Sunteți pe pagina 1din 59

LUCRARI PRACTICE

CHIMIE ORGANIC

Programare edine lucrri practice CHIMIE ORGANIC


1. Protecia muncii i prezentarea laboratorului
Analiza elementar calitativ organic
2. Reacii de identificarea elementelor carbon, hidrogen, oxigen, azot, sulf, halogeni
Analiza funcional calitativ organic
3. Reacii caracteristice legturii duble
Reacii caracteristice hidrocarburilor aromatice
4. Reacii caracteristice alcoolilor
5. Reacii caracteristice fenolilor
Reacii caracteristice aminelor
6. Reacii caracteristice compuilor carbonilici
7. Reacii caracteristice combinaiilor carboxilice
8. Reacii caracteristice acilglicerolilor
9. Determinarea coninutului de lipide totale prin metoda Soxhlet
10. Reacii de identificare a proteinelor
11. Evidenierea aminoacizilor prin cromatografie
12. Determinarea coninutului total de glucide reductoare prin metoda cu acid 3,5dinitrosalicilic
13. Determinarea coninutului de proteine prin metoda Lowry
14. COLOCVIU

LUCRAREA 1
Analiza elementar calitativ organic

Reacii de identificarea elementelor carbon, hidrogen, oxigen, azot, sulf, halogeni


Compuii organici sunt alctuii dintr-un numr mic de elemente chimice numite elemente
organogene (C, H, O, N, Cl, S, P, Br, I, F, Si, metale). Compoziia compuilor organici se determin prin
tehnici moderne de identificare cum ar fi spectrometria de mas, cromatografia analitic sau diagrame
moleculare.
Identificarea elementelor organogene prin analiz elementar poate evidenia prezena unui
element (analiza elementar calitativ) sau grup funcional (analiza funcional calitativ) ntr-o
substan organic a crei compoziie nu este cunoscut ori poate stabili un anumit moment n cursul unei
transformri chimice. n continuare, prin analiz elementar cantitativ, se determin proporia
elementelor care intr n compoziia substanei investigate.
Elementele organogene pot fi identificate n substana organic dup transformarea acesteia, prin
mineralizare sau dezagregare, n compui anorganici uor de identificat prin metode specifice chimiei
anorganice.
Analiza elementar calitativ se realizeaz n mai multe etape.
Analiza preliminar presupune stabilirea caracterului substanei supuse analizei precum i unele
constante fizice care caracterizeaz substana (stare de agregare, miros, culoare, temperatura de fierbere
sau temperatura de topire, solubilitate, indice de refracie etc.)
O operaie important prin care se stabilete caracterul organic al unei substane este
descompunerea termic i arderea
n timp ce substanele anorganice nu ard substanele organice, nclzite treptat, se
carbonizeaz i ard cu flacr mai mult sau mai puin luminoas (indic un procent mai ridicat sau mai
sczut de carbon) sau ard exploziv (indic prezena unui polinitroderivat sau ester nitric). n timpul
proceselor de descompunere termic i ardere substanele organice emit vapori cu mirosuri diferite.
Mirosul de caramel indic faptul c substana analizat este de natur glucidic, mirosul de pene arse
arat c substana este de natur proteic, mirosul de usturoi indic prezena arsenului n substana
organic analizat, mirosul de acid acetic plaseaz substana analizat n categoria derivailor acidului
acetic, mirosul de hidrogen sulfurat n cea a sulfonamidelor etc.
Reactivi i materiale necesare:
- prob de analizat;
- acid clorhidric pa;
- creuzet din platin sau porelan;
- clete pentru manevrat creuzete;
- bec de gaz.
Mod de lucru
Substana de analizat se introduce ntr-un creuzet, din platin sau porelan, splat n prealabil cu
acid clorhidric pentru ndeprtarea oricror urme impurificatoare, cltit cu ap distilat i uscat. Cu
ajutorul unui clete se menine proba deasupra flcrii oxidante a unui bec de gaz i se urmrete procesul
de ardere. Sunt posibile urmtoarele comportri:
- substana arde i nu las nici un reziduu;
- substana arde i las un reziduu de culoare albicioas;
- substana nu arde i rezult un reziduu de culoare nchis.
Concluziile experimentului sunt c n prima situaie substana este de natur organic, n a doua
de natur organometalic (sruri ale acizilor carboxilici sau sulfonici) i n cea de a treia anorganic.
Compuii organici ard n mod diferit n funcie de natura lor. Astfel, hidrocarburile alifatice
inferioare ard cu flacr i nu produc fum, hidrocarburile aromatice i derivaii monohalogenai ard cu
flacr i produc fum, substanele organice care conin oxigen ard cu flacr de culoare albastr, glucidele
i proteinele ard i degaj mirosuri caracteristice, compuii polihalogenai ard numai n contact direct cu
flacra etc.

Identificarea carbonului i hidrogenului


Substanele organice, nclzite treptat se carbonizeaz i ard cu flacr mai mult sau mai puin
fumegtoare indicnd n acest fel prezena carbonului n molecul . n cazul n care substana organic de
analizat sublimeaz prin nclzire, prezena carbonului nu poate fi pus n eviden prin aceast metod. n
aceast situaie se recurge la oxidarea substanei organice utiliznd drept ageni de oxidare oxid de cupru sau
dioxidul de mangan care au i rol de catalizatori. Prin aceast metod alturi de carbon se realizeaz i
identificarea hidrogenului. Descompunerea substanei organice conduce la obinerea de dioxid de carbon,
care se identific sub forma de carbonat de bariu sau carbonat de calciu i ap prezent sub form de picturi
pe pereii reci ai eprubetei n care se produce oxidarea.
Identificarea hidrogenului se mai poate realiza cu ajutorul sulfului elementar sau a unei substane
care conine sulf.
Reactivi i materiale necesare:
- substan organic de analizat;
- hidroxid de bariu pa;
- oxid de cupru pa;
- sulf elementar sau tiosulfat de sodiu pa;
- acetat de plumb pa;
- hrtie de filtru;
- eprubete;
- clete pentru eprubete;
- dop din plut prevzut cu tub recurbat;
- pahar Berzelius.
Mod de lucru
Se amestec 0,1-0,2g substan de analizat cu aproximativ 1-2g (n exces) oxid de cupru (II) calcinat
pentru a nu conine urme de ap sau alte substane organice. Amestecul se introduce ntr-o eprubet greu
fuzibil prevzut cu dop din plut prin care trece un tub de sticl recurbat. ntreg sistemul se fixeaz n
poziie orizontal pe un stativ. Vrful liber al tubului recurbat se introduce intr-o eprubet care conine o
soluie de hidroxid de bariu sau hidroxid de calciu. Amestecul se nclzete treptat, cu mare atenie. Dac
substana este de natur organic, n urma procesului de oxidare va rezulta dioxid de carbon care n prezena
hidroxidului de bariu sau a hidroxidului de calciu va forma un precipitat de carbonat de bariu sau carbonat de
calciu. Pe pereii reci ai eprubetei sau pe tubul abductor se depun picturi de ap rezultate din oxidarea
hidrogenului coninut de substana organic cu ajutorul oxidului de cupru. Oxidul de cupru se reduce pn la
cupru metalic de culoare roie. Au loc urmtoarele reacii chimice:
2CuO + C = CO2 + 2Cu
CuO + H2 = H2O + Cu
CO2 + Ba(OH)2 = BaCO3 + H2O
Pentru identificarea hidrogenului cu ajutorul sulfului sau a unui compus cu sulf se introduc intr-o
eprubet aproximativ 0,1g substan de analizat i sulf. La gura eprubetei se aeaz o hrtie de filtru
umectat cu o soluie de acetat de plumb. Cu ajutorul unui clete se menine eprubeta deasupra flcrii
unui bec cu gaz. Colorarea hrtiei de filtru n negru, datorit formrii sulfurii de plumb, indic prezena
hidrogenului n substana de analizat. Au loc urmtoarele reacii chimice:
H2 + S = H2S
H2S + (CH3COO)2Pb = CH3COOH + PbS
Identificarea azotului, sulfului, halogenilor i fosforului
Pentru identificarea azotului, sulfului i halogenilor substana de analizat este supus
mineralizrii cu sodiu metalic. n urma acestui proces sodiul, care este foarte reactiv, se combin cu
elemente din molecula organic rezultnd compui anorganici (cianura de sodiu, sulfura de sodiu i
respectiv halogenura de sodiu),uor de identificat prin reacii simple si specifice.
Reactivi i materiale necesare:
- substan organic de analizat;
- sodiu metalic;
- sulfat feros pa (FeSO4 x 7H2O;
- clorur feric pa;

acid clorhidric;
acid azotic;
acid sulfuric;
nitroprusiat de sodiu;
carbonat de sodiu;
azotat de potasiu;
molibdat de amoniu;
fir din cupru;
acetat de plumb;
eprubete;
tub din sticl greu fuzibil;
sticl de ceas;
clete pentru eprubete;
plnie simpl;
plnie cu mas filtrant;
capsul din porelan;
hrtie de filtru;
pahare Berzelius;
baghete din sticl;
bec de gaz.

Mod de lucru
ntr-un tub din sticl nchis la unul din capete, se introduc 0,02-0,05 substan de analizat i apoi
un grunte de sodiu metalic, uscat cu hrtie de filtru i curat de stratul de oxid (cantitatea de sodiu
utilizat trebuie s asigure alcalinitatea soluiei rezultate deoarece, n caz contrar, este necesar ca operaia
de mineralizare s se repete).

Tub din sticl pentru mineralizare


Se ine tubul nclinat cu un clete i se nclzete treptat la flacra mic a unui bec de gaz, nti n partea
unde se gsete sodiul (pn cnd acesta se topete i cade peste amestecul de analizat) i apoi n partea
unde se gsete substana organic de analizat, n aa fel nct vaporii substanei s treac peste sodiul
topit. Dup ce substana este calcinat complet, tubuorul incandescent se introduce ntr-un flacon
Erlenmeyer care conine 15-25ml ap distilat. Pentru ca sodiul metalic nereacionat s nu sar afar din
ap din cauza reaciei violente cu aceasta, flaconul se acoper imediat cu o sticl de ceas, tubul se sparge
cu ajutorul unei baghete din sticl iar coninutul se dizolv n ap. Soluia alcalin rezultat (alcalinitatea
este conferit de excesul de sodiu care prin reacie cu apa formeaz hidroxid de sodiu) se filtreaz i se
mparte n trei poriuni:
1. 1/2 din soluie pentru identificarea azotului;
2. 1/4 din soluie pentru identificarea sulfului;
3. 1/4 din soluie pentru identificarea halogenilor.

Identificarea azotului prin metoda Lassaigne


Identificarea azotului din soluia rezultat se realizeaz prin metoda Lassaigne. n timpul
procesului de mineralizare cu sodiu metalic, azotul din substana organic analizat se transform n
cianur de sodiu care reacioneaz cu sulfatul feros conducnd la obinerea hexacianoferatului de sodiu
(intermediar rezult cianur feroas). n prezena ionilor de fier trivalent, n exces, hexacianoferatul de
sodiu se transform n complexul de culoare albastr, hexacianoferatul feric, numit albastru de Berlin.
2NaCN + FeSO4 = Na2SO4 + Fe(CN)2
Fe(CN)2 + 4NaCN = Na4[Fe(CN)6]
3Na4[Fe(CN)6] + 4FeCl3 = Fe4[Fe(CN)6]3 +12NaCl
Mod de lucru
Soluia pstrat pentru identificarea azotului se trateaz la rece, ntr-o eprubet, cu 2-3 picturi dintro soluie de sulfat feros 10% (proaspt preparat) pn se obine un precipitat de culoare neagr de hidroxid
feros ca urmare a reaciei cu hidroxidul de sodiu din soluia de analizat..
2NaOH + FeSO4 = Na2SO4 + Fe(OH)2
n amestecul rezultat se adaug 1-2 picturi clorur feric (n soluie trebuie s existe exces de ioni ferici
deoarece n caz contrar se formeaz compleci de forma NaFe[Fe(CN) 6] care conduc la soluii coloidale), se
nclzete soluia pn la fierbere, se rcete i se aciduleaz cu cteva picturi de acid clorhidric diluat pentru
a dizolva precipitatul de hidroxid feros. Dac substana conine mult azot apare imediat precipitatul albastru
de Berlin, dac substana conine puin azot apare o coloraie care variaz ntre verde i albastru iar dac
substana de analizat nu conine azot soluia rmne colorat n galben.

Identificarea sulfului
Metodele de identificare ale sulfului constau, n principiu, n reacia acestuia cu reactivi specifici
(acetat de plumb, nitroprusiat de sodiu) conducnd la obinerea unor produi de reacie colorai
caracteristic.
Mod de lucru
n dou eprubete diferite se introduc cte 2-3ml soluie de analizat. n una dintre ele soluia se
aciduleaz cu acid acetic i se trateaz cu o soluie de acetat de plumb dup care eprubeta se nclzete
uor. Formarea unui precipitat negru de sulfur de plumb indic prezena sulfului:
Pb(CH3-COO) + Na2S = PbS + 2 CH3COONa
n a doua eprubet, peste soluia de analizat se introduc cteva picturi dintr-o soluie apoas
proaspt preparat de nitroprusiat de sodiu [pentacianonitrozoferat de sodiu, Na 2[Fe(CN)5NO]x2H2O)]
(reacia Vohl). n prezena ionilor S 2- (din Na2S care a rezultat din reacia substanei organice cu sodiu
metalic) apare o coloraie care la concentraii mici este violet, la concentraii mari roie i dispare n
timp. Aceast coloraie este datorat formrii unui complex:
Na2[Fe(CN)5NO] + Na2S = Na4[Fe(CN)5NOS]
Reacia cu nitroprusiatul de sodiu se desfoar n mediu slab alcalin din cauz c o alcalinitate
avansat mpiedic apariia coloraiei caracteristice ca urmare a formrii prusiatului de sodiu
(Na4[Fe(CN)5NO2]x10H2O) care confer soluiei o coloraie galben.
Metoda nu poate fi utilizat pentru identificarea sulfului din hidrogenul sulfurat pentru c n
soluie exist ioni HS- care nu reacioneaz cu nitroprusiatul de sodiu i foarte puini ioni S 2- care dau
reacia caracteristic descris anterior.
Dac n substana de analizat exist compui ionizabili care conin sulf, dup identificarea
acestuia cu reactivii caracteristici de mai sus se poate determina natura legturii elementului n molecul.
Un exemplu este identificarea ionului sulfat n soluia apoas a substanei de analizat cu o soluie de
clorur de bariu. Prin reacia ionilor sulfat cu ionii de bariu rezult sulfatul de bariu, precipitat de culoare
alb, care indic prezena sulfului ionizabil.
SO42- + Ba2+ BaSO4
n cazul substanelor care conin n molecul att sulf ct i azot aceste elemente pot fi
determinate calitativ cu o soluie de clorur feric. Astfel, soluia rezultat dup mineralizarea cu sodiu
metalic se aciduleaz i se trateaz cu o soluie proaspt preparat de clorur feric. Din reacie rezult
sulfocianura feric [Fe(SCN) 3] de culoare rou nchis.

Identificarea halogenilor
Prezena sau absena halogenilor n soluia de dezagregare se poate realiza n mod diferit, n
funcie de tipul halogenului i de prezena sau absena azotului i sulfului in substana organic..
Identificarea halogenilor prin metoda cu azotat de argint
Mod de lucru
Dac soluia rezultat dup mineralizare conine numai halogen atunci, dup tratarea cu o soluie
de azotat de argint rezult halogenur de argint, precipitat alb sau galben n funcie de halogenul prezent:
NaX + AgNO3 = AgX + NaNO3
Pentru identificarea fiecrui atom de halogen, precipitatul obinut se trateaz cu o soluie de
hidroxid de amoniu. Dac precipitatul rezultat este alb i se dizolv uor n soluie de hidroxid de amoniu
halogenul din substana organic este clor. Prezena unui precipitat galben deschis, greu solubil n soluie
de hidroxid de amoniu ne indic brom n molecula organic. Dac precipitatul de culoare galben este
insolubil n soluie de hidroxid de amoniu halogenul este iod.
Dac substana organic de analizat conine n molecul azot, sulf sau ambele elemente metoda cu
azotat de argint nu poate fi utilizat deoarece reactivul interacioneaz att cu cianura de sodiu ct i cu
sulfura de sodiu rezultate din mineralizarea substanei organice conducnd la formarea cianurii de argint
i a sulfurii de argint, ambele precipitate de culoare alb (induce eroare) i respectiv neagr (mpiedic
observarea precipitatului halogenur de argint). Acestea sun motive pentru care soluia obinut dup
dezagregare se aciduleaz cu acid sulfuric sau acid azotic i se fierbe cteva minute pentru a ndeprta
ionii cian i sulf (sub forma compuilor volatili acid cianhidric i hidrogen sulfurat).
2NaCN + H2SO4 = 2HCN + Na2SO4
Na2S + H2SO4 = H2S + Na2SO4
Soluia obinut se dilueaz (un exces de acid sulfuric ar conduce la obinerea precipitatului de sulfat de
argint, greu solubil) i se trateaz cu o soluie de azotat de argint. Formarea halogenurii de argint,
precipitat alb-glbui), indic prezena halogenilor n molecul.
Identificarea halogenilor prin metoda cu oxid de calciu
Metoda const, n principiu, n calcinarea substanei organice cu oxid de calciu chimic pur, reacie
care conduce la formarea halogenurii de calciu uor de identificat cu o soluie de azotat de argint.
Mod de lucru
ntr-o eprubet special cu perei subiri, sau ntr-un tub de calcinare se introduce o cantitate mic
de substan de analizat fin pulverizat i un exces de oxid de calciu uscat i liber de halogeni. Prin
nclzire pn la incandescen se formeaz halogenura de calciu. Eprubeta nroit se introduce ntr-un
pahar cu puin ap distilat i se sparge. Soluia obinut se filtreaz de resturile de sticl, se aciduleaz
cu acid azotic i se trateaz cu o soluie de azotat de argint. Formarea unui precipitat indic prezena
halogenilor n substana de analizat.
Avantajul acestei metode este c poate fi utilizat i n cazul n care substana de analizat conine
azot i sulf deoarece prin calcinare rezult numai halogenur de calciu nemaifiind necesare acidularea i
fierberea.
Identificarea halogenilor prin metoda Beilstein
Metoda pe cale uscat numit metoda Beilstein se bazeaz, n principiu, n calcinarea substanei
organice de analizat plasat pe o srm de cupru la flacra oxidant a unui bec de gaz. n urma procesului
rezult halogenuri de cupru volatile care au proprietatea de a colora flacra n verde sau verde-albstrui:
CuO + X2 = CuX2 + 1/2O2
Mod de lucru
Firul de cupru se arde n flacr oxidant pn cnd se acoper cu un strat negru de oxid de cupru
i nu mai coloreaz flacra dup care se rcete. Se depun cteva mg substan de analizat pe captul
curat al firului de cupru i se introduc n flacr cu atenie. La nceput, introducnd substana la
marginea flcrii aceasta se topete, apoi se aprinde cu flacr luminoas. Dac substana conine
halogeni flacra becului de gaz se coloreaz n verde sau verde albstrui.

LUCRAREA 2
Reacii caracteristice legturii duble
Compuii nesaturai cu una sau mai multe legturi duble n molecul (alchene) prezint
reactivitate chimic mrit datorat tendinei de desfacere a dublei sau dublelor legturi (mai uor
polarizabil comparativ cu legtura ) dintre atomii de carbon. Caracteristicile energetice ale acestor
legturi sunt la originea unui numr mare de reacii chimice cum ar fi reacii de adiie, reacii de
oxidare, reacii de polimerizare etc.
Reacii de adiie la legtura dubl
Reaciile caracteristice compuilor cu legtur dubl n molecul sunt reaciile de adiie electrofil
(hidrogenare, halogenare, hidrohalogenare, oxidare etc.). Pentru identificarea legturii duble cel mai
frecvent se utilizeaz reacia de adiie a bromului i reacia de oxidare cu permanganat de potasiu.
Reacia de bromurare
Halogenii se adiioneaz uor la dubla legtur conducnd la formarea de dihalogeno-alcani n
care cei doi atomi de halogen sunt legai de doi atomi de carbon vecini. Clorul se adiioneaz cel mai
uor fiind urmat de brom i apoi de iod (numai sub aciunea radiaiilor luminoase).
Din punct de vedere analitic cel mai uor se urmrete adiia bromului din cauz c viteza de
reacie este convenabil i, n plus reacia poate fi urmrit deoarece bromul are culoare brun.
Reactivi i materiale necesare:
- acid fumaric pa;
- acid cinamic pa;
- etanol pa;
- benzen pa;
- brom;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduce o cantitate mic de substan organic cu dubl
legtur (acid fumaric, acid cinamic) i 2 ml dintr-un solvent potrivit, inactiv fa de brom (etanol
pentru acidul fumaric i benzen pentru acidul cinamic; apa de brom poate fi folosit doar n cazul n
care compusul organic nesaturat este solubil n ap). Eprubeta se agit pentru dizolvarea substanei
organice i apoi se introduce, cu pictura, soluie de brom 5%, preparat n acelai solvent utilizat
pentru solubilizarea substanei organice de analizat.
Decolorarea soluiei indic prezena dublei legturi n molecula organic. Dac nu se observ
decolorarea la temperatura obinuit, eprubeta cu soluia de analizat se nclzete uor ntr-o baie de
ap. Are loc adiia bromului la dubla legtur, proces n urma cruia rezult compui dibromurai
saturai:

HOOC

acid fumaric

COOH + Br2

HOOC

Br

Br

COOH

acid dibromfumaric

C 6H5

COOH + Br2

C 6 H5

acid cinamic

Br

Br

COOH

acid dibromcinamic

Soluia n care se desfoar reacia de bromurare trebuie s fie uor acid din cauz c, la pH
bazic, bromul trece n bromur i hipobromit, motive pentru care reacia nu mai este concludent
pentru adiie. n plus, n cazul n care se utilizeaz pentru bromurare ap de brom trebuie avut n
vedere c aceasta are capacitate de oxidare important, comportare care atrage dup sine o interpretare
dificil a rezultatelor.
Reacia de adiie a bromului la dubla legtur este utilizat n scopuri analitice pentru dozri
calitative sau cantitative.
Reacia de oxidare
Legtura dubl este mai sensibil la oxidare comparativ cu legtura simpl. Oxidarea alchenelor
are loc n condiii diferite, motiv pentru care produii de reacie sunt la rndul lor diferii n funcie de
natura reactanilor i condiiile n care se desfoar reaciile respective.
Prin oxidarea legturilor duble are loc adiia oxigenului la dubla legtur. Mecanismul acestei reacii
nu se poate preciza ntotdeauna dar, se pare c, de multe ori, reacia se desfoar prin faza
intermediar de diol:

+ [O] + HOH

alchen

OH

OH

diol

Dac agentul oxidant este puternic reacia merge mai departe rezultnd cetone sau chiar acizi ca
urmare a scindrii legturii duble
Reacia Wagner-Bayer permite identificarea legturii duble. n prezena dublei legturi o soluie
alcalin de permanganatul de potasiu (reactiv Bayer) se decoloreaz. Aceast reacie se bazeaz, n
principiu, pe eliberarea oxigenului necesar oxidrii legturii duble din permanganat de potasiu care, n
mediu slab bazic, se reduce la dioxid de mangan (precipitat brun). n aceste condiii, la temperatur
normal alchenele se oxideaz la dioli:
OH
HC

CH

COOH

HC

OH
C

COOH

H
+ [O] + HOH

acid cinamic

diolul acidului cinamic

Reactivi i materiale necesare:


- acid cinamic pa;
- carbonat de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2ml hidrocarbur nesaturat lichid (acid cinamic) care se
alcalinizeaz cu o soluie de carbonat de sodiu 5% (se verific pH-ul). Peste acest amestec se
introduce, cu pictura, sub agitare, soluie de permanganat de potasiu 0,5%. Iniial culoarea roz a
permanganatului dispare pentru ca apoi s apar un precipitat floconos, brun de dioxid de mangan.
Utilizarea acestei metode de identificare trebuie sa in cont de natura compusului nesaturat supus
analizei deoarece exist substane organice, altele dect cele care au n structur legturi duble, care
oxidate n prezena unor soluii de permanganat de potasiu le decoloreaz. De asemenea, exist
compui organici cu legtur dubl n molecul care nu dau reacia Wagner-Bayer.
Reacii caracteristice hidrocarburilor aromatice
Hidrocarburile aromatice sau arenele sunt compui organici care conin cel puin un ciclu n
structura cruia legturile duble i simple ntre cei ase atomi de carbon alterneaz (ciclu benzenic).
Cea mai simpl hidrocarbur din aceast clas este benzenul.
Gradul de nesaturare ridicat (raport H:C mic) ar presupune o reactivitate sporit. Cu toate acestea,
benzenul, de exemplu, este stabil din punct de vedere chimic i n plus particip la reacii de substituie
(halogenare, nitrare, sulfonare, alchilare, acilare), reacii care sunt caracteristice compuilor saturai.
Aceste comportri sunt datorate stabilizrii ciclului prin delocalizarea i distribuia egal a electronilor
ntre cei ase atomi de carbon care formeaz o trien ciclic. Delocalizarea electronilor este
ilustrat printr-un cerc plasat n interiorul ciclului format din cei ase atomi de carbon.
=

Arenele pot fi formate dintr-un singur ciclu (mononucleare) sau mai multe cicluri (polinucleare).
Reacia de sulfonare a hidrocarburilor aromatice
Sulfonarea hidrocarburilor aromatice este procesul chimic care conduce la obinerea de acizi
sulfonici aromatici (acizi arilsulfonici) a cror trie este comparabil cu a acizilor minerali.
Agenii de sulfonare a hidrocarburilor aromatice cel mai frecvent utilizai sunt trioxidul de sulf (agent
electrifil foarte reactiv), acidul sulfuric concentrat sau o soluie de trioxid de sulf n acid sulfuric
concentrat (oleum). n cazul utilizrii acidului sulfuric concentrat, reacia general de sulfonare este:
Ar-H + H2SO4

Ar-SO3H + H2O

Sulfonarea benzenului, la cald, sub aciunea acidului sulfuric concentrat conduce la acid
benzensulfonic. n condiii energice sulfonarea poate continua rezultnd acid m-benzen disulfonic i
acid m, m benzen trisulfonic:

10

SO3 H

SO 3H

SO3 H

+ H 2SO 4

+ H 2SO 4

+ H 2SO 4

- H2 O

- H2 O

- H2 O
SO3 H HO3 S

benzen

acid benzen

acid m-benzen

sulfonic

disulfonic

SO3 H

acid m, m-benzen
trisulfonic

Sulfonarea toluenului, la cald, conduce la obinerea unui amestec de acizi toluen sulfonici:
CH 3

CH 3

CH 3
SO3 H

+2H 2 SO 4

toluen

- 2H2 O

acid o-toluen sulfonic

SO3 H

acid p-toluen sulfonic

n condiii energice sulfonarea toluenului poate continua rezultnd acizi toluen disulfonici i
toluen trisulfonici.
Reactivi i materiale necesare:
- benzen pa;
- toluen pa;
- acid sulfuric concentrat;
- eprubete;
- pahare Berzelius.
Mod de lucru
n dou eprubete diferite se introduc 0,1-1ml benzen, respectiv, toluen peste care se adaug cte
3ml acid sulfuric concentrat (se introduce acid sulfuric n exces deoarece la nclzire se produce diluie
datorit apei de reacie). Eprubetele se nclzesc timp de 10 minute pe o baie de ap la fierbere, sub
agitare, fr ca amestecurile din eprubete s fiarb. n continuare, eprubetele se rcesc ntr-un pahar cu
ap rece.
Se observ c amestecul care conine acid benzensulfonic se separ n dou straturi, un strat apos
de acid sulfuric i un altul de acid benzensulfonic, greu solubil n acidul sulfuric diluat de apa de
reacie.
Sulfonarea toluenului conduce la obinerea unui amestec de acid o-toluensulfonic (n proporie
mai mic) i acid p-toluensulfonic, ambii solubili n acidul sulfuric diluat de apa rezultat din reacie.
Se trece coninutul fiecrei eprubete n cte un pahar n care se afl 10-15ml ap distilat rece.
Reacia de nitrare
Reacia de nitrare direct cu acid azotic decurge uor n seria aromatic. n anumite cazuri este
utilizat pentru nitrare amestec nitrant (amestec de acid azotic i acid sulfuric n proporii i concentraii
care variaz de la caz la caz).
Benzenul reacioneaz cu acidul azotic concentrat conducnd la formarea nitrobenzenului.

11

Reactivi i materiale necesare:


- benzen pa;
- acid azotic concentrat;
- acid sulfuric concentrat;
- nitrobenzen;
- eprubete;
- pahare Berzelius.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 0,5g benzen i 5ml acid azotic concentrat. Dup nclzirea amestecului
timp de cteva minute, coninutul eprubetei se introduce ntr-un pahar Berzelius n care se afl 15ml
ap distilat. Se observ separarea nitrobenzenului, lichid de culoare slab glbuie, mai dens dect apa,
cu miros specific de migdale amare.
NO 2

NO 2

NO 2

+HNO3

+HNO3

+HNO3
- H 2O

- H 2O

- H 2O

NO2

benzen

nitrobenzen

m-dinitrobenzen

O 2N

NO2

m, m-trinitrobenzen

Gruparea nitro este substituent de ordinul II. Introducerea unei a doua grupe nitro necesit
condiii mai energice de reacie. n acest sens nitrarea se realizeaz cu amestec nitrant prin meninerea
la cald un timp mai ndelungat a amestecului de reacie.
Amestecul nitrant se prepar din 1,5ml acid azotic i 2ml acid sulfuric. Imediat, fr ca amestecul
nitrant s se rceasc, se adaug peste acesta 1ml nitrobenzen. Amestecul de reacie rezultat se
nclzete pe baie de ap timp de 15 minute, dup care se rcete i se introduce ntr-un volum de ap
rece de patru ori mai mare (aproximativ 20ml). Se observ separarea m-dinitrobenzenului care
cristalizeaz.
Reacia de nitrare a toluenului conduce la obinerea unui amestec de o-nitrotoluen i pnitrotoluen:
CH 3

CH 3

CH 3
NO2

+2HNO3

- 2H2 O

NO2

toluen

o-nitrotoluen

p-nitrotoluen

Nitrarea este condus n aceleai condiii ca n cazul benzenului. Compuii de nitrare rezultai sunt
lichide cu aspect uleios, de culoare glbuie i miros caracteristic compuilor nitroaromatici.

12

LUCRAREA 3
Reacii caracteristice alcoolilor
Compuii hidroxilici sunt substane organice care rezult prin nlocuirea unuia sau mai multor
atomi de H dintr-o caten hidrocarbonat cu radicalul hidroxil (OH). Dup starea de hibridizare a
atomului de carbon de care se leag gruparea funcional, compuii hidroxilici pot fi: alcooli (gruparea
funcional oxidril este legat de un atom de carbon hibridizat sp 3 care aparine catenei unui alcan sau
izoalcan, poriunii saturate a unei alchene sau catenei laterale a unei arene), enoli (compui hidroxilici
n care grupa oxidril este legat de un atom de carbon hibridizat sp 2,care aparine unei legturi duble)
sau fenoli (gruparea hidroxil este legat de un atom de carbon dintr-un nucleu aromatic, hibridizat sp 2).
Dup natura atomului de carbon de care se leag gruparea hidroxil deosebim alcooli primari,
alcooli secundari i alcooli teriari:
R
R

CH 2OH

alcool primar

CHOH

COH

alcool secundar

alcool teriar

.
Reacia cu metalele alcaline
Reacia cu metalele alcaline este una din reaciile de identificare a compuilor hidroxilici.
Alcoolii, fenolii i enolii reacioneaz cu metalele alcaline care nlocuiesc hidrogenul din grupa
funcional (hidrogenul hidroxilic, activ), conducnd la formarea de alcoxizi (alcoolai), fenoxizi
(fenolai) i respectiv enolai, substane cu caracter ionic i hidrogen uor identificabil.
R-OH + Na = R-O-Na+ + 1/2H2
R-O-Na+ + H2O = R-OH + NaOH
Reactivi i materiale necesare:
- alcool (etilic sau metilic) absolut;
- sodiu metalic;
- fenolftalein, soluie indicator;
- eprubete;
- pahare Berzelius.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 4ml alcool absolut (etilic sau metilic), i o bucic de
sodiu metalic, proaspt tiat, curat de oxid i uscat cu hrtie de filtru. Reacia este puternic exoterm
i se observ degajarea bulelor de hidrogen. Sub agitare continu metalul se consum treptat n reacie.
Dup terminarea reaciei, soluia de alcoxid rezultat se rcete (la robinet). Dac soluia este concentrat,
alcoxidul, greu solubil n alcool anhidru, va precipita. Soluia se dilueaz n continuare cu 5-6ml ap
distilat constatndu-se dizolvarea alcoxidului (se regenereaz alcoolul iniial i mediul capt caracter
bazic din cauza hidroxidului de sodiu format). Cu ajutorul fenolftaleinei se pune n eviden alcalinitatea
soluiei datorat hidrolizei alcoxidului.
Reacia cu reactivul Nessler
Reactivul Nessler (tetraiodomercuriatul de potasiu - K 2HgI4 este o soluie de iodur de mercur
1,4%, n soluie apoas de iodur de potasiu i hidroxid de potasiu) este utilizat pentru identificarea
alcoolilor primari, secundari i teriari. Alcoolii primari i secundari reduc reactivul Nessler la mercur
metalic, comportare care nu se manifest la alcoolii teriari.
Reactivi i materiale necesare:
- reactiv Nessler;
- eprubete.

13

Mod de lucru
n trei eprubete diferite se introduc cte 1-2ml alcool primar, alcool secundar i respectiv alcool
teriar. Se adaug apoi cte 1-2ml reactiv Nessler i se fierbe amestecul, ntr-o baie de ap, timp de 2
minute. Analiznd coninutul eprubetelor. Se observ apariia unui precipitat negru de mercur metalic n
eprubetele cu alcooli primar i secundar i lipsa acestuia n eprubeta cu alcool teriar.
Reacii de oxidare
Reaciile de oxidare pot servi n chimia analitic pentru identificarea alcoolilor primari, secundari
i teriari. Alcoolii primari se oxideaz, n condiii blnde, conducnd la formarea de aldehide. n condiii
mai energice reacia poate s conduc la obinerea acizilor carboxilici.
Reacia de oxidare cu dicromat de potasiu
Aceast reacie este utilizat analitic pentru identificarea alcoolilor primari, secundari i teriari.
n prezena unor ageni de oxidare obinuii cum ar fi dicromatul de potasiu.
n mediu de acid sulfuric, n condiii blnde, alcoolii primari sunt oxidai la aldehide.. Oxidarea n
condiii energice conduce la obinerea de acizi carboxilici.

K2Cr2O7 + 4H2SO4 = Cr2(SO4)3 + K2SO4 + 4H2O + 3/ 2O2


R

CH2 OH

blnd

R
CHOH

-H 2O

alcool primar
Oxidarea

+1/ 2 O2

+1/ 2 O2

aldehid
a

+1/ 2 O2

alcool secundar

-H2 O

OH

acid carboxilic

alcoolilor

secundari

conduce

la

obinerea

de

cetone:

R
R

ceton

n condiii energice, prin oxidarea alcoolilor secundari, se formeaz acizi organici cu numr mai
mic de atomi de carbon n molecul fa de alcoolul de la care s-a plecat:
H 3C
H 3C

+1/ 2 O2

CHOH

alcool izopropilic

-H2 O

H 3C
H 3C

+3/ 2 O2
C

aceton

COOH + CH3 COOH

acid formic

acid acetic

Alcoolii teriari sunt stabili n condiii blnde de oxidare n condiii energice catena se scindeaz
i rezult acizi organici cu numr mai mic de atomi de carbon n molecul comparativ cu alcoolul supus
oxidrii:
H3 C
H3 C
H3 C

OH + 3O2

alcool butilic teriar

COOH + CH 3

acid formic

CH 2

COOH + H2 O

acid propionic

Reactivi i materiale necesare:


- alcool etilic;
- alcool izopropilic;
- alcool butilic teriar;
- dicromat de potasiu;
- acid sulfuric;
- reactiv Schiff (fucsin decolorat cu dioxid de sulf);
- eprubete.

14

Mod de lucru
n trei eprubete diferite se introduce cte 1ml alcool etilic, alcool izopropilic i respectiv alcool
butilic teriar peste care se adaug civa mililitri soluie dicromat de potasiu i 1ml acid sulfuric diluat.
Amestecul se nclzete treptat, alcoolii etilic i izopropilic transformndu-se n aldehid acetic i
respectiv aceton care se recunosc dup mirosurile plcute, caracteristice sau dup culoarea roz pe care o
dau cu reactivul Schiff.
Alcoolul teriar rmne nemodificat din cauza stabilitii sale n condiii blnde de oxidare.
Oxidarea alcoolilor la acizii corespunztori se realizeaz n condiii mai energice i este indicat de
modificarea culorii portocalii a dicromatului de potasiu n verde, modificare ce indic sfritul reaciei
de oxidare.
Reacia de oxidare cu oxid de cupru
Alcoolii primari, n prezena oxidului de cupru (II), se oxideaz conducnd la obinerea
aldehidelor corespunztoare:
H
CH 3 OH + CuO

O + Cu + H 2O

metanol

formaldehid

Reactivi i materiale necesare:


- alcool metilic;
- reactiv Schiff (fucsin decolorat cu dioxid de sulf);
- fir din cupru;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet uscat se introduc 2-3ml alcool metilic. Se nroete n flacra oxidant a unui bec
de gaz un fir din cupru pn ce acesta se acoper cu un strat de oxid de cupru. Srma de cupru fierbinte se
introduce n alcoolul metilic din eprubet. Se constat c firul de cupru se nroete din cauza reducerii
oxidului de cupru de pe suprafaa sa, iar alcoolul metilic se oxideaz la formaldehid care poate fi pus n
eviden cu reactiv Schiff.
Reacia de oxidare cu permanganat de potasiu
n condiii energice de oxidare, n prezena permanganatului de potasiu n mediu acid, alcoolul etilic se
transform n acid acetic cu formare intermediar de aldehid acetic.
CH 3

CH 2

OH

+ [O]

alcool metilic

CH 3

CH 2OOH

acid acetic

Reactivi i materiale necesare:


- alcool etilic pa;
- permanganat de potasiu pa;
- acid sulfuric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduce o cantitate mic de permanganat de potasiu solid,
civa ml ap distilat i 2-3ml alcool etilic. Se fierbe coninutul eprubetei timp de 2-3min. dup care se
adaug 3ml acid sulfuric diluat. Se ataeaz la eprubet un tub din sticl recurbat i se continu nclzirea.
Se va constata degajarea acidului acetic dup mirosul caracteristic al acestuia, dup culoarea roie a

15

hrtiei de turnesol sau prin introducerea captului liber al tubului recurbat ntr-o eprubet n care se afl o
soluie slab alcalin cu indicator acido-bazic (fenolftalein).
Reacia de esterificare (acilare)
Reacia de acilare const n nlocuirea atomilor de hidrogen funcionali (hidroxilici) cu radicali
acil rezultnd compui organici care se numesc esteri. Agenii de acilare pot fi acizi carboxilici sau, cel
mai adesea, derivai funcionali ai acizilor carboxilici (anhidride sau cloruri acide):
O

O
R1

OH + R 2

R2

+ H 2O
OR1

OH

acid carboxilic

O
R2
2 R1

OR 1

OH +

O
R2

anhidrid

O
OR 1

O
R1

OH + R 2

+ H 2O

2R 2

+ HCl

R2
Cl

clorur acid

Esterii rezultai pot fi evideniai calitativ prin determinarea unor constante fizice sau prin reacii
specifice.
Reactivi i materiale necesare:
- alcool etilic pa;
- alcool etilic pa;
- acetat de sodiu pa;
- acid sulfuric concentrat;
- eprubete.
Mod de lucru
n dou eprubete diferite se introduce cte o cantitate mic de acetat de sodiu solid i 1ml acid
sulfuric concentrat. n una din eprubete se introduc 2ml alcool metilic i n cealalt 2ml alcool etilic.
Coninutul eprubetelor se nclzete cu atenie i se constat degajarea unor mirosuri plcute de fructe,
dovad a prezenei esterilor metilic i respectiv etilic ai acidului acetic. Au loc urmtoarele reacii:

H3 C

COONa + CH3

acetat de sodiu
H 3C

CH 3

etanol

OH

CH 3
+ H2O + NaHSO4

metanol

COONa + C2 H5

acetat de sodiu

OH

+ H2SO4

acetat de metil
O

+ H 2SO 4
CH3

C 2H 5
+ H 2O + NaHSO 4

acetat de etil

16

Reacii de culoare
Alcoolii dau reacii de culoare caracteristice, n prezena unor substane cum ar fi valina (acid amino izovalerianic) sau acidul diazobenzensulfonic.
Reactivi i materiale necesare:
- valin pa;
- acid sulfuric pa;
- acid sulfanilic pa;
- acid clorhidric pa;
- azotit de sodiu;
- alcool metilic;
- alcool etilic pa;
- alcool propilic;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
Pentru reacia cu valina este necesar s se preparare un reactiv format din 0,5g valin dizolvat n
100ml acid sulfuric concentrat. 2 ml din acest reactiv se introduc ntr-o eprubet mpreun cu 3-4 picturi
alcool i cteva picturi de ap distilat. Apare coloraia caracteristic produsului de reacie cu alcoolul
respectiv. Astfel:
- alcoolul metilic d coloraie galben, care devine cu timpul roz;
- alcoolul etilic d coloraie albastr-verzuie care trece cu timpul n albastru nchis;
- alcoolul n-propilic d coloraie galben, care la adugarea n jur de 15 picturi ap devine
rou - purpurie;
- alcoolul normal butilic d coloraie galben-portocalie care dup adugarea apei se schimb
treptat n rou-violet;
- alcoolii teriari dau coloraie portocalie care, dup adugarea apei, devine rou-violet;
- alcoolul izoamilic d coloraie roie care dup adugarea apei devine rou-violet.
Pentru reacia cu acid diazobenzensulfonic, n 2-3 eprubete diferite se introduc cte 2ml amestec
dintre reactivii Rosenthaler I (1g acid sulfanilic dizolvat n 150ml ap distilat i 50ml HCl, 5N) i
Rosenthaler II(azotit de sodiu 7%), n raportul 4:1. Amestecul se alcalinizeaz cu NaOH 20% (pH-ul
trebuie s fie alcalin). n fiecare eprubet se introduc cte 2-3ml alcool (metilic, etilic, propilic).
Coninutul eprubetelor se nclzete timp de 2-3min. Se observ apariia unei coloraii rou nchis n cazul
alcoolilor uor solubili i roz deschis n cazul celor greu solubili.
Reacii specifice unor compui hidroxilici
Reacia etanolului cu iodul n mediu alcalin
Aceast reacie poate fi utilizat pentru identificarea alcoolilor care au n structura lor o grupare
metil legat de un atom de carbon primar sau secundar de care este ataat gruparea funcional hidroxil,
de forma urmtoare:
n soluie alcalin iodul se transform n hipoiodit, oxidant puternic ce transform alcoolul etilic
n aldehid acetic. n condiiile n care hipoioditul este n exces aldehida acetic se transform n triiodacetaldehid care, n mediu alcalin, se scindeaz conducnd la iodoform:

I 2 + 2NaOH = NaI + NaIO + H2O


hipoiodit
de sodiu

O
H3 C

COONa + HO

CH3 +NaIO = H3 C

+ NaI + H 2O
H

acetaldehid

17

O
H3 C

+ NaIO = I3 C

C
H

+ 3NaOH
H

triiodacetaldehid

O
I 3C

+ NaOH = CHI3 + HCOONa


H

iodoform

Reactivi i materiale necesare:


- alcool etilic pa;
- soluie de iod;
- hidroxid de sodiu sau potasiu pa;
- eprubete;
- baie de ap.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2-3ml alcool etilic i 2-3ml ap distilat. Soluia obinut se nclzete
ntr-o baie de ap la o temperatur n jur de 60 oC dup care se adaug 0,5-1ml soluie de iod (2g iod i 5g
iodur de potasiu se dizolv ntr-o cantitate mic de ap distilat dup care soluia se aduce la 100ml) i
cu pictura, pn la dispariia coloraiei iodului, o soluie alcalin 5% (NaOH sau KOH). Formarea
iodoformului se recunoate dup apariia unui precipitat de culoare galben deschis cu miros caracteristic
de medicament.
Experimentul mai poate fi condus prin alcalinizarea n exces a alcoolului etilic, nclzirea
amestecului la temperatura de aproximativ 60 oC i tratarea cu soluie de iod n iodur de potasiu pn la
coloraie galben persistent. Alcalinizarea suplimentar determin apariia cristalelor de iodoform cu miros
specific.
Reacia de deshidratare a glicerinei
n principiu, reacia se bazeaz pe proprietatea glicerinei de a se deshidrata n prezena sulfailor
acizi transformndu-se n acrolein care se recunoate dup mirosul caracteristic, neptor sau prin
reducerea azotatului de argint amoniacal la argint metalic.
Reactivi i materiale necesare:
- glicerin pa;
- sulfat acid de potasiu pa;
- azotat de argint amoniacal;
- creuzet din porelan;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet sau creuzet se nclzesc aproximativ 1g sulfat acid de potasiu (KHSO 4) i cteva
picturi de glicerin, constatndu-se c dup scurt timp apare mirosul specific de acrolein.
Prezena acroleinei mai poate fi pus n eviden prin plasarea la gura eprubetei sau deasupra
creuzetului a unei hrtii de filtru umectat cu soluie de azotat de argint amoniacal preparat
extemporaneu (peste o soluie apoas de azotat de argint 5% se adaug soluie de amoniac 25% pn la
dizolvarea precipitatului). Se va observa apariia unei pete negre de argint metalic.
Reacia de recunoatere a glicerinei cu hidroxid de cupru
Metoda se bazeaz, n principiu, pe reacia glicerinei cu hidroxidul de cupru, reacie care conduce
la formarea gliceratul de cupru care este un alcoxid de culoare albastr, solubil n ap:

18

CuSO4 + 2NaOH = Cu(OH)2 + Na2SO4


CH 2

OH

CH 2

O
Cu

CH

OH + Cu(OH)2 = CH

CH 2

OH

OH

glicerin

CH 2

+ H 2O

glicerat de cupru

Reactivi i materiale necesare:


- glicerin pa;
- sulfat de cupru pa;
- hidroxid de sodiu;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o prim etap, se prepar hidroxid de cupru, precipitat de culoare albastr, prin tratarea unei
soluii apoase de sulfat de cupru 5% cu un mic exces de soluie apoas de hidroxid de sodiu sau potasiu
5%. Apoi, peste precipitatul obinut, se adaug cteva picturi de glicerin i se agit eprubeta pn la
dispariia precipitatului. Rezult o soluie de glicerat de cupru, colorat n albastru intens.

LUCRAREA 4
19

Reacii caracteristice fenolilor


Fenolii sunt compui hidroxilici n structura crora grupa funcional hidroxil este legat de un
atom de carbon dintr-un nucleu aromatic, hibridizat sp2. Influenele reciproce pe care le manifest grupele
hidroxil i nucleul aromatic determin proprietile chimice caracteristice care pot fi utilizate pentru
determinarea calitativ a acestor compui.
Reprezentantul clasei, cu structura cea mai simpl este fenolul.
Evidenierea caracterului acid
Fenolii prezint caracter acid mai pronunat dect alcoolii. Aceast comportare este datorat
conjugrii electronilor neparticipani de la atomul de oxigen, care aparine gruprii funcionale oxidril, cu
electronii din sistemul aromatic ceea ce determin ionizarea mai accentuat a fenolilor comparativ cu
alcoolii.
O

Ca urmare a deplasrilor de electroni, legtura dintre atomii de oxigen i hidrogen din gruparea
funcional hidroxil este labilizat i de aceea fenolii reacioneaz nu numai cu metalele alcaline ci i cu
hidroxizii alcalini conducnd la formarea de fenoxizi.. Fiind sruri ale unor acizi slabi cu baze tari,
fenoxizii metalelor alcaline sunt hidrolizai n soluie apoas ce prezint caracter bazic.
Aciditatea grupei hidroxil n fenoli este intermediar ntre aceea a alcoolilor alifatici i acizilor
carboxilici.
Reactivi i materiale necesare:
- fenol pa;
- rezorcin pa;
- hidrochinon;
- -naftol;
- hidroxid de cupru pa;
- acid sulfuric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
Cantiti mici de fenoli (fenol, rezorcin, hidrochinon, -naftol) se introduc n eprubete diferite.
OH

OH

OH

OH

OH

fenol

rezorcin

OH

hidrochinon

-naftol

20

n fiecare eprubet se adaug, cu pictura, soluie de hidroxid de sodiu de concentraie 5-7% pn la


dizolvarea complet a fenolului. Rezult astfel fenoxizii corespunztori, compui care sunt solubili n ap.
ONa

OH

+ H 2O

+ NaOH

fenol

fenoxid de sodiu

Fenolii pot fi pui n libertate din fenoxizii corespunztori de ctre acizi slabi. Astfel, prin acidularea
soluiilor limpezi de fenoxizi cu acid sulfuric diluat (1:5) constatm c soluiile se tulbur datorit
separrii fenolilor sub form de emulsie sau precipitat, n funcie de natura fenolului analizat din punct de
vedere al aciditii..
Reacii de culoare
Reacia cu clorura feric
Reacia se bazeaz, n principiu, pe proprietatea fenolilor de a reaciona, n soluii neutre sau slab
acide, cu soluii diluate de clorur feric formnd sruri bazice de fier sau combinaii complexe colorate
specific. Clorura feric este un oxidant slab, ionul de fier reducndu-se din Fe 3+ n Fe2+. Aceast reacie
este caracteristic gruprii funcionale HO -:
OFe 2+

OH
+ (Fe 3+ + 3Cl-)

fenol

+ 2Cl- + (H+ + Cl-)

ion complex, colorat

Reactivi i materiale necesare:


- fenol pa;
- rezorcin pa;
- pirogalol;
- -naftol;
- - clorur feric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
n eprubete diferite se dizolv n ap distilat cteva cristale de fenoli (fenol, rezorcin, pirogalol,
-naftol). n fiecare eprubet se introduc apoi 1-2 picturi dintr-o soluie apoas de clorur feric 1%. Se
va constata apariia unor coloraii caracteristice:
- violet pentru fenol i -naftol);
- albastru-violet pentru 1,2 xilenol-3 i rezorcin;
- albastru pentru o-, m-, i p-crezolii, 1,3 xilenol-4, hidrochinona i floroglucina;
- verde pentru pirocatechin i -naftol;
- albastru verzui pentru hidroxi-hidrochinon;
- rou-brun pentru pirogalol.

21

Reacia cu acidul azotos (reacia Liebermann)


Fenolii, tratai cu azotii, n mediu de acid sulfuric, conduc la apariia unei coloraii specifice n
funcie de natura fenolului. La adugare de ap, culoarea vireaz spre rou intens datorit formrii unor
compui de natur chinonic.
Reactivi i materiale necesare:
- fenol pa;
- acid sulfuric pa;
- reactiv Liebermann;
- eprubete;
- pahare Berzelius.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se dizolv o cantitate mic de fenol n acid sulfuric concentrat. Peste aceast
soluie se adaug reactiv Liebermann (KNO 2 5% n acid sulfuric concentrat) constatndu-se apariia unei
coloraii caracteristice fenolului. Dac se introduce amestecul colorat din eprubet ntr-o cantitate mic de
ap distilat se va observa virarea culorii spre rou datorit formrii unor colorani cu structur chinonic
din clasa indofenolilor (Jurc i colab., 1984):
OH

OH

NO

NOH

+ KNO2 ; H2 SO4

p-nitrozofenol (forme tautomere)

Tautomerul cu structur p-chinoid reacioneaz cu fenolul conducnd la obinerea indofenolului, colorat


n rou:

NOH +

OH

OH

indofenol
Reacia ftaleinelor
Reacia se bazeaz, n principiu, pe proprietatea fenolilor de a participa, n anumite condiii, la reacii
de condensare cu formare de ftaleine, compui organici cu structur trifenilmetanic incolori n mediu acid
(structur lactonic) i colorai n mediu bazic (structur chinonic). Este o reacie caracteristic grupei
funcionale HO-.
Reactivi i materiale necesare:
- fenol pa;
- anhidrid ftalic pa;
- acid sulfuric pa;
- hidroxid de sodiu;
- eprubete;

22

- pahare Berzelius.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc cteva cristale de fenol, o cantitate mic de anhidrid ftalic i cteva
picturi de acid sulfuric concentrat. Amestecul se nclzete cu atenie la flacra unui bec de gaz timp de
cteva minute, dup care se rcete i se adaug, cu pictura, hidroxid de sodiu de concentraie 5-10% pn la
apariia coloraiei roii caracteristice fenolftaleinei n mediu alcalin.

HO

OH
C
+

+
O
fenol

anhidrid ftalic

HO

OH

+2HO-

+2H
C

HO

2Na+

C
O-

fenolftalein (forma lactonic)

fenolftalein (forma chinonic)

n chimia analitic fenolftaleina este utilizat ca indicator de pH.


Bromurarea fenolilor
Reacia de bromurare este o reacie de substituie la nucleul aromatic care se petrece mai uor n
cazul fenolilor comparativ cu alte hidrocarburi aromatice datorit prezenei grupei funcionale OH,
substituent de ordinul I, care activeaz poziiile orto i para ale nucleului aromatic datorit conjugrii
electronilor neparticipani de la atomul de oxigen cu electronii din nucleul aromatic.
Bromurarea fenolului decurge aproape instantaneu conducnd la obinerea compusului tribromurat
2,4,6-tribromfenol.
OH

OH

Br

Br

+ 3HBr

+ 3Br 2

fenol

Br

2,4,6 - tribrom fenol

Reactivi i materiale necesare:


- fenol pa;
- ap de brom;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduce 1ml soluie apoas de fenol 2% i apoi, cu pictura, ap de brom
(saturat). Se constat apariia unui precipitat alb de tribromfenol cu miros caracteristic. Adugarea n exces
de brom conduce la obinerea derivatului tetrabromurat de culoare galben care poate fi considerat derivat al
p-chinonei.

23

Reacii caracteristice aminelor


Aminele sunt compui organici cu caracter bazic (datorit perechii de electroni neparticipani de
la atomul de azot) care conin n molecul una sau mai multe grupe amino (-NH 2). Pot fi considerate
derivai ai amoniacului rezultate prin nlocuirea parial sau total a atomilor de hidrogen cu radicali
hidrocarbonai. Dup numrul de atomi de hidrogen nlocuii aminele se clasific n primare, secundare i
teriare.
Evidenierea caracterului bazic
Aminele prezint caracter bazic avnd proprietatea de a forma, n soluie apoas, hidroxizi complet
ionizai.

NH 3+ + HO-

NH2 + HOH

Caracterul bazic al aminelor variaz n funcie de natura i numrul radicalilor din molecul. Astfel,
aminele alifatice sunt baze mai tari dect amoniacul, iar aminele aromatice sunt baze mai slabe dect
amoniacul. Caracterul bazic se determin prin aciunea acizilor asupra aminelor sau cu ajutorul indicatorilor.
Reactivi i materiale necesare:
- anilin pa;
- acid clorhidric pa;
- soluie indicator metilorange;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 2ml soluie acid clorhidric diluat i o pictur de
metilorange. Se va observa colorarea soluiei acide n rou. La adugarea ctorva picturi de anilin culoarea
roia va vira n galben din cauza modificrii pH-ului mediului, modificare datorat caracterului bazic al
anilinei; n soluie se formeaz clorhidrat de anilin.

NH3Cl

NH2

+ HCl
anilin

clorhidrat de anilin

Reacia cu acidul azotos


Reacia cu acidul azotos are loc diferit n funcie de natura aminelor.
Reacia aminelor primare cu acidul azotos
Aminele primare alifatice reacioneaz cu acidul azotos conducnd la obinerea alcoolului
corespunztor:

NH2 + ON

OH

OH + N2 + H2O

Aminele primare aromatice reacioneaz cu acidul azotos n mediu acid, formnd sruri de
diazoniu:

C6H5

NH2 + ON

anilin

OH + HCl

C6H5

+
N

N Cl - + 2H2O

clorur de benzendiazoniu

Srurile de diazoniu, compui foarte reactivi prezint importan deosebit fiind utilizate drept
produse intermediare pentru prepararea multor substan e organice. Identificarea lor se realizeaz facil prin

24

cuplare cu fenoli n soluie alcalin sau cu amine aromatice ter iare n solu ie acid. Din aceste reacii se
obin colorani azoici.
Reactivi i materiale necesare:
- anilin pa;
- acid clorhidric pa;
- azotit de sodiu;
- -naftol;
- hidroxid de sodiu;
- eprubete.
Mod de lucru
Clorura de benzendiazoniu (clorur de diazobenzen) rezultat din reacia anilinei cu acidul azotos
poate fi identificat prin cuplare cu -naftol, cnd se ob ine un colorant azoic, de culoare ro ie
caracteristic:
OH

C6H5

+
N Cl- +

C6H5

OH + HCl

Srurile de diazoniu sunt stabile la temperaturi joase motiv pentru care reac ia de diazotare se
efectueaz la temperaturi cuprinse n intervalul 0 5 oC).
ntr-o eprubet se dizolv 0,5ml anilin n 1-2ml acid clorhidric concentrat. Peste acest amestec
se adaug puin ap distilat pentru dizolvarea clorhidratului de anilin care se formeaz, se rce te
coninutul eprubetei dup care se adaug cteva picturi dintr-o solu ie de azotit de sodiu. Prezena
azotitului de sodiu conduce la formarea acidului azotos necesar diazotrii. Solu ia srii de diazoniu,
rcit, se trateaz cu -naftol n hidroxid de sodiu (se adaug n picturi sub agitare) i se observ apari ia
unui precipitat de culoare roie, caracteristic.
Reacia aminelor secundare cu acidul azotos
Aminele secundare reacioneaz cu acidul azotos formnd nitrozamine:

R
NH + HONO

N
R

NO + H2O

Nitrozamin

Nitrozaminele pot fi identificate cu ajutorul fenolului n mediu de cid sulfuric (reac ia Lieberman)
Reactivi i materiale necesare:
- difenilamin pa;
- alcool etilic pa;
- acid clorhidric pa;
- acid sulfuric pa;
- azotit de sodiu pa;
- fenol;
- eprubete.

25

Mod de lucru
ntr-o eprubet se dizolv, prin nclzire uoar ,1g difenilamin n 3ml alcool etilic dup care se
adaug imediat 0,5g azotit de sodiu dizolvat n prealabil ntr-un ml ap distilat. Se rcete puternic
eprubeta i se observ formarea unui precipitat de culoare galben de nitrozamin. Amestecul se filtreaz
iar cteva cristale din nitrozamina obinut se introduc ntr-o eprubet uscat i se trateaz cu 0,5g fenol.
Eprubeta se nclzete uor timp de 20 secunde, se rce te i se adaug cu precau ie 1ml acid sulfuric
concentrat. Se va observa apariia unei colora ii caracteristice. Prin diluare solu ia capt o nuan ro uintens.
]
Reacia aminelor teriare cu acidul azotos
Aminele teriare mixte reacioneaz cu acidul azotos conducnd la p-nitroderiva ii corespunztori.
H 3C

H 3C
N

+ HONO

NO + H2O

H 3C

H 3C

N-dimetilanilin

p-nitrozodimetil-anilin

Aminele teriare aromatice formeaz de asemenea nitrozoderiva i substitui i la nucleu, n timp ce


aminele teriare alifatice reacioneaz diferit, conducnd la sruri ale acidului azotos.
Reactivi i materiale necesare:
- dimetilanilin pa;
- azotit de sodiu pa;
- acid clorhidric pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eter etilic pa;
- plnie de separare;
- cristalizor;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se dizolv 0,5ml dimetilanilin n 4 ml acid clorhidric diluat dup care amestecul
se rcete prin introducerea unor buci mici de ghea. Sub agitare energic se adaug, cu pictura, 2 ml
dintr-o soluie de azotit de sodiu 20%. Se las amestecul timp de 5 minute n repaus i apoi se adaug o
soluie de hidroxid de sodiu, observndu-se formarea unui precipitat de culoare verde de p-nitrozodimetilanilin.
p-nitrozodimetil-anilina format poate fi extras cu eter etilic utiliznd o plnie de separare.
Soluia eteric rezultat se introduce ntr-un cristalizor unde dup evaporarea eterului rmne pnitrozodimetil anilina sub form de foie de culoare verde.
Reacia de bromurare
Aminele aromatice particip la reacii de substituie la nucleul aromatic n poziiile orto i para.
Astfel, bromurarea anilinei conduce la obinerea compusului tribromurat 2,4,6-tribromanilina.
NH2

NH2
Br

+ 3HBr

+ 3Br2

anilin

Br

Br
2,4,6 tribromanilina

26

Reactivi i materiale necesare:


- anilin pa;
- ap de brom;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduce 1ml anilin peste care se adaug, cu pictura, ap de brom. Se va
constata decolorarea apei de brom i separarea 2,4,6-tribromanilinei, compus cristalizat de culoare alb.
Reacii de culoare
Aminele alifatice primare i secundare, n soluie acetonic, dau cu nitroprusiatul de sodiu,
Na2[Fe(CN)5NO]x2H2O, o coloraie albastr.
Aminele aromatice dau coloraii intense cu dioxidul de plumb n soluie acetic.
Reactivi i materiale necesare:
- dimetilamin pa;
- nitroprusiat de sodiu pa;
- acid acetic;
- dioxid de plumb;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 1-2ml amin alifatic (dimetilamin), 1-2ml aceton i
1-2ml soluie de nitroprusiat de sodiu proaspt preparat. Se constat apariia unei coloraii albastre a
crei intensitate este dependent de natura aminei utilizate.
ntr-o alt eprubet se introduc cteva picturi de amin aromatic (anilin), 1-2ml acid acetic
diluat (3:8) i cteva cristale de dioxid de plumb. Se agit coninutul eprubetei i se observ apariia unei
coloraii intense brun-negre.

27

LUCRAREA 5
Reacii caracteristice compuilor carbonilici (aldehide i cetone)
Combinaiile carbonilice sunt substane organice care conin n molecula lor grupa funcional
carbonil. Prin valenele libere de la atomul de carbon, grupa carbonil se poate lega de un radical organic i
un atom de H (aldehide) sau de doi radicali organici identici sau diferii (cetone).
Grupa carbonil are o reactivitate mare datorit diferenei de electronegativitate dintre atomii
oxigen i carbon. Oxigenul, mai electronegativ, atrage electronii ai legturii duble, determinnd
polarizarea legturii C-O.
Reactivitatea aldehidelor este superioar cetonelor. Reactivitate a grupei carbonil este mai mare
cnd este legat de un radical alifatic comparativ cu unul aromatic.
Reacii de culoare caracteristice aldehidelor i cetonelor
a) Reacia Schiff
Metoda const, n principiu, n identificarea aldehidelor prin modificarea culorii reactivului
Schiff.
Fucsina sau rozanilina, colorant cu structur trifenilmetanic, este colorat datorit structurii sale
chinoide. Decolorarea sa se realizeaz prin sulfonare la atomul de carbon central. Ocantitate n exces de
agent de sulfonare reacioneaz cu grupele amino.
Reacia cu aldehidele este complex, literatura de specialitate menionnd dou mecanisme.
Primul mecanism presupune reacia grupelor aldehidice cu grupele sulfonice din acidul
fucsinsulfonic (reactivul Schiff) care conduce la formarea unei sulfonamide, produs de reacie colorat.
n cel de-al doilea mecanism fucsina, acidul sulfuros i aldehida se combin conducnd la
obinerea unui acid alchilsulfonic, cu sulful legat de un atom de carbon fa de mecanismul anterior n
care sulful era legat la atomii de azot ai grupelor aminice (Hardonk et Duijn, 1964)
Reactivi i materiale necesare:
- aldehid pa;
- fucsin pa;
- sulfit acid de sodiu pa;
- acid clorhidric;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduce o cantitate mic de aldehid (daca aldehida este n stare solid este
necesar mojararea sa pn la obinerea unei pulberi fine) i 1-2ml reactiv Schiff (1g fucsin se dizolv
ntr-un litru ap distilat. n aceast soluie se introduc 20ml soluie sulfit acid de sodiu 28% i se las n
repaus aproximativ o or timp n care soluia se decoloreaz. n continuare se adaug 10ml acid clorhidric
concentrat. Soluia rezultat se pstreaz ntr-un vas din sticl nchis ermetic, la ntuneric). Se agit bine
coninutul eprubetei i se va constata, dup 10-15 minute, apariia unei coloraii roiu-violet caracteristice.
b) Reacia cu nitroprusiatul de sodiu
Nitroprusiatul de sodiu este un compus anorganic cu formula Na 2[Fe(CN)5NO]x2H2O i structura
urmtoare:

28

2-

O
N

N
C

2Na+

N
C

Fe
C
N

C
C

N
Reacia cu nitroprusiatul de sodiu se bazeaz, n principiu, pe capacitatea acestuia de a colora
specific cetonele.
Reactivi i materiale necesare:
- aceton pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- nitroprusiat de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc cteva picturi de aceton i o cantitate mic dintr-o de soluie de
NaOH. Amestecul se trateaz cu civa mililitri soluie diluat de nitroprusiat de sodiu proaspt preparat.
Se va constata apariia unei coloraii rou aprins, caracteristic.
Reacii de adiie
Reacia de adiie la dubla legtur a grupei carbonil este caracteristic att aldehidelor ct i
cetonelor.
Adiia disulfitului de sodiu la toate aldehidele i la cetonele alifatice conduce la obinerea de
sruri ale unor acizi sulfonici combinaii disulfitice), frumos cristalizate, folosite pentru separarea
aldehidelor i cetonelor din amestecurile lor cu alte substane:

OH

O
R

+ HSO3Na

SO3Na

aldehid

sarea de sodiu a acidului


alchil -hidroxisulfonic

OH

O
R

+ HSO3Na
R

ceton

R
SO3Na

sarea de sodiu a acidului


dialchil -hidroxisulfonic

Aldehidele reacioneaz mai uor cu sulfitul de sodiu comparativ cu cetonele.

29

Reactivi i materiale necesare:


- aceton pa;
- sulfit de sodiu pa;
- acid sulfuric pa;
- fenolftalein 1%;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduce 1ml de sulfit de sodiu neutru de concentraie 5-10% i o pictur de
fenolftalein 1%. Dac apare o coloraie roz, se neutralizeaz soluia cu cteva picturi de acid sulfuric
diluat. Peste amestecul obinut se adaug cteva picturi de aceton i se constat apariia unei coloraii
rou intens a lichidului din eprubet datorit prezenei ionilor hidroxil n mediu.

OH

O
H3C

+ HSO3Na

H3C

CH3

CH3
SO3Na

aceton

dimetil -hidroxisulfit de sodiu

Reacii de condensare
Se numesc reacii de condensare ale aldehidelor i cetonelor unele adiii i substituii n care un
compus cu grup carbonil (componenta carbonilic) se unete cu substane coninnd o grup CH, CH 2
sau CH3 (componenta metilenic) crend o nou legtur C-C (Neniescu, 197). Reaciile de condensare
sunt foarte variate.
Reacia de condensare cu aminele primare
Aldehidele reacioneaz cu aminele primare rezultnd produi de condensare numii azometine
sau baze Schiff. Bazele Schiff rezultate n urma condensrii aldehidelor aromatice cu amine aromatice
sunt stabile
n cazul particular al aldehidei benzoice aceasta reacioneaz cu anilina conducnd la obinerea
benziliden anilinei.
H
C

H
+

C
H

O H

aldehida benzoic

anilina

benzilidenanilina

Reactivi i materiale necesare:


- aldehid benzoic pa;
- anilin pa;
- alcool etilic pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 1ml aldehid benzoic i 1ml anilin. Amestecul se
nclzete la flacr mic timp de 5-10 minute. Dup acest interval de timp coninutul eprubetei se
rcete, se adaug cteva picturi de alcool etilic i apoi se freac energic cu o baghet pereii eprubetei
pentru a declana procesul de precipitare al bazei Schiff rezultate (la nceput se prezint ca un lichid
uleios).
Reacia de condensare cu hidroxilamina

30

Aldehidele i cetonele se condenseaz uor cu hidroxilamina formnd substane cristalizate cu


temperaturi de topire caracteristice numite aldoxime i respectiv cetoxime:

R
H

O + NH2 OH

R
-H2O

aldehid hidroxilamina

R
R

O + NH2 OH

N OH

aldoxim

R
-H2O

ceton hidroxilamina

N OH

cetoxim

Reactivi i materiale necesare:


- aldehid benzoic pa;
- clorhidrat de hidroxilamin pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- flacon Erlenmeyer.
Mod de lucru
ntr-un flacon Erlenmeyer se dizolv 0,5g clorhidrat de hidroxilamin n 3ml ap distilat, se
adaug apoi 2ml NaOH 10% i 0,2g aldehid sau ceton insolubile n ap. Dac se folosete aldehid
benzoic, amestecul se nclzete pe o baie de ap timp de zece minute, apoi se rcete i apoi se freac
cu o baghet de sticl pereii vasului pentru a grbi cristalizarea.
Reacia de condensare cu fenilhidrazina
Fenilhidrazina se condenseaz uor cu aldehidele i cetonele conducnd la obinerea de
fenilhidrazone, substane solide i cristalizate. Reacia este utilizat n chimia analitic pentru
identificarea i caracterizarea compuilor carbonilici.

R
C

O + H 2N

aldehid

NH

C6H5

fenilhidrazina

C
H

NH

C6H5 + H2O

fenilhidrazona aldehidei

R
C

O + H2N

NH

C6H5

R
ceton

fenilhidrazina

C
R

NH

C6H5 + H2O

fenilhidrazona cetonei

Reactivi i materiale necesare:


- aldehid pa;
- ceton pa;
- fenilhidrazin pa;
- acid acetic glacial pa;
- acetat de sodiu cristalizat;
- alcool etilic pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat se introduce o cantitate mic de aldehid sau ceton (cteva picturi sau un
vrf de spatul n funcie de starea de agregare) i se dizolv n ap sau alcool etilic. Peste aceast soluie
se adaug cteva picturi de fenilhidrazin (o cantitate aproximativ echivalent cu cantitatea de aldehid
sau ceton) i un numr dublu de picturi de acid acetic glacial. Amestecul se agit foarte bine i se

31

supune fierberii timp de cteva minute. Dup rcire sau prin adugare de ap distilat se va constata
precipitarea fenilhidrazonei corespunztoare compusului carbonilic introdus n reacie.
n cazul necesitii de a se identifica un compus carbonilic, determinarea punctului de topire al
hidrazonei corespunztoare d indicaii asupra naturii substanei, aceast proprietate fizic fiind
caracteristic pentru fiecare fenilhidrazon n parte.
Reacia de condensare aldolic
Aldehidele i cetonele se condenseaz ntre ele (n mediu alcalin sau acid) rezultnd
hidroxialdehide sau hidroxicetone. Astfel, prin condensarea a dou molecule de aldehid acetic se obine
un aldol care, la nclzire sau n prezena catalizatorilor, elimin apa intramolecular cu formare de
aldehid crotonic. Aldehida crotonic se poate condensa n continuare, n mediu puternic alcalin, cu una
sau mai multe molecule de acetaldehidconducnd la aldehide nesaturate superioare. Prin condensarea
unui numar mare de molecule, n condiiile menionate, rezult o rin de aldehid macromolecular,
substan nesaturat i colorat..

H3C

O + H3C

H
acetaldehid

H3C

OH

-H2O
H3C

aldehid crotonic
Reactivi i materiale necesare:
- aldehid acetic pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.

Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 2ml aldehid acetic i aproximativ 1ml soluie
concentrat hidroxid de sodiu. Coninutul eprubetei se nclzete la fierbere i se observ colorarea
amestecului n galben apoi n brun, dup care se separ rina aldehidic recunoscut dup mirosul
caracteristic, ptrunztor.
Reacii specifice aldehidelor
Aldehidele particip la reacii specifice care, prin natura lor, nu se pot desfura n cazul
cetonelor. Astfel, aldehidele se transform uor n acizi prin oxidare. Procesul se poate realiza cu ageni
oxidani sau cu oxigen molecular.

R
C

O + [O]

aldehid

OH

acid carboxilic

Deoarece se oxideaz foarte uor, aldehidele funcioneaz ca substane puternic reductoare,


proprietate foarte utilizat pentru identificarea lor.

32

Reacia Tollens
Reacia se bazeaz, n principiu, pe proprietatea aldehidelor de a reduce soluiile amoniacale de
azotat de argint (reactiv Tollens) cu depunere de argint metalic, de multe ori sub forma unei oglinzi de
argint (Neniescu, 1974). Aldehida, sub form de hidrat este oxidat de hidroxidul de argint amoniacal
(reactiv Tollens) pn la acid carboxilic i argint metalic.

R
C

O + HOH

CH

OH

OH

aldehid

hidratul aldehidei

AgNO3 + 2NaOH = Ag2O + 2NaNO3 + H2O


Ag2O + 4NH4OH = Ag(NH3)2OH + H2O
hidroxid de argint
amoniacal

R
CH

OH + 2[Ag(NH3)2]+OH-

OH

O + 2Ag + 4NH3 + 2H2O

OH
acid carboxilic
Reactivi i materiale necesare:
- aldehid formic pa;
- glucoz pa;
- azotat de argint pa;
- hidroxid de amoniu pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru

Reactivul Tollens se prepar extemporaneu prin amestecarea unor volume egale de soluie de
azotat de argint 10% i NaOH 10% dup care se adaug cu pictura hidroxid de amoniu, pn la
dizolvarea complet a oxidului de argint i formarea hidroxidului de argint amoniacal.
ntr-o eprubet foarte curat i uscat se introduce o soluie diluat de aldehid formic (sau o
aldoz cum este glucoza deoarece reacia este specific i pentru glucidele reductoare) i se trateaz cu
cteva picturi de reactiv Tollens. Se va constata apariia imediat sau dup meninerea eprubetei timp de
cteva minute ntr-o baie de ap la temperatura de aproximativ 70 oC a unei oglinzi de argint pe pereii
eprubetei.
Argintul care a aderat la pereii eprubetei poate fi ndeprtat uor cu o cantitate mic de acid
azotic concentrat.
Reacia Fehling
Reacia se bazeaz, n principiu, pe proprietatea aldehidelor de a reduce soluiile alcaline ale
ionului de cupru divalent pn la oxid cupros. Soluia alcalin a ionului de cupru divalent (reactivul
Fehling) se obine prin amestecarea unei soluii apoase alcalinizate de sulfat de cupru divalent cu o soluie
de tartrat de sodiu i potasiu. Prin amestecarea sulfatului de cupru cu carbonatul alcalin are loc reacia:

2CuSO4 + Na2CO3 + 2H2O

CuCO3xCu(OH)2 + 2NaHSO4

Tartratul dublu de sodiu i potasiu conduce la formarea unui complex tartro-cupric solubil, de
culoare albastr, care mpiedic apariia oxidului cupric de culoare neagr.

33

ONa

COOK

COONa
C

CHOH
Cu(OH) 2 + 2

HC

OH

Cu

HC

OH + 2H 2O

CHOH
H

COOK
COOK

ONa

Cuprul din complexul tartrocupric este redus, la cald, de aldehid cu formarea unui precipitat de oxid
cupros de culoare rou-crmizie:
ONa

COOK
COONa

H
CHOH

H
2 HC

OH

Cu

HC

OH +

C
H

O + 2H 2O

CHOH

+ HCOOH +Cu2O

C
COOK

COOK

ONa

Aldehidele aromatice, cu excepia 2,4-dihidroxibenzaldehidei i cetonele, cu excepia


hidroxicetonelor, nu reduc reactivul Fehling.
Reactivi i materiale necesare:
- aldehid formic pa;
- sulfat de cupru cristalizat pa;
- tartrat de sodiu i potasiu (sare Seignette) pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
Reactivul Fehling se obine prin amestecarea unor volume egale din soluiile Fehling I (3,4 g
sulfat de cupru cristalizat, CuSO 4x5H2O, se dizolv n 50ml ap distilat) i Fehling II (13,7g tartrat de
sodiu si potasiu i 5g NaOH se dizolv n 50ml ap distilat).
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 2ml aldehid formic i aproximativ 5ml reactiv
Fehling (amestec n pri egale din reactivii Fehling I i Fehling II). Amestecul se fierbe i se constat
apariia unui precipitat rou crmiziu de oxid de cupru (II). Reaciile care au loc sunt urmtoarele:
Reacii specifice cetonelor
Reacia iodoformului
Reacia se bazeaz, n principiu, pe proprietatea cetonelor -metilate de a reaciona cu iodul n
soluie alcalin conducnd la formarea iodoformului care se recunoate uor datorit mirosului
caracteristic de produs antiseptic:

R
O

C
R

+ 3 I2
CH3
I
C I + 3KOH
I

I
C

I + 3HI
I
R

I
C OK +HC I
I

iodoform

34

Reactivi i materiale necesare:


- aceton pa;
- hidroxid de potasiu pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- iod pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 1-2ml aceton i 2-4 picturi dintr-o soluie apoas de hidroxid de
potasiu. Amestecul se nclzete la temperatura de 50-60 oC dup care se adaug cu pictura soluie de iod
pn cnd lichidul se coloreaz n galben deschis. Excesul de iod se ndeprteaz cu hidroxid de sodiu
(pn la decolorare) i se va constata apariia iodoformului sub forma unui precipitat de culoare galben
deschis, cu miros caracteristic

35

LUCRAREA 6
Reacii caracteristice combinaiilor carboxilice (acizi organici)
Combinaiile care conin n molecul grupa funcional carboxil se numesc acizi organici sau
acizi carboxilici.

O
C
OH

grupa funcional carboxil


Cele dou funciuni prezente n grupa funcional carboxil, hidroxil i carbonil, se influeneaz
reciproc i dau nsuiri caracteristice acestei funciuni
Acizii organici sunt stabili din cauz c sunt produi finali ai unor reacii de oxidare i pot fi
recunoscui prin diferite reacii.
Acizii organici pot fi clasificai n funcie de numrul grupelor carboxil din molecul
(monocarboxilici, dicarboxilici, policarboxilici) sau dup natura radicalului hidrocarbonat (saturai,
nesaturai, aromatici).
Reacia cu bicarbonaii
Acizii carboxilici tratai cu carbonai acizi (de sodiu sau potasiu) produc efervescen datorit
degajrii dioxidului de carbon din bicarbonat i formarea srii (de sodiu sau potasiu) corespunztoare:

COOH + NaHCO3 = R

COO-Na+ + CO2 + H 2O

La adugarea unei cantiti mici de acid mineral se reface acidul organic:

COO -Na+ + HCl = R

COOH + NaCl

Dup intensitatea cu care se degaj dioxidul de carbon putem avea indicaii asupra triei acidului
respectiv.
Reacia cu bicarbonaii nu este o reacie specific pentru c, pe de o parte, unii acizi carboxilici
slabi nu dau reacie cu carbonaii acizi i pe de alt parte exist compui, alii dect acizii organici, care
descompun carbonaii cu degajare de dioxid de carbon (acizii sulfonici, trinitrofenolul, acidul picric etc.
Reactivi i materiale necesare:
- acid acetic pa;
- carbonat acid de sodiu sau de potasiu pa;
- sticl de ceas.
Mod de lucru
Pe o sticl de ceas se pun n jur de 2g carbonat acid de sodiu fin pulverizat i se umecteaz cu o
pictur de ap. Se nclzete substana uor la flacra unui bec de gaz dup care se adaug o cantitate
mic de acid acetic i se constat apariia unei efervescene determinat de degajarea dioxidului de
carbon.
Reacia cu clorura feric
Reacia cu clorura feric este o reacie de culoare care se bazeaz pe proprietatea acizilor organici
de a forma sruri complexe de fier colorate n galben.
Reactivi i materiale necesare:
- acid acetic pa;
- acid oxalic pa;
- acid tartric pa;
- acid lactic pa;

36

- fenol pa;
- clorur feric pa;
- carbonat acid de sodiu sau de potasiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc civa ml soluie apoas de clorura feric peste care se adaug cteva
picturi soluie apoas de fenol pn la apariia culorii violet. n mai multe eprubete se introduc 1-2ml
soluie din acizii organici de cercetat (n locul acidului lactic se poate folosi zer din lapte care conine acid
lactic liber) i cte 2-3 picturi soluie de clorur feric ce conine fenol. Se va observa apariia unei
coloraii galbene, uneori cu nuane verzui.
Reacia de identificare a acidului formic
Acidul formic sau metanoic este un acid monocarboxilic saturat (HCOOH) ca un lichid incolor,
cu miros neptor puternic i ptrunztor, coroziv pentru piele.
Acidul formic poate fi identificat prin reacii de precipitare, reacii de culoare (cu furfurolul sau
ferocianura de potasiu) etc.
Precipitarea cu hidroxid de bariu se petrece n soluie apoas i n prezena bromului care
acioneaz ca agent oxidant elibernd dioxid de carbon n mediul de reacie. Dioxidul de carbon
reacioneaz cu hidroxidul de bari conducnd la obinerea precipitatului de carbonat de bariu:

HCOOH + Br2
CO2 + Ba(OH)2

2H + + 2Br- + CO 2
BaCO3 + H2O

Reactivi i materiale necesare:


- acid formic pa;
- ap de brom;
- hidroxid de bariu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet, curat i uscat, se trateaz o soluie apoas de acid formic cu puin brom i o
soluie de hidroxid de bariu. Amestecul format se nclzete uor i se observ c soluia din eprubet se
tulbur din cauza formrii carbonatului de bariu, precipitat insolubil.
Reacia de oxidare a acidului formic
Spre deosebire de omologii superiori, acidul formic are proprieti reductoare. Aceast
proprietate este utilizat pentru identificarea sa prin evidenierea dioxidului de carbon care rezult n
prezena unor ageni de oxidare:
Reactivi i materiale necesare:
- acid formic pa;
- permanganat de potasiu pa;
- acid sulfuric pa;
- ap de var sau ap de barit (soluie apoas de hidroxid de bariu, utilizat pentru identificarea
CO2;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet, prevzut cu un tub de evacuare, se introduc 0,5ml acid formic, 1ml acid sulfuric
i 2-3ml permanganat de potasiu. Captul tubului recurbat se introduce ntr-o alt eprubet ce conine 12ml ap de var sau ap de barit. Se nclzete cu atenie amestecul pn ncepe s fiarb i se observ
decolorarea amestecului de permanganat din prima eprubet i formarea unui precipitat sau o tulbureal
de carbonat de calciu sau bariu n a doua eprubet.

37

Reacia de oxidare a acidului formic este urmtoarea:


OH
OH

+[O]

OH

CO2 + Ca(OH)2

H2O + CO2

CaCO3 + H2O

Reacia de descompunere a acidului formic


Acidul formic i srurile sale se descompun n prezena acizilor minerali tari, ca urmare a unui
proces de deshidratare, n dioxid de carbon i ap:

HCOOH

CO + H 2O

Reactivi i materiale necesare:


- acid formic sau formiat de sodiu pa;
- acid sulfuric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet, prevzut cu dop prin care trece un tub efilat, se amestec, cu atenie, 1ml acid
sulfuric concentrat i 0,5ml acid formic anhidru sau 1g formiat de sodiu. n urma reaciei se degaj oxid
de carbon care poate fi evideniat prin faptul c prezint proprietatea de a arde cu flacr de culoare
albastr, caracteristic.
Reacia de formare i descompunere a formiatului de argint
Capacitatea reductoare a azotatului de argint poate fi utilizat pentru evidenierea sa sau a
srurilor sale cu ajutorul azotatului de argint. ntr-o prim etap rezult formiat de argint care prin
nclzire se descompune n argint metalic care se depune sub form de oglind pe pereii eprubetei n care
se desfoar experimentul i acid formic care va acidifia mediul de reacie:

HCOONA + AgNO3
HCOO-Ag+ + NaNO3
2HCOO -Ag+
2Ag + HCOOH +CO2
Reactivi i materiale necesare:
- formiat de sodiu pa;
- azotat de argint pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 1-2ml soluie formiat de sodiu 1% i cteva picturi azotat de argint,
soluie apoas 1-2%. Rezult formiatul de argint care se prezint sub forma unui precipitat de culoare
alb. Se verific neutralitatea soluiei cu ajutorul unei hrtii indicatoare de pH. Se nclzete amestecul i
se constat apariia unui precipitat negru de argint metalic care se depune pe pereii eprubetei sub forma
unei oglinzi. n plus, verificarea pH-ului dovedete c soluia prezint caracter acid.
Reacia de identificare a acidului acetic cu clorur feric
Acidul acetic numit i acid etanoic, este un lichid incolor cu miros ptrunztor i iritant. Acidul
acetic pur (anhidru) se numete acid acetic glacial datorit aspectului de ghea al cristalelor care se
formeaz la o temperatura de 16,6 oC (temperatura de solidificare). n solu ii diluate se nume te o et
(folosit n alimentaie).
Cu o soluie de clorur de fier (III) n mediu alcalin, acidul acetic d o coloraie rou-brun
caracteristic, datorit formrii ionului complex triferidiolhexaacetic:
8CH3COONa + 3FeCl3 + 2H2O

Fe 3(OH)2(CH 3COO) 6 +Cl- + 8NaCl + 2CH 3COOH

38

Dac se dilueaz cu ap i apoi se nclzete la fierbere, rezult un precipitat brun de acetat de fier
ca urmare a descompunerii complexului:

Fe3(OH)2(CH3COO)6 +Cl- + 4H 2O

3CH 3COOFe(OH)2 + 3CH3COOH + HCl

Reactivi i materiale necesare:


- acetat de sodiu pa;
- clorur feric pa;
- ferocianur de potasiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2ml acetat de sodiu 20% i 1ml clorur feric 1%. Se constat apariia
unei coloraii roii. Dac peste aceast soluie se adaug 2ml ap distilat i se nclzete amestecul la
fierbere va aprea un precipitat rou-brun de acetat de fier.
Se oprete nclzirea i se las eprubeta pentru a se decanta precipitatul. Se pipeteaz, ntr-o alt
eprubet, 3-4ml supernatant peste care se adaug cteva picturi de ferocianur de potasiu. Se va constata
c nu se formeaz albastru de Berlin, pigment caracteristic rezultat prin reacia ionilor de fier trivalent cu
ferocianura de potasiu ceea ce nseamn c n mediul de reacie ionii de fier sunt divaleni..
Reacia de identificare a acidului acetic prin esterificare
Acidul acetic reacioneaz cu alcoolul etilic formnd acetatul de etil:

CH3COOH + C2H5OH

CH3COOC2H5 + H2O

Aceast reacie este reversibil, ajungndu-se la un amestec de echilibru. Pentru a obine


randamente ct mai mari de ester una din componente trebuie s fie n exces.
Reacia de esterificare a acidului acetic cu alcoolul etilic se desfoar cu vitez mic. n practic,
reacia este condus la temperaturi ridicate (150 oC, vas nchis) sau n prezen de catalizatori acizi (acid
clorhidric 3% sau acid sulfuric 5-10%, fa de alcoolul introdus n reacie).
Reactivi i materiale necesare:
- acid acetic pa;
- alcool etilic pa;
- acid clorhidric sau sulfuric concentrai pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 3ml acid acetic, 4ml etanol (n exces fa de acidul
acetic) i 0,4ml acid sulfuric concentrat (sau 0,12ml acid clorhidric concentrat). Se va constata degajarea
unui miros specific i plcut de fructe, caracteristic acetatului de etil care rezult n urma reaciei de
esterificare.
Acidul benzoic, C6H5 COOH, se prezint sub form de cristale cu punctul de topire la 121,4 0 C
i este solubil n ap fierbinte. Cu clorura feric formeaz un precipitat de culoare brun n mediu neutru.
Reacie de identificare a acidului benzoic
Acidul benzoic este cel mai simplu acid carboxilic aromatic cunoscut, n special, datorit
utilizrilor multiple n conservarea alimentelor. Srurile i esterii si sunt denumite benzoai.
Acidul benzoic se oxideaz uor cu ap oxigenat, sub aciunea catalitic a acidului azotic,
conducnd la obinerea acidului salicilic:

39

COOH

COOH
OH

+ HNO3 + H2O

+ HNO 2 + H2O

Acidul salicilic se poate identifica prin coloraia violet pe care o d cu clorura feric:
COOH

COOH
OH
+ FeCl3

OFeCl2
+ HCl

Acidul benzoic mai poate fi identificat utiliznd proprietatea sa de a forma cu ionii ferici, n
mediu neutru un precipitat de culoare galben-crmizie de benzoat bazic de fier:

2Fe3+ + 6C6H5COO- + 3H2O

Fe2(OH)3(C6H5COO)3+ + 3C6H5COOH

Reactivi i materiale necesare:


- acid benzoic pa;
- acid salicilic pa;
- permanganat de potasiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 0,02g acid benzoic, 2ml ap distilat, cteva picturi de
peroxid de hidrogen i 1-2 picturi acid azotic. Eprubeta se agit bune dup care se ncearc identificarea
prezenei acizilor benzoic i salicilic cu o soluie diluat de clorur feric.
Evidenierea acidului oxalic
Acidul oxalic este primul din seria acizilor dicarboxilici, acizi mai tari dect acizii
monocarboxilici saturai. Influena acidifiant a unei grupe carboxil asupra celeilalte (efect inductiv) este
invers proporional cu distana dintre cele dou grupe funcionale. Ca urmare, acidul oxalic este acidul
cel mai tare din seria acizilor dicarboxilici saturai.
Acidul oxalic se gsete sub form de sruri de calciu sau magneziu (oxalai) n foiele externe ale
bulbului de ceap i n peiolul de Begonia. Dac o soluia care conine ionul oxalat este tratat cu o
soluie de clorur de calciu va precipita oxalatul de calciu, un precipitat de culoare alb puin solubil n
acid acetic i solubil n acizi minerali.
Reactivi i materiale necesare:
- clorur de calciu pa;
- acid acetic pa;
- acid clorhidric pa;
- material vegetal;
- eprubete.
Mod de lucru
Pentru obinerea extractului vegetal materialul biologic se mrunete, se mojareaz i se extrage,
timp de 10 minute, la cald, n ap distilat
Dup decantare se adaug clorur de calciu 10%. Prezena acidului oxalic este evideniat prin
formarea unui precipitat alb, dens, de oxalat de calciu. Se va testa solubilitatea oxalatului de calciu.

40

Reacia de oxidare a acidului oxalic cu permanganatul de potasiu


Acidul oxalic are proprieti reductoare spre deosebire de acizii superiori din serie, fiind oxidat
cantitativ de permanganatul de potasiu n soluie acid.

2KMnO4 + 3H2SO4 + 5H2C2O4 = 2MnSO4 + K2SO4 + 8H2O + 10CO2


Pe aceast reacie se bazeaz utilizarea acidului oxalic drept etalon n oxidimetrie, metod de
analiz chimic cantitativ bazat pe procesul de oxidare.
Reactivi i materiale necesare:
- acid oxalic pa;
- acid sulfuric pa;
- permanganat de potasiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se introduc 1ml soluie de acid oxalic 20% i civa mililitri acid
sulfuric diluat. Se nclzete eprubeta i se adaug pictur cu pictur soluie de permanganat de potasiu
2%. Se va observa decolorarea soluiei de permanganat de potasiu ca urmare a reducerii sale de ctre
acidul oxalic prezent n mediul de reacie.
Reacia de formare a oxalailor din formiai
nclzirea rapid a formiatului de sodiu la temperatura de 420 oC determin producerea unei
descompuneri violente a substan cu degajare de hidrogen i formarea oxalatului de sodiu:

2HCOONa

COONa
COONa

+ H2

Procedeul este utilizat pentru fabricarea industrial a acidului oxalic. Se poate scdea temperatura
de reacie a unor mici cantiti de hidroxid de sodiu. Prezena ionilor oxalat se evideniaz prin tratarea
amestecului de reacie cu o soluie de clorur de calciu cnd va precipita oxalatul de calciu, precipitat de
culoare alb:

COO

COONa
COONa

+ CaCl2

Ca +2NaCl
COO

Reactivi i materiale necesare:


- formiat de sodiu pa;
- clorur de calciu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet curat i uscat se nclzete 1g formiat de sodiu la o temperatur n jur de 400 oC.
Se va constata degajarea hidrogenului deoarece acesta aprins, n prezena aerului, arde provocnd o
pocnitur caracteristic.
Eprubeta se rcete i se adaug 3-4ml ap distilat, se agit i apoi se nclzete uor, pentru
accelerarea dizolvrii dup care se adaug cteva picturi de soluie de clorur de calciu 10%. Se va
constata formarea unui precipitat alb de oxalat de calciu, insolubil n acid acetic i uor solubil n acizi
minerali.
Reacia de descompunere a acidului oxalic
Acidul oxalic prin nclzire rapid la temperaturi de peste 200 oC se descompune n acid formic i
dioxid de carbon. Aceast reacie este favorizat de prezena glicerinei. Dac reacia se desfoar n
prezena acidului sulfuric concentrat rezult oxid de carbon, dioxid de carbon i ap:

41

COOH

HCOOH + CO2

COOH

CO + CO2 + H2O

Reactivi i materiale necesare:


- acid oxalic pa;
- ap de var sau ap de barit pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet prevzut cu tub recurbat se introduc 1-2g acid oxalic. Captul tubului recurbat se
introduce ntr-o eprubet ce conine 1-2ml ap de var sau ap de barit. Se nclzete eprubeta cu acid oxalic i
se constat degajarea unui gaz care n prezena apei de var sau a apei de barit determin apariia unui
precipitat.
Se scoate tubul recurbat din eprubet i se aprinde un chibrit la captul deschis al tubului pentru a
evidenia gazul care se degaj. Oxidul de carbon arde cu flacr albastr caracteristic.
Acidul oxalic cristalizat (C2H2O4x2H2O) pierde prin nclzire apa de cristalizare, se decarboxileaz i
trece n acid formic, care la rndul su se descompune n ap i oxid de carbon.
Reacia de descompunere a acidului oxalic este accelerat de prezena acidul sulfuric concentrat care
are capacitatea de a absoarbi apa de cristalizare

42

LUCRAREA 7
Reacii caracteristice acilglicerolilor
Acilglicerolii (gliceride) sunt esteri ai acizilor grai cu glicerina. Dup gradul de acilare al
grupelor hidroxil se deosebesc monoacilgliceroli, diacilgliceroli i triacilgliceroli. Acilglicerolii sunt cele
mai rspndite lipide n esuturile plantelor (uleiuri) i animalelor (grsimi).
Acizii grai care intr n structura acilglicerolilor sunt acizi monocarboxilici saturai sau
nesaturai, cu numr par de atomi de carbon i caten normal.
Esterificarea grupelor OH din glicerol se poate realiza cu acelai acid gras (acilgliceroli simpli)
sau cu acizi grai diferii (acilgliceroli micti). n natur predomin triacilglicerolii micti cu 2 sau cu 3
acizi grai diferii. Proprietile fizice ale acilglicerolilor sunt determinate n mare msur de proporia i
natura acizilor grai care intr n constituia lor. Proprietile chimice sunt caracteristice esterilor dar sunt
influenate i de comportrile particulare ale acizilor care particip la esterificare.
Dizolvarea acilglicerolilor
Acilglicerolii, la temperatura camerei, se prezint n stare solid sau lichid fiind uor solubili n
alcool etilic, eter etilic, sulfur de carbon, tetraclorur de carbon, cloroform, benzen, tricloretilen, toluen,
benzen etc. dar insolubile n ap cu care formeaz emulsii.
Reactivi i materiale necesare:
- solveni diferii pa;
- carbonat de sodiu pa;
- ulei de floarea soarelui;
- ulei de ricin;
- grsimi i uleiuri diferite;
- eprubete.
Mod de lucru
n eprubete diferite, curate i uscate se introduc 1-2ml (sau g) ulei sau grsime, peste care se
adaug volume egale de diferii solveni organici. Se agit bine eprubetele i observ dizolvarea uleiurilor sau
grsimilor, n mod diferit, n funcie de tipul de solveni utilizai.
Uleiurile i grsimile formeaz cu apa dispersii coloidale sau emulsii care, n prezena unor
substane capilar active (emulgatori) cum sunt proteinele, spunurile i unii acizi sulfonici, n special n
mediu alcalin, se stabilizeaz.
Intr-o eprubet curat se introduc 2-4ml ap distilat i cteva picturi de ulei. Se va observa
separarea a dou straturi distincte. Dac n amestecul ulei-ap se introduce pulbere de carbonat de sodiu i
se agit eprubeta se va constata c se formeaz o emulsie stabil (cele dou straturi iniiale nu se mai
disting).
Hidroliza acilglicerolilorr (saponificare)
Reacia de hidroliz are loc prin nclzirea acilglicerolilor n prezena unor acizi sau baze.
n cataliz acid reacia conduce la obinerea de glicerol i acizi grai liberi, produi care rezult i n
organismele vii sub aciunea unor enzime numite lipaze.

O
O
H2C

HC

H2C

triacilglicerol

O
O

R1
R2 + 3H2O
R3

H2C
HC
H2C

OH

R1

glicerol

OH
O

OH + R2
OH

C
C

OH
O

R3

OH

acizi grai

43

n cataliz bazic acilglicerolii se scindeaz ireversibil n glicerin i sruri alcaline ale acizilor grai care
au participat la esterificare numite spunuri. Reacia de saponificare este favorizat de prezena unei
cantiti mici de alcool.

O
O
H2C

HC

H2C

O
O

H2C

R1

OH

HC

R2 + 3NaOH

triacilglicerol

OH

glicerin

ONa
O

OH + R2

H2C

R3

R1

ONa
O

R3

ONa

spunuri

Cantitatea, n mg, de hidroxid de sodiu necesar pentru neutralizarea acizilor grai liberi i
esterificai dintr-un gram de triacilglicerol se numete indice de saponificare.
Reactivi i materiale necesare:
- grsime;
- hidroxid de sodiu pa;
- clorur de sodiu pa;
- alcool etilic pa;
- capsule din porelan.
Mod de lucru
ntr-o capsul din porelan se introduc 3g grsime, 3ml alcool etilic, 3ml soluie hidroxid de sodiu
30 - 40% i se agit cu o baghet din sticl. Amestecul, se nclzete pe o baie de ap la fierbere cnd,
dup cteva minute se constat c devine omogen saponificarea grsimii fiind complet.
La soluia astfel obinut se adaug soluie saturat cald de clorur de sodiu, amestecndu-se bine
cu bagheta. Se va constata c amestecul se tulbur iar la suprafaa lichidului se separ o pelicul solid de
spun care plutete.
Descompunerea acilglicerolilor
Prin descompunerea termic a acilglicerolilor rezult un amestec complex de produi, printre care
glicerina liber. Aceasta n prezena unor reactivi care au proprieti deshidratate (n special bisulfii) se
transform n acrolein, aldehid nesaturat cu miros specific.

H2C

OH

HC

OH

H2C

OH

glicerin

HC
-H2O

C
H2C

OH
H

HC

tautomerizare

OH

HC

H2C

O
H
OH

-H2O

HC

CH2
acrolein

Reactivi i materiale necesare:


- grsime sau ulei;
- sulfat acid de potasiu pa;
- azotat de argint amoniacal;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet uscat se introduc aproximativ 0,5g sulfat acid de potasiu sau de sodiu i 1ml ulei.
Amestecul se fierbe i se constat nnegrirea acestuia i degajarea de vapori de ap i alte produse volatile
nsoite de un miros iritant caracteristic acroleinei. Aceast aldehid nesaturat se poate identifica folosind
o hrtie de filtru umectat cu azotat de argint amoniacal care se plaseaz la gura eprubetei. Hrtia de

44

filtru se nnegrete, datorit argintului metalic care se formeaz ca rezultat al aciunii reductoare a
acroleinei.
Reacia acilglicerolilor cu iodul
Pentru evaluarea gradului de nesaturare a acizilor grai din acilgliceroli se utilizeaz indicele de iod.
Cantitatea de iod, n grame, adiionat la dublele legturi ale acizilor grai din 100g acilglicerol, n condiii
de reacie bine determinate, se numete indice de iod.
Indicele de iod este important pentru aprecierea calitii uleiurilor sicative care au un indice de iod
de peste 130 (uleiul de in are indicele de iod ntre 170 i 180). Uleiurile nesicative au indici de iod sub 90
(uleiul de msline are indicele de iodntre 75 i 88 iar uleiul de floarea soarelui care este semisicativ are
indicele de iod ntre 127 i 136).
Reactivi i materiale necesare:
- ulei sau grsime;
- tinctur de iod;
- amidon 1%;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2ml ulei (n cazul n care se utilizeaz grsime aceasta trebuie topit n
prealabil) i cteva picturi tinctur de iod dup care se agit foarte bine. Se nclzete eprubeta i se
observ dispariia culorii rou-brun a iodului ca urmare a reaciei de adiie care are loc, produsul obinut
devenind incolor sau uor glbui. Absena iodului liber se pune n eviden dac se adaug n eprubet 2-3
picturi de soluie de amidon 1% i se constat c nu apare culoarea albastr caracteristic.

45

LUCRAREA 8
Determinarea coninutului de lipide totale prin metoda Sxhlet
Principiul metodei
Grsimile se extrag la cald din materialul de provenien vegetal cu ajutorul solvenilor organici i
se determin gravimetric dup evaporarea extractului la sec.
Pentru extracie se folosete aparatul de tip Soxhlet care este format din trei pri demontabile
(balon de distilare, extractor, refrigerent):

nclzirea aparatului se face pe se face pe un dispozitiv electric din cauza inflamabilitii


solventului organic.
Mod de lucru
Se introduce o cantitate determinat de material vegetal, uscat i fin mcinat, n cartuul pentru
probe care n prealabil a fost cntrit. Cartuul cu proba de analizat se cntrete. Prin diferen se afl
cantitatea exact de material biologic luat pentru extracie. Cartuul cu prob se introduce n extractor.
Balonul de distilare, perfect curat i uscat, coninnd cteva buci de piatr ponce degresate se
cntrete la balana analitic. n balonul de distilare se introduce pn la 2/3-3/4 din volumul lui solventul
folosit pentru extracie. Balonul se unete cu extractorul introducnd partea inferioar a acestuia n gtul
balonului. Dup ace3asta se fixeaz balonul pe dispozitivul electric de nclzire. La partea superioar a
extractorului se monteaz refrigerentul prin care trece ap rece.
Dup instalarea complet a aparatului Soxhlet coninutul balonului se nclzete treptat i moderat
pentru ca fierberea solventului s nu fie prea puternic.
Funcionarea aparatului va ncepe cu evaporarea solventului care, ajuni n refrigerent se vor
condensa. Picturile de lichid vor cdea peste materialul de analizat dizolvnd parte din grsimea coninut
de acesta. Solventul se acumuleaz treptat n extractor i cnd i cnd nivelul lichidului depete nlimea
tubului de sifonare, solventul care a dizolvat parte din grsime (extractul) va sifona n balonul de distilare.
Dup aceast prim sifonare, extracia se repet, potrivind intensitatea fierberii n aa fel nct s se
realizeze 3-4 sifonri pe or. Cu fiecare extracie n balonul de extracie sunt aduse noi cantiti din
grsimea dizolvat.
Durata extraciei variaz ntre 5-12 ore, n funcie de cantitatea i natura materialului de analizat.
Dup terminarea extraciei, solventul din balonul de distilare, n care se gsete dizolvat grsimea, se
distil. Balonul, cu grsimea aflat n el, este uscat la termostat la temperatura de 60-70 oC pn la greutate
constant.
Calculul rezultatelor
Diferena dintre greutatea balonului cu reziduul rmas dup evaporarea solventului i greutatea
iniial reprezint cantitatea de grsime prezent n eantionul de material vegetal cercetat. Cantitatea de
grsime (X) n 100 g material vegetal uscat se calculeaz cu ajutorul formulei:

46

( g1 g 2 ) x100
G (100 u )
unde: g1 este greutatea balonului cu grsimea extras, n g;
g2 este greutatea balonului gol, n g;
G este greutatea materialului supus extraciei, n g;
U este coninutul procentual al umiditii n materialul analizat.
X=

47

LUCRAREA 9
Reacii de identificare proteinelor
Aminoacizii, unitile structurale ale proteinelor, sunt compui organici cu funciuni mixte,
carboxil (-COOH) i amino (-NH2). n structura aminoacizilor naturali gruparea amino este n poziia
fa de gruparea carboxil. Formula lor general este:
H
H 2N

COOH

Proteinele sunt produi naturali cu structur macromolecular care prin hidroliz se transform
ntr-un amestec de -aminoacizi. Moleculele proteinelor sunt alctuite din catene polipeptidice lungi n
care resturile de -aminoacizi sunt unite prin legturi amidice numite i legturi peptidice.

H2N

R1

R2

H
.......

Rn

COOH

Aceti compui sunt eseniali pentru viaa organismelor alturi de ap, sruri anorganice, lipide,
hidrai de carbon, acizi nucleici, vitamine, enzime etc.
Identificarea proteinelor se efectueaz prin reacii de culoare sau precipitare, pe preparate
proteice naturale, uor accesibile (ou, lapte, fin de gru, tuberculi de cartof etc.) obinute astfel:
- extract proteic din albu de ou - ntr-un flacon Erlenmeyer cu capacitatea de 250ml se
amestec prin agitare albuul unui ou cu 150ml ap distilat; lichidul opalescent obinut se filtreaz
printr-o pnz umectat cu ap, filtratul reprezentnd o soluie de albumin;
- extractul proteic din lapte - ntr-un flacon Erlenmeyer cu capacitatea de 250ml se amestec o
cantitate de lapte proaspt i un volum egal de soluie saturat de sulfat de amoniu; suspensia obinut
se filtreaz pentru ndeprtarea cazeinei i globulinelor precipitate iar soluie limpede care rezult conine
albumine;
- extractul proteic din fin de gru - ntr-un flacon Erlenmeyer cu capacitatea de 250ml se
amestec 50g fin de gru cu 200ml ap distilat; amestecul se agit cu intermiten timp de 30
minute dup care se filtreaz printr-un filtru cutat;
- extractul proteic din tuberculi de cartof - ntr-un flacon Erlenmeyer cu capacitatea de 250ml
se introduc cteva grame material vegetal dat prin rztoare i 100ml ap distilat; amestecul se agit timp
de 30 minute dup care se filtreaz i se obine o soluie de albumin.
Reacii de culoare
Reaciile de culoare pe care le dau proteinele cu reactivi specifici sunt utilizate pentru identificarea
lor. Responsabile de reaciile de culoare sunt tipurile de aminoacizi legai prin legturi peptidice n
structura proteinelor i gruprile funcionale libere.
Dintre reaciile de culoare, reacia biuretului este singura caracteristic pentru detectarea prezenei
legturilor peptidice, toate celelalte fiind determinate de catenele laterale ale anumitor aminoacizi din
macromolecula proteinei.
Reacia biuretului
Reacia biuretului este caracteristic peptidelor care au n structura lor cel puin trei
aminoacizi, adic cel puin dou legturi peptidice.
Reacia const, n principiu, n formarea unor compleci interni, colorai n violet, ai
gruprilor peptidice cu ionul divalent cupru, n mediu puternic alcalin. Dei reactivul implicat n
acest test nu conine biuret, reacia se numete astfel din cauz c testul este pozitiv n cazul
moleculei biuret (compus rezultat din condensarea a dou molecule de uree).

48

O
NH 2

O
NH

biuret

NH2

Reacia biuretului este condiionat de particularitile legturilor dintre resturile


aminoacizilor prezeni n molecula proteinelor.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- hidroxid de sodiu pa;
- sulfat de cupru pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2-3ml extract proteic, un volum egal de hidroxid de sodiu 20-30% i
1-2 picturi dintr-o soluie de sulfat de cupru 1%. Dac soluia de sulfat de cupru se introduce, uor, pe peretele
eprubetei nclinate se va observa apariia unui inel foarte clar, colorat violet, la limita de separaie dintre
straturi.
Reacia Pauly
Reacia Pauly este o reacie colorimetric n care sunt implicai inelul imidazol din histidin i
gruparea fenolic din tirozin.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- carbonat de sodiu pa;
- acid sulfanilic pa;
- azotit de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2-3ml extract proteic, 1ml soluie carbonat de sodiu 10% i 8-10
picturi reactiv Pauly (2-5ml acid sulfanilic se amestec cu 0,5ml azotit de sodiu 10%). Se va constata
apariia unei coloraii roii a soluiei care, dup acidulare, vireaz n galben.
Reacia xantoproteic
Reacia este caracteristic proteinelor solubile care conin aminoacizi cu nucleu aromatic n
molecul (tirozin, triptofan, fenilalanin).
n principiu, extractele proteice tratate cu acid azotic concentrat se coloreaz n galben la
nclzire datorit nitrrii nucleelor aromatice i formrii unor xantoproteine. n mediu alcalin
culoarea vireaz n portocaliu datorit formrii unor nitrofenoxizi. Compui de culoare galben se
formeaz, de exemplu, la contactul acidului azotic cu celulele epiteliale fapt ce dovedete o
manevrare necorespunztoare a acestui acid mineral care necesit precauii privind securitatea
utilizrii sale.

49

OH

OH

+2HNO3

O2N

NO2

-2H2O

CH2
HC

CH2
NH2

HC

COOH

NH 2

COOH

tirozin

dinitrotirozin

Reactivi i materiale necesare:


- extract proteic;
- acid azotic pa;
- hidroxid de amoniu pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 1ml extract proteic i 2-3 picturi acid azotic concentrat. Se va observa
c amestecul se tulbur sau se formeaz un precipitat de culoare galben care dispare la nclzire timp de
1-2 minute. Lichidul din eprubet devine galben intens. Dup rcire, se alcalinizeaz soluia cu hidroxid
de sodiu (20-30%) sau hidroxid de amoniu (25-35%) constatndu-se virajul culorii ctre portocaliu.
Reacia Millon
Reacia Millon const, n principiu, n tratarea extractelor proteice cu o soluie concentrat de
azotat mercuric n acid azotic care conine o cantitate mic de acid azotos. n urma reaciei, nclzind uor
amestecul, se obine un precipitat a crui culoare variaz de la roz la rou nchis indicnd prezena unor
aminoacizi ciclici cu grupare hidroxil cum ar fi tirozina. Colorarea este datorat probabil apariiei unor
sruri mercurice ale resturilor fenolice din moleculele proteinelor care sunt nitrate.

OH

HNO2

OH

OH

Hg 2+

Hg
N

Nefiind specific pentru proteine este indicat ca pentru confirmarea rezultatelor s se recurg la
teste precum reacia biuret sau reacia cu ninhidrin.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- reactiv Millon (fiind foarte toxic i corosiv se va lucra cu mare atenie cu acest reactiv; reactivul
se poate prepara n laborator sau, de preferat, se poate achiziiona de la firme specializate) se dizolv

50

40g mercur metalic n 57ml acid azotic concentrat (se nclzete uor dac este nevoie), se dilueaz cu
dou volume ap distilat, se agit cu atenie i se las n repaus cteva ore, timp n care se depune un
precipitat; n reacie se utilizeaz lichidul limpede de deasupra precipitatului;
- eprubete sau flacoane Erlenmeyer.
Mod de lucru
ntr-o eprubet sau flacon Erlenmeyer se introduc 2-3ml extract proteic i o aceeai cantitate de
reactiv Millon. Amestecul se nclzete cu atenie constatndu-se apariia unui precipitat alb care la
nclzire se coloreaz, n funcie de natura i concentraia aminoacizilor, de la roz la rou nchis
Reacia Adamkiewicz
Reacia Adamkiewicz este un test biochimic utilizat pentru a evidenia prezena aminoacizilor cu
nucleu indolic (triptofan) n proteine.
Metoda const, n principiu, reacia de condensare dintre un aminoacid cu nucleu indolic i acidul
glioxilic n prezena acidului sulfuric, produsul de condensare rezultat fiind colorat n rou-violet. Aceast
reacie este caracteristic compuilor indolici care reacioneaz cu anumite aldehide (acid glioxilic, pdimetilamino benzaldehid, aldehid formic) conducnd la coloraia specific menionat
.
COOH
CH

NH2

CH 2
O
+

O
C

COOH

COOH

CH NH2

CH NH 2

CH 2

CH2

OH

N
-H 2O
H

CH
N

N
COOH

Reactivi i materiale necesare:


- extract proteic;
- acid sulfuric concentrat;
- acid acetic glacial;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 5ml extract proteic i 2ml acid acetic glacial care conine urme de
acid glioxilic, responsabil de dezvoltarea culorii specifice(datorit unor reacii chimice care au loc n
prezena aerului sau luminii acidul acetic conine urme de acid glioxilic; pentru a se forma cantiti mici
de acid glioxilic, acidul acetic glacial se expune la lumin solar timp de 5 6 ore). n laborator se vor
testa probe de acid acetic cu grade diferite de impurificare pentru a se utiliza acidul acetic care conine o
cantitate suficient de acid glioxilic care s permit evidenierea nucleului indolic. Eprubeta se agit i
peste amestecul rezultat se introduce cu deosebit atenie, cu pictura, pe peretele eprubetei, o cantitate de
3ml acid sulfuric concentrat avnd grij ca lichidul s nu se amestece. La suprafaa de separare a celor
dou lichide va aprea un inel colorat n rou-violet.

51

Reacia sulfului din proteine


Reacia const, n principiu, n evidenierea sulfului labil din aminoacizii care conin grupe
tiol, prezeni n moleculele proteice, prin reacia acestor grupe funcionale cu acetatul bazic de plumb.
Prin fierbere n mediu puternic alcalin sulful este eliberat sub form de hidrogen sulfurat care este
neutralizat n mediul bazic. Ionii de sulf reacioneaz cu ionii de plumb conducnd la formarea unui
precipitat insolubil de sulfur de plumb. Reaciile care au loc n cazul prezenei n structura proteinei a
cisteinei sunt:
CH 2

SH

CH 2

OH

CH

NH 2 + 2NaOH

CH

NH2 + Na 2S + H2 O

COOH

COOH

Pb(CH3 COOH) 2 + 2NaOH

Pb(ONa)2 + 2CH3 COOH

Na2 S + Pb(ONa) 2 + 2H2 O

PbS + 4NaOH

Reactivi i materiale necesare:


- extract proteic din albu de ou;
- acetat de plumb pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 1ml soluie acetat de plumb 0,5% i soluie de hidroxid de sodiu
20%, n picturi, pn la dizolvarea precipitatului care se formeaz iniial. Peste acest amestec se
adaug extract proteic, tot sub form de picturi, dup care eprubeta se agit i se nclzete pe o
baie de ap la fierbere. Dup aproximativ trei minute se constat apariia unui precipitat i
colorarea soluiei n negru sau brun datorit formrii sulfurii de plumb.
Reacia Liebermann
Reacia const, n principiu, n condensarea nucleelor furfurolice, rezultate prin reacia la cald a
glucidelor existente n substanele de natur proteic cu acid clorhidric concentrat, cu aminoacizii
ciclici din structura proteinelor.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- acid clorhidric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
Se coaguleaz prin nclzire aproximativ 5ml extract proteic, se decanteaz ct mai bine
lichidul rezultat iar coagulul rmas se introduce n 5ml acid clorhidric concentrat. Se fierbe
amestecul cu atenie pn la dizolvarea complet a coagulului i dup un timp scurt se observ
apariia unei coloraii violet cu tendin de brunificare.
Reacia Sakaguchi
Proteinele, n mediu alcalin i n prezena -naftolului i a unui oxidant cum ar fi
hipobromitul de sodiu sau hipocloritul de sodiu dau o coloraie roie. Reacia este condiionat de
prezena n molecula proteinelor a argininei n a crei structur intr gruparea guanidinic. Compusul de
culoare roie format n mediu alcalin n prezena agentului oxidant este rezultatul reaciei dintre arginin
i -naftol.

52

O
NH 2
C

OH
NH

NH

NH

NH
+2

(CH2)3
HC

Br

NH 2

COOH

+ 3NaOBr

+ 2NaBr + NaOH + 2H 2O

(CH2)3
HC

NH2

COOH

Reactivi i materiale necesare:


- extract proteic;
- brom pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- -naftol pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 6ml soluie d hidroxid de sodiu 33% i 12 picturi brom obinndu-se
astfel hipobromit de sodiu. ntr-o alt eprubet se amestec 5-6 picturi hipobromit de sodiu cu 5-6 picturi
soluie de -naftol 2% i se observ apariia unei coloraii roii care indic prezena argininei n extractul
proteic. Aceast reacie este foarte sensibil putnd fi observat i la o diluie a argininei n extractul proteic de
1/1.000.000.trebuie evitate excesul de hipobromit i prezena amoniacului n mediul de reacie deoarece
diminueaz viteza reaciei i o mascheaz parial.
Reacia cu nitroprusiatul de sodiu
Proteinele care au grupe SH libere ale cisteinei dau coloraie roie cu nitroprusiatul de sodiu n
soluie amoniacal. Multe proteine dau rezultate pozitive la acest test dup coagulare la cald sau
denaturare ceea ce indic eliberarea grupelor SH din cistein. Este un test foarte sensibil pentru grupele
SH libere.
Reacii de precipitare
Proteinele i n general aminoacizii precipit din soluiile lor datorit aciunii unor ageni de
denaturare diferii cum ar fi acizi organici, acizi minerali, alcooli, aceton, ioni ai metalelor grele,
soluii concentrate de sruri precum i n prezena unor ageni fizici cum ar fi temperatura crescut.
Precipitarea poate fi reversibil sau ireversibil. Precipitarea ireversibil (denaturarea), proces n urma
cruia proteinele pierd structura i solubilitatea naturale, are loc atunci cnd, dup ndeprtarea
agentului precipitant, proteina rmne sub form solid (precipitat). Denaturarea se folosete cu
precdere la separarea proteinelor n vederea studierii structurii lor primare. Precipitarea reversibil se
realizeaz atunci cnd proteina precipitat revine la forma solubil dup ndeprtarea agentului
precipitant. Acest tip de precipitare este utilizat n primele etape ale metodelor de separare i
purificare a proteinelor din lichide biologice deoarece diferite proteine precipit la diferite concentraii
ale agentului precipitant .

53

Precipitarea proteinelor cu acizi minerali


Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- acid azotic pa;
- acid clorhidric pa;
- acid sulfuric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
n 3 eprubete diferite se introduce cte 1ml acid azotic, acid clorhidric i respectiv acid sulfuric i
apoi pe peretele fiecrei eprubete, cu precauie, cte 1ml din extractul proteic. La suprafaa de separare
dintre cele dou soluii din fiecare eprubet n parte se va constata formarea unor inele de precipitate de
culoare alb (n prezena acizilor clorhidric i sulfuric) sau glbuie (n prezena acidului azotic testul
xantoproteic). Prin agitare precipitatele formate se dizolv n exces de acid clorhidric i acid sulfuric, dar
nu i n exces de acid azotic.
Precipitarea proteinelor cu acizi organici
Reactivii specifici pentru precipitarea proteinelor sunt acidul tricloracetic i acidul sulfosalicilic.
Acidul tricloracetic este utilizat pentru deproteinizarea lichidelor biologice deoarece precipit numai
proteinele din soluie, nu i produii de degradare ai acestora. Amestecul de acid picric cu acid citric
(reactiv Esbach) este utilizat pentru determinarea cantitativ a proteinelor.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- acid sulfosalicilic pa;
- acid tricloracetic pa;
- acid picric pa;
- eprubete.
Mod de lucru
n trei eprubete diferite se introduc cte 1-2ml extract proteic. ntr-una din eprubete se adaug cteva
picturi de soluie de acid sulfosalicilic 20%, n alta cteva picturi de soluie de acid tricloracetic 10% i
n a treia cteva picturi de soluie de acid picric 1,2%. Se va constata formarea unor precipitate
abundente.
Reacia proteinelor cu bazele
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- hidroxid de sodiu pa;
- azotat sau acetat de plumb pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 1-2ml extract proteic i un volum de dou ori mai mare soluie
concentrat de alcalii. Se observ apariia unui precipitat care prin fierbere timp de 2-3 minute se
dizolv cu degajare de amoniac care se identific foarte clar la unele soluii proteice (albu de ou,
cazein sau extract apos din carne).
n soluia puternic alcalin, fierbinte, se adaug 1ml soluie sare de plumb i se fierbe din nou.
Se constat formarea unui precipitat alb de hidroxid de plumb care se dizolv n excesul de alcalii.
Dac proteina conine sulf se formeaz sulfura de plumb, iar lichidul se coloreaz n brun sau brunnchis cnd coninutul n sulf este mare. Reacia poate constitui metod de identificare a sulfului
din proteine.

54

Reacia proteinelor cu sruri ale metalelor grele


Proteinele, n marea lor majoritate, sunt macromolecule hidrofile. n principiu, proteinele
formeaz cu srurile metalelor grele (plumb, cupru, mercur, argint, cadmiu etc.) sruri complexe interne
care sunt colorate i prezint solubilitate redus. Precipitarea se produce la concentraii mici ale srurilor
cnd se produce deshidratarea proteinelor. Precipitatele proteice obinute prin salifiere pot fi redizolvate
prin scderea concentraiei srii respective prin diferite metode cum ar fi de exemplu prin dializ sau
diluare cu ap distilat.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- sulfat de cupru pa;
- acetat de plumb pa;
- azotat de argint pa;
- eprubete.
Mod de lucru
n 3 eprubete diferite se introduce cte 1 ml extract proteic. n fiecare eprubet se adaug,
pictur cu pictur, soluii de sulfat de cupru 10%, acetat de plumb 10% i respectiv azotat de argint 5%.
Se va constata c n toate eprubetele se formeaz precipitate. Acetatul de plumb i sulfatul de cupru nu se
adaug n exces, deoarece precipitatele formate se dizolv n exces de reactiv (salting-in).
Reaciile de precipitare prin nclzire
Proteinele precipit la nclzire, procesul desfurndu-se cu viteza cea mai mare la punctul
izoelectric (valoare a pH-ului la care ncrcarea net a aminoacidului este zero). n mediu puternic acid
sau bazic proteinele nu precipit la nclzire, deoarece sarcina electric le confer o mai mare stabilitate n
stare dizolvat.
Reactivi i materiale necesare:
- extract proteic;
- acid acetic pa;
- sulfat de amoniu pa;
- hidroxid de sodiu pa;
- eprubete.
Mod de lucru
ntr-o eprubet se introduc 2-3ml extract proteic i se nclzete amestecul pn la fierbere,
timp de 1 minut. Se constat apariia unui precipitat fin sau cu aspect floconos. Dup rcire,
precipitatul se mparte n dou eprubete.
n prima eprubet se introduc 1-2 picturi acid acetic iar n a doua 1-2 picturi soluie
saturat de sulfat de amoniu. nclzind din nou amestecurile se constat creterea cantitilor de
proteine coagulate . Dac ntr-una din eprubete se adaug un volum egal de ap se constat c
precipitatul este insolubil iar dac n cealalt eprubet se adugarea 1ml soluie hidroxid de sodiu se
va observa dizolvarea rapid a proteinei precipitate. Prin fierberea soluiei alcaline proteinele nu mai
precipit.

55

LUCRAREA 10
Evidenierea unor compui prin cromatografie
Cromatografia este o metod fizico-chimic de analiz care se bazeaz pe vitezele diferite de
deplasare a substanelor dizolvate n sistemul a dou faze: faza fix sau staionar i faza mobil sau
purttoare. Rezultatul este separarea componenilor chimici respectivi n zone sau benzi distincte.
Dintre metodele cromatografice, cromatografia pe hrtie este eficace i accesibil permind
separarea i analiza unor cantiti foarte mici de substane. Mecanismul cromatografiei pe hrtie const n
repartiia diferit a componenilor din amestec ntre faza staionar (hrtie de filtru, de tip Whatman sau
Schleicher-Schll, i lichidul fixat pe ea) i faza mobil, de obicei organic. Hrtia cromatografic posed
capacitatea de a absorbi i fixa apa ntre fibrele celulozice.
Pe acelai principiu se bazeaz i cromatografia n strat subire (CSS) care const n separarea
cromatografic pe o faz staionar sub forma unui strat de aproximativ 0,25 mm,aezat pe o plac
dintr-un material inert cu dimensiunea, de exemplu, de 10x20 cm. Separarea depinde, ca i n alte tipuri de
cromatografii, n primul rnd de faza staionar i de sistemul de solveni utilizat. Din acest punct de vedere
CSS poate fi de repartiie, de absorbie sau de schimb ionic.
Tehnica uzual const n aplicarea unei cantiti foarte mici de soluie coninnd amestecul de substane
care urmeaz a fi separate, la mic distan (de exemplu 1,5 cm) de unul din capetele plcii,dup care se
introduce placa ntr-un
vas cu posibiliti de nchidere etane n care atmosfera a fost saturat n prealabil cu vaporii solventului sau al
amestecului de solveni folosii pentru separare. .Se imerseaz apoi captul unde s-au aplicat probele n lichidul
aflat pe fundul vasului,astfel nct punctele de aplicare a probelor s fie la aproximativ 1 cm deasupra nivelului
lichidului.
Faza mobil (developantul) se deplaseaz prin ascensiune capilar (se cunosc i tehnici descendente)
printre particulele de faz staionar avnd loc concomitent un proces de separare a componentelor probei.
Astfel, pe msur ce progreseaz frontul fazei mobile, substanele din amestec se separ n zone distincte situate
de-a lungul stratului de adsorbant. Cnd frontul fazei mobile s-a apropiat de extremitatea plcii cromatografice,
aceasta se scoate, se usuc i apoi prin diferite procedee (eventual chiar vizual) se identific substanele separate.
CSS are o serie de avantaje fa de alte tehnici cromatografice i anume: eficien mare de separare a
substanelor, cantiti mici de substane necesare pentru a fi luate n prob, simplitate i rapiditate a metodei,
reproductibilitate a rezultatelor, posibilitate de separare simultan a mai multor probe, posibilitate de utilizare a
tehnicii att n scopuri analitice ct i preparative, posibilitate de a efectua direct pe placa cromatografic unele
reacii.
Pe cromatoplac, caracterizarea i diferenierea substanelor se poate face prin valoarea R f care msoar
viteza de deplasare a zonelor de substan. Rf - ul este raportul ntre XS - distana de la start pn n punctual de
concentraie maxim a unei zone de substan (eventual revelat printr-un procedeu oarecare) i X D - distana
parcurs de frontul developantului ,n acelai timp .Aadar:
XS
Rf = X D
Msurarea XS i XD se face n mm sau cm, prin diverse procedee, ncepnd cu cele mai simple (cu
ajutorul unei rigle). n cazul n care petele sunt simetrice se msoar distana pn la centrul petei.

56

LUCRAREA 11
Determinarea coninutului total de glucide reductoare metoda cu acid
3,5 - dinitrosalicilic
Principiu
Glucidele reductoare reduc acidul 3,5-dinitrosalicilic la acid 3-amino, 5-nitrosalicilic de culoare
oranj care este determinat colorimetric la =500nm.
Reactivi necesari
a) 10g fenol cristalizat se dizolv n puin ap distilat, se adaug 22 ml NaOH 10% i se aduce
cu ap distilat la volumul de 100ml. n 69ml din aceast soluie alcalin se introduc 6,9g NaHSO 4. Se
adaug 255g sare Seignette care se solv anterior n 300ml soluie NaOH 4,5% precum i 880ml soluie
acid 3,5-dinitrosalicilic 1%. Dup dou zile soluia se filtreaz. Pstrat n flacoane brune soluia este
stabil mai multe luni.
b) NaOH 6N
c) Soluie de sare Seignette, 0,5g/ml
d) Soluie standard cu 2mg/ml glucid
Mod de lucru
n jur de 1g material biologic de analizat se omogenizeaz cu nisip de cuar sau sticl pisat i se
aduce cu ap distilat la un volum constant (20ml). Pentru hidroliz se adaug 2,2ml acid clorhidric
concentrat i probele se menin timp de 30minute pe o baie de ap la temperatura de 68-70 oC. Dup
hidroliz, probele se neutralizeaz cu NaOH i se aduc la un volum cunoscut (100ml sau 200ml, n
funcie de concentraie).
n eprubete gradate de 10ml se introduc 3-4ml soluie de analizat (coninnd aproximativ 0,5mg
glucid), 3ml reactiv a 2ml reactiv b i 1ml reactiv c. Eprubetele se agit bine dup care se introduc, timp
de 10 minute ntr-o baie de ap la fierbere. Dup rcire sub jet de ap volumul probelor se aduce la 10 ml
(volumul trebuie corelat cu volumul probelor din curba de etalonare). Se citete extincia fa de o prob
control ( cu ap distilat n loc de soluie de analizat) la =500nm. Calculul rezultatelor se face n raport
cu o curb de etalonare.

57

LUCRAREA 12
Determinarea coninutului de proteine solubile metoda Lowry
Reactivi necesari
Reactivul A
Soluie 2% Na2CO3 (anhidru) n NaOH 0,1N. Se prepar o cantitate suficient pentru toate
determinrile din seria respectiv. Dup preparare reactivul se filtreaz prin filtru din sticl sau prin vat
de sticl. Reactivul se pstreaz n vase din sticl brun, nchise ermetic cu dop din cauciuc.
Reactivul B
Soluie 1% CuSO4x5H2O. Se pstreaz n vase brune. Soluie 2% tartrat dublu de sodiu i potasiu
(sare Seignette) preparat extemporaneu. nainte de utilizare se amestec soluiile n proporie de 1:1 i se
obine reactivul B.

Reactivul C reprezint un amestec din 50ml reactiv A i 1ml reactiv B (volumele se vor
msura cu exactitate). Reactivul se prepar extemporaneu.
Reactivul D (reactivul Folin-Cioclteu): 100g Na 2WO4x2H2O i 25g Na2MoO4x2H2O se dizolv
n 700ml ap distilat i se adaug 50ml soluie H 3PO4 85% i 100ml HCl concentrat. Acest amestec se
fierbe ntr-un balon cu refrigerent timp de 10 ore. Se adauga apoi 150g Li 2SO4, 50ml ap distilat i
cteva picturi de ap de brom. Pentru nlturarea excesului de ap de brom, amestecul se fierbe sub ni,
fr refrigerent, timp de 10-15min. Dup rcire se adaug ap distilat pn la 1 litru i se filtreaz.
Reactivul Folin-Cioclteu se titreaz cu o soluie de NaOH 1N n prezena fenolftaleinei (1%).
Pentru aceasta ntr-un balon Erlenmeyer de 500-750 ml se introduce 1 ml reactiv i 250-300ml ap
distilat, 2-3 picturi fenolftalein 1% i se titreaz cu NaOH 1n pn la culoarea roz-pal. Dup
determinarea titrului se dilueaz reactivul Folin-Cioclteu cu ap pn la obinerea unei soluii 1N. se
pstreaz n vase brune, la ntuneric (n general, dup titrare, se constat c este necesar s se dilueze
reactivul de aproximativ 3 ori) . Reactivul este valabil timp de peste un an.
Trasarea curbei de etalonare
80mg albumin cristalin (seric sau din ou) se dizolv n ap distilat, se filtreaz ntr-un balon de
100ml i se aduce cu ap distilat la semn. Se agit pentru omogenizare i se msoar urmtoarele
volume:
Nr. eprubet
Soluie proteic
Concentraie
Reactiv C
Reactiv Folin
(ml)
(g)
(ml)
(ml)
1
0,05
40
9,05
0,9
2
0,10
80
9,00
0,9
3
0,15
120
8,95
0,9
4
0,20
160
8,90
0,9
5
0,25
200
8,85
0,9
6
0,30
240
8,80
0,9
7
0,35
280
8,75
0,9
8
0,40
320
8,70
0,9
9
0,45
360
8,65
0,9
10
0,50
400
8,60
0,9
Martor
0
0
9,10
0,9
Probele se agit bine i se las la temperatura camerei timp de 2 ore dup care se msoar densitatea
optic la lungimea de und de 660nm a tuturor probelor fa de proba martor. Cu valorile obinute se
traseaz curba de etalonare.
Mod de lucru
Reactivi

Prob (ml)

Martor (ml)

58

Reactiv C
8,1
9,1
Reactiv Folin
0,9
0,9
Lichid de analizat
1,0
Probele se menin timp de 2 ore la temperatura camerei dup care se citesc extinciile la 660nm. Se
calculeaz concentraia proteic utiliznd curba de etalonare.
Observaii:
dup preparare reactivul Folin are o concentraie de aproximativ 3N;
se determin factorul pentru a se stabili diluia;
cantitate din soluia 1N reactiv Folin se titreaz cu aceeai cantitate de NaOH 1N.

59