UNIVERSIDADE DE SO PAULO - INSTITUTO DE BIOCINCIAS

DEPARTAMENTO DE ECOLOGIA
LABORATRIO DE LIMNOLOGIA

DETERMINAO DO OXIGNIO DISSOLVIDO

MTODO DE WINKLER descrito em GOLTERMAN, H.L.; CLYMO, R.S. & OHNSTAO, M.AM. 1969.
Methods for Physical and Chemical Analysis of Freshwaters. I.B.P. Handbook n 6. Blackwell
Scientific Public.
Baseado na apostila de Ecologia Geral da Prof. Dra. Takako Matsumura Tundisi, 1984 (UFSCar).
Adaptado por Carolina Fiorillo Mariani, 2004.

INTRODUO
A medida do oxignio dissolvido na gua constitui um parmetro de grande importncia,
pois depende de uma srie de fatores como a atividade das algas e dos vegetais (fotossntese e
respirao), dos animais (respirao) e das bactrias (reduo e oxidao), alm da turbulncia da
gua.
A tcnica mais utilizada a descrita por Winkler, na qual o iodo liberado como um resultado
de reaes que liga quimicamente o oxignio dissolvido medido quantitativamente atravs da
titulao com tiossulfato de sdio. Essa tcnica foi descrita por Winkley (1888) e modificada por
Pomeroy e Kirshmam (1945) e at hoje considerada a mais precisa e amplamente aceita.
O princpio desse mtodo consiste no seguinte: o O2 combina com Mn(OH)2 formando
Mn(OH)4 que, com a subseqente acidificao, na presena de iodeto libera I2 na quantidade
equivalente ao contedo original de O2 dissolvido presente na amostra.

COLETA A CAMPO
Os frascos usados em campo devem ser de vidro cor mbar de 250 mL, de boa qualidade,
gargalo estreito e tampa de vidro esmerilhada. Os frascos precisam ser lavados previamente no
laboratrio e aferidos quanto sua capacidade volumtrica total. Para coleta de gua superficial, o
prprio frasco de armazenamento pode ser utilizado. J em profundidades, utilizada a garrafa de
Van Dorn para transportar a gua da profundidade desejada at a superfcie.
Antes de encher o frasco com gua a ser analisada, deve-se preocupar em lavar com gua
da profundidade desejada (2 vezes). A gua (amostra) deve ser colocada cuidadosamente de
modo a no provocar a formao de bolhas de ar durante o preenchimento, que podero aerar a
gua e causar uma medida errada de oxignio dissolvido. Para que isso no ocorra, deve-se
inserir a ponta da mangueira da garrafa de Van Dorn at o fundo do frasco e controlar o fluxo de
gua apertando a mangueira de borracha de sada da garrafa, com o objetivo de controlar a
presso e causar pouca turbulncia dentro do frasco. Na coleta de superfcie, a inclinao do
frasco precisa ser controlada para evitar a formao de bolhas. Deve-se encher o frasco at a boca
e deixar que, ao colocar a tampa, a gua em excesso seja descartada.
muito importante e no se deve nunca esquecer de anotar o nmero do frasco, a
profundidade correspondente, o local e a estao na ficha de bordo.

REAGENTES PARA DETERMINAO DO OXIGNIO DISSOLVIDO PELO MTODO DE

WINKLER
1) KIO3 (iodato de potssio) 0,1 M ou 0,1 N
Dissolver 3,567 g de KIO3 (seco a 105 C) em gua destilada
Diluir para 1000 mL

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Para diluir para 0,025 M, pipetar 250 mL da soluo de 0,1 M e completar at 1000 mL
o volume com gua destilada.

2) Na2S2O3 (tiossulfato de sdio) ~ 0,025 M

Pesar 6,2 g de Na2S2O3.5H2O

Acrescentar gros de NaOH ou 1,0 g de Na2CO3

Diluir para 1000 mL com gua destilada desaerada (fervida por 15 mim e resfriada a

temperatura ambiente)
Armazenar em frasco escuro

Padronizao do Tiossulfato
Observao: A padronizao deve ser feita semanalmente.

Pipetar 5 mL de KIO3 0,025 N em frasco cnico contendo 100 mL de gua destilada

Adicionar 1,0 mL de soluo de azida
Adicionar 1,0 mL de H2SO4
Titular com Na2S2O3 adicionando o amido como indicador.

Clculo do volume: V.N = V.N

V = volume de KIO3
N = molariadade de KIO3
V = volume de tiossulfato gasto na titulao (~9,5 a 10 mL)
N = molaridade do tiossulfato
3) H3PO4 (s.g. = 1,75)
4) Soluo de Iodo Alcalino Azida
Dissolver 400 g de NaOH em 560 mL de H2O
Adicionar 900 g de NaI P.A.
Manter a soluo quente at que o NaI tenha se dissolvido completamente
Resfriar a soluo e diluir para 1000 mL
Se necessrio, decantar ou filtrar aps estabilizada a soluo por uma noite
Adicionar a 1 L da soluo alcalina, 300 mL de NaN 3 (azida sdica) a 2,5% (7,5 g de
NaN3/300 mL de H2O)
Observaes: NaN3 utilizada para eliminar a interferncia de NO 2- quando este est presente
acima de 5 mg.L-1.
Para melhor preciso, no misturar NaN 3, j que essa substncia interfere levemente na
reao entre IO3- e I-, incutindo um erro de aproximadamente 1%. Portanto, amostras com
concentrao de NO2- superior a 5 mg.L-1 no podem ter concentrao de oxignio dissolvido
determinada com preciso.
5) MnSO4.5H2O 50%
Dissolver 350 g de MnSO4.H2O em gua
Filtrar se necessrio
Completar o volume para 1000 mL

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6) Indicador Amido 1,0%

Colocar 1,0 g de amido em 100 mL de gua
Elevar a temperatura de 80 para 90 C e agitar bem
Esfrie e adicione 0,1 g de cido saliclico
Observao: Para a preparao das solues acima descritas, importante observar as
frmulas dos reagentes. Caso contrrio pode ocorrer erro na molaridade das solues e
necessidade de se recalcular.

PROCEDIMENTO
Todo procedimento deve ser executado na ausncia de raio solar direto.
No campo
1) Aps o acondicionamento da amostra de gua no frasco de coleta, adicionar 2,0 mL de MnSO 4,
justamente abaixo do gargalo do frasco
2) Adicionar 2,0 mL da soluo de azida, na superfcie do frasco. Para tanto, deve-se usar uma
pipeta de ponta fina cortada ou uma seringa hipodrmica.
3) Recolocar a tampa do frasco, cuidadosamente, para que no forme bolha de ar, e agitar vrias
vezes invertendo o frasco ( 10 segundos).
4) Quando o percipitado (~ 1/3 do frasco) estabilizar no fundo, agitar novamente, permitindo,
assim, a precipitao completa e deixando o sobrenadante bem claro.
5) Conservar os frascos com amostras em caixa de isopor, na ausncia de luz.
No laboratrio
1) Adicionar 2,0 mL de H2SO4
2) Recolocar a tampa e agitar o contedo. Bolhas de O2 podem se formar nesta etapa, mas no
tem importncia
3) Normalmente, o precipitado dissolver quase que instantaneamente. Se isso no ocorrer, deixe
por alguns minutos descansando e agite novamente
4) Deixar os frascos no escuro e aguardar 30 min.
Titulao com tiossulfato
1) Transferir 100 mL da amostra de gua para frascos cnicos de 250 mL com rplica
2) Titular com a soluo de tiossulfato at que haja a virada para incolor
3) Usar como indicador 2,0 mL da soluo de amido
As reaes que se processam so as seguintes:
MnSO4 + NaOH Mn(OH)2 + K2SO4
Mn(OH)2 + O2 + 2 H2O 2 Mn(OH)4
3 Mn(OH)4 + 4 H3PO4 Mn3(PO4)4 + 12 H2O
6 Mn(PO4)4 + 6 KI Mn3(PO4) + 2 K3PO4 + 3 I2
4 Na2S2O3 + 2 I2 2 Na2S4O6 + 4 NaI

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Clculo do Oxignio dissolvido na gua

A partir do volume titulado, calcula-se a concentrao de oxignio dissolvido a partir da
seguinte frmula:

OD ( mg L1 )

VT ( mL) N 8 1000
vol. frasco 4

V A ( mL)
vol. frasco

Onde,
OD (mg L) a concentrao de Oxignio Dissolvido em mg L-1;
VT o volume de tiossulfato gasto na titulao;
N a normalidade da soluo de tiossulfato;
VA o volume de amostra usado na titulao.
Observao: todos os volumes, na frmula, so expressos em mL e corrigidos pelo fator 1000
para gerar a concentrao do oxignio em L.
A porcentagem de saturao de oxignio na gua depende da temperatura da gua e da
presso atmosfrica. Quanto menor a temperatura, maior a quantidade de oxignio dissolvido a
gua consegue reter. A relao entre porcentagem de saturao e presso atmosfrica tambm
inversamente proporcional saturao. Essas relaes entre saturao de oxignio com presso
atmosfrica e temperatura so tabeladas e existem ndices para o clculo da porcentagem de
saturao para cada temperatura e presso atmosfrica especficas (Tabelas 1 e 2).
Com o auxlio desses ndices, a seguinte frmula empregada para o clculo da
porcentagem de saturao do oxignio dissolvido:

% saturao

OD( mg L1 ) 100
S Px
760

onde:
OD a concentrao de oxignio dissolvido em mg L-1.
S = solubilidade do oxignio dependente da temperatura presso de 760 mmHg (Tabela 1), e
Px = presso atmosfrica do local de coleta (Tabela 2).

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Tabela 1. Solubilidade de O2 na gua em equlbrio com o ar presso de 760 mmHg e

100% de umidade relativa (de Montgomety, Thom e Cockburn, 1964, apud Golterman et al. 1969).
Temperatura
Temperatura
da amostra
Solubilidade da amostra Solubilidade
(C)
(mg/l)
(C)
(mg/l)
0
14,63
18
9,45
1
14,23
19
9,27
2
13,84
20
9,08
3
13,46
21
8,91
4
13,11
22
8,74
5
12,77
23
8,57
6
12,45
24
8,42
7
12,13
25
8,26
8
11,84
26
8,12
9
11,55
27
7,97
10
11,28
28
7,84
11
11,02
29
7,70
12
10,77
30
7,57
13
10,53
31
7,45
14
10,29
32
7,33
15
10,07
33
7,21
16
9,86
34
7,09
17
9,65
35
6,98
Tabela 2. Variao da presso atmosfrica mdia com a altitude (Dussart e Francis-Boeuf,
1949 apud Golterman et al. 1969).
Presso
Presso
Altitude
atmosfrica
Altitude
atmosfrica
(m)
mdia (mmHg)
Fator
(m)
mdia (mmHg)
Fator
0
760
1,00
1300
647
1,17
100
750
1,01
1400
639
1,19
200
741
1,03
1500
631
1,20
300
732
1,04
1600
623
1,22
400
723
1,05
1700
615
1,24
500
714
1,06
1800
608
1,25
600
705
1,08
1900
601
1,26
700
696
1,09
2000
594
1,28
800
687
1,11
2100
587
1,30
900
679
1,12
2200
580
1,31
1000
671
1,13
2300
573
1,33
1100
663
1,15
2400
566
1,34
1200
655
1,16
2500
560
1,36