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CROMATOGRAFA
FUNDAMENTO TERICO
Las tcnicas cromatogrfcas se utilizan actualmente para la separacin, aislamiento,
purificacin e identificacin de sustancias, tanto orgnicas como inorgnicas.
Todos los mtodos cromatogrfcos se basan en las diferentes afinidades de los
componentes de una muestra por las fases inmiscibles con las que estn en contacto.
Segn sea el proceso de separacin, los mtodos cromatogrfcos se clasifican en:
1. Cromatografa de adsorcin
Las propiedades responsables de la separacin son las fuerzas de adsorcin. Si una mezcla
de sustancias disuelta en una fase se pone en contacto con otra fase, las sustancias se concentrarn
ms o menos en la superficie de la otra fase; esto se llama adsorcin. Segn las fases que
intervienen puede ser:
Cromatografa de adsorcin lquido-gas. La fase fija es un lquido y la fase mvil
un gas.
Cromatografa de adsorcin slido-gas. La fase fija es un slido y la mvil un gas.
Cromatografa de adsorcin slido-lquido. La fase fija es un slido y la mvil un
lquido. Es la ms usual, se puede hacer en columna o en capa fina.
2. Cromatografa de particin.
La separacin se basa en la distinta solubilidad de las sustancias en dos fases diferentes.
Esta diferencia de solubilidad se expresa mediante coeficientes de reparto.
Puede ser de dos tipos:
Cromatografa de particin lquido-lquido. La fase fija es la fase acuosa que est
sujeta en un slido, y la fase mvil es la orgnica. Segn el tipo de soporte, puede ser
de varios tipos:
Papel: el soporte es la celulosa.
Columna o capa fina: el soporte es silicagel, almidn, etc.
Cromatografa de particin lquido-gas. La fase fija es un lquido orgnico no
voltil soportado en un slido, y la mvil un gas inerte.
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3. Cromatografa de cambio inico
Slo se puede aplicar a sustancias con carga elctrica, intrnseca o inducida, en disoluciones
acuosas. Cuando sustancias que forman iones en disolucin acuosa se ponen en contacto con
resinas cambiadoras de iones, hay una interaccin entre las cargas de los grupos funcionales de los
cambiadores inicos y las cargas de los iones. La fuerza de atraccin vara con la fuerza inica y el
pH del medio. La fase fija son cambiadores, naturales o sintticos, y la fase mvil es la disolucin.
Los iones de mayor carga son retrasados ms durante el paso a travs de la columna y as se
verifica la separacin.
4. Cromatografa de permeacin
La separacin se basa en la diferencia de tamaos y pesos moleculares de las distintas
sustancias. Las sustancias de pequeo tamao tienden a penetrar en el interior de los poros y son
retrasadas en la elucin respecto a las ms grandes. Hay dos tcnicas:
Cromatografa de vidrio poroso.
Filtracin por gel
Tambin se realizan otros tipos de clasificaciones entre las que cabe destacar la clasificacin por
aplicaciones:
Cromatografa analtica: para identificar sustancias.
Cromatografa preparativa: para separar sustancias y aislarlas.
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Polaridad del disolvente
Polaridad del producto
Actividad del adsorbente
Los disolventes ordinarios se pueden ordenar segn su polaridad creciente: ter de petrleo,
tetracloruro de carbono, ciclohexano, ter, acetona, benceno, diclorometano, cloroformo, acetato de
etilo, piridina, etanol, metanol, agua, cido actico.
La actividad de los adsorbentes aumenta en el siguiente orden: celulosa, almidn, azcar,
silicagel, sulfato calcico, fluorisil, magnesia, almina, carbn activo.
La secuencia de elucin de compuestos, en orden de elucin creciente: hidrocarburos,
olefinas, teres, compuestos halogenados, aromticos, cetonas, aldehidos, alcoholes y aminas,
cidos y bases dbiles.
Se van recogiendo las fracciones y luego se analiza el contenido de cada fraccin.
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Cromatografa en capa fina preparativa
Sirve para separar y aislar los distintos componentes de una mezcla. Se usan placas (20x20
cm) de cristal. El procedimiento de preparar las placas es similar al anterior. La aplicacin se hace
en forma de franja y no de punto.