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CINETICA ENZIMATICA
Fernando Castillo
Vania Cortes
Alexander Pizarro
Karen Savareses
Escuela de Kinesiologa,
Universidad Santo Toms
Docente a cargo: BQ. Rodrigo
Caldern
Fecha realizacin 03/11/2015
Fecha de entrega 12/11/2015
INTRODUCCIN
Las enzimas son consideradas como las estructuras proteicas fundamentales para
la regulacin de las reacciones qumicas en los distintos sistemas biolgicos, que
actan como catalizadora, acelerando la reaccin uniendo sus sustratos en el
centro activo o cataltico, actuando disminuyendo la energa de activacin
aumentando la velocidad de reaccin, proporcionando un ambiente especfico
dentro del cual una reaccin determinada puede transcurrir a mayor velocidad.
Debido a su alto grado de especificidad respecto a su sustrato y al gran poder
cataltico que estas tienen, las enzimas son especficas para cada tipo de
reaccin. En la catlisis, las enzimas participan de distintas reacciones sin alterar
el equilibrio de las mismas y aceleran procesos biolgicos que tienden a ser muy
lentos. Las enzimas requieren de la participacin de otras molculas ms
pequeas como las coenzimas (biotina, NADH, entre otras) o iones metlicos
llamados cofactores. Adems de pequeas coenzimas que ayudan en los
procesos metablicos, los factores que influyen el funcionamiento de las enzimas
son el pH, temperatura, inhibidores/activadores, concentracin de enzima y
sustrato (1).
De esta manera hace compatibles estas reacciones a las velocidades del
organismo, de lo contrario las reacciones tardaran ms de lo requerido por los
organismos biolgicos. Estas enzimas pueden perder su actividad cataltica si se
desnaturalizan o si se disocia una enzima en sus subunidades, su actividad
tambin se puede ver modificada por factores como la concentracin de enzima o
sustrato, las condiciones de pH, la temperatura y la presencia de inhibidores.
Las enzimas se pueden clasificar segn su funcin en: Oxidorreductasas,
transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas. Siendo la cintica
enzimtica es la principal y ms antiguo mtodo para estudiar el mecanismo de
una reaccin catalizada enzimticamente. Consiste en determinar la velocidad de
la reaccin y el modo en que sta se modifica en respuesta a cambios en los
parmetros experimentales.
Una de las enzimas con mayor importancia en el organismo es la catalasa, esta
hemo protena que se encuentra en las clulas del torrente sanguneo, hgado y
rin. Posee una actividad de tipo oxidorreductadasa. La catalasa tiene la
habilidad de usar perxido de hidrgeno para oxidar toxinas, incluyendo el
metanol, etanol, formaldehido y nitrito (2).
Su funcin principal es catalizar la detoxificacin de las clulas de un compuesto
formado por el metabolismo aerbico el perxido de hidrogeno. Esta reaccin
ocurre espontneamente dentro del organismo pero gracias a esta enzima lo
realiza con una mayor velocidad de reaccin, oxidndolo y descomponindolo a
agua y oxgeno. Este compuesto es altamente reactivo el que puede provocar
dao celular que proviene de la peroxidacin de lpidos que conducen a la rotura
de la membrana eritrocitaria y la oxidacin de protena y DNA.
OBJETIVOS
Objetivos generales:
Objetivos especficos:
Lanceta estril,
Pipeta graduada,
Mtodos:
Pipeta Pasteur,
Bureta graduada,
Matraz Erlenmeyer,
Para hacer el clculo de las velocidades tenemos los mL de todos los matraces y
tenemos los moles remanentes del primer matraz que eran 350, se hace una regla
de tres simples, donde los 350 moles van a equivaler a los primeros mL gastados
y los mL gastados del segundo matraz van a equivaler a los moles remanentes del
segundo matraz, y ah nos da moles remanentes y con eso se puede sacar la
velocidad restndole los moles iniciales menos los moles remanentes de cada
matraz y con eso se obtiene la velocidad.
Para calcular el porcentaje de inhibicin se saca primero la velocidad igual que en
el paso anterior, el primer valor de velocidad equivale al 100% de actividad
enzimtica, por lo que el segundo valor de velocidad equivale a el valor de
actividad del segundo matraz y para sacar el porcentaje de inhibicin se resta a
100 el porcentaje de actividad que daba como resultado de la regla de tres
simples.
RESULTADOS
Efecto de concetracion
mL de H2O2
pH 7 0,24%
moles
iniciales de
H2 O 2
350
mL de
enzima
mL de
H2SO4 2N
mL de
KMnO4
gastados
12,5
moles de
H2 O 2
remanentes
350
moles de
H2O2 que
reacciono
XXX
Velocidad
(moles
H2O2/min)
XXX
2
3
4
5
5
5
5
5
350
350
350
350
0,1
0,2
0,4
0,5
5
5
5
5
11,4
10,6
8,95
7,95
319,2
296,8
250,6
222,6
30,8
53,2
99,4
127,4
30,8
53,2
99,4
127,4
Efecto temperatura
mL de H2O2
pH 7 0,24%
1
1B
2
5
5
5
moles
iniciales
de H2O2
350
350
350
mL de
enzima
mL de
H2SO4 2N
0
0,5
0
5
5
5
mL de
KMnO4
gastados
14
9,3
13,633
moles de
H2 O 2
remanentes
350
232,5
350
moles de
H2O2 que
reacciono
XXX
117,5
XXX
Velocidad
(moles
H2O2/min)
XXX
117,5
XXX
2B
3A
3B
4A
4B
5
5
5
5
5
350
350
350
350
350
0,5
0
0,5
0
0,5
5
5
5
5
5
7,85
12,833
7,4
13,2
9
201,533045
350
201,823424
350
238,636364
148,466955
XXX
148,176576
XXX
111,363636
148,466955
XXX
148,176576
XXX
111,363636
Efecto de pH
Tabla de datos de pH
N
1A
1B
2A
2B
3A
3B
4
4B
5
5B
mL de
H2O2 pH 7
0,24%
5.- pH=3
5.- pH=3
5.- pH=5
5.- pH=5
5.- pH=7
5.- pH=7
5.- pH=9
5.- pH=9
5.- pH=11
5.- pH=11
moles
iniciales
de H2O2
350
350
350
350
350
350
350
350
350
350
mL de
enzima
mL de
H2SO4 2N
0
0,5
0
0,5
0
0,5
0
0,5
0
0,5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
mL de
KMnO4
gastados
13,1
12,1
11
7,23
13
8,5
11,73
7,5
0,9
0,6
moles de
H2 O 2
remanentes
350
323,2824427
350
230,0454545
350
228,8461538
350
223,7851662
350
233,3333333
moles de
H2O2 que
reacciono
XXX
26,7175573
XXX
119,954545
XXX
121,153846
XXX
126,214834
XXX
116,666667
Velocidad
(moles
H2O2/min)
XXX
26,7175573
XXX
119,954545
XXX
121,153846
XXX
126,214834
XXX
116,666667
Al aumentar la concentracin
de inhibidor la velocidad
disminuye alcanzando su
punto
de
inhibidor
competitivo.
Efecto Inhibidor
mL de
KCN
0,0001
M
-
mL de
KCN
0,001 M
mL de
KCN
0,01 M
mL de
enzima
mL de
H2SO4
2N
1
2
mL de
H2 O 2
0,24%
pH=7
5
5
mL de
KMnO4
gastado
s
moles
H2 O 2
remanente
Velocidad
(moles
H2O2/min)
% de
inhibicin
0
0,5
5
5
13,45
7,05
9,55
0,5
12
XXX
166,54275
1
101,48698
9
37,732342
XXX
0%
0,5
350
183,45724
9
248,513011
0,5
0,5
0,5
0,5
12,75
312,26765
8
331,78438
7
18,215613
4
DISCUSIN
Las enzimas tienden a funcionar dependiendo el medio en el que se encuentren,
adems del tipo de reaccin que deban catalizar. La concentracin de sustrato, se
determin que mientras ms alta sea la concentracin de esta, la velocidad de
reaccin ser mayor y la enzima funcionar de manera ms efectiva, pero a
medida que la concentracin de sustrato sea mayor, la enzima tardar ms tiempo
en reaccionar, ya que al haber una mayor cantidad de sustrato, tiene que tener
39,07%
77,34%
89,06%
una mayor capacidad de catalizar esta, el punto mximo a alcanzar seria en teora
su Vmax en donde el sitio activo estara completo con sustrato.
En el caso de la catalasa, al ser una enzima presente en la sangre, se
pensara que su pH ptimo alcanzara un rango de 7, pero la realidad es que su
pH ptimo estara rodeando los 7 a 9, no obstante, en los valores de ph restantes
la actividad disminuyo siendo 3 y 11 en donde la curva cayo totalmente, que fue en
donde la la enzima perdi su estructura 3D, , la velocidad de reaccin que se hall
a pH 7 fue de 119,954545 umolesH2O2/min; Dando as a conocer que nuestra
hiptesis era Correcta, y la actividad enzimtica de la catalasa es ms efectiva a
pH fisiolgico, La estabilidad que presenta el perxido frente a pH 11 se debe que
las soluciones sin contaminar de perxido de hidrgeno, son lo ms estables a pH
ligeramente ms cido que el valor de pH natural 7 segn Slater: Estudi los
datos relativos a la velocidad de descomposicin de la solucin de perxido de
hidrgeno al 3%, viendo que aumentaba cuando se la volva ms alcalina con
hidrxido sdico, si bien luego mostr cmo este efecto disminua
considerablemente si se le aada de forma similar silicato sdico. Este
comportamiento se explica debido a la accin estabilizante del silicato,
probablemente ejercida frente al agente cataltico responsable de dicho aumento de
descomposicin
(4)(E.
Trabal
2004).
CONCLUSIN
La actividad cataltica es bastante compleja y se pudo evidenciar en la experiencia
que fue realizada en el laboratorio, donde las variaciones de las condiciones
ptimas van a influir de manera significativa en los resultados de su desempeo
cataltico.
Cabe destacar el importante rol que cumple la catalasa y lo indispensable que son
las enzimas a nivel biolgico, ya que existen mnimas condiciones que van a
cambiar su accin como el pH, temperatura, concentracin de enzimas e inhibicin
enzimtica, stas producen un efecto llamado velocidad cataltica la cual va a
aumentar, disminuir o mantenerse la actividad cataltica dependiendo del factor
que se est modificando.
CUESTIONARIO
1. Por qu se puede obtener catalasa al agregar sangre sobre agua
destilada?
La catalasa se encuentra dentro de los eritrocitos, al someter una pequea
muestra de sangre sobre agua destilada, estos glbulos rojos producen hemolisis
debido a la diferencia de las concentraciones intra y extra celulares en un medio
hipotnico lo que produce la liberacin de la enzima catalasa en el medio, es decir,
las clulas al exponerse al agua destilada explotan y liberan su contenido celular
al medio.
2. Cul es la importancia de la presencia de catalasa en las clulas?
La catalasa es la enzima responsable de la descomposicin del perxido de
hidrgeno, el cual es un compuesto txico (en oxgeno y agua). Catalasa participa
en la proteccin y mantenimiento del balance oxidante/antioxidante del
metabolismo celular. Descompone el perxido de hidrgeno y H 2O2, obteniendo
agua. Debido a que el perxido de hidrogeno es fuertemente oxidante. Por esta
razn la sangre y el hgado de los mamferos contienen la enzima catalasa que
cataliza la descomposicin de compuestos oxidantes.
3. Qu pasara si no hubiera catalasa presente en las clulas? Investigue si
existen condiciones asociadas a una deficiencia de catalasa
La catalasa tiene un efecto antioxidante, por lo cual disminuye los radicales libres
y la deficiencia de esta, se denomina Acatalasia o acatalasemia. Por lo cual,
cuando se presenta la Acatalasia se caracteriza por la ausencia de actividad de la
catalasa en los eritrocitos, lo cual est asociado con las lesiones orales
ulcerantes/gangrenosas, pudiendo producir la prdida de dientes y graves
destrucciones de los maxilares y regiones blandas que los cubren.
4. Cul es el efecto que tiene el cianuro (CN) en la actividad de la catalasa?
En qu se fundamente esta accin?
El cianuro corresponde a un inhibidor competitivo de la catalasa. Este inhibidor se
une a l Fe+2 presentes en la molcula de la catalasa, lo que causa la inhibicin
completa de esta es decir, la actividad enzimtica se bloquea por completo desde
su sitio activo. Por consecuencia impide la actividad enzimtica. Adems, el
cianuro inhibe la cadena transportadora de electrones en la mitocondria, ya que al
unirse al citocromo A3, bloque el metabolismo aerbico de ella que lo lleva
finalmente a la asfixia.
BIBLIOGRAFA
(1) Principios de Bioqumica, Lehninger, 2005.
(2) Bioqumica. Fundamentos para Medicina y Ciencias de la Vida, Werner MllerEsterl
(3) LEHNINGER, A., NELSON, D., COX, M., Principios de Bioqumica, 4 Edicin,
Ed. Omega, Barcelona, 2006, p. 212.
(4)
E, T. (2004). upcommons. Obtenido de
http://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099/6041/Article03.pdf?sequence=1