Productos acadmicos y ponderacin de la actividad colaborativa

Al desarrollar el siguiente cuestionario notamos que:

3.1. Que tipos de tecnologas son mostrados en el artculo?

Uno de los Procedimientos Publicados previamente para la diferencia de la

Purificacin de la invertasa externa.
Una Etapa de Diseado se Aplic Sobre QAE- Sephadex
Que permiti la Separacin de las Cuatro iso formas

Cromatografa de intercambio inico

Cromatografa de gel
Electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE)
El enfoque isoelctrico

3.2. Segn su criterio las polticas o tecnologas descritas en los artculos.

Cmo pueden ser aplicadas o implementadas, en el contexto nacional
colombiano?
Estos avances en el contexto colombiano son importante, y son utilizadas para la
el mejoramiento y avance del planeta en cuanto a la mejora de las propiedades y
caractersticas de los alimentos.
La creciente poblacin mundial, el mercado y la industria han incurrido a que cada
vez se piense ms en alimentos sanos y en cantidad suficiente para todos; esta es
una de las razones por las que creo que este tipo de tecnologas utilizadas, sirven
y se aplican para ser de apoyo en el estudio por ejemplo de fermentaciones de
alimentos, control biolgico) ingeniera gentica), los anticuerpos monoclonales y
los nuevos mtodos de cultivo de clulas y tejidos etc.
3.3. Especifique la relacin directa existente entre los temas tratados y la
biotecnologa Alimentaria.
Estos temas estn relacionados, por medio de la biotecnologa alimentaria es que
se pueden logran Un conjunto de innovaciones tecnolgicas que se basa en la
utilizacin de microorganismos y procesos microbiolgicos para la obtencin de
bienes y servicios y para el desarrollo de actividades cientficas de investigacin.
Ya que la biotecnologa no es nueva, pero podemos evidenciar que desde los
grandes descubrimientos de Pasteur y muchos ms cientficos que aportaron a la
ciencia, nacieron las bases de la biotecnologa que poco a poco se ha ganado su
posicin y que ser la herramienta para la alimentacin del futuro.

3.4. Como se realiza la determinacin de actividad enzimtica de la enzima

del artculo elegido.
Determinacin de la constante cintica
Se determin la constante de Michaelis-Menten (Km) para la sacarosa usando las
condiciones descritas del ensayo y la invertasa una concentracin de sacarosa en
el intervalo de 2,5 a 300 mM. El Km se calcul utilizando la transformacin de
Lineweaver-Burk de Ecuacin de Michaelis-Menten.
3.5. Explique la metodologa para la determinacin de la actividad enzimtica
de las siguientes protenas:
a. Glucosa Ismeras.
b. Peptinasa.
c. Proteasa.
a. Glucosa Ismeras:
Esta enzima se halla incluida en el grupo de las aldosacetosa ismeras, que
catalizan la inter conversin de los azcares isomtricos aldo y ceto mediante la
migracin de un enlace carbono-hidrgeno entre los carbonos 1 y 2. Estas
enzimas pueden clasificarse en dos grupos de acuerdo con su accin sobre
monosacridos libres o fosforilados. Las que actan sobre los azcares libres
estn presentes principalmente en los microorganismos, mientras algunas de la
que actan sobre substratos fosforilados son comunes a todos los organismos
vivientes y entre ellas se encuentra la GPI.
b. Pectinasas.
Las pectinasas son un conjunto de enzimas capaces de hidrolizar a la pectina, la
cual es un polisacrido formado principalmente por unidades de cido Dgalacturnico, que puede estar o no metilado.
Las pectinasas son un grupo de enzimas de diversos tipos encargadas de
degradar a la pectina hasta sus compuestos monomricos elementales. Las
actividades enzimticas que actan sobre la cadena principal de la pectina
comprenden a las hidrolasas, que actan sobre los enlaces -1,4-glicosdicos.
Existen diversas aplicaciones industriales de las enzimas pectinasas una de ellas,
en el procesamiento de jugos de frutas en el cual el producto obtenido
generalmente es viscoso, debido a la pectina disuelta, y turbio por los fragmentos
de paredes celulares en suspensin. Cuando se agregan pectinasas, la viscosidad
disminuye y las partculas pueden eliminarse fcilmente, centrifugando el lquido o
filtrndolo.

d. Amilasa.
La alfa-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y
cataliza la degradacin del almidn, que es un polisacrido de reserva vegetal. El
almidn est formado por dos tipos de molculas: la amilosa y la amilopectina,
ambos polisacridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de
glucosas unidas por enlaces?- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene, adems
de estos ltimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La?amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina,
dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacridos) como productos.
Para medir la actividad enzimtica de la alfa-amilasa, se utilizar un test
colorimtrico que detecta el almidn. Para ello se contar con una solucin de
iodo/ioduro de potasio (I2/IK), ya que el almidn en presencia de esta solucin
adquiere una coloracin azulada caracterstica.
3.6. Uno de los mtodos ms utilizados para el rompimiento celular es la
sonicacin, describa y explique el fundamento fsico de esta tcnica.
La sonicacin es el acto de aplicacin de la energa del sonido (generalmente
ultrasonidos) para agitar las partculas de una muestra, con diversos fines
cientficos o industriales.
Una corriente elctrica transmite su energa a un sistema mecnico que la
convertir en vibraciones de alta intensidad que generan ondas de ultrasonido.
Los ultrasonidos generan, a su vez, vibraciones en el material objetivo.
3.7. Determine la sensibilidad de dos mtodos de determinacin de
protenas, junto con las tinciones de comassie y nitrato de plata.
Cuantificacin de protenas y sus rangos de sensibilidad

3.8. Si se tiene 65 ml de extracto enzimtico para realizar una purificacin

para llevarla a una saturacin del 30%, y de protenas, cunto sulfato de
amonio hay que adicionarle a dicha solucin cuanto hay que adicionarle de
ms para llevarla al 50%

3.9. Defina y explique el fundamento de las siguientes cromatografas:

a. Cromatografa preparativa.
La cromatografa preparativa comprende un amplio campo de aplicaciones, desde
el aislamiento de 1 g. de muestra para identificacin espectroscpica hasta el
aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g. La cromatografa
preparativa se diferencia de la tcnica bsica en muchos aspectos, desde la
preparacin de la papilla. sta debe hacerse con menos agua que de ordinario.
Una papilla ms espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa
para una carga de mayor magnitud. El espesor ptimo oscila desde un mnimo de
1 mm. Hasta un mximo de 2 mm.
b. Cromatografa exclusin por tamao
Cromatografa de exclusin por tamao es un mtodo cromatogrfico en el que las
molculas en solucin se separan por su tamao, y en algunos casos de peso
molecular. Por lo general, se aplica a las grandes molculas o complejos
macromoleculares, tales como protenas y polmeros industriales. Tpicamente,
cuando se utiliza una solucin acuosa para el transporte de la muestra a travs de
la columna, la tcnica es conocida como cromatografa de filtracin en gel, en
comparacin con la cromatografa de permeacin en gel de nombre, que se utiliza
cuando se utiliza un disolvente orgnico como fase mvil.
c. Cromatografa de intercambio inico
La cromatografa de intercambio inico (o cromatografa inica) es un
proceso que permite la separacin de iones y molculas polares basado en las
propiedades de carga de las molculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de
molcula cargada, incluyendo grandes protenas, pequeos nucletidos y
aminocidos. La solucin que debe inyectarse es usualmente llamada "muestra" y
los componentes separados individualmente son llamados analitos. Es usada a
menudo en purificacin de protenas, anlisis de agua o control de calidad.
d. Cromatografa de intercambio catinico
Retiene cationes cargados positivamente debido a que la fase estacionaria
muestra un grupo funcional cargado negativamente, como un fosfrico.

e. Cromatografa de fase reversa

La cromatografa en fase reversa (RPC) permite separar molculas en base a su
polaridad. El principio de la cromatografa en fase reversa es semejante al de la
cromatografa en capa fina. Sin embargo, aqu la fase estacionaria es de
partculas de slica qumicamente modificadas con hidrocarburos saturados,
insaturados o aromticos de diferentes tipos. Esto convierte a la fase estacionaria
en una matrz apolar. Por lo tanto, para este tipo de cromatografas se emplean
mezclas de solventes polares, tales como agua, acetonitrilo, acetato de etilo,
acetona y alcoholes alifticos.

3.10. Como se calcula el factor de purificacin de una enzima y el

rendimiento de esta, cul es su significado prctico.
El significado de estos permiten cuantificar y comparar los diversos mtodos de
purificacin, determinar la actividad, calidad y costos, adems poder permitir
aislar un slo tipo de enzima de una mezcla compleja. El factor de purificacin
expresa cuntas veces ha sido purificada una protena en relacin con el control
inicial presenta su valor mximo en la fraccin.
Se trata de comparar el paso con el extracto crudo. El parmetro a comparar es la
actividad total, de modo que efectuamos un clculo de tanto por ciento haciendo
que la actividad total del extracto crudo sea el 100%.
3.11. Cules son los mtodos de concentracin de protenas escala
laboratorio ms utilizados y cul es su fundamento fsico.
Mtodo de Bradford: (Bradford, M. Anal. Biochem., 72:248, 1976), el mismo est
basado en el cambio de color del colorante Coomassie brilliant blue G-250 en
respuesta a diferentes concentraciones de protenas. Este compuesto interacciona
con aminocidos bsicos (especialmente arginina) y aromticos. Esta unin del
colorante con las protenas provoca un cambio en el mximo de absorcin del
colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, este mtodo se basa en la propiedad
del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores
diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul cuando el colorante se
une a la protena. Experimentalmente se mide la diferencia de Absorbancias entre
595 y 465 nm (595-465nm).
Mtodo de Lowry: (1951) es un mtodo colorimtrico de valoracin cuantitativa de
las protenas.
Bajo condiciones alcalinas el Cu++ forma un complejo con los enlaces peptdicos
de las protenas y se reduce a Cu +. El Cu+ as como los grupos R de Tirosina,

Triptofano y Cisteina reaccionan con el reactivo de Folin. Este reactivo reacciona

primero produciendo un producto inestable que se reduce lentamente a azul de
molibdeno/tungsteno esta reaccin ocurre en medio cido.
MTODO DE BRADFORD
Preparacin del colorante
Azul Brillante de Coomasie G-250 (100mg) es disuelto en 50 ml de etanol 95%. A
esta disolucin se le aade 100ml de cido fosfrico 85% p/v. La solucin
resultante se diluye llevndola hasta un litro de volumen final. La concentracin en
la disolucin final es 0,01% p/v de azul, 4,7% p/v de etanol y 8,5 % p/v de cido
fosfrico.
Solucin stock de BSA
Se utilizar la misma que en el Mtodo de Lowry.
3.12. Describa una metodologa para determinar el nmero de subunidades
de un enzima alostrica purificada.
Cuando se ha identificado
inmediatamente dos preguntas:

purificado

una

nueva

protena,

surgen

1. Existe la protena en condiciones fisiolgicas como una cadena

polipeptdica nica o est formada por mltiples subunidades (multmero)?
2. Si la protena funcional tiene ms de una subunidad, son las subunidades
idnticas o las hay de varios tipos?

Determinacin del nmero y peso aproximado de las subunidades: electroforesis

en gel con SDS
Una vez se ha determinado el peso molecular nativo de la protena, mediante la
tcnica del equilibrio de sedimentacin, la manera ms fcil de averiguar el peso o
pesos moleculares de las subunidades consiste en utilizar la electroforesis en gel
en presencia de SDS.
En estas condiciones, en presencia del SDS, la estructura secundaria, terciaria y
cuaternaria de las protenas se descomponen todas. La cadena se despliega y se
rodea de molculas SDS. Las numerosas cargas negativas transportadas por las
muchas molculas de SDS unidas a la protena hacen que la carga que transporta

la protena sea insignificante, quedando la protena cargada negativamente. La

cadena polipeptdica plegada se transforma en un objeto alargado, cuya carga es
proporcional a la longitud (y por tanto, al peso molecular) de la cadena. As pues,
no hay ninguna protena carada positivamente despus de pasar por un bao en
SDS, y adems la cantidad de carga negativa ser independiente de la secuencia
de aminocidos, ya que nicamente depender de la longitud de la protena.
Estas partculas (protenas cargadas negativamente por efecto del SDS) migrarn
en la electroforesis en gel con movilidades relativas, que dependen nicamente de
sus longitudes. Entonces, si la electroforesis de la cadena proteica desconocida se
lleva a cabo en el mismo gel que un conjunto de estndares de referencia, el peso
molecular de la cadena desconocida puede medirse por interpolacin en un
grfico. De esta manera conseguimos que las protenas se separen por peso
molecular gracias al efecto de un campo elctrico que las separa por su cantidad
de carga, pero como la carga depende nicamente de la longitud y el peso
molecular de la protena, stas quedan separadas segn su peso molecular

3.13. Explique el dogma central de la biologa molecular y como este se

relaciona con la enzima del artculo.
El dogma central de la biologa molecular es un concepto que ilustra los
mecanismos de transmisin y expresin de la herencia gentica tras el
descubrimiento de la codificacin de sta en la doble hlice del ADN.
La forma en que se relaciona este dogma de la biologa molecular con la enzima
del articulo escogido es principalmente conocer la levadura, y sabemos de qu es
una clula eucariota y que su ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LOS ACIDOS
NUCLEICOS, Y PROTEINAS IMPLICADAS EN DICHOS PROCESOS, La
recombinacin de ADN en levadura son muy estudiados por la biologa
molecular ,debido a su gran utilizacin industrial, ms que todo el mbito
alimenticio..
La levadura es un sistema modelo en Biologa Molecular
3.14. Explique por qu al realizar una mutacin en el gen del enzima, esto
puede conllevar a un aumento en la actividad.
Las enzimas tienen una estructura tridimensional sin la que no pueden desarrollar
su actividad. En esa estructura poseen el centro activo al que se unen los
sustratos y en el que se produce la reaccin cataltica. Cuando el sustrato accede
al centro activo, se produce un cambio en la estructura del conjunto enzimasustrato pero una vez finalizada la catalizacin (catlisis: transformacin qumica
motivada por sustancias que no se alteran en el curso de la reaccin) la enzima es
recuperada sin ningn cambio en su estructura

Las enzimas son esenciales para la vida ya que, de otra forma, las reacciones en
las clulas ocurriran lentamente.
Bibliografa

https://diagnosticoclinico.wikispaces.com/file/view/Tema+Enzimas.pdf
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm
http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/bidimensional
http://docsetools.com/articulos-utiles/article_104964.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_de_intercambio_i
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http://es.slideshare.net/valentinapaz90/cromatografia-de-intercambioionico?next_slideshow=1
http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/EPrpc.html
http://www.google.com/url?
sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=12&ved=0CFgQFjAL&url=http%3A
%2F%2Fwww.biol.unlp.edu.ar%2Fqcabiolfarmacia
%2Fguia1.doc&ei=Oag5VZqrMMjjsATQoGgAQ&usg=AFQjCNEE8UliYu602KZz9eSHS_4u7SeF9Q&bvm=bv.91427
555,d.cWc
http://es.wikipedia.org/wiki/Mult%C3%ADmero
https://www.google.com/search?q=Purificaci
%C3%B3n+de+saccharomyces+cerevisiae&ie=utf-8&oe=utf-8#q=M
%C3%A9todos+para+la+cuantificaci%C3%B3n+de+prote%C 3%ADnas+