1.

INTRODUCCIN

La actividad de las enzimas puede inhibirse. Las molculas que reducen

la actividad de una enzima, denominadas inhibidores, incluyen muchos
frmacos, antibiticos, conservantes alimentarios y venenos. Las
investigaciones de la inhibicin enzimtica y de los inhibidores llevadas
a cabo por los bioqumicos son importantes por varias razones. En
primer lugar y la razn mas importante, en los seres vivos la inhibicin
enzimtica es un medio importante para regular las rutas metablicas,
actualmente para modular las velocidades de las reacciones enzimticas
especficas, se emplean pequeas biomolculas, de forma que
satisfagan las necesidades del organismo. En segundo lugar, numerosos
tratamientos clnicos se fundamentan en la inhibicin enzimtica. Por
ejemplo, muchos antibiticos y frmacos reducen la actividad de
enzimas especficas. Actualmente, el tratamiento ms eficaz contra el
SIDA utiliza varios frmacos que incluyen inhibidores de proteasas,
molculas que incapacitado a una enzima vrica que se requiere para
formar virus nuevos.
Finalmente, las investigaciones de la inhibicin enzimtica han permitido
a los bioqumicos disear tcnicas que se utilizan para demostrar la
arquitectura fsica y qumica, as como las propiedades funcionales de
las enzimas.
En el presente trabajo se estudian los tipos de inhibicin enzimtica as
como las ecuaciones de velocidad (proporcionadas por Michaelis
Menten) correspondientes a cada una. Adems se presenta un caso
resuelto aplicando dichos conceptos.

2. DESARROLLO
2.1 Inhibicin enzimtica
Con frecuencia, las velocidades de las reacciones enzimticas son
afectadas por sustancias que no son sustratos; cuando un compuesto
reduce la velocidad de reaccin, se dice que es un inhibidor. El efecto
opuesto es el aumento en la velocidad de una reaccin por un activador.
En el manejo de inhibidores, es importante distinguir entre los efectos
que se observan experimentalmente y los mecanismos (modelos)
propuestos para explicarlos.
Existen tres tipos bsicos de inhibicin. Estos se definen en recuerdo
grado de inhibicin i, el cual se define como:
Ecuacin 1

Donde

v0

i=
vi

v 0v i
v0

son las velocidades iniciales de reaccin no inhibida e

inhibida, respectivamente.
1. Se dice que existe una inhibicin no competitiva pura si i no es
afectada por la concentracin del sustrato.
2. Existe inhibicin competitiva si i disminuye a medida que
aumenta la concentracin del sustrato.
3. Existe inhibicin anti o no competitiva si i aumenta a medida
que se incrementa la concede el sustrato.
Adems de lo anterior, existe una inhibicin mixta, la cual ocurre si i
aumenta o disminuye con el aumento de la concentracin del
sustrato, pero no en la misma magnitud que en los casos de
antagonismo competitivo puro o competitivo, respectivamente. De
hecho puede mostrarse mecnicamente que la inhibicin no
competitiva es un caso especial de la inhibicin mixta; sin embargo,
como se define aqu, operacionalmente la inhibicin mixta es una
combinacin de dos de los tres tipos bsicos.

2.2 Mtodo Grfico

a) Inhibicin Competitiva

Con frecuencia el sustrato y el inhibidor compiten por el mismo lugar en

la enzima. Los inhibidores competitivos se unen de forma reversible a la
enzima libre, y no al complejo ES, para formar un complejo enzima
inhibidor (EI).

Las representaciones de 1/v frente a 1/[S] en presencia de varias

concentraciones del inhibidor cortan en el mismo punto sobre el vertical
1/Vmax.

b) Inhibicin Acompetitiva
En la inhibicin acompetitiva, el inhibidor slo se une al complejo
enzima-sustrato, y no a la enzima libre.

Km y Vmx
disminuyen

El inhibidor se une solamente al complejo Enzima-Sustrato, disminuye la

velocidad mxima por el factor (1+I/Ki) y, paradjicamente, disminuye la Km
por el mismo valor obtenindose una Kmap Menor.
C) No competitiva
En este tipo de inhibidores, la molcula se une a la enzima como al complejo ES. (El
inhibidor se une a un lugar diferente del lugar activo).

2.3 Bases mecansticas de la ecuacin de Michaelis-Menten

Para explicar sus resultados de la conversin de sacarosa en glucosa y
fructuosa por la enzima invertasa, Michaelis y Menten propusieron en 1913 el
siguiente esquema de reacciones:

E+S

K1

ES

K3

E+P

Ecuacin 2

K-1
K2

Ellos supusieron que

K 1 y K 1 eran mucho mayores que

K 2 ; por lo tanto, la

primera parte de la reaccin podra ser descrita por la constante de equilibrio

para la disociacin del complejo enzima-sustrato:

K 2=[ E ][ S ] / [ ES ] . Las

concentraciones de S y E en cualquier tiempo se derivan de las condiciones

iniciales conocidas.

Tabla 1. Ecuaciones de velocidad para los cuatros tipos de inhibicin enzimtica

No competitiva pura

Competitiva pura

v max [ S ]

v=

( [ ])

( K m + [ S ] ) 1+

I
KI

Km

[I]
(KI+[I ])
Anticompetitiva

[I ]
i=

[I ]

KI

+S

KI

)[]
+S

[I]
KI

( )

v max

)(

K m [S]
+
KI K ' I

( [ ]) (

K m 1+

[I ]
I
+ 1+
[S]
KI
K 'I

[I ]

KI

[I ]

[I ]
K m Mixta
1+
+[S]
KI

K m 1+

( )[]

K m 1+

2.4 Caso 2

v=

I
+[ S ]
KI

[ S]
i=

i=

v max [ S ]
K m 1+

K m 1+

i=

v=

v max [ S ]

v=

}
)

I
[I ]
+ 1+
[S]
KI
K 'I

La celulosa puede convertirse en azcar mediante el siguiente

ataque enzimtico:
Celulosa

Celula
Azcar

Esta conversin se ve afectada por la presencia de celubiosa y glucosa, las

cuales inhiben el proceso. Para estudiar la cintica de esta reaccin se
realizaron una serie de corridas en un reactor de mezcla completa,
manteniendo una temperatura de 50C y utilizando como alimentacin celulosa
finamente dividida (CAo=25 kg/m3), enzima (CEo=0.01 kg/m3 para todas las
corridas) y varios inhibidores. Los resultados son los siguientes:

Corrida

Corriente de salida
CA (kg/m3)

Sin inhibidor
(min)

Con celubiosa
CBo= 5 kg/m3
(min)

Con glucosa
CGo=10 kg/m3
(min)

1.5

587

940

1020

4.5

279

387

433

9.0

171

213

250

21.0

36

40

30

A partir de estos datos realice lo siguiente:

a)
b)
c)

Encuentre una ecuacin de velocidad que represente la ruptura de celulosa por

medio de la celulasa en ausencia de inhibidores.
Cul es el papel de la celubiosa en la ruptura de celulosa (encuentre el tipo de
inhibicin y la ecuacin de velocidad)
Cul es el papel de la glucosa en la ruptura de celulosa (encuentre el tipo de
inhibicin y la ecuacin de velocidad)

Se analizaron los datos proporcionados y se calcularon las velocidades, as

como las inhibiciones correspondientes:
Tabla 2.2 Datos correspondientes a la celulosa

Concentr
acin del
sustrato
(CAoCorrida Cazucar)

Tiempo
min
(sin
inhibid
or)

23.5

587

20.5

279

16

171

36

Velocida
d de
enzima
(SIN
inhibido
r)
(Kg/m3.
min)
0.040034
07
0.073476
7
0.093567
25
0.111111
11

Tabla 2.3 Datos correspondientes al inhibidor Celubiosa

corrida corrien Tiempo Velocid INHIBICIN

te de
mins
ad
i=(Vo-Vi)/Vo
salida
(con
(Celubi
(Kuchel y
Ralston,
celubio
osa)

Kg/m3.
min

sa)
1

940

387

213

40

1994)

0.005319
15
0.012919
9
0.023474
18
0.125

0.86713445
0.82416336
0.74911972
-0.125

Tabla 2.4 Datos correspondientes al inhibidor Glucosa

Tiempo
corrien
corri
mins
te de
da
(con
salida
Glucosa)
1
2
3
4

10
10
10
10

1020
433
250
30

Velocidad
(con
inhibidor
Glucosa)
Kg/m3.min
0.00980392
0.02309469
0.04
0.33333333

INHIBICI
N i=(VoVi)/Vo
(Kuchel y
Ralston,

1994)

0.75511055
0.68568693
0.5725
-2

A continuacin se calcularon los recprocos del sustrato y las velocidades

correspondientes:
Tabla 2.4 Recprocos del sustrato y velocidades

1/[S]
0.04255
319
0.04878
049
0.0625
0.25

1/v
sin
inhibido
r
24.9787
234
13.6097
561
10.6875
9

1/v
Celubiosa

1/v
Glucosa

188

102

77.4

43.3

42.6
8

25
3

Una vez obtenidos los recprocos, se procedi realizar el grfico de LineweaverBurk:

Figura 1.4 Grfico de Lineweaver-Burk

Con los modelos obtenidos de la grfica anterior, se calculan Km y Vmx:
Sin inhibidor:

y=41.53 x +18.762

Modelo :
Donde:

b=

1
V m x

=18.762

m=

Km
=41.53
V m x

Como:

18.762=

1
V m x

Se despeja

V m x
V m x=

Como:

1
=0.0532
18.762

41.53=

Km
V mx

Se despeja Km

(41.53 ) ( V m x ) =K m
V m x

Se sustituye el valor de

calculado

K m= (41.53 )( 0.0532 ) =2.2135

Inhibidor celubiosa:

y=518.5 x+131.35

Modelo :
Donde:

b=

1
V m x

=131.35

m=

Km
=518.5
V m x

Como:

131.35=

1
V m x

Se despeja

V m x
V m x=

1
=0.00761
131.35

Como:

518.5=

Km
V mx

Se despeja Km

(518.5 ) ( V m x )=K m
Se sustituye el valor de

V m x

calculado

K m= (518.5 ) ( 0.00761 )=3.947

Con glucosa:

y=292.73 x+72.878

Modelo :
Donde:

b=

1
V m x

=72.878

m=

Km
=292.73
V m x

Como:

72.878=

1
V m x

Se despeja

V m x
V m x=

1
=0.0137
72.878

Como:

292.73=

Km
V mx

Se despeja Km

(292.73 ) ( V m x )=K m
Se sustituye el valor de

V m x

calculado

K m= (292.73 ) ( 0.0137 ) =4.0167

As mismo se decidi graficar la inhibicin calculada con la ecuacin 2 para

observar el comportamiento de cada inhibidor.

Inibicin-Celubiosa
1
0.8
0.6

Inhibicin

0.4
0.2
0

10

15

20

25

-0.2

[S]

Figura 1.5 Inhibicin de la Celubiosa

Se observa que la inibicin aumenta a medida que incrementa la

concentracin del sustrato, esto es un comportamiento anti o no
competitivo.

Inibicin-Glucosa
1
0.5
0

Inhibicin

-0.5

10

15

-1
-1.5
-2
-2.5

[S]

Figura 1.5 Inhibicin de la Glucosa

20

25

Se observa que la inibicin de la glucosa tambin aumenta a medida

que incrementa la concentracin del sustrato, esto es un
comportamiento anti o no competitivo.

3. RESULTADOS
a) El modelo cintico ms caracterstico de una reaccin bioqumica es el
modelo de Michaelis-Menten para cintica enzimtica. Todas las
reacciones bioqumicas, as sean llevadas a cabo en un bioreactor
industrial, dentro de una clula o fuera de ella, dentro de nuestro cuerpo
o en un tejido animal o vegetal, son mediadas por enzimas, la reaccin
estudiada en este caso no sale de dicho contexto. Por todo lo anterior la
ecuacin de velocidad que representa la ruptura de celulosa por medio
de la celulasa en ausencia de inhibidores es la proporcionada por
Michaelis-Menten:

v=

V m x [S ]
[ S ]+ K m

b) Se determin que la celubiosa tiene un papel acompetitivo con el

sustrato, ya que Km disminuy con respecto a Km sin inhibidor, adems
de que su inhibicin increment con el incremento en la concentracin
del sustrato. De acuerdo a Michelis-Menten la ecuacin de velocidad
correspondiente a ese tipo de inibicin es la siguiente:

v=

v max [ S ]

K m 1+

I
+[ S ]
KI

c) As mismo se determin que la celubiosa tambin tiene un papel

acompetitivo con el sustrato, ya que Km disminuy con respecto a Km
sin inhibidor, adems de que su inhibicin increment con el incremento
en la concentracin del sustrato. De acuerdo a Michelis-Menten la
ecuacin de velocidad correspondiente a ese tipo de inibicin es la
siguiente:

v=

v max [ S ]

K m 1+

I
+[ S ]
KI

4. CONCLUSIN

En base a los modelos obtenidos a partir del grfico de Lineweaver-Burk,

se determin que tanto la celulosa como la celubiosa tienen un papel

acompetitivo (anti o no competitivo), es decir, que estos inhibidores

esperan a que se forme el complejo ES para entrar en accin.

Bibliografa

Kuchel, P. y Ralston, G. 1994.Bioquimica General. McGraw Hill. Mxico.

Navas, J. Enzimas. Biologa Molecular. Disponible en URL:
Http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioqumica/material-de-clase1/Tema6_Enzimas.pdf
Universidad de Alcal. 2014. Inhibicin enzimtica. Disponible en URL:
http://www2.uah.es/bioquimica/
Villegas, G. Bioqumica inhibicin competitiva y no competitiva. Disponible
en URL: http://es.slideshare.net/glenderv/bioquimica-inhibicion-y-nocompetitiva-20763548