tardo) en muchas partes del mundo, por la resistencia al
metalaxyl, entre otros factores (Fry y Goodwin,1997a, citado por Smart et al., 2002).
Los estudios que involucran marcadores moleculares, han dado la posibilidad de detectar
nuevos tipos de especializacin patognica y han sido de gran ayuda para una mejor definicin
del concepto de linaje clonal, el cual se refiere a un grupo de individuos descendientes
asexualmente de un ancestro comn, pero los cuales pueden diferir entre si debido a la ocurrencia
de mutaciones. (Anderson y Kohn, 1995 cit Smart, et al 2002).
Los individuos dentro de un linaje clonal son probablemente mas parecidos que los no
relacionados, cuyas poblaciones son simples y clonales, con preferencia por un husped (Smart,
et al 2000), situacin observada en las investigaciones del Laboratorio de Estudios Moleculares
de la Universidad Nacional de Colombia, sede Medelln. (Botero y Gilchrist, 1998; Jaramillo y
Gilchrist, 2002).
3.1. Patrones de Electroforesis de Protenas Totales
Las protenas extradas del micelio de los aislamientos de Phytophthora se mueven a diferente
velocidad, a travs de la matriz de un gel de almidones o poliacrilamida en un campo elctrico.
Se utilizan como evidencia de una especie, pero dependen de condiciones del ambiente o del
control del desarrollo, razn por la cual no son necesariamente constantes.
Segn Spielman et al., (1990) citado por Erwin y Ribeiro (1996), se han probado alrededor de
50 sistemas de enzimas diferentes en P. infestans, utilizando diferentes mtodos de extraccin,
30

buffers, condiciones de corrido y coloracin, para lograr las mximas resoluciones de las cuales
11 enzimas resultaron monomrficas y 18 polimrficas, la mayora ha presentado resolucin muy
pobre o genticamente tan complejas, no es posible deducir los genotipos de los patrones
electroforticos observados
3.2. Patrones isoenzimticos (Aloenzimas)
La isoenzima es una variante de una enzima que comparte la misma funcin cataltica en el
metaolismo celular. Las aloenzimas, son isoenzimas cuyas variantes son codificadas en el mismo
locus. Las aloenzimas tambin son allicas, por lo tanto son ideales para investigar poblaciones,
porque los mejores mtodos analticos dependen del conocimiento de las frecuencias y
distribuciones allicas (Spielman 1991, citado por Erwin y Ribeiro 1996).
Las isoenzimas se utilizan para identificar la diversidad gentica dentro de poblaciones de
organismos: Se considera que los patrones de bandas isoenzimticas son menos complejos que
los de protenas totales y se pueden diferenciar e interpretar mas rpidamente, adems son
estables, codominantes y generalmente estn bajo control gentico simple.
En el estudio de poblaciones normalmente se utilizan enzimas monomricas o dimricas, ya
que las polimricas, son difciles de observar en cruces, puede haber mas de un locus que codifica
para la enzima y no se puede determinar que alelo pertenece a cual locus. En el caso de las
enzimas monomricas, el producto gentico es la unidad de la enzima activa, as que las
homocigotas presentan una banda y las heterocigotas presentan dos bandas.
En las enzimas dimricas, los productos genticos iniciales son inactivos.
La actividad
enzimtica solo se presenta, cuando se unen dos productos o subunidades de un solo gen. Las
subunidades se combinan al azar, si se presentan dos clases diferentes, como podra ser el caso en
heterocigotas, se forman tres clases de molculas enzimticas activas: dos homodmeros
diferentes y un heterodmero. As que las homocigotas tienen una sola banda pero las
heterocigotas poseen tres bandas.
Solo se ha presentado buena resolucin para las isoenzimas glucosa fosfato isomerasa (Gpi) y
peptidasa (Pep), las cuales tienen control gentico simple, con alelos mendelianos y fueron
polimrficas para las poblaciones que se reproducen sexual y asexualmente (Tooley, et al., 1995).
Tanto Gpi (siete alelos) como Pep (cinco alelos), producen patrones de bandas sobre geles tpicos
de enzimas dimricas y si se cruzan parentales diferentes con una solo banda (homocigota), se
obtiene una progenie con tres bandas heterocigotas. Si dos heterocigotos idnticos se cruzan, se
observan tres clases de progenie (1 homocigota: 2 heterocigota: 1 homocigota). Si una
heterocigota es cruzada con una homocigota, se presentan los mismos dos genotipos en la
progenie en igual proporcin. Algunas veces ocurren clases inesperadas en baja frecuencia por
autocruzamiento. (Spielman et al., 1990).
Castaeda y Morales (1996) evaluaron varios aislamientos madres y sus monospricos
procedentes de cultivos de papa ubicados en el departamento de Antioquia, Colombia para Pep,
en el buffer de Robinson para la extraccin y un buffer de electrodo tris-borato a pH 9, sin
observar polimorfismos, lo que indica la homogeneidad de estos aislamientos a este nivel.

31

En una investigacin preliminar (Castaeda y Morales,1996) se observ que la y Esterasa

mostraron polimorfismo en dos aislamientos de Phytophthora infestans tomados de pepino
(colectado en Rionegro, Antioquia), la variedad ICA Cumanday de papa (San Pedro, Antioquia),
en comparacin con uno de P. parasitica de tabaco (Nicotiana tabacum) proporcionado por el
Centro de Investigacin y Desarrollo Tecnolgico de COLTABACO, Colombia, lo que indica
que puede ser til en estudios de caracterizacin inter e intraespecficos.
Benavides et al, 2002, en una investigacin realizada en el laboratorio de Estudios Moleculares
y repetida en El CIP, sede Quito, evaluaron 54 aislamientos colectados en cultivos de papa, de
diferentes municipios del departamento de Nario (al sur de Colombia), en los lmites con
Ecuador para le enzima Pep (peptidasa) en un gel de poliacrilamida, observando que al igual que
los aislamientos del departamento de Antioquia y los aislamientos testigo del Ecuador ( EC-1),
presentaban tres bandas, que representaban los alelos 96 y 100, correspondientes a una poblacin
monomrfica heterocigota, con un genotipo 96/100 .
Gonzlez y Garca (1998) evaluaron 84 aislamientos procedentes del altiplano Cundiboyacense,
los cuales presentaron el tipo de apareamiento A1, con fuerte heterotalismo y ninguno present
autofertilidad. Los valores para la Ec50 fueron mayores a 200 ppm, lo que indica una fuerte
presin de seleccin posiblemente por el uso inadecuado de los fungicidas. Al parecer hay
posible efecto de seleccin sobre el tipo de variedad y las cepas del patgeno, dado que se
observ una asociacin de la variedad con la sensibilidad del patgeno al metalaxyl. Resultados
similares fueron observados por Argel (2002) con la evaluacin de aislamientos procedentes de
dicha zona, colectados dos aos despus, los cuales presentaron una mayor proporcin de
resistentes, frente a los de sensibilidad intermedia y sensibles.
Shattock et al. 1986 a,b citados por Erwin y Ribeiro 1996, determinaron que las caractersticas
isoenzimticas, fueron inherentes a la progenie de oosporas del cruce sexual entre parentales
A1xA2 y la ocurrencia de la hibridacin. Spielman et al,1989, 1990, 1991, utilizaron las
isoenzimas como marcadores de la distribucin geogrfica de tipos de P. infestans y encontraron
que los alelos Gpi 83, Gpi 98 y Pep 83, se presentaron nicamente en aislamientos del Centro de
Mxico, y en frecuencias bajas a moderadas. Los alelos Gpi 90, Gpi 111 y Pep 96, se
encontraron en aislamientos de fuera del Centro de Mxico.
Garca et al., (2000) encontraron en el Valle del fuerte noroeste de Mxico que los aislamientos
de 1995, presentaron preferencialmente el apareamiento A2 y los patrones aloenzimticos Gpi
100/111 y 100/100 y Pep 100/100 en todos los casos encontrados tanto en papa como en tomate.
Para 1996 la poblacin muestreada fue prcticamente A1, con los patrones aloezimticos Gpi
100/111, 100/122 y 111/122 y para Pep 100/100 excepto uno con 92/100. En 1997 slo se
detectaron A1 con patrones isoenzimticos Gpi 100/122 y 100/100 y papa Pep 100/100 y 92/100,
con respuestas variables frente al metalaxyl. La reproduccin fue bsicamente asexual y las
variaciones se debieron a la introduccin con los tubrculos de papa.
Los 26 aislamientos de P. infestans colectados en Ecuador en S. brevifolium y S. tetrapetalum,
caracterizados como pertenecientes al tipo de apareamiento A2 (Ordoez et al, 1998) y unos
pocos patognicos de papa y tomate, presentaron un patrn de bandas Pep de 83/100, el cual fue
diferente al de los aislamientos tomados de tomate 92/100 y papa 96/100. Para Gpi todos los
aislamientos presentaron un patrn de 100/100 , mientras que en los de tomate fue de 86/100, con
un haplotipo I-b y un tipo de apareamiento A1 (Oyarzn et al.,1997).
32

En 1990, Spielman et al., citado por Erwin y Ribeiro,1996, encontraron que los aislamientos de
P. infestans pudieron haberse caracterizado por aloenzimas como las poblaciones viejas (antes
de que se hubiese encontrado el tipo de apareamiento A2 por fuera de Mxico) y las nuevas
poblaciones, (despus de que A2 se report por fuera de Mxico). Cada poblacin fue nica para
los alelos aloenzimticos y genotipos. Concluyeron que el cambio de la poblacin en Europa, fue
probablemente el resultado de la migracin de nuevos biotipos y no de una mutacin. Se han
realizado varios estudios de migracin de poblaciones desde Mxico a otras partes del mundo,
utilizando las caractersticas isoenzimticas (Fry et al.,1991, Goodwin et al., 1994, Fry y
Goodwin, 1995).
3.3. Anlisis del Producto de la Trascripcin (Northern blot) y la
Traduccin (Southern blot)
Estos sistemas son utilizados para determinar la resistencia que puede ser transmitida a las
plantas por los genes R, mediante la extraccin del DNA de hojas de plantas solanaceas digeridos
con la enzima EcoV5 seguida por la electroforesis, cuyo producto fue transferido a una
membrana Hybon-N+ para la hibridacin con varias sondas.
Para el anlisis de expresin, la tercera, cuarta y quinta hojas completamente desarrolladas de
plantas sanas no inoculadas fueron cosechadas y guardadas en Nitrgeno lquido. Se realizaron
dos series independientes de RNA. Cada muestra de 15 g de RNA fue cargada para la
electroforesis y luego tansferida a una membrana Hybon-N+. Tanto el Northern blot como el
Southern blot se hibridaron a la par con las sondas que representaban los genes PR-1, PR-2 y PR5 y tubulina a 65, 60, 60 y 65C respectivamente y fueron lavadas 1, 0.5, 0.5 y 1xSSC
rigurosamente. Los niveles de mRNA fueron determinados del Northern blots utilizando un
analizador Fuji Bio-Imaging. Las seales fueron cuantificadas por un estmulo fotoluminiscente
(PSL) por mm2 (Vleeshouwers et al., 2000).
Las sondas utilizadas para la deteccin de los genes arriba sealados fueron: un fragmento de
400 bp Eco R-I/KpnI de StPR-1, un clon PR-1 cDNA de papa, un fragmento de 1.300 bp Eco RI/Xho1 de un clon c DNA de una glucanasa cida de tomate, un fragmento amplificado por PCR
de un DNA genmico de tomate para PR-5 y un fragmento de 1.800 bp Eco R-I/Xho1 de un clon
cDNA pFB19 que codifica para tubulina de papa ( Vleeshouwers et al., 2000).
Mucha de las plantas Solanum evaluadas, mostraron niveles variables y significativos de
raza/aislamiento no especfico con resistencia parcial a cinco aislamientos de P. infestans de
diferentes origenes. Los noveles de mRNa constitutivos de los genes PR-1, PR-2 y PR-5
relacionados con la patogenicidad, en hojas no infectadas vari entre los clones de Solanum. A
nivel de gnero no se observ correlacin entre los niveles basales de PRmNRA y la resistencia,
pero s en el nivel de las especies S.arnezii x hondelmannii, S. microdontum, S. sucrense y S.
tuberosum. Los mayores niveles de expresin de genes R fueron para la variedad mas resistente
Robijn, intermedio en las parcialmente resistentes Premire, Estima y Ehuh y el ms bajo en la
susceptible Bintje.
Los resultados de la investigacin indican que la diferencia entre compatibilidad e
incompatibilidad es del tipo cuantitativo mas que cualitativo (genes R). Sin embargo, el modelo
clsico de un gen R de resistencia del husped por un gen Avr de avirulencia en el patgeno, se
puede utilizar para explicar el carcter cuantitativo de la resistencia parcial. Existe la posibilidad
33

de que un gen dbil R-10 de la papa, interacte con un gen Avr y desarrolle niveles alterados de
la resistencia, que permiten alguna colonizacin del patgeno bajo ciertas condiciones. Adems
los PRmRNAs, pueden servir como marcadores moleculares en los programas de mejoramiento
gentico de la papa (Vleeshowuers, et al., 2000).
3.4. Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restriccin RFLPs
para anlisis de los genomas nuclear y mitocondrial
Esta tcnica ha sido utilizada en estudios de poblaciones y evolucin biolgica.
En hongos permite establecer las relaciones entre gneros y aislamientos de las especies. Carter
et al. (1990), evaluaron el DNA mitocondrial de 24 aislamientos procedentes de 11 pases y
encontraron cuatro tipos de polimorfismos utilizando un rango pequeo de endonucleasas de
restriccin. Estos polimorfismos del DNA mitocondrial deben ser analizados conjuntamente con
los RFLPs del DNA nuclear, para lo cual se utiliza la sonda marcada RG 57, con el fin de
determinar la huella del genoma nuclear (Goodwin et al.,1992).
Se extrae DNA de origen mitocondrial o nuclear y se trata con enzimas endonucleasas que
cortan las molculas de DNA en sitios especficos. Los fragmentos que resultan se clasifican por
tamao mediante electroforesis sobre geles, los cuales pueden ser fotografiados y evaluados, con
el fin de depurar la informacin obtenida con las isoenzimas o las caractersticas morfolgicas y
fisiolgicas.
Se secuenci el genoma completo de la mitocondria de P infestans y se encontr que tena
37.957 pares de bases. Como un excelente indicador filogentico se determin el gen 4Lnad, el
cual codifica la subunidad del complejo mitocondrial NADH deshidrogenasa y Chesnick et al.,
(1996) citado por Smart et al., (2002) fueron capaces de resolver diferencias evolutivas entre las
plantas terrestres, hongos verdaderos y straminopilos y dentro de estos pudieron diferenciar P.
infestans de Chrysodidimus synuroides y Ochroma danica.
Los anlisis de la digestin con enzimas de restriccin del DNA mitocondrial, tambin han sido
tiles para comparar las especies estrechamente relacionadas P infestans, P. mirabilis y P.
phaseoli, indicando que esta ltima tiene diferentes sitios de restriccin que para las dos
primeras, las cuales difieren entre s por un sitio de restriccin (Moller et al, 1993, citado por
Smart, 2002) y la utilizacin del nitrato de sodio como fuente nitrogenada en el caso de P.
mirabilis. Posteriormente Gavino (1998) demostr un mayor nmero de diferencias entre estas
dos especies que dentro de diferentes aislamientos de P. infestans.
Para P. infestans se utilizan las enzimas de restriccin Cla I, Eco RI, Bgl II, Bcl I. Los patrones
de DNA mitocondrial de aislamientos de varios pases mostraron diferencias que fueron tiles
para identificar el origen de varios aislamientos y su grado de afinidad. Un inserto de DNA de
aproximadamente 2 Kbp se observ en el DNA mitocondrial de aislamientos de Brasil, Egipto,
Reino Unido y Estados Unidos, lo que sugiere que este biotipo tuvo una distribucin global.
Shaw y Wattier (2002), indican que los marcadores moleculares han revelado que en muchas
zonas cultivadas con papa predomina la poblacin con el viejo genotipo US-1. En otras reas las
poblaciones estn compuestas de uno o unos pocos genotipos o linajes clonales, ampliamente
dispersos y que persisten cada ao. En otras zonas puede predominar un slo linaje clonal, pero
34

puede detectarse un cambio gentico a nivel de DNA nuclear o mitocondrial en unos pocos
individuos.
En el noroeste de Mxico, Garca et al., (2000), determinaron el patrn de RFLP perteneciente
al linaje clonal US-7 con variantes en los aos posteriores y concluyeron que la reproduccin fue
slo asexual y los cambios que se presentaron fueron debidos a la introduccin de nuevos
aislamientos con tubrculos-semilla de papa. Los aislamientos fueron igualmente agresivos en
papa y tomate, dado que comparten el mismo nicho ecolgico, en cuyo caso las poblaciones no se
separan por husped.
En Nepal, Ghimire et al. (2003) caracterizaron aislamientos de cultivos de papa y tomate
durante 1999-2000, por la sonda RG57 del DNA nuclear y detectaron 11 genotipos multilocus en
280 aislamientos, de los cuales tres genotipos constituyeron el 94% de la poblacin total,
mientras que otros genotipos tuvieron muy baja frecuencia (0,004-0,014), el genotipo NP-3
present una huella por la sonda RG57, idntica a la de US-1, con un haplotipo mitocondrial I-b,
confirmando la presencia del linaje clonal mas antiguo de P. infestans en ese pas.
A pesar de que el ndice de diversidad de genotipos de Gleason fue muy bajo (1.78), con
relacin al ltimo ndice calculado para Antioquia (4,26) Colombia, por Gilchrist et al. (2003), la
mayor parte de los genotipos presentaron huellas dactilares con RG57 diferentes a US-1, junto
con el haplotipo mitocondrial I-a, lo que significa la presencia de nuevas poblaciones, que estn
desplazando las viejas poblaciones, como sucede en diversos pases, posiblemente como producto
de las introducciones en los tubrculos-semilla (Ghimire et al., 2003).
Hay nuevos mtodos con marcadores moleculares disponibles que prometen definir mas
claramente la forma como va evolucionando el patgeno, y como hacer un mejor control, es el
caso de microsatlites y polimorfismos de un solo nucletido, marcadores codominantes, que a la
par con la isoenzimas permiten determinar la frecuencia de alelos y cuantificar la recombinacin.
Igualmente los nuevos marcadores del DNA mitocondrial, detectan genotipos adicionales, los
cuales no estn influenciados por el sexo y por lo tanto son tiles para trazar linajes a travs de la
distancia y el tiempo ( Shaw y Wattier, 2002).
3.5. Haplotipos Mitocondriales (RFLP-PCR)
Carter (1990) utiliz la tcnica de RFLPs para determinar cuatro haplotipos del DNA
mitocondrial (I-a y I-b, II-a y II-b) de 24 aislamientos procedentes de 11 paises. Luego se utiliz
la tcnica de PCR-RFLP para detectar dichos haplotipos en 90 aislamientos procedentes de Rusia
y el Reino Unido. En 1991, Goodwin descubri cuatro haplotipos por la tcnica de southern,
determinando los haplotipos A,B,C y D entre 173 aislamientos procedentes de Mxico, Per y
Europa.
Griffith y Shaw (1998) disearon cuatro pares de primers para la amplificacin de PCR, de
regiones polimrficas conocidas del genoma mitocondrial, de P. infestans. La digestin de los
productos amplificados con enzimas de restriccin, permiti la identificacin de los haplotipos
previamente establecidos.
El producto del corte P2 con Msp1 nicamente identific los
haplotipos I-b y II-a, mientras los haplotipos I-a y II-b fueron diferenciados por la digestin del
producto P4 con Eco R1. Las digestiones de los productos P1 y P3 dieron resultados similares a
los obtenidos con la digestin de P4, pero la amplificacin de estos productos fue menor. Por lo
35

tanto los cuatro haplotipos comunes son identificados por amplificar y digerir los productos P2 y
P4 (figura 1), cuyo DNA puede ser extrado directamente de los foliolos de papa y tomate con
pequeas lesiones de tizn tardo, lo que permite monitorear de manera rpida y eficiente la
poblacin de P. infestans.

Figura 1. Representacin del genoma mitocondrial de P. infestans. Ilustra la ubicacin de

varios productos de la amplificacin (segn Griffith y Shaw, 1998).
Koh et al 1994, citados por Gavino y Fry (2002), encontraron dos haplotipos diferentes
utilizando el mtodo de Goodwin
en 124 aislamientos del Oeste del Asia, los cuales
denominaron E y F.
Con el propsito de unificar criterios en torno a los haplotipos
mitocondriales, dichos investigadores propusieron un esquema de relaciones entre los diferentes
sistemas de haplotipos, segn se ilustra en la figura 2.
Existen dos sistemas de nomenclaturas para seis haplotipos del DNA mitocondrial de P.
infestans. Los haplotipos I-a y I-b (grupo I de Carter) fueron determinados por el mtodo PCRRFLP adaptado por Griffith y Shaw (1998), al parecer corresponden a los haplotipos A de
Goodwin (1991). Los haplotipos II-a y II-b corresponderan a los haplotipos B de Goodwin
(1991). El haplotipo C difiere del A por una insercin y el D por tener varias mutaciones. Los
haplotipos E y F de Koh fueron incluidos en el haplotipo I-b. El haplotipo E (I-b) tiene una
delecin con respecto al haplotipo A (I-a) y el F (I-b) tiene una insercin. (Gavino y Fry, 2002).

36

Figura 2. Relaciones entre los haplotipos de DNAs mitocondrial I-a, I-b, II-a y II-b por Carter
y A, B, E y F por Goodwin fueron reconciliadas y conformaron los grupos I y II, con base en el
diagrama de Griffith y Shaw (1998). El haplotipo I-b(A) muestra un mapa de restriccin Eco R1
(crculo interno) basado sobre la secuencia completa del DNAm de P. infestans. Los fragmentos
de 1-10 corresponden a los siguientes tamaos: 1=7.6Kb, 2=5.7Kb, 3=0.4Kb, 4=6.5Kb,
5=3.3Kb, 6=4.4Kb, 7=4.7Kb, 8=2.9Kb, 9=0.6Kb y 10=1.5Kb. Las regiones (en negro) P1, P2,
P3, P4, P5, P6 y P7 amplificadas y analizadas para polimorfismos. Las inserciones ( )fueron
encontradas en los haplotipos I-b(E) y I-b(F), II-a(B) y II-b(B). Las sustituciones de un solo
nucletido ( ) que resultan en la ganancia (+) o prdida -)
( de sitios de restriccin fueron
detectados en P1, P2, P4 y P6 por secuenciamiento. El nmero de sustitucin de nucletidos ( )
y de inserciones ( ) que difieren entre los haplotipos son indicadas en las ramas que conectan
los haplotipos. (Tomado de Gavino y Fry, 2002).
37

A su vez el haplotipo I-b de Carter difiere del I-a por el cambio de un nucletido (CxT) y se
pierde un sitio de restriccin Msp 1(-) y I-a o I-b, podra ser el haplotipo mitocondrial ancestral
de los dems genotipos por mutaciones, razn por la cual concluyeron que el haplotipo
mitocondrtial en dicha zona es momomrfico. En el grupo II, el haplotipo II-a difiere de I-b por
un inserto de 2Kb en P5. Adems hay cambios en P4 (CxT) Eco R1 (-); en P2 (TxC) (+) y (CxT)
(-) Msp1; en p1 (CxT) Cfo (-) y en P6 (AxT). El haplotipo II-b difiere de II-a por cambios en P6,
as (AxT) y (GxA) lo que indica la sustitucin de dos nucletidos (Figura 2).
Segn Gavino y Fry (2002) el haplotipo I-a, asociado a los linajes clonales US-7 y US-8, y
varios linajes de Per, Argentina , Brasil, Ruanda e Israel, se ha encontrado en aislamientos de
papas cultivadas del valle de Toluca y cinco aislamientos de especies silvestres en Mxico, lo que
indica que la poblacin de esa zona tiene una diversidad de DNA mitocondrial muy limitada,
pues los cinco aislamientos de las especies silvestres tuvieron exactamente los mismos 182 bp en
la regin P2.
El haplotipo I-b no se ha encontrado en ningn aislamiento procedente de Mxico, pero
posiblemente es el origen ancestral de los dems haplotipos mitocondriales y est asociado
exclusivamente a las huellas con la sonda RG57 del DNA nuclear, encontradas nicamente en el
linaje clonal US-1 presente en las colecciones mas viejas de Estados Unidos, Per y Holanda.
Difiere del haplotipo I-a, por el cambio de un nucletido (CxT) y se pierde un sitio de restriccin
Msp1 (-) el cual difiere de I-b (E) por un inserto de 0.8 Kb y de I-b (F) por un inserto de 0.4 Kb.
Las variantes E y F slo han sido observadas en Filipinas (Gavino y Fry, 2002).
El haplotipo II-a se ha reportado en Japn y Corea, asociados al linaje (JP-1), Sur Amrica y
Europa. Sin embargo, el haplotipo II-a no se encontr en Norte Amrica. Los haplotipos I-a y
II-a estuvieron presentes en Europa entre diversos genotipos del DNA nuclear que contenan los
tipos de apareamiento A1 y A2. El haplotipo II-b solo se ha encontrado asociado al genotipo o
linaje clonal US-6, en Mochis al noroeste de Mxico y al oeste de Norteamrica. La diferencia
entre los haplotipos II-b y II-a est en la sustitucin de dos nucletidos (AxT) y (GxA) (Gavino y
Fry, 2002).
Esta tcnica fue utilizada por Knapova et al., (2002), para determinar los haplotipos
mitocondriales en aislamientos de P. infestans colectados en papa y tomate, en Suiza, Francia y
Alemania.
En dicha evaluacin utilizaron como referencia los aislamientos cuyo genotipo
nuclear corresponda a US-1, US-7, US-8 y los aislamientos Europeos EU-49 y EU-414 y la
progenie de dos aislamientos de campo compatibles de origen suizo, encontrando que el 93% de
las poblaciones de P. infestans europeas presentaban el haplotipo I-a (168 aislamientos
colectados en los ltimos 4 aos). El haplotipo clonal antiguo I-b, solo se encontr en el 2% y el
haplotipo II-a, en el 5% de los aislamientos evaluados.
Dichos investigadores indican que la progenie obtenida del cruce A1 (T04.97) y A2 (P317) fue
principalmente uniparental y posiblemente materno, pues slo dos descendientes de los 27
evaluados, presentaron un patrn diferente propio de la mitocondria paterna. Situacin similar
observaron Gavino y Fry (2002) en los aislamientos del centro de Mxico donde solo se observ
el haplotipo I-a, en contraste con la expectativa de encontrar alguna diversidad mitocondrial que
coincidiera con la mayor diversidad nuclear.
Flier et al., (2003) sealan que de 170 genotipos colectados en papas comerciales, especies
silvestres nativas de Solanum, S. demissum y S. xedinense, colectadas en el valle de Toluca,
38

Mxico, presentaron el haplotipo mitocondrial I-a, como lo observaron Gavino y Fry (2002).
Para el estudio separaron el origen de los aislamientos en tres poblaciones: los de papas
comerciales en el valle de Toluca, los de cultivos de subsistencia en las laderas del Nevado y los
de las especies silvestres de las zonas boscosas de la ladera del nevado de Toluca, las cuales
mostraron un alto grado de diversidad gentica, cuyo nmero de polimorfismos vari de 20 a
62.4% de los aislamientos colectados en los cultivos y especies silvestres.
Con base en el anlisis de las poblaciones encontraron que las lneas procedentes de papas
cultivadas presentaron una diferencia significativa con respecto a las lneas o aislamientos de
especies silvestres de Solanum (0.001-0.022) y se observaron alelos nicos en individuos de las
tres poblaciones en un nmero que vari de 9 a 16 para aislamientos colectados de cultivos
comerciales de papa y de especies silvestres de Solanum respectivamente..
Hay un flujo de genes restringido entre poblaciones de P. infestans de papas cultivadas y de
especies silvestres. Ellos proponen la hiptesis de que la diferenciacin de poblaciones y
aislamiento gentico de P. infestans en el valle de Toluca, centro de Mxico, se debe a factores
de interaccin especfica con el husped (como genes R) ampliamente distribuidos en especies
silvestres de Solanum y deriva (rumbo) gentica al azar. Encontraron cuatro marcadores
exclusivos de aislamientos procedentes de S. demissum (Flier, et al., 2003).
Gavino y Fry (2002) proponen la hiptesis de que la presencia de un solo linaje clonal se debe a
la seleccin, que acta sobre el DNA mitocondrial de P. infestans, cuyo mecanismo no se conoce,
pero que podra estar relacionado con la seleccin del DNA mitocondrial de P. infestans
colectados de plantas de papa que crecen bajo diferentes condiciones ambientales y de especies
silvestres, lo que fue sealado para Mycosphaerella graminicola, en el cual se present una
variacin limitada del DNA mitocondrial, a medida que la poblacin se fue especializando para
infectar el trigo.
Si un evento similar ocurri en el patosistema P. infestans/Solanum, se necesita explicar la
amplia distribucin mundial del haplotipo I-b en papa y I-a en diversas solanceas en Mxico
Central, para lo cual Gavino y Fry (2002) proponen tres mecanismos:
El haplotipo I-b presente en los aislamientos de papa, puede estar ligado a un genotipo nuclear
particular.
La ocurrencia del haplotipo I-a sobre diversas solanceas nativas en el centro de Mxico, podra
explicarse por la influencia de una zona extensa con produccin muy intensiva de cultivos de
papas, a partir de la segunda mitad del siglo XX. Las progenies de un cruce de aislamientos con
un haplotipo mitocondrial I-a y un haplotipo I-b, podra producir una poblacin de individuos
genticamente diversos que contiene el haplotipo I-a o I-b, lo que indica que no hay un efecto
nuetral del haplotipo del DNA mitocondrial.
Las pruebas de eficacia patognica sobre esta progenie, similares a las realizadas por Day y
Shattock (1997), podran revelar diferencias patognicas atribuibles a los haplotipos
mitocondriales. Tales pruebas requieren el desarrollo de su propia progenie. En Colombia se ha
observado el predominio del haplotipo II-a en aislamientos colectados de plantas de papa y del
haplotipo I-b de tomate. Los haplotipos se originaron todos de un solo linaje (Gavino y Fry,
2002) y han venido cambiando (mutando) posiblemente por efecto de los huspedes y la
evolucin colineal de los mismos, presentndose preferencias en la relacin husped-patgeno
39

Los haplotipos pueden ocurrir en diversos DNA nuclear. Los haplotipos I-a y II-a se presentan
en diversos genotipos del DNA nuclear (linaje clonal), pero el haplotipo I-b y II-b estn
estrechamente asociados a linajes clonales. Es as como el I-b solo se encontr en el linaje clonal
US-1 y sus variantes (nmero reducido de mutaciones entre individuos).
El haplotipo II-b se encontr en individuos que presentaban el linaje clonal US-6 con tipo de
apareaminto A1 y sin derivados (Gavino, 1999; 2000), cuya distribucin se ubic en el noroeste
de Mxico y oeste de Norteamrica. Griffith y Shaw (1998), solo encontraron el haplotipo II-b en
USA y Canad en los dos tipos de apareamiento (A1 y A2)., con muestras diferentes a las de
Gavino y Fry (2002).
Recientemente se observ el linaje clonal US-11,en el cual se presenta el haplotipo II-b, el cual
pudo surgir por recombinacin sexual con US-6 (Gavino et al., 2000). Al parecer el DNA
mitocondrial de los Oomycetes y sus parentales, est evolucionando lentamente en contraste con
el de hongos verdaderos, en los cuales se presentan intrones, los cuales no existen en P. infestans
y P. megasperma. Estos dos patgenos y las formas especiales de P. megasperma f. Sp. glycine,
f.Sp. medicaginis y P. parasitica var nicotianae, presentan las mismas secuencias para los cuatro
genes del DNA mitocondrial. La conservacin de las secuencias es consistente con el hecho de
que mas del 95% del genoma mitocondrial de P. infestans codifica para genes (Forster et al.,
1987, Poqun et al.,1997, citados por Gavino y Fry, 2002).
La diversidad del haplotipo I-b (A), I-b (E) y I-b (F) es consistente con las hiptesis de que es
el haplotipo mas viejo y que el linaje clonal US-1, en el cual se presenta dicho haplotipo, es el
mas antiguo de los linajes existentes. Por otro lado, se plantea la hiptesis de seleccin para el
haplotipo I-a en el valle de Toluca, Mxico (Gavino y Fry, 2002).
En aislamientos de P. infestans colectados en Antioquia y norte de Santander, Jaramillo, et al.,
2002a, encontraron que la gran mayora de los aislamientos evaluados presentaron el haplotipo
II-a y poco aislamiento presentaron el haplotipo I-b, lo que indica una posible transicin de una
poblacin antigua a otra mas reciente y asociada a una mayor resistencia a metalaxyl. En las
zonas marginales bajas para papa en las cordilleras de los Andes, se desarrollan cultivos de
tomate, los cuales pueden ser afectados por gota, con posibilidad de transporte de esporangios de
lotes cercanos con el haplotipo I-b mas frecuente en tomate hacia los lotes de papa.
Maldonado y Garca (2000), Caldern et al. (2002) encontraron que todos los aislamientos
procedentes de cultivos de papa de Cundinamarca y Boyac (regin centro-oriental de Colombia)
presentaron el haplotipo mitocondrial II-a. Esto demuestra la homogeneidad de las poblaciones
en Colombia, asociada a la reproduccin asexual del patgeno, corroborada por dichas
investigaciones mediante la tcnica de PCR con Primers especficos S1A asociados al estado
hemicigtico A1 y en el segundo caso, adems, por cruces consigo mismos y con un aislamiento
previamente caracterizado con el tipo de apareamiento A1, en medio agar-centeno.
Ordoez et al., (2000) encontraron que la nueva poblacin EC-2 de P. infestans caracterizada
por el tipo de apareamiento A2, no pudo clasificarse dentro de los sistemas de haplotipos
mitocondriales previamente descritos, lo que indica la posibilidad de un nuevo haplotipo del
DNA mitocondrial, el cual posteriormente (Oliva et al., 2002), lo refirieron a un haplotipo I-c.
Existe la posibilidad de que esta poblacin sea nativa de Ecuador y/o zonas ecolgicas similares
en los pases andinos, dado que comparten ecosistemas y especies silvestres de Solanum.
40

May y Ristano (2002), amplificaron el DNA con un par de primers especficos PIN/HERB1
para P. infestans en plantas de siete herbarios de los siglos XIX y XX y encontraron que el 87%
de las hojas estaban afectadas con dicho patgeno, pues amplificaron un fragmento de 100 bp, el
cual fue evaludo con primers especficos para los haplotipos mitocondriales. Ellos observaron
que slo un especmen procedente del Ecuador, contena el haplotipo I-b, con predominancia para
el haplotipo I-a, en las muestras mas antiguas de Estados Unidos, Inglaterra, Irlanda y Francia.
3.6. Mtodo AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism)
Fue utilizado originalmente por Van der Lee et al., (1997) para elaborar el primer mapa
gentico de ligamiento del DNA de P. infestans y posteriormente por Knopova et al. 2002, para
caracterizar aislamientos europeos, utilizando marcadores fluorescentes. Los mapas genticos
permiten posicionar el clonaje de genes ligados a fenotipos particulares, entender las relaciones
evolutivas entre los organismos y analizar los rearreglos dentro del genoma.
La tcnica de las huellas AFLP-DNA tiene como ventaja la posibilidad de evaluar muchos
marcadores en un slo experimento, con una combinacin de primers, s el nmero posible de
combinaciones con el primer E+2/M+2 es 256 y por lo tanto, se pueden generar 4.500
marcadores mas con la combinacin de enzimas EcoRI/MseI.
El nmero de fragmentos amplificados depende del tamao del genoma, la frecuencia de corte
de las enzimas, y el nmero y naturaleza de las bases selectivas adheridas a los cebadores o
primers de la PCR. Con el fin de optimizar a las condiciones para las huellas AFLP de P.
infestans, Van der Lee et al., 1997, variaron: i) Las enzimas de restriccin (cortan cuatro pares
de bases) para digerir el DNA genmico, ii) el nmero de bases selectivas (2 o 3) y iii) los
perfiles del ciclo en los pasos de preamplificacin y amplificacin.
A pesar del gran tamao de los fragmentos MseI la mejor combinacin de las enzimas para las
huellas digitales por AFLP con el menor background parece ser EcoRI/MseI. La mayor
resolucin fue obtenida con un gel separador de poliacrilamida al 4%. La mejor PCR fue corrida
con cebadores que contenan los 3nucletidos selectivos E+2/M+2. Se variaron las temperaturas
y el nmero de ciclos de la PCR. En dicho trabajo se obtuvieron 183 marcadores de AFLP, se
mapiaron 7 marcadores RFLP y el locus del tipo de apareamiento. (Van der Lee et al., 1997).
El mapa gentico de ligamiento comprende 10 grupos mayores (I-X) con marcadores A, B y H
que podran representar los cromosomas de P. infestans, estn compuestos de los marcadores
derivados de ambos padres y presentaron segregacin mendeliana, mientras otros siete grupos
menores contienen los marcadores del tipo de apareamiento (A1 o A2) de los parentales (I-X),
pero no se encontr segregacin mendeliana para el tipo de apareamiento y slo 13 marcadores
de AFLP muestran distorciones claras en las relaciones de sgregacin, los cuales se originaron
del parental A1 y mapiado sobre LG III, el grupo de ligamiento que contiene el locus del tipo de
apareamiento. Se destaca que el parental A1 slo tiene un locus heterocigoto dominante, el cual
no segrega como las relaciones mendelianas (Aa x aa) (Van der Lee et al., 1997).
Knapova et al. (2002) encontraron que con 31 marcadores AFLP se detectaron 43 genotipos
diferentes entre 83 aislamientos evaluados. Prcticamente cada dos aislamientos evaluados,
presentaban un genotipo diferente. Estos resultados demostraron una alta diversidad de las
poblaciones de P. infestans, pero ninguno de los aislamientos europeos evaluados perteneci al
41

antiguo genotipo (US-1, EU 49 y EU 314) ni a los nuevos genotipos (US-7, US-8 hallados por
Goodwin et al., 1992).
De 170 aislamientos del valle de Toluca, se determinaron 158 genotipos AFLPs multilocus, lo
que indica una alta variabilidad gentica y cada aislamiento prcticamente est representado por
un nico genotipo basado en el anlisis de 165 loci con marcadores AFLP. Un promedio de
81.8% (135) de los loci AFLP fueron polimrficos y la heterocigocidad vari de 7,7 a 19,4%
(Flier et al., 2003).
Segn Knopova et al., (2002) el patrn de bandas encontrado en la progenie tambin apareci
en las poblaciones de campo. La herencia de los marcadores AFLP en la F1, fue principalmente
de segregacin mendeliana (excepto el marcador 411) y la distribucin del tipo de apareamiento
A1:A2 fue 1:1. Este mtodo present el mas alto polimorfismo para aislamientos individuales,
observacin hecha por Prez et al., (1997-1998), en aislamientos de P. infestans del Per, al
comparar los dendrogramas derivados del anlisis de RFLP usando la sonda RG57 y las huellas
de AFLP.
Se esperaba que con el mapa de ligamiento de P. infestans y la disponibilidad de la tecnologa
de marcadores AFLPs, se pudiera analizar la herencia de fenotipos (a)virulentos y clonar los
genes de avirulencia (Van der Lee et al., 1997), lo cual se logr cuatro aos mas tarde, pues
encontraron que la deteccin de un fragmento ubicado en el grupo VIII de ligamiento y que
corresponde a Avr3-Avr10-Avr11 se correlaciona con los genes de resistencia R3, R10 y R11 de
los clones diferenciales de papa (Van der Lee et al., 2001a)
Van der Lee et al. (2001a), encontraron la sonda o marcador (AFLP) M5.1, ligada al grupo de
genes Avr3-Avr10-Avr11 que hbrido slo con el padre y la progenie de P. infestans que
presentaba caractersticas de avirulencia sobre clones de papa, con los respectivos genes de
resistencia R3, R10 y R11. Dicho grupo de genes avirulentos est localizado sobre la parte distal
de grupo de ligamiento VIII, segn el mapa gentico de P. infestans.
3.7. Marcadores Microsatlites
Los marcadores microsatlites fueron desarrollados para P. infestans usando una librera
genmica para este patgeno, enriquecida con una secuencia simple de repeticin (TC)n, como lo
describi para Venturia ineaqualis Tenzer et al., (1999) citado por Knapovaet al., (2002). Los
clones positivos fueron secuenciados y los loci de los microsatlites nicos identificados. En
total se seleccionaron seis marcadores microsatlites para caracterizar los aislamientos de P.
infestans (Knapova et al., 2002).
De los seis marcadores microsatlites, tres mostraron polimorfismo para los aislamientos
evaluados. En total se identificaron 20 alelos diferentes en tres loci. La diversidad gentica
calculada de acuerdo con el ndice de Nei (1973) fue mas alta en los loci 4G y G118 (0.65 y 0.66
respectivamente) que en el locus 4B (0.30). Con los dos microsatlites Pi4G y Pi4B, se
identificaron 26 genotipos de P. infestans de 175 aislamientos europeos evaluados.
Los genotipos viejos y nuevos de P. infestans no fueron detectados entre los aislamientos
Europeos. Los cruces de los dos aislamientos de campo compatibles generaron los mismos
genotipos identificados en las poblaciones de campo, sugiriendo que emergen al menos
42

parcialmente de las recombinaciones sexuales.

Los microsatlites son un mtodo rpido,
especfico y reproducible para identificar los genotipos en las poblaciones. (Knopova et al.,
2002).
3.8. ITS Regiones espaciadoras transcritas
Permiten la diferenciacin de especies dentro de un mismo grupo, por el anlisis de los regiones
espaciadoras de los genes del DNA ribosomal, pero no dentro de la especie, pues dentro de un
mismo grupo no se diferencian P. infestans, P. mirabilis y P. phaseoli, pero s de P. elicis, P.
colocacie y P. hibernalis. (Briard, et al.,1995).
Ordoez et al., 1998, determinaron si la regin ITS2 del DNA ribosomal de los aislamientos
tomados de lesiones tpicas de tizn tardo, que crecan en dos especies silvestres de Solanum, en
el Ecuador, con tipo de apareamiento A2, pertenecan a P. infestans. Utilizaron los primers
especficos ITS3 y PINF2 y una muestra de 10ng de DNA extrada segn el procedimiento
propuesto por Tooley et al. (1997) y encontraron que todos los aislamientos que haban sido
ubicados en el tipo de apareamiento A2 amplificaron, confirmando que pertenecan a dicha
especie.
Clonaron la regin ITS 2 del aislamiento 1836 de S. brevifolium utilizando el kit de clonacin
Invitrogen Original TA Cloning; la regin del DNA clonada fue purificada con el sistema de
purificacin de Promega WizardT M Plus Minipreps. Las digestiones del plsmido con el
inserto fueron hechas con EcoR1 y los productos se corrieron en un gel de agarosa al 1% con el
buffer TAE (0.04 M tris-acetate,0.001 M EDTA pH 8.0). El tamao del inserto se compar con
el del producto PCR amplificado. La regin ITS2 clonada del rDNA del aislamiento 1836 fue
secuenciada utilizando el dsDNA Cycle Sequencing System from Gibco BRL (Gaitherburg,
MD) y luego alineado con otras 14 especies de Phytophthora para identificar cualquier diferencia
en los nucletidos, encontrando que slo difera en dos nucletidos de la secuencia publicada
para P. infestans (Ordoez et al., 1998).
3.9. Nuevos cebadores (primers) para la deteccin de Phytophthora
infestans por PCR
Dado que los ITS del DNA ribosomal y otras secuencias con pocas copias no son tan precisas
para determinar la infeccin inicial con P. infestans, de cultivos de papa y tomate, puesto que
pueden repetirse entre 1.000-3.000 veces en el genoma, se opt por evaluar secuencias en las
familias de DNA con alto nmero de copias (Primers O8-1/O8-4 con 260 bp), basados en la
hibridacin especfica, logrando una deteccin de hasta 10 fentogramos de P. infestans, 100
veces mas preciso que los ITS. Pero para incrementar la certeza del diagnstico, se desarroll un
control positivo utilizando un simulador de amplificacin (0,2 fentogramos de un plsmido
plantilla, 54 bp), que servi como competidor para la PCR cuantitativa. Se compararon los
resultados de dos laboratorios con diferencias, que deben ser consideradas en las aplicaciones de
los diagnsticos, en cualquier sistema. (Judelson y Tooley, 2000).

43

3.10. Marcadores de polimorfismo del DNA amplificado al azar ( Random

amplified polymorphic DNA, RAPD)
Segn Mahuko, et al., (2000), se utilizan para detectar variacin gentica entre la poblacin de
P. infestans durante periodos de cambio rpido, para lo cual evaluaron 40 cebadores (primers) y
seleccionaron seis, que exhibieron polimorfismos y patrones de bandas consistentes. El primer
OPE-4 permiti detectar la mayor cantidad de haplotipos RADP y el anlisis de correspondencia
mltiple los separ en 21 grupos. Los polimorfismos resultan de cambios de secuencia por
deleciones, inserciones, sustituciones o inversiones.
La variacin promedio dentro de un grupo fue del 80% y entre grupos del 61%. La mayora de
los grupos tenan ambos tipos de apareamiento, pero no se observ correlacin entre los
marcadores RADP y los orgenes geogrficos de los aislamientos, ni con los genotipos
previamente descritos (Gpi), el tipo de apareamiento y la resistencia al metalaxyl, puesto que los
marcadores RADP, detectan la variacin que es distribuida a travs de todo el genoma, mientras
que el tipo de apareamiento y la respuesta al metalaxyl representan loci definidos en el genoma.
En el laboratorio de Estudios Moleculares de la Universidad Nacional de Colombia (Jaramillo et
al., 2002a) se logr la separacin de dos grupos por husped uno para papa y otro para los
aislamientos de tomate, pepino, pimentn y la raza r0, mediante el cebador OPM-09.
POBLACIONES DE P. INFESTANS REPORTADAS A NIVEL MUNDIAL
Forbes et al., (1998) elaboraron una base de datos con marcadores globales para P. infestans de
41 localidades incluidos 31 pases y 10 regiones dentro de Mxico. Se tuvieron en cuenta los
tipos de apareamiento, isoenzimas, RFLPs con la sonda RG57, resistencia a metalaxyl y
propusieron una nomenclatura con el fin de que sea internacionalmente aceptada que incluye dos
letras del del pais de origen del aislamiento, asignadas por la Organizacin Internacional de
Estandarizacin (ISO) seguida de un nmero nico.
Un ejemplo es US-1, el cual fue
originalmente identificado en Estados Unidos, pero luego ha sido encontrado en muchos pases,
donde mantiene su designacin.
Para identificar genotipos que surgen dentro de un linaje clonal, excepto por cambios en una o
dos aloenzimas o loci (bandas) en las huellas del DNA con la sonda RG 57, es mediante la
colocacin de un punto decimal y luego un nmero despus del nombre del genotipo como US1.1, EC-2.1 los cuales son variantes dentro del linaje o se han desarrollado a partir de dicho linaje
como US-6.1, algunos de los cuales aparecen en la tabla 3. La unificacin de la nomenclatura
facilita la comparacin y complementariedad de los resultados de las investigaciones, evitando la
duplicidad. Uno de los limitantes del sistema es que est ligado a los marcadores utilizados para
definir los genotipos (Forbes, et al., 1998).

44

Tabla 3. Algunos Genotiposa multilocus los cuales estn representados en la base de datos
(Tomado de Forbes et al.,1998)
Genotipo
AU-1
AU2*
BR-1
CA-1*
CA-2
CA-2.1
CA-3
CA-4
CA-5
CA-6
CA-7
CR-1
EC-1
EE-1
EE-2
IL-1
JP-1
RU-1
RW-1
RW-2
US-1*
US-1.1*
US-1.2*
US-1.3**
US- 1.4*
US-1.5*
US-1.6*
US-1.7*
US-2*
US-3*
US-4*
US-5*
US-6*
US-6.1*
US-6.2*
US-6.3*
US-6.4*
US-6.5*
US-7
US-8
US-9e

Tipo de
apareamiento
A1
A1
A2
A1
A1
A1
A2
A2
A2
A2
A2
A1
A1
A1
SF
A2
A2
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A1
A2
A2
A1

Gpi

24
24
44
24
44
44
24
45
44
44
44
44
34
34
34
44
44
44
34
34
24
24
24
24
24
24
24
44
24
24
44
44
44
44
44
44
44
44
45
44
44

55
55
55
35
55
55
55
55
55
55
55
56
45
55
55
55
44
55
25
55
35
55
35
35
55
35
35
35
35
35
33
35
35
33
35
35
55
35
55
456
25

Pep

Bandas de DNA por RFLPd

Sonda RG57
1001100001001101010110011
1011101000001100000110011
1011101000001100001111011
1111101011001101001110011
1011001000001100001110011
1011001000001100001111011
1111101001001001100110011
1001000001001101000110011
1000110000001101000110011
1010001001001100010110011
1001000000001100010110011
1001000001001101000110011
1111101001001101000111011
1001100001001100100110011
1010101011001101000110011
1001100001001101000110011
1001110000001101100010011
1011101011001101000110011
1111111011001101001111011
1111101001001101001111011
1011101011001101000110011
1011101011001101000110011
1011101010001101000110011
1011101001001101000110011
1011101010001101000110011
1011101011001101010110011
1011101011001101000111011
1011101011001101000110011
1011101001001101011110011
1011100000001101000110011
10 11101001001101100110011
1011101001001101011110011
1011111001001100010110011
1011111001001100010110011
1011101001001100010110011
1011111001011100010110011
1011011001001100010110011
1011111001001100010010011
1011101011001101000110011
1001100001001101000110111

Fuente y Pas
13, Australia
13, Australia
13, Brasil
12, Canad
12, Canad
12, Canad
12, Canad
17, Canad
17, Canad
17, Canad
17, Canad
14, Costa Rica
5, Ecuador
17, Estonia
14, Estonia
13, Israel
18, Japn
14, Rusia
13, Ruanda
13, Ruanda
13, USA
28, USA
13, USA
13, USA
12, USA
17, USA
14, USA
14, USA
12, USA
12, USA
12, USA
12, USA
17, USA
12, USA
12, USa
12, USA
12, USA
12, USA
17, USA
17, USA
17, USA
45

Genotipo
US-10e
AR-1
AR-2
AR-3
AR-4
AR-5
FR-1
ES-1

Tipo de
apareamiento
A2
A2
A2
A2
A2
A2
A1
A1

Gpi
56
44
44
44
44
44
44
34

Pep
55
34
44
34
44
45
25
55

Bandas de DNA por RFLPd

Sonda RG57
1001000000000000000111111
1001000000000000000111111
1001100010000000000101111
1001100010000000000101111
1001100010000000000101111
1010111111001101001110101
1100100001001101000110011

Fuente y Pas
17, USA
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Francia
Espaa

genotipos basados en 23 bandas de RFLPs, gentipo aloenzimtico y tipo de apareamiento. Los nombres originales
de los genotipos han sido guardados en la base de datos, p ara facilitar el cruce de las referencias.
b
Glucosa-6-fosfato isomerasa. Los alelos en el locus Gpi son codificados como 86=2, 90=3, 100=4, 111=5 y 122=6.
c
Peptidasa. Los alelos para el locus Pep son codificados como: 83=2, 92=3, 96=4 y 100=5
d
DNA bandas por la sonda RG57, moderadamente repetitivas, indican presencia 1 y ausencia 0, las cuales se
enumeran de izquierda a derecha. Las bandas 4 y 25 no fueron utilizadas en el anlisis.
e
US-9 y US-10 estn basados sobre nuevos patrones de Gpi y Pep: No se conocen las bandas RFLP
*Genotipos viejos
Genotipos con A2

Existen genotipos multilocus de poblaciones asexuales presentes en mas de un pas. Genotipos

antiguos: RU-1 presente en Rusia y Ruanda, US-1-1 registrado en Brasil, Canad, Estados
Unidos y Filipinas, US-1-2 reportado en el Per, Gran Bretaa y Estados Unidos, US-1.3 existe
en Per y Estados Unidos. Genotipos nuevos: BR-1 registrado en Bolivia y Brasil, JP-1 reportado
en Japn y Korea, PO-4 presente en Polonia y Bielorusia, PO-57, registrado en Polonia, Israel y
Rusia y EC-1 reportado en Ecuador y Colombia.
Hay genotipos comunes en pases vecinos, pero tambin en pases distantes, pero no se conoce
si es producto de la migracin o de la evolucin independiente de cada genotipo en dichas
regiones, lo que amerita una mayor investigacin en dichos pases y centralizar la informacin
alrededor de la base de datos creada en la Universidad del Estado de Oregn, para hacer mas
eficiente el uso de recursos y tener un panorama global sobre este patgeno y su evolucin, que
permita entender la dinmica del patosistema P. infestans/ solanceas
En la base de datos se puede observar el desbalance de las investigaciones en Asia, frica y
Amrica del Sur, las cuales son necesarias para mejorar las estrategias de manejo y para la
seleccin y desarrollo de variedades con resistencia gentica prolongada. De 1.776 entradas, se
destaca la presencia de 369 genotipos nicos determinados por RFLP y 288 genotipos multilocus
para aloenzimas. Los aislamientos con tipo de apareamiento A1 (1.118) prcticamente duplican
la cantidad de aislamientos con apareamiento A2 (608) y slo se registr autofertilizacin en un
aislamiento de Saltillo Mxico, dos de Holanda, cinco de Polonia y uno de Ruanda (Forbes, et al.,
1998).
Shaw y Watier (2002) sealan que los marcadores moleculares han revelado que las
poblaciones de P. infestans, en zonas donde se cultiva la papa en el mundo, estn compuestas de
un slo genotipo (US-1) o mezclas de unos cuantos genotipos, que se van dispersando o
persisten ao tras ao. En otras zonas se pueden presentar mezclas, dada la presencia de los dos
tipos de apareamiento y la posibilidad de generar oosporas que pueden quedar en el suelo, pero
con el tiempo queda un solo genotipo. Por lo tanto, es necesario estudiar (identificar y
cuantificar) todos los factores que influyen en la evolucin del patgeno como: condiciones
46

climticas, sexualidad, parasexualidad, mtodos de cultivo, migracin de otras poblaciones sobre

papa y otros huspedes, rumbo gentico, mutaciones.
Hacia los aos 1980s se report la poblacin US-1, en Estados Unidos y Canad y EU-49 y
EU-314 en Europa con sensibilidad al metalaxyl y con el tipo de apareamiento A1, y aloenzimas
Gpi 86/100 y Pep 92/100. Los datos genticos de estas poblaciones indican que P. infestans
sufri un severo cuello de botella al pasar de Mxico a Estados Unidos, Canad y Europa,
generndose poblaciones muy simples, dominadas por un slo linaje clonal US-1, del cual slo se
detect un aislamiento colectado en 1997 en papa al Este de Carolina del Norte por
Wangsomboondee et al., (2002), pues despus de 1990s aparecen nuevas poblaciones.
Fry et al., (1993) indican que en Japn, Corea, Egipto, Israel, Ruanda, Alemania, Irlanda,
Holanda, Polonia, Suiza, Gran Bretaa, Bolivia, Brasil Colombia y Ecuador, se presentaron
nuevos genotipos de P. infestans que no haban sido detectados en colecciones anteriores a los
aos de 1980s y comienzos de los 1990s, dando origen a nuevas poblaciones. En 1987 se reporta
US-8 principalmente en papa al Oeste de Estados Unidos y Canad y US-7 en papa y tomate.
Ambos muy patognicos y resistentes al metalaxyl. Entr un slo clon del Noroeste de Mxico a
los extremos continentales de los Estados Unidos con el comercio del tomate?.
El genotipo correspondiente a US-7 fue encontrado en el noroeste de Mxico, un semestre antes
de ser encontrado en Estados Unidos, lo que indica que dicho genotipo probablemente se origin
en Mxico y emigr a Norteamrica. Las epidemias sobre los cultivos de papa, posiblemente se
iniciaron a partir de los tubrculos semilla, pero las epidemias sobre tomate pudieron haber
empezado de tubrculos de papa o frutos de tomate infectados. Los primeros genotipos
encontrados en tomates, presentaron una agresividad variable en el follaje de la papa, al igual que
el grado de susceptibilidad al metalaxyl (Garca et al., 2000).
Mahuko et al., (2000) estudiaron las poblaciones de P. infestans colectados en diferentes
provincias paperas de Canad entre 1994 y 1996, observando variaciones genticas en el genoma,
las cuales no correlacionaron a los genotipos que fueron definidos por anlisis aloenzimticos del
locus Gpi, ni con los grupos definidos por los marcadores RAPD, ni con la resistencia al
metalaxyl. No se observaron diferencias estadsticas entre los aos y las poblaciones, pero s
dentro de los individuos que conforman una poblacin. En los aos 1995-1996 se colect un
mayor nmero de aislamientos US-8.
Los genotipos US-7 y US-8 fueron A2 y presentaron mayor agresividad, tamao de lesin y
esporulacin que el US-1. Este ltimo fue sensible al metalaxyl, mientras que el US-11 (A1)
mostr insensibilidad.
El genotipo US-8 present un amplio rango, con predominio de
aislamientos medianamente resistentes. Se presume que la variacin surge de la reproduccin
sexual o migraciones (Mahuko, et al., 2000).
Miller y Johnson (2000) evaluaron la habilidad competitiva (eficacia biolgica) entre los
aislamientos US-1 y US-8 de P. infestans, en condiciones de campo semirido en Pullman USA y
encontraron que US-8 predomin sobre US-1, dado el incremento de su agresividad en los tejidos
de papa, tanto en campo como en laboratorio, a la vez que fueron insensibles al metalaxyl. Fue
escasa la deteccin de oosporas, por lo cual se considera que la reproduccin sexual entre estos
dos aislamientos sera un evento raro.

47

Los resultados de esta investigacin confirman las observaciones de otros investigadores, en el

sentido de que cuando un aislamiento se establece en un cultivo, lo hace a expensas de otros
aislamientos, en este caso el US-8 prolifer significativamente, mientras que US-1 casi se
extingui. Por un sistema de simulacin concluyeron que para hacer un control adecuado de la
gota en campos de papa, con el linaje clonal US-8, debe reducirse en 2-3 das la frecuencia de las
aplicaciones para el control qumico, con relacin a un campo afectado con el linaje US-1 (Miller
y Johnson, 2000).
En Carolina del Norte, Wangsomboondee et al., (2002), evaluaron 93 aislamientos de cultivos
de tomate que crecan al oeste del Estado, contra las montaas y 157 de papa de la zona este,
entre 1993 y 1998. Todos los aislamientos de papa presentaron el genotipo US-8, excepto un
aislamiento que present el US-1 (con haplotipo mitocondrial I-b), los cuales presentaron
resistencia intermedia o alta al metalaxyl, mientras que los aislamientos de tomate, presentaron
los genotipos US-7, US-8 y dos nuevos genotipos denominados US-18 y US-19 (con tipo de
apareamiento A2, genotipo aloenzimtico Gpi 100/100 y Pep 92/100). Con un patrn de bandas
RFLP nico y sensibles al metalaxyl, lo que demuestra mayor complejidad de P. infestans en las
poblaciones de tomate que de papa, en dicho Estado. Excepto US-1, todos los aislamientos
presentaron el haplotipo mitocondrial I-a
En Ecuador se han reportado cuatro linajes clonales: US-1 antigua poblacin, que prevalece en
tomate, con el tipo de apareamiento A1 y el haplotipo mitocondrial I-b. EC-1 que representa el
95% de la poblacin de P. infestans en dicho pas y present el genotipo Pep 100/100 (96/100?),
con el tipo de apareamiento A1 y el haplotipo mitocondrial II-a. Poblacin reciente, con
resistencia a metalaxyl, muy agresiva e introducida de Colombia. Esta slo afecta especies
tuberferas, el linaje clonal EC-2 slo afecta solanceas silvestres no tuberferas y presenta el
tipo de apareamiento A2 (Forbes et al., 1997, Oyarzn et al., 1998). La poblacin EC-3 es del
tipo de apareamiento A1 y afecta el tomate de rbol (S. betaceum) (Oyarzn et al., 1998).
Posteriormente Chacn et al., (2002) hicieron un muestreo de P. infestans en nueve especies de
la seccin petota y nueve en no petota (no tuberferas): Todos los aislamientos colectados en
especies de la seccin petota, presentaron el tipo de apareamiento A1 y los de la seccin no
petota presentaron A1 o A2. Las isoenzimas fueron heterocigotas con el fenotipo Gpi 90/100,
Pep 96/100. Para la seccin no petota fueron Gpi 90/100, 86/100 o 100/100, Pep 76/100 o
92/100. Igualmente el haplotipo mitocondrial para las petotas fue II-a, en tanto que las no petotas
presentaron diferentes haplotipos mitocondriales I-a, I-b o I-c.
Las huellas con la sonda RG57 correspondieron para la seccin petota al linaje clonal EC-1, las
de la seccin no petota se ubicaron en los linajes clonales EC-1; EC-2; EC-2.1; EC-3 y US-1
(Chacn et al., 2002), que demuestra la gran diversidad gentica de las poblaciones de P.
infestans en esta zona, en especies no tuberferas, lo que pude ser similar a la situacin que se
presenta en Colombia, en donde se ha encontrado el predominio de aislamientos con haplotipo
mitocondrial II-a y I-b en papa y I-b en tomate y pepino.
Dichos investigadores reportan que por primera vez se detect el tipo de apareamiento A2 en
pepino y un nuevo haplotipo mitocondrial denominado I-c en pepino, S. brevifolium y una
especie de Solanum no identificada. Adems se observaron nuevas bandas de RFLPs, que
determinaron los linajes clonales ya sealados (Tablas 4 y 5).

48

Tabla 4. Diversidad de Phytophthora infestans en Solanaceas en el Ecuador (Alder, et al.,

2002)
Linaje a Haplotipo b

Tipo de
apareamiento

Gpi c

Pep d

US-1

I-b

A1

86/100 92/100

EC-1

II-a

A1

90/100 96/100

EC-2
EC-3

I-a
I-c
I-a

A1
A2
A1

100/100 76/100
100/100 76/100
86/100 76/100

Huspedes
S. ochrantum, S.lycopersicon,
S.caripense, S. muricatum e
S. tuberosum, todas las solanaceas
de la seccin petota
f
Complejo de S. brevifolium, Datura bicolor
Complejo f S. brevifolium y S. muricatum g
S. betaceum

Linaje clonal definido por marcador.. El DNA del haplotipo mitocondrial de los aislamientos que atacan s.
brevifolium, hasta la fecha tienen las huellas del arquetipo EC-2RFLP, pero difiren de otros marcadores.
b
Haplotipo mitocondrial c Patrn de bandas de la Glucosa fosfato isomerasa
d
patrn de bandas de Peptidasa e Antes del 2001 slo se encontraba US-1 en S. Muricatum
f
Especies huspedes de este complejo, an no han sido identificadas
g
Dos aislamientos con este genotipo fueron tomados de un campo muy afectado de S. muricatum cerca a los Baos

Aunque las poblaciones EC-2 y EC-3 con morfologa y otras caractersticas moleculares
diferentes a cualquiera de los genotipos descritos, slo es reportada en el Ecuador, en Colombia
tambin se ha observado la presencia de P. infestans en hojas de tomate de rbol y tallos de lulo
(Solanum quitoense), variedad La Selva (Zapata y Castaeda, comunicacin personal, 2000).
Estos aislamientos deben ser caracterizados en prximas evaluaciones.
Segn Abad (1983), Botero Y Gilchrist, (1998), Oyarzn et al. (1998), normalmente se reporta
un slo linaje clonal sobre un husped (preferencia patognica o especializacin fisiolgica). Es
as como Yun Lee (1998) citado por Smart et al., (2000) determin que todas las lneas de P.
infestans evaluadas eran patognicas a papa y solo unas pocas eran patognicas a tomate.
Erselius et al., (2000) observaron la estabilidad de los aislamientos procedentes de cultivos de
tomate en el Ecuador, pues se mantuvieron dentro del linaje clonal US-1, mientras que dos
aislamientos de un campo colindadate con un cultivo de papa muy afectado por el tizn tardo,
presentaron el linaje clonal EC-1 mas frecuente en papa, razn por la cual se dice que la papa y el
tomate son atacados por poblaciones separadas de dicho patgeno, cuando existe una barrera
geogrfica como en la zona Andina, donde generalmente los cultivos de papa y tomate se realizan
en ecosistemas diferentes, pero se presentan algunas zonas de transicin, donde se cultiva papa y
tomate, como las zonas marginales de caf en las cordilleras de Colombia.
Es posible que se presente una adaptacin paulatina a uno de los huspedes cuando comparten
el nicho ecolgico y hay predominancia de una de las poblaciones, como en el caso de la fuerte
epidemia con tizn tardi en un campo de papa vecino a tomate, en el cual se observ la
presencia de dos aislamientos con las caractersticas de EC-1 mas frecuente en papa. Estos son
aspectos de importancia en la epidemiologa del patgeno en una zona.
Igualmente en Colombia se observaron campos de papa con uno o dos aislamientos con
haplotipos mitocondriales I-b, como en el caso de Norte de Santander (Gilchrist, 2001) y que
podran corresponder a la poblacin US-1 predominante en tomate. Sin embargo, parece haber
un mecanismo reproductivo que impide la recombinacin sexual entre aislamientos y que
49

posiblemente est relacionada con la adaptacin a los huspedes, pues en condiciones naturales
no se ha observado la hibridacin entre las poblaciones EC-2 (A2) de las especies silvestres que
crecen como setos o enredaderas en zonas aledaas a los cultivos de papa y tomate y las (A1)
EC-1, EC-3 y US-1 de papa, tomate de rbol y tomate (tabla 4).
Oliva et al., (2002) obtuvieron un slo cruce en condiciones in vitro, cuya progenie no fue
patognica a los huspedes de los aislamientos parentales. Tampoco se han observado cruces
entre los aislamientos A2 de Bolivia ubicados en el linaje clonal BR-1 y A1 del Per, linaje
clonal EC-1, presentes en cultivos de papa en la zona limtrofe entre los dos pases alrededor del
lago Titicaca, centro de origen de la papa cultivada. En tal sentido es necesario aumentar los
muestreos, incluyendo las especies huspedes alternos, en los cuales se puede estar presentando
la posibilidad de una recombinacin sexual, que resultara en la formacin de oosporas, con
cosecuencias sobre la epidemiologa y problemas de manejo del patgeno en esta zona, como lo
indican Forbes et al., 1998.
Alder et al., (2002) hacen referencia a la diversidad gentica de las poblaciones de P. infestans
presentes en Amrica del Sur, en papa, tomate y otras especies de la familia solancea de la
seccin petota (que tuberizan) y de la Etuberosum (no tuberizan), donde se destaca el amplio
rango de especies cultivadas en el Ecuador, las cuales tambin se cultivan en Colombia como
papa, tomate, tomate de rbol (S. betaceum), lulo (S. quitoense), pepino de agua (S. muricatum) y
de especies silvestres como S. andreanum, S. caripense, S. brevifolium, S tuquerrense y otras
(tabla 4).
Hasta el presente han encontrado dos grupos de P. infestans distintos afectando el complejo de
S. brevifolium, uno de los cuales ha sido asociado con un fenotipo identificado tentativamente
como S. oblongifolium y es caracterizado por el tipo de apareamiento A1, Gpi(100/100),
Pep(76/100) y el haplotipo mitocondrial I-a. El otro grupo tiene las mismas aloenzimas, pero con
apareamiento A2 y el haplotipo mitocondrial I-c, el cual est asociado a otros fenotipos en el
complejo de huspedes, probablemente S. brevifolium y S. tetrapetalum y en dos oportunidades
se encontr en pepino (Alder et al., 2002).

50

Tabla 5. Diversidad Gentica de Poblaciones de P. infestans en Amrica del Sur (Adaptado de

Alder et al., 2002)

Pas

Especies de
plantas estudiadas

Argentina

Papas y tomates

Bolivia
Brasil
Chile

Papas
Papas y tomates
Papas
Papas,
tomates,
pepino y
Colombia1
otras
Papas, tomates, pepino,
Ecuador
otras..
Petota, tomate y S.
Per
caripense
Uruguay
Papas
Venezuela
Papas
a

DNA del haplotipo mitocondrial

Tipo de
Haplotipos a
apareamiento

Linajes clonales b

A1, A2

I-a y II-a

A2
A1, A2
A1, A2

II-a
I-a, II-a
I-b

AR-1, AR-2, AR-3,

AR-4, AR-5, BR-1
BR-1
US-1, BR-1
US-1

A1

II-a, I-b

US-1, EC-1

A1, A2

I-a, II-a, I-b, Ic

US-1, EC-1; EC-2, EC-3

A1

I-a, II-a, I-b,

US-1, EC-1, PE-3, PE-5, PE-6

A2
A1

Ii-a
II-a, I-b

Br-1
US-1, EC-1

Linaje clonal definido por marcador

Gilchrist, 2001

Los anlisis con AFLPs dividen todos los aislamientos ecuatorianos en dos grupos principales.
Los linajes US-1 y EC-1 conforman un grupo, mientras que el complejo de aislamientos de S.
brevifolium y los aislamientos EC-3 conforman el otro grupo. Es posible que estos dos linajes
estn emparentados a una poblacin antigua de P. infestans que es propia del Ecuador o
inmigr mucho antes de que tuviera lugar el primer reporte de migraciones desde Mxico (Alder,
et al., 2002).
En el Per, Prez et al. (1997-98), encontraron cinco linajes clonales de P. infestans. Los
linajes clonales EC-1.2 (siete genes de virulencia) y PE-5 (Seis genes de virulencia),
representados cada uno por un solo genotipo con resistencia a metalaxyl y procedan de Cusco.
Los genotipos mas abundantes fueron del linaje EC-1, con 8 razas o patotipos diferentes, con 510 factores de virulencia, todos resistentes al metalaxyl.
Los genotipos de PE-3 con 8 patotipos posean 2-8 factores de virulencia, excepto uno de
Cusco, los dems procedan de Puno. Los genotipos mas complejos presentaron resistencia al
metalaxyl, mientras que los menos complejos (2-3 factores de virulencia) fueron susceptibles.
Los genotipos de US-1 slo se encontraron en Puno, con cinco razas, siendo la mas compleja la
1,2,3,4,7,8,10,11; con resistencia a metalaxyl, los otros cuatro genotipos presentaron entre dos y
tres factores de virulencia y fueron susceptibles (Prez et al., 1997-98).
Prez et al., (1997-98) concluyeron que los aislamientos peruanos de P. infestans con 5-10
factores de virulencia, presentaron resistencia al metalaxyl y los moderadamente resistentes o
susceptibles presentaron entre dos y siete genes de resistencia, razn por la cual, el aumento en la
complejidad del patgeno, podra estar relacionada con el desarrollo de la resistencia a las
fenilamidas. Sin embargo, en Chile, Rivera et al., (2002) observaron que los aislamientos con 2.1
genes de patogenicidad fueron resistentes a metalaxyl.

51

Reis, et al., (2002) estudiaron el estado y factores epidemiolgicos sobre las poblaciones de P.
infestans en Brasil, determinando que los componentes epidemilgicos son especficos a los
huspedes, dado que observaron valores altos para los parmetros de frecuencia de infeccin (IF),
rea de la lesin (LA), tasa de expansin de las lesiones y de esporulacin (SP), acompaadas de
corto periodo de latencia, cuando las inoculaciones de los tejidos huspedes se hicieron con sus
respectivos linajes clonales.
La temperatura afecta los componentes epidemiolgicos, as: Por encima de 22 C, los
aislamientos BR-1 (papa) no presentaron germinacin, a los 10 C con humedad en las hojas
durante 24 horas, presentaron el mayor nmero de lesiones y el mayor tamao de lesiones se
logr entre 15-22 C, a 27 C no hubo esporulacin, mientras que los aislamientos tipo US-1
(tomate) desarrollaron el mayor nmero de lesiones a los 22 C con humedad en las hojas por 24
horas, el mayor tamao de lesin a los 27 C y no se present esporulacin a los 10 C. Esto
indica la estrecha relacin con las condiciones ecoambientales de los cultivos huspedes (Reis, et
al., 2002).
En Chile se observ que todos los aislamientos de P. infestans procedentes de papa, presentaron
caractersticas propias del linaje clonal US-1, puesto que el tipo de apareamiento fue A1 y Gpi
86/100, pero todos mostraron resistencia al metalaxyl, con LD50 que oscilaron entre 200 y
400g/ml. Se detectaron 17 razas fisiolgicas que representaban el 50% de la poblacin de P.
infestans, con predominio de infeccin sobre los diferenciales R3 (75%) y R7 (56%). El 1,8%
(1/52) no infect los diferenciales.
La poblacin present patotipos muy simples (cada
aislamiento infect 1.8 diferenciales de papa) y el ndice de complejidad de las razas tambin fue
simple. Cada raza en promedio tuvo 2,1 genes r (Rivera et al., 2002).
En Mxico (subtrpico) y varios pases de zonas templadas, los cultivos de papa y tomate
generalmente comparten los ecosistemas y de manera general los aislamientos colectados en
papa, afectan en un grado similar a tomate, aunque dentro de los aislamientos hay diferentes
grados de patogenicidad (Garca, et al., 2000). Igualmente en Marruecos, observaron que los
aislamientos colectados en papa eran patognicos a tomate, pero los aislamirentos patognicos a
tomate, afectaban en menor grado a papa y fueron sensibles a Metalaxyl. Los aislamientos de
papa presentaron insensibilidad o sensibilidad intermedia (Sedegui et al., 2000).
Los linajes clonales o genotipos predominantes en Marruecos, fueron: MO-1 con aislamientos
colectados en papa (1996-97), con un tipo de apareminto A1 y con Gpi (100/100) y Pep (92/100);
MO-2 cuyos aislamientos fueron colectados en tomate (1997-1998), con apareamiento A1 y Gpi
(86/100) y Pep (92/100), todos sensibles al metalaxyl; MO-3 colectados en papa (1998) con
apareamiento A2 posiblemente introducido con semilla de papa, lo que indica un potencial para
la reproduccin sexual, pues en un mismo campo se encontraron ambos tipos de apareamiento,
pero no observaron indicios de que sta se haya presentado, Gpi (100/100) y Pep (100/100);
MO-4 colectados en papa (1998) con apareamiento A1 , Gpi (100/100) y Pep (100/100),
(Sedegui, et al., 2000).
En Uganda, el muestreo realizado entre noviembre del 2000 y mayo de 2001 y caracterizado
por Ochwo et al. (2002) present ausencia de diversidad gentica, pues sus caractersticas se
agruparon con las de los asislamintos US-1, lo que indica que la poblacin de P. infestans es de
naturaleza clonal y que el incremento de la severidad del patgeno, puede deberse a procesos de
mutaciones o autofertilizacin, pues slo se ha detectado el tipo de apareamiento A1, en el linaje
UA-1 encontrado en dicho pas.
52

En el Sur de Alemania Moeller et al.,(2002) observaron que la mayor parte de los aislamientos
colectados en papa y tomate de cultivos comerciales y huertas caseras, fueron A1, con haplotipo
mitocondrial (II-a), los cuales mediante el anlisis de los AFLPs, presentaron dos grupos,
separados por huspedes, uno correspondiente a papa y otro a tomate.
Cooke et al., (2002) evaluaron 500 aislamientos de P. infestans de papas comerciales y jardines
de Escocia entre 1995-1997 y encontraron que la quinta parte de la poblacin fue A2,
posiblemente restringida por la sensibilidad a las fenilamidas, ya que slo el 5% present
resistencia, mientras que el 51% de los aislamientos A1 fueron resistentes al metalaxyl. En los
tres aos evaluados se increment la poblacin con sensibilidad intermedia. Los AFLPs fueron
diversos, posiblemente por la recombinacin sexual y flujo de genes, con la respectiva formacin
de oosporas de larga vida, que dan un significado evolutivo y epidemiolgico del patgeno en
dicha zona, que debe ser analizado al momento de establecer las prcticas de manejo de la gota.
En la China, Zhang et al., (2002) evaluaron 210 aislamientos entre 1995 y 2001 y determinaron
que el 26.2% presentaban el tipo de apareamiento A2. A su vez los aislamientos de la provincia
del Norte presentaron una proporcin mayor de A2 que los del Sur y mayor resistencia al
metalayl. Se observ una proporcin alta de aislamientos con resistencia intermedia, lo que
indica un posible cambio paulatino de los aislamientos hacia las nuevas poblaciones, con flujo de
Norte a Sur.
En Nepal, Ghimire et al., (2002) evaluaron aislamientos procedentes de tres regiones
agroecolgicas: las colinas altas, colinas y las zonas bajas, entre los aos 1999-2000. Ellos
identificaron 30 razas de P. infestans entre 251 aislamientos de 36 campos, que representaban las
nueve pricipales zonas paperas, el tipo de apareamiento A1 se encontr en siete de las regiones,
en una regin se encontr el tipo de apareamiento A2 y en otra se encontraron ambos tipos de
apareamiento.
270 aislamientos fueron evaluadas para resistencia al metalaxyl presentando resistencia (10%)
sensibilidad intermedia (12%) y sensibilidad (78%). La resistencia se observ en todas las
regiones, pero con predominancia en las zonas donde histricamente se han utlizado los
fungicidas. Por la sonda RG57 se separaron 11 genotipos entre 280 aislamientos, los cuales
constituyeron los linajes NP-1, NP-2 y NP-3 con un 94% de la poblacin (Ghimire et al., 2002).
En todas las regiones se observ el haplotipo mitocondrial I-a; el haplotipo mitocondrial I-b,
slo se observ en dos sitios de colinas, correspondientes al tipo de apareamiento A1 y los
denominaron NP-3, el cual parece ser idntico en todos los loci a US-1, el cual parece ser su
origen. En las colinas fue donde observaron las mayores variaciones, mientras que en las colinas
altas se present la menor variacin, situacin similar a las observaciones hechas en Colombia
por Jaramillo et al, 2002. En las zonas bajas se present variacin en la sensibilidad al metalaxyl
y a la virulencia (Ghimire et al., 2002), confirmando las observaciones de Fontem y Tsopmbeng
Noumbo (2002), en Camern.
En Pakistn (Iram et al.,2002), Rusia y Bielorusia (Lavrova et al., 2002) los aislamientos de P.
infestans procedentes de cultivos de papa comercial, conformaron dos grupos claramente
definidos, en el primer caso por perfiles de protena y en el segundo por marcadores moleculares
SINEs (Short Interspersed Elements), que separ los aislamientos de Rusia de los de Bielorusia,
lo que indica una alta homogeneidad de las poblaciones dentro de dichos pases.
53

Thompson et al., (2002), evaluaron las poblaciones de P. infestans de cultivos de papa de Sur
Africa, para determinar la correlacin entre la severidad de la enfermedad causada por este
patgeno y el genotipo del mismo. Los 657 aislamientos evaluados presentaron el tipo de
apareamiento A1, conla isoenzima Gpi 86/100.
El patrn RG57 present las bandas
correspondientes al linaje clonal US-1 y el haployipo mitocondrial fue I-b, lo que indica que en
esta regin permanece el linaje clonal US-1 originalmente introducido.
En Camern, Fontem y Tsopmbeng Noumbo (2002), evaluaron aislamientos de P. infestans
procedentes de cultivos de arndano (Solanum scabrum), papa y tomate por la patogenicidad
entre s, observando que los aislamientos de arndano fueron igualmente infectivos a los tres
huspedes, mientras que los aislamientos de papa, fueron mas agresivos a papa que a arndano y
tomate, demostrando su preferencia por el husped original, comportamiento observado por
Botero y Gilchrist (1997). Los aislamientos de tomate de la provincia del oeste fueron
igualmente agresivos a papa y tomate, mientras que los de la provincia noroeste fueron mas
agresivos a papa que sobre tomate y arndano. Esto da indicios de que los aislamientos se
originaron en papa y se fueron adaptando a las dems especies a medida que fueron compartiendo
los nichos ecolgicos.
Al evaluar la susceptibilidad al metalaxyl, encontraron que el 48% fueron resistentes, el 24 %
intermedios y el 28% sensibles. Los aislamientos procedentes de tomate presentaron la mayor
poblacin con resistencia (64%), los de papa un 44% y los menos resistentes fueron los de
arndano (36%). Estos resultados sugieren que la patogenicidad y la sensibilidad al metalaxyl,
dependen del husped y origen geogrfico de los aislamientos de P. infestans (Fontem y
Tsopmbeng Noumbo, 2002).
Schiessenddopler y Molnar (2002) separaron los aislamientos de P. infestans de la regin del
sur del Sahara en frica, en dos grupos, uno conformado por los aislamientos de Kenia y
Uganda, con apareamiento A1, haplotipo mitocondrial I-b y sensibles al metalaxyl. En otro
grupo ubicaron los aislamientos de Etiopa, los cuales tambin fueron A1, pero con el haplotipo
mitocondrial I-a, con el 80% de ol s aislamientos sensibles al metalaxyl y el 19% resistentes. Se
encontraron lneas autofrtiles en aislamientos de las tres regiones, con mas alta tasa en Etiopa.
Es posible que los aislamientos de Kenia y Uganda pertenezcan a las poblaciones antiguas,
mientras que los aislamientos de Uganda se ubiquen en la nueva poblacin.
Adems de las poblaciones mencionadas Forbes et al., (1998), hace alusin a otras como: tres
entradas de Taiwan (TW) con un slo genotipo por RFLP y el tipo de aparemiento A1, Filipinas
(PH) con 28 entradas, igualmente con un solo genotipo RFLP y con apareamiento A1, mientras
que los de Holanda con 211 entradas, registraron 131 genotipos RFLP, 11 genotipos
aloenzimticos, 107 con apareamiento A1 y 99 con A2 y Polonia de 251 entradas presentaron 62
genotipos RFLP, 81 para aloenzimas, 189 con apareamiento A1 y 43 con A2 con una situacin
similar a la de Mxico (MX) con 318 entradas, con 102 genotipos RFLP, 93 genotipos
isoenzimticos, 194 con apareamiento A1 y 124 con A2. Se destaca la complejidad de los
aislamientos de los pases tradicionalmente paperos como Polonia y Holanda comparable a la de
Mxico, supuesto centro de origen del patgeno.

54

CAPTULO IV

BIOLOGA DE PHYTOPHTHORA INFESTANS

Dada la habilidad de P. infestans para la manipulacin bioqumica, fisiolgica y morfolgica en
su husped, a travs de la formacin de diversas molculas de virulencia o avirulencia, definidas
como efectoras, es necesario realizar estudios de genmica estructural, con el fin de entender
las bases moleculares de la patogenicidad de P. infestans, a travs de la identificacin de genes
que contribuyan a los procesos de infeccin, identificar la funcin de virulencia y avirulencia en
los huspedes y no-huspedes y los centros del control qumico. Adems permite entender la
estructura poblacional y su evolucin a travs del mejoramiento de las tcnicas de marcadores
moleculares y los marcadores que determinan los fenotipos (Kamoun, 2002).
Al ligar las secuencias a los fenotipos, Kamoun (2002) aplica el paradigma de genmica
funcional que le permite descubrir nuevos genes efectores y blancos a fungicidas, en P. infestans,
para lo cual desarrollaron herramientas computacionales, con el fin de minimizar los datos a
secuenciar y aplicar ensayos funcionales para validar las funciones predichas de los genes
candidatos, con los siguientes criterios de seleccin:
Genes que codifican para enzimas que degradan. Se predice que estos genes codifican para los
factores propios de la virulencia involucrados en la penetracin del tejido husped y la
degradacin.
Genes que codifican para protenas extracelulares. Estos estn probablemente involucrados en
el intercambio (cross-talk) con la planta husped.
Genes que son regulados durante la infeccin. Estos genes codifican factores propios de la
virulencia o patogenicidad y pueden servir como blanco de los fungicidas.
Genes que son conservados en los Oomycetes. Pueden servir como blanco de los fungicidas.
Este patgeno se propaga sexual y asexualmente.
La reproduccin sexual sirve para
proporcionar un estado de supervivencia de las esporas (oosporas) y generar nueva
combinaciones de genes. Sin embargo, este organismo ha tenido grandes explosiones de
poblaciones epidmicas por la reproduccin asexual, como parsito obligado, causando la gota o
tizn tardo en cultivos de papa y tomate principalmente en muchas partes del mundo, con
marcadas consecuencias econmicas y sociales.
Segn Turkesteen (S.F.) hay dos tipos de esporas, los mas frecuentes son los zoosporangios que
son hialinos y de pared delgada y tiene forma de limn, con un tamao de 21-38 nm x 12-23 nm
ubicados en las puntas de las ramificaciones del micelio. Otro tipo son las oosporas, cuerpos
redondos 24-46 nm, con paredes gruesas. Bajo condiciones secas, los esporangiforos empiezan
a retorcerse y el esporangio se desprende. Bajo condiciones de sequa los zoosporangios son de
vida corta, al igual que si no encuentran el tejido husped apropiado. La germinacin se da en
agua libre, de manera directa por la emisin de un tubo germinativo, pero comnmente se liberan
55

ocho (8) o mas zoosporas, las cuales nadan con la ayuda de los dos flagelos. Mas tarde estas
esporas se enquistan y forman el tubo germinativo para infectar.
Lees et al., (2002) establecieron una metodologa basada en PCR, para detectar P. infestans en
tejido y oosporas en el suelo, para lo cual disearon un par de primer especficos (INF FW2 y
INF REV) logrando como producto de la amplificacin un fragmento de DNA de 613 bp,
especfico de P. infestans, con una sensibilidad in vitro, para slo dos oosporas, dos eporangios,
cuatro zoosporas y 0,5 pg de DNA de micelio deshidratado y congelado. En tejido con o sin
sntomas se podra detectar con 10 mg de tallo, hoja o tubrculo y 10 oosporas podran ser
detectadas en 0,5 g de suelo.
Los estudios de sobrevivencia a largo plazo, de las oosporas (sexual) y esporangios y micelio
(asexual), realizados sobre hojas quemadas por la gota en el campo, permitieron detectar el
inculo de tipo asexual y sexual en al s hojas hasta 12 y 21 meses despus de la quemazn de las
hojas. La deteccin del inculo asexual fue menos efectiva nueve meses despus de la
quemazn, por posible degradacin del inculo no adaptado a la sobrevivencia por periodos
prolongados. Las pruebas de viabilidad mostraron que los esporangios de los apareamientos A1
y A2, no fueron capaces de causar enfermedad. Sin embargo, las oosporas recuperadas de hojas
de 21 meses despus de muertas infectaron hojas de papa y produjeron abundante micelio y
desarrollo de los esporangios (Lees et al., 2002).
Los cromosomas de P. infestans son muy grandes, Van der Lee et al., (2001), consideran que
pueden ser 2,5 veces el tamao de los de P. megasperma, con alrededor de 250 Mb en promedio
y un fragmento de AFLP puede tener 10 Kb. El mapa fsico del genoma de P. infestans viene
siendo desarrollado por Whisson et al. (2002) quienes indican que es el genoma mas grande y
complejo dentro del grupo de los oomycetes caracterizado hasta el presente, y contiene una alta
proporcin de DNA repetitivo.
Dado que los cromosomas varan de tamao entre las especies de Phytophthora, pueden ser
utilizados como caractersticas para la identificacin de especies. Aunque no se conoce su
nmero, se puede considerar que los grupos de ligamiento de I a X podran representar los
cromosomas, pues segn Samsome y Brasier (1973) un gametangio en la profase meitica,
contiene de 16-20 cromosomas, lo que indica que el nmero haploide de cromosomas es 9 + 1, los
cuales son difciles de observar por microscopio de luz y por lo tanto, se ha intentado determinar
el nmero de cromosomas por electroforesis de campo pulsado, sin xito (Van der Lee et al.
1997).
Quintero y Saldarriaga (1998), lograron separar cuatro bandas de DNA, mediante electroforesis
de campo pulsado, dos molculas de gran tamao y poca resolucin (5,7 y 5,2 Mb) aparecieron
en la zona cuatro del gel y otras dos bandas (1,64 y 1,057 Mb) con buena resolucin, pero con
baja intensidad en la zona tres del gel. Sin embargo, en el pozo del gel qued gran cantidad de
DNA sin separar, lo que indica la existencia de macromolculas mayores de 12 Mb, que no
pueden ser separadas por ese sistema. Es posible que el genoma posea mltiples copias de cada
cromosoma y que los cromosomas tengan mayor peso molecular, pues se ha reportado poliploida
en P. infestans y formas aneuploides (Samsome y Brasier, 1993).
En P. infestans se ha observado poliploida (2n; 3n; 4n) y aneuploida en aislamientos de
Europa y Estados Unidos. Adems se han reportado ncleos con diferente nivel de ploida en la
56

misma hifa (Brasier, 1992). En aislamientos mexicanos y britnicos se encontraron diploidas,

tetraploidas y mezclas de ploidas (Sansome y Brasier, 1993).
Sin embargo, Tooley y Therrien (1987) citados por Erwin y Ribeiro (1996) evaluaron el
contenido de DNA en zoosporas de aislamientos de P. infestans por citofluorometra con tincin
de Fulgen y concluyeron que los aislamientos mexicanos, se pueden considerar diploides y los de
fuera de Mxico presentan diferentes niveles de ploida, incluyendo aneuploidas.
Se presume que el ciclo de duplicacin del ncleo de las zoosporas que germinan de P.
infestans, requiere de 7 a 8 horas para un aislamiento diploide, pero de 10 a 12 horas para un
aislamiento tetraploide y dicho ncleo en el estado germinativo, equivale al estado G1 del ciclo
celular y la variacin del DNA entre aislamientos, se debe a los cambios en los niveles de ploida,
los cuales existen en la naturaleza y explican la complejidad gentica de este patgeno (Whittaker
et al., 1992, citados por Erwin y Ribeiro, 1996).
1. Reproduccin asexual
El esporangio (zoosporangio) es la unidad de reproduccin asexual, el cual puede ser producido
en abundancia en muchas especies huspedes: Una sola lesin puede producir hasta 300.000
esporangios en una noche. (Legard et al., 1995, citado por Smart, et al., 2000).
Los esporangios son estructuras hialinas con un tamao que oscila entre 18-28 nm por 25-35
nm, separados del micelio por una septa. Cada esporangio tiene de seis a diez ncleos. Se
desprenden fcilmente de los esporangiforos cuando maduran y son arrastrados por los vientos
que los dispersan y los cambios de humedad relativa que los ayudan a germinar en los tejidos de
las plantas huspedes, mediante la germinacin directa a travs de un tubo germinativo o
indirectamente al producir zoosporas (Smart, et al., 2000).
Segn Henfling, (1987) y Turkesteen, (S.F.) la germinacin de los esporangios es afectada por
la temperatura. As: temperaturas entre 18-24 C favorecen la germinacin directa de las
zoosporangios, mientras que temperaturas inferiores 12-16 C, estimulan la liberacin de las
zoosporas mviles (10 a 20), por el fraccionamiento del citoplasma multinucleado, en clulas
uninucleadas de paredes delgadas. Los tubos germinativos pueden penetrar directamente la
epidermis de las hojas y tallos (no requieren estomas) y en los tubrculos por las lenticelas o
heridas. En Brasil se observ una respuesta diferencial con relacin a las temperaturas ptimas
para germinar y esporular entre las poblaciones de P. infestans BR-1 de papa y US-1 de tomate
(Ries et al., 2002).
Los esporangios de los oomycetos estn programados ms para la produccin de zoosporas que
para la germinacin directa.
Cada zoospora produce dos flagelos, pero despus de
aproximadamente una hora de movilidad las zoosporas se enquistan (pierden los flagelos y
desarrollan una pared celular) y germinan por la produccin de un tubo germinativo. La
diferenciacin de las zoosporas requiere la sntesis de protenas pero no de DNA, mientras que la
germinacin directa de los esporangios va un tubo germinativo, es presumiblemente dependiente
de un evento de cascada, que involucra la degradacin de protenas innecesarias y de los RNAs
involucrados en zoosporognesis.
Adicionalmente la produccin del tubo germinativo
posiblemente requiere sntesis de novo de otros RNAs y activacin de la va metablica, tal como
la biognesis de la pared celular (Smart, et al., 2000).
57

Las protenas y genes involucrados en la germinacin directa e indirecta estn identificados.

Para 1998, haban entrado mas de 50 genes a la base de datos del banco de genes. Un estudio (no
publicado) realizado por Sandock y Fry, citados por Smart et al., (2000) para diferenciar las
libreras de cDNA de los estados de micelio, zoosporas y esporangios, revel 16 grupos de RNAs
diferentes, los cuales fueron expresados de manera abundante en los estados de esporangio y
zoospora.
En dicho estudio, nueve de los cDNAs mostraron secuencias de alta similitud a las de los genes
en los bancos, mientras que las otras siete no mostraron similitud. Los cDNAS que codificaron
para sorbitol deshidrogenasa y una especie de protena IpiB fueron expresados de manera
abundante en las zoosporas y los esporangios.
Paris y Lamattina (2002) observaron fluctuaciones en los contenidos de RNA y DNA durante el
ciclo de vida de P. infestans, relacionados con los procesos de la enfermedad. Encontraron altos
niveles de rRNA en las mitocondrias de las zoosporas (mitrRNA), en relacin con los rRNA del
micelio y de los cistos en la germinacin, los cuales pueden deberse al incremento en el nmero
de copias de genes, por el alto nmero de mitocondrias por clula, o al incremento en la tasa de
transcripcin del rDNA, o ambos.
Los experimentos indican que la cantidad de rDNA de la mitocondria es el doble del rDNA
citoplasmtico en el estado de zoosporas que en los cistos en germinacin y el micelio, lo que
puede explicar los altos niveles de rRNA mitocondriales en las zoosporas. Por el contrario, en el
proceso de germinacin de los cistos se conserva el contenido del rDNA mitocondrial, pero el
RNA baj al 50% con relacin a las zoosporas, lo que indica una alta actividad de la sntesis de
las protenas mitocondriales durante la fase de zoosporas, seguida por una reduccin regulada y
rpida de la actividad de las mitocondrias durante la formacin del cisto. Se propone que los
cambios en la expresin de los genes constitutivos de P. infestans, operan durante los primeros
estados de desarrollo de la gota y hacen parte de la respuesta de adaptacin metablica durante
los estados de infeccin, lo cual es vital para que el patgeno complete los ciclos de infeccin
(Paris y Lamattina, 2002).
2. Reproduccin sexual
Segn Smart et al., (2000), la formacin de oosporas es uno de los aspectos mas relevantes del
ciclo de vida de P. infestans. Como organismo heterotlico, son necesarios ambos tipos de
apareamiento denominados A1 y A2 para la reproduccin sexual. Las esporas se forman a
medida que cada tipo de apareamiento responde a la hormona inducida por el tipo de
apareamiento contrario, produciendo un oogonio y un anteridio (Galindo y Gallegly, 1960; Ko,
1988; Shaw, 1987). Al parecer el control gentico del apareamiento es muy dbil. Las oosporas
de autofertilizacin en organismos heterocigotos generan mayor variabilidad, condicin que
constituye un factor importante en la epidemiologia del patosistema (Smart et al., 2000).
La meiosis ocurre inmediatamente antes del desarrollo de los gametangios, representando el
nico estado haploide del ciclo de vida de este organismo. La cariogamia se da entre estos dos
ncleos haploides, formando una oospora diploide uninucleada de paredes gruesas, que puede
servir adems, como estructura de supervivencia para el invierno en las zonas templadas
(Sansome,1976; Drenth, et al., 1995, citado por Smart, et al., 2000).
58

Las Oosporas se forman cuando los micelios con distinto tipo de apareamiento A1 y A2, crecen
juntos y uno de ellos puede formar clulas masculinas (anteridio) y el otro clulas femeninas
(oogonio). El oogonio crece a travs del anteridio permitiendo la fertilizacin. El oogonio
fertilizado se convierte en una espora de descanso, que le permite resistir condiciones
desfavorables, como sequa, bajas temperaturas, ausencia de huspedes. Las oosporas forman un
tubo germinativo sobre el cual se forma un zoosporangio similar a los de la reproduccin asexual,
el cual germina y las zoosporas resultantes pueden iniciar un nuevo ciclo de vida (Henflig, 1987).
Segn Fabritius y Judelson 1997 citados por Smart et al.,(2000), la determinacin del tipo de
apareamiento est controlada por un solo locus, que en condicin homocigota produce el tipo de
apareamiento A2 y heterocigota el A1. Sin embargo, se ha observado desigualdad numrica en
las proporciones de A1 y A2 en las progenies en muchos apareamientos. La segregacin no
mendeliana, para varias caractersticas como Pep, es descrita corrientemente por la presencia de
un loci recesivo letal balanceado, cerca al locus de apareamiento, el cual se presenta en relaciones
de segregacin anormales (Fabritius y Judelson, 1997, Judelson et al., 1995), situacin tambin
observada por Oliva et al., (2002). Sin embargo, Van der Lee et al., (1997), no soportan la
hiptesis de la letalidad balanceada, segn su investigacin con la progenie del cruce 71.
Cuando se cruzan aislamientos de P. infestans diploides con tetraploides dieron progenies
diploides, triploides y tetraploides y al cruzar tetraploides entre s, la progenie present
caractersticas de diploides y tetraploides. Las oosporas de estos cruces presentaron mas bajo
porcentaje de germinacin, que cuando se cruzaron con diploides, cuya progenie fue diploide y
result ser hbrida. Qu impacto tienen estas progenies en campo? (Wittaker et al., 1991, citado
por Erwin y Ribeiro, 1996).
En el noroeste y este de Europa, las poblaciones viejas de reproduccin asexual, estn siendo
reemplazadas por poblaciones con mezclas A1/A2, genticamente diversas por la reproduccin
sexual, observadas en Asia y posiblemente en Africa y Suramrica, pero no existen medidas
especiales que interfieran con la produccin y sobrevivencia de las oosporas, lo que significa un
alto potencial de reproduccin por esta va, especialmente en las zonas donde predominan las
socas o residuos de cosecha en el campo y las condiciones ambientales (zonas con estaciones) lo
favorezcan, pero es independiente del grado de resistencia de la variedad. Las oosporas son
susceptibles a bajas dosis de diferentes fungicidas, al igual que con temperaturas altas y
saturacin del suelo (Flier, et al., 2002).
Donde coexisten los tipos de apareamiento A1 y A2, se pueden observar oosporas en las hojas
de papa que crecen en el campo, indicando que la recombinacin sexual puede generar mas
variacin y un banco de oosporas en el suelo, razn por la cual Shaw y Wattier (2002) consideran
que es necesario identificar y cuantificar los factores involucrados en la evolucin del patgeno
como: cambios climticos; mtodos de cultivo de los huspedes; sexualidad; parasexualidad;
migracin de otras poblaciones sobre papa y otros huspedes; deriva (rumbo) gentica; mutacin.
Un estudio sobre la preferencia sexual de P. infestans en cultivos en agar, revela que se podran
producir entre 5-95% de oosporas dependiendo de los aislamientos parentales involucrados en el
cruce. El origen del parental fue determinado por coloracin debida a la glucuronidasa (GUS),
que revel que las oosporas fueron derivadas de un solo parental. Ahora no se sabe si las dems
oosporas se produjeron por autofertilizacin, apomixis o una combinacin de ambos procesos,
puesto que las oosporas no germinaron. (Judelson, 1997a citado por Smart et al., 2000).
59

En Gran Breyaa, Earnshaw y Shattock (2002) realizaron cruces con dos parentales A1 y un
parental A2, los cuales produjeron 144 y 146 ooporas respectivamente. Detectaron un 10% de
autofertilizacin y evaluaron la patogenicidad en 7 variedades, en las cuales observaron que 15%
y 19 % de las oosporas de los respectivos cruces no fueron patognicas, mientras que el 22% y
6%, fueron mas patognicas que los aislamientos parentales. La variedad menos resistente
present la misma agresividad en los parentales y las progenies.
Stromberg, et al., (1999) produjeron Oosporas de dos aislamientos (A1 y A2) de Escandinavia,
las cuales mezclaron con talco y secaron por siete semanas, al cabo de las cuales fueron
inoculadas en diferentes concentraciones en suelo estril, en el cual se sembraron plantas de papa
de la variedad Bintje, procedentes de cultivo in vitro y se incubaron por un mes a 15C y 16 horas
de luz, periodo en el cual se desarrollaron lesiones de gota en tallos y tubrculos con 250 y 400
oosporas/ml de suelo. El patgeno pudo ser aislado de estos tejidos.
En los pases nrdicos se estudi la frecuencia de la formacin de oosporas, en foliolos que
tuvieran dos o mas lesiones. Las lesiones que coalescieron fueron analizadas y congeladas y las
que no se juntaron, fueron incubadas hasta que se juntaran. Se detectaron oosporas en 10 campos
de Suecia y 13 de Noruega. La frecuencia de oosporas fue mayor con la incubacin. La
reproduccin sexual en estos pases, incrementa la variabilidad gentica y la posibilidad de
sobrevivencia en el suelo (Dahlbery et al., 2002).
Medina y Platt (1999) estudiaron la viabilidad de las oosporas bajo las condiciones de campo en
el noreste de Amrica del Norte y encontraron que despus de siete meses de exposicin a
condiciones de invierno la viabilidad de las oosporas enterradas en la Isla Prncipe Eduardo (PE)
Y New Brunswick (NB) oscil entre 2.5-13% y 1-28% respectivamente con la prueba de
plasmlisis y con la prueba de bromuro de tetrazolio vari entre 13-44% y 2.5-40%. En otros
estudios en la isla PE la viabilidad de oosporas vari entre 5-15% doce meses despus de
enterradas.
En condiciones controladas de laboratorio, Meedina y Platt (1999) observaron que la menor
viabilidad (22%) de las oosporas, se presentaba a la mas alta temperatura evaluada (36 C) y la
germinacin fue relativamente baja (6-19%), pero suficiente para demostrar que las oosporas son
una fuente de inculo importante, pues fue estimulada por extractos de tallos y tubrculos
adicionados al sustrato. Por otro lado, las oosporas que se formaron en los tallos de papa y el
suelo, fueron infectivas a discos de hojas, siete meses despus de permanecer en el suelo. Estos
autores no indican el origen de la oosporas (cruce sexual, apomixis o autofertilizacin)
Oliva et al, (2002) evaluaron el potencial sexual in vitro de aislamientos representativos de las
diferentes poblaciones ecuatorianas (A1: EC-1 de papa y S. colombianum, US-1 de tomate, EC-3
de S. betaceum y como A2: EC-2 de S. brevifolium especie silvestre) de P. infestans, y
encontraron bajo porcentaje de germinacin de oosporas, posiblemente por una barrera para la
reproduccin sexual, entre poblaciones adaptadas a huspedes diferentes, ya que solo un cruce
produjo suficiente progenie para la evaluacin (EC-1 x EC- 2) en medio con agar.
El cruce arriba sealado se produjo entre el aislamiento A1 perteneciente al linaje clonal EC-1,
aislado de Solanum colombianum con un haplotipo mitocondrial II-a y el A2 (poblacin EC-2) de
S. brevifolium, con un haplotipo mitocondrial I-c. La progenie conformada por 23 oosporas que
germinaron, pareci ser hbrida, aunque no todos los marcadores presentaron las segregaciones
esperadas. Esto indica que existe un riesgo de recombinacin entre genotipos que coexisten,
60

aunque filogenticamente sean distantes, pues se destaca que la mayor progenie se dio entre
aislamientos de dos especies de Solanum silvestres y Brasier et al., 1999 citado por Oliva et al.,
reportaron un nuevo hbrido interespecfico de Phytophthora que afecta el sauce (Alnus spp).
La fertilizacin cruzada parece ser mas efectiva entre los aislamientos procedentes de una
misma especie, que entre aislamientos procedentes de diferentes especies, segn las
observaciones de Oliva et al., (2002). Muchos de los aislamientos exhiben una preferencia
sexual, produciendo de manera predominante, gametangios masculinos si los aislamientos eran
A2, o femeninos si los aislamientos eran A1.
Cuando el anteridio y el oogonio se forman en el mismo parental (adems son auto frtiles o
apomcticos), el nmero de la progenie tiende a incrementarse, si las oosporas se forman muy
cerca al parental, lo cual puede deberse a una mas alta proporcin de micelio de uno de los
parentales. Pero la ocurrencia de esta progenie no hbrida, vara con el tipo de aislamientos
utilizados en el apareamiento. Ahora se sabe que existen tres mecanismos diferentes para la
produccin de oosporas en P. infestans: Apomixis, autofertilizacin y fertilizacin cruzada
(Judelson, 1997 a, citado por Smart et al,. 2000).
Las progenies apomcticas deben tener la misma patogenicidad y agresividad del parental, dado
que son idnticas y por lo tanto pueden tener una ventaja por la eficacia biolgica sobre las
progenies autofertilizadas o de cruces, cuyas consecuencias epidemiolgicas se desconocen. En
trminos generales las lneas apomcticas han sido regeneradas de muchos aislamientos apareados
en el laboratorio. Lo que ha sido determinado por alelos aloenzimticos, el tipo de apareamiento
y el tipo de huellas (finger printing) del genoma nuclear (Smart, et al., 2000).
La autofertilizacin en P. infestans es muy comn y puede ser iniciada por muchos
mecanismos. En un estudio de laboratorio se encontr que los linajes clonales US-7 y US-8
fueron autofrtiles cuando crecieron sobre agar-V8. La progenie de las oosporas de una de estas
lneas fueron germinadas y parecan haber sido producto de un evento meitico, mas que una
apomixis. Un estudio mas extenso de autofertilidad, ha mostrado que el 96% (n=47) de las lneas
con tipo de apareamiento A2 y 6% (n=69) de lneas A1, fueron autofrtiles en agar-V8. ( Smart y
Fry, no publicado, citado por Smart et al., 2000).
Diversas investigaciones han mostrado diferentes factores que inducen la formacin de
oosporas en especies de Phytophthora heterotlicas, que indica que el control gentico sobre el
apareamiento puede ser dbil. Dichos factores son: edad del cultivo, heridas, presencia de
Trichoderma viridae, exudados de plantas huspedes, niveles de calcio, fungicidas.
La
importancia relativa de las oosporas producidas por los diferentes mecanismos es completamente
desconocida.
Es posible que las progenies de origen apomctico, sean mas adaptadas
biolgicamente, que las de autofertilizacin o fertilizacin cruzada; o que la autofertilizacin de
este organismo altamente heterocigoto, pueda producir una progenie genticamente diversa y
epidemiolgicamente importante. As, las oosporas de cada uno de los tres procesos, pueden
tener un determinado papel en las relaciones husped-patgeno (Smart, et al, 2000).
3. Ciclo de Vida de Phytophthora infestans
La figura 3 presenta el ciclo de vida con los respectivos mecanismos de reproduccin sexual y
asexual: Este ltimo mecanismo es mas frecuente.
61

Figura 3. Ciclo de vida de Phytophthora infestans.

Tomado de : http://www.cals.ncsu.edu/plantpath/Faculty/ristaino/graphics/fig1.gif

62

CAPTULO V

FUENTES GENTICAS DE RESISTENCIA A LA GOTA CAUSADA POR P.

INFESTANS
Se considera un husped resistente cuando no puede ser atacado por el patgeno. Sin embargo,
en la relacin husped-patgeno, la resistencia puede ser de varios niveles y algunos individuos o
clones, pueden estar mas afectados que otros. La resistencia puede ser total (100%), o parcial
(Turkensteen, S.F.).
Ha habido un xito limitado en la resistencia de variedades de papa a P. infestans, a pesar de
que existe una amplia reserva de genes en especies silvestres de Solanum, dado que se conoce
muy poco sobre la fisiologa y las bases moleculares de la resistencia (Vleeshowuers, et al.
2000). Otro aspecto es la complejidad del patgeno, pues los aislamientos a evaluar deben ser
representativos de la poblacin de P. infestans en por lo menos 12 a 20 aos. Se cuestiona si las
pruebas deben ser hechas con un solo aislamiento compatible a todas las fuentes de resistencia
disponibles. Es necesario readaptar los procedimientos de seleccin por resistencia, acompaada
de una base de datos y una coleccin de aislamientos debidamente caracterizados, para las
pruebas de seleccin de materiales mejorados ( Turkensteen y Flier, 2002b).
Segn Wastie (1991) los mejoradores necesitan con urgencia, la informacin concerniente a la
localizacin de los genes responsables de los diferentes componentes de la resistencia de campo,
para lo cual la gentica detallada y el anlisis estadstico de los diferentes componentes de la
resistencia, pueden ayudar en la localizacin e identificacin de genes de resistencia que operan
en diferentes estados del proceso de infeccin y adems se incrementan los niveles de
resistencia, por la combinacin apropiada de genes. En la actualidad hay buena parte de esta
identificacin (Gebhardt, 1999; Vleeshowuers, et al., 2000; Smart et al., 2000).
Hay diferencias de criterio entre los grupos que defienden la utilizacin de materiales vegetales
con genes R los que prefieren que estn libres de los genes R. El hecho es que los materiales con
genes R pronto o mas tarde pierden la resistencia por compatibilidad con las poblaciones de P.
infestans predominantes. Segn Turkensteen y Flier (2002b) existen tres normas bsicas sobre la
resistencia a este patgeno: 1. Los genes R pueden contribuir a la resistencia parcial durable a
travs del ligamiento o por efectos pleitrpicos. 2. Hay evidencia de que el mejoramiento por
genes R Puede producier variedades muy susceptibles , como la variedad Vertifolia que posee
cuatro genes R (R1, R2, R3, R4). 3. Hay una slida evidencia de los buenos niveles de
resistencia despus de la remocin de los genes R de las poblaciones mejoradas.
Estas tres reglas parecen ciertas, pero no todas al mismo tiempo, en el mismo clon o con la
misma fuente de resistencia. La experiencia y malicia del mejorador son muy importantes para
definir los procedimientos, adems de los recursos econmicos, pues la resistencia tiene una alta
prioridad, para contrabalancear el incremento de la agresividad de las nuevas poblaciones de P.
infestans (Turkensteen y Flier, 2002b)
Umaerus et al., (1983) citado por Wastie (1991) opinan que un mayor conocimiento de la
bioqumica de los mecanismos de resistencia y sobre el cual todava hay grandes falencias, podra
63

ayudar al desarrollo de las tcnicas de seleccin. Las tcnicas in vitro para la produccin de
haploides, combinadas con el tamizado in vitro, favoreceran el proceso de mejoramiento.
Hermsen (1987) citado por Wastie (1991), seala que el mejoramiento a nivel diploide tiene
muchas ventajas, dado que se puede utilizar mayor diversidad de parentales con amplia base
gentica, permite mejor entendimiento de la herencia de caracteres especficos, por la evaluacin
a nivel diploide y el incremento de la resistencia a nivel de poligenes, posibilita la conversin al
estado tetraploide por el uso de gametos 2n y el mejoramiento de tetraploides por la fijacin de
caractersticas deseables.
Dicho investigador recalca que es difcil determinar la mejor estrategia para el mejoramiento
para una resistencia alta y estable, debido a la asociacin de la resistencia poligentica con las
caractersticas de madurez tarda por la asociacin de los poligenes con los genes R o porque la
resistencia polignica aparentemente no se expresa en gran extensin en el follaje de variedades
tempranas.
El programa de mejoramiento Sueco, (Umareus et al.,1983, citados por Wastie, 1991), ha
logrado separar la asociacin entre madurez y resistencia. Gebhardt (1999), seala que es posible
con ayuda de los marcadores de DNA, identificar alelos superiores para resistencia cuntitativa,
separados de los ligados a la maduracin de las plantas y determinar en una poblacin hbrida, los
genotipos poco frecuentes con alelos QTL superiores para la resistencia a tizn tardo. Unos
pocos QTLs para resistencia a gota, estn relacionados con los genes de las protenas (PR)
asociadas a la patognesis.
Mendoza (1997) citado por Waste (1991) seala que el programa de mejoramiento del CIP,
viene utilizando la resistencia del germoplasma de Mxico y Sur Amrica, a travs de cuatro
ciclos de seleccin recurrente de fenotipos. Las pruebas de campo para tamizar las poblaciones
en el estado de plntulas, produjeron un 75% de clones resistentes, despus de cuatro aos de
evaluacin en Colombia, la mayora de las selecciones fueron tambin resistentes en Toluca
Mxico. Las caractersticas agronmicas, incluyendo la adaptacin a la longitud del da y el
periodo de maduracin, tambin fueron mejoradas. Estos parentales sobresalientes son una
fuente de germoplasma valioso, para los programas de mejoramiento de otros pases.
Al comparar 10 clones sin genes mayores R (poblacin B del CIP) y 10 variedades de papa
mexicanas con los genes R y menores (poblacin A del CIP), bajo las condiciones del valle de
Toluca, no se observaron diferencias entre ambas poblaciones, a pesar de que se presentaron
condiciones climticas favorables. Al final del periodo vegetativo se observ que las poblaciones
A y B presentaron menos de 25% de severidad, mientras que en la altamente susceptible, Alfa, se
present el 95% de severidad de la gota. Estos resultados sugieren que los genes con resistencia
de campo operan de manera similar cuando estn solos o en combinacin con los genes mayores.
Es difcil separar los genes R porque generalmente estn ligados, adems las evaluaciones para
seleccionar las poblaciones B, se hicieron con base en la imposibilidad de la raza o de infectar
cualquier material con los genes R conocidos, pero existe la posibilidad de que existan otros
genes R ligados a los genes menores en la poblacin B (Rubio-Covarrubias, et al., 2002).
Los programas de mejoramiento necesitan pruebas de progenie, con amplio juzgamiento de los
parentales potenciales de alto valor por resistencia fenotpica y los productos de dicho
juzgamiento, proporcionan materiales valiosos para la seleccin por resistencia a gota y otras
caractersticas, permitiendo una escala de tiempo y recursos para lograr los objetivos del
64

mejoramiento. Se debe coordinar la provisin de facilidades de materiales con resistencia,

cuarentenas y pruebas de evaluacin en el mundo sobre una base recproca, pues para determinar
si la resistencia tiene una base estable, deben hacerse evaluaciones en varias localidades,
incluyendo Mxico e impulsar el trabajo multidisciplinario, que permita poner las nuevas
tecnologas al servicio de la agricultura (Wastie, 1991).
Es necesario continuar con las investigaciones sobre la relacin entre la resistencia del follaje y
la de los tubrculos, los factores bioqumicos y fisiolgicos que influyen en la infeccin y el
anlisis gentico de sus componentes los cuales a su vez pueden facilitar el tamizado para los
factores de pre y pospenetracin y la posibilidad de disear pruebas moleculares (Wastie,1991).
Estrada (2000) enfatiza en la utilizacin de S.stoloniferum como fuente de resistencia al tizn
tardo, en cruzamientos con S. phureja. Aunque la mayora de los clones producen tubrculos
muy pequeos en la F1, algunos presentan buen tamao y buena forma. Aunque los hbridos son
triploides, (2n=3x=36) tiene 5-20% de polen funcional que origina gametos (2n=2x=24) para
fertilizar cultivares tetraploides y obtener una segunda generacin de hbridos con buen
rendimiento, buena forma y tamao de tubrculos, resistencia horizontal a la gota y bajo
contenido de alcaloides.
En cruzamientos de S. stoloniferum (clones PI 220552, 160225 y 230490) con S. brevidens se
obtuvo hbridos triploides con polen de baja fertilidad (2%) los cuales se cruzaron con clones
avanzados de tetraploides y se obtuvieron clones promisorios para caracteres agronmicos, con
resistencia a gota, PLRV y PVY. Adems, fue posible acortar los ciclos de cruzamiento para
obtener clones de calidad (dos, tres generaciones), reducir las poblaciones necesarias para
transferir los genes deseados en las especies silvestres y explotar los genes mas convenientes de
las especies S. stoloniferum, S. brevidens, S. avilesii, S. brachycarpum, S.bulbocastanum,
S.cardiophylum, S. demissum, S.hougasii, S. iopetalum, S. polytrichon, S. polyadenium, S.
verrucosum, S. tuberosum, S. andigena, S. phureja, S. stenotomum y S. juzepczukii (Estrada,
2000).
El cruce con especies diploides como S. phureja con dihaploides de S. tuberosum, resulta en el
desarrollo de partenognesis del ncleo del vulo y da origen a plantas que pueden tener vulos
frtiles y ocasionalmente polen frtil, lo que facilita la seleccin especialmente la determinada
por poligenes. Sin embargo, se pueden presentar componentes genticos aditivos y no aditivos,
que resulta en altos niveles de resistencia a la gota en los fololos. Un parental que se comporta
aditivamente en un cruce, puede no serlo en otro (Wastie, 1991).
Bolvar y Lpez (1995) evaluaron 195 clones diploides de papa derivados de Atzimba (variedad
tetraploide mexicana), por resistencia a P. infestans y produccin de polen 2n, despus de dos
evaluaciones sucesivas, seleccionaron 32 clones que producan polen 2n y de stos 29
presentaron resistencia moderada a gota. Este material fue producido por el CIP y evaluado en
Rionegro, Colombia, Centro Regional Experimental La Selva.
1. Resistencia Especfica a Razas de P. infestans
En la interaccin S. tuberosum/Phytophthora infestans, el tipo de resistencia mas comnmente
estudiado, es la resistencia especfica a razas, la cual est gobernada por un slo gen resistente y
dominante (gen R), y por lo tanto, efectiva contra una determinada raza del patgeno y se rompe
65

facilmente por una evolucin rpida del patgeno, por lo que se hace poco durable en el campo.
Segn Estrada (2000), estos genes R fueron aislados de la especie S. demisum, por Salaman en
Inglaterra y Reddick en Estados Unidos en 1910s, los cuales posibilitaron nuevas variedades con
resistencia completa, pero slo se mantuvo en los primeros aos, posiblemente por la variacin
sexual o parasexual del patgeno
La resistencia especfica es manifestada por una respuesta o reaccin de hipersensibilidad (HR)
rpida, que produce una necrosis localizada en el sitio de la infeccin, lo que restringe el
patgeno al sitio de la lesin, impidiendo su expansin a otros tejidos de la planta, debido a que
el producto de un gen de resistencia dominante de la planta (R), interacta especficamente con
un elicitor especfico de la raza del patgeno, producto de un gen genticamente dominante de
avirulencia Avr que resulta en el estmulo de una reaccin de hipersensibilidad (Cornelissen y
Melchers, 1993).
Las proteasas extracelulares ricas en serina inician la reaccin necrtica sobre las hojas de papa
(respuesta hipersensible) y por anlisis estadstico del banco de datos de la Universidad de
Agricultura de Wageningen, encontraron un clon que tiene alta homologa con las proteasas
asprticas, las cuales pueden elicitar la necrosis en las hojas microinyectadas y las clulas
muertas sobre cultivos celulares de papa (Paris y Lamattina, 2002b).
En el CIP se ha venido evaluando la introduccin de genes que inducen la formacin de
protenas antifngicas, como la glucanasa (PR-2) de papa, el gen de la osmotina de S.
commersonii y los genes de las lisosimas del bacterifago T y bovino, en diferentes
combinaciones (simple, dobles y triple gen) para transformar los tejidos de dos variedades de
papa y se obtuvo callos y tejidos transformados con uno o dos genes, pero no con el constructor
de tres genes (Guevara-fugita et al., 2002).
Igualmente estn tratando de aislar genes como la defensina de Lepidium meyenii, que codifican
para protenas relacionadas con la patognesis y pertenecen a la familia PR-12, las cuales son
ampiamente distribudas dentro de las plantas como trigo, cebada, arveja y varios miembros de la
familia Brassicae. De los cuatro tipos de defensinas que existen en las plantas slo las del grupo I
(defensinas morfognicas) y las del grupo II (defensinas no morfognicas) tiene propiedades
antifungosas y se espera poder evaluar contra la actividad de varios patgenos de papa,
incluyendo P. infestans (Guevara-fugita et al., 2002).
Wastie (1991) indica que el programa de mejoramiento gentico de Alemania, utiliz
materiales producidos por cruces con S. demissum, dando origen al material W-Rassen del cual
se obtuvo en 1934, la primera variedad resistente a la gota Sandnudel, y luego se lleg a
obtener un 83% de las variedades con genes de S. demissum, al igual que Escocia, en donde
tambin se utiliz S. phureja. En Europa y Norte Amrica se utilizaron adems S. chacoense y S.
verrucosum. La variedad Empire de Estados Unidos liberada en 1945, proceda de S.
demissum, seguida por variedades producidas por retrocruces con S.maglia y S. fendleri. La
variedad Kennebec, obtenida en 1948, proceda del material denominado W-Rassen.
En Rusia han identificado que S.polytrichon, S. verrucosum, S. pinnatisectum de Mxico y S.
simplicifolium, S. berthaultii y S. gourlay de Suramrica, son buena fuente de resistencia
horizontal y representan una fuente poco utilizada para los programas de mejoramiento gentico,
sin olvidar que se reduce la produccin (Kolovayev, 2002).
66

Estrada (2000) seala que para 1932, se observaron infecciones fuertes en los nuevos hbridos,
debido a que el patgeno empez a seleccionar sus propios patotipos o razas, por lo cual Black et
al., (1953) desarrollaron un esquema internacional para explicar la resistencia, basado en los
genes del husped que interactuaban o correspondan a los genes del patgeno, de tal forma que
P. infestans desarrollaba genes recesivos, en la medida que se incorporaban genes resistentes en
los nuevos cultivares de papa. As, el genotipo R1 de un cultivar se infectaba con el patotipo
simple r1, y con los mas complejos 1.2, 1.3, 1.2.3, y dems, pero no con los patotipos 2.2, 2.4,
2.3.4... con mayor variacin en Mxico, donde se han encontrado los dos tipos de apareamiento
A1 y A2. Sin embargo, estos patotipos tambin se pueden formar en ausencia de genotipos de
papa.
Segn Wastie (1991) S. demissum presenta los dos tipos de resistencia, la general o de campo,
que depende de la accin combinada de muchos genes y la resistencia especfica a razas, cuya
base gentica es la relacin gen-a- gen, propuesta por Flor en 1958. Segn Estrada, (2000) en
dicha especie hexaploide, se reconocieron 11 genes de resistencia, los cuales actan por
condicionar una respuesta necrtica hipersensible, en las clulas invadidas por el patgeno, la
cual est conectada al menos en los tubrculos, con la formacin de fitoalexinas como risitina,
fituberina y raras veces solavetivon y lubimina, las cuales son sesquiterpenoides de bajo peso
molecular, formados en la va metablica acetato-mevalonato, la cual termina con la produccin
de a-chaconina, a-solanina y otros
Ross (1986) citado por Estrada (2000) dice que la sntesis de las fitoalexinas, est mediada por
la formacin de elicitores-cidos grasos insaturados de la pared celular del patgeno. Los
elicitores reaccionan con la lectina de la papa, glicoprotenas ricas en hidroxiprolina y otros
fragmentos similares de la pared celular, que sirven como receptores de las clulas del husped,
induciendo la produccin de fitoalexinas, las cuales se acumulan en las clulas, que mueren junto
con las del patgeno invasor, dando como resultado una reaccin de incompatibilidad. La
sntesis es inhibida cuando los glucanos (cadenas de glucosa, especficos y solubles en agua)
formados por patotipos especiales, bloquean los sitios receptores, reduciendo o impidiendo la
formacin de terpenoides txicos, dndose una reaccin de compatibilidad.
Al parecer los productos del husped sintetizados por el gen R, controlan los sitios receptores.
Cada patotipo posee un sistema patognico no especfico para inducir la sntesis de fitoalexinas y
por otro lado, un sistema especfico para bloquear la sntesis, si encuentra receptores especficos
en el husped. Parece que la reaccin de hipersensibilidad no est relacionada con la acumulacin
de fitoalexinas. (Ross, 1986, citado por Estrada, 2000).
Vleeshowuers, et al., (2000b) opinan que la principal respuesta de defensa durable de las
plantas al patgeno es la HR, dado que est asociada con resistencia parcial y resistencia total
(no husped) a P. infestans, tanto para las especies de Solanum spp., Nicotiana tabacum y
N.rustica, como para las no solanaceae A. thaliana, R. sativa, y M. Jalapa, posiblemente por una
cascada de seales iniciada por genes R, que se traduce en una respuesta HR. Igualmente la
variedad antigua Robijn de papa, presenta resistencia parcial durable.
Los resultados de la investigacin de Vleeshowuers, et al., (2000b) indican que la diferencia
entre compatibilidad e incompatibilidad es del tipo cuantitativo mas que cualitativo (genes R).
Sin embargo, el modelo clsico de un gen R de resistencia del husped por un gen Avr de
avirulencia en el patgeno, se puede utilizar para explicar el caracter cuantitativo de la resistencia
parcial. Existe la posibilidad de que un gen dbil R-10 de la papa, intercte con un gen Avr y
67

desarrolle niveles alterados de la resistencia, que permiten alguna colonizacin del patgeno bajo
ciertas condiciones. Estrada (2000) seala que la combinacin de genes R con poligenes o genes
menores en el hbrido de S. demissum MPI 19286, que tiene el gen R10, da origen a una
resistencia de campo muy alta, segn las investigaciones realizadas por el CIP en 1983.
Por otro lado, los productos de los genes Avr del patgeno pueden codificar ligandos dbiles,
segn lo observaron Kamoun et al., (1999b) (citado por Vleeshowuers, et al., 2000a) la expresin
de genes Avr, con una actividad reducida del elicitor en plantas de papa transgnicas con
resistencia al virus X, dieron una respuesta de mas baja resistencia en tabaco. Estos datos
indican que los genes R tienen un papel potencial dentro de la resistencia parcial, por lo tanto los
mejoradores, no deben seleccionar variedades sin los clsicos genes R, para lograr resistencia
durable al tizn tardo, al igual que la utilizacin de genes de resistencia de los no huspedes. Al
respecto hay criterios encontrados.
La actividad diferencial de la respuesta HR entre variedades R1 y R10 puede sugerir la
existencia de umbrales diferenciales entre R1 y R10 para activar la HR. Un efecto de dosis en los
receptores o en los genes R, puede incrementar la sensibilidad del patgeno y luego la resistencia.
Las plantas duplex de plantas tetraploides que contienen dos genes R de la misma clase
(R1R1r1r1), fueron mas resistentes a P. infestans que los simplex (R1r1r1r1). Pero no se
puede excluir la presencia de otros genes R desconocidos (Vleeshowuers, et al., 2000b).
Se demostr que los genes de avirulencia Avr (reportados despus de 1980s) en la mayora de
los casos se presenta con un gen especfico de resistencia R del husped. La descendencia de
ambos padres virulentos (rr x rr = F1 rr) genera hijos virulentos. Pero en ocasiones se han
presentado descendientes avirulentos, razn por la cual el modelo de que la avirulencia del
patgeno, est relacionado con la dominancia del husped, es inadecuado o tiene excepciones
(Vleeshowuers, et al., 2000).
Hasta el presente han sido mapiados varios genes R. As: R1 en el cromosoma 5, R2 en el
cromosoma 4, R3, R6 y R7 en el cromosoma 11: recientemente se ha aislado un nuevo gen R de
S. berthaultii en el cromosoma 10. En tomate se aislaron los genes Ph-1 en el cromosoma 7 y Ph2, sobre el brazo largo del cromosoma 10. El mapa gentico de papa es altamente colineal con el
de tomate (Smart et al., 2000).
El gen R1 es miembro de una familia de genes que codifica para una protena de 1293
aminoacidos, con una masa molecular de 149,4 Kda, y pertenece a la clase de genes para
resistencia a patgenos, dicha protena es alta en leucina (Gebhardt, 2003). Al parecer hay dos
QTLs en el cromosoma V que no se pueden distinguir: uno para el tipo de madurez del follaje y
el otro para la resistencia a P. infestans, o existe un slo gen con un efecto pleiotrpico sobre
ambas caractersticas. Los dos QTLs para resistencia a gota (en los cromosomas 3 y 5) muetran
una importante interaccin episttica, sugiriendo que los QTLs para resistencia afectan la
expresin el uno del otro (Visker et al., 2003).
2. Resistencia Parcial o Cuantitativa (Resistencia de Campo)
En contraste con los grandes efectos asociados a la resistencia con genes R, se presenta una
resistencia producto de la suma de muchos efectos pequeos, los cuales probablemente estn bajo
control polignico, denominada resistencia parcial, de campo o resistencia no especfica y se
68

atribuyen a las expresiones del fenotipo en las parcelas de campo, contribuye a la reduccin de la
enfermedad, pero es difcil de analizar por tcnicas mendelianas e incluso por marcadores
moleculares, dada la naturaleza poligentica de la resistencia y la poliploida y heterocigosis de la
papa.
Hay consenso de que la resistencia cuantitativa generada por genes menores debe ser utilizada
para lograr una resistencia durable contra P. infestans, demostrado por mas de 30 aos en
Holanda con las antiguas variedades y en regiones tropicales donde la gota es endmica, puesto
que se presentan rangos de infeccin estables a la gota. En el CIP se hizo mejoramiento
inicialmente con materiales con genes R y luego con fuentes libres de genes R, presentando un
incremento significativo de la frecuencia de genes con resistencia a niveles mas altos y con
caractersticas agronmicas de importancia econmica superiores, cuyos materiales deben
continuar siendo evaluados en diferentes condiciones ambientales y poblaciones de dicho
patgeno (Landeo, 2002).
Segn Wastie (1991) se han estudiado los componentes bioqumicos de la resistencia de campo,
en los que se incluyen los compuestos glucanos y fenlicos. Se atribuy la resistencia de S.
berthaultii a steres de los cidos grasos exhudados por los tricomas glandulares sobre las hojas.
Tambin se describi una toxina que produca P. infestans en cultivos lquidos, la cual causaba
una lesin necrtica sobre S. tuberosum, pero no pudo relacionarse con la resistencia al patgeno,
por lo tanto no puede ser utilizada para seleccionar la resistencia.
Behnke (1979-1980) citado por Wastie (1991) seleccion varios cultivos callosos de tres clones
de papa sobre medios que contenan filtrados de cultivos de P. infestans. Los callos que
sobrevieron varias transferencias sobre este medio, produjeron plantas las cuales desarrollaron
pequeas lesiones, en relacin a las plantas no seleccionadas, cuando fueron inoculadas en el
invernadero, pero la prueba de campo no produjo resultados.
Tambin Stolle y Schber (1985), Foroughi-Wehr y Stolle (1986) citados por Wastie (1991)
cultivaron callos sobre toxinas producidas por cultivos lquidos del patgeno, encontrando
diferencias en las reacciones entre cultivares, pero desafortunadamente no coincidieron con los
ensayos de campo para la resistencia al patgeno.
Dicho sistema fue utilizado por Urrea (2000), haciendo seleccin de clulas in vitro de la
variedad Diacol Capiro con filtrados y toxinas producidas en medios lquidos de diferentes cepas
de P. infestans y algunas pruebas de inoculacin en plantas regeneradas in vitro, adaptadas a
invernadero y campo, con poca efectividad, pues varios de los materiales seleccionados in vitro y
en invernadero al ser llevados a pequeas parcelas en campos comerciales, presentaron alta
susceptibilidad, al igual que la variedad Diacol Capiro (Botero, H., 2001, comunicacin
personal).
Segn Estrada (2000) este tipo de resistencia fue observado en los aos 1950s por
Niederhauser y su grupo en Mxico y Thurston, Guzmn, Estrada y Heidrick en Colombia, en
algunas variedades e hbridos mejorados, considerados muy susceptibles, pero que permanecan
verdes por un tiempo ms largo, que otras variedades durante las epidemias fuertes de tizn
tardo. Es posible acumular genes de resistencia utilizando especies silvestres resistentes como S.
stoloniferum, S. verrucosum, S. polyadenium, S. bulbocastanum, S. iapetalum, S. brachycarpum,
S. hougasii, S. chiquidenum, S. berthaultii, S. vernei, S. avilesii y otras.
69

En Rusia Zoteyeva, (2002) hizo evaluaciones de campo en dos periodos ampliamente

distanciados (1982 y 2001) en 22 especies de papa silvestres. Encontr que la patogenicidad de
P. infestans en las estaciones de 1982 y 2001 fue similar con base en las fechas de los primeros
sntomas de gota en el campo y la infeccin total de dos de las especies mas susceptibles: S.
Kurtzianum y S. chacoense. En ambos periodos las evaluaciones de campo mostraron algn
grado de desarrollo de la enfermedad sobre plantas de S. bulbocastanum, S. verrucosum, S.
spegazzinii y S. kurtzianum, S. demissum, S. stoloniferum, S. vernei, S. papita, S. polytrichon, S.
berthaultii, S. oplocense y S. canesense. Se confirmaron los niveles altos de resistencia para
accesiones individuales de S. simpicifolium, S. stoloniferum,S. S. ruiz-ceballosii, S.
neoantipoviczii y S. pinnatisectum, lo que indica los niveles de resistencia estables de la mayora
de las accesiones probadas en los dos periodos.
Algunos clones como las variedades Lpez, Amarilla de Puebla (andigena) y Atzimba
(tuberosum) en Mxico, Algodona, Jabonilla, Flora (andigena) y Soliman (phureja) y en los
hbridos Monserrate y Cumbal y otros de Colombia, se observ que aunque se infectaban con
gota, el dao de la planta era limitado (ligero a moderado) y el patgeno se diseminaba mas
lentamente en el campo. Situacin similar fue observada por Jaramillo y Gilchrist (2002), en la
evaluacin de seis de los clones que el grupo de papa de la Universidad Nacional de Colombia,
ha venido produciendo y evaluando, con miras al lanzamiento de nuevas variedades para
consumo fresco e industria y posiblemente forrajeras.
En dicha investigacin se observ que algunos clones presentaron el comportamiento tpico de
resistencia especfica y luego resistencia general, confirmando las observaciones de
Vleeshowuers et al., (2000b) y Gebhardt (1999), quienes sealan la presencia de algunos loci que
confieren resistencia especfica y alelos QTL (regiones del genoma con contribucin cuantitativa
de resistencia) en un mismo cromosoma, conformados por secuencias similares a genes de
resistencia resistance gene-like sequences.
El estudio mas destacado de resistencia polignica en Colombia, fue el realizado por Estrada y
Guzmn (1969) con la variedad Algodona de S. andigena, cultivado en el sur del pas y
probado por mas de seis aos en el campo sin la aplicacin de fungicidas. Posiblemente este sea
la variedad mas resistente a gota de esta especie, segn pruebas realizadas por Estrada (2000) en
Per y Bolivia.
Al evaluar la descendencia producto de la autofecundacin de esta variedad, determinaron que
que se trataba de una resistencia basada en la herencia tetrasmica, suponiendo que hubo una
distribucin independiente de los genes y un tipo de segregacin cromosmica. Se postul que la
resistencia se deba a cuatro pares de genes con un efecto aditivo similar, suponiendo que la
variedad algodona era dplice para cuatro pares de factores, AAaaBBbbCCccDDdd, donde la
letra mayscula no indica dominancia, sino un factor de resistencia horizontal (Estrada y
Guzmn, 1969).
Guzmn (1964) estudi la resistencia de campo en numerosos clones de las especies tuberosum,
andigena y phureja y encontr diferencias en la penetracin, velocidad de esporulacin, tamao y
tipo de lesin en diferentes variedades. No observ diferencias en el periodo de incubacin. Los
tamaos de lesiones fueron de menor a mayor en las siguientes variedades: Monserrate (tbr x
adg) con alta resistencia; algodona (andigena) resistente; Tocana (andigena) ligeramente
resistente y Curipamba (adg x adg) susceptible.
70

La variedad Monserrate obtenida por Estrada y Hawkes en 1950, proviene del cruzamiento de
la variedad Branca Cascuda de tuberosum, una antigua variedad holandesa seleccionada en
Brasil, con la variedad Pana Blanca de andigena, nativa de Colombia. Ambos padres tienen una
resistencia intermedia, pero dentro de la descendencia se obtuvieron 3-4 clones con resistencia
superior, de los cuales se seleccion Monserrate (Estrada, 2000).
La resistencia de la variedad Monserrate se podra explicar por la complementacin de genes o
por la interaccin no allica. Si se supone que los padres tenan por parte de Branca Cascuda
cuatro (4) genes dplices para resistencia y por parte de Pana Blanca Seis (6) genes dplices para
resistencia, el hbrido Monserrate, podra resultar con 10 genes para resistencia en cuatro loci
distitos. Esta variedad ha mostrado durante cuarenta aos, en localidades y ambientes diferentes,
nivel superior de resistencia horizontal, a los materiales de tuberosum evaluados (Estrada, 2000).
El mapeo y anlisis de los (QTL) para la resistencia general del follaje de papa a la gota, se
efectu en ocho (8) familias hbridas producidas a partir de once (11) lneas parentales diploides
de diferentes origenes intra o interespecfico y de una familia hbrida, que se produjo de un cruce
entre la variedad Stirling y la linea 12601 ab1 derivada de SCRI. Al juntar y analizar todos los
resultados de los experimentos del mapeo de los QTL, se observ que los factores que afectaban
la resistencia cuantitativa a la gota en el follaje, se encontraban en los 12 cromosomas de papa,
demostrando la naturaleza polignica de la resistencia de campo (Gebhardt, 1999).
Sin embargo, no siempre se detectan los QTL en todos los hbridos evaluados, lo que indica la
presencia de diferentes alelos en cualquiera de los QTL de los materiales genticos analizados, lo
cual puede tener diversos efectos sobre la resistencia y adems pueden interactuar de manera
diferente entre s y con el ambiente (Vleeshowuers, 2000). Las grandes diferencias entre los
componentes de la resistencia dependen de las variedades y de las especies silvestres. En algunos
hbridos, pueden actuar los efectos de la habilidad combinatoria general debida a genes aditivos
y/o la habilidad combinatoria de los genes especficos (R) debido a interacciones no allicas de
genes (epistasis) o una combinacin de ambas (Estrada, 2000).
Se han encontrado QTL de resistencia general a gota, ligados a genes R de resistencia
especfica: el R1 sobre el cromosoma V y el grupo de R3, R6 y R7 sobre el cromosoma XI, lo
que sugiere que los componentes de la resistencia general a la gota, estn controlados por genes
similares, como los de la resistencia especfica a razas, segn lo seala Vleeshowuers (2000), en
cuyo caso, no sera tan fundamental diferenciar entre los genes que controlan la resistencia
cuantitativa de la cualitativa a la gota. Las diferencias observadas a nivel de fenotipo, pueden ser
el resultado de variaciones allicas de uno o varios genes relacionados (Gebhardt, 1999).
Las caractersticas de la resistencia de campo generalmente se expresan por la reducida
posibilidad del establecimiento del patgeno, por una demora o inadecuado reconocimiento de
los elicitores del patgeno, por los genes dbiles de resistencia (R), lo que se traduce en la
reduccin de la tasa de crecimiento del patgeno en los tejidos del husped, y por una reducida o
ausencia de la esporulacin y desarrollo de la lesin (Estrada, 2000 ; Smart, et al., 2000).
En las interacciones compatibles e incompatibles del patosistema S. tuberosum/P. infestans, se
han encontrado depsitos de calosa en la pared celular. En diferentes especies, la lignificacin
(lignina y suberina), tambin est asociada con la resistencia a ste y otros patgenos (Estrada,
2000; Vleeshouwers, et al., 2000).
71

Al comparar los procesos de infeccin y las respuestas de resistencia de las plantas con
diferentes tipos y niveles de resistencia, se puede entender mejor los mecanismos involucrados en
la resistencia durable. En las especies silvestres de Solanum, es posible encontrar una gama de
resistencias, desde altamente resistentes como Solanum nigrum-SN18, con reaccin de
hipersensibilidad en el sitio de la inoculacin, a mas susceptibles como S. arvenzii x
hondelmannii-72, las cuales presentaron alta eficiencia de la infeccin (IE 86%) y alta tasa de
crecimiento de la lesin (IGR 2,4 mm/da) o susceptibles, mostrando una expansin rpida de la
lesin (hasta 4 mm/dia). Mientras que en las especies no huspedes (completamente resistentes)
como Arabidosis, rbano (Raphanus sativus), tabaco y Mirabilis jalapa macroscpicamente no se
observaron lesiones (Vleeshouwers, et al., 2000b).
Cuando la resistencia se da por efecto de no husped, se denomina resistencia completa a nivel
de especies o gneros, la cual se conoce poco en oomycetes. La penetracin de P. infestans en
los no hupedes, se caracteriza por una reaccin de hipersensibilidad, debido a que las elicititinas
secretadas de manera abundante por este patgeno, inducen una reaccin de hipersensibilidad
como en Nicotiana. Pero cuando se transforman las cepas para inhibir la produccin de elicitina,
INF1, se incrementa el rango de huspedes de P. infestans. Adems muchos elicitores de
patgenos interactan con receptores de genes R de diversas plantas y median la resistencia de las
no huspedes (Kamoun et al., 1999b, citado por Vleeshouwers, et al. 2000b).
3. Resistencia Sistmica Adquirida (SAR)
La resistencia sistmica adquirida (SAR) se presenta cuando se da un ataque localizado de un
patgeno, sin lograr xito. Involucra un incremento del estado de resistencia a una amplia gama
de patgenos y est asociada con el incremento de la expresin de los genes que codifican para
las protenas relacionadas (PR) con la patognesis. En otros casos, el patgeno que ataca es
impedido por la resistencia sistmica inducida (RSI), la cual no est asociada con un incremento
en la expresin de las protenas relacionadas con la patognesis (Vleeshouwers, et al., 2000b).
La SAR ocurre en muchas especies de plantas incluyendo la papa, en la cual puede ser iniciada
por el efecto de compuestos de paredes hifales, cidos grasos no saturados y cido jasmnico, que
dan un incremento a la resistencia a P. infestans. Puede ser inducida por muchas seales, pero
adems, los niveles bsicos pueden variar entre plantas. En mutantes de Arabidopsis, los niveles
de SAR se correlacionaron positivamente con la resistencia a los patgenos Peronospora
parasitica y P. syringae, por una sobreexpresin del gen npr1, pues es una relacin dependiente
de la dosis. En tanto que en los mutantes que impiden que se expresen los genes para las PR, no
responden a los tratamientos que inducen SAR y son susceptibles al patgeno P. syrigae
(Vleeshouwers, et al., 2000b).
Vleeshouwers, et al., (2000b), indican que la sobrexpresin del gen PR-1 en tabaco increment
la resistencia a P. parasitica y Peronospora tabacina y la sobreexpresin de PR-5 (osmotina)
ligeramente increment la resistencia a P. infestans en papa y S. commersoni. La protenas tipo
PR-1 estn implicadas en la defensa. En tomate y tabaco inhibieron la germinacin de zoosporas
de P. infestans in vitro y el crecimiento de la lesin in vivo.
Los genes PR-2 y PR-3 codifican glucanasas y quitinasas, enzimas que juegan un papel en la
degradacin de la pared celular. Sin embargo, los oomycetes carecen de quitina en sus paredes
celulares y se espera que no sean afectados por quitinasas. Los estudios relacionados con la
72

actina, sugieren que una quitinasa bsica y una protena como osmotina, pueden estar
involucrados en la agregacin citoplamtica, evento importante en la defensa celular de la papas a
P. infestans. Adems las protenas PR-5 participan en el estrs osmtico, tolerancia al fro,
permeabilizacin de las membranas plasmticas de hongos y oomycetes y resistencia a patgenos
(Vleeshouwers, et al., 2000b).
No se ha observado una correlacin entre los niveles bsicos del RNA mensajero que codifica
para una protena de resistencia (PRmRNA) y la resistencia a nivel de gnero, pero s hay
correlacin a nivel de especie en S. arnezii x hondelmannii, S. microdontum, S. sucrense y S.
tuberosum. En esta ltima especie se presentan diferentes niveles de expresin del mRNA de los
genes PR a nivel de variedades. As: La variedad mas resistente Robijn present los mas altos
valores, las parcialmente resistentes Premiere, Estima y Ehud, presentaron valores intermedios y
los valores mas bajos se observaron en la variedad susceptible Bintje (Vleeshouwers, et al.,
2000b).
Entre especies los patrones de hibridacin fueron bastante diversos. Para PR-2 se pudo notar
una cierta especificidad, en los patrones de hibridacin de especies relacionadas estrechamente
como S. berthaulti y S. arnezii x hondelmannii, lo que indica que son muy similares. Pero la
hibridacin de la sonda de tomate PR-2 con el DNA de S. nigrum, fue excepcionalmente dbil,
mientras la hibridacin con PR-1 y PR-5 di una seal de mayor intensidad. Esto sugiere que los
genes PR-2 y los de S. nigrum son bastante divergentes de las dems especies de Solanum
evaluadas, por lo tanto es la especie mas alejada del grupo de especies evaluadas y est ubicado
dentro del subgnero solanum, mientras las otras especies evaluadas y tomate pertenecen al
subgnero petota (Vleeshouwers, et al., 2000b).
Vleeshouwers, et al., (2000b), concluyeron que la resistencia sistmica adquirida (SAR) bsica,
puede estar en funcin de un mecanismo de resistencia independiente, pero muy probablemente
contribuye a la red de reacciones de defensa que toma lugar despus de que ataca el patgeno.
Los niveles bsicos de SAR, pueden incrementar la sensibilidad de las clulas vegetales a la
elicitacin de la HR, o el patgeno puede invadir lentamente al crear condiciones fisiolgicas que
limitan su crecimiento.
La identificacin de marcadores ligados a la resistencia parcial de P. infestans en especies
Solanum, es de gran valor para el mejoramiento de la papa por resistencia a la gota. Altos niveles
de mRNA de los genes PR, pueden servir como marcadores moleculares, utilizados para
seleccionar las poblaciones en los procesos de mejoramiento y para evaluar el germoplasma.
Ensayos basados en la cuantificacin del nivel de expresin de los genes PR utilizando RTPCR especficos de dichos genes, podran ser desarrollados para ayudar a los mejoradores y
genetistas de la papa, en la identificacin de genotipos promisorios y complementar otras pruebas
basadas en QTL (Quantitative trait loci), utilizando genes marcadores para mecanismos de
resistencia conocidos, tales como SAR. Estas tcnicas se constituyen en una perspectiva
novedosa para el mejoramiento asistido por marcadores (Vleeshouwers, et al., 2000b).
Strmberg (1995), estudi el efecto de la resistencia sistmica inducida (RSI) en tres variedades
de papa con diferente grado de resistencia a la gota, por inoculaciones de plantas previamente
multiplicadas in vitro, con cepas de P. infestans o P. cryptogea no patognica. Se logr una
resistencia mas intensa en la variedad Matilda, cuyo grado de resistencia en una escala de 1-5,
73

tuvo grado 4, presentando una reduccin en la formacin de lesiones que oscil entre 50-60%,
despus de 4 das de haberse realizado la inoculacin.
Es posible modificar genes que permitan la expresin de una protena como la osmotina, la cual
tiene un efecto inhibitorio sobre el crecimiento in vitro de Phytphthora infestans, y que pueden
ser introducidos en un proceso de transformacin gentica de las plantas de papa, contribuyendo
al control integrado de este patgeno (Cornelissen y Melchers,1993).
4. Factores Posiblemente Involucrados en la Prdida de la Resistencia de
las Plantas a la Gota
Van der Lee et al., (2001b), encontraron que deleciones o prdidas de fragmentos de
cromosomas, en aislamientos de P. infestans, estaban correlacionadas con la virulencia sobre las
lneas de papa que posean los genes R3, R10, R11. Pero cuando estaba presente el marcador M
5.1, derivado de un fragmento amplificado (AFLP) de DNA y ligado a un grupo de tres genes
dominantes para avirulencia Avr3-Avr10-Avr11, se presentaba avirulencia sobre las lneas de
papa que tenan los genes R3, R10 y R11.
Igualmente encontraron que las deleciones se presentaban en aislamientos de campo colectados
en Holanda entre 1980-1991, de los cuales el 37% no posean el homlogo M 5.1 y dicha
delecin estuvo fuertemente correlacionada con la ganancia de virulencia sobre las lneas de papa
que posean los genes R3, R10 y R11. Adems detectaron que algunos aislamientos antiguos
que pertenecan al linaje clonal US-1 y por lo tanto altamente homogneos, presentaban
deleciones en el locus M 5.1, indicando que dicha regin es inestable (Van der Lee et al., 2001b).
De los 83 aislamientos evaluados 28 presentaron el tipo de apareamiento A1, dos se
autofertilizaron y los 53 restantes fueron A2, mostrando una relacin A1:A2 de 1:2 en dicha
zona. Menos del 10 % de los aislamientos presentaron el mismo genotipo segn la sonda RG57.
Dichos aislamientos presentaron una alta incidencia de virulencia en los clones de papa R3, R10
y R11, tanto con el marcador M 5.1 como sin el marcador, al igual que a los clones de papa con
R4, posiblemente por algunas mutaciones que pueden volver virulentos a otros genes R (Van der
Lee et al., 2001b).
Aunque no se conoce con certeza, los factores que podra romper la resistencia vertical y
menos los mecanismos que conduciran al rompimiento de la resistencia de las plantas huspedes
al patgeno, incluyendo la resistencia de campo (por genes menores o cuantitativa) en plantas de
papa, Van der Lee et al., (2001b), seala los siguientes mecanismos y los autores:
Que nicamente se expresen de manera parcial los genes de virulencia del patgeno
(Malcolmsom, 1969).
Por hibridacin vegetativa o fusin nuclear (Malcolmsom, 1970).
Parasexualidad, herencia citoplasmtica o heterosis (Leach y Rich, 1969).
Mutaciones puntuales o entrecruzamiento somtico (Shattock, 1977; Shaw, 1991)

74

La naturaleza heterocaritica de los aislamientos parentales, que conduce a la induccin de

nuevas razas. Sin embargo, los aislamientos parentales utilizados por dichos investigadores en el
mapeo gentico no fueron heterocariticos (Van der Lee et al., 1997).
Deleciones, metilacin, elementos trasponibles o molculas de dsRNA.
1997, 2001).

(Van der Lee et al.,

Egan et al., (1995) consideran que es poco probable que la ingeniera gentica o las tcnicas de
mejoramiento tradicionales, puedan producir resistencia durable, o conduzcan a una reduccin
significativa de la necesidad del uso de fungicidas en un futuro inmediato, pues adems de
variedades resistentes y el mejoramiento de las estrategias de control, podran involucrarse
nuevos y mejores fungicidas, con mayor flexibilidad de uso y tiempo de aplicacin, integrado a
mtodos de prediccin de la enfermedad.

75

CAPTULO VI

PATOGENICIDAD
Existen tres componentes fundamentales para determinar la habilidad patognica de un
aislamiento: periodo de latencia, rea de la lesin y esporulacin despus de 96 horas de haber
ocurrido la inoculacin, razn por la cual Kato et al., (1997) evaluaron aislamientos de los linajes
clonales US-1, US-7 y US-8, colectados en Estados Unidos y Canad en 1994, por inoculaciones
con 20.000 esporangios/ml, en hojas desprendidas de una variedad con alta suceptibilidad a P.
infestans.
Dichos investigadores encontraron diferencias significativas entre los linajes clonales US-1 y
US-8 para el rea de la lesin y el grado de esporulacin y entre US-1 y US-7 para el periodo de
latencia. A su vez las diferencias en los componentes de habilidad patognica, contribuyen a la
predominancia de los nuevos linajes clonales mas agresivos y con resistencia a los fungicidas tipo
fenilamidas, mayor agresividad en las hojas y tubrculos de papa y hojas de tomate. Peters et al.,
(1999) observaron que los aislamientos canadienses (US-7; US-8 y US-11) fueron mas agresivos
a los tejidos de los tubrculos an de variedades mas resistentes, que los del genotipo tradicional
(US-1).
Botero y Gilchrist (1998) observaron diferencias en el tiempo de iniciacin, desarrollo de los
sntomas, esporulacin y rea afectada, para ocho aislamientos de Phytophthora infestans,
procedentes de distintas especies, cuando fueron inoculados en tejidos de su misma especie y
cruzados con las diferentes especies que originaron los aislamientos.
Al parecer estos
aislamientos pertenecan a un slo linaje clonal con un tipo de apareamiento A1, reforzando las
observaciones de Kato et al., (1997), quienes determinaron mayores diferencias entre los
aislamientos dentro de las poblaciones, que entre poblaciones, aunque los factores abiticos
pueden contribuir de manera significativa en la respuesta diferencial y por lo tanto amerita mas
investigacin.
En el Ecuador Oyarzm et al, (1998), encontraron que algunas lneas de P. infestans,
demostraron mas agresividad sobre tomate que otras. Estos investigadores observaron que
aislamientos obtenidos de Solanum tetrapetalum y Solanum brevifolium fueron diferentes a los de
las lneas originadas sobre papa y tomate, por el tipo de apareamiento, RFLPs , aloenzimas y la
poca o no patogenicidad sobre la papa y el tomate.
La hiptesis propuesta por Oyarzm et al., (1998), es que los aislamientos de las especies
silvestres deben haber sido introducidos en eventos separados. Sin embargo, existe la posibilidad
de que no hubiesen sido introducidos, sino que se originaron y han coevolucionado con los
especies huspedes en sus lugares de origen y no fueron observados en tiempos anteriores,
posiblemente por la falta de estudio del patgeno en los ecosistemas naturales de los Andes
Suramericanos, en los cuales se espera un equilibrio dinmico husped-patgeno y por ende no
existe el concepto de enfermedad, en dichas especies.
Yun Lee (1998), estudi el control gentico de la agresividad de este patgno en tomate: todas
las lneas parentales fueron patognicas a papa, pero algunas tambin fueron agresivas a tomate.
76

Cuando ambos parentales fueron agresivos a tomate, todos los individuos de la progenie fueron
patognicos a tomate. Pero cuando uno solo de los parentales era patognico a tomate, la
progenie segreg para la patogenicidad en tomate. Unos fueron patognicos y otros no lo fueron,
razn por la cual se concluy que un factor recesivo controlaba la patogenicidad en tomate, dado
que la mayor parte de la progenie no fue agresiva a tomate. (Smart, et al., 2002).
Por su parte Oyarzn et al., (1998) tambin observaron alta agresividad de los aislamientos de
P, infestans en su husped original, pero muy poca o ninguna agresividad en su husped alterno
(papa, tomate). Sin embargo, el aislamiento 1642 de tomate produjo lesiones dbiles en todas las
variedades de tomate evaluadas y un par de aislamientos de papa caus lesiones tan dbiles en
tomate como las causadas por el aislamiento 1642 de tomate.
Algunos aislamientos de papa fueron virulentos sobre la variedad de tomate Perialbo
(diferencial sin genes mayores de resistencia). Por las razones expuestas concluyeron que la
poblacin EC-1 era predominante en papa y US-1 en tomate, como se ha observado en Colombia
por Gilchrist et al., (2002), donde papa y tomate comparten una misma regin geogrfica. La
agresividad cuantitativa determina la agresividad entre los huspedes.
Ninguno de los aislamientos evaluados produjo sntomas de reaccin, ni esporularon en
pimentn (Capsicum annum), mientras que en hierbamora (Solanum nigrum), dos aislamientos de
papa y dos de tomate, indujeron una respuesta hipersensible en tejidos foliares de dicha especie,
caracterizada por puntos necrticos en el sitio de inoculacin, sin produccin de micelio ni
esporulacin, lo que indica que hay algn tipo de resistencia, como lo observ Vleeshouwers et al
(2000b).
Sin embargo, se ha reportado que aislamientos procedentes de papa, pueden inducir reacciones
de hipersensibilidad en tejidos foliares de pimentn (Berg citado por Brommonschenkel, 1988;
Abad, 1983). Marn y Mira (1998) colectaron varios fololos de pimentn con sntomas de tizn
tardo, cuyo agente causal no creci en discos de tubrculos de la variedad Tuquerrea de papa, la
cual se usa corrientemente en el laboratorio, para el aislamiento y purificacin de cepas de P.
infestans.
Es posible que un medio como agar-centeno con un coctel de fungicidas y antibiticos,
frecuentemente utilizados para dicho propsito, hubiese permitido el aislamiento de cepas de P.
infestans, pues est reportado como patgeno de pimentn (Erwin y Ribeiro, 1996) y la zona
donde se colectaron la muestras es productora de tomate, pimentn y diferentes variedades de
papa incluyendo S. phureja (papa criolla). Esta observacin refuerza la hiptesis sobre la alta
especificidad de los aislamientos de P. infestans sobre su husped original.
Los aislamientos de P. infestans procedentes de lulo (S. quitoense) variedad la selva, han sido
purificados y multiplicados en discos de tubrculo de la variedad Diacol Capiro, con buena
esporulacin y formacin de esporangios, los cuales son almacenados en Nitrgeno lquido y se
vuelven a activar para nuevas inoculaciones en los discos de tubrculo de dicha variedad (Zapata,
2002). Vale la pena resaltar que los aislamientos procedentes de papa y tomate, desarrollan
buena cantidad de micelio, pero no se ha conseguido su esporulacin, cuando han sido inoculados
en discos de tubrculo de la variedad Diacol Capiro, lo que s se ha logrado con discos de la
variedad tuquerrea.

77

Botero y Gilchrist (1998), Patio et al., (1998) evaluaron la respuesta de aislamientos cruzados
de P. infestans con diferentes especies huspedes. Los aislamientos procedentes de papa
presentaron un rango de reconocimiento mas amplio, al infestar y esporular relativamente mas
rpido (4-5 das despus de la inoculacin) en la variedad de papa Alfa (sin genes mayores),
tomate variedades Marglobe y Chonto y pepino (S. muricatum). La variedad Monserrate de papa
(con resistencia vertical) tuvo un inicio lento del desarrollo de la lesin y baja esporulacin, pero
a los ocho das, dos de los aislamientos procedentes de papa, presentaron un incremento
significativo del rea afectada. Incluso el aislamiento ST1 de papa, produjo una alta esporulacin
(18.625 esporangios) y present la mayor rea de tejido foliar afectada (269 mm2 ).
La situacin arriba sealada indica, que una vez que se rompa la barrera de la resistencia en una
planta, es muy difcil detener la infeccin con este patgeno y el inicio de la gota, lo cual fue
observado por Jaramillo y Gilchrist (2002), en una evaluacin de clones de papa con diferente
fuente de resistencia a P. infestans, en una zona papera del Oriente de Antioquia Colombia, en la
cual la resistencia se rompi por daos fsicos causados por granizo y una fuerte presin de
inculo de parcelas con variedades susceptibles sin control qumico. En este caso es conveniente
involucrar otro componente, para el control de tan nefasta enfermedad, como el uso adecuado de
molculas qumicas.
En trminos generales se present la esporulacin mas rpida en los tejidos inoculados con
aislamientos originalmente colectados en la misma especie, que cuando se hicieron inoculaciones
cruzadas, las cuales presentaron esporulaciones a partir del 6-7 da despus de la inoculacin
(Botero y Gilchrist, 1998). Los tejidos de los clones que posean algn grado de resistencia,
presentaron un retrazo en la infeccin y esporulacin sobre el tejido, lo que indica que es posible
ampliar el intervalo entre las aplicaciones para el control qumico de la gota, lo que se traduce en
la reduccin de las aplicaciones hasta un 50%, pero no se pueden suprimir especialmente cuando
las condiciones ambientales favorecen la epidemia como observaron Jaramillo y Gilchrist (2002).
Los aislamientos de tomate
reconocieron rpidamente con
(resistente) produciendo una
Sin embargo, en la variedad
esporulacin.

incluyendo el tomate silvestre (Lycopersicon pimpinelifolium) se

los tejidos de tomate variedades Marglobe (suceptible) y chonto
esporulacin relativamente alta (153.000 - 28.125 esporangios).
Chonto, las lesiones fueron pequeas a pesar de la abundante

En papa la esporulacin promedio fue menor, pero en la variedad Alfa se logr una alta
esporulacin (78.000 esporangios) con uno de los aislamientos y muy baja esporulacin sobre la
variedad Monserrate (9.375 esporangios), con una respuesta de hipersensibilidad en S. nigrum,
especie que tiene un amplio rango de adaptacin ecolgica y en la cual no se han observado
sntomas de gota en condiciones naturales, en diferentes ecosistemas en los cuales se ha estudiado
su comportamiento.
Se destaca que en hojas de pepino no se desarroll lesin, ni esporulacin de los aislamientos
TOM S de la especie silvestre de tomate y MT1 (tomate de Marinilla). El primero procedente de
una zona geogrfica y ecolgica (Venecia Suroeste Antioqueo, 1480 msnm) muy diferente, a la
zona donde ha venido creciendo el pepino (Oriente de Antioquia), lo que indica que el no
compartir el nicho ecolgico, ni la especie y/o variedad de origen del aislamiento, puede incidir
en el tiempo de respuesta del patgeno al husped, mientras que MT1 esporul especficamente
en tomate, presentando la mas alta esporulacin (153.000 esporangios) en la variedad susceptible
Marglobe.
78

Al igual que las observaciones de Botero y Gilchrist (1998) la especificidad por huspedes
mantiene el aislamiento gentico entre las subpoblaciones de P. infestans en el Ecuador (tabla 6),
ya que ha sido imposible infectar plantas del complejo S.brevifolium (huspedes del grupo de
aislamientos I-c mDNA) con aislamientos obtenidos de huspedes de la seccin Petota y
viceversa. Los resultados de experimentos de inoculacin cruzada demuestran de manera
general, que cada linaje clonal, excepto el EC-3 que es el nico encontrado en S. betaceaum
(tomate de rbol), est asociado con mas de un husped, pero rara vez los huspedes estn
asociados con mas de un linaje clonal. La nica excepcin parece ser el pepino, donde se han
encontrado dos linajes clonales afectando el cultivo, igual observacin se hizo en papa, en
Colombia. Sern poblaciones en transicin
Tabla 6. Inoculaciones cruzadas de subpoblaciones de P. infestans sobre diferentes huspedes
(+ infeccin, - no infeccin o reaccin hipersensible en hojas desprendidas).
Especies huspedes del aislamiento
Huspedes

Grupo petota
Complejo S. brevifolium
S. betaceum
S. lycopersicon, S.
murictum, S. caripense
(US-1)

Petota
(EC-1)

Complejo S.
brevifolium

S. betaceum
(EC-3)

+
-

+
-

+a

S. murictumb

S. lycopersicon, S.
murictum, S. caripense
(US-1)
+a
-

US-1 y EC-1 pueden ser inoculados de manera cruzada sobre sus huspedes alternos, pero son mas agresivos
sobre su husped primario.
b

Dos aislamientos tpicos del complejo de S. brevifolium, fueron colectados de un cultivo muy afectado de S.
muricatum

Abad (1983) manifiesta que la adapatacin de P. infestans a un determinado husped resistente

es una situacin frecuente, pero requiere una serie de transferencias sucesivas (hasta 7 veces) a
travs de hojas iniciando senescencia y hojas jvenes de la especie resistente, hasta lograr
abundante esporulacin y por ende la adaptacin del patgeno a dicho husped. Igual ha
sucedido con la mezcla de razas para formar nuevos patotipos.
Los foliolos de papa pueden ser afectados mas fcilmente por aislamientos procedentes de
tomate o pepino. Los aislamientos de papa esporulan en pepino o tomate, pero los aislamientos
procedentes de tomate no esporulan o lo hacen en muy baja cantidad en pepino y lo contrario, lo
que indica un posible flujo de genes de P. infestans de dichas especies a travs de la papa, donde
posiblemente ha alcanzado la mayor variabilidad gentica y por ende la variacin en el grado de
adaptacin al husped, que se comprueba por la diversidad de especies silvestres de papa con
resistencia (Estrada, 2000) y el nmero de razas del patgeno, cada vez mas complejas, en los
aislamientos colectados en los cultivos de papa ubicados en diferentes regiones y /o zonas
ecolgicas (Mazo y Patio,1995; Marn y Mira,1998, Jaramillo y Gilchrist, 2002).
Marn y Mira (1998), observaron que los aislamientos procedentes de huertas caseras, en las
que crecen1 varias especies de plantas huspedes o no, y de zonas poco intervenidas por cultivos
79

intensivos de papa colectados en cultivos comerciales, presentaron prcticamente una raza

relativamente simple por especie, mientras que los aislamientos de papa, presentaron pocas razas
pero de gran complejidad, determinadas por el nmero de clones diferenciales afectados por los
aislamientos, lo que indica una posible relacin de equilibrio relativo del patgeno en los
ecosistemas poco intervenidos por el hombre.
No se encontr una relacin directa entre la esporulacin y el rea de tejido afectada. Algunos
aislamientos presentaron poca esporulacin, pero causaron mayor dao en los tejidos de su
husped original, situacin observada con los aislamientos de papa y pepino, mientras que los de
tomate presentaron la mayores esporulaciones, con poca rea afectada, excepto uno de los
aislamientos que caus la mayor esporulacin y rea afectada en la variedad mas susceptible
(Marglobe), confirmando una estrecha relacin husped-patgeno.
Vleeshouwers et al., (2000b), realizaron estudios a nivel citolgico y macroscpico, sobre el
desarrollo de las lesiones inducidas por aislamientos de P. infestans en diferentes especies
huspedes y no huspedes. La frecuencia de penetracin est relacionada con la severidad y el
tiempo de aparicin de los sntomas de hipersensibilidad. En especies no huspedes la reaccin
de hipersensibilidad se presenta entre las 22 y las 46 horas despus de la inoculacin.
La resistencia parcial de clones de Solanum present mayor cantidad de clulas con la HR
(reaccin de hipersensibilidad) antes de que se restringiese el crecimiento del patgeno,
produciendo una lesin de mayor tamao, mientras que en los clones mas sensibles, no se
observ HR, y a las 46 horas despus de la inoculacin, los discos de hoja estaban
completamente cubiertos por las hifas y se desarrollaba una necrosis extensiva. La variacin en
la estructura morfolgica de las capas epidermales o la cutcula, puede explicar las diferencias en
la frecuencia de penetracin de las hifas y puede ser propio de cada planta, la expresin de la
resistencia se presenta despus de la penetracin (Vleeshouwers et al., 2000b).
En la reaccin hipersensible de la interaccin P. infetans/Solanum, se activa un mecanismo
conservado de muerte programada de la clula (PDC), y en varias plantas diversos fenmenos
citolgicos, exhiben las caractersticas de apoptosis, mientras otras sufren necrosis. Las clulas
vecinas con respuesta HR, que parecen estar activas metablicamente de manera transitoria en el
patosistema, puede expresar dicho programa de muerte anti-celular. Existen dudas si la necrosis
que aparece es una forma de muerte programada de la clula (PCD) o una necrosis patolgica. Si
un clon es resistente, la necrosis de la muerte celular programada aparece rpidamente. Si el clon
es susceptible la necrosis de patogenicidad se desarrolla mas lentamente (Vleeshouwers et al.,
2000b).
En las regiones donde penetran y crecen las hifas, en especies susceptibles, se presentan
collares y papilas de callosa cerca al micelio expandido, mientras en los clones resistentes con
HR, los depsitos de callosa se observan alrededor de las paredes celulares y en los clones con
resistencia parcial, se observ un fenotipo intermedio. Al inocular el hbrido S.nigrum x Desire
se observaron depsitos de callosa distribudos al azar, asociados a las zonas de la inoculacin
con los aislamientos IPO-0 y 90128 de P.infestans y lesiones necrosadas con HR, similares a las
lesiones simuladas en otras plantas no huspedes como Arabidopsis sp. La calosa tambin se
puede presentar en las clulas como una respuesta general de estrs (Vleehouwers et al., 2000b).
Aunque los compuestos de fenoles (suberina, lignina y callosa) no estn asociados a los
oomycetes, a menudo se observaron cerca a las lesiones HR sobre las clulas del parnquima
80

esponjoso y epidermales, afuera de la membrana plasmtica y sobre la superficie de la pared

celular. La diferencia en la localizacin de los glbulos de fenoles, entre los clones de Solanum,
parece estar relacionada con la posicin de las reacciones HR, puesto que stas estn limitadas a
la epidermis en S. berthualtii y al mesfilo en S. arnezii x hondelmannii. Pero no hubo seales de
correlacin entre la cantidad de glbulos de fenoles formados y los niveles de resistencia
observados en los diferentes clones de Solanum evaluados (Vleeshouwers et al., 2000a).
Adems se observaron compuestos autofluorescentes acumulados sobre las hifas de P. infestans
dentro de las clulas de plantas completamente resistentes, como S. nigrum y Arabidopsis
thaliana, donde se presenta un reconocimiento rpido, respuesta observada en otros patosistemas
con oomycetes. En soya tratada con un elicitor de P. sojae, se present una actividad
incrementada de peroxidasas con la acumulacin de polmeros fenlicos, incluyendo la lignina
(Grham y Graham 1991, citado por Vleeshouwers et al., 2000a).
1. Interaccin de P. infestans con Plantas Altamente Susceptibles
Cuando los esporangios o las zoosporas liberadas por ste llegan al tejido de la planta husped,
en presencia de agua en forma lquida, emiten un tubo germinativo y entran por los estomas,
ubicados principalmente en el envs de las hojas. Despus de la germinacin de las esporas, se
desarrolla el apresorio y ocurre la penetracin al cabo de las 16 o mas horas, formando las
vesculas de infeccin intracelular en las clulas epidermales. En este primer estado biotrfico,
22 horas despus de la inoculacin, las hifas crecen en los espacios intercelulares, presentndose
la ramificacin a travs del mesfilo y forman entre uno y dos haustorios por clula
parenquimatosa que encuentran (Vleeshouwers et al., 2000a).
A nivel macroscpico, durante las primeras 24 horas las clulas del husped tienen una
respuesta poco detectable. Entre 24-48 horas o un periodo mas prolongado en los huspedes
resistentes, se observa el inicio de la lesin que consta de clulas necrticas en el centro, rodeadas
por tejido aparentemente saludable, en el cual el patgeno est creciendo, razn por la cual se
denomina como organismo hemibiotrfico.
La zona necrosada va creciendo y es muy
caracterstica de los estados avanzados de patogenicidad en las plantas huspedes (Smart et al.,
1999).
Despus de 46 horas de inoculados los discos de hoja de plantas susceptibles S. microdontum
265 y S. sucrense-23, y la variedad Bentji de papa, se cubran completamente de hifas y se
observaba una necrosis en el sitio de la inoculacin. Ocasionalmente se inducen respuestas de
HR. A menor resistencia de la planta al patgeno, menor respuesta hipersensible en los tejidos
inoculados (Vleeshouwers et al., 2000b).
A partir de las 46 horas despus de la inoculacin, las observaciones microscpicas, permiten
observar los esporangiforos que empiezan a emerger a travs de los estomas, se forman los
esporangios y las clulas afectadas empiezan a necrosarse. Sin embargo, no siempre son exitosos
los intentos de P. infestans por colonizar clulas huspedes de los tejidos foliares, pues
ocasionalmente al penetrar a las clulas epidermales, se presenta una reaccin de
hipersensibilidad (HR), la cual est restringida a una clula epidermal (Vleeshouwers et al., 1999,
2000b).

81

2. Interaccin de P. infestans con Plantas Altamente Resistentes y con

Resistencia Intermedia
En las variedades de papa con fuerte resistencia a P. infestans, como Solanum nigrum-SN18
(no husped) la respuesta hipersensible (HR) fue inducida extremadamente rpido, mostrando
necrosis en una de las tres clulas a las 22 horas despus de la inoculacin, con un aislamiento de
la raza 0 (IPO-0) y una interaccin biotrfica cuando se inocularon con un aislamiento de una
raza compleja del patgeno (90128), como la variedad de papa Ehud (Gen fuerte R-1) inoculada
con dichos aislamientos. En S. berthaultii- 9 y S. circaeifolium-circl la HR, se estableci ms
lentamente, pero se complet a las 46 horas despus de la inoculacin (Vleeshouwers et al.,
1999).
Las variedades Estima y Premire que llevaban el gen dbil R-10, tambin mostraron una
reaccin HR cuando fueron inoculadas con IPO-0, al igual que para los clones S.berthaultii-19 y
ABTP-44, pero la induccin de la reaccin se inici ms tarde. El crecimiento de las hifas a
menudo sobrepas las lesiones de hipersensibilidad y estableci una reaccin compatible, lo que
sugiere que en estas plantas las reacciones HR son menos efectivas que en una variedad
resistente. Al ser inoculadas con el aislamiento 90128, tambin se indujo la reaccin HR pero
con menor efectividad que en la interaccin con el aislamiento IPO-0 (Vleeshouwers et al.,
1999).
3. Interaccin de P. infestans con Plantas que Presentan Resistencia de
Campo (sin genes R)
En la variedad Robijn con resistencia de campo y sin los genes R conocidos de S. demissum, se
demostr la respuesta hipersensible cuando las hojas fueron inoculadas con ambos aislamientos
IPO-1 y 90128 de P. infestans, pero despus de las 46 horas de la inoculacin, las hifas se
escaparon de la lesin HR y establecieron una interaccin biotrfica con las clulas del mesfilo,
formando uno o dos haustorios por clula que encontraban, presentando sntomas similares a los
estados iniciales de una interaccin compatible sobre plantas susceptibles. La diferencia entre la
necrosis desarrollada por la reaccin compatible y la de la respuesta hipersensible (HR), est en
que la primera se desarrolla mas rpidamente. En este caso el grado de resistencia est
determinado por la velocidad de aparicin de los sntomas necrticos (Vleeshouwers et al.,
1999).
En todos los clones de Solanum silvestres evaluados con los aislamientos de P. infestans IPO-0
y 90128, se promovieron respuestas de resistencia similares, pero las lesiones causadas por 90128
se desarrollaron ligeramente mas rpido. En S. sucrense-23 se observ que a las 46 horas
despus de la inoculacin, apareci la reaccin de hipersensibilidad (HR), la cual no se expandi
mas all de su tamao. Sin embargo, a las 70 horas algunas hifas que se escaparon
ocasionalmente, desarrollaron la necrosis. Con el aislamiento IPO-0 se estableci una interaccin
biotrfica a las 22 horas despus de la inoculacin, que result en un necrosamiento del tejido a
las 46 horas. Los investigadores plantean la ambigedad de si la necrosis se debi a una reaccin
de hipersensibilidad o una interaccin de patogenicidad (Vleeshouwers et al., 2000b).

82

4. Desarrollo de la Interaccin de P. infestans con Plantas no Huspedes

de P. infestans
En las plantas no huspedes o Solanum completamente resistentes, Vleehouwers et al., ( 1999,
2000), observaron una respuesta hipersensible a las 22 horas, que consista en la muerte de 1 a 3
clulas. La HR parece ser la principal respuesta de defensa de las especies silvestres de Solanum
con diferentes genes de resistencia, pero no con los genes R conocidos. El patgeno fue capaz de
penetrar todas las clulas epidrmicas de las plantas evaluadas, confirmando las observaciones
realizadas por Abad (1983) y Patio et al., (1998).
Las inoculaciones de S. nigrum con P. mirabilis especie estrechamente relacionada con P.
infestans y patgeno natural de Mirabilis jalapa, indujeron una reaccin rpida de
hipersensibilidad, observada adems cuando las especies no huspedes Raphanus sativa,
Nicotiana tabacum, N. rustica y Arabidopsis thaliana fueron inoculadas con el aislamiento IPO-0
de P. infestans. En todas las especies no huspedes las clulas epidermales y ocasionalmente del
mesfilo, fueron penetradas por el patgeno, pero el rpido desarrollo de la reaccin HR estuvo
asociado con el cese de la colonizacin (Vleeshouwers et al., 2000b).
Los clones de Solanum, particularmente los mas resistentes, pueden presentar una respuesta
reversible, restaurando su apariencia normal, en los primeros estados de induccin de la
hipersensibilidad, lo cual fue observado por Vleehouwers et al, (2000b), en clulas del mesfilo
adyacentes a la HR, puesto que al ser coloredas con azul-tripano, presentaron una caracterstica
fenotpica diferentes a las clulas muertas y retomaron su apariencia normal.
Hay ocasiones en que las hifas colonizan las nervaduras de las hojas en los vasos muertos del
xilema, puesto que no se da el mecanismo de HR, pero una vez emergen del xilema a las clulas
vivas del mesfilo, se desarrolla la respuesta hipersensible. Esta situacin se observ en algunos
clones de Solanum incluyendo los completamente resistentes como S. nigrum-SN18.
(Vleeshouwers et al. 2000b).
5. Cmo Estimar la Resistencia de las Plantas a P. infestans?
Zimnoch-Guzowaska y Flis (2002) indican que existen amplias discrepancias en los sistemas de
descripcin de la resistencia a P. infestans, que se originan de las diferencias de severidad entre
los pases para los diferentes materiales, razn por la cual recomienda que hasta donde sea
posible se eviten, para obtener resultados mas consistentes.
Simonds y Malconson (1967) citados por Estrada (2000) seleccionaron sucesivamente clones a
partir de poblaciones masales de S. andigena y obtuvieron mayor resistencia, la cual se us para
los cruzamientos con S. tuberosum. Humaerus (1970) tambin citado por Estrada, recomend
seleccionar plantas con resistencia horizontal, caracterizadas por pocas lesiones de gota despus
de la inoculacin o necrosis rpida con poca esporulacin. Indic que S. demissum, S.
bulbocastanum y S. stoloniferum son fuentes valiosas para resistencia de campo, la cual presenta
diversos grados de modificacin por factores ambientales como la luz, la temperatura, la
humedad y el tipo de suelo.
Wastie (1991) opina que la inoculacin con una mezcla de razas no es conveniente por el
periodo de tiempo que transcurre entre la fase estacionaria, la fase de multiplicacin, la
83

dispersin de razas compatibles en la mezcla y la impresin falsa de resistencia, que se puede

crear si cualquier gen R presente, no puede ser inmediatamente dominado. Recomienda que se
deben mantener las condiciones ambientales favorables para la penetracin y dispersin del
patgeno, incluyendo el riego si es necesario.
5.1. Pruebas moleculares para la deteccin de resistencia
Para probar la resistencia de materiales producto del mejoramiento gentico, adems de las
pruebas de campo, es posible utilizar tcnicas moleculares, dado que se han determinado
segmentos genmicos para loci con efectos reproducibles de resistencia a la gota. Una regin
distal de cada uno de los cromosomas II, VIII, IX y XII, ambas regiones distales de los
cromosomas VI y XI, una regin central y una distal del cromosoma III, la mitad del cromosoma
IV y todo el cromosoma V (Gebhardt, 1999).
El QTL mas destacado y consistente con la resistencia a gota, est localizado en el cromosoma
V, el cual est fuertemente ligado a un marcador GP179, que afecta tanto, la resistencia de hojas
como de tubrculos. Fuertemente ligado al mismo marcador GP179, est el locus R1, que
confiere resistencia especfica para una raza de P. infestans ligado a un QTL fundamental para la
maduracin de la planta. Dice Gebhardt (1999 ) que es posible que el (los) gen(es) en este QTL,
controlen tanto la resistencia a gota como la maduracin de la planta.
Las plantas que tienen alelos QTL que incrementan la resistencia al follaje, presentan reduccin
de resistencia de gota en el tubrculo y maduracin tarda. La mayora de los cultivares con
buena resistencia de campo a la gota, son de maduracin tarda, lo que sugiere que debido a la
seleccin fenotpica, los alelos en este QTL pudieron haberse vuelto homocigotos en muchas
poblaciones de mejoramiento gentico. Es necesario investigar en la identificacin de QTLs con
resistencia a gota, que no estn ligados a los genes de maduracin de las plantas (Gebhardt,
1999).
Los alelos QTL que incrementan la susceptibilidad a gota, son generalmente dominantes sobre
los alelos que incrementan la resistencia, razn por la cual, durante los retrocruces con variedades
susceptibles, se pierde frecuentemente la resistencia de campo a la gota. Adems la relacin de
segregacin de los QTL, a menudo son distorcionadas, con alelos de susceptibilidad mas
frecuentes que los de resistencia a gota. Por tal razn, los marcadores DNA deben ser
herramientas preferidas para identificar en una poblacin de hbridos, los genotipos poco
frecuentes con alelos QTL superiores para la resistencia a gota. (Gebhardt, 1999 ).
La secuencias ligadas a los genes de resistencia (resistence gene-like sequences RGLs), segn
Gebhardt (1999) son tcnicas utilizables para determinar los genes que controlan la resistencia
cualitativa y los componentes de la resistencia cuantitativa a la gota de la papa. Estos RGLs son
miembros de una familia de multigenes que codifican para protenas con alta repeticin de
leucina (LRR) y un sitio de enlazamiento nuclear (NBS) dominante. Es conveniente buscar
QTLs involucrados con las protenas relacionadas con la patognesis (PR).
Bormann, et al., (2002) han venido realizando diferentes anlisis genticos para cuantificar la
resistencia cuantitativa a la gota de la papa. De clones tetraploides aprovechando la experiencia
con los materiales diploides, para lo cual efectuaron dos cruces con un parental susceptible y dos
parentales con buena resistencia de campo a la gota y se efectu la evaluacin de las progenies
84

por la resistencia cuantitativa a la gota, durante dos aos en campo. Las plantas fueron
genotipificadas con 36 marcadores PCR (SCAR, CAPS, SSCP), con el fin de determinar efectos
significativos sobre la resistencia cuantitativa.
Los marcadores que correlacionaron
significativamente con la resistencia cuantitativa fueron encontrados en los cromosomas V,IX y
XI.
Otra forma de determinar la resistencia de las plantas a P. infestans, es mediante la
determinacin de la biomasa del patgeno, mediante pruebas serolgicas como ELISA o
mediante evaluaciones con lneas transgnicas de P. infestans con el gen GUS y que se expresa
produciendo glucuronidasa, aunque podran ser menos eficientes (Vleeshouwers, et al.,
2000a).
5.2. Pruebas de seleccin y evaluacin de resistencia en plntulas bajo
condiciones controladas.
En Holanda se utilizan discos de hoja y en Suecia e Inglaterra hojas desprendidas, pero los
resultados en tan pequea escala deben ser interpretados con mucho cuidado, pues las
condiciones no siempre son apropiadas para la identificacin precisa de resistencia/
susceptibilidad, en el caso de los valores que no estn en los extremos de la escala. As por
ejemplo, Tegera y Fouarge (1984), citados por Wastie (1991) no fueron capaces de distinguir
entre genotipos moderadamente susceptibles y moderadamente resistentes.
Steward et al., (1983) citados por Wastie (1991), sealaron que las pruebas de invernadero,
tendieron a subestimar la resistencia de plantas resistentes y la susceptibilidad de los susceptibles,
al compararlas con pruebas de campo, pero Erjefalt (1975) citado por dicho autor, puntualiz que
una prueba de invernadero, favorece la seleccin de clones con altos niveles de resistencia a la
infeccin, mas que a la invasin, mientras las pruebas de campo determinan ambos componentes.
Para evaluar la resistencia se deben estandarizar las metodologas para las diferentes zonas,
acordes con las exigencias de las especies y variedades a evaluar.
As por ejemplo,
Vleeshouwers, et al., (1999), proponen la siguiente metodologia, similar a la utilizada por el CIP
y descrita por Trillos (1989):
Es conveniente utilizar plantas completamente sanas preferiblemente de cultivos in vitro. El
suelo debe de estar estril en el caso de hacer las evaluaciones en el invernadero o una cabina
climatizada, en la cual se debe suministrar luz 16/8 horas dia-noche, 18/15 C da-noche, 65-80%
de humedad relativa. Las lmparas Phillips HPIT de 400 wat a 50 cm de la superficie de las
plantas y separadas 1,5 m. Para las condiciones del trpico estas evaluaciones se pueden realizar
bajo condiciones de casa de malla, ubicada en una zona ecolgica apropiada para el cultivo de la
papa o el tomate, segn la especie a evaluar, dado que los ecosistemas propios de estos cultivos
son diferentes.
Las plntulas de 4 a 6 semanas de edad (cuando presenten el primer par de hojas compuestas),
las cuales proceden de semilla sexual y que vienen creciendo bajo condiciones ambientales
controladas, en bandejas bajo casa de malla o invernadero, se inoculan con un aislamiento lo mas
complejo posible (varios factores de virulencia), con el fin de seleccionar las plntulas que
sobreviven, aunque no siempre son resistentes, pues pueden escapar a la infeccin por diferentes
situaciones.
85

Este sistema tiene la ventaja de evaluar de manera rpida un gran volumen de plantas producto
de las progenies de un amplio nmero de parentales e identifica las combinaciones mas
adecuadas, para posteriores cruzamientos y puede facilitar los estudios de arquitectura gentica
de la resistencia horizontal a la gota. Su mayor utilidad depende del alto nivel de resistencia
presente, en la mayora de las progenies que estn siendo tamizadas; adems facilita el descarte
de un alto nmero de plantas, debido a la susceptibilidad a la gota, antes de que sean
seleccionadas para otros atributos (Wastie, 1991).
5.3.
Preparacin
inoculacin

de

las

suspensiones

de

zoosporangios

para

la

El inculo se activa y multiplica en medio agar centeno o arveja-centeno-agar suplementado

con sacarosa al 2%, o preferiblemente en hojas o rodajas de papa de una variedad que no posea
genes mayores (Alfa, Bintje o Tuquerrea para Colombia). Se incuba a 18 C en oscuridad. Los
aislamientos de lulo Solanum quitoense, esporulan bien en rodajas de la variedad Diacol Capiro
(Comunicacin personal de J. L. Zapata, 2000).
Cuando se tiene suficiente desarrollo del micelio (4-7 das) se procede a lavar con agua
destilada estril y se filtran los esporangios en un filtro de nylon de 10, hasta obtener una
suspensin muy pura de esporangios, que se almacena a 4 C por dos horas para la liberacin de
zoosporas. La suspensin de 3x103 - 5x104 Zoosporangios/ml, se inoculan en las hojas o foliolos
de la tercera, cuarta y quinta hoja plenamente desarrolladas, o en discos de estas hojas, con 10 l
de dicha suspensin, sobre el lado abaxial, con un aspersor de plstico o vidrio, a una presin
que no exceda las 5 psi (libras por pulgada cuadrada). Para asperjar las 100 plntulas de una
bandeja se requieren 25 ml (Trillos, 1989).
Una vez asperjadas se incuban a 95-100% de humedad relativa, con una temperatura entre los
16-19 C y en oscuridad por 10 horas, al cabo de las cuales se deben de pasar a luz difusa (1.500
bujas-pie) con un fotoperiodo de 10-14 horas. Al cabo del 4-5 da, se procede a la evaluacin,
retirando las plntulas con lesiones grandes en tallos u hojas o con lesiones necrticas. Sin
embargo, en este ltimo caso, se debe ser cuidadoso, ya que se han encontrado en el mismo
cromosoma genes de resistencia R (Resistencia cualitativa) con resistencia de campo o cuntitativa
(Trillos, 1989).
Las plntulas con lesiones pequea o que no presenten sntomas son conservadas, para lo cual
se les aplica un fungicida no sistmico como mancozeb, clorotalonil u otro y se adaptan a una
nueva condicin de humedad relativa (menor de 95%) y mayores temperaturas, incluso se pueden
transplantar a campo, para su multiplicacin y pruebas posteriores (Trillos, 1989).
Para evitar demoras en la determinacin de resistencia en los tubrculos a la gota, Wastie
(1991) sugiere que se tomen dos muestras de 10 plntulas por cruce, que crecen en el
invernadero. Cada plntula debe proporcionar dos tubrculos, los cuales son analizados para
predecir la susceptibilidad de una progenie al tizn tardo. En Colombia no es frecuente el dao
por gota en los tubrculos, aunque stos pueden llevar el inculo en las semillas posibilitando una
rpida infeccin despus de la siembra, al momento de la emergencia, la cual es mas difcil de
curar.

86

5.4. Pruebas de evaluacin de resistencia en plantas bajo condiciones de

campo
Para las evaluaciones de campo se deben elegir sitios en los cuales, se presenten las condiciones
ambientales mas apropiadas para una alta incidencia de gota y preferiblemente se deben hacer
inoculaciones mediante la aspersin de las plantas con suspensiones de 5.000 zoosporangios /ml
de una cepa compleja (originalmente una cepa sin los factores de virulencia r5, r7 y r9 y
caracterizada por Turkesteen, actualmente se tiene una cepa mas compleja, que no posee el factor
r5, del Oriente Antioqueo) en horas de la tarde, previa aplicacin de riego en caso que se
presente un periodo seco. Hay que evitar hasta donde sea posible, la dispersin del inculo a los
cultivos de papa y tomate de los agricultores, razn por la cual se debe tener en cuenta la
distancia de los campos experimentales y la direccin de los vientos, ya que los esporangios
pueden ser transportados a varios kilmetros (J. L. zapata, comunicacin personal, 2002).
Segn Trillos (1989) para el lanzamiento de una variedad, se hacen por lo menos 5
evaluaciones de campo, previas a las pruebas regionales. As: Plntulas o familias de tubrculos.
Cada planta representa un genotipo diferente, razn por la cual hay que ser muy objetivo, para
seleccionar los fenotipos adecuados, por comparacin con el testigo, el cual a su vez sirve como
fuente de inculo. Los fungicidas se pueden omitir o utilizarse hasta las dos terceras partes del
ciclo vegetativo. La fertilizacin y el manejo de plagas se realiza segn las necesidades del
cultivo.
Se hacen mximo 6-7 lecturas para gota, empleando intervalos de 5-10 das despus de iniciada
la infeccin, o cuando se observe entre 0,1 y 1 % del follaje afectado. Se recomienda que una
persona haga las lecturas en campo y otra haga las anotaciones en el libro de campo, para que las
estimaciones previas no influyan en las lecturas. Adems se determina la produccin, para lo
cual hay que determinar el nmero de plantas que germinaron y permanecieron al momento de la
cosecha y otras caractersticas importantes como la arquitectura de la planta, la morfologa, el
tamao, color de la piel y la carne de los tubrculos, sabor, uniformidad, reaccin a otras
enfermedades y plagas, periodo de latencia, caractersticas para industria, capacidad de
almacenamiento.
Segn Wastie (1991) las relaciones entre la resistencia de la variedad y el nivel de prdida de la
cosecha, determinadas bajo diferentes condiciones de intensidad de la enfermedad, han sido poco
consideradas en el mejoramiento por resistencia a gota. Se asume que hay una relacin y se cree
que el crecimiento ya se ha alcanzado, cuando la defoliacin alcanza el 75% (equivalente a una
calificacin de 3 en la escala de 1-9). Esta situacin es el caso de las zonas templadas, donde al
comienzo de la estacin lluviosa es muy baja la cantidad de inculo en el campo, pero en el
trpico, donde se tienen cultivos de papa todo el ao, en diferentes estados de desarrollo, hay una
alta presencia de inculo de manera permanente, pues adems, las condiciones climticas
favorecen el desarrollo de la gota.
Las nicas variedades con dicho nivel de susceptibilidad, que son tolerantes en la prctica en
Europa, son las de maduracin temprana, que logran la produccin deseada, antes de que
aparezca el tizn tardo. Obviamente la infeccin temprana afecta mas la produccin y esta es la
razn de los programas de aspersin con fungicidas y de mejoramiento gentico por resistencia al
patgeno, al punto que se retrace el inicio de la epidemia lo mas posible y se logre la tuberizacin
temprana, lo cual proporciona al menos un escape parcial a la gota (Wastie, 1991).
87

Las cuatro primeras evaluaciones clonales, se realizan de manera similar. Se siembran a la

distancia de los cultivos comerciales. En la primera generalmente no hay semilla para las
repeticiones entonces se deben sembrar surcos con 10 tubrculos, separados por la variedad
testigo (susceptible) y se hacen de 4-6 lecturas para gota en le follaje, de acuerdo con la escala
propuesta por Turkesteen (escala CIP, tabla 3). Se pueden aplicar fungicidas hasta las dos
terceras partes del periodo vegetativo del cultivo. Las siguientes tres evaluaciones deben tener
por lo menos tres a cuatro (bloques) repeticiones. (Trillos, 1989).
No siempre la resistencia del follaje se relaciona con la resistencia de los tubrculos, razn por
la que deben ser evaluadas por separado, para lo cual, se toma una muestra representativa de cada
clon de aproximadamente 5 Kg, al momento de la cosecha y se almacenan por dos semanas, a 1518 C y alta humedad relativa, al cabo de las cuales se procede a determinar el nmero de clones
infectados con tizn tardo, como un porcentaje de la muestra total. Si la infeccin de los
tubrculos en el campo no es muy frecuente, bajo las condiciones experimentales o en su rea
particular, se hacen inoculaciones artificiales a los tubrculos inmaduros de los clones en etapas
avanzadas de seleccin (Trillos, 1989).
Parmetros para estimar la resistencia de las plantas en el campo
En las evaluaciones de campo, el Centro Internacional de la Papa (CIP) utiliza una escala (tabla
7) que va de 1 a 9, basada en cuatro elementos bsicos:
La ley de Fechner-Weber, la cual implica que las diferencias de la percepcin visual del ojo
humano, estn basadas sobre una escala logartmica. Una consecuencia es que por ejemplo, las
diferencias entre 3% y 6% del rea de la hoja afectada es fcilmente distinguible por personas,
pero no es tan diferente entre el 25% y el 28%.
Es fcil memorizar los valores de los porcentajes escogidos 3%, 10%, 25% y 50%.
La misma logstica de la escala de crecimiento mencionada al comienzo. Sin embargo, para
encajar los valores escogidos, se ha distorsionado levemente la curva para la escala de 1 a 9 en el
intervalo de 2 a 8. Los valores R, calculados con la escala de 1 a 9 pueden ser transferidos a los
valores logit al multiplicarlos por 1,16 de acuerdo con la ecuacin y=1,16x 5,8 (Turkesteen,
1973).
La transformacin logartmica no acepta los valores 0 1. Sin embargo, en las pruebas de
campo con agricultores, los valores 0 y 1 son conocidos y son de importancia.

88

Tabla 7. Escala para evaluar el grado de rea foliar afectada por P. infestans
Porcentaje de
follaje afectado
0. 0
0.1- 3 (1.55)
3.1-10(6.55)
10.1-25(17.55)
25.1-50(37.55)
50 1-75(62.55)
75.1-90(82.55)
90.1-97(93.55)
97.1-100 (98.5)

Grado
1
2
3
4
5
6
7
8
9

Descripcin
Ninguna o muy pocas lesiones dentro de todo el surco
Hasta 10 lesiones pequeas por planta. > de 0%, pero< 10%
Hasta 30 lesiones pequeas por planta o 1/20 hoj
La mitad del follaje destrudo

Muy pocas reas verdes, menos del 10%

Follaje completamente destrudo

Tomado de Henfling, J.W.1980. El Tizn Tardo de la Papa Phytophthora infestans. Boletn de Informacin
Tcnica 4 . Centro Internacional de la Papa (CIP). Lima, Per. 16p. Trillos,1989

Se pueden evaluar los parmetros como la curva de incremento de la enfermedad, la tasa de

infeccin aparente (coeficiente de regresin lineal r) y el rea bajo la curva de infeccin (A). En
general por la permanente liberacin de inculo nuevo, se desarrolla una curva tpica en forma de
S, con crecimiento lento al principio y al final, pero acelerado en la parte media del ciclo, para lo
cual se grafican los valores del porcentaje del rea foliar afectada, contra el tiempo y puede
transformarse matemticamente a una grfica lineal, por la transformacin logartmica de la
proporcin de tejido afectado.
Si x es la porcin de tejido afectado, se tiene:
Logit de x= Loge( x/1-x) Logit de x=Ln( x/1-x)
Ejemplo: si el rea afectada en un momento dado es 30%, el logit x ser :
Log e (0.30/1-0.30) =Log e (0.30/0.70)= -0.085.
La tasa de infeccin aparente representa la susceptibilidad del clon a la gota, la cual es mayor
en la medida que el coeficiente de regresin (r) sea mayor, cuyo clculo se indica a continuacin:
Das

% de rea afectada

Grados CIP

Punto intervalo%

15
7

22

36

44

40

70

80

98

1.5

29

6.5 37.5 62.5 82.5 98.5

xy x y
xy

n
r=
de donde r =
x
x

(
x
)

utilizando la escala CIP r = 263,3/1.414,9

89

r = 0.186, cuando hay varias repeticiones, los valores de x se pueden promediar.

El rea del progreso de la enfermedad o rea bajo la curva de infeccin, corresponde a la
sumatoria de trapecios.
n

A=

( x
i =1

i +1

+ xi )

2 (ti +1 t i )

x: Proporcin de tejido afectado (punto medio del intervalo en porcentaje)

t: Tiempo cuando se realiza la observacin en das
n: Nmero total de observaciones
Ejemplo:
A={(1.55+0)/2(8-1)}+{(6.55+1.55)/2(15-8)}+{(37.55+62.5)/2(22-15)}+
{(62.55+37.33)/2(29-22) } +{(82.55+62.55)/2(36-29) } + {(98.5+82.55)/2(44-36) }
A=5.43+28.35+154.35+350.35+507.85+724.20=1.770.53
A=1.770.53
En la escala CIP basada en una transformacin logartmica, se puede calcular directamente el
coeficiente de regresin, pero las comparaciones siempre tendrn que hacerse con los clculos de
la escala para todos o con la porcin de rea afectada para todos, pero no se deben mezclar
escalas, para que las comparaciones sean vlidas.
El mejor parmetro para estimar la resistencia de plantas en el campo, puede ser expresado
como los valores del rea bajo la curva del progreso de la enfermedad (ADPC). A nivel de
laboratorio generalmente se utilizan: tamao de la lesin (LS), periodo de latencia (LP) y
densidad de esporas (SD) sobre fololos desprendidos, los cuales parece que se correlacionan con
el parmetro ADPC, determinado en campo, al correr una regresin lineal mltiple. Otros
parmetros son la tasa de crecimiento de la lesin (LGR) o tasa de extensin de la necrosis, que
se correlaciona con el tamao de la lesin (LS), eficiencia de la infeccin (IE) y porcentaje de
lesiones exitosas, (Vleeshouwers, et al., 2000).
Dorrance e Inglis, 1997 (citado por Vleeshouwers, et al., 2000b) sealan que las pruebas con
plantas de invernadero, se correlacionan mejor con el rea bajo la curva del progreso de la
enfermedad en el campo, que las pruebas de laboratorio con fololos desprendidos y discos de
hoja. Las condiciones ambientales del campo, son muy diferentes a las de las camas climatizadas
y de invernadero. En este ltimo se puede presentar resistencia inducida por el estrs del calor y
la sequa. Sin embargo, se observ interaccin entre el material inoculado (plantas intactas y
hojas desprendidas) y la variedad evaluada (p=0,029), pero las hojas desprendidas presentaron
una expresin reducida de la resistencia. Adems se ha demostrado que la edad del tubrculo
tiene efecto sobre la resistencia en el follaje (Stewart et al., 1983).
90

Jaramillo y Gilchrist (2002) evaluaron diferentes clones de papa con resistencia de campo, bajo
las condiciones de Paysand (BhMb, a 2.550 asnm, 14 C de temperatura media y 1.500mm de
precipitacin), los cuales presentaron diferentes grados de resistencia, expresados por las reas
bajo la curva de infeccin y los ndices de regresin (r).
Cuando las lesiones en fololos no crecen mas de 16 mm2, se considera que es una reaccin de
hipersensibilidad y no se incluye dentro de los clculos de la tasa de crecimiento de la lesin,
mientras si crece mas de 16 mm2 , al menos en uno de las repeticiones en el tiempo evaluado, se
estiman las tasas de crecimiento de las lesiones y la regresin lineal a travs del tiempo. El rea
afectada se calcula por el uso de la frmula (A= LA) y se transforma a raz cuadrada.
Se ha observado que el patgeno no es capaz de detoxificar (metabolizar) fitoalexinas y que la
resistencia se basa mas en la concentracin que en el tipo de fitoalexinas. Al parecer la variedad
Diacol Capiro tiene una baja concentracin de Fitoalexinas y es suceptible a P. infestans,
mientras que la variedad Unica, presenta buena resistencia al patgeno y tiene una alta
concentracin de fitoalexinas, posiblemente procedente de genes que confieren resistencia de
campo (ensayos preliminares realizados en tubrculos de las variedades UNICA, Diacol Capiro,
Monserrate y Purac en el Laboratorio de Estudios Moleculares, en 1997 (cuyos resultados no
fueron publicados).
La resistencia especfica de raza se debe a los genes mayores (R) los cuales se conservan entre
especies de plantas, que conducen a la codificacin de receptores especficos y que al ser
disparados por elicitores, inician las seales de traduccin por una va que conduce a la
hipersensibilidad. En un modelo gen x gen, la presencia de los genes R en la planta y su
correspondiente gen de avirulencia (Avr) en el patgeno, resulta en una resistencia (interaccin
incompatible), mientras la ausencia de genes R o de Avr resulta en una interaccin compatible y
por lo tanto se presenta la enfermedad.
En total se han introducido 11 genes R a variedades de papa, procedentes de Solanum
demissum. En la naturaleza han evolucionado numerosas razas del patgeno y son capaces de
infectar plantas con genes R, por lo que se denominan razas complejas del patgeno, mientras
que la raza 0, se define como la raza incapaz de infectar cualquier planta que tenga genes R.
Dicha respuesta podra ser de completa incompatibilidad, cuando la presencia de genes en la
papa, resulta de interacciones incompatibles con los aislamientos de P. infestans avirulentos; o
hipersensibles si se presenta una muerte rpida de 2 o 3 clulas de la epidermis, al momento de
iniciar la penetracin, lo que evita que el patgeno crezca.
Segn Forbes y Jarvis (1993) para seleccionar clones con resistencia parcial al tizn tardo, se
requiere un conocimiento de los tipos de resistencia involucrados y sus respectivas expresiones
fenotpicas. Adems, debido a las complejas interacciones entre la resistencia parcial y el
ambiente, se requiere tener en cuenta la fuente (variedad o especie), para definir claramente el
tipo de resistencia. Es necesario controlar los efectos de los genes R o mayores, con el fin de
identificar y medir la resistencia parcial (Estrada, 2000).

91

CAPTULO VII

CONTROL DE LA GOTA (TIZN TARDO) CAUSADA POR Phytophthora

infestans
La forma mas adecuada para enfrentar la gota (tizn tardo) de la papa y el tomate, es mediante
la utilizacin de todas las tcnicas que conducen al manejo integrado de la enfermedad, como las
medidas de prevencin, mediante el cumplimiento de las normas sanitarias para el transporte de
material vegetal, erradicacin, las cuarentenas cuando se requieran, variedades resistentes,
semillas sanas.
Govers (2001) opina que la clasificacin errnea de P. infestans como hongo, ha causado
muchas dcadas de retrazo, dado que gran parte de los ingredientes activos de los fungicidas no
son tan efectivos para el control de los oomicetos, adems de que se ha limitado el conocimiento
de la biologa de este patgeno.
Las prcticas culturales bien ejecutadas y oportunas como la calidad sanitaria de la semilla, la
siembra, fertilizacin, control de malezas y socas, recoleccin de residuos de cosecha, riegos y
drenajes si se requieren, cosecha oportuna y finalmente acudir al control qumico del patgeno,
para lo cual es conveniente hacer un diagnstico temprano del patgeno en los tejidos. Por la
importancia de la resistencia gentica, este tpico ha sido tratado en un captulo separado.
Egan et al., (1995), consideran que es poco probable que la ingeniera gentica o las tcnicas de
mejoramiento tradicionales, puedan producir resistencia durable, o conduzcan a una reduccin
significativa de la necesidad del uso de fungicidas en un futuro inmediato, pues adems de
variedades resistentes y el mejoramiento de las estrategias de control, podran involucrarse
nuevos y mejores fungicidas, con mayor flexibilidad de uso y tiempo de aplicacin, integrado a
mtodos de prediccin de la enfermedad.
Schber-Butin et al. (1995), evaluaron un mtodo indirecto de ELISA (ensayo de
inmunoabsorbancia ligada a enzimas) y uno especifico con dos cebadores (primers Pi1 y Pi2)
para la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR). Con el mtodo de ELISA, encontraron que
a los tres das de inoculacin del tejido foliar con zoosporas, fue posible observar reacciones
directamente relacionadas con el grado de resistencia de las variedades evaluadas y en tubrculos
a los dos das, pero se presentan reacciones cruzadas con otras especies de Phytophthora no
patognicas a papa. Mientras que la PCR fue mas especfica, con resultados a los dos das
despus de haber sido inoculados los tubrculos y fololos. Ambas pruebas presentaron
sensibilidad similar para los umbrales de micelio puro (100ng/ml).
Es importante que los agricultores protejan bien sus cultivos. Si este no es el caso un sistema
de prediccin basado en los sistemas de control de la gota, se vuelve riesgoso. Si algn agricultor
permite que la gota se desarrolle en el campo, alcanzando niveles altos y liberacin de esporas, se
pueden desarrollar epidemias en los cultivos de los agricultores vecinos.
En el largo plazo, es mas exitoso la integracin de todos los factores, con variedades mas
resistentes y nuevos fungicidas, acoplados con un mayor entendimiento del impacto de la
92

epidemiologa y la variacin gentica de las poblaciones, por efectos de la presencia del tipo de
apareamiento A2, sobre el control de la enfermedad (Egan, et al., 1995), dado que la
recombinacin sexual, permite que el patgeno se adapte mas fcilmente a las condiciones
adversas y las oosporas pueden sobrevivir en el suelo, de manera independiente a sus plantas
huspedes y actuar como una fuente extra de inculo (Govers, 2001).
ELEMENTOS PARA EL MANEJO INTEGRADO DE LA GOTA DE LA PAPA
Es necesario conocer los factores que inciden en las epidemias de gota de la papa y/o el tomate
y el impacto de las diferentes fuentes de inculo de P. infestans, para poder establecer las
medidas de control mas convenientes, segn las situaciones particulares de cda zona.
1. Control Biolgico
Hay algunos intentos de conseguir microorganismos para control biolgico. Se han realizado
algunas inoculaciones previas con cepas de P. infestans, que por su cultivo permanente en medios
artificiales han perdido su agresividad a las plantas de papa y se han venido buscando cepas de
bacterias que le den alguna actividad de antibiosis a P. infestans y otros patgenos de plantas.
Sturz et al., (1999) opinan que algunas comunidades de bacterias endofticas, pueden inducir un
cierto grado de defensa contra los patgenos, segn su adaptacin y localizacin dentro del
husped, la cual puede ser especfica para un determinado sitio y tipo de tejido.
2. Saneamiento
Estas prcticas estn encaminadas a reducir la cantidad de inculo para los cultivos siguientes.
Implica la destruccin del follaje antes de la cosecha, pilas de tubrculos de cosechas anteriores
que hayan quedado en el campo, o socas y dems residuos de cosecha, que permiten mantener el
inculo vivo como cordones verdes en la zona de los cultivos. Tambin la eliminacin de plantas
huspedes alternos, en muchos casos especies silvestres u otros cultivos de papa , tomate de rbol
y lulo, infestados y sin control en los lotes aledaos a los cultivos de papa. Esta prctica evita
que tubrculos infestados puedan ser almacenados, para semillas en la siguiente generacin.
Tambin es conveniente introducir rotaciones del cultivo a mas largo plazo.
Un slo tubrculo afectado por cuatro millones de tubrculos sembrados, del cual puede
emerger un brote afectado, es suficiente para iniciar en esa misma estacin, el ciclo de la
enfermedad en el campo a travs de las esporas que se liberan de la lesin e inician nuevas
lesiones. Bajo condiciones favorables y en variedades susceptibles, el periodo de una generacin
de esporas a la siguiente, sobre una nueva lesin es de cuatro das. Dicho periodo es similar al
periodo de latencia utilizado en el sentido epidemiolgico (Turkesteen S.F.).
En Holanda, Zwankhuizen et al., (1998) establecieron que las pilas de tubrculos abandonados
en los campos, eran significativamente los focos principales de diseminacin de la gota, seguidos
por los cultivos orgnicos en los cuales se ha observado una alta intensidad de la gota, las socas o
tubrculos abandonados en los lotes de cultivos previos, los tubrculo-semilla y las plantas de
papa y tomate en los jardines de las casas, pero las epidemias variaron dramticamente de un ao
a otro, segn las condiciones del clima que favorecieran en mayor grado el desarrollo de la gota.
93

Cabe resaltar que las condiciones ecolgicas, de manejo y las variedades de papa y tomate, son
muy diferentes en los pases del trpico, por lo tanto estas experiencias deben ser tomadas como
referencia, para la elaboracin de los programas de control integrado en las diferentes
ecoregiones.
3. Escape
Esta prctica va encaminada a evitar los cultivos en ciertas zonas y/o durante los periodos que
favorecen las condiciones ambientales para el desarrollo del patgeno, mediante la anticipacin o
retrazo de las fechas de siembra. Es muy importante conocer el comportamiento de la resistencia
de las variedades, ya que algunas variedades, se vuelven susceptibles bajo ciertas condiciones
ambientales, como Alfa que se vuelve susceptible en das cortos. Hay variedades de tuberizacin
temprana o alta resistencia de los tubrculos, por lo tanto, el desarrollo de la enfermedad no
afecta la produccin.
4. Prediccin
Segn Turkesteen (198.) se han adaptado dos sistemas de prediccin de la enfermedad, para
determinar la necesidad de aplicar fungicidas, el sistema BLITECAST y el sistema de pronstico
negativo, los cuales registran las condiciones del clima y las relacionan con las condiciones del
tiempo posibles para el desarrollo de la gota, segn los registros histricos, por comparar las
condiciones del tiempo para el desarrollo de la gota en el campo y en el laboratorio durante varios
aos.
Estas metodologas son funcionales en los sistemas agrcolas caracterizados por muy bajos
niveles de inculo iniciales, debidos a largos periodos en los cuales las condiciones para el
desarrollo de la enfermedad son desfavorables.
En las zonas templadas o donde hay
estacionalidad en la produccin existen tres periodos con riesgo variable de la enfermedad, el
primero despus de la siembra del cultivo, caracterizado por bajo riesgo; el segundo de posible
riesgo durante el desarrollo de los cultivos, en el cual los agricultores deben de ser alertados y el
tercero es un estado mas avanzado del cultivo, con un periodo de permanente peligro para el
desarrollo de la epidemia. La resistencia gentica induce a una baja velocidad de desarrollo de la
enfermedad, razn por la cual el agricultor tiene suficiente tiempo para aplicar fungicidas, si las
condiciones de epifitotia lo requieren (Turkesteen S.F.).
Myint (2002), indica que en Myanmar se ha logrado un buen control de la gota, cuando
hacen las aplicaciones despus de que se acumulan 12,7 mm de lluvia, similar a
recomendaciones del ICA en Colombia, que seala la necesidad de realizar aplicaciones
fungicidas despus de la acumulacin de 13 mm, en el caso de variedades susceptibles a
infestans.

se
las
de
P.

Colombia y los pases de la zona Andina, tienen condiciones ecolgicas muy variables en los
ecosistemas paperos, razn por la cual es difcil establecer sistemas de prediccin, para grandes
regiones, razn por la cual se deben realizar estudios de la dinmica patognica para las distintas
regiones con variedades adaptadas a cada zona, utilizando los registros de lluvias y temperaturas,
dadas las facilidades de implementar termmetros y pluvimetros manuales en las fincas a bajo
costo, con el fin de que los agricultores empiecen a utilizar los sistemas de prediccin y no
94

dependan de las aplicaciones calendario, contribuyendo a una agricultura mas tecnificada y

acorde con las exigencias de los mercados mundiales.
Hay que tener presente que los riesgos de las epidemias son altos debido a que se siembra papa
todo el ao, hay cultivos en diferentes estados de desarrollo y se da un manejo irregular de la
gota, por los diversos criterios de los agricultores, que en su mayora siembran pequeas reas
(menos de una hectrea para Boyac y menos de tres para Cundinamarca, segn el censo papero
de 2001-2002), por lo que cualquier foco de infeccin puede dar inicio a la epidemia en la regin,
razn por la cual el componente qumico es un factor indispensable dentro de las prcticas de
manejo integrado de la enfermedad, dado el alto nmero de agricultores involucrados en esta
cultivo y los altos riesgos que se corren por no hacer una aplicacin oportuna.
5. Otras prcticas de control cultural
La fertilizacin adecuada puede ser una prctica que puede contribuir de manera importante a la
reduccin de los daos causados por la gota, por incidir en la relacin resistencia/susceptibilidad
del cultivo. Sin embargo, hay pocos reportes, uno de los cuales fue realizado por Santos et al.,
(2002), en el cual manifiesta que se ha identificado que el potasio tiene un efecto sobre la
enfermedad a travs de funciones metablicas especficas, que alteran las relaciones de
compatibilidad del ambiente, en torno al husped-parsito (Huber y Arny, 1985, reportados por
Santos et al., 2002).
Frenkel et al., (2002) indican que el boro como microelemento que abunda en las aguas de
riego recicladas y otros compuestos no determinados, pueden inducir resistencia sistmica
adquirida contra P. infestans y Alternaria solani. Segn Moeller et al., (2002) en el sur de
Alemania se estudi la influencia de la interaccin de la aplicacin de nitrgeno y la
susceptibilidad a P. infestans sobre el llenado de los tubrculos, en cultivos de campos de
produccin orgnica de papa, observando que el anlisis de la regresin muestra que la variacin
en la produccin fue principalmente explicada por las diferencias en el suministro de Nitrgeno
entre los campos individuales, pero el progreso de la enfermedad por Phytophthora infestans slo
explica diferencias aproximadas de un 25% del total de la produccin, posiblemente por la
influencia del nitrgeno sobre el llenado de los tubrculos.
El suministro de Nitrgeno determina la tasa de llenado y el periodo de crecimiento de los
tubrculos. En aproximadamente el 50% de los cultivos orgnicos el suministro de Nitrgeno es
tan bajo, que el llenado de los tubrculos es limitado slo por el Nitrgeno, an en aos con
aparicin temprana de Phytophthora infestans, pero con suministros mas altos de Nitrgeno en
campos individuales, existe una mayor probabilidad de que P. infestans se vuelva limitante, lo
que implica que la fertilizacin con N tenga una importancia relativa en las medidas de
prevencin de la gota (Moeller et al., 2002).
En un campo de papas orgnicas y una parcela experimental, se evalu el desarrollo de P.
infestans en dos variedades de papa (una susceptible y otra moderadamente resistente) en un
suelo arenoso con plantas de la familia Brassicae como cultivo previo, el cual fue fertilizado con
excrementos de pollo y compost con diferentes niveles de nitrgeno (85-170 Kg/ha de N) y
algunos de los tratamientos fueron suplementados con sulfato de potasio, para lograr los niveles
N:K requeridos (1:1; 1:2). No se observ incremento en el desarrollo de la gota en follaje, ni
tubrculos a medida que se increment el nivel de N. Pero las producciones en ambas variedades
95

fueron mas altas cuando se abonaron las parcelas con compost a razn de 170 Kg/ha de N, que
con estircol de pollo peletizado. Cuando se aplic K adicional la materia seca del tubrculo
disminuy (Santos et al., 2002).
6. Control qumico
El control qumico hace parte de las estrategias del manejo integrado de la gota de la papa y el
tomate, dado que es imposible hacer un control eficiente a base de productos orgnicos o
biolgicos, razn por la cual hay que integrarlo a las medidas de prevencin y mejoramiento
gentico, no slo por genes mayores o especficos a razas del patgeno (resistencia vertical) sino
por resistencia de campo, la cual es mas durable, pero difcil de conseguir. El control qumico
puede estar enfocado a fungistticos (inhiben la germinacin de las esporas) o fungicidas que
matan las esporas, con accin erradicante, pero que pueden causar fitotoxicidad, de forma
especfica a los oomycetes, pues segn Govers (2001) hay que producir y utilizar productos
oomicidas.
Griffith et al.,(1992), citado por Erwin y Ribeiro, (1996), el desarrollo de fungicidas debe estar
asociado a enzimas particulares y otros procesos bioqumicos que son nicos para los Oomycetes,
puesto que poseen una maquinaria bioqumica y molecular propia. El antibitico poliene suprime
el crecimiento de la mayora de los hongos pero no de Phytophthora. Govers (2001) minifiesta
que ha habido cierta demora en el desarrollo de molculas qumicas para este patgeno, puesto
que hasta hace poco tiempo fue considerado como hongo, cuyas caractersticas bioqumicas son
diferentes.
Dado que los Oomycetes no requieren esteroles para su crecimiento, no son sensibles a
fungicidas que inhiben la sntesis
de estos compuestos, como Triademefon, Triadimenol,
Bitertanol y Propiconazol , es as como el Benomyl, que es muy activo en hongos en bajas dosis,
se utiliza como medio selectivo para aislar Phytophthora, pues este compuesto no se adhiere a la
tubulina (Erwin y Ribeiro, 1996) .
Segn Egan et al., (1995), a finales de 1880s se utilizaron los productos a base de cobre (Caldo
Bordels), los cuales pueden ser aplicados al comienzo y final del cultivo, pero estn siendo
reemplazados por los ditiocarbamatos (Zineb, Maneb y Mancozeb) a partir de 1930, por ser
menos fitotxicos y en ocasiones aumentan el color verde de las hojas, posiblemente porque
corrigen la deficiencia de algunos elementos menores tipo cationes como el Zinc. Para los aos
1970s, se pusieron en el mercado los fungicidas sistmicos y curativos.
En Checoeslovakia en los periodos de fuertes lluvias en 2000-2001 y alta humedad en el suelo,
se favoreci el desarrollo de la gota, causando prdidas entre el 50-80% en las parcelas no
tratadas: los fungicidas empleados fueron el Fluazinam, Fentin y el hidrocloruro de propamocarb.
El Mancozeb y el Oxicloruro de Cobre, proporcionaron un bajo control. (Hausvater, 2002).
Despus de tres aos de ensayos de campo en Suiza, Wiik (2002) lanza la hiptesis de que es
posible reducir el nmero de tratamientos y las dosis de productos qumicos, al comienzo de la
estacin, en combinacin o mezclas de fungicidas con efectos sinergsticos, apoyados en los
pronsticos y alertas de epidemias posibles.
El control curativo o posterior a la infeccin de las plantas, est relacionado con muchos
factores, algunos relacionados con la naturaleza especfica del fungicida y otros como la
96

temperatura, la densidad del inculo y localizacin de la infeccin son mas generales y afectan de
manera similar a los distintos fungicidas curativos. Geddens et al., (2002) observaron que la alta
temperatura, alta densidad de inculo y la infeccin de las hojas, favorecieron el desarrollo rpido
de la infeccin, reduciendo la efectividad de los fungicidas curativos.
La resistencia gentica de las variedades, permite la reduccin significativa de las aplicaciones
de fungicidas, como fue observado por Jaramillo y Gilchrist, 2002, Kato y Shimanuki (2002), sin
que se afecte de manera significativa la produccin, pero no es posible lograr una buena
produccin sin control qumico, especialmente cuando las condiciones ambientales son
favorables para el desarrollo de la gota en el follaje.
Flier et al., (2002) opinan que la mayora de los fungicidas tienen una excelente actividad
contra la formacin de las oosporas. A concentraciones por debajo de las recomendadas, todos
los fungicidas evaluados in vitro, redujeron significativamente la formacin de oosporas. De las
evaluaciones en plantas, se concluy que tanto los fungicidas protectantes como los
semicurativos, podan ser aplicados para evitar la formacin de oosporas, a pesar de que la
epidemia hubiese estado bien avanzada. La absorcin por el tejido necrtico parece ser mas
importante que la actividad de los fungicidas que tienen caractersticas sistmicas especficas.
6.1. Normatividad para el Registro de Productos con Accin Fungicida
El Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) es la autoridad colombiana que da la autorizacin
para el registro de los productos de uso agropecuario, condicin sin la cual no puede
comercializarse ningn producto, que no haya sido previamente evaluado dentro del pas, segn
la normatividad vigente, la cual tiene mucha similitud con las normas para otros pases, como el
es caso de la Unin Europea, los cuales son descritos por Slawson, 1995. De manera general,
comprenden los siguientes aspectos relacionados con las pruebas de efectividad en el campo:
Condiciones experimentales, para lo cual cada pas o regin tiene su propia gua.
Aplicaciones de los tratamientos. Se refiere a dosis, mtodos de aplicacin e intervalos entre
las aplicaciones.
Mtodos de evaluacin como porcentajes de severidad en el follaje y los tubrculos, efectos en
las producciones.
Resultados para cada tratamiento y ensayo, establecido con validez estadstica.
Los criterios de evaluacin tienen que ver con el nmero de ensayos de campo, el control
aceptable de la enfermedad con una dosis mnima, datos de la posible resistencia, efectos sobre la
cantidad y calidad de la cosecha, fitotoxicidad y efectos no deseables (residualidad en los
tubrculos y en el medio, deriva hacia otros cultivos, efectos sobre organismos benficos o que
no son el blanco del producto).

97

6.2. Fungicidas utilizados para el Control Qumico de la Gota (tizn

tardo)
6.2.1. Protectantes
Debido a los cambios significativos en la composicin de las poblaciones de P. infestans en
Estados Unidos y Canad, Kato et al., (1997), evaluaron la sensibilidad de los fungicidas
protectantes Mancozeb y Clorotalonil con aislamientos colectados entre 1990-1994,
pertenecientes a los linajes clonales US-1, US-6, US-7 y US-8, encontrando que ningn
aislamiento o linaje clonal fue resistente a dichos fungicidas, con ligeras variaciones en el grado
de sensibilidad entre las poblaciones, con un rango de EC 50 para el Mancozeb de 1,61-4,22 g/ml
y para Clorotalonil de 0,47-0,73g/ml.
6.2.1.1. Ditiocarbamatos
Erwin y Ribeiro (1996), indican que los protectantes tipo ditiocarbamatos (mancozeb, maneb,
metiran, propineb y zineb) inhiben la germinacin de las zoosporas y el crecimiento del micelio.
No se translocan en el follaje y representan el 33% del mercado mundial para el control del tizn
tardo de la papa y el tomate, adems son de amplio espectro. En mezclas con productos
sistmicos y curativos como fenilamidas y cymoxanil, introducidos en 1970s, pueden ser mas
efectivos para el control del tizn tardo.
6.2.1.2. Phthalamidas
El Clorotalonil pertence al grupo de los phthalonitrilos, cuya accin no es especfica, pero al
parecer reacciona con los grupos tioles de las clulas.
Como fungicida foliar puede ser utilizado por largo plazo, debido a la buena tolerancia del
cultivo. Tiene buena residualidad y propiedades de redistribucin sobre la planta de papa,
hacindolo mas resistente a las lluvias, constituyndose en un excelente producto para el control
de la gota del follaje de la papa, sin embargo tiene limitaciones por el costo del producto. Egan et
al., (1995) acta como protectante y se vende como Bravo, es muy efectivo contra gota y el tizn
temprano (causado por Alternaria solani) en hojas de la papa y el tomate, dado que no es
fitotxico como otros productos. Es mas persistente en tiempos lluviosos que los dems
protectantes como el zineb y puede ser utilizado en mezcla con un ditiocarbamato. No se observ
resistencia cruzada con los fungicidas metalaxyl y cymoxanil (Power et al. 1995).
6.2.1.3. Piridineaminas
El fluazinam es un fungicida, cuyo uso a dosis bajas acta como protectante con excelente
accin residual, por su actividad antiesporulante, puede ser utilizado en las ltimas tres
aplicaciones, para prevenir la infeccin de tubrculos. Es un potente desactivador de la
fosforilacin oxidativa e inhibe la transferencia de protones a travs de las membranas
mitocondriales (Egan et al., 1995).
98

El fluazinam ofrece una alternativa no sistmica al mancozeb, bien sea para ser utilizado
durante toda la estacin, o seguido de aplicaciones con sistmicos. Generalmente tienen mayor
permanencia que el mancozeb y efectividad contra la gota del follaje. No se evalu su
efectividad como tratamiento curativo (Cooke et al., 1995).
Schepers y van Soesbergen, (1995) encontraron fluazinam a 0,1% inhibi de manera
significativa la movilidad de las zoosporas, al igual que al 1,0%, en la mezcla de
maneb/fentinacetato, con relacin al efecto del clorotalonil y el oxicloruro de cobre a las mismas
dosis.
La germinacin de las zoosporas fue significativamente inhibida por fluazinam y
maneb/fentinacetato a 0,001%. Igualmente la proporcin de rodajas de papa infectadas fue mas
baja con estos productos, cuya infeccin no slo estaba determinada por la reduccin de esporas
viables, sino por la periodicidad y cantidad de lluvia, el contenido de humedad y la temperatura
del suelo.
A pesar de una fuerte esporulacin en el follaje, se hizo inoculacin artificial al suelo, para
medir el efecto de los fungicidas ya sealados, sobre los sntomas en el follaje y los tubrculos
que crecan en dos tipos de suelo, encontrndose que el clorotalonil mostr la mas baja
proporcin de follaje afectado despus de la inoculacin. Es posible que el menor nmero de
rodajas infectadas se debi a la baja proporcin de tejido afectado y no por un efecto fuerte del
clorotalonil sobre las esporas presentes, cuya movilidad y germinacin fueron fuertemente
afectadas por el fluazinam y el maneb/ fentinacetato (Schepers y van Soesbergen, 1995)
6.2.1.4. Compuestos trifeniltinas
Incluyen fentin-acetato y fentinhidrxido. Son muy efectivos contra la gota de la papa en el
follaje y tambin ofrecen alguna proteccin a los tubrculos, debido a su actividad en el suelo. Es
antiesporulante, reduciendo la dispersin de los esporangios, que podran causar infeccin en los
tubrculos. Actan inhibiendo la fosforilacin oxidativa de las esporas y el micelio, a la vez que
pueden inhibir el transporte de electrones en los cloroplastos de las plantas, causando
fitotoxicidad, razn por la cual solo son recomendables para las aspersiones al final del periodo
vegetativo del cultivo (Egan, et al., 1995).
Los fungicidas protectantes deben ser utilizados con mayor frecuencia en tiempos lluviosos (37 das) dependiendo de la localidad y la severidad de la enfermedad, procurando que se apliquen
en el momento de la germinacin de las zoosporas, pero antes de que penetren al tejido, para
evitar que se presente la infeccin. En condiciones de alta humedad (o lluvias) y temperaturas
superiores a 10 C (alto riesgo de enfermedad) es preferible utilizar productos con actividad
curativa. (Egan et al., 1995).
6.2.2. Fungicidas Sistmicos
Hay cinco grupos principales de nuevos productos sistmicos que son activos contra
Oomicetos, los cuales se pueden trasladar hacia arriba con la transpiracin (por el Apoplasto) a
las nuevas zonas de crecimiento o hacia abajo por el floema (por el Simplasto), en ambos
sentidos como el fosetil de Al o translaminar como el Cymoxanil, los cuales se indican a
continuacin:
99

CARBAMATOS: Prothiocarb y Propamocarb, cuya frmulacin es Previcur

ISOXAZOLES: Tachigaren (5- methylisoxasol-3-ol).
CYANOACETAMIDE-OXIMES: (Cymoxanil), formulado como Curzate
ETHYL PHOSPHONATES: (fosetyl), en formulacin como Alliete
PHENYLAMIDES
5-1 Acylalanines: Furalaxyl formulado como fongrid, Metalaxyl formulado como Ridomil,
Benalaxyl, en la frmula Galben
Acylamino-butyrolactones: (Ofurace) con su frmula Patafol; Cyprofuram , formulado como
Vinicur
Acylamino-oxazolidionones, con su frmula Sandofan
6.2.2.1. Carbamatos
El Propamocarb es un carbamato, que demostr sinergismo en mezcla con mancozeb para el
control del tizn tardo, en papa. Tiene movimiento translaminar en las hojas, pero poco
movimiento sistmico acroptalo o basiptalo. Afecta las membranas celulares, pero su accin es
principalmente fungisttica. Aunque qumicamente no tiene relacin con las fenilamidas, en
Israel se encontr, que es menos efectivo en aislamientos resistentes a fenilamidas (Egan, et al.,
1995).
6.2.2.2. Derivados del cido Cinmico
El Dimetomorf, producido por la Shell, es un nuevo fungicida curativo y de gran efectividad
contra especies de Phytophthora a bajas concentraciones (0,25- 0,75 microgramos por mililitro).
Cohen et al., (1995), mostraron que era muy efectivo para el control de P. infestans en papa. Las
dosis EC90 variaron entre diferentes aislamientos desde 62 hasta 193 g/ml de ingrediente
activo.
El Dimetomorf es un derivado del cido cinmico con accin sistmica local, tiene actividad
translaminar (a travs de la hoja), y fuerte resistencia al lavado por las lluvias. Fue muy activo
contra lneas de P. infestans resistentes al metalaxyl. Su actividad fue asociada a la supresin de
los procesos de formacin de la pared celular de las zoosporas. Impide la germinacin de
esporangios y zoosporas, llegando a ser letal (Egan, et al ., 1995).
6.2.2.3. Cianoacetamidas-oximes (CYMOXANIL)
Se formula como Curzate (Du Pont) o Curathane (Dow AgroSciences). Penetra localmente y
tiene un movimiento traslaminar rpido, no se transloca de una hoja a otra, ni del tallo al follaje.
Es curativo y preventivo, pues es efectivo en los tres primeros das de iniciada la infeccin, antes
100

de que aparezcan los sntomas. Se metaboliza rpidamente en los tejidos de la planta y tiene
pocos das de actividad, pero mas que los protectantes (Erwin y Ribeiro,1996).
Tiene efecto sinergstico para el control de aislamientos de P. infestans en papa y tomate,
cuando se aplica en mezcla con mancozeb y con oxadixyl. Se ha demostrado que afecta la
sntesis de RNA en los hongos (Samoucha y Cohen, 1988,1989, Erwin y Ribeiro, 1996, Egan et
al., 1995).
Power et al., (1995) encontraron que el cymoxanil era igualmente efectivo para inhibir el
crecimiento radial del micelio de los tipos de apareamiento A1 y A2 que fueron clasificados
como resistentes al metalaxyl. La dosis letal media (EC50), fue menor para los aislamientos tipo
A1(0.27 mg/l) que para los tipo A2 (0.49 mg/l) con tendencia similar en los aislamientos
resistentes al metelaxyl. No se observ resistencia cruzada entre los fungicidas metalaxyl,
cymoxanil y clorotalonil, lo que tiene implicaciones positivas para las estrategias de manejo de
aislamientos de P. infestans resistentes.
Las evaluaciones en hojas aisladas y plantas completas, mostraron una estrecha correlacin con
los ensayos in vitro para el metalaxyl, proporcionada por las poblaciones resistentes (10-277
mg/l) y susceptibles (0,00002-1,0 mg/l), mientras que con cymoxanil y clorotalonil, no se
observaron variaciones significativas en los ensayos in vitro y en invernadero (Power et al.,
1995).
6.2.2.4. Fosfonatos
No se ha entendido de manera clara las razones por las cuales el fosetil-Al (Aliette 80 wp) tiene
amplio espectro de accin en las especies de Phytophthora, posiblemente por muchos sitios de
accin bioqumica, no es muy efectivo para el control de la gota de la papa en el follaje, pero s
tiene actividad para su control en los tubrculos. Este modo complejo de accin sucede por la
variacin en los resultados, cuando se usan diferentes plantas y lneas o especies de patgenos y
explica las razones por las cuales en la prctica no se ha encontrado resistencia a los fosfonatos
(Erwin y Ribeiro, 1996).
6.2.2.5. Fenilamidas (METALAXYL)
El desarrollo del Metalaxyl (fenilamida) fue un xito en el control de patgenos como
Phytophthora, por su efectividad y efecto curativo a bajas dosis en condiciones de alta presin de
la enfermedad, lo que hizo que fuera tan atractivo para los agricultores quienes explotaron sus
potencialidades al mximo, presionando la resistencia (Nuninger, et al., 1995).
Es altamente sistmico con translocacin hacia arriba o hacia abajo, pues el tratamiento al
follaje da buena proteccin a los tubrculos, posiblemente por la translocacin del ingrediente
activo, inhibiendo la esporulacin y el desarrollo de los esporangios, lo que no sucede con los
productos protectantes, los cuales actan sobre las zoosporas hasta su germinacin, antes de
penetrar al tejido. Adems el metalaxyl es menos susceptible de ser lavado por las lluvias (Egan,
et al.,1995).

101

El Metalaxyl afecta la sntesis del RNA ribosomal y por ende la sntesis de las protenas y
reduccin del crecimiento del micelio, mas que sobre las zoosporas, las cuales pueden ser
controladas por un fungicida protectante como mancozeb, antes de penetrar al tejido, condicin
que se aprovech en Inglaterra, para mejorar el control de la gota en hojas viejas y el control a la
par de Alternaria solani (Nuninger, et al., 1995).
Uno de los primeros reportes de la actividad del Metalaxyl indica que aplicaciones de 10 g/ml
al follaje de papa inhibieron el desarrollo de lesiones, expansin y esporulacin. Fue necesario
aplicar una dosis de 100 g/ml, cuando se hicieron las inoculaciones al follaje, tres das antes de
la aplicacin. Aplicaciones al suelo requieren dosis mas altas (1000 g por 1000 cc de suelo)
para suprimir la formacin de lesiones en las hojas, cuando se inocula tres das antes de la
aplicacin (Erwin y Ribeiro, 1996).
Segn Grohmann y Hoffman (1989) citados por Erwin y Ribeiro (1996) el Metalaxyl estimula
la formacin de las fitoalexinas capsidiol en pimentn (Capsicum annum) y glyceolina en soya
(Glicine sojae), pero no se observaron cambios ultraestructurales en las hojas de la papa, despus
de ser tratados con dosis de 10, 100 y 200 g/ml, lo que indica un efecto secundario sobre lo
mecanismos de defensa de las plantas.
La rpida generacin de resistencia del patgeno a este producto, oblig a su retiro del mercado
por algn tiempo, en varios pases de Europa como Suiza, Irlanda y Holanda, donde fue
nuevamente reintroducido en forma de mezclas con protectantes y otros sistmicos, dado que a
los cuatro o cinco aos las poblaciones de P. infestans, se vuelven nuevamente susceptibles al
producto.
Schepers y van Soesbergen (1995) propusieron un programa para el control de la gota en
Irlanda con amplia utilizacin de protectantes para reducir el riesgo de cepas resistentes a
fenilamidas
RESISTENCIA A FUNGICIDAS SISTMICOS CON NFASIS EN LAS
FENILAMIDAS
Una pequea poblacin puede sobrevivir a la aplicacin de fungicidas por diferentes razones,
entre otras: 1) el escape por deficiencias en las aplicaciones, las cuales no cubren completamente
las plantas, 2) Algunos individuos de la poblacin son menos sensible que otros, previo a las
aplicaciones del producto, de tal forma que no son controlados y continan los ciclos de
multiplicacin y 3)puede llegar inculo de campos vecinos (o plantas arvenses), no tratados o en
los cuales el fungicida redujo su accin por degradacin (Gisi et al., 1997).
Para 1980 la resistencia a fenilamidas en las poblaciones de P. infestans en Holanda, era del
77% de los aislamientos y decreci en la medida que el producto se fue retirando del mercado.
En 1984 se aplic en mezcla con Mancozeb y luego se hicieron mezclas con Maneb y
Fentinacetatos, con un manejo limitado, pues slo se recomendaba y se recomienda hacer dos
aplicaciones por ciclo del cultivo en situaciones crticas, para el manejo de epidemias severas,
pero se debe evitar las aplicaciones en estado avanzado de la enfermedad. (Davidse, et al., 1989)
Segn el Comit de Apoyo para la Resistencia a Fungicidas (FRAC, 2002) la sensibilidad de
las poblaciones de P. infestans flucta de un ao a otro y dentro de una misma estacin. En
102

muchos casos los aislamientos sensibles predominan al comienzo de la estacin y los resistentes
al final, tanto en campos tratados como en los no tratados. En Europa los aislamientos de tomate
son mas sensibles, mientras que los de papa son mas resistentes a las fenilamidas.
De acuerdo con la FRAC (2002) algunos biotipos de P.infestans son naturalmente resistentes al
metalaxyl, habindose reportado poblaciones resistentes y susceptibles en campos no tratados con
fenilamidas, situacin observada en el laboratorio de Estudios Moleculares con aislamientos
procedentes de Paysand, corregimiento de Medelln Colombia. Igualmente Fraser, et al.,
(1995), observaron que el 82% de los aislamientos evaluados en Carolina del Norte presentaron
resistencia, muchos de los cuales no haban sido tratados previamente con fungicidas.
Gisi et al.,(1997) opinan que antes de la aplicacin de fungicidas la sensibilidad bsica de
individuos en una poblacin de patgenos puede diferir de 10 a100 entre los aislamientos menos
y mas sensibles. En poblaciones de P. infestans, este factor determinado en ensayos con discos de
hojas fue de 100 para azoxystrobin, para el cual no se detectaron aislamientos resistentes,
aumentado a 1.000 para Cianoacetamidas-Cymoxanil, sin presentar resistencia y mayor de
10.000 para Fenilamidas-oxadicyl, con subpoblaciones sensibles, con sensibilidad intermedia y
resistentes.
Shattock (1988) citado por Erwin y Ribeiro (1996), dice que no hay claridad sobre los
mecanismos por los cuales surge la resistencia de P. infestans al metalaxyl, pero dado que es un
patgeno diploide, la progenie de oosporas aisladas de cruces entre un aislamiento sensible contra
uno resistente, es consistente con la explicacin de que la resistencia es gobernada por un locus
nuclear simple, que exhibe dominancia incompleta.
FRAC (2002) menciona que el modo de resistencia puede involucrar uno (o dos genes)
mayores y potencialmente varios genes menores. Sin embargo, no se sabe si el cambio en el
mismo locus es siempre el responsable de la insensibilidad. Por analoga con otros sistemas, la
insensibilidad puede resultar de una variedad de mecanismos incluyendo desactivacin,
transporte alterado, o metabolismo alterado del fungicida, o un cambio en el blanco de las
fenilamidas. Adems varios loci pueden contribuir a la insensibilidad. Pero es claro que afecta la
sntesis del RNA (Judelson y Roberts,1999).
Segn los autores arriba sealados, una diversidad de mecanismos contribuyen a la
insensibilidad de P. infestans a las fenilamidas:
La insensibilidad es una caracterstica propiamente cuantitativa, en la cual los loci mayores
MEX, interactan con genes de efectos menores.
Muchos de los genes menores son
posiblemente epistticos a MEX, debido a que la descendencia de padres sensibles muestran poca
variacin en la respuesta al metalaxyl.
Al menos dos loci mayores parecen estar presentes, los cuales se denominaron MEX1, para
aislamientos mexicanos, americanos y alemanes y MEX2 para uno de los aislamientos britnicos,
pertenecientes al mismo linaje del MEX1, pero en un sitio diferente y posiblemente ligados.
Las diferencias allicas posiblemente existen en MEX1, como evidencia por los altos valores
de insensibilidad exhibida por los heterocigotos MEX 1/mex1 de los aislamientos canadienses,
frente a los heterocigotos de los aislamientos alemanes y mexicanos.
103

Hay una fuerte posibilidad que la mutacin de genes cromosmicos, cuyo sitio no ha sido bien
mapeado, podra dar origen a heterocigotos con resistencia intermedia. Adems las mutaciones o
alternativamente retrocruces durante la profase mittica en el ncleo diploide heterocigoto,
podran producir segregantes homocigticos con resistencia, segn la herencia mendeliana
(Shattock, 1988 citado por Erwin y Ribeiro, 1996). Dado que diferentes aislamientos del linaje
clonal US-8, mostraron reduccin del crecimiento entre el 5-60%, a 5 g/ml de metalaxyl, indica
que mutaciones adicionales se han acumulado dentro del linaje (Judelson y Roberts,1999).
Dowley et al., (1995), al monitorear la resistencia al metalayl confirmaron que hubo un
incremento inicial de la distribucin en la resistencia, seguida por la introduccin de mezclas
comerciales de Fenilamidas/ Mancozeb, pero decreci en la medida que se implementaron las
estrategias anti-resistencia y se evit el uso de curativos.
Los aislamientos resistentes pueden estar presentes en las poblaciones de campo a altas
proporciones, pero estn en un equilibrio dinmico con los aislamientos sensibles. Las
dinmicas de la evolucin de la resistencia estn manejadas no solo por la resistencia a
fenilamidas, sino por la herencia gentica, los antecedentes de resistencia, la eficacia biolgica y
la migracin de los aislamientos (FRAC, 2002).
Para tener una idea sobre el comportamiento del producto en una determinada rea, se deben
tomar muestras iniciando y finalizando la estacin, para evaluar la sensibilidad y observar la
respuesta de sensibilidad al final de la seleccin, migracin, apareamiento y competencia que se
presenta durante la epidemia, en un cierto periodo de tiempo, pero este muestreo no es til para
predecir la permanencia del producto. En muchos casos las mezclas de poblaciones pueden ser
controladas por las fenilamidas, si la proporcin de resistencia no es muy alta y no se hacen mas
aplicaciones de las recomendadas con estos productos (FRAC, 2002).
Se ha reportado resistencia en Holanda, Irlanda, Israel, Escocia, el Noroeste de Estados Unidos,
Canad, entre otros. En una epidemia de tizn tardo al Noroeste de Washington se observ que
el 81% de los aislamientos encontrados en el campo, fueron resistentes al metalaxyl en dosis de
10 g/ml (Dahl et al., 1993 , citados por Erwin y Ribeiro,1996).
En Espaa, donde los problemas por gota son menores que en otros pases de Europa, se
encontr resistencia en 5 de 9 aislamientos evaluados por la metodologa de discos de hoja (Sozzi
y Staub, 1987), logrndose la mayor cantidad de aislamientos resistentes a partir de tubrculos,
debido a que los aislamientos resistentes tienen la habilidad de sobrevivir durante la estacin de
crecimiento, lo que facilita la infeccin del tubrculo (Marqunez, 1995).
Collier y Le Boutillier (1995), reportaron que en el Estado de Jersey Reino Unido, el nivel de
resistencia a fenilamidas se mantuvo relativamente estable durante 10 aos. En algunos aos
(1987-1989) se present una alta presin de inculo, debido a las condiciones meteorolgicas
prevalecientes, presentndose poblaciones con resistencia parcial. En las socas (plantas que
permanecen por residuos de cosecha en el campo) se observaron mas poblaciones resistentes de
las esperadas.
La reduccin del riesgo potencial de resistencia en Jersey por un periodo relativamente largo,
pudo deberse a la destruccin de los focos de infeccin y la remocin de los tubrculos que
quedaron en el lote, acompaado del uso de mezclas con fungicidas protectantes, incluidas las
mezclas de tres fungicidas con modos de accin diferente como fenilamidas, cymoxanil y
104

mancozeb, que han mostrado gran efectividad contra las poblaciones resistentes de P. infestans
en otros pases como Israel (Cohen y Coffey, 1986; Samoucha y Cohen 1988,1989; Collier y Le
Boutillier,1995).
Segn Goodwin y Fry 1995, los Linajes clonales US-6, US-7 y US-8 previamente identificados
en Mxico por marcadores aloenzimticos, migraron a Estados Unidos en donde se reportaron
como resistentes al metalaxyl y Sojkowski et al., (1995) indicaron que la mayora de 75
aislamientos mexicanos evaluados, mostraron baja sensibilidad al Metalaxyl (en dosis mayores
de 100 g/ml).
Puesto que en varios pases de Europa, frica, Asia y Amrica, se han encontrado los Tipos de
Apareamiento A1 y A2, se puede dar una recombinacin meitica y una segregacin, que
conducira a la produccin de homocigotos resistentes al metalaxyl, que podran multiplicarse
rpidamente obtenindose poblaciones resistentes en poco tiempo (Erwin y Ribeiro, 1996).
A pesar de que la FRAC 2002, afirma que no hay ninguna conexin gentica entre la resistencia
a las fenilamidas y el tipo de apareamiento (A1, A2). En Pakistn (Ahmad et al., 2002b),
encontraron un incremento significativo en los aislamientos de P. infestans con resistencia
intermedia al metalaxyl, para ambos tipos de apareamiento.
La proporcin de aislamientos A2 colectados en campos comerciales de Pakistn fue variable
pero muy inferior (Ahmad et al., 2002a) ,al igual que en algunos pases como el Reino Unido,
Francia, Alemania y Suiza, mientras en otros puede llegar al 50% como en Mxico, Estados
Unidos, Holanda y Scandinavia. En nuestras investigaciones se ha encontrado un alto porcentaje
de aislamientos resistentes y un bajo porcentaje con sensibilidad y resistencia intermedia al
metalaxyl forma cis, todos agrupados en el tipo de apareamiento A1 (Jaramillo et al., 2002a).
En Suiza Gisi et al., (1995), encontraron que hasta 1990 el 50% de las poblaciones fueron
resistentes a las fenilamidas, pero a partir de 1992, eran del orden del 70%, para 1994
encontraron un incremento de aislamientos con sensibilidad intermedia al oxadicyl, pero la
incidencia del tipo de apareamiento A2, se mantuvo baja (4-5%), lo que indica la prevalencia del
tipo de apareamiento A1 en la mayora de los pases.
Los autores arriba mencionados, consideran que no hay una relacin entre el nmero de genes
de virulencia y el perfil de sensibilidad a las fenilamidas, en las poblaciones suizas de P.
infestans, puesto que no encontraron evidencias de la complejidad con respecto al incremento en
la resistencia a dichos compuestos. Sin embargo, recomiendan los muestreos por varios aos y la
utilizacin de las tcnicas moleculares, tipo huellas (finger printing) del DNA.
Dado que el patgeno es multicclico y se multiplica en un tiempo muy corto, no es
recomendable aplicar metalaxyl en los campos de multiplicacin de semilla, porque pueden
quedar esporangios en los tubrculos, que llevaran inculo de aislamientos resistentes, los
cuales infectaran las plantas en los campos. Una sola planta por kilmetro cuadrado puede
originar una epidemia, razn por la cual hay que tener una estrategia de manejo integrado, que
evite el desarrollo de poblaciones resistentes a las fenilamidas, puesto que estos productos son
buenas herramientas de control (Erwin y Ribeiro, 1996).

105

En Israel se ha encontrado que poblaciones con resistencia al metalaxyl tuvieron mayor

adaptacin para infectar, esporular y colonizar que las poblaciones susceptibles. (Kadish y
Cohen, 1989).
MTODOS PARA EL MONITOREO DE LA RESISTENCIA
Ante la evidente resistencia del metalaxyl y compuestos afines, con modo de accin especfico
sobre P. infestans, y por lo tanto poco efectivos para el control del tizn tardo en papa, Sozzi y
Staub (1987) propusieron los mtodos para hacer monitoreo de la resistencia en poblaciones de
campo del patgeno, por crecimiento radial en medio agar-centeno, tratamiento a plantas
completas, hojas y discos de hojas flotando en una suspensin del fungicida y su posterior
inoculacin con esporangios del patgeno.
1. Evaluacin en discos de tubrculo (Tomado de Sedegui, et al., 1999 y
basado en la tcnica de Kadish y Cohen, 1988).
Se utilizan tubrculos de una variedad susceptible, como Bintje o Tuquerrea para Colombia,
producidos en invernadero, sin tratamiento con fungicidas, los cuales se extraen con un
sacabocados estril (16-20 mm) y se colocan en platos de petri de 90 mm estriles y sobre papel
de filtro humedecido con 2,5 ml de agua desionizada estril (testigo) o con la suspensin en dosis
creciente del respectivo fungicida.
El inculo se produce por lavar la superficie del plato de cultivo, donde estn creciendo
activamente los esporangios de aislamientos de P. infestans, en medio agar-V8 o agarcenteno,
filtrados y con una concentracin ajustada a 104 esporangios/ml usando un hemocitmetro. Para
la liberacin de zoosporas, los esporangios se refrigeran a 6 C por 2 horas y luego se incuban
a 25 C por 30 minutos antes de la inoculacin, la cual consta de una gota de 2.5 l de una
suspensin de esporangios y zoosporas.
La gota se deposita en el centro de tres discos de tubrculo por plato de petri, con una
micropipeta, con tres (platos de petri) repeticiones por tratamiento, los cuales se incuban a 15 C
en 12 horas de luz por da. La respuesta a los diferentes fungicidas y dosis se determina por la
escala propuesta por Dehal et al., (1993) para el % de lesin desarrollada = (dimetro promedio
de la lesin sobre el disco del tubrculo sin fungicida)/( dimetro promedio de la lesin sobre el
disco del tubrculo con fungicida)X100. Este experimento se repite dos veces, bajo las mismas
condiciones.
2. Evaluacin con discos de hoja flotando en la solucin fungicida
(Tomado de Sedegui, et al.,1999 y Basado en la tcnica descrita por
Kadish et al., 1990).
Se cortaron discos de hoja de 20 mm de dimetro con un sacabocados a partir de plantas de 6-8
semanas de crecimiento bajo condiciones de invernadero de la variedad Bintje (Tuquerrea) los
cuales se ponen a flotar en un agua destilada estril (testigo) o en las soluciones de los fungicidas
en platos de petri con la superficie abaxial hacia arriba. El inculo se prepara y la inoculacin se
106

ejecuta de igual forma que para los discos de tubrculo, ya sealado. Se utilizan cuatro discos
por plato y tres platos por tratamiento.
Una vez inoculados los discos son incubados a 16 horas luz-da y 75.000 lx, 15 C por 5-10
das. El porcentaje de la lesin de cada disco foliar, se calcula con la misma escala que para los
discos de tubrculo. Una lesin desarrollada menor del 20%, indica sensibilidad al fungicida. El
ensayo se repiti dos veces bajo las mismas condiciones.
Jaramillo et al., (2003) estandarizaron la metodologa de discos de hoja propuesta por Mauras y
Latorse (2002) para la evaluacin del Fenamidone, utilizando hojas de la variedad Diacol Capiro
crecidas en casa de malla, en una zona ecolgica propia para el cultivo de la papa.
3. Evaluacin con hoja flotando en la solucin fungicida (Tomado de
Sedegui, et al, 1999 y Basado en la tcnica descrita por Goth y Kean,
1997).
Se cortan las hojas completas entre el tercero y sexto nudo de los tallos de papa de la variedad
Bintje, se insertan los peciolos en tubos con agua de 14 x 100 mm que contienen 9 ml de agua
destilada estril. Las hojas son soportadas sobre el lado abaxial hacia abajo en una malla de
metal de 12 x 12 mm. La malla de soporte es colocada a 4 cm del agua destilada en una cubeta
plstica de 30 x 12 x 8 cm ajustada firmemente. El inculo se prepara de igual forma que para
los discos de hoja o tubrculo.
Para la inoculacin se utilizan discos de papel de filtro de 12 mm de dimetro, humedecidos
durante tres minutos con una solucin de esporangios suspendidos a una concentracin de 104
esporangios por ml y colocados sobre cada foliolo de cada hoja. Cada tratamiento incluy tres
foliolos por hoja y tres hojas por tratamiento. Los foliolos testigos son inoculados con agua
desionizada estril.
Las hojas son incubadas a 15 C con 15 horas de luz. El desarrollo de las lesiones se evidencia
a los 5-7 das despus de la inoculacin. Las escalas de evaluacin son las mismas que para los
discos de hoja y basado sobre el porcentaje de rea foliar que muestra desarrollo de la lesin. El
experimento se repite una vez mas.
La comparacin de estos mtodos se realiz con aislamientos del linaje clonal US-8. Un
aislamiento sensible y otro resistente fueron proporcionados por DuPont. Se observ que se
presenta diferencia en la respuesta de los aislamientos a los fungicidas, por el desarrollo de la
lesin. Los aislamientos resistentes al metalaxyl tambin lo fueron al oxadixyl.
Al parecer existe resistencia cruzada entre el Metalaxyl y el Oxadixyl, puesto que el genotipo
US-8, no expuesto a Oxadicyl previamente, (no estaba registrado en USA), fue igualmente
insensible a ambos fungicidas. Todos los mtodos mostraron claramente las diferencias entre los
aislamientos sensibles e insensibles a las fenilamidas ( Sedegui, et al.,1999).
El mtodo de discos de hoja suspendidos mostraron resistencia de P. infestans al cymoxanil,
mientras que por los mtodos de discos de tubrculo y hoja desprendida, todos los aislamientos
fueron susceptibles, los cuales no presentaron diferencia por el desarrollo de la lesin, lo que
indica que el mtodo de discos de hoja, no es adecuado para evaluar la sensibilidad de P.
107

infestans al cymoxanil.
Por los sistemas evaluados, todos los aislamientos presentaron
sensibilidad al clorotalonil y al cymoxanil con respuestas similares. (Sedegui, et al.,1999).
ESTRATEGIAS PARA EVITAR RESISTENCIA A FENILAMIDAS
Las estrategias de resistencia han sido enunciadas por varios investigadores, (Nuninger et al.,
1995, Dowley et al.,1995, Erwin y Ribeiro, 1996) quienes proponen una estrategia para utilizar
exitosamente las fenilamidas, en mezclas con productos residuales, en presencia de lneas
resistentes, cuyos elementos claves son:
El uso de mezclas preempacadas con fungicidas residuales (a razn de una dosis a completa),
en las tres primeras aplicaciones, dada la baja translocacin en plantas maduras.
Limitar las aplicaciones tempranas a 2 mximo 3 aspersiones por cultivo y estacin. Mayores
aplicaciones dieron como resultado menor follaje y produccin de tubrculos
Asperjar en intervalos mximos de 10-14 das.
El uso de un producto protectante; no aplicar curativos o erradicantes, despus de la tercera
aplicacin.
SINERGISMO ENTRE DIFERENTES FUNGICIDAS PARA EL CONTROL DEL
TIZN TARDO
En ensayos realizados por Nuninger et al., (1995) en Suiza entre 1990 y 1994, se observ un
fuerte efecto supresor de la poblacin inicial del patgeno y mayor produccin por hectrea,
cuando se utiliz Ridomil MZ (200+1600 g ia/ha de Metalaxyl+Mancozeb) con 3 aplicaciones en
intervalos de 10-14 das, seguidas de aplicaciones semanales de Mancozeb, frente a las
aplicaciones semanales con solo Mancozeb (2.400 g/ha), a pesar de haberse detectado resistencia
del patgeno al Metalaxyl.
Si dos pesticidas utilizados producen mayor grado de control que la suma de la accin de cada
uno por separado, se dice que tienen accin sinergstica. Gisi et al., 1995, demostraron que
varios fungicidas sistmicos y protectantes tenan accin sinergstica para lo cual propusieron la
aplicacin de las siguientes frmulas para calcular el porcentaje (%) de control esperado:
Frmula de Abbott ( Levy et al., 1986)
%Cesp = A+B-(AB/100), donde A y B son los niveles de control individuales.
SF : Factor de sinergismo entre la relacin de la eficiencia experimental ( Cobs) observada de la
mezcla y la eficiencia(Cexp) esperada de la mezcla.
SF= Cobs / Cexp
Si FS es mayor de 1 hay sinergismo

108

Este mtodo no es muy preciso si los controles individuales de los productos son mayores de
70%, pues los valores de SF seran iguales a 1.0, para lo cual Gisi et al., (1985) y Levy et al.,
(1986), propusieron un mtodo mas laborioso con curvas de respuesta a dosis de A, B, y A+B,
que con una transformacin Logit- log, se convierten en regresiones lineales, que pueden ser
utilizadas para calcular las concentraciones efectivas de los diferentes niveles de control
(ejemplo EC50, EC90 con inhibicin del 50 y 90% respectivamente).
Erwin y Ribeiro (1996) citan una serie de trabajos donde se muestra la actividad de diferentes
tipos de fungicidas, contra lneas susceptible y resistentes de Phytophthora infestans a
fenilamidas en tomate. Dado lo til de este trabajo para futuras investigaciones en los aspectos
de control qumico, se presenta la tabla 8 ilustrada por dichos autores.
Tabla 8. Actividad Fungicida (EC90 mg/l) de Oxadicyl (A), Mancozeb (B); y Cymoxanil (C),
solos y en mezcla y la relacin de sinergia de mezclas contra aislamientos resistentes y sensibles
a Fenilamidas de Phytophthora infestans en tomate.
Fungicidas y Relaciones
de compuestos
(A) Oxadicyl
(B) Mancozeb
(C) Cymoxanil
A+B = 1:7
B+C = 7:0.4
A+C = 1:0.4
A+B+C = 1:7:0.4

EC90 (mg/l)
Sensible
Resistente
34
mayor de 5.000
776
495
48
23
69(9+60)
406 (51+355)
134(127+7)
51(48+3)
22(16+6)
41(29+12)
74(9+62+4)
63(8+53+3)

Relacin de sinergia
Sensible
Resistente

3.0
3.2
1.7
2.4

1.4
4.6
2.0
4.2

Copiado de Erwin y Ribeiro 1996, quienes a su vez obtuvieron los respectivos permisos, en la cual se destaca la
relacin de sinergia de la mezcla de dos y tres fungicidas

Estos trabajos mostraron una alta sinergia con la mezcla de dos o tres fungicidas en
evaluaciones in vitro, invernadero y campo para reducir el crecimiento de lneas resistentes y
suceptibles de P. infestans y por lo tanto para controlar el tizn tardo de la papa y el tomate en el
campo.
Gisi (1991) citado por Erwin y Ribeiro (1996) indican que hay unas combinaciones mejores
que otras, sealando que la mezcla de tres fungicidas (Oxadicyl, Mancozeb y Cymoxanil) fue
mejor que la de dos fungicidas (Oxadicyl + Mancozeb), lo que demuestra que las mezclas
frecuentes de un sistmico tipo fenilamida con un protectante, son menos efectivas para el control
de lneas resistentes a fenilamidas.
Se ha reportado mayor efectividad con formulaciones con tres fungicidas oxadicyl + cymoxanil
+ mancozeb, para el control de P. infestans resistentes a fenilamidas; sin embargo en ninguno de
los ensayos evaluados por Cooke et al., 1995, se presentaron diferencias significativas entre la
utilizacin de mezclas con dos y tres fungicidas. En aos recientes el sistmico propamocarb y el
translaminar dimetomorf, han sido introducidos en formulaciones con mancozeb, particularmente
por la contribucin al control de lneas resistentes a fenilamidas.
Es posible que el Cymoxanil que penetra rpidamente las hojas y tiene un modo de accin
diferente a las fenilamidas como Oxadicyl y Metalaxyl, mejore la actividad sinergstica de las
109

mezclas, retardando el desarrollo de lneas resistentes. Dicho sinergismo no ha sido bien

entendido, pero Gisi (1991) cita evidencias de varios mecanismos que pueden hacer posible la
explicacin:
Incremento en la toma y enlazamiento del fungicida al sitio de accin, lo que puede conducir a
altas concentraciones en la clula objetivo.
Reduccin de la biodegradacin de los fungicidas por las clulas del patgeno y la planta, lo
que conduce a una actividad mas prolongada.
Diferentes sitios de accin de los fungicidas, tanto en las clulas del patgeno (mecanismo
bioqumico) como en el ciclo de vida (mecanismo patognico) lo que puede reducir su
agresividad.
UN PROGRAMA PARA EL CONTROL QUMICO DE LA GOTA O TIZN
TARDO DE LA PAPA Y EL TOMATE
Cooke et al., (1995), evaluaron durante 10 aos un programa de fungicidas en Irlanda, en dos
centros de investigacin uno con infeccin natural y en el otro con inoculacin controlada, con
los siguientes resultados por programa y grado de resistencia a las fenilamidas.
1. Efectividad de los productos fenilamidas/mancozeb (Inculo natural)
Con 100% de resistencia a fenilamidas no hubo diferencias en el dao del follaje por gota, entre
los tratamientos con metalaxyl + dosis completa de mancozeb y mancozeb solo a iguales
intervalos. Los intervalos de 14 das para las aplicaciones de metalaxyl + mancozeb con
aislamientos resistentes a fenilamidas, presentaron mas dao en el follaje que con las aplicaciones
de mancozeb solo en intervalos de 10 das.
No se observ diferencias en los daos causados a los tubrculos con las aplicaciones de las
mezclas y el mancozeb solo. Las aplicaciones de oxadicyl + cymoxanil + mancozeb presentaron
resultados similares a metalaxyl + mancozeb.
2. Efectividad del control con propamocarb (Inculo artificial)
Compararon propamocarb-HCl + mancozeb con mancozeb a intervalos de 10 das y metalaxyl
+ mancozeb con intervalos de 14 das, utilizando inculo 100% resistente como fuente de
infeccin. La mezcla de propamocarb + mancozeb fue mejor al final de la estacin que
mancozeb solo, cuando se utilizaron a intervalos de 10 das, pero con intervalos de 14 das fue
inferior, pero significativamente mejor que con metalaxyl + mancozeb a los mismos intervalos.
No hubo efectos significativos sobre la gota en el tubrculo, ni en la produccin (Cooke et al.,
1995).

110

3. Efectividad del control con Dimetomorf (Inculo Natural)

La mezcla de dimetomorf + mancozeb fue mas efectiva que el mancozeb para el control de la
gota en el follaje, al final de la estacin, pero solo en un ao hubo diferencias significativas para
la infeccin en los tubrculos entre dicha mezcla y mancozeb. No se observ efecto consistente
sobre la produccin. En la mayor parte del tiempo los resultados fueron similares entre
dimetomorf + mancozeb y metalaxyl + mancozeb (Cooke et al., 1995).
4. Efectividad del control con Fluazinam a intervalos de 10 das
Se evaluaron los tratamientos Fluazinam en dosis de 200 y 150 g/ha, frente a mancozeb y
metalaxyl + mancozeb con intervalos iguales en las aplicaciones.
Fluazinam retraz
significativamente el inicio de la enfermedad frente al mancozeb y redujo el nivel de dao en el
follaje al final de la estacin. Ambos productos fueron igualmente efectivos para controlar la
gota en los tubrculos. No hubo un efecto significativo del fluazinam frente a la mezcla
metalaxyl + mancozeb para la reduccin de daos en el follaje, ni gota en los tubrculos .
Igualmente no se observ un efecto consistente en la produccin (Cooke et al., 1995).
5. Efectividad del control con Fluazinam a intervalos de 7 y 10 das
Se hicieron evaluaciones de 200 g a.i./ha a intervalos de 10 das y 150 g a.i./ha a intervalos de 7
das y 10 das, en comparacin con mancozeb con 10 das de intervalo. Todos los programas con
fluazinam redujeron significativamente el dao en el follaje al final de la estacin y tambin en el
tubrculo. Los intervalos de 7 das de fluazinam mostr de manera significativa, menor dao en
el follaje que el intervalo de 10 das, pero ambos presentaron sntomas similares en los tubrculos
(Cooke et al., 1995).
MEZCLAS DE FUNGICIDAS DE USO COMN PARA EL CONTROL DE LA
GOTA EN PAPA Y TOMATE EN COLOMBIA.
Algunos de los productos utilizados en mezclas de protectantes (a base de cobre,
ditiocarbamatos, clorotalonil) y sistmicos (Fenilamidas, Carbamatos, Cyanoacetamidas,
Fosfonatos) vienen previamente formulados por las casas comerciales o los agricultores hacen las
mezclas, algunos de los cuales no tienen en cuenta ninguna recomendacin tcnica, pues no
conocen su modo de accin.
En casi todos los casos utilizan surfactantes o adherentes
Propamocarb + Clorotalonil ( Previcur + Daconil o Bravo )
Propamocarb+ mancozeb (tattoo)
Metalaxyl y Clorotalonil (Ridomil+ Daconil)
Metalaxyl y Maneb o Mancozeb (Ridomil +Manzate o Dithane)
111

Oxadicyl + Mancozeb (Sandofan)

Benalaxy + Mancozeb (Galben)
Cymoxanil + Mancozeb (Curzate o Curathane).
Cymoxanil + Clorotalonil
Cymoxanil + Propineb (Fitoraz)
SISTEMAS EXITOSOS DE CONTROL QUMICO DE LA GOTA DE LA PAPA.
Dadas las condiciones de humedad relativa de muchas zonas con cultivos de papa en Colombia,
es necesario realizar aplicaciones incluso en los periodos de verano, pues la condensacin del
agua al amanecer permite la germinacin de los esporangios y/o zoosporas. En algunas zonas se
aumenta la frecuencia de aplicacin a perodos de 10 das, en condiciones de verano y se reduce
a cinco das en perodos de lluvias alternadas con ratos soleados, condiciones muy favorables
para el desarrollo del patgeno.
En San Pedro Antioquia Colombia (Jaramillo, F., 2002, comunicacin personal) en condiciones
meteorolgicas que favorecen el desarrollo de la enfermedad (fuertes lluvias seguidas de das
soleados), algunos agricultores han logrado un buen control de la gota en la variedad Diacol
Capiro (susceptible), con aplicaciones cada cinco (5) das con una mezcla de Clorotalonil +
propamocarb + adherente, alternada con un fungicida de contacto como mancozeb, por mximo
tres aplicaciones de la primera y en total 18-20 aplicaciones con fungicidas por ciclo del cultivo.
Mientras que con algunos clones con resistencia de campo y posiblemente con resistencia por
genes mayores (Jaramillo y Gilchrist, 2002, Jaramillo, F., 2002, comunicacin personal) se han
podido reducir las aplicaciones a una quinta parte (3-4), como la han observado Fernndez
Northcote et al., (2002).
Segn Doster y Fry (1991) cit por Erwin y Ribeiro (1996) es preferible reducir las dosis que
aumentar las frecuencias de aplicacin, pues observaron que al final del perodo del cultivo, las
dosis se pueden reducir hasta en un 50%, sin que se incremente de manera significativa la
enfermedad. Ellos utilizaron un modelo de simulacin por computador para determinar el
esquema de aspersin del metalaxyl en mezcla con un protectante (Clorotalonil) que permitiera la
reduccin de la gota, con la decisin basada en las condiciones del clima, con relacin a los
esquemas tradicionales.
Stein et al. (2002) determinaron el periodo (tiempo) crtico para la aplicacin de fungicidas
foliares, con el fin de limitar la infeccin del follaje de la papa con Phytophthora infestans y el
nivel crtico (umbral) de la infeccin foliar, en la cual los fungicidas solos o en mezclas, evitan o
limitan la dispersin de la infeccin con P. infestans. En muchas estaciones, se logr reducir la
epidemia de la gota en el follaje a menos del 50% de la observada en una parcela testigo no
tratada, cuando el programa de las aplicaciones se iniciaron 72 horas antes y 72 horas despus de
la inoculacin con P. infestans y cuando el rea foliar con lesiones de gota fue estimada en 1% o
menos. Las lesiones a nivel microscpico se observan despus de las 22 horas de penetracin de
las zoosporas al tejido, cuando las plantas son altamente susceptibles. Entre la 24-48 horas se
observa el inicio de las lesiones a nivel macroscpico (Vleehouwers et al., 2000b).
112

Despus de 46 horas de inoculados los discos de hoja de plantas susceptibles S. microdontum

265 y S. sucrense-23, y la variedad Bentji de papa, se cubran completamente de hifas y se
observaba una necrosis en el sitio de la inoculacin. Ocasionalmente se inducen respuestas de
HR. A menor resistencia de la planta al patgeno, menor respuesta hipersensible en los tejidos
inoculados (Vleehouwers et al., 2000b).
La demora en las aplicaciones de cualquier fungicida, hasta que el rea foliar afectada
represent el 5-10% del rea total de la planta, produjo el desarrollo de la enfermedad en
proporcin similar a las parcelas no tratadas. Muchos fungicidas y mezclas de fungicidas
evaluados, redujeron entre el 30-50% de la infeccin con gota, con respecto a las parcelas no
tratadas, siempre y cuando sus aplicaciones no se realizaran despus de que se estimara el 1% del
follaje afectado con gota ( Stein et al., 2002).
Las observaciones de Stein et al. (2002), demuestran la fragilidad de las plantas frente a la
agresividad del patgeno y la inminente necesidad de incorporar genes de resistencia a dicho
patgeno, en combinacin con el control qumico, pues Jaramillo y Gilchrist (2002) observaron
que las lesiones se desarrollan mas lentamente, lo que permite espaciar las aplicaciones,
reducindose en por lo menos un 50% con respecto al testigo susceptible con aplicaciones.
Si se presentan daos fsicos en las plantas por heladas y granizadas, se debe realizar
inmediatamente una aplicacin con un fungicida, pues la barrera proporcionada por la resistencia
de las paredes celulares se pierde por la ruptura, permitiendo la entrada de los esporangios por las
heridas de los tejidos. Si las plantas estn en estado juvenil (antes de floracin ) se pueden
recuperar,dado que es posible activar el crecimiento vegetativo, produciendo. Si est en un
estado avanzado (Floracin o despus) slo se logra retrazar un poco la muerte acelerada del
follaje, pero con gran desgaste energtico por las respuestas fisiolgicas a las heridas.
Geddens et al., (2002) observaron que Curzate (marca registrada) fue efectivo para el control de
la gota de la papa en Francia, cuando las temperaturas, densidad del inculo y dao de la
enfermedad en los tallos fueron bajas, por el contrario cuando las condiciones de altas
temperaturas, alta densidad de inculo e infeccin foliar que favorecieron un rpido desarrollo de
la enfermedad, el Curzate fue menos efectivo, pero superior a los dems productos que evaluaron.
Sin embargo, hay que ser cuidadoso con el uso del Curzate M (cimoxanyl + mancozeb) y el
Ridomil Gold (metalaxyl + macozeb) dado que Kessel et al., (2002), los sealan como poco
efectivos para la inhibicin de las oosporas, en las zonas donde potencialmente se puedan
presentar los dos tipos de apareamiento.
Hausvater et al., (2002) observaron que bajo condiciones favorables para el desarrollo de la
enfermedad en follaje y tubrculos en la Repblica Checa, entre los aos 2000-2001, se logr un
mejor control con fluazinam, fentin y propamocarb- HCl, con poco control sobre la gota de los
tubrculos con mancozeb y oxicloruro de cobre. En la produccin de papa orgnica, Bhm y
Cerny (2002), evaluaron extractos de plantas, oleato de potasio y el hidrxido de cobre, siendo
ste el nico producto que present algn control, determinado por la reduccin del rea foliar
bajo la curva e incremento en la produccin de tubrculos.
Ante la restringida efectividad del cobre se podra pensar que con las variedades de papa que
tienen actualmente los papicultores colombianos, no se puede hacer un cultivo comercial de papa
completamente orgnico.
Es posible lograr mejores sistemas de control integrado de la
113

enfermedad, que reduzcan el nmero y/o dosis de aplicacin de los distintos tipos de fungicidas,
como una alternativa de produccin mas limpia, con variedades resistentes a P. infestans, pues
Cooke y Little (2002) observaron que tres aplicaciones de oxicloruro de cobre, proporcionaron
proteccin aceptable a las variedades mas resistentes.
En Suecia Wiik (2002) evalu en tres zonas cuatro tratamientos de fungicidas, para los cuales
hicieron entre 7-8 aplicaciones durante el periodo, especialmente en las variedades susceptibles a
la enfermedad en follaje y tubrculos, encontrndose que es factible hacer un buen control, con
pocos tratamientos a bajas dosis al comienzo de la estacin con mezclas de fungicidas con efectos
sinergsticos, acompaados de un buen sistema de pronsticos, para reducir al mnimo el uso de
fungicidas. Los tratamientos evaluados fueron los siguientes:
0.3-0.4 l/ha de Shirlan ( i.a. fluazinam 500 g/l).
0.4-0.5 l/ha de Epoc 600 EC (i.a. fluazinam 400g/l + metalaxyl M 200 g/l).
1.5-2.0 Kg/ha de Acrobat MZ (i.a. mancozeb 60% p/p + dimetomorf 9% p/p).
2.0-4.0 l/ha de Tattoo (i.a. mancozeb 302g/l + propamocarb 248g/l).
Kato y Shimanuki (2002) evaluaron tres variedades susceptible (Iris Cobbler), con resistencia
intermedia (Norin N 1) y resistente (Hanashibetsu) y tres frecuencias de aplicacin de
fungicidas: 1) sin fungicida, 2) con 4-5 aplicaciones y 3) con 7 aplicaciones. Con este ltimo
tratamiento se observaron pocos sntomas en las variedades evaluadas entre los aos 2000-2001.
Al reducir el nmero de aplicaciones se redujo la produccin entre el 16-19% para la variedad
susceptible, 7-22% para la intermedia y 7-20% para la resistente.
Sin aplicaciones de fungicidas, la produccin se redujo entre 35-49% para la variedad
susceptible, 28-41% para la variedad con resistencia intermedia y del 5-16% para la resistente.
Cuando la variedad resistente creci bajo condiciones favorables para la gota, hasta finales de
agosto (un mes antes de la cosecha), present completa defoliacin, pero solo se afect el 5% de
los tubrculos.
Las observaciones anteriores sugieren la posibilidad de reducir a 1-2 aplicaciones al final de la
estacin de crecimiento, sin que se presente una prdida en la produccin, en las zonas templadas
o se realicen cultivos en condiciones cuarentenarias en el trpico. En diferentes clones con
resistencia producidos por el grupo de papa de la Universidad Nacional de Colombia, ha sido
posible reducir de manera significativa el nmero de aplicaciones, distribuidas durante el periodo
vegetativo, pero siempre y cuando no se presenten condiciones extremas de clima que incluya
heladas y granizadas, las cuales disparan la gota en los cultivos.
Fernndez-Northcote et al., (2002) han venido trabajando en una estrategia de control apoyada
en el uso de fungicidas sistmicos a la emergencia del cultivo conocida como la estrategia
PROINPA, la cual valid y ajusto en Huanuco Per, con una variedad susceptible (Amarilla
Tumbay), logrando una reduccin del 30-50% de las aspersiones que realizan los agricultores
locales.
La estrategia PROINPA logr la reduccin en el nmero de aspersiones entre el 40-70% con
relacin a los agricultores. La primera aplicacin del fungicida sistmico se debe realizar cuando
ha emergido entre el 50-100% de las plantas, extendindose a todo el periodo de crecimiento,
114

con aplicaciones alternadas con fungicidas de contacto y utilizando al menos dos fungicidas
sistmicos de diferente clase y tipo qumico como cymoxanil + propineb o mefenoxam +
mancozeb, alternados con clorotalonil, a intervalos de 5 das, cuando las condiciones
epidemiolgicas locales favorecen la pronta aparicin de la enfermedad, para un total de 12-15
aplicaciones durante el periodo vegetativo del cultivo (Fernndez-Northcote et al., 2002).
CONDICIONES PARA UNA ADECUADA APLICACIN DE FUNGICIDAS
Es primordial las condiciones meteorolgicas durante y despus de las aplicaciones de los
fungicidas. Las condiciones ptimas se presentan cuando los vientos son suaves (menos de 10
nudos), bajo condiciones secas o hay ausencia de lluvias por varias horas. Las fungicidas
sistmicos son menos dependientes del clima y solo requieren de media hora sin lluvia, mientras
que los de contacto que forman una capa protectora sobre la planta y contienen un adherente o
humectante para una adhesin adecuada, necesitan dos horas bajo buenas condiciones de tiempo
y varias horas cuando el follaje est hmedo, antes de que la proteccin sea segura (Keane,1995).

115

CAPTULO VIII

PRONSTICO DE LA GOTA CAUSADA POR P. INFESTANS

Es importante tomar precauciones basadas en los pronsticos para el desarrollo de la
enfermedad, debido al tiempo de regeneracin tan corto de P. infestans como especie
multicclica, cuyo inculo se incrementa y se reproduce varias veces en el ciclo del cultivo. La
naturaleza multicclica afecta directamente las medidas de control de una enfermedad epidmica,
razn por la cual es muy difcil erradicar el 100% del inculo, cuyo nivel puede incrementarse en
poco tiempo; adems explica el incremento de lneas del patgeno resistentes al metalaxyl, las
cuales esporulan y se diseminan rpidamente por todo el campo con cultivos.
Segn Turkensteen y Flier (2002b) la infeccin primaria se puede originar de un tubrculo antes
de la cosecha, en la cosecha o durante el almacenamiento o unas cuantas plantas huspedes
(plantas de papa, tomate, pepino, y otras especies silvestres) infectadas en el campo, llegando a
causar una epidemia, cuando los brotes afectados emergen translocndose a los tallos y hojas,
causando lesiones sobre las cuales forman esporangios, si las condiciones meteorolgicas (agua
lquida y temperatura ptima) son favorables. Dichos esporangios se pueden desprender y ser
transportados a las plantas huspedes, como tomate y papa, donde germinan o liberaran las
zoosporas, que a su vez se desarrollan sobre los tejidos de dichas plantas, con alta preponderancia
en las socas o residuos de cosecha, formando focos de infeccin, los cuales repiten el ciclo varias
veces en el cultivo, llegando a causar la epidemia.
Dada la efectividad en la diseminacin de este patgeno una vez se desarrolla en una planta el
el campo, los tubrculos afectados de manera latente, son ideales para la dispersin en un amplio
rango y contribuyen a la globalizacin de nuevas poblaciones, razn por la cual es necesario
identificar y erradicar las fuentes de inculo iniciales (a escala nacional o regional) lo que implica
una permanente inspeccin para la erradicacin o la iniciacin del control qumico. Las oospora
no son muy efectivas como fuente de inculo primario, pues requieren precipitaciones por 24
horas o mas para asegurar la inundacin de los suelos que permita la germinacin Turkesteen y
Flier, (2002b).
En algunos sitios la enfermedad tiene ciclos tan cortos como 2,5 das, lo que demanda una
vigilancia permanente por parte de los agricultores, sin embargo la mayora prefieren asperjar
segn el calendario, que en algunas regiones es de cuatro o mas das, lo que segn Turkesteen y
Flier (2002b), es riesgoso, con 2,5 das de ciclo de la enfermedad en el campo por lo tanto es
importante utilizar sistemas de prediccin, debidamente ajustados a las diferentes ecoregiones
donde se establecen los cultivos.
Hay sistemas de prediccin basados en parmetros meteorolgicos (del clima) que ayudan al
manejo eficiente de los recursos de los agricultores, porque se pueden reducir al mnimo las
aplicaciones, si el ambiente no es favorable para el desarrollo de la enfermedad. Por otro lado,
las predicciones permiten la reduccin del riesgo de grandes prdidas en los cultivos, puesto que
se pueden programar aplicaciones adicionales de fungicidas, cuando los pronsticos indican la
116

probabilidad de que la enfermedad puede alcanzar proporciones epidmicas.

cuantificar el riesgo de una fuente conocida.

El propsito es

Hasta el presente se ha determinado la supervivencia de los esporangios en relacin con la

temperatura, la humedad relativa y la irradiacin solar. Esta ltima parece tener mayor efecto si
los esporangios estn en el aire o en la superficie de las hojas. Es necesario investigar sobre
modelos para describir la va del transporte areo, modelos sobre la forma como se depositan y
sobreviven los esporangios despus de que llegan a la superficie del tejido.
Por varios aos Fry et al., (2002) han encontrado que bajo condiciones favorables se forman
mas de 30000 esporangios/cm2 durante una noche sobre lesiones foliares. Las pequeas parcelas
de experimentacin con el 6% de enfermedad, podan tener 109 esporangios disponibles para la
dispersin.
Dichos investigadores detectaron hasta 10.000 esporangios/m3 en el aire
inmediatamente encima del follaje del cultivo. En condiciones favorables para la produccin de
esporangios, pero desfavorables para la dispersin encontraron nuevamente hasta 30.000
esporangios/cm2 , pero menos de 2.000 esporangios/m3 en el aire por encima del follaje. Sin
embargo, observaron una pequea concentracin en el aire a 188-299 m de altitud y a una
distancia de 300-700 m de la fuente de inculo viento abajo.
Segn Mizubuti et al., (2002) los modelos de prediccin y simulacin deben ser validados
previamente antes de utilizarlos, basados en las evaluaciones de los efectos de la temperatura y la
combinacin de la temperatura/duracin de la humedad en la hoja, sobre el componente
epidemiolgico en dos linajes clonales (US-1, A1 en tomate y BR-1, A2 en papa). No
observaron germinacin de esporangios de BR-1 por encima de 22 C ni esporulacin de las
lesiones a 27 C, mientras que las lesiones de US-1, no esporularon a 10 C. Los ndices de
latencia y esporulacin se observaron a 22 C, temperatura en la cual se form el mayor tamao
de lesin de US-1, pero para BR-1 la temperatura ptima vari de 15-22 C. El mayor nmero de
lesiones se determin cuando las plantas fueron mantenidas en condiciones de humedad por 24
horas a 22 C para tomate con US-1 y 10 C para papa con BR-1.
En reas donde las condiciones del ambiente son continuamente favorables (temperatura
promedio de 20 C y agua lquida por lluvia o zona hmedas donde se da la condensacin por el
punto de roco), las predicciones son de poco valor (Erwin y Ribeiro, 1996). Esta condicin
correponde a varias zonas paperas del trpico como Colombia, especialmente en el Oriente de
Antioquia, durante gran parte del ao. En Irlanda y Canad el servicio de meteorologa anuncia
por radio o televisin las condiciones meteorolgicas que favorecen el desarrollo de la gota, con
el propsito de que los agricultores tengan la oportunidad de asperjar sus cultivos.
Keane (1995), hace referencia a varios modelos para la prediccin, pero en Irlanda opera un
modelo basado en los trabajos de Bourke (1955), quien mostr que para que se presenten
condiciones favorables para el desarrollo de los esporangios y la germinacin de las zoosporas, se
requiere un periodo de humedad de al menos 12 horas, con temperaturas no inferiores a 10 C y
humedad relativa del aire (HR) del 90%, si ocurre precipitacin a las 7-15 horas despus de haber
empezado el perodo. Si no ocurre precipitacin en ese periodo se requiere un tiempo mnimo de
16 horas para el desarrollo de la enfermedad.
En Cuba, Gmez y Hernndez (2003), despus de evaluar la efectividad de varios modelos de
prediccin en los que se destaca el uso de la precipitacin y la temperatura, disearon un nuevo
modelo que denominaron Indice de Riesgo al Tizn Tardo (IRTT), el cual aplica los
117

componentes mejores de los modelos Naumova Modificado y Umbral de lluvia, que pueden
ser calculados semanalmente o diariamente desde el primero de diciembre, teniendo en cuenta
los valores del umbral de las lluvias diarios o acumulados en la semana, los cuales indican que
con 38 mm de precipitacin en un periodo de cuatro semanas y un promedio de temperatura
inferior a 24 C se puede inducir una epidemia.
Este modelo permite la emisin de alerta o peligro de aparicin y un estimativo del riesgo de
enfermedad, de tal forma que se puedan proteger los campos con cultivos. El riesgo puede ser
obtenido al comparar los valores semanales del periodo analizado cuando la papa est en
crecimiento, con las tablas de valores promedios IRTT cuando las epidemias son suaves,
intermedias y severas, el cual se est aplicando como una ayuda para mejorar el manejo integrado
de la gota en el 2005. Dicho modelo puede ser empleado en predicciones a largo plazo, para lo
cual se utiliz un modelo climtico simple del efecto de invernadero por liberacin de gases
(IS92a), que estima un rango promedio de emisiones futuras y un Modelo de Clima Global
(HADCM2) que tiene en cuenta la mayor condicin de alerta y la condicin mas seca de la tierra
(Gmez y Fernndez, 2003).
La situacin sealada es tpica para los pases con estaciones, en los cuales es fcil predecir las
condiciones climticas, pero en el trpico hmedo el riesgo es permanente desde la siembra hasta
la cosecha de los cultivos, los cuales se establecen durante todo el ao, como sucede en buena
parte de los municipios paperos de Colombia, donde los sistemas de prediccin no funcionaran
muy bien, salvo de que se disponga de variedades con alto grado de resistencia y que se
desarrollen sistemas de informacin confiables y oportunos, por la ubicacin de microestaciones
meteorolgicas en las diferentes regiones paperas, conectadas a un sistema central de recoleccin
y anlisis de lo datos, lo que implica hacer investigacin en cada regin, con el fin de reducir las
aplicaciones de fungicidas.
Segn Turkesteen (S.F.) este sera el caso de agriculturas de alto capital, comn en los pases
desarrollados y no para una agricultura de subsistencia como sucede generalmente en los pases
en desarrollo. Actualmente se habla de agricultura de precisin, la cual requiere de estudios a
nivel de micro-regiones lo mas homogneas posibles, situacin difcil de lograr en las zonas de
ladera de los departamentos paperos de Colombia, por la alta concentracin minifundista.
Las predicciones de gota basadas en los sistemas de control, asumen que el inculo inicial viene
de algn lugar, pero el desarrollo de la gota en el campo empieza a muy bajos niveles. Grnwald
et al., (2003), validaron el sistema SimCast modificado para predecir el uso de fungicidas en
variedades mexicanas con altos niveles de resistencia a gota, logrando reducir el nmero de
aplicaciones de fungicidas. La precipitacin fue la variable del ambiente responsable de la
mayora de los eventos de prediccin, al igual que en Cuba, donde adems la temperatura que
favorece los frentes fros como el fenmeno de nio, proporcionan condiciones favorables para
el desarrollo de la enfermedad.
Las predicciones mas ajustadas de la enfermedad podran permitir a los agricultores precisar de
manera mas adecuada, los periodos de aspersin cercanos a los perodos de infeccin predichos y
a los mejoradores la evaluacin de la resistencia de clones en los estados iniciales del
crecimiento, para acelerar los procesos de mejoramiento gentico y la produccin de nuevas
variedades con resistencia a dicho patgeno Turkesteen (S.F.).

118

Los criterios utilizados en Alemania son diferentes a los de Irlanda. Los primeros se basan en
el inicio de la epidemia, considerado en el 0,1% de las plantas afectadas, mientras que en Irlanda
se basan en el periodo cero (antes de mediados de junio). En ambos casos se utilizan los registros
de los inspectores de campo y las predicciones basadas en un sistema de simulacin de las
condiciones meteorolgicas favorables para la epidemia (Keane,1995)
Uno de los sistemas de prediccin mas utilizados en Estados Unidos es el BLITECAST, el cual
combina un sistema de prediccin de la gota con un sistema de valores de severidad, asignados a
periodos de alta humedad relativa. Se registran mximo cuatro valores de severidad por da, con
incrementos en la duracin de la humedad relativa y la temperatura hasta 26,6 C.
Se predice que la aparicin inicial de la gota se presenta despus de que se acumulan 18-21
valores de severidad, desde el momento de germinacin de la planta; adems las ocurrencias
pueden ser predichas despus de la acumulacin subsiguiente de tres valores de severidad. Este
sistema est adaptado a un equipo microcomputarizado acoplado a un sistema de toma de datos
climatolgicos, en una unidad autocontenida y colocada en el campo del cultivo (Erwin y
Ribeiro, 1996).
Segn Fohner et al., (1984), el programa BLITECAST y el sistema de Fry et al., (1983)
determinan cuando tienen que hacerse aplicaciones de fungicidas en el Estado de New York y
parece ser equivalente a una aplicacin semanal, como sucede con los agricultores del
departamento de Antioquia, Colombia, quienes prcticamente realizan aplicaciones calendario,
las cuales suspenden o reducen la frecuencia, cuando el cultivo inicia su madurez fisiolgica,
para papa comercial y semilla respectivamente y /o cuando las condiciones climtica (baja
precipitacin) lo permitan.
El sistema propuesto por MacHardy en 1979 (citado por Erwin y Ribeiro, 1996), podra ser una
buena herramienta para Colombia, por los microclimas que se presentan en las regiones paperas,
las cuales se caracterizan por ser esencialmente minifundistas. Ellos describen un programa no
computarizado, basado en BLITECAST, en el que se registran diariamente las temperaturas
mximas, mnimas y promedios, a la par con los registros de lluvias.
Una temperatura promedio por debajo de 25,6 C durante 5 das y la lluvia total para 10 das de
1,2 pulgadas (3 cm) o ms, dan una condicin favorable para el desarrollo de la enfermedad. Si
la temperatura es superior a la indicada, o inferior a 7,5 C con lluvias menores a 3 cm, no se
favorece el desarrollo de la enfermedad. Un modelo similar fue propuesto en Colombia por el
ICA a comienzos de los 1970s, el cual debe ser ajustado para cada microclima y variedad, con
base en la experimentacin.

119

BIBLIOGRAFIA

Abad, G.J. de. 1983. Phytophthora infestans en la zona Central del Per: Razas, Patotipos,
especializacin fisiolgica, tipos de compatibilidad, Resistencia de Variedades y Rangods de
hospederos. Tesis M.Sc. Programa Acadmico de Graduados Universidad Nacional Agraria La
Molina, Lima Per. Mimeografiado.
Abad, Z.G., and Abad, J.A. 1995. Historical evidence on ocurrence of late blight of potato,
tomato and pear melon in the Andes of South America. Pginas 36-41. En: Phytopthora infestans
150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd.
Dublin.
Abad, Z.G.; Abad, J.A. and Ochoa, C. 1995. Historical and scientific evidence that supports the
modern theory of the Peruvian Andes as the centre of origin of Phytopthora infestans. 1995,
Pginas 239-246. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane,
T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Abad, Z.G.; Abad, J.A. 1997. Another Look at the Origen of Late BLIGHT OF Potatoes,
Tomatoes and Pear Melon in the Andes of South America. Plant Disease. 81 (6): 682-688
Abad, Z.G.; Abad, J.A. and Ochoa, C.; fernndez-Northcote. 2002. Additional Evidences that
Support the Andes of South as Center of Origin of Phytophthora infestans. P.12. In: GILB 02
CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg,
Germany. Poster abstracs.
Andrivon, D. 1996. the origen of Phytophthora infestans populations present in Europe in the
1840s: a critical review of historical and scientific evidence. Review. Plant Pathology 45, 19271035.
Ahmad, I.; Mirza, J .I. and Batool, S. 2002. Metalaxyl Resistance in Pakistani Population of
Phytophthora infestans. Pgina 314. Potatoes Today and Tomorrow Supplement I. Abstracts of
Papers and Posters. 15th Triennial Conference of the European Association Potato Research.
Editors Wenzel, G. and Wulfert, I. July 14-19. Hamburg, Germany.
Ahmad, I.; Batool, S. and Mirza, J .I. 2002. Distribution of Mating Types of Phytophthora
infestans in Pakistan. Pgina 315. Potatoes Today and Tomorrow Supplement I. Abstracts of
Papers and Posters. 15th Triennial Conference of the European Association Potato Research.
Editors Wenzel, G. and Wulfert, I. July 14-19. Hamburg, Germany.
Alder, N., Chacn, M.G., Forbes, G.A. and Flier, W.G. 2002. Phytophthora infestans sensu lato
in America Latina, What Does it Mean?. In: GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing
The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Alder, N., Chacn, M.G., Forbes, G.A. and Flier, W.G. 2002. Phytophthora infestans sensu lato
in South America Population substructuring through host-specificity. Lizrraga (ed). Late Blight:
Managing The Global Threat. Proceedings of the Global Initiative on Late Blight Conference. 1113 July, Hamburg, Germany. P.13-17.
120

Alfonso, C. and Govers, F. 1995. A search determinants of race-specificity in the Phytophthora

infestans- potato pathosystem. 1995. Pginas 107-115. En: Phytopthora infestans 150. Dowley,
L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Andrivon, D. 1995. Comparison of race structure and diversity in populations of Phytophthora
infestans, 1966-1993. Pginas 71-76. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E,
Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Argel, LE.; Jaramillo,S.; Gilchrist E. 2002. Evaluacin de la Resistencia/susceptibilidad a los
Fungicidas Metalaxyl y Cymoxanyl en aislamientos de Phytophthora infestans (Mont) de Bary
de Cundinamarca y Boyac. Tesis Biloga. Universidad de Antioquia. Instituto de Biologa.
Medelln;24p.
Ballvora, A.; Ercolano, M.R.; Weiss, J.; Meksem, K Bormann; C.A.; Oberhagemann,P.;
Salamini, F. And Gebhardt,C. 2002. The R1 gene potato resistance to late blight (Phytophthora
infestans) belongs to the leucine zipper /NBS/LRR class of plant resistant genes. The Plant
Journal 30:361-371. Tomado de The GILB Newsletter. www.cipotato.org/gilb
Benavides, D., Moncayo, B y Lagos, L.2002. Caracterizacin Aloenzimtica de la Poblacin de
Phytophthora infestans en la Zonas productoras de papa Solanum tuberosum en el
Departamentpo de Nario. En: XXIII Congreso ASCOLFI. Nuevas Tendencias en Fitopatologa.
Bogot, Colombia, julio3-6. Resmenes, P.78.
Black, W.; Mastenbroek, C.; Mills, W.R. and Peterson, L.C. 1953. A Proposal for International
Nomenclature of Races of Phytophthora infestans and Genes Controlling Immunity in Solanum
demissum derivates. Euphytica 2 (3): 173-179.
Bhm, H. and Cerny, D. 2002. Effects of different plant protection treatments regulating late
blight (Phytophthora infestans) in organic potato production. Pgina 208. Potatoes Today and
Tomorrow Supplement I. Abstracts of Papers and Posters. 15th Triennial Conference of the
European Association Potato Research. Editors Wenzel, G. and Wulfert, I. July 14-19. Hamburg,
Germany.
Bolvar R.,R y Lpez G., G.1985. Resistencia de Clones de Papa a Phytophthora infestans
(Mont) de Bary y Produccin de Polen 2n. Medelln. Trabajo de grado (Ingeniera Agronmica).
Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Agronoma.110p.
Bormann, C.A.; Burh, K.; Salamini, F. and Gebhardt, C. 2002. Development of PCR-MarkerAssisted_Selection (MAS) for field Resistence to Late Blight in Tetraploid Potato. GILB02
CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg,
Germany.
Botero g., H y Gilchrist R., E. 1997. Evaluacin de la Compatibilidad de Diferentes ailamientos
del hongo Phytophthora infestans (Mont) de Bary con algunas especies de la familia
Solanaceae.Medelln. Trabajo de Grado (Ingeniera Agronmica). Universidad Nacional de
Colombia, Facultad de Ciencias Agropecuarias. 64p.
Bourke,P-M.1964. Emergence of potato blight. 1843-1846. Nature 203: 805-808.

121

Briard, M.; Duterte, M.; Rouxel; F. and Brygoo, Y. 1995. Ribosomal RNA sequence
divergence within the Pythiaceae. Mycology Research 99:1119-1127.
Brommaonchenkel, S.R. 1988. Patogenicidade, compatibilidade, citogenetica e padroes
isoenzimticos de isolados de Phytophthora infestans (Mont) de Bary do Brasil. Vicosa. Tese
(Magister Scientiae), Universidade Federal de Vicosa. 82p.
Caldern, H.J., Castro, M., Gilchrist, E., Mrquez, E., Jaramillo, S. 2002. Caracterizacin de las
Poblaciones de Phytophthora infestans Presentes en los Departamentos de Boyac y
Cundinamarca. En: XXIII Congreso de la Asociacin Colombiana de Fitopatologa (ASCOLFI).
Nuevas Tendencias en Fitopatologa. Bogot, Colombia, julio3-6. Resmenes, P.46.
Carter, D.A.; Archer, S.A. and Buck, K.W. 1990. Restriction Fragment Length Polimorphisms
of Mitochondrial DNA of Phytophthora infestans. Mycological Research. 94(8): 1123-1128.
Castaeda, D.; Morales, J.G. 1996. Caracterizacin de aislamientos Monozoospricos de
Phytophthora infestans (Mont) de Bary por anlisis de zimodemas. Tesis Ingeniero Agrnomo.
Universidad Nacional de Colombia, sede Medelln. 38p.
Chacn, G. Alder, N. Gessler, C.; Flier, W. And Forbes, G.A. 2002. Characterization of
Phytophthora infestans on Wild and Cultivated Solanaceas in Ecuador. GILB02
CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg,
Germany.
Cohen, Y. And Coffey, M. D. 1986. Systemic fungicides and the control oomycetes. Annual
Review of Phytopatology. 24:311-338.
Cohen Y., Baider, A. And Cohen, B.H. 1995. Dimetomorph activity against oomycete fungal
plants pathogens. Phytopathology. 85:1500-1506
Collier, R.A. and Le Boutillier, S. J.1995. Minimising Phenylamide resistance: a Successful
strategy in Jersey. Pginas 148-153. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E,
Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Cooke, L.R.; Dowley, L.J.; Little,G. and OSullivan. 1995. Efficacy of fungicide programmes
for the control of late blight in Ireland. Pginas 177-184. En: Phytopthora infestans 150. Dowley,
L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin .
Cooke, D.EL.; Lees, A.K.; Young, V.; Birch, P.R.J.; Hussain, S.; Toth, R.; Gourlay, F.;
Carnegie, S.F and Duncan, J.M. Phytophthora infestans Populations in Scotland: The
implications of Mixed Mating Types on Potato Late Blight Management. GILB02
CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg,
Germany.
Cooke, L. R. and Little, G. 2002. Responses of potato cultivars to Phytophthora infestans and
fungicide programmes for integrated control of late blight in Northern Ireland. Pgina 221.
Potatoes Today and Tomorrow Supplement I. Abstracts of Papers and Posters. 15th Triennial
Conference of the European Association Potato Research. Editors Wenzel, G. and Wulfert, I. July
14-19. Hamburg, Germany.
122

Cornelissen, B.J.C. and Melchers,L.S. 1993. Strategies for Control of Fungal Diseases whit
Transgenic Plants. Plant Physiol. 101:709-712.
Corts D, W.E. y Madrid S.,Y. N.1999. Comparacin de dos metodologas para estimar la
sensibilidad a fungicidas en poblaciones del hongo Phythoptora infestans (Mont) de Bary.
Medelln. Trabajo de Grado (Ingeniera Agronmica). Universidad Nacional de Colombia.
Facultad de Ciencias Agropecuarias. 76p.
Dahlberg, J.; anderson, B.; Nordskog, B. and Hermansen, A. 2002. Field survey of Oospore
Formation by Phytophthora infestans. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global
threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Daly, D. C. 1996. The Leaf That Launched a Thousand Sips. In Natural History: 24 35.
Mimeografiado del dr Estrada.
Day, J.P. and Shattock, R.C. 1997. Agressoveness and other factors relating to displacement of
population of Phytophthora infestans in England and Wales. European Journal of Plant Pathology
!03: 379-391.
Davidse, L.C.; Henken, J.; Van Dalen;A.; Jesper, A.B.K. and Mantel, B.C. 1989. Nine Years of
Practical Experience with Phenylamide Resistence in Phytophthora infestans in the
Netherlands.Neth. J. Pl. Path. 95. Supplement 1: 197-213.
Dehal, K.L, Goth, R.W., Young, R., Sinden, S.L. and Gallegly, M.E. 1991. Ocurrence of the
A2 mating type of Phytophthora infestans in potato fields in the United States and Canada.
American Potato Journal. 68: 717-725.
Dehal, K.L ; Inglis, D.A. and Demuth,S.P. 1993. Testing for resistance to metalaxylin
Phytophthora infestans isolatesfrom noth-western Washington. American Potato Journal. 70:
779-795.
Dowley , L. J.1995. Rese4arch on Phytophthora infestans in Ireland: a short historical review.
Pginas 12-29. En: Phytopthora infestans 150 . Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane,
T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Dowley , L. J.; Cooke, R. L. and OSullivan, E. 1995. Development and monitoring of an antiresistence estrategy for phenylamide use against Phytophthora infestans. Pginas 130-136. En:
Phytopthora infestans 150 . Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan,
E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Drenth, A., Goodwin, S.B., Fry, W.E. and Davidse, L.C. 1993. Genotypic
Diversity of Phytophthtora infestans in the Netherlands Revealed by DNA Polymorphisms.
Phytopathology. 83 (10): 1087-1092.
Earnshow, D.M.D. and Shattock, R.C. 2002. Inheritance of Aggressiveness in sexual Progeny
of Phytophthtora infestans Isolates from The United Kingdom. GILB02 CONFERENCE: late
blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.

123

Egan, A. R. ; Murray, A, and Mullins, S. 1995. Past history and future prospects for fungicides
for the control of Phytophthtora infestans on potatos. Pginas 160-170. En: Phytopthora
infestans 150 . Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole
Press Ltd. Dublin.
Erselius, L.J., Vega-snchez, M.E. and Forbes, G. 2000. Stability in Population of Phytopthora
infestans Attacking Tomato in Ecuador Demostrated by Cellulose Acetate Assesment of Glucose6-P Isomerase. Plant Disease. 84(3):325-327.
Erwin, D.C. and Ribeiro O.k. 1996. Phytophthora Diseases Worldwide. Minnesota.
American Phytopathological Society. 562. pp

The

Estrada R.,N. 2000. La biodiversidad en el mejormiento gentico de la papa. CIP-IPGRIPRACIPA-IBTA-PROINPA-COSUDE-CID. Edicin de Hardy, B y Martnez, E. Impreso en
Bolivia. 372p.
Estrada R.,N. y Guzmn,1969. Herencia de la resistencia de campo al tizn (Phytopthora
infestans Mont. de Bary) en variedades cultivadas de papa (subespecie tuberosas y angigena).
Revista ICA 4: 117-137.
Fernndez-Northcote, E. N.; Villodas, L.; Azaedo, V.; Mrquez, K. And Amzquita, W. 2002.
Validation and adjustment of PROINPA strategies for the chemical control of potato late blight in
susceptible cultivars and for complementation of cultivar resistance under the epidemiological
conditions of Huanuco in the Peruvian Andes. Pgina 55. En GILB02 CONFERENCE: late
blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Flier, W.G.; Grnwald, N.J.; Kroon, L.P.N.; Sturbaum, A.K.; van den Bosch, T.B.M.; GaraySerrano, E.; Lozoya-Saldaa, H. and Fry, W.E. 2003. The Population structure of Phytophthora
infestans from the Toluca Valley of Central Mexico suggests genetic diferentiation between
populations from cultivated potato and wild Solanum spp. Phytopathology 93:382-390.
Flier, W.G.; Kessel, G.J.T., Schepers, H.T.A.M.; van Bekkum, P.J.; Frch, M.G: and
Turkesteen, L.J. 2002. Field-Biology: Ospore Formation, Survival and Infectivity. In: GILB 02
CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg,
Germany.
Fohner, G.R.; Fry, E.W. and White, G.B.1984. Computer simulation raises questions about
timing protectant fungicide application frequency according to a potato late blight
forecast.Phytophatology 74: 1145-1147.
Fontem, D.A. Tsombeng Noumbo, G.R., Owona,M.A.P. and Olanya, M. 2002. Pathogenicity
and sensitivity to Metalaxyl of Phytophthtora infestans Isolates from Garden Huckleberry, Potato
and tomato. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 1113 July, Hamburg, Germany.
Forbes, G.A., and Jarvis, M.C.1993. Host resistance for management of potato the late blight.
Informe paara Taller de Pracipa-Rionegro, Colombia, 19p.

124

Forbes, G.A., Escobar, X.C., Ayala, C.C., Revelo,J., Ordoez, M.E., Fry, B.A., Doucett, K and
Fry, W.E. 1997. Population Genetic Structure of Phytophthtora infestans in Ecuador.
Phytophatology. 87 (4): 375-380.
Forbes, G.A., Goodwin, S.B., Drenth, A., Oyarzun, P., Ordoez, M.E., and Fry, W.E. 1998. A
Global Datebase for Phytophthtora infestans. Plant Disease. 82 (7):811-818.
Forisekov, K.; Heldk, J. and Debreov, K. 2002. Changes in Population of Phytophthtora
infestans in Slovak Republic Races. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The
Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Fraser, D.E., Shoemaker, P.B. and Ristaino, J.B. 1995. Characterization of Phytophthora
infestans isoletes from tomato and potato in North Carolina. U.S.A. 1993-1995. pginas 102-106
. En: Phytopthora infestans 150 . Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and
OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
FRAC (Fungicide Resistance Action Committee). 2002. www.rac.info/publications. Html.
Phenylamide Working Group.
Fry, E.W., Goodwin, S.B., Dyer, A.T., Matuszak,J.M., Drenth, A., Tooley, P.W., Sujkowski,
L.S., Koh, Y,J., Cohen, B.A., Spielman, L.J., Deahl, K.L., Inglis, D.A. and Sandlan, K.P. 1993.
Historical and Recent Migrations of Phytophthora infestans: Chronology, Pathways, and
Implications. Plant Disease 77(7): 653-661.
Fry, E.W., Goodwin, S.B. 1995. Recent migrations of Phytophthora infestans. 1995. Pginas
89-95. . En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and
OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Fry, E.W., Mitzubuti, E.S.G.; Mayton, H.; Aylor, D.E. and Andrade Piedra, J. 2002. Late Blight
Forecasting: Quantifying the Risk from a Known Source. In: GILB 02 CONFERENCE Late
blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Galindo, J. and Gallegly, M.E. 1960. The nature of Sexuality in Phytopthora infestans.
Phytopathology 50: 123-128.
Garca, R.J., Correa, R.T., Gastelum, R.F., Orum, T.V.; Wasmann, C.C. and Nelson , M.R.
2000. Temporal and Spatial Patterns of Genetic Structure of Phytophthora infestans from Tomato
and Potato in the del Fuerte Valley. Phytopathology. 90(11): 1188-1195.
Gavino, P. D., Smart, C.D; Sandrock, R.W; Miller, J.S.; Hamm, P.B., Yun LEE, T.; Dvis, R.M.
and Fry, W.E. 2000. Implications of sexual reproduction for Phytophthora infestans in the United
States: generation of an agressive lineage. Plant Disease 84: 731-735.
Gavino, P.D. and Fry, W.E. 2002. Diversity in and Evidence for Selection on the Mitochondrial
Genome of Phytophthora infestans. Mycologia. 94(5):781-793.
Gebhardt, C. 1999. Genetic Analysis of Quantitative and Qualitative Resistance to Late Blight
Using DNA Markers: The State of Art. GILB Newsletter. N 9:1-2.

125

Geddens, R. M.; Shepherd, C.M. and Genet, J.L. 2002. Factors Affecting the Post-infection,
Curative Activity of fungicides for Control of Late Blight ( Phytophthora infestans). Pgina 323.
Potatoes Today and Tomorrow Supplement I. Abstracts of Papers and Posters. 15th Triennial
Conference of the European Association Potato Research. Editors Wenzel, G. and Wulfert, I. July
14-19. Hamburg, Germany.
Ghimire, S.R.; Hyde, K.D.; Hodgkiss, I.J.; Shaw, D.S. and Liew, E.C.Y. 2003. Variations in
The Phytophthora infestans population in Nepal as revealed by nuclear and mitochondrial DNA
polymorphisms. Phytopathology 93:236-243.
Ghimire, S.R.; Hyde, K.D.; Hodgkiss, I.J.; Shaw, D.S. and Liew, E.C.Y. 2003. Diversity in the
Population of P. infestans in Nepal. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The
Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Gilchrist, E. 2001. Evaluacin de la Diversidad Gentica y Patognica de las poblaciones de
Phytophthora infestans (Mont.) de Bary en Antioquia. Tesis de Maestra, Universidad Nacional
de Colombia, sede Medelln.
Gisi, U.; Iten, F. And Ohl, L.1995. Changes in sensibility to fungicides and epidemiological
behaviour of Phytophthora infestans field isolates. Pginas 142-147. En: Phytopthora infestans
150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd.
Dublin.
Gisi, U.; Hermann, D.; Oho, L. and Steden, C. 1997. Sensitivity Profiles of Mycosphaerella
graminicola and Phytophthora infestans populations to different Classes of Fungicides. ^Pestic.
Sci. 0031-613X: 290-298.
Gmez, G. and Fernndez, K. 2003. Forecasting Models for Potato Late Blight Management in
Cuba. The GILB Newsletter. www.cipotato.org/gilb.
Gonzlez, G.P y Garca, C. 1998. Caracterizacin de las Poblaciones de Phytophthora infestans
en el Altiplano Cundiboyacense con Base en el Tipo de Apareamiento y Sensibilidad al
Fungicida Metalaxyl. Fitopatologa Colombiana 22 (2): 74-81.
Goodwin, S.B., Cohen B.A. and Fry, W.E. 1994, Pangloblal distribution of a single clonal
lieage of the Iris potato famine fungus. Proc. Natl. Acad. Sc. 91: 11.591-11595.
Goodwin, S.B., Sujkowski, L.S., Dyer, A.T., Fry, B.A. and Fry, W.E. 1995. Direct Detection of
Gene Flow and Probable Sexual Reproduction of Phytopthora infestans in Northern North
America. Phytophatology. 85 (4): 473-479.
Goodwin, S.B., Smart, C.D., Sandrock, R.W., Deahl, K.L.,Punja, Z.K. and Fry, W.E. 1998.
Genetic change Withing Populations of Phytophthora infestans in the United States and Canada
During 1994 to 1996: Role of Migration and Recombination. Phytophatology. 88 (9): 939-949.
Govers, F.2001. Misclasificaction of pest as fungi puts vital research on wrong track. Nature,
411:633. www.nature.com. Correspondence.

126

Griffith, G.W. and Shaw, D.S. 1998. Polymorphisms in Phytophthora infestans: Four
Mitochondrial Haplotips are detected after PCR Amplificationof DNA from pure cultures or from
Host Lesions. Applied of Environmental Microbiology. 64(10): 4007-4014.
Grnwald, N.J., Romero-Montes,G.; Lozoya-Saldaa, H.; Rubio-Covarrubias, O.A. and Fry,
E.W. 2002. Potato late blight management in the Toluca Valley: validation of SimCast modified
for cultivars with high field resistance. Plant Disease 86:264-268.
Guevara-Fujita, M.L; Rivera, C. And Ghislain, M. 2002. Antifungal Proteins used in Genetic
engineering for Late Blight Resistance. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The
Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Guzman, J. 1964. Nature of partial resistence of certain clones of three Solanum tuber bearing
species to Phytophthora infestans. Phytopathology 54: 1398-1404.
Hausvater, E.; Rasocha, V and Dole, P. 2002. The Effect of Fungicide Treatments on Control of
Tuber Blight in 2000 and 2001. Pgina 54. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the
global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Helgeson, J.P. 2002. Molecular Methods for Assisting in Breeding for late Blight Resistance. In
GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July.
Hamburg, Germany.
Henfling, J.W: 1980- 1987. El Tizn Tardo de la papa Phytophthora infestans. Boletn de
Informacin Tcnica 4. Centro Internacional de la Papa (CIP). Lima Per. 25p. (Primera versin
16p. y la segunda 25p.)
Hermansen, A. And Amudensen, T. 1995. Mating types of Phytophthora infestans in Norway.
Pginas 77-82. En: Phytopthora infestans 150 . Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane,
T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Hossain, M.; Dey, T.K.; Haque, M.A.; Rahman; M.M. and Ali, M.S. 2002. Studies on Late
Blight Disease of Potato in Bangladesh. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the
global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Iram, S.; Ahmad, I.; Batool, S. and Masood, S. 2002 Protein Profiles of Phytopthora infestans
Isolates Collected from potato production zones of Pakistan . GILB02 CONFERENCE: late
blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Jaramillo V., S. ; Afanador, L ; Mrquez, E. J.; Lpez, J.B. Mrquez, M.E.; Arango, R. Y
Zapata, J.L. 2001. Caracterizacin Gentica del Patosistema Phythoptora infestans/Solanum
tuberosum y su Relacin con Polimorfismos Moleculares. Informe parcial Proyecto de
Investigacin . Convenio COLCIENCIAS-Universidad Nacional de Colombia, Facultad de
Ciencias Agropecuarias.
Jaramillo V., S. ; Afanador, L ; Mrquez, E. J.; Lpez, J.B.; Arango, R. y Zapata, J.L. 2002a.
Caracterizacin Gentica del Patosistema Phythoptora infestans/Solanum tuberosum y su
Relacin con Polimorfismos Moleculares. Informe Final Proyecto de Investigacin . Convenio
COLCIENCIAS-Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias Agropecuarias.
Mimeografiado.
127

Jaramillo, S., Gilchrist, E. y Afanador, L. 2002b. Evaluacin de Aislamientos Colombianos de

Phytophthora infestans por tipo de Apareamiento. En: XXIII Congreso de la Asociacin
Colombiana de Fitopatologa (ASCOLFI). Nuevas Tendencias en Fitopatologa. Bogot,
Colombia, julio3-6. Resmenes, P.48.
Jaramillo V., S. Gilchrist R., E.; Gutirrez, L.A.; Morales O., J.G. Y Correa L., G. 2002c.
Determinacin de la presencia del tipo de Apareamiento A2 en Aislamientos de P. infestans
colectados en diferentes zonas paperas del pas. Medelln. Informe Final Proyecto de
Investigacin. Convenio CEVIPAPA- Universidad Nacional de Colombia. 57. Mimeografiado.
Jaramillo V., S.; Gutirrez, L.A.; Gilchrist R., E.; Afanador, L. y Morales O., J.G. 2002d.
Sensibilidad de Aislamientos de Phytophthora infestans (Mont) de Bary Procedentes de
diferentes zonas paperas colombianas a fungicidas sistmicos. En prensa para Fitopatologa
Colombiana.
Jaramillo, S.; Lpez, J.B.; Mrquez M.E.; Mrquez, E.J.; Afanador,L.1998. Caracterizacin
Gentica del Patosistema Phytophthora infestans/Solanum tuberosum y su Relacin con
Polimorfismos Moleculares. Informe Investigacin Universidad Nacional de ColombiaCOLCIENCIAS. Mimeografiado.
Jaramillo, S.; Morales, J.G.; Argel, L.E.; Snchez, G.; Guzmn, E. and Jacquim, B. 2003.
Estandarizacin de la metodologa de discos de hoja para determinar la sensibilidad de
aislamientos de P. infestans al Fenamidone. Cuarto Taller de papas Colombianas, junio 4-5 .
Bogot Colombia, Mimeografiado.
Judelson, H.S. 1996.Chromosomal Heteromorphism Linked to the Mating Type Locus of the
Oomycete Phytophthora infestans. Mol. Gen Genet. 252: 155-161.
Judelson, H.S. and Roberts, S. 1999. Multiple Loci Determining Intensivity to Phenylamide
Fungicides in Phytophthora infestans. Phytopathology, 89 (9):754-760.
Judelson, H.S., Spileman, L.J. and Shattock, R.C. 1885. Genetic Mapping and non-Mendelian
segregation of Mating Type Loci in the Oomycete Phytophthora infestans. Genetics. 141: 503512.
Judelson, H.S. and Tooley P.W. 2000. Enhancend Polymerasa Chain Reaction Methods for
Detecting and Quantifying Phytophthora infestans in Plants. Phytopathology.90 (10):1112-1119.
Kadish ,D. and Cohen, Y. 1989. Population dynamics of Metalaxyl sensitive and metalaxylresistance isolates of Phythoptora infestans untreated crops of potato. Plant Pathology. 38: 271276.
Kamoun, S. 2002. Basic Biology: Information of Mechanisms that make Phytophthora
infestans a Pathogen. In: GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat.
Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Kamoun, S. 2002. Basic Biology. What makes Phythoptora infestans a pathogen?. Lizrraga
(ed). Late Blight: Managing The Global Threat. Proceedings of the Global Initiative on Late
Blight Conference. 11-13 July, Hamburg, Germany. P.11-12.
128

Kamoun, S.; Hraber, P.; Sobral, B.; Nuss, D. And Govers, F. 1999. Initial Assessment of Gene
Diversity for the Oomycete Pahogen Phythoptora infestans Based on Expressed Sequences.
Fungal Genetics and Biology. 28: 94-106. http: www.idealibrary.com on.
Kato, M.; Mizubuti, E.S.; Goodwin, S.B.and Fry, W.E. 1997. Sensivity to Protectant
Fungicides and Pathogenic Fitness of Clonal Lineages of Phytophthora infestans in the United
States. Phytopathlogy, 87 (9):973-978.
Kato, M. and Shimanuki,T. 2002. Reduction of fungicide applications by field resistant
cultivars to potato late blight. Pgina 55. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the
global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Keane, T.1995. Potato blight warning practice in Irland. Pginas 191-200. En Phytopthora
infestans 150 aos. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds,
Boole Press Ltd. Dublin .
Kessel, G. J. T.; Turkensteen L. J.; Schepers, H. T. A: M.; van Bekkum, P. J. and Flier, W. G.
2002. Phytophthora infestans Oospores in the Netherlands: occurrence and effects of cultivars
and fungicides. Pgina 114. Potatoes Today and Tomorrow Supplement I. Abstracts of Papers
and Posters. 15th Triennial Conference of the European Association Potato Research. Editors
Wenzel, G. and Wulfert, I. July 14-19. Hamburg, Germany.
Knapova, G., Tenzer, I., Gessler, C. and Gisi, U. 2001. Characterization of Phytophthora
infestans from Potato and tomato with Molecular Markers.In: Biodiversity in plant Pathology,
Proccedings of the 5 Congress of the European Foundation for the Plant Pathology, 18-22
September 2000, Taormina/Giardini-Naxoss, Sicily, Italy. SIPV Pisa, Italy. P: 6-9.
Ko, W.H. 1988. Hormonal Heterothallism and Homothallism in Phytophthora. Annual Review
Phytopathology 26:57-73.
Kolovayev, V.A. 2002. Donors of Potato Horizontal Resistance to Phytophthora infestans.
GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July.
Hamburg, Germany.
Lagos, L. E. 2002. Aislamiento y Caracterizacin gentica de las poblaciones de Phytophthora
infestans (Mont) de Bary en las Zonas Productoras de Papa Solanum tuberosum l. En el
Departamento de Nario. Cali. Tesis (Maestra en Ciencias Biolgicas). Universidad del Valle.
Facultad de Ciencias. 66p.
Landeo, J.A. 2002. Durable Resistance: Quantitative/Qualitative Resistance. En GILB02
CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg,
Germany. En Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and
OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Landeo, J.A.; Gastelo, M; Pinedo, H. And Flores, F. 1885. Breeding for horizontal resistence to
late blight in potato free of R genes. Pginas 268-274.
Latijnhouwers, M., Munnik, T. and Govers, F. 2002. Phospholipase D in Phytophthora
infestans and its Role in Zoospore Encystment. Molecular Plant Microbe Interactions. 15(9):
939-946.
129

Laxalt, A.M; Latijnhowers, van Hulten, M. and Govers , F. 2002. Differential expression of G
protein and subunited genes during development of Phytophthora infestans. Fungal Genetic
and Biology 36: 137-146. Academic Press, Elsevier Science USA.
Lees, A.; Hussain, S.; Cooke, D. and Duncan, J. 2002. The Development of Phytophthora
infestans Specific Primers and their Use in Epidemiological Studies. GILB02 CONFERENCE:
late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Levy, Y; Benderly, M.; Cohen, Y,; Gisi, U. and Bassand, D. 1986. The join action of fungicides
in mixtures: comparison of two methods for synergy calculations. EPPO Bull. 16:651-657.
Lpez, J.B; Mrquez, M.E.; Jaramillo, S.; Zapata, J.L. Mazo, J.J. and Patio, L.F. 1997.
Determinacin de Razas fisiolgicas y Tipo de Apareamiento en aislamientos de Phytophthora
infestans (Mont) de Bary. Revista Latioamericana de la Papa. 9/10(1): 156-170.
Lujn C. L. 1996. Historia de la Papa. Origen-Culturas Andinas. Esclarecimiento de tres
hechos. En: Robayo V., G. (editor). Papas Colombianas con el mejor entorno ambiental.
Comunicaciones y Asociados Ltda. P:18-26.
Mahuko, G., Peters, R.D., Platt, H.W. and Daayf, F. 2000. Random Amplified Polymorphic
DNA ( RADP) analysis of Phytophthora infestans Isolates Collected in Canada During 1994 to
1996. Plant Pathology. 49: 252-260.
Maldonado, J., Garca, C. 2002. Determinacin de Polimorfismos por Haplotipos de
Phytophthora infestans de Cundinamarca. En: XXIII Congreso de la Asociacin Colombiana de
Fitopatologa (ASCOLFI). Nuevas Tendencias en Fitopatologa. Bogot, Colombia, julio3-6.
Resmenes, P.78.
Marn M., M. Y Mira C., J.J. 1998. Caracterizacinn de Razas Fisiolpgicas y Tipo de
Apareamiento en Aislamientos de Phytophthora infestans (Mont) de Bary en Diferentes Pisos
Trmicos y Hospederos, en el Departamento de Antioquia. Trabajo de Grado (Ingeniera
Agronmica). Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias Agropecuarias. 55 p.
Mrquez, M.E.; Lpez, J.B.; Jaramillo, S.; Zapata J.L.; Ramrez, D. y Bedoya, G. 1998.
Establecimiento y Caracterizacin de Cultivos Monozoospricos obtenidos de Aislamientos de
Phytophthora infestans (Mont) de Bary en Antioquia. Fitopatologa Colombiana 22(1):5-6.
Mazo A. J.J. y Patio H., L.F. 1995. Determinacin de Razas Fisiolgicas y Tipo de
apareamiento en Aislamientos de Phytophthora infestans (Mont) de Bary. Trabajo de Grado
(Ingeniera Agronmica). Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias
Agropecuarias. 66 p.
Marqunez, R. 1995. Resistance of Phytophthora infestans strains to phenylamides in Spain.
Pginas 137-141. En Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane,
T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Mauras, S. and Latorse, M.P. 2002. Sensitivity to Fenamidone of Phytophthora infestans
Isolates. Aventis CropScience Regulatory Affairs Fungicides. Mimeografiado. 6p.

130

May, K.J. and Ristaino, J.B. 2002. The Mitochondrial DNA Haplotype of Phytophthora
infestans in 19th Century herbarium Specimens. GILB02 CONFERENCE: late blight managing
the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Medina, M.V. and Platt, H.W. 1999. Viability of Oospores of Phytophthora infestans under
Field Conditions in Northeastern North America. GILB Newsletter 9:3. Late Blight Abstracts.
(Canadial Journal of Plant Pathology 21:137-143).
Miller, J.S. and Johson, D.A. 2000. Competitive fitness of Phytophthora infestans Isolates
Under Semiarid Field Conditions. Phytophthology. 90(3):220-227.
Mizubuti, E.S.G.;and Forbes, G.A. 2002. Potato Late Blight IPM in theDeveloing Countries.
P.9. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July,
Hamburg, Germany.
Mizubuti, E.S.G.; Maziero, J.M.N.; Maffia, L.A. and Haddad M.A. 2002. Quantifying Basic
Ecological Requeriments for Better Late Blight Management in Sub-tropical Climate. En
GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July.
Hamburg, Germany.
Moeller, K.; Flier, W. and Habermeyer, J. 2002. Characterization of German Isolates of
Phytopthora infestans by mating Type, Fungicide Resistance, mtDNA Hplotyping and AFLP
fingerprinting. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS.
11-13 July. Hamburg, Germany.
Moeller, K. ; Habermeyer ; J. And Reents, H.J. 2002. Influence and Interaction of Phytopthora
infestans and Nitrogen Supply of Potatoes on Tuber Bulking of Organic Potato Crops in South
Germany. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13
July. Hamburg, Germany.
Myint, M.M. 2002. Research on Management of Potato Late Blight in Myanmar. GILB02
CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg,
Germany.
Nuninger, C, ; Steden, C. And Staub, T. (1995). The contribution of Metelaxyl-based fungicide
mixtures to potato late blight control. Pginas 122-129. En: Phytopthora infestans 150 . Dowley,
L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Oliva, R.F ; Erselius, L. J.; Alder, N. E. And Forbes, G. A. 2002. Potential of sexual
reproduction among host-adapted populations of Phytophthora infestans sensu lato in Ecuador.
En prensa para Plant Pathology. 19 p.
Ordoez, M.E., Erselius, L.J., Hohl, H.R., Ramn, M.P., Smart, C.D ., Velasco, A. , Oyarzn
P.J., Nelson, R.J. and Forbes, G.A. 1998. An A2 Population of Phytophthora infestans Found on
Wild Solanaceus Species in Ecuador is Weakly Pathogenic on Patotoe and Tomatoe. En prensa
para Phytopathology. 88: 265-271
Ordoez, M.E., Hohl, H.R., Velasco, J.A., Ramn, M.P., Oyarzn, P.J., Smart, C.D., Fry, W.E.,
Forbes, G.A. and Erselius, L.J. 2000.
A Novel Population of Phytophthora, similar to
Phytophthora infestans attacks Wild Solanum species in Ecuador. Phytopathology. 90: 197-202.
131

OSullivan, E.; Cooke, L.R.; Dowley,L.J. and Carlisle, D. 1995. Distribution and significance
of the A2 mating type of Phytophthora infestans in Ireland. Pginas 232-237. En: Phytopthora
infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole
Press Ltd. Dublin.
Oyarzn , P.J., Pozo, A., Ordoez; M.E., Doucett, K. and Forbes, G.A. 1998. Host Specificity
of Phytophthora infestans on Tomato and Potato in Ecuador. Phytopathology. 88(3): 265-271.
Paris, R. and Lamattina, L. 2002. Fluctuations of Mitochondrial rRNA and rDNA Content
During the life Cycle of Phytopthora infestans. En GILB02 CONFERENCE: late blight
managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Paris, R. and Lamattina, L. 2002. A Phytopthora infestans EST Homologue to Aspartic
Proteases: Cloning and Expression. En GILB02 CONFERENCE: late blight managing the
global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Patio, L.J.; Morales, J.G.; Buritic, P.; Zapata, J.L. y Jaramillo, S. 1998. comportamiento
Ecolgico y Poblacional de la Interaccin Phytopthora infestans-Solanaceas. Fitopatologa
Colombiana 22(2): 59-54.
Prez, W., Gamboa, S., Coca, M., Raimundo, R.,Hijmans, R. And Nelson, R. 1997-1998.
Characterization of Phytophthora infestans Populations in Per. In: Impact on a Changing World.
Program Report International Patato Center. Lima, Per. Pag 31-38.
Peters, R.D., Platt, H.W., Hall, R. and Medina, M. 1999. Variation in Aggressiveness of
Canadian Isolates of Phytophthora infestans as indicated by their Relative Abilities to Cause
Potato Tuber Rot. Plant Disease 83:652-661.
Peterson, P.D. Jr. 1995. The influence of the potato late blight epidemics of the 1840s on
disease etiology theory in plants. Pginas 30-35. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.;
Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Power, R. J.; Hamlen, R. A. and Morehart. 1995. Variation in sensitivity of Phytophtora
infestans field isolates to cymoxanyl, chlorothalonil and metalaxyl. Pginas 154-159. En:
Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan,
E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Quintero G., O.D. y Saldarriaga M., G.M. 1998. Determinacin del Cariotipo de Phytopthora
infestans Mediante Electroforesis de Campo Pulsado. Medelln, Trabajo de Grado (Ingeniera
Agronmica) Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias Agropecuarias. 63p.
Rave, I. y Roldn, P. 1998. Evaluacin de la resistencia in vitro e in vivo de Phythoptora
infestans (Mont) de Bary al fungicida Metalaxxyl, en aislamientos del departamento de
Antioquia. Medelln Trabajo de Grado (Ingeniera Agronmica). Universidad Nacional de
Colombia. Facultad de Ciencias Agropecuarias. 67p.
Raven P.H., Evert R.F. and Eichhorn S.E. 1999. Biology of Plants. Six edition. New York.
WH Freeman and Cmpany. 944. pp 370.

132

Richardson B.J., Baverstock, P.R. and Adams, M. 199.. Allozyme Electrophoresis. A

Handbook for Animal Systemics and population Studies. Academic Press, INC . San Diego.
P:122-144.
Ries, A.; Dias Soussuna, N.; Maziero, J.M; Maffia, L.A. and Mitzubuti, E.S.G. 2002.
Phytophthora infestans Populations in Brazil: Current Status and Epidemiologial Features. Ries,
A.; Dias Soussuna, N.; Maziero, J.M; Maffia, L.A. and Mitzubuti, E.S.G. 2002. Phytophthora
infestans Populations in Brazil: Current Status and Epidemiological Features.
Ristaino. J.B. 1998. The importance of archival and Herbarium Materials in understanding the
role of oospores in Late Blight Epidemics of the past. Phytophtology. 88(11):1120-1130.
Ristaino, J.B. Abad, Z.G. and Ugent, D. 1995. Tracking ancient epidemics: survey of plant
pathogens of Preceramic Peru. Pginas 226-231. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.;
Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Rivera-Pea, A. 1995. Racial composition in population of Phytopthora infestans (Mont.) de
Bary in the Toluca Valley and slopes of the volcano Nevado de Toluca over the period 19891994. Pginas 116-121. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.;
Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin.
Rivera, V.; Riveros, F. and Secor, G. 2002. Characterization of Phytophthora infestans
Populations in Chile. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat.
Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Rubio-Covarrubias, O.A.; Daz, C., and Daz, M. Field Evaluation of Horizontal and Vertical
Resistance to Late Blight in Potato in the Toluca Valley, Mexico. GILB 02 CONFERENCE Late
blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Samoucha, Y. and Cohen, Y. 1988. Synergistic interactions of cymoxanil mixtures in the
control of metalaxyl-resistant Phytophthora infestans of potato. Phytopatology 78:636-640.
Samoucha, Y. and Cohen, Y. 1989. Field control of potato late blight by synergistic fungicidal
mixtures. Plant Diseases 73:751-753.
Sansome , E. and Brasier C.M. 1973. Diploidy and Chromosomal structural hybridity in
Phytophthora infestans. Nature 241: 344-345.
Santos, J.; Zarb, J.; Juntharathep, P. and Leifert, C. 2002. Effect of Organic Fertility Input
Type, Level and N:K Ratio on Late Blight Development and Yield Production. GILB 02
CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg,
Germany.
Schepers, H.T.A.M. 2002. Potato Late Blight IPM in the Industrialized Countries. GILB 02
CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg,
Germany.
Schepers, H.T.A.M. and van Soesbergen, M.A.T. 1995. Factors affecting the occurence and
control of tuber blight. Pginas 171-176. En: Phytopthora infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon,
E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole Press Ltd. Dublin .
133

Schiessendoppler, E and Molnar, O. Characterization of Phytopthora infestans Populations in

Sub-Saharan Africa as a Basis for simulation Modeling and Integrated Disease Management.
GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July,
Hamburg, Germany.
Schber-Butin, B.; Knapova, G.; Knipfelberg, I. and Niepold, F. 1995. Phytopthora infestans in
Germany: population dynamics and methods in diagnosis. Pginas 96-101. En: Phytopthora
infestans 150. Dowley, L. J.; Bannon, E, Cooke, R. L.; Keane, T. and OSullivan, E., eds, Boole
Press Ltd. Dublin .
Sedegui, M.;Carroll, R.B.; Morehart,A.L.; Evans, T.A. Kim, S.H.; Lakhdar, R. and Arifi, A.
2000. Genetic Structure of the Phytophthora infestans Population in Morocco. Plant Disease.
84(2):173-176.
Sedegui, M.;Carroll, R.B.; Morehart,A.L.;Hamlet,R.A. and Power, R.J. 1999. Comparison of
Assays for Measuring Sensivity of Phytophthora infestans Isolates to Fungicides. Plant Disease
83:1167-1169.
Shaw, D.S., Fyfe,A.M., Hibberd, P.G. and Abdel-Sattar, M.A. 1985. Ocurrence of the Rare A2
Mating Type of Phytophthora infestans on Imported Egyptian Potatoes and the Production of
Sexual Progeny with A1 mating Types from the UK. Plant Pathology. 34: 552-556.
Shaw, D. and Wattier, R. 2002. Evolution of P. infestans: A Globala Overview. In:GILB 02
CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg,
Germany.
Shaw, D. and Shattock, R.C. 1991. genetics of Phytophthora infestans: The Mendelian
Approach. In Phytophthora. J.A. Lucas, R.C Shattock, D.S Shae and L.R. Cooke, Eds.
Cambridge, Cambridge University Press, 218-230.
Smart,C.D; Sandrock, R. W.; and Fry, R. 2000. Molecular Techniques and Mystery of the
Potato Late Bligth Pathogen. Plant-Microbe Interctions. Vol 5. Edited by gary Stacey and Noel
Keen . 336p. APS (American Phytopathology Society) Press. St. Paul Mn. United States of
America. P: 21-41.
Solis, J.; Guevara-Fujita, M.; Ghislain, M. 2002. Isolation of Defensin-like Genes from Lepidim
meyenii (Maca). GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts.
11-13 July, Hamburg, Germany.
Sozzi, D. and Staub, T. 1987. Accuracy of Methods to Monitor Sensivity of Phytophthora
infestans to Phenylamide Fungicides . Plant Disease. 71:422-425.
Spielman, J.L., Drenth, A., Davidse, L.C., Sujkowski, L.J., Gu, W., Tooley, P.M. and Fry, WE.
1991. A Second world-wide Migration and Population Displacement of Phytophthora infestans ?.
Plant Pathology. 40: 422-430.
Spielman, J.L., Sweigard, J.A., Shattock, R.C. and Fry, W.E. 1990. The Genetics of
Phytophthora infestans: Segregation of Allozime Markers in F2 and Backcross Progeny and the
Inheritance of Virulence against Potato Resistance Genes R2 an R4 in F1 Progeny. Experimental
Mycology. 14: 57-69.
134

Stein, J.M. and Kirk, W.W. 2002. Containment of existing potato late blight (Phytophthora
infestans) foliar epidemics with fungicides. Crop Protection 21:575-582. Tomado de The GILB
Newsletter. www.cipotato.org/gilb.
Strmberg, A. 1995. Systematically induced Resitence in Potato Cultivars with Different
Degree of Resistance to ligh Blight caused by Phytophthora infestans (Mont.) de Bary. J.
Phytopathology, 143, 27-31. ISSN 0931-1785.
Strmberg, A. ; Peterson, L. and Wicstrom, M. 1999. Infection of Potatoes by Oospores of
Phytophthora infestans in Soil. GILB Newsletter 9:3. (Abstracs. Plant Disease 83:876).
Sturz, A. V.; Christie, B.R. ; Matheson, B.G.; Arsenault; W.J. and Buchanan. 1999. Endophytic
Bacterial communities in the Periderm of Potato Tubers and their Potential to Improve Resistence
to Soil-Borne Plant Pathogens. GILB Newsletter 9:4. (Abstracs Plant Pathology 48:360-369).
Sujkowski, L.S.; Goodwin, L.B.; Dyer, A.T. and Fry, W.E. 1994. Increased Genotypic
Diversity via Migration and Possible Ocurrence of Sexual Reproduction of Phytophthora
infestans in Poland. Phytophatology. 84 (2):201-207.
Sunseri, M. and Johnson, D. 2002. Potato Late Blight: How Long Can Sporangia Survive. In
Triennial Conference of the European Association for Potato Research, July 14-18, 2002.
Hamburg, Germany.
Sujkowski, L.S., Goodwin, S.B. Dyer,A.T. and Fry, W.E. 1994. Increased Gentypic Diversity
Via Migration and Possible Ocurrence of sexual Reproduction of Phytophthora infestans in
Poland. Phytophatology 84 (2): 201-207.
Thomson PLM. 2003. Diccionario de Especialidades Agroqumicas. Editorial PLM, S.A.
Dcima Tercera edicin.
Thompsom, A.H.; McLeod, A. ; Denner, F.D. and Zondo, P.T. 2002. Characterization of
Phytophthora infestans Populations in South Africa. GILB 02 CONFERENCE Late blight:
Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Tooley, P.; Therrien, C. and Ritch, D.1989: Mating Type, race composition, nuclear DNA
content and isozyme analysis of peruvian isolates of P. infestans. Phytopathology 79: 478-481.
Trillos, O. 1989. Evaluacin de la Resistencia al Tizn Tardo de la Papa (Phytophthora
infestans). Curso de Manejo de Germoplasma. Convenio ICA-CIP. Bogot Colombia.
Mimeografiado.
Turkesteen, L.J. S.F. Fungus diseases. International Potato Course: Production, Storage and
Seed Technology. Wageningen, Holanda. 72 p.
Turkesteen, L.J. and Flier, W.G. 2002. Late Blight:Its Global Status in 2002 and Beyond.
In:GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global Threat. Abstracts. 11-13 July,
Hamburg, Germany.

135

Turkesteen, L.J. and Flier, W.G. 2002b. Late Blight:Its Global Status in 2002 and Beyond.
Lizrraga (ed). Late Blight: Managing The Global Threat. Proceedings of the Global Initiative on
Late Blight Conference. 11-13 July, Hamburg, Germany. P:1-9.
Urrea, A.!. 2000. Efecto de Phytophthora infestans (Mont) de Bary y sus Metabolitos en la
Seleccin de Somaclones de Papa (Solanum tuberosum) variedad Diacol Capiro Obtenidos por
Mutagnesis in vitro y variacin somaclonal. Tesis. Universidad Central de las Villas. Cuba.
Resumen 42p.
Van der Lee, T. ; De witte, I; Drenth,A.; Alfonso,C. and Govers, F. 1997. AFLP Linkage Map
of the Oomycete Phytophthora infestans. Fungal Genetics and Biology 21,278-291. Academic
Press.
Van der Lee, T. ; Testa, A. ; Vant Klooster, J.; Van den Berg-Velthuis, G. and Govers. 2001a.
Chromosomal Deletion in Isolates of Phytophthora infestans Correlates with Virulence on R3,
R10, and R11 Potato Lines. Molecular Plant-Microbe Interctions 14 (12): 1444-1452. The
American Phytop. Soc.
Van der Lee, T. ; Rebold, A. ; Testa, A. ; Vant Klooster, J. and Govers, F. 2001b. Mapping of
a Virulence Genes in Phytophthora infestans with Amplified Fragment Length Polimorfism
Markers Selected by bulked Segregant Analisis.
Veit, H. 1994. Holocene Landscape and climate evolution of the Central Andes. 14 Symposium
on Latin American Geosciences. Tubingen 1994. Edited by, Miller, HF; Rosenfeld, U. and weber
Diefenbach. P:887-895.
Visker; M.H.P.W.; Keizer, L.C.P.; Van Eck,H.J.; Jacobsen, E.; Colon, L.T. and Struik, P. 2003.
Can the QTL for late blight resistence on potatp chromosome 5 be attributed to foliage maturity
type?. Theoretical and Applied Genetics 106:317-325. Tomado de The GILB Newsletter.
www.cipotato.org/gilb
Vleeshouwers, V.G.A.A.; van Dooijeweert,W.; Keizer, LC.P. and Sijpkes, L. 1999. A
Laboratory Assay for Phytophthora infestans resistence in varies Solanum species reflects the
field situation. European Journal of plant Pathology. 105:241-250. Netherlands Holland.
Vleeshouwers, V.G.A.A.; van Dooijeweert,W.; Govers, F. ; Kamoun, S. and Colon, L.T. 2000a.
Does Basal PR Gene Expression in Solanum Species Contribute to non-specific Resistence to
Phytophthora infestans. Physiological and Molecular Plant Pathology . 57:35-42.
Vleeshouwers, V.G.A.A.; van Dooijeweert,W.; Govers, F. ; Kamoun, S. and Colon, L.T.
2000b. The Hypersensitive Respnse is Associated with Host and Nohost Resistance to
Phytophthora infestans. Planta. 210: 853-864.
Wangsomboondee, T.; Trout Groves, C. Shoemaker, P.B. Cubeta, M.A. and Ristaino, J.B.
2002. Phytophthora infestans population from tomato and potato in Noth Carolina differ in
genetic diversity and structure. Phytopathology 92:1189-1195.
Wastie, R.L. 1991. Breeding for Resistance. In: Advances in Plant Pathology. Academic Press
Limited. Vol 7, Cap 7:193-224.
136

Whisson, S.C.; van Der Lee, T.; Bryan, G. J.; Waugh, R. ; Govers, F. and Birch, P.R.J. 2001.
Physical mapping across an avirulence locus of Phytophthora infestans using a highly
representative, large-insert bacterial artificial chromosome library. Mol. Genet. Genomics. 266:
289-295. Springer-Verlag.
Whisson, S.C., avrova, A.O. and Birch, P.R.J. 2002. Physical Mapping of the Phytophthora
infestans Genome. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat.
ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Wiik, L. 2002. Fungicide strategies against late blight in Sweden. Pgina 54. GILB02
CONFERENCE: late blight managing the global threat. ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg,
Germany.
Yun Lee, T. 1998. Genetic studies of Phytophthora infestans, a late blight pathogen of potato
and tomato.Ph.D thesis, Cornell University, Ithaca, NY.
Zhang, Z.; Zhu, J.; Tian, S.; Li, Y.; Yang, Z. and Wang, R. 2002. Study on Biology of
Phytophthora infestans in China. GILB 02 CONFERENCE Late blight: Managing The Global
Threat. Abstracts. 11-13 July, Hamburg, Germany.
Zoteyeva, N. 2002. Resistance to Phytophthora infestans of Wild Potato Species Accesions in
two remote Time Periods. GILB02 CONFERENCE: late blight managing the global threat.
ABSTRACS. 11-13 July. Hamburg, Germany.
Zwankhuizen, M.J.; Govers, F. and Zadocks, J.C. 1998. Developmente of Potato Leaf Blight
Epidemics: Disease Foci, Disease Gradients, and Infection Sources. Phytopathology 88(8): 754763.
www.nature.com Macmillan Magazines Ltd, 2001. Nature vol 411. june 7 2001. pp 633
www.canal-h.net/webs/sgonzalez002/ Micologia/REINOSHONGOS.htm
www.geocities.com/alex_jango/hongos.htm

137