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Informe N 002 2013 / UNDAC / ING - MET

Ing.: PALACIOS ESPIRITU CAYO

Docente del curso de ANALISIS QUIMICO INSTRUMENTAL

DE

ESPINOZA LAVARADO KLEVER

BORJA BALDEON VICTOR
BONIFACIO GILIAN MIGUEL
CHAMORRO DAVILA BRINNER
FERNANDES MACURI DAVID
HINOSTROSA PABLO JHON

tengo grato dirigirme a usted, para informarle la siguiente trabajo

de investigacin informacin colectada y suministrada en el presente trabajo podra ser de
utilidad en las posteriores prcticas del curso a seguir con el fin de tener una buena
preparacin como alumnos cuyo realizacin se efectu en GRUPO

INDICE
1.-introduccion........................................................................................................5
2.-objetivo................................................................................................................6
2.1.-objetivo general.-..6
2.2.-objetivos especficos...6
3.-marco de referencia.....7
3.1.-la ltima innovacin del lder mundial en AA...7
3.2.-nuevas tecnologas asombrosas de la absorcin atmica...7
3.3.-anlisis mediante llama...9
3.4.-anlisis mediante horno de grafito..10
3.5.-horno de plataforma de temperatura

estabilizada (stpf)....11

4.-horno de grafito................................................................................................12
4.0.-atomizacin de llama vs horno de grafito..13
4.1.-APLICACIONES ANALTICAS...13
4.2.-fortalezas....14
4.3.-limitaciones.....14
4.4.-MODO DE FUNCIONAMIENTO.....15
4.5.-descripcin general del horno de grafito16
4.6.-secuenciaparaeltratamientodelamuestra...16
4.7.-la atomizacin en flama se caracteriza por:..22
4.8.-en horno de grafito se tienen las siguientes caractersticas...23
4.9.-la atomizacin en generador de hidruros se caracteriza por.....24

5.-interferencias....................................................................................................26
5.1.-interferenciasespectrales.....27
5.2.-interferencias no espectrales...28
5.3.-muestrador automtico en horno de grafito..28
6.-tcnica de generacin de hidruros.-......28
6.6.-limitaciones de la tcnica.-.......29
7.-ejemplo determinacin de plomo en la sangre......30
1. objeto y campo de aplicacin......30
4. aparatos y material.32

5. toma de muestras32
6. procedimiento de anlisis....32
6.1. Limpieza de material.........33
6.2. Preparacin de la muestra...34
6.3. Preparacin de patrones y curva de calibracin..........35
6.4 determinacin.............35
7. clculos..............................................................................................................36
8. precisin....37
8.1. Coeficiente de variacin37
8.2. Sesgo del mtodo......38
8.3. Lmite de deteccin...39
8.-glosario.....41
9.-conclusiones y recomendaciones.-......42
10.-bibliografia......................................................................................................43

1.-INTRODUCCION
La tecnologa de horno de grafito fue el resultado de la necesidad de contar con
una tcnica que emplea a volmenes mnimos de la muestra
El presente trabajo es la Espectrometra de absorcin atmica de horno de grafito
(GFAAS) es tambin conocido como espectrometra de absorcin atmica electro
trmica (ETAAS).La tcnica se basa en el hecho de que los tomos absorben la
luz en las frecuencias o longitudes de onda caracterstica del elemento de inters
(de ah el nombre de la espectrometra de absorcin atmica).
Dentro de ciertos lmites, la cantidad de luz absorbida se puede correlacionar
linealmente con la concentracin de analito. Los tomos de la mayora de
elementos pueden ser producidos a partir de las muestras mediante la aplicacin
de altas temperaturas.

En GFAAS, las muestras se depositan en un tubo de

grafito pequea, que puede ser calentado para vaporizar y atomizar el analito.
Con el fin de mantener los estndares de calidad, se realiz la validacin de la
metodologa la cual consisti en establecer los parmetros ptimos de operacin
del espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000 tales como
determinacin de temperatura ptima para cada metal, parmetros de auto
muestre ador, condiciones de respetabilidad y parmetros pticos; se prepararon
una serie de patrones, estndares y muestras de concentraciones conocidas, bajo
los lineamientos del Standard methods for the examination of water and
wastewater, a dichas soluciones se les realizaron siete ensayos durante siete das
diferentes; el grupo de muestras se analiz por duplicado.

2.-OBJETIVO
2.1.-OBJETIVO GENERALES.Validar los mtodos de Espectroscopia de absorcin atmica con horno de
grafito, en las determinaciones de los metales Cadmio y Plomo en el agua
potable y otros casos como la deteccin del plomo en la sangre mediante
los hornos de grafito que en los trabajos realizados a dado mucha ayuda
para el desarrollo de la tecnologa.

2.2.-OBJETIVOS ESPECFICOS.Establecer las condiciones instrumentales experimentales para los anlisis

mediante ensayos previos con muestras patrn.
Obtener las soluciones patrn con los rangos de concentracin definidos y
las muestras naturales y de referencia de acuerdo a la metodologa
planteada por medio de la tcnica de espectrofotometra de absorcin
atmica con horno de grafito.
Determinar las variables del mtodo tales como lmite de deteccin, lmite
de cuantificacin y reproducibilidad para confirmar que el mtodo de ensayo
tiene cualidades de desempeo acordes con lo que la aplicacin requiere.
Documentar el procedimiento para la cuantificacin de Cadmio y Plomo por
espectrofotometra de absorcin atmica por horno de grafito.
Este mtodo especifica el procedimiento a seguir y el equipo necesario para
la determinacin de plomo (N CAS 7439-92-1) en sangre por
espectrofotometra de absorcin atmica, en un intervalo de concentracin
de 5 a 100 g de Pb/100 ml de sangre (0,24 a 4,82 mol/litro) aplicable al
seguimiento de poblaciones laborales potencialmente expuestas a plomo
metlico y sus compuestos inicos.

3.-MARCO DE REFERENCIA.3.1.-LA LTIMA INNOVACIN DEL LDER MUNDIAL EN AA.

PerkinElmer, como lder reconocido de la Absorcin Atmica, posee un amplio
historial de innovacin de productos, y mayor la base instalada de instrumentacin
de todo el mundo. Ahora el rendimiento de la AA est alcanzando nuevas cotas
gracias a la revolucionaria serie PinAAcle. Con un diseo que incorpora diversos
avances tecnolgicos muy interesantes, la gama PinAAcle ofrece mltiples
configuraciones y capacidades que permiten conseguir el nivel de rendimiento que
necesita:
Diseos slo de llama, slo de horno o apilados que incluyen los dos modos para
ahorrar espacio.
Funciones

de

llama,

horno,

inyeccin

de

flujo,

horno

FIAS

mercurio/hidruro en un nico instrumento.

Escoja correccin de fondo Zeeman longitudinal o de deuterio.
Software WinLab32 probado que ofrece facilidad de uso y una
excepcional

flexibilidad.

Independientemente

del

modelo

que

elija,

descubrir un sistema intuitivo y de alta eficiencia, capaz de simplificar el

recorrido desde la muestra hasta los resultados, incluso con las matrices
ms difciles.
Obtenga un rendimiento mximo y una productividad sin igual. Psese a la serie
PinAAcle de PerkinElmer.

3.2.-NUEVAS TECNOLOGAS ASOMBROSAS DE LA ABSORCIN

ATMICA.
Tanto si necesita las funciones de llama o el rendimiento mejorado del horno,
encontrar la solucin idnea para sus necesidades en los espectrmetros
PinAAcle.
La tecnologa de vanguardia de fibra ptica crea un sistema ptico totalmente
integrado que aumenta el rendimiento ptico para obtener los mejores lmites de
deteccin. Este camino ptico de nuevo diseo no slo utiliza el 100% del haz,
sino que tambin permite al instrumento tener el tamao ms reducido de todos
los sistemas de AA de horno de llama/grafito combinados del mercado.
El tamao compacto del PinAAcle tambin es consecuencia de su exclusivo
diseo apilado. En los modelos de horno/llama de modo dual, se coloca un
conjunto de quemador de titanio slido sobre el horno de grafito, y se puede retirar
(y volver a colocar) rpida y fcilmente para cambiar la tcnica analtica.
Cada instrumento tambin incluye un compartimento verstil de 8 lmparas
compatible con las lmparas de ctodo hueco (HLC) Luminay las lmparas de
descarga sin electrodo (EDL) patentadas PerkinElmer. Estas ltimas ofrecen una
mayor sensibilidad y vida til. El compartimento flexible permite:
Configuracin automtica (con precalentamiento de la lmpara) para
permitir una mayor productividad.
Supervisin continuada del uso de la lmpara para ofrecer un rendimiento
constante y unos resultados fiables.

3.3.-ANLISIS MEDIANTE LLAMA.El modo de llama del PinAAcle presenta un diseo de doble haz verdadero para
una rpida puesta en marcha y una estabilidad a largo plazo excepcional sin
recalibracin. La correccin de fondo de deuterio garantiza la mxima sensibilidad
y precisin en un amplio rango de longitud de onda, y el asistente de alineacin
del quemador ajusta automticamente la posicin del quemador, vertical y
horizontalmente. El software WinLab32 tambin incluye un asistente de
optimizacin del flujo de gas para la medicin de elementos especficos con la
mxima sensibilidad. La aplicacin del instrumento resulta ms flexible gracias a
varias opciones de nebulizador, disponibles en modelos de acero inoxidable o de
alta sensibilidad y resistentes a la corrosin.

IMAGEN 1

3.4.-ANLISIS MEDIANTE HORNO DE GRAFITO

Cambiar a modo de horno en el PinAAcle es tan fcil como retirar el conjunto de
quemador para as poder acceder al horno. El instrumento, que se puede
configurar con correccin de fondo Zeeman longitudinal o de deuterio, permite
elegir la tcnica que ms se ajusta a sus anlisis concretos. Tambin le permite
analizar desde las matrices de muestras ms sencillas hasta las ms complejas en
el mismo sistema sin comprometer el rendimiento ni la sensibilidad.
El diseo de la correccin Zeeman longitudinal patentado de PerkinElmer:
Permite el calentamiento transversal del tubo de grafito, reduciendo
drsticamente los efectos de matriz.
Proporciona el doble de transmisin ptica que otros sistemas Zeeman.
Permite alcanzar los mejores lmites de deteccin posibles.

IMAGEN 2

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3.5.-HORNO DE PLATAFORMA DE TEMPERATURA

ESTABILIZADA (STPF)
Slo los sistemas de horno de grafito PerkinElmer utilizan la tcnica STPF y
garantizan la mxima precisin y exactitud as como los mejores lmites de
deteccin. La tcnica STPF implica:
Plataforma integrada
Modificadores de matriz
Mxima potencia de calefaccin
Parada de flujo de gas interno durante la atomizacin
Correccin del desplazamiento de la lnea de base
Rpido procesamiento de datos mediante el rea de picos
Correccin de fondo
Ms de 15.000 usuarios de hornos de grafito PerkinElmerya utilizan la tcnica
STPF.

IMAGEN 3

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4.-HORNO DE GRAFITO.La tecnologa de horno de grafito fue el resultado de la necesidad de contar con
una tcnica que emplea a volmenes mnimos de la muestra.

El espectrmetro de absorcin atmica con cmara de grafito (GFAAS) permite

trabajar con muestras de volumen muy reducido (inferior a 100 L) o directamente
sobre muestras orgnicas lquidas.

Habitualmente se analizan muestras de material biolgico de origen clnico

(sangre, suero, orina, biopsiashepticas, etc.).

Por su elevada sensibilidad (nivel es de ppb), la tcnica se aplica en la deteccin

de metales en productos de alta pureza, como por ejemplo frmacos, alimentos
(peces y carne) y productos industriales, y tambin en aguas de bebida y de
acuferos (determinacin de la presencia de Cu, Cd, Pb, As, Hg, etc.)
Un horno de grafito ideal debe cumplir los siguientes requisitos:
Una temperatura constante en el tiempo y el espacio durante el intervalo en
que los tomos libres se producen
La

formacin

de

tomos

cuantitativos

independientemente

de

la

composicin de la muestra
Control por separado de la volatilizacin y procesos de atomizacin
Alta sensibilidad y buena lmites de deteccin; un mnimo de interferencias
espectrales

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ATOMIZACIN DE LLAMA VS HORNO DE GRAFITO

4.1.-APLICACIONES ANALTICAS.Clnicos y biolgicos : sangre, orina, lquido sinovial

Las muestras ambientales : aguas naturales, sedimentos, materiales
vegetales
Materiales industriales: aceros, productos derivados del petrleo

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4.2.-FORTALEZAS
Muy buena deteccin de pequeos tamaos de la muestra
Precio Moderado
Instrumento muy compacto
Pocas interferencias espectrales

4.3.-LIMITACIONES
tiempo de anlisis ms lento
Interferencias Qumicas
Limitaciones Elemento
1-6 elementos por determinacin
Rango dinmico Limitado

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4.4.-MODO DE FUNCIONAMIENTO
La mayora de GFAAS disponibles en la actualidad estn totalmente
controlados desde un equipo personal que tiene un software compatible con
Windows. Muestras acuosas debe ser acidificada (normalmente con cido
ntrico, HNO

3)

a un pH de 2,0 o menos. La decoloracin en una muestra

puede indicar que los metales estn presentes en la muestra Por ejemplo, un
color verdoso puede indicar un alto contenido de nquel, o un color azulado
puede indicar un alto contenido de cobre. Una buena regla a seguir es analizar
clara (relativamente diluida) las primeras muestras, a continuacin, analizar de
color (relativamente concentrada) muestras.

IMAGEN 4

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4.5.-DESCRIPCIN GENERAL DEL HORNO DE GRAFITO.

Consiste en un cuerpo de acero con ciertos sensores elctricos y que acomoda en
su parte central una cavidad para que sea colocado un tubo de grafito.

IMAGEN 5

Este tubo de grafito consiste en un tubo cilndrico hueco de aproximadamente 4cm

de altura y 1cm de dimetro, con un orificio en el centro para poder inyectar la
muestra liquida que se desea analizar.

A travs del cuerpo del horno de grafito, fluye agua para enfriamiento del sistema
cuando as requiera, adems de un gas inerte (Argn o Nitrgeno) que sirve como
gas de proteccin del sistema.

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IMAGEN 6

El gas inerte fluye exteriormente al tubo de grafito para evitar la oxidacin

provocada a altas temperaturas; e interiormente para desalojar los componentes
voltiles que se produzcan.
El calentamiento del horno y del tubo se hace por medio de una fuente de poder
elctrica controlada por un microprocesador.
El microprocesador abre y cierra el gas inerte, sube la temperatura indicada,
sostienen la temperatura el tiempo deseado, abre el flujo de agua para
enfriamiento del horno despus de la secuencia del programa completo, etc.

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4.6.-SECUENCIAPARAELTRATAMIENTODELAMUESTRA.Independientemente del modelo que elija, descubrir un sistema intuitivo y de alta

eficiencia, capaz de simplificar el recorrido desde la muestra hasta los resultados,
incluso con las matrices ms difciles.

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PROCESO
Evaporacin
del solvente

DESCRIPCION
Evaporar el solvente por
medio de la rampa de
calentamiento, evitando
que arrastre consigo
partculas del analito.

Calcinacin
de la
muestra

Eliminar los componentes

orgnicos voltiles que la
muestra puede contener.

Atomizacin

Una vez que se separa el

solvente y los voltiles
orgnicos se produce la
atomizacin de los
componentes residuales
de la muestra.
Calcinar y volatilizar el
residuo de material que
puede existir en la muestra
analizada.

Limpieza del
tubo

TEMPERATURA
La muestra se calienta a una
velocidad de 10C/seg, hasta 120C.
La temperatura es superior a la de
ebullicin del agua para asegurar que
todo el solvente se desprenda de la
muestra a atomizar.
Una vez alcanzada la temperatura de
600C se sostiene durante 10 seg
para asegurar la perdida de todos los
voltiles.
Se eleva la temperatura utilizando el
mximo de potencia del equipo para
alcanzar la temperatura de
atomizacin en el menor tiempo
posible. (2200C)
Se incrementa unos 100C la
temperatura (2400C).

LECTURA DE LA SEAL
La seal generada es muy rpida y debe ser procesada de tal forma.
Los recientes avances en computacin y electrnica han permitido que sea posible
medir y tener una lectura en una pantalla de: Absorbancia (altura del pico),
Absorbancia Segundos (rea del pico) o concentracin.
Gracias a la rapidez del instrumento no hay distorsin de la seal.

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IMAGEN 6

TUBOS DE GRAFITO
Nuestro exclusivo grafito de alta densidad usado como materia base garantiza una
calidad y una reproducibilidad sin precedentes.
Tanto los tubos THGA como los HGA incluyen plataformas integradas para un
rendimiento analtico excepcional, y cuentan con un revestimiento piroltico
completo que prolonga su vida til.

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IMAGEN 7

IMAGEN 8

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4.7.-LA ATOMIZACIN EN FLAMA SE CARACTERIZA POR:

Gran parte de la muestra es desechada
La velocidad de formacin de tomos a partir de una solucin o roco de
partculas no es muy eficiente
El tiempo de residencia de los tomos en la flama es mnimo
Se requiere de volmenes de muestra relativamente grandes
La poblacin de tomos en la flama es baja comparada con la que se
produce en una atomizacin sin flama
Los lmites de deteccin son del orden de ppm

4.8.-EN HORNO DE GRAFITO SE TIENEN LAS SIGUIENTES

CARACTERSTICAS:
Se requiere de cantidades mnimas de muestra
La formacin de tomos ocurre en segundos y la seal es instantnea pero
muy intensa lo que permite mayor sensibilidad.
Los lmites de deteccin son de ppb
Se pueden cuantificar elementos que por EAA en flama son problemticos
por ejemplo los que forman xidos refractarios.
Las interferencias por seal de fondo son ms evidentes por lo que siempre
es necesario contar con un corrector de fondo

4.9.-LA ATOMIZACIN EN GENERADOR DE HIDRUROS SE

CARACTERIZA POR:
La formacin de tomos ocurre en segundos y la seal es instantnea pero
muy intensa lo que permite mayor sensibilidad.
Se requiere de volmenes de muestra relativamente grandes
Los lmites de deteccin son del orden de ppb y hasta de ppt
Se limita a elementos que forman tomos al agregar un reductor poderoso
(mercurio, tcnica de vapor en fro), o a los que forman hidruros voltiles
que se descomponen fcilmente a la temperatura de la flama.

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5.-INTERFERENCIAS
A) FISICAS.Sales, cidos, sustancias orgnicas cambios en el transporte, temperatura, etc.
(mismas propiedades fsicas en muestra y patrones)

B) QUIMICAS
Aniones que puedan formar sales refractarias con el analito
Formacin de xidos, hidrxidos, etctrmicamente estables QUMICAS

5.1.-INTERFERENCIASESPECTRALES:
Se deben al aislamiento incompleto de la lnea emitida o absorbida por el
elemento a analizar.
Las principales interferencias o curren por:
Absorcin de radiacin por traslapa miento de las lneas atmicas o moleculares
emitidas por elementos y sustancias que se encuentran en la matriz, con la lnea
absorbida o emitida por el elemento a analizar.
Dispersin de radiacin emitida por la fuente, por partculas slidas no voltiles
formadas por efectos de la matriz.
La superposicin de lneas de resonancia
Al: 308.215 nmV: 308.211 nm
Banda de absorcin de anchas

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5.2.-INTERFERENCIAS NO ESPECTRALES:
Toda seal ajena a la seal del analito y que no tiene como causas la distorsin en
la lnea absorbida o emitida.
La EAA en horno de grafito y generador de hidruros es esencial para
determinacin de metales a nivel de trazas en: lcteos, frutas y vegetales, aguas
potables y residuales, en geoqumica, en metalurgia, etc.

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5.3.-MUESTRADOR AUTOMTICO EN HORNO DE GRAFITO

Cuando no se tiene el muestreados automtico, existe la posibilidad de prdida
de reproducibilidad en los resultados cuando la tcnica de inyeccin de la muestra
del analito en el tubo de grafito no se hace con cuidado y la reproducibilidad
requerida. Los avances en robtica y microprocesadores han creado sistemas de
automuestradores, que se programan de forma automtica y repetitiva. Se utiliza
un carrusel de 50 o 100 muestras y despus, al trmino de las muestras, se
cambia el carrusel si es necesario. Adems, en el carrusel se puede cambiar la
lmpara y los parmetros del instrumento para analizar la misma muestra por otro
elemento diferente.

6.-TCNICA DE GENERACIN DE HIDRUROS.Hay algunos elementos que son difciles de volatilizar con una llama o con un
horno. Para estos elementos se utiliza la tcnica de generacin de vapor, ya sea
formado el hidruro metlico del elemento (As, Bi, Sb, Sn, Se y Te) o directamente
vapores como en el caso del Hg.

IMAGEN 9

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Esta tcnica es 5 o 10 veces ms sensible comparada con el horno de grafito,

para elementos como Arsnico, Bismuto, Selenio, Teluro y Estao.

Es posible aislar completamente el elemento o el hidruro del elemento de las

sustancias que acompaan la muestra. Esto tiene como consecuencia que casi no
se tengan interferencias por efecto de matriz.

Se considera la ms reciente de las tcnicas de Espectrometra ptica Atmica.

Su uso no ha sido tan difundido, debido fundamentalmente a que es aplicable a
pocos elementos, su sensibilidad es equivalente a otras tcnicas atmicas o, de
ser mayor, su reproducibilidad no es satisfactoria. Por ello, existen pocas
compaas que comercializan estos instrumentos

6.1.-COMPARACIN EN LOS LIMITES DE DETECCIN ENTRE

LAS TCNICAS DE HORNO DE GRAFITO Y GENERACIN DE
HIDRUROS
Volumen de muestra:
Horno de Grafito = 100 L y Generador de Hidruros = 50 mL.

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Se tiene un recipiente cnico en el fondo, donde se coloca la muestra a analizar.

El fondo cnico tiene la finalidad de producir una agitacin ms intensa y
homognea, y el volumen de muestra es de 10 a 50 mL.

IMAGEN 10

Con la muestra se agrega HCl 1M para favorecer las condiciones reductoras y es

posible agregar unas gotas de Permanganato de Potasio 1M, el cual le da un tinte
rosa a la solucin de muestra y al ocurrir la reduccin completa la solucin se d
colorar

por

completo,

lo

cual

garantiza

la

reduccin

los

hidruros

correspondientes.

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6.6.-LIMITACIONES DE LA TCNICA.Est restringida a la cuantificacin de elementos que formen hidruros voltiles a

temperatura ambiente o que se reduzcan al estado elemental en condiciones
apropiadas.

La cantidad de tomos que se pueden formar es mucho ms en Generador de

Hidruros, lo que indica que tiene menores lmites de deteccin que los
correspondientes al Horno de Grafito.

No tiene interferencias por seal de fondo, pues el analito se asla de la matriz por
volatilizacin.

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7.-EJEMPLO DETERMINACIN DE PLOMO EN LA SANGRE

2. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN
Este mtodo especifica el procedimiento a seguir y el equipo necesario para la
determinacin de plomo (N CAS 7439-92-1) en sangre por espectrofotometra de
absorcin atmica, en un intervalo de concentracin de 5 a 100 g de Pb/100 ml
de sangre (0,24 a 4,82 mol/litro) aplicable al seguimiento de poblaciones
laborales potencialmente expuestas a plomo metlico y sus compuestos inicos.
La interferencia espectral provocada por la absorcin inespecfica, que tiene lugar
a la longitud de onda de trabajo, hace necesario el uso de un sistema corrector de
la radiacin de fondo.
3. FUNDAMENTO DEL MTODO.Las muestras de sangre se recogen en tubos de polietileno conteniendo EDTA-K2
(sal dipotsica del cido etilendiaminotetractico) como anticoagulante.
La sangre se diluye con un tensoactivo para facilitar su hemlisis. La cuantificacin
del plomo presente se efecta por espectrofotometra de absorcin atmica a
283,3 nm, utilizando cmara de grafito con plataforma de L'vov y modificacin de
matriz (9.1), frente a una curva de patrones acuosos.
4. REACTIVOS
Durante el anlisis, se utilizarn nicamente reactivos "para anlisis".

4.1. AGUA DESTILADA O DESIONIZADA

El agua ser de grado 2 de pureza como mnimo, de acuerdo con ISO 3696
(9.6).
El contenido en plomo ser menor de 0,01 g/ml.

3.2. octil-fenoxi-polietoxietanol (tritn x-100)

3.3. Dihidrgeno fosfato (v) de amonio (nh4) h2po4
3.4. Pirrolidinditiocarbamato de amonio (apdc)
3.5. Triclorometano (cloroformo).

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Precaucin. Sustancia nociva. Frases (r): 20, frases (s): 2-24/25. Real decreto
2216/1985 (9.5). (2)

3.6. NITRATO DE PLOMO (II)

PRECAUCIN. SUSTANCIA NOCIVA. Frases (R) 20/22-23; Frases (S): 13-20/21.
Real Decreto 2216/1985 (9.5). (2)

3.7. DISOLUCIN DE PIRROLIDINDITIOCARBAMATO DE AMONIO

DE 10 G/I
Se pesa 1 g de APDC (3.4) y se disuelve en agua (3.1) completando hasta 100 ml.

3.8. DISOLUCIN DE TRITN X-100 AL 0,1% (V/V)

Se depositan 0,5 ml de Tritn X-100 (3.2) en un matraz aforado de 500 ml y se
completa este volumen con agua (3.1)

3.9. DISOLUCIN PATRN DE PLOMO DE 1 000 G/ML.

Se seca nitrato de plomo (II) a 120C durante 4 horas y se deja enfriar en
desecador. Se pesan 1,598 g y se disuelven en cido ntrico a 1% (V/V) hasta
completar 1 litro de disolucin.

3.10. MODIFICADOR DE MATRIZ

Se disuelven 5 g de di hidrgeno fosfato (V) de amonio (3.4) en la disolucin de
Tritn X-100 al 0,1% (V/V) (vase 3.8) hasta completar 500 ml (9.1).
Se vierte esta disolucin en un embudo de decantacin de 1 litro de capacidad, se
aade 1 ml de la disolucin de APDC de 10 g/l (3.7) y se agita vigorosamente. Se
aaden 20 ml de cloroformo y se agita de nuevo para extraer las trazas metlicas
que pueda aportar el di hidrgeno fosfato (V) de amonio. Se deja decantar y se
elimina la fase orgnica. Esta operacin ha de repetirse las veces que sean
necesarias para eliminar las trazas de plomo (generalmente 2 o 3).
La disolucin as preparada se conservar en botella de vidrio o polipropileno para
su posterior utilizacin.

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4. APARATOS Y MATERIAL
4.1. TUBOS DE POLIETILENO
Tubos de polietileno de 5 ml, exentos de plomo, conteniendo EDTA-K2 (sal
dipotsica de rido etilendiaminotetractico) como anticoagulante.

4.2. CUBILETES DESECHABLES DE POLIESTIRENO

Cubiletes desechables de poli estireno, de fondo cnico, de 2 ml de capacidad.

4.3. TUBOS DE GRAFITO PIROLIZADOS

Tubos de grafito pirolizados, de 28 mm de longitud y 6 mm de dimetro interno,
con plataforma de L'vov (9.1 y 9.2).

4.4. AGITADOR HOMOGENEIZADOR

Agitador homogeneizador para las muestras de sangre.

4.5. PIPETAS AUTOMTICAS Y DOSIFICADORES

Pipetas automticas y dosificadores que cumplan los requisitos recogidos en ISO
8655 (9.7).

4.6. MATERIAL DE VIDRIO

Material de vidrio. De boro silicato 3.3 de acuerdo con ISO 3585 (9.8).

4.7. CMARA DE GRAFITO

Cmara de grafito capaz de satisfacer el programa de anlisis propuesto en 6.4.2.

4.8. ESPECTROFOTMETRO DE ABSORCIN ATMICA

Espectrofotmetro de absorcin atmica equipado con lmpara de plomo y
corrector de absorcin inespecfica.

5. TOMA DE MUESTRAS
La muestra de sangre venosa extrada con jeringa de polietileno o poliestireno se
recoge en tubos de polietileno de 5 ml conteniendo EDTA-K2 como
anticoagulante, mezclndola cuidadosamente.
Las muestras se conservarn a 4 C hasta el momento del anlisis (vase Tabla 1
del Anexo A).

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6. PROCEDIMIENTO DE ANLISIS
6.1. LIMPIEZA DE MATERIAL
6.1.1. Todo el material de vidrio utilizado en el anlisis despus de su lavado con
un detergente, debe mantenerse sumergido varios minutos en cido ntrico al 50%
(V/V) y ser despus cuidadosamente enjuagado con agua (3.1).
6.1.2. Los tubos de grafitos nuevos y los usados, tras un perodo fuera de uso,
deben acondicionarse siguiendo las recomendaciones del fabricante.
6.1.3. Las ventanas de cuarzo de la cmara de grafito deben limpiarse
peridicamente para eliminar las salpicaduras que sobre ellas se depositan.
6.1.4 Los conos de plstico para los micros pipetas y los cubiletes de poliestireno
deben mantenerse en sus bolsas de origen hasta el momento de su uso, para
evitar cualquier contaminacin.

6.2. PREPARACIN DE LA MUESTRA

6.2.1. La sangre se homogeneiza perfectamente en un agitador (4.4) una vez
alcanzada la temperatura ambiente.
6.2.2. Se. Pipetean 600 l del modificador de matriz preparado segn 3.10, en un
cubilete de fondo cnico (4.2).
6.2.3. Se aaden 50 l de sangre con pipeta automtica y con el mismo cono de
plstico utilizado se remueve el contenido del cubilete hasta conseguir una
completa homogeneizacin. La muestra as preparada est lista para su
introduccin directa en el horno de grafito.

32

6.3. PREPARACIN DE PATRONES Y CURVA DE CALIBRACIN

6.3.1. Disoluciones de trabajo. A partir de la disolucin patrn de plomo de 1.000
g/ml (3.9) y con las diluciones pertinentes se preparan las disoluciones de trabajo
de 0,2; 0,4; y 0,8 l de Pb por ml de agua (3.1)
6.3.2. Se pipetean 600 l de modificador de matriz (3.10) en los cubiletes de fondo
cnico (4.2) en los cuales se van a preparar los patrones.
6.3.3. Se aaden 50 l de cada una de las disoluciones de trabajo preparadas
segn 6.3.1 a los cubiletes que contienen modificador de matriz (6.3.2) y se agita
el contenido del cubilete tal como se indic para las muestras.
6.3.4. Blanco de reactivos. Corresponde a la adicin de 50 l de agua destilada
(3.1) a 600 l de modificador de matriz. Su lectura se restar de la obtenida para
patrones y muestras antes de construir la curva de calibracin.
6.3.5. Curva de calibracin. De las lecturas, en rea de pico, obtenidas para los
patrones

preparados

segn

6.3.2

que

correspondern

finalmente

concentraciones de 0,2; 0,4; y 0,8 l Pb/ml de sangre, se resta la lectura, en rea

de pico tambin, obtenida para el blanco de reactivos definido segn 6.3.4.
Se representan los valores corregidos de rea de pico frente a sus
correspondientes concentraciones, obtenindose as la curva rea de picoconcentracin.
Las concentraciones propuestas para los patrones son orientativas. Los patrones
deben cubrir el intervalo de concentracin de las muestras a analizar y a su vez
encontrarse dentro de la regin lineal de la grfica de calibracin.

33

6.4 DETERMINACIN
NOTA - MEDIDA DE SEGURIDAD
No debe mirarse directamente al tubo de grafito durante el proceso de atomizacin
para evitar posibles lesiones oculares debidas a radiacin.

6.4.1 Se introducen 10 l de patrones y muestras, preparados como se indic en

6.2 y 6.3, en el horno de grafito con una pipeta automtica o bien con un
introductor automtico si se dispone de l.

6.4.2 El anlisis se efectuar con un programa de temperaturas y tiempos (9.4) lo

ms similar posible al siguiente

ETAPA

1
2
3
4
5
6
7

TEMP(C) RAMPA(s) ISOTERMA(s)

110
200
800
850
1700
2600
20

10
10
10
5
0
1
1

10
10
10
5
3
3
4

ESPECIFIC
ACIONES

secado
secado
mineralizacin
mineralizacin
(int. flujo) atomizacin
limpieza
recuperacin

34

6.4.3. Se mide el rea del pico registrado, durante la etapa de atomizacin, a

283,3 nm. Es imprescindible utilizar correccin de la absorcin no especfica. Las
determinaciones de muestras y patrones deben efectuarse al menos por
duplicado.
6.4.4. El elevado nmero de variables que intervienen en la determinacin y la
dificultad en controlarlas todas ellas de forma precisa y continua, hace necesaria la
introduccin de muestras de sangre de concentracin conocida entre las muestras
reales.
6.4.5. Es importante en orden a obtener unos resultados reproducibles,
asegurarse del buen estado de conservacin de los contactores de grafito
(cilindros), limpindolos peridicamente de acuerdo con las instrucciones del
fabricante y cambindolos cuando su grado de deterioro as lo aconseje.

7. CLCULOS

7.1. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE PLOMO EN

LA CURVA DE CALIBRACIN.
La concentracin de plomo en sangre de cada muestra, expresada en
microgramos por mililitro, se determina directamente por interpolacin de la lectura
obtenida, restado el blanco 6.3.4, en la curva de calibracin.

7.2. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE PLOMO

PRESENTE EN LA MUESTRA.
Los resultados, expresados en microgramos de plomo por cien mililitros de sangre,
se obtienen mediante la siguiente expresin:

C = c x 100
35

Donde
C es la concentracin de Pb en g/100 ml de sangreC es la concentracin de Pb
en l/ml leda en la curva de calibracin.

NOTA.- Si el resultado quiere expresarse en micro moles por litro de sangre

mol/l se divide el resultado calculado en g Pb/100 ml entre 20,72.

8. PRECISIN

8.1. COEFICIENTE DE VARIACIN

El coeficiente de variacin del mtodo calculado a partir de los datos
intralaboratorio result ser inferior al 3% en el intervalo de concentraciones
ensayado (vase Tabla 2 del Anexo A).
La repetibilidad (r) y la reproducibilidad (R) han sido evaluadas segn la Norma
ISO 5725 por medio de una prueba interlaboratorios cuyos resultados se recogen
en la Tabla 3 del Anexo A. Los valores de r y R obtenidos en el intervalo de
concentraciones ensayado son los siguientes:

Concentracin Repetividad
g Pb/100ml

Reproducibilidad

Absoluta relativa

absoluta

relativa

32,32

1,77

5,49

7,93

24,54

58,12

2,92

5,02

8,98

15,45

77,86

4,30

5,53

13,40

17,21

36

La relacin funcional encontrada entre r y R con la concentracin c se ajusta al

modelo r(R)= a + bx. La Figura 1 muestra la representacin grfica de las
relaciones funcionales encontradas.
La diferencia entre dos resultados analticos obtenidos en condiciones de
repetibilidad ( reproducibilidad) no deber exceder, con una probabilidad del
95%, los valores de r y R obtenidos en las relaciones funcionales establecidas,
para cada concentracin.

FIGURA 1

37

8.2. SESGO DEL MTODO

El sesgo del mtodo, evaluado mediante la utilizacin de Materiales de Referencia
Certificados del B.C.R. (Oficina de Referencia de la Comunidad Europea) result
ser no significativo (p < 0,05) en todo el intervalo de concentraciones ensayado. La
Tabla 2 del Anexo A muestra los resultados de esta prueba.

8.3. LMITE DE DETECCIN

El lmite de deteccin calculado para el mtodo, utilizando una muestra real de
concentracin prxima al blanco, de acuerdo con la definicin de la I.U.P.A.C. es
de 1,5 g Pb/100 ml de sangre (n=8; K=3) (9.9 y 9.10).
El intervalo de aplicacin del mtodo est comprendido entre 5 (K=10) y 100 g
Pb/100 ml de sangre.

GLOSARIO
Analito: sustancia contenida en la muestra sometida a anlisis.

Blanco: es un sistema fsico que no contiene muestra real y por consiguiente no

debera contener el analito de inters, pero que debe contener todos los reactivos
que se utilizan en el mtodo de anlisis, y ser sometida a las mismas condiciones
y al mismo procedimiento que las muestras reales y los estndares. En lugar de
muestra, el volumen faltante se completara con agua grado reactivo que deber
tener la calidad recomendada por el mtodo respectivo.

38

Calibracin: Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones

especficas, la relacin entre valores indicados por un instrumento o valores
representados por una medida material y el correspondiente valor conocido como
una medida.
Curva de calibracin: Representacin grfica de la seal de medicin como una
funcin de la cantidad de analito
Estandarizacin: Es un mtodo analtico riguroso que dependiendo de la tcnica
analtica a la que pertenezca el mtodo, la matriz el analito, la cantidad de
parmetros de estandarizacin, y de la logstica empleada para su desarrollo,
puede requerir de un tiempo ms o menos considerable.

Exactitud: Es la proximidad de concordancia entre un resultado medido y el valor

de referencia aceptado.

Matriz de la muestra: Conjunto de todas aquellas especies qumicas que

acompaan al analito en la muestra.

Medicin: Conjunto de operaciones que tienen por objeto determinar un valor de

una magnitud.

Mtodo de medicin: Secuencia lgica de operaciones, descritas genricamente,

utilizada en el desarrollo de las mediciones.

Muestra: Se refiere a cada sistema fsico que sea sometido al procedimiento de

anlisis siguiendo el mtodo que se est estandarizando, ya sea un blanco, un
estndar, una muestra adicionada, o una muestra real propiamente dicha. [4]

Linealidad: define la habilidad del mtodo para obtener resultados de la prueba

proporcionales a la concentracin del analito.
39

Parmetros de estandarizacin: Son los resultados finales del proceso,

expresados en forma clara y de acuerdo con las convenciones que se utilicen por
la literatura especializada en el tema.
Patrones: Los patrones, mejor las sustancias qumicas patrn son especies
qumicas fciles de obtener y purificar, y en particular estables en condiciones
adecuadas de almacenamiento. Los patrones primarios son un grupo de
sustancias utilizadas como referencia para diferentes anlisis, de los cuales existe
informacin general.
Procedimiento

de

medicin:

Conjunto

de

operaciones,

descritas

especficamente, para realizar mediciones de acuerdo a un mtodo determinado.

Protocolo: Es la descripcin especifica de un mtodo, las instrucciones detalladas

deben seguirse, sin excepcin, si se quiere que los resultados analticos sean
aceptados para un propsito dado, como un anlisis.

Recuperacin: Es la fraccin del analito adicionada a una muestra de prueba

previa al anlisis que es determinada efectivamente por el mtodo.

Selectividad: Capacidad de un mtodo para determinar exactamente y

especficamente el analito de inters en presencia de otros componentes en una
matriz de muestra bajo las condiciones de prueba establecidas.

Sensibilidad: El cambio en la repuesta de un instrumento de medicin dividido

por el correspondiente cambio del estimulo

40

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.Esta tcnica es muy til, ya que permite utilizar pequeas cantidades de la
muestra para la determinacin de trazas de elementos en diferentes tipos
de sustancias como en los alimentos, orina, aguas y petrleos. Adems
tiene bajo costo y tiene pocas interferencias espectrales a la hora del
anlisis.
Se determinaron las condiciones instrumentales experimentales ptimas
para la metodologa para la determinacin de plomo en la sangre por
espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito.
Se valid la metodologa para la determinacin de Plomo en la sangre
empleando la tcnica de espectroscopia de absorcin atmica con horno de
grafito, donde se realiz la medicin por duplicado de estndares y
muestras con matriz de agua tratada, durante siete das seguidos; con los
resultados de stos se demostr que el mtodo es efectivo para la anlisis
de Plomo.
Las soluciones patrn, las soluciones estndares y la solucin blanco de
reactivos, se deben preparar a partir de una misma solucin madre y
emplear la misma agua des ionizada para el aforo de las soluciones con el
fin de evitar interferencias en la lectura.
La limpieza peridica y mantenimiento al sistema de inyeccin es
importante, por lo tanto se debe realizar ya que el mal estado de ste puede
provocar fugas o errores al aspirar el volumen de muestra.
Se recomienda utilizar inyeccin directa de la muestra y el modificador de
matriz por el automestreador en lugar de permitir que el equipo los mezcle
para su posterior inyeccin al horno.

41

BIBLIOGRAFIA
Asociacin Espaola de Farmacuticos de la Industria. Validacin de
Mtodos Analticos.

Monografa.

Comisin

de

normas de

buena

fabricacin y control de calidad. 2001

LPEZ RUIZ, Martha Isabel. Optimizacin del sistema de calidad analtica
en el laboratorio de anlisis de aguas de la Carder. Manizales, 2003. 278
p. Universidad Nacional de Colombia. Departamento de Ingeniera Qumica.
Mtodos analticos adecuados a su propsito, gua de laboratorio para la
validacin de mtodos y temas relacionados. Segunda edicin noviembre
de 2005. Eurachem. pg. 48, 51-54, 57,58, 60,61
Protocolo estandarizacin de mtodos analticos. Bogot noviembre de
1999 .Gustavo Alfonzo Coy. Instituto de hidrologa, meteorologa y estudios
ambientales (IDEAM). Pg. 9,3.
TEMA 1, INTRODUCCION AL ANALISIS QUIMICO. Anlisis qumico,
Grado bioqumica. Curso 2011/12. Pg. 3
la revista de qumica til. Mol Labs LTDA. Edicin 17

42