1.

PRCTICA N01 ESPECTROFOTOMETRA INTRODUCIN

La espectrofotometra puede definirse como la medida de la atenuacin que la muestra efecta sobre una
radicacin incidente sobre el mismo con un espectro definido. En general, las medidas se realizan dentro
del espectro comprendido entre 220 y 800nm, y este espectro, a su vez, puede dividirse en dos amplias
zonas: la zona de la radiacin visible, situada por encima de 380nm, y la zona de la radiacin ultravioleta
situada por debajo de estos 380nm. La regin del infrarrojo se sita por encima de los 800nm. La
espectrofotometra tambin se puede definir como la medicin de la cantidad de energa radiante que
absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la longitud de onda; es el mtodo de anlisis ptico
ms usado en las investigaciones qumicas y bioqumicas. El espectrofotmetro es un instrumento que
permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. La teora
ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energa llamados
fotones; la luz de una cierta longitud de onda est asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee
una cantidad definida de energa. En esta prctica se tiene como objetivo el conocer cmo usar el
espectrofotmetro y como utilizar los datos que este arroja. El anlisis cuantitativo por espectroscopia de
absorcin mide la absorbancia de una sustancia a varias longitudes de onda crecientes. Despus al graficar
el dato de absorbancia contra el de concentracin se obtuvo una curva que recibe el nombre de grfica de
la ley de Beer y Lambert.
2. OBJETIVOS
Obtener el coeficiente de absorbancia de la sustancia problema Determinar la longitud de onda adecuada
y los niveles de concentracin para el anlisis cuantitativo por espectrometra.
MATERIALES - Tubos de ensayos - Solucin de (K2CrO4), (Cu2SO4) y (KMNO4) - Agua destilada Espectrofotmetro
MARCO TERICO La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la
concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas que absorben las radiaciones
electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida dependen de forma lineal de la
concentracin. Adems es usada para identificar compuestos por su espectro de absorcin y conocer la
concentracin de un material o sustancia, esto ltimo permite, seguir el curso de reacciones qumicas y
enzimticas as como determinar enzimas y protenas incluso cidos nucleicos. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotmetro, como ya sabemos es un equipo de laboratorio que mide la
cantidad de luz que pasa por

3. medio de una longitud de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un medio es
proporcional a la concentracin del soluto presente, es entonces as que la concentracin de un soluto
colorido en solucin puede ser determinada en el laboratorio mediante la medicin de su absorcin de
luz a una longitud de onda especfica. Las muestras en estos equipos se utilizan en estado lquido y se
colocan en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes tamaos y
materiales. En espectroscopia el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de radiacin
electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En espectrofotometra de
absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400nm) y el visible (400780nm). La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400nm. Es una regin
de energa muy alta. En la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que corresponde
a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el
complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones de absorcin es necesario
utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solucin coloreada. La fuente de radiacin visible
suele ser una lmpara de tungsteno y no proporciona suficiente energa por debajo de 320nm. La
transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la cantidad de luz transmitida que
llega al detector una vez que ha atravesado la muestra y l a absorbancia (A) es un concepto ms
relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma.

4. Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de longitud de onda fija) y concentracin
de un cromforo en solucin: A = log I/Io = cl La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a
su concentracin a mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz con ellas-; tambin depende de la
distancia que recorre la luz por la solucin a igual concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la
muestra ms molculas se encontrar; y por ltimo, depende de , una constante de proporcionalidad
-denominada coeficiente de extincin- que es especfica de cada cromforo PROCEDIMIENTO Agregar a cada
tubo de ensayo la cantidad de reactivo indicado.

5. Tenemos los tubos numerados y solos con el reactivo a utilizar. Agregamos agua destilada para
igualar la cantidad en cada solucin Llevamos cada grupo de soluciones al espectrofotmetro para
determinar su absorbancia Anotamos los datos obtenidos para posteriormente realizar los grficos
correspondientes
6. RESULTADOS Tubos I II III IV V KMNO4 0 1 2 3 4 (0.015%) Agua Destilada 4 3 2 1 0 Mezclar - Leer
a 475 nm Concentracin 0 150 300 450 600 Absorbancia 0 0.189 0.385 0.577 0.746 C= fc * Do CuSO4
(10%) Concentracin 0 100 200 300 400 Absorbancia 0 0.094 0.176 0.272 0.351 KCrO2 (0.1%)
Concentracin 0 1 2 3 4 Absorbancia 0 0.066 0.15 0.228 0.317

7. GRFICOS KMNO4 (0.015%) y = 0.0013x + 0.0034 R = 0.9994 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0
100 200 300 400 500 600 700 Absorbancia Linear (Absorbancia)

8. CuSO4 (10%) y = 0.0009x + 0.0026 R = 0.9991 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 50 100 150
200 250 300 350 400 450 Absorbancia Linear (Absorbancia)

9. KCrO2 (0.1%) y = 0.0796x - 0.007 R = 0.9977 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 -0.05 0 0.5 1 1.5 2
2.5 3 3.5 4 4.5 Absorbancia Linear (Absorbancia)

10. CUESTIONARIO 1. Cul crees que es el mtodo ms exacto para obtener la concentracin de una
muestra problema, el grfico o el analtico? Por qu? El analtico, ya que es un instrumento
especializado para el anlisis qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la
relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a radiaciones y la concentracin o
reacciones qumicas que se miden en una muestra. 2. Qu factores alteran la ley de LAMBERT y
BEER? La ley de Beer-Lambert slo se cumple para concentraciones bajas, a partir de una
concentracin 0,01M empieza a haber desviaciones de la linearidad. Adems, si la radiacin utilizada no
es monocromtica, tambin puede haber errores. La existencia de otros equilibios qumicos en
disolucin, como cido-base, de precipitacin, de formacin de complejos, aunque no modifican la ley
en s misma, s que pueden modificar la concentracin de la sustancia que estamos midiendo, y puede
producir un error en el resultado. 3. Existe otro mtodo de ajuste de curvas? - Rectas de Regresin en
mnimos cuadrados - El ajuste potencial y=AxM - El ajuste exponencial y= CeAx - Combinaciones
lineales en mnimos cuadrados

11. 4. Cul es el objetivo de utilizar el mtodo de los mnimos cuadrados? Mnimos cuadrados es una
tcnica de anlisis numrico enmarcada dentro de la optimizacin matemtica, en la que, dados un
conjunto de pares ordenados: variable independiente, variable dependiente, y una familia de funciones,
se intenta encontrar la funcin continua, dentro de dicha familia, que mejor se aproxime a los datos (un
"mejor ajuste"), de acuerdo con el criterio de mnimo error cuadrtico. 5. Mencione aplicaciones de la
prctica en el campo de su especialidad La aplicacin de diversos mtodos matemticos al clculo de
concentraciones y otras propiedades a partir de datos instrumentales se conoce como quimiometra y es
un rea de intensa actividad, sus aplicaciones en la agroindustria son para procesos qumicos y/o
fsicos, y en estudios ambientales en general como por ejemplo la prediccin de propiedades de
carbones minerales a partir de datos del infrarrojo medio, con el objetivo de desarrollar mtodos de
anlisis rpidos y no destructivos para estos materiales. Otro ejemplo sera cuando un ingeniero
agroindustrial de una embotelladora est analizando la entrega de producto y el servicio requerido por
un operador de ruta para surtir y dar mantenimiento a mquinas dispensadoras. El ingeniero visita x
locales al azar con mquinas dispensadoras, observando el tiempo de entrega en minutos y el volumen
de producto surtido en cada uno. Las observaciones se grafican en un diagrama de dispersin (no todos
los puntos estn contenidos en una recta), donde claramente se observa que hay una relacin entre el
tiempo de entrega y el volumen surtido; los puntos casi se encuentran sobre una lnea recta, con un
pequeo error de ajuste, para lo cual aplicaremos el mtodo de los mnimos cuadrados.

12. CONCLUSIONES Y DISCUSIONES

1. Debido a que no fuimos muy exactos, utilizamos el mtodo de mnimos cuadrados para poder ajustar
la recta de la absorbancia. 2. Se identific que el equipo presenta una adecuada precisin y exactitud
determinando que las mediciones realizadas en este pueden ser confiables. 3. El conocer el adecuado
uso del espectrofotmetro permiti obtener en el laboratorio resultados con alta calidad analtica en las
mediciones que son emitidas por ste. 4. Se determin la longitud de onda ptima a las tres soluciones
coloreadas teniendo como resultados las siguientes: solucin amarilla 625 nm, para solucin de color
celeste 600, y para la solucin de color fucsia una longitud de onda de 475nm, concluyendo que los

datos obtenidos experimentalmente, se encuentran dentro de los datos tericos. BIBLIOGRAFA 1.

Walton y Reyes. 1978. Anlisis qumico e instrumental moderno. Editorial Reverte S.A. Espaa. 2.
Borfost R. y Scholz, M.1964. Spektroskopische Methoden in der organischen. Chemie. Berlin. 3.
Snchez, D.1995. instrumentacin en Bioqumica. Consejo nacional de Ciencia y Tecnologia
(CONCYTEC).
Lima.
LINKOGRAFA
1.
http://www.academia.edu/4264776/FOTOCOLORIMETRIA_carlos_lavarez
2.
http://www.slideshare.net/kelycaterine/espectrofotometro-28574184