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Polimorfismo de ADN
Podemos agrupar los tipos de polimorfismos del ADN en dos
categoras:
- polimorfismo de secuencia
- polimorfismo de tamao
El polimorfismo gentico hace
referencia a la existencia en una
poblacin de mltiples alelos de un gen.
Un polimorfismo es una variacin en la
secuencia de un lugar determinado del
ADN entre los individuos de una
poblacin.
Los polimorfismos son siempre
mutaciones que se presentan con una
frecuencia superior al 1%

Polimorfismos de tamao:
Se trata de secuencias de ADN distribuidas en miles de loci por
todo el genoma que se repite en un numero variable de veces.
VNTRs (variable number of tamdem repeats): aquellos que
poseen repeticiones en numero variable, arregladas en serie y
sin interrupcin a lo largo del cromosoma.

Teniendo en cuenta la alta variabilidad de estos sistemas

Jeffreys sostuvo que la probabilidad de encontrar dos individuos
con el mismo perfil multilocus de ADN, en el planeta era casi
nula por lo que se denomino al sistema el DNA fingerprinting o
huellas de ADN y lo propuso como una marca individual que
podra ser utilizado con fines de identificacin de personas.

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VNTR significa "nmero variable de repeticiones en tndem" (Variable Number

of Tandem Repeats)
Una repeticin en tndem es una secuencia corta de ADN que se repite consecutivamente
en un locus cromosmico especfico. Se encuentran repartidas por todo el genoma
humano. Para muchas de las repeticiones en tndem, el nmero de unidades repetidas
vara entre individuos. Un ejemplo de VNTR en humanos es una secuencia de ADN de 17 pb
que se repite entre 70 y 450 veces en el genoma. El nmero total de pares de bases en ese
locus puede as variar entre 1190 y 7650.
Se detectan por Southern blot y PCR
- los microsatlites, que presentan una unidad de repeticin pequea (1 a 8 nucletidos),
que en 76% de los casos son A, AC, AAAN y AG. Son altamente polimrficos, es decir,
presentan un gran nmero de alelos. Algunos de ellos parecen estar directamente
implicados en la etiologa de algunas enfermedades (este sera el caso de las expansiones
de trinucletidos),
- los minisatlites, presentan unidades de repeticin mayores (de 10 a 100 nucletidos).
Son menos polimrficos (presentan menos alelos) y tambin menos abundantes.
STR (short tandem repeat)
amplificacin de secuencias con pequeas repeticiones en tandem (2 a 4 n)

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Deteccin del polimorfismo

Polimorfismo de longitud de los fragmentos de DNA (RFLP)
son variaciones en la secuencia de DNA que afectan a la
secuencia de reconocimiento de una enzima de restriccin. Se
detectan por Southern blot y PCR
Polimorfismo del nmero de repeticiones de secuencias en
tandem (VNTR) son variaciones en la secuencia de DNA que
afectan al nmero de repeticiones de una secuencia.
Corresponden normalmente a los minisatlites y microsatlites.
Se detectan principalmente por PCR. Muy polimrfico.
Polimorfismo de un solo nucletido (SNP) son variaciones en la
secuencia de DNA de un par de bases.

Aplicaciones de los polimorfismos

Marcadores en el mapeo de genes

Diagnstico presintomtico y prenatal de enfermedades
hereditarias
Pruebas de paternidad
Medicina forense

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Polimorfismos de longitud de fragmentos de

restriccin
RFLP

RFLP
Los RFLP son marcadores genticos del ADN
La tcnica RFLP se usa como marcador para identificar grupos
particulares de personas con riesgo a contraer ciertas
enfermedades genticas, en ciencia forense y en pruebas de
paternidad.

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Deteccin por PCR:

1.Extraccin de ADN
2.Amplificacin con un par de primers especficos a la regin
flanqueante al sitio de restriccin polimorfico
3.Digestin con la Enzima de Restriccin apropiada
4.Separacin de los fragmentos por electroforesis, teido con
Gel Red
5.Anlisis de los resultados

RECORDAR:
Separacin electrofortica de cidos nucleicos

Los fragmentos grandes de ADN quedan retenidos en su migracin al pasar

con mayor dificultad a travs del poro. Los fragmentos ms pequeos
alcanzan el extremo final del gel, pasando con facilidad a travs de los poros

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Cul sera el perfil electrofortico para:

Homocigoto normal
Heterocigoto
Homocigoto enfermo

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Sonda dirigida a extremo 5`de fragmento de 1.2 kb

Cul sera el perfil detectado por Southern para:

Homocigoto normal
Heterocigoto
Homocigoto enfermo

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RFLP
Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP): polimorfismo de la longitud
de fragmentos de restriccin
ejemplo: en el alelo 2, el sitio rojo ha mutado, y el fragmento "a" obtenido por
restriccin desaparece, forma parte de un segmento ms grande de ADN, el
fragmento "b".

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Anlisis por hibridizacin con sondas de RFLP

- se trata con enzimas de restriccin especficas
- los fragmentos de restriccin se separan mediante
electroforesis en geles de agarosa
- las bandas son transferidas por Southern Blot
- se hibridan con una sonda que permite determinar la longitud
y la separacin de los fragmentos
Suponiendo que este sitio de restriccin se encuentra en un
cromosoma especfico lo va a cortar formando dos
fragmentos de ADN. Si una persona tiene una mutacin en el
sitio reconocido por la enzima no va a poder cortar y solo
habr un fragmento.
Si una persona tiene una mutacin en el sitio reconocido por la
enzima no va a poder cortar y solo habr un fragmento

La tcnica de Southern Blot

1.
2.
3.
4.
5.

Cortar DNA con ER

Separar los fragmentos por electroforesis en geles de agarosa
Transferir los fragmentos a una membrana de nitrocelulosa
Hibridar los fragmentos con una sonda marcada
Detectar los fragmentos por el marcaje de la sonda

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Polimorfismos del tamao de los fragmentos de restriccin (RFLP)

SNPs

Esta secuencia de ADN polimrfica presenta dos alelos

Los distintos fragmentos obtenidos tras el corte con la enzima de restriccin

pueden ser separados mediante electroforesis en geles de agarosa y
posteriormente detectados utilizando una sonda especifica de la secuencia
polimrfica.
La sonda utilizada debe reconocer la secuencia donde se encuentra el sitio de
restriccin

Resultado del anlisis electrofortico:

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Aplicaciones
- El anlisis de la variacin de RFLP en genomas ha sido una herramienta
fundamental en el mapeo genmico y el anlisis de enfermedades
genticas
- El anlisis RFLP fue tambin la base de las modernas tcnicas de anlisis de
huellas genticas (Genetic Fingerprinting) tiles en la identificacin de
muestras recuperadas de la escena de un crimen, en pruebas de
paternidad, y en el estudio de la biodiversidad en poblaciones
- Cuando un RFLP normalmente se asocia con una enfermedad de origen
gentico, la presencia o ausencia de ste puede usarse a modo de consejo
sobre el riesgo de desarrollar o transmitir la enfermedad.
- Algunas personas sern homocigotos y presentarn una nica banda, otros (
ej, todos los miembros de la familia mostrados abajo) sern heterocigotos
y presentarn una banda distinta por cada alelo.

Southern blot

+ ER

1. Cortar DNA con ER

2. Separar los fragmentos por
electroforesis
3-4. Transferir los fragmentos a una
membrana
5. Hibridar los fragmentos con una
sonda marcada
6. Detectar los fragmentos por el
marcaje de la sonda
RFLP

genotipos

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VNTR

El nmero variable de repeticiones en tndem (Variable Number of Tandem

Repeats) o VNTR (minisatlites) son repeticiones de secuencias de 9 a 100
pares de bases que se utilizan como marcador molecular. El nmero de
repeticiones es variable pero en general es menor a 1000.

pb
2000
1400
800
400

Variaciones de la longitud del alelo VNTR en seis individuos

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La deteccin de los VNTR se puede realizar por hibridacin del ADN

o por tcnicas de PCR
En el primer caso, el ADN genmico es digerido con enzimas de
restriccin que reconocen sitios adyacentes a la regin repetida.
La diferencia bsica entre RFLP y VNTR reside en el tipo de sonda
utilizada.
En la tcnica de VNTR las sondas estn constituidas por secuencias
homlogas a las secuencias repetidas de los minisatlites, por lo
tanto todos los loci hipervariables del genoma son detectados
simultneamente, mientras que en los RFLP, las sondas son
homlogas a secuencias nicas del genoma, por lo que se detectan
uno o pocos loci cada vez. De esta manera, en el autorradiograma
no se obtiene un patrn simple de bandas como en el caso de los
RFLP, sino un perfil complejo de bandas mltiples.
En la tcnica de PCR se utilizan partidores que flanqueen los VNTR

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DNA fingerprinting

Analisis VNTR

Sitio de
restriccin

Repeticiones en tandem
(Tandem Repeats)

Sitio de
restriccin

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En esta figura, slo se ilustran tres variantes diferentes (alelos) para el locus VNTR,
pero es habitual en los loci VNTR humanos encontrar 50 o ms alelos distintos.

Para tres alelos diferentes, designados A, B y C, son posibles seis perfiles distintos
de ADN.

Los genotipos posibles son AA, BB, CC, AB, BC y AC,

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Cuando se comparan los perfiles de un solo locus VNTR para

individuos no relacionados entre s, habitualmente son
diferentes. No obstante, es posible que dos personas tengan
el mismo perfil en uno o dos loci por casualidad. Sin
embargo, la probabilidad de que dos personas tengan el
mismo perfil de ADN en 4, 5 o 6 loci VNTR diferentes es
extremadamente baja. Cuando se usan los perfiles de ADN
con fines medico-legales, se analizan de 4 a 6 o mas loci VNTR
diferentes.
Corte con ER
Southern

Huella Gentica

Sir Alec Jeffreys

La identificacin con ADN o huella gentica se basa en el estudio de una serie de
fragmentos de ADN presentes en todos los individuos pero que poseen la caracterstica
de ser altamente variables o polimrficos entre los mismos
Adems de ser muy polimrfico, el ADN que se utiliza para la identificacin en Gentica
Forense es un ADN no codificante o no expresivo, por lo que no revela caractersticas
fenotpicas de los individuos;

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La huella gentica (fingerprint) es una tcnica que se utiliza para distinguir entre
los individuos de una misma especie utilizando muestras de su ADN. La tcnica
se basa en que dos seres humanos tienen una gran parte de su secuencia de
ADN en comn y para distinguir a dos individuos se puede explotar la repeticin
de secuencias altamente variables llamadas VNTR. Dos seres humanos no
relacionados ser poco probable que tengan el mismo nmero de mini o
microsatlites en un determinado locus. La tcnica de PCR se utiliza para
obtener suficiente ADN que permita detectar el nmero de repeticiones en
varios loci.
La huella gentica se utiliza en la medicina forense para identificar a los
sospechosos con muestras de sangre, cabello, saliva o semen tambin en la
identificacin de los restos humanos y en las pruebas de paternidad.
Los microsatlites muestran una mayor variacin que el resto del genoma ya que
en ellos se encuentran unas secuencias en distinta repeticin y con diferente
grado de recombinacin

VNTRs, or minisatellites contain repeating clusters of 10-100 nucleotides that are variable between
individuals, and may produce different restriction fragments.
Even though one band (B2) is shared between 2 individuals in this RFLP analysis of many VNTR markers
(this example shows just 2 markers) can serve as a DNA fingerprint to identify individuals.
Relatively large sample of DNA (10,000 cells) is required for VNTR analysis, so this technoloqie is more
useful in paternity testing than in criminal cases.

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El ADN de cada persona

proviene, mitad de su padre y
mitad de su madre.
Cada persona tiene dos alelos
para cada locus (Marcador), uno
en la regin D5S818 del
cromosoma de la madre y otro en
esa misma regin pero del
cromosoma del padre.

La informacin gentica proviene

la mitad del padre y la otra mitad
de la madre. Los caracteres se
expresan
en
las
nuevas
generaciones segn el Principio
de Segregacin
Conceptos de:
Alelo, dominancia y recesividad

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CIENCIA FORENSE y PATERNIDAD

Secuencias hipervariables de microsatlites llamadas VNTR (variable number

of tandem repeat) sirven para determinar paternidad.

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CIENCIA FORENSE y PATERNIDAD

B es hijo
Quin es el padre?
Construya el perfil de la madre

Marker
Suspect A
Semen (clothing)
Suspect B
Marker
Vaginal swab
Victim
Control DNA
Marker
No DNA

Quin es el violador?

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Aplicaciones de los polimorfismos en la Medicina forense

identificacin de individuos
Se analizan diferentes VNTR o STR, lo que
da un perfil de bandas para cada individuo
Cada alelo tiene una frecuencia
La frecuencia del perfil ser el producto de
dichas frecuencias

DEFINICION DE GENETICA FORENSE

Rama de la gentica humana aplicada a la solucin de
problemas sociales y legales, cuyos objetivos son:
Identificacin genotpica de los individuos, que se basa en
la estructura gentica individual nica y no repetida de cada
persona.

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La informacin gentica proviene la mitad del

padre y la otra mitad de la madre Los
caracteres se expresan en las nuevas
generaciones segn el Principio de Segregacin
Conceptos de: Alelo, dominancia y recesividad

Anlisis del cromosoma Y

Se han creado cebadores especficos para regiones del cromosoma Y que
amplifican secuencias solo heredadas por parte paterna. Por ello, este tipo
de anlisis slo sirve para comparar familiares por parte del padre y
varones.
Anlisis mitocondrial
Se usa en muestras muy degradadas, ya que el DNA mitocondrial posee
ms copias que el nuclear. Se amplifican las regiones HV1 y HV2 y se
comparan siempre con familiares por parte materna ya que las
mitocondrias son herencia exclusiva de la madre. Los cientficos forenses
amplan la regin HV1 y HV2 del ADNmt y luego cada regin es secuenciada
en un nico nucletido y se compara las diferencias con la referencia.

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GENOTIPO
El ADN de cada persona
proviene, mitad de su padre y
mitad de su madre.
Cada persona tiene dos
alelos para cada locus
(Marcador), uno en la regin
D5S818 del cromosoma de la
madre y otro en esa misma
regin pero del cromosoma
del padre.

El sistema CODIS (Combined DNA Index System)

El FBI ha sido un lder en el desarrollo de tecnologa de tipificacin de ADN para

su uso en la identificacin de autores de delitos violentos.
En 1997, el FBI anunci la seleccin de 13 loci STR que formaran el ncleo central
de la base de datos nacional de los EE.UU., llamada CODIS.
Todos los STR del CODIS son secuencias repetitivas tetramricas.
Todos los laboratorios forenses o criminalsticos que usan el sistema CODIS
pueden contribuir a una base de datos nacional.
Los analistas de ADN pueden tambin buscar coincidencias entre el perfil de ADN
de pruebas obtenidas en la escena de un crimen y los perfiles de ADN ya
disponibles en la base de datos.

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MICROSATLITES MS UTILIZADOS COMO

MARCADORES GENTICOS
SISTEMA O LOCUS

UNIDAD REPETIDA

LOCALIZACIN
CROMOSMICA

FGA

(TTTC) n

4q28

TPOX

(AATG) n

2p23-pter

ACPP

(AAAT) n

3q21-qter

F13B

AAAT

Iq31-q32.1

CSF1PO

(AGAT) n

5q 33.3-q34

F13A1

(AAAT) n

6p24-p25

LPL

(AAA) n

8p22

THO1

(AATG) n

11p 15.5

D16S539

AGAT

16q24-qter

D3S1744

AGTT

3q24

VWA

(AGAT) n

12q 13.3-q13.2

D12S1090

(TAAT) n

12q 12

FPS

(AAAT) n

15q25-ter

Chromosomal locations of the 13 VNTR loci in the CODIS panel

CODIS (Combines DNA Information System).

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The designations D3, vWA and FGA represent three different chromosomal
locations (STRs) under analysis

Anlisis del cromosoma Y

Se han creado cebadores especficos para regiones del cromosoma Y que amplifican
secuencias solo heredadas por parte paterna. Por ello, este tipo de anlisis slo sirve
para comparar familiares por parte del padre y varones.

Anlisis mitocondrial
Se usa en muestras muy degradadas, ya que el DNA
mitocondrial posee ms copias que el nuclear. Se
amplifican las regiones HV1 y HV2 y se comparan
siempre con familiares por parte materna ya que las
mitocondrias son herencia exclusiva de la madre. Los
cientficos forenses amplan la regin HV1 y HV2 del
ADNmt y luego cada regin es secuenciada en un
nico nucletido y se compara las diferencias con la
referencia. Hay un fragmento en este genoma de
400pb altamente polimrfico
En el tejido seo, los dientes y el pelo se encuentran a menudo unas cantidades de
ADN nuclear tan pequeas que no se puede obtener un perfil de STR.

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