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Autores:
Carlos Garca
Sebastin Merino
Alondra Vjar
Gustavo Gmez Barbieri
Licenciatura Medicina, Escuela de Medicina, Facultad de Ciencias
El FISH es una tcnica de caracterizacin citogentica que se utiliza para demarcar los
cromosomas y determinar las alteraciones en el cariotipo que no pueden ser determinadas por
las tcnicas de marcaje bandeo de Giemsa tradicionales, con el fin de determinar aneuploidas
y aberraciones coromosmicas, constituyendo un cariotipo molecular. Para ello efectuar un
FISH es necesaria una sonda de ADN y una secuencia diana.
Durante su implementacin antes de la hibridacin, la sonda de ADN est demarcada por
diversos medios, como el marcaje de un cebador en forma aleatoria, y PCR. Dos estrategias de
etiquetado son comnmente utilizados: marcaje indirecto (panel izquierdo) y el marcaje directo
(panel derecho). Para el marcaje indirecto, las sondas se marcan con nucletidos modificados
que contienen un antgeno que luego se reconoce mediante un anticuerpo marcado, mientras
que el marcaje directo utiliza nucletidos que han sido modificados directamente para contener
un fluorforo. (c) La sonda marcada y el ADN diana se desnaturalizan. (d) combinar la sonda
desnaturalizada y diana permite la hibridacin de secuencias de ADN complementarias. (e) Si
la sonda ha sido etiquetado indirectamente, se requiere un paso adicional para la visualizacin
del anticuerpo no fluorescente que utiliza un sistema de deteccin enzimtica o inmunolgica.
Considerando que el sondaje es ms rpido con sondas marcadas directamente, el marcaje
indirecto ofrece la ventaja de amplificacin de la seal mediante el uso de varias capas de
anticuerpos, y por lo tanto podra producir una seal que es ms brillante en comparacin con
los niveles de fondo.
Referencias
(1)
(2) Speicher, M. R. et al. The new cytogenetics: blurring the boundaries with molecular biology. Nature Reviews
Genetics 6, 784 (2005).
(3)
Speicher, M. R., & Carter, N. P. The new cytogenetics: Blurring the boundaries
with molecular biology. Nature Reviews Genetics 6, 782792 (2005)
doi:10.1038/nrg1692