Nanopartculas de slice: preparacin

y aplicaciones en biomedicina
Maria C. Llins, David Snchez-Garca*
Grup dEnginyeria Molecular, Institut Qumic de Sarri, Universitat Ramon Llull, Via Augusta 390, E-08017 Barcelona (Spain)

Silica nanoparticles: preparation and applications in biomedicine

Nanopartcules de slice: preparaci i aplicacions en biomedicina
Recibido: 15 de julio de 2013; revisado: 4 de diciembre de 2013; aceptado: 5 de diciembre de 2013

RESUMEN

RESUM

Actualmente, un importante nmero de avances cientficos se fundamentan en la utilizacin de nanopartculas

cmo superficies de actuacin, vehculos de transporte,
en procesos relacionados con aplicaciones en catlisis,
sistemas de informacin, nuevos materiales o biomedicina. Esta revisin se centra en las nanopartculas de slice
mesoporosas, las cuales estn caracterizadas por su elevada superficie especfica, su buena biocompatibilidad, su
fcil obtencin en mltiples tamaos y formas, as como
su fcil funcionalizacin.

Actualment, un gran nombre davenos cientfics es basen

en ls de nanopartcules com a superfcies dactuaci o
vehicles de transport, en processos relacionats amb aplicacions en catlisi, sistemes dinformaci, nous materials
o biomedicina. Aquesta revisi se centra en nanopartcules de slice mesoporoses, que es caracteritzen per la seva
alta superfcie especfica, la seva bona biocompatibilitat,
fcil obtenci en mltiples mides i formes, aix com la seva
fcil funcionalitzaci.

Palabras clave: nanotecnologa, administracin de frmacos, nanopartculas de slice mesoporosas.

Mots clau: nanotecnologia, administraci de frmacs, nanopartcules de slice mesoporoses.

SUMMARY
Currently, a large number of scientific advances are based on the use of nanoparticles as functional surfaces or
transport vehicles, in processes related to applications in
catalysis, information systems, new materials or biomedicine. This review focuses on mesoporous silica nanoparticles, which are characterized by their high specific surface, its good biocompatibility, easy preparation in multiple
sizes and shapes, as well as its easy functionalization.
Key words: nanotechnology, drug delivery, mesoporous
silica nanoparticles.
*Autor para la correspondencia: david.sanchez@iqs.edu

20

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

1. NANOPARTCULAS
En los ltimos aos, el uso de las nanopartculas (NPs)
tanto en la investigacin como en la industria ha aumentado de forma exponencial. Segn un informe de la OCDE
(Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo Econmico), la manufacturacin de productos que utilizan
nanopartculas pasar del 0,1% en 2013, a un 15% en
2015 con aplicaciones en el transporte, energa y medio
ambiente, electrnica, biotecnologa, ciencias de la salud,
sector textil y construccin(1). Las NPs se definen como
partculas que tienen al menos una de las dimensiones en
el rango comprendido entre 1 y 100 nm(2). En la Figura 1 se
comparan los tamaos de diversas NPs con una molcula
de agua y una clula. Como se puede apreciar las NPs
poseen un tamao comprendido entre el de pequeas
protenas y los virus.

partculas orgnicas estn formadas por materiales tales

como polmeros, estructuras repetitivas, bicapas lipdicas,
mientras que los materiales inorgnicos estaran formados
por metales y materiales inertes como el dixido de titanio,
la hidroxiapatita o la slice.

2. NANOPARTCULAS DE SLICE MESOPOROSA

Desde hace una dcada las nanopartculas de slice mesoporosa (MNPs) han atrado la atencin de la comunidad
cientfica. Este hecho es debido a sus excepcionales propiedades fsico-qumicas como son su resistencia mecnica, estabilidad qumica, biocompatibilidad y versatilidad
sinttica(6,7). Estas NPs estn constituidas por una matriz
de slice y se caracterizan por la presencia de poros de
un dimetro comprendido entre los 2 y 50 nm(8). Esta singularidad proporciona a estas NPs dos dominios diferenciados: una superficie externa y otra interior en los poros
(Figura 2). Las posibilidades que abren estas propiedades
las hacen idneas para ser utilizadas en un amplio campo
de aplicaciones que van desde la biotecnologa y nanomedicina a la ciencia de los materiales. Las principales caractersticas de las NPs de slice mesoporosa son:

Figura 1: Escala de tamaos

Dentro del trmino NPs se engloban diversas familias de

nanobjetos: dendrmeros, liposomas, sistemas polimricos, micelas, virus, quantum dots, nantotubos de carbono y todo tipo de nanopartculas de metales de transicin y slice entre las ms estudiadas(3-5). Generalmente,
las nanopartculas se pueden clasificar atendiendo a su
naturaleza inorgnica u orgnica (Tabla 1). As, las nano-

Elevada rea superficial (>1000 m2g-1) que permite

almacenar una gran cantidad de carga (35%).
Elevado volumen de poro (>1 cm3g-1), gran porosidad
y elevado orden del poro.
Tamao de poro modificable con una estrecha distribucin (2-10 nm).
Buena estabilidad qumica y trmica.
No txicas y biocompatibles con el organismo humano.
Dos superficies funcionalizables (interna y externa)
Fcilmente modificables morfolgicamente (control
en tamao, poro y forma).
Fcilmente sintetizables.
Mesoestructura estable.

Tabla 1: Principales tipos de nanopartculas y sus aplicaciones

Nanopartculas
orgnicas

Nanopartculas
inorgnicas

Nanopartculas polimricas

Utilizadas en aplicaciones mdicas. No obstante, presentan una biodistribucin no especfica y una baja capacidad de carga.

Dendrmeros

Macromolculas definidas, que presentan una estructura altamente ramificada formada

por un ncleo y mltiples ramas. Su estructura molecular les permite cargar diferentes
agentes activos.

Liposomas

Nanosistemas esfricos formados por una bicapa lipdica que permiten la encapsulacin
de frmacos hidroflicos e hidrofbicos. A pesar de estar ampliamente estudiados, una
de sus principales desventajas es su rpida eliminacin.

Micelas

Agregados coloidales de molculas amfiflicas. Las micelas estn formadas por una parte
interna hidrofbica y una externa hidroflica que permite la internalizacin de frmacos de
carcter apolar para su vehiculizacin.

Nanopartculas de slice

Las nanopartculas de slice son inertes, biodegradables y presentan una buena biodistribucin. Son fcilmente sintetizables y se pueden obtener de distinta forma y tamao.

Nanopartculas de oro

Nanopartculas metlicas que presentan unas propiedades pticas y electrnicas que

dependen totalmente de su forma y tamao. No presentan toxicidad intrnseca. Adems
son fcilmente funcionalizables mediante la formacin de puentes Au-SR.

Nanopartculas de xido de hierro

Nanopartculas de xido de hierro, tpicamente de magnetita (Fe3O4), biocompatibles y

fcilmente biodegradables. Tienen gran potencial en biomedicina dada su capacidad
intrnseca de ser monitorizadas in vivo por tcnicas de resonancia magntica nuclear.

Quantum dots (QD)

Nanopartculas activas que se utilizan generalmente como sondas para imagen, ya que
presentan elevados rendimientos cunticos de fluorescencia, elevada fotoestabilidad y
una emisin fluorescente que puede ser variable mediante el tamao. Sin embargo, los
QD no son biodegradables ni biocompatibles con el organismo, lo que restringe bastante
su uso en aplicaciones mdicas.

Nanotubos de carbono

Monocapas de grafeno enrolladas en forma de cilindros. Presentan una elevada superficie especfica que permite anclar una amplia variedad de molculas teraputicas.

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

21

Figura 2: Representacin esquemtica de una

MNP y micrografa de MNP realizada mediante microscopa electrnica de transmisin (TEM)

Su elevada superficie y gran volumen de poro permite una

elevada carga de componentes, tales como frmacos,
sensores o protenas, los cuales dotaran de funcionalidad
los soportes inorgnicos. Por otra parte, las molculas
husped en el interior de los poros estarn protegidas de
una posible degradacin en ambientes hostiles, como son
el estmago y los intestinos, en el caso de aplicaciones
biolgicas(8).

3. PREPARACIN DE NANOPARTCULAS
MESOPOROSAS DE SLICE
La preparacin de MNPs fue comunicada por primera vez
por cientficos de la Mobil Company en 1992 en el marco
de un proyecto de la compaa para encontrar materiales
con poros de mayor tamao que el que presentan las zeolitas. Es por ello que este tipo de nanopartculas son conocidas como MCM (Mobil Composition of Matter) y ms en
concreto como MCM-41(9). Su metodologa de sntesis se
basa en la condensacin de precursores de slice (silicato
sdico, tetraetilortosilicato o silicato de tetrametilamonio)
en presencia de surfactantes catinicos en condiciones
bsicas. Se trata de una adaptacin del mtodo descrito
por Stber en 1968 para la obtencin de nanopartculas
de slice(10), pero con la diferencia de que se le incorpora
un tensioactivo catinico. Se combina as el proceso de
sol-gel, una tcnica muy utilizada para preparar vidrios
inorgnicos, con surfactantes catinicos que permiten
la obtencin de estructuras ordenadas y monodispersas
mediante la formacin tpica de micelas, que actuaran a
modo de molde o plantilla y darn origen a la formacin de
poros(11,12). El procedimiento estndar consiste en mezclar
un precursor de silicato, generalmente tetraetilortosilicato
(TEOS), con un surfactante catinico, siendo el ms utilizado el bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB), a una temperatura comprendida entre 30 y 60 oC en medio bsico
(pH = 11). Las nanopartculas se forman mediante el proceso de sol-gel catalizado en medio bsico, segn dos reacciones clave, hidrlisis y condensacin(13) (Esquema 1).
La primera etapa del proceso consiste en la hidrlisis del
alcxido. En esta etapa se obtiene una suspensin coloidal que contiene partculas de tamao inferior a 100 nm
a la vez que se forman grupos silanol (Si-OH) y se libera
el alcohol correspondiente(14). A continuacin los grupos
silanol polimerizan por condensacin, formando estructu-

ras tridimensionales unidas por enlaces siloxano (Si-O-Si)

con eliminacin de agua y alcohol concomitante. En esta
segunda etapa de condensacin se forma un gel, ms o
menos compacto y denso(11,12). La presencia en esta fase
de micelas, formadas por el surfactante es crtica ya que
actan a modo de molde y darn origen a la formacin
de los poros. En efecto, el surfactante catinico atrae las
cargas negativas de las especies de slice, las cuales se
concentran alrededor de las micelas formando una estructura de slice tubular. La nanopartcula va aumentando de
tamao hasta que la carga neta negativa, que introducen
las especies de slice, es tan elevada que sta deja de crecer. Hay que sealar que el tamao, la forma y la regularidad de las nanopartculas dependen de diversas variables
como son la temperatura, la velocidad de adicin, la agitacin y la cantidad de catalizador utilizado respecto a la de
TEOS(15). De todos estos factores se ha determinado que
el que ms afecta al tamao de la MNP es la proporcin
de base respecto a la cantidad de TEOS, seguido de la
temperatura(16). La formacin de las MNPs puede seguirse
visualmente ya que a medida que avanza la polimerizacin aumenta la turbidez de la suspensin de MNPs como
consecuencia del crecimiento de stas. Alternativamente,
tambin puede seguirse la evolucin de las NPs a travs
de la dispersin que sufre un haz de luz al atravesar la
disolucin coloidal (efecto Tyndall) (Figura 3).

Figura 3: Turbidez y efecto Tyndall en soluciones coloidales de MNPs en funcin del tamao de partcula

Finalmente, se debe liberar el surfactante del interior de

los poros. Para ello se pueden seguir tres mtodos: reflujo
en alcohol acidulado con cido clorhdrico, un tratamiento
con nitrato amnico o mediante calcinacin. stos tratamientos permiten la rotura de la interaccin electroesttica
que existe entre los grupos de la cabeza del surfactante
catinico y los silicatos aninicos, lo que facilita la eliminacin del surfactante en los mesoporos y la formacin final
de las nanopartculas mesoporosas (Figura 4).
Para aplicaciones biomdicas, las MNPs deben presentar
un tamao uniforme que est comprendido, idealmente,
entre 50-100 nm ya que por debajo de este rango las nanopartculas resultan ser algo citotxicas y difciles de obtener, mientras que por encima se trata de nanopartculas
demasiado grandes que o bien no podran ser inyectadas
o seran fcilmente eliminadas del organismo(16b, 16c, 17).

Esquema 1: Mecanismo de polimerizacin del TEOS

22

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

Esta tcnica permite estimar el tamao de las nanopartculas tomndolas como un conjunto. De hecho, el valor
obtenido es un promedio de toda la muestra, lo que permite estimar su polidispersidad. La obtencin de una distribucin estrecha se corresponde a una muestra homognea, mientras que la obtencin de varios picos significa
la existencia de diversas poblaciones de NPs de distinto
tamao (Figura 6).

Figura 4: Fases para la preparacin de MNPs

4. CARACTERIZACIN DE LAS MNPS

La caracterizacin de MNPs requiere determinar el taFigura 6: Distribucin de tamaos medida por DLS
mao, tanto de la NP como de los poros y su morfologa
general(18). Los mtodos ms utilizados para caracterizar
Generalmente, los mismos equipos de DLS incorporan
NPs son: dispersin de luz dinmica (DLS), isotermas de
un sistema de medida del potencial zeta (Figura 7). Este
adsorcin y desorcin de N2 (BET, BJH), difraccin de rapotencial est relacionado con la carga superficial de las
nanopartculas y es muy til para evaluar la estabilidad y el
yos X de ngulo pequeo (XRD) y microscopa electrnica
grado de agregacin de las NPs. As, si se obtiene un elede transmisin (TEM). Las tcnicas del DLS y de TEM pervado valor absoluto de potencial zeta, las nanopartculas
miten determinar el tamao global de las nanopartculas,
nanopartculas
y es muy
til para entre
evaluar
estabilidad
y el Sin
grado
de agregacin de las
tendern
a repelerse
s la
y no
flocularan.
embargo,
mientras que las tcnicas de BET, BJH y de XRD se utinanopartculas
presentan
unosde
bajos
valores
delas
polizan para caracterizar los poros. A continuacin se van NPs.
a
As,sisilas
se obtiene
un elevado
valor absoluto
potencial
zeta,
nanopartculas
tencial zeta stas acabaran floculando ya que no existe
describir brevemente dichas tcnicas de caracterizacin.
tendern a repelerse entre s y no flocularan. Sin embargo, si las nanopartculas
ninguna fuerza que lo impida. En general, la lnea divisoria
presentan entre
unos bajos
valores deestables
potencialezeta
stas acabaran
floculando
suspensiones
inestables
se establece
en ya que no
4.1 TAMAO DE LAS MNPS: DISPERSIN DE LUZ DIel rango
deque
+30lomV
o -30mV.
Por otra
parte,divisoria
un potencial
NMICA (DLS)
existe ninguna
fuerza
impida.
En general,
la lnea
entre suspensiones
positivo es altamente recomendable para favorecer la inLa dispersin de luz dinmica (DLS) permite relacionar el
estables e inestables se establece en el rango de +30 mV o -30mV. Por otra parte, un
ternalizacin de las nanopartculas en membranas celuladesplazamiento aleatorio de las partculas con el dimetro
positivo
altamente recomendable
res paraesaplicaciones
biolgicas. para favorecer la internalizacin de las
hidrodinmico de stas. Este dimetro depender de potencial
la
fuerza inica del medio, de la concentracin de la disonanopartculas en membranas celulares para aplicaciones biolgicas.
lucin, de la temperatura y de su ndice de refraccin. En
medios de elevada fuerza inica el tamao obtenido es
menor al real de la MNP, mientras que en medios de baja
fuerza inica se obtienen valores del dimetro de partcula mayores. Si adems las nanopartculas presentan una
capa de molculas que recubren su superficie, la velocidad de difusin global se ralentiza y el radio hidrodinmico
tampoco corresponder con el tamao real de la partcula,
obtenindose un valor superior (Figura 5) (19).
Figura 7: Distribucin de potencialZ de una muestra de MNPs

Figura 7: Distribucin de potencial-Z de una muestra de MNPs

4.2 SUPERFICIE
ESPECFICA
Y POROSIDAD:
4.2. SUPERFICIE
ESPECFICA
Y POROSIDAD:
MTODOSMTODE BET Y BJT
DOS DE BET Y BJT
Un parmetro
en la caracterizacin
de sliUn parmetro
fundamentalfundamental
en la caracterizacin
de slidos porosos
es su superficie
dos porosos es su superficie especfica(20). Este valor pue(20)
especfica . Este valor puede estimarse utilizando el mtodo de Brunauer, Emmett y
de estimarse utilizando el mtodo de Brunauer, Emmett
Teller (BET)
basado
en labasado
capacidad
slidos ende
absorber
gases en
y Teller
(BET)
endelalos
capacidad
los slidos
ensu superficie
absorber
gases
en
su
superficie
que
viene
gobernada
por
que viene gobernada por la siguiente ecuacin [Eq.1]:
la siguiente ecuacin [Eq.1]:
1

Dnde
Figura 5: Dimetro hidrodinmico de una
NP funcionalizada en su superfcie.

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0 1

(1)

[Eq.1]
0

[Eq.1]

Dnde
V volumen de un gas (tpicamente N2) adsorbido a la
presin p;
volumen de un gas (tpicamente N2) adsorbido a la presin p;

Vm

volumen requerido para cubrir la superficie del adsorbente con una capa
monomolecular de adsorbato;

presin de equilibrio;

po

presin de saturacin del adsorbato lquido utilizado;

23

cuando la nanopartcula se encuentra perpendicular al

Vm volumen requerido para cubrir la superficie del adsorplano de visualizacin se observan los poros como lneas
bente con una capa monomolecular de adsorbato;
o canales (Figura 8a), mientras que si las nanopartculas se
p presin
dedeequilibrio;
De la representacin
grfica
los datos experimentales sobre un grfico 1/V[(p0/p)-1]
encuentran en el mismo plano de visualizacin lo que se
po presin de saturacin del adsorbato lquido utilizado;
frente a (p/p0) se obtiene una curva que es lineal en el intervalo 0,05 < (p/p0) < 0,35 de
observa son crculos peridicos (Figura 8b).
C constante de BET;
la cual pueden extraerse Vm y C. De estos valores se calcula la superficie especfica SBET
De la representacin grfica de los datos experimentales sobre un grfico 1/V[(p0/p)-1]
la representacin
grfica de los datos experimentales
a partir de la De
frmula
[Eq. 2]:
frente a (p/p
obtiene
una1/V[(p
curva que
es frente
lineal en
el intervalo
0,05 <una
(p/p0) < 0,35 de
0) se un
sobre
grfico
/p)-1]
a (p/p
) se obtiene
0
0
curva
que esVlineal
intervalo
0,05
< (p/p0la) <superficie
0,35 de especfica
la
(
)
la cual pueden
extraerse
Deelestos
valores
se calcula
SBET
m y C.en
=V y C. De estos valores
[Eq. 2]
cual pueden extraerse
se calcula
m
a partir de la frmula [Eq. 2]:
la superficie especfica SBET a partir de la frmula [Eq. 2]:
Dnde
( )
=
[Eq. 2]
[Eq. 2]

Vm
volumen
requerido para cubrir la superficie del adsorbente con una capa
Dnde
monomolecular
de adsorbato;
Vm volumen
requerido para cubrir la superficie del adsorDnde
bente
con una capa monomolecular de adsorbato;
N
nmero de Avogadro;
N nmero
de Avogadro;
Vm
volumen
requerido
para cubrir la superficie del adsorbente con una capa Figura 8: Micrografa de MNPs realizada medis
superficie
una molculas
demolculas
adsorbato; de adsorbato;
s de
superficie
de una
ante TEM de alta resolucin: a) plano perpenmonomolecular
de adsorbato;
V volumen molar del adsorbato;
dicular al de visualizacin b) mismo plano
V N volumen
molar
del adsorbato;
nmero
de Avogadro;
masa
del adsorbente.
Adems de poder observar la morfologa y periodicidad de
s
masa
del adsorbente.
superficie
de una molculas de adsorbato;
Suponiendo que las partculas son esfricas y que presenlos poros en las nanopartculas, la tcnica TEM tambin
Suponiendo
que lasmolar
partculas
son esfricas y que presentan una distribucin de tamao
V
volumen
del adsorbato;
tan una
distribucin
de tamao estrecha, el rea superfipermite obtener el valor del dimetro de stos a travs de
estrecha,
el
rea
superficial
especfica
proporciona
un
dimetro
medio
de
la
NP
cial
especfica
proporciona
un
dimetro
medio
de
la
NP
la transformada de Fourier (Figura 9).

masa del adsorbente.

dimetro de BET.
denominado denominado
dimetro de BET.
Suponiendo
las partculas son
y quesepresentan
distribucin
Laque
caracterizacin
deesfricas
los poros
efectauna
mediante
el de tamao
La caracterizacin
de propuesto
los poros sepor
efecta
mediante
elymtodo
propuesto
(21)por Barret,
mtodo
Barret,
Joyner
Halenda
(BJH)
estrecha, el rea superficial especfica proporciona un dimetro medio de la NP
(21)
Joyner y Halenda
(BJH)
clculo del
dimetrode
y volumen
deEstos
los poros. Estos
para el
clculopara
del el
dimetro
y volumen
los poros.
denominado dimetro de BET.
parmetros
se pueden
determinar
a partir dedelas
isotermas
parmetros se pueden determinar
a partir
de las isotermas
adsorcin-desorcin
de
La caracterizacin
de los poros se efecta
mediante utilizando
el mtodo la
propuesto
de adsorcin-desorcin
de nitrgeno
ecua- por Barret,
nitrgeno utilizando
laKelvin
ecuacin
Kelvin poros
[Eq. 3] para poros cilndricos:
(21)[Eq.de
cin de(BJH)
para3]elpara
clculo del cilndricos:
dimetro y volumen de los poros. Estos
Joyner y Halenda
a partir de
las isotermas de adsorcin-desorcin de
parmetros se pueden determinar
[Eq. 3]
ln = 2
[Eq. 3]
0

nitrgeno utilizando la ecuacin de Kelvin [Eq. 3] para poros cilndricos:

Dnde
Dnde

Vm volumen molar
= 2 lquido;
ln deladsorbato
[Eq. 3]
0 del adsorbato
lquido;
tensin superficial
Figura 9: Transformada de Fourier realizada mediVm
volumen molar del adsorbato lquido;
r radio de Kelvin;
ante TEM sobre una muestra de MNPs proporcioDnde
nando un dimetro medio de poro de 4 nm.

tensin superficial del adsorbato lquido;

La medida del volumen de los poros ofrece, indirectamenVm
volumen
molar
del adsorbato
lquido;
te, una
estimacin
del grado
de funcionalizacin que se ha
Adems, algunos modelos de microscopios tambin perr
radio de Kelvin;
dado en la superficie de los poros, por comparacin entre
miten realizar el anlisis elemental de la muestra, lo cual

tensin
superficial
lquido;
el volumen
dedel
losadsorbato
poros de
las MNPs funcionalizadas y
permite obtener informacin sobre la composicin y funLa medida del volumen de los poros ofrece, indirectamente, una estimacin del grado
sin funcionalizar.
cionalizacin de las NPs.
radio de Kelvin;
der funcionalizacin
que se ha dado en la superficie de los poros, por comparacin entre
4.3
MESOPOROSA:
DIFRACCIN
el volumen de
losESTRUCTURA
poros de las MNPs
funcionalizadas y sin
funcionalizar. DE
La medidaRAYOS
del volumen
de los poros ofrece, indirectamente, una estimacin del grado
X (XRD)
5. DECORACIN Y FUNCIONALIZACION DE
La difraccin
X de
ngulo pequeo
(XRD)
una
MNPS
de funcionalizacin
que sedeharayos
dado en
la superficie
de los poros,
porescomparacin
entre
tcnica no-destructiva que permite estudiar la estructura
11
el volumen de los poros de las MNPs funcionalizadas y sin funcionalizar.
interna mesoporosa de las MNPs. Los difractogramas
Las MNPs presentan tres posibles dominios de funcionalidan informacin sobre la periodicidad y el orden interno
zacin: la superficie de la NP, la parte interna de los mesode las nanopartculas porosas(20, 22). Esta tcnica resulta
poros y la matriz de slice de la NP. Existen entonces, tres
11
estrategias de funcionalizacin que permiten incorporar
especialmente til para verificar la integridad de la estruccualquier agente activo en una MNP, mediante oclusin,
tura mesoporosa de las MNPs despus de efectuar mainjerto, o co-condensacin(23,10).
nipulaciones qumicas sobre ellas que pueden erosionar
su estructura.
5.1 OCLUSIN
4.4 MORFOLOGA DE LAS NANOPARTCULAS: MILa oclusin se utiliza generalmente con molculas fluoresCROSCOPA DE TRANSMISIN ELECTRNICA (TEM)
centes, a modo de sondas, o agentes de contraste que
La microscopa de transmisin electrnica (TEM) permite
permiten la localizacin y seguimiento de los nanovehcuvisualizar directamente la estructura y tamao de una nalos en el organismo (24,25). En este tipo de funcionalizacin,
nopartcula en concreto o de un conjunto de ellas. De forel agente activo se encuentra disperso en la matriz polima visual es posible determinar si la muestra es morfolmrica sin estar unido covalentemente(7,26). La oclusin de
gicamente homognea. En el caso particular de las MNPs
un agente en el interior de la matriz de la NP permite su
permite la observacin de los poros y su periodicidad. As,
proteccin contra factores externos, minimizndose as su
degradacin (Figura 10).

24

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

puede alcanzar, simplemente, eliminando el tensioactivo y,

posteriormente, aplicando el mtodo del injerto tratando
con un silano (p.ej. APTMS). La superficie externa de la
NP, ms accesible al reactivo, se funcionalizar preferentemente respecto a la interior. Un mtodo alternativo, quizs
ms eficiente, es silanizar la MNP en dos fases con y sin
surfactante (Figura 12).

Figura 10: Anclaje en la matriz de la nanopartcula

5.2 MTODO DEL INJERTO

El injerto (grafting) es un mtodo post-sinttico que permite modificar la superficie de la NP e incorporar grupos
funcionales por silanizacin(27). En este procedimiento los
grupos silanol superficiales (Si-OH), que pueden estar
presentes en elevada concentracin, actan como puntos
de anclaje por tratamiento con un siloxano funcionalizado
con el grupo deseado. La silanizacin transcurre ya sea a
travs de grupos libres de (= Si-OH) o de grupos silanol
geminales (=Si(OH)2).
5.3 MTODO DE CO-CONDENSACIN
El mtodo de co-condensacin se basa fundamentalmente en el proceso de sol-gel(28). La diferencia estriba en la
adicin de un siloxano funcionalizado junto con el precursor de slice (TEOS). En comparacin con el mtodo de
post-injerto en el que la distribucin de los grupos funcionales tiende a ser heterognea, el mtodo de co-condensacin es capaz de distribuir homogneamente grupos orgnicos en la superficie interna de los poros. Otra
ventaja del mtodo de co-condensacin sobre el mtodo
del injerto es que se puede controlar ms fcilmente la
morfologa de las MNPs (Figura 11).

Figura 12: Mtodo selectivo para funcionalizar las dos superficies de las MNPs

5.5 POSTFUNCIONALIZACIN
Con el fin de conferir mayor complejidad a las MNPs y
preparar materiales funcionales se han descrito protocolos de post-funcionalizacin que permiten incorporar a la
NP prcticamente cualquier grupo funcional, macromolcula e incluso otras NPs. Bsicamente, estos protocolos
se pueden dividir en dos tipos: los que implican la formacin de enlaces covalentes con la MNPs y los basados en
interacciones de carcter electrosttico.
Figura 11: Co-condensacin de una MNP con
aminopropiltrimetilsiloxano (APTMS)

En cualquier caso, cada uno de los dos mtodos de funcionalizacin tiene ciertas ventajas. Si lo que se desea es
la funcionalizacin directa de la superficie en un solo paso
de sntesis el mtodo de grafting parece el ms adecuado.
Sin embargo, si se desea la obtencin de una superficie
homognea e uniforme el mtodo de co-condensacin resulta ms prctico.
5.4 FUNCIONALIZACIN REGIOSELECTIVA
Existe la posibilidad de funcionalizar las MNPs de forma
regioselectiva y discriminar entre la superficie externa de
las nanopartculas y sus poros. Esta regioselectividad se

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5.5.1 FORMACIN DE ENLACES COVALENTES CON

MNPs
Una vez la MNP ha sido funcionalizada mediante injerto
o co-condensacin es posible utilizar las diversas tcnicas desarrolladas en bioconjugacin con el fin de decorar la MNP con molculas o biomoleculas de inters(29). A
continuacin, se describen algunas de las estrategias de
acoplamiento ms interesantes en el campo de las nanopartculas: formacin de amidas, tioureas y cicloadicin de
Huisgen.
Normalmente para la formacin de amidas se requiere la
participacin de un reactivo activador del cido. Un protocolo muy utilizado se conoce como reaccin de Steglich o
mtodo de la carbodiimida. Para ello el cido carboxlico

25

se activa mediante la formacin del ster de la N-hidroxisuccinimida correspondiente. Esta activacin se realiza en
presencia de un agente de acoplamiento como la 1-etil3-(dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC). Finalmente la
amina reacciona con el ster activado para proporcionar la
amida con excelentes rendimientos (>90%) (Esquema 2).

Esquema 2: Formacin de una amida

Alternativamente es posible utilizar la gran reactividad y

selectividad del grupo isotiocianato frente a aminas primarias para formar tioureas(30). Este protocolo es ampliamente utilizado en bioqumica para el acoplamiento de
protenas y conjugacin de anticuerpos. La reaccin es
prcticamente cuantitativa y se pueden utilizar DMSO o
EtOH como disolventes (Esquema 3).

6. TCNICAS DE CARACTERIZACIN DE
NANOPARTCULAS FUNCIONALIZADAS
Con el fin de estudiar y analizar la presencia de grupos
funcionales en la superficie de las NPs se dispone de diversas tcnicas que no difieren de los mtodos comunes
del laboratorio: espectroscopa de absorcin y fluorescencia, espectroscopa de infrarrojo (IR), anlisis termogravimtrico (TGA), anlisis elemental orgnico (AE) y resonancia magntica en fase slida.
6.1
ESPECTROSCOPIA
DE
ABSORCIN
Y
FLUORESCENCIA
Los espectros de absorcin y fluorescencia son una buena opcin para confirmar rpidamente la funcionalizacin
de las nanopartculas, a partir de su suspensin en un
disolvente adecuado(38). Estas tcnicas son especialmente indicadas para el estudio de sistemas que incorporan
sensores fluorescentes o colorantes. En la Figura 13, se
muestra como ejemplo el espectro de absorcin de MNPs
funcionalizadas con isocianato de fluorescena (FITC).

Esquema 3: Formacin de una tiourea

Otra ruta muy comn en bioconjugacin es la cicloadicin

alquino-azida catalizada por Cu(I), basada en el concepto
de qumica click o tambin conocida como CuAAC(31-33).
Este tipo de qumica implica la cicloadicin de un alquino
y una azida para formar un anillo de 1,2,3-triazol, que sirve como un fuerte nexo entre la nanopartcula y el agente
biofuncional (esquema 4).

Esquema 4: Reaccin de formacin de 1,3-triazoles

Este proceso ha demostrado ser altamente verstil y adecuado para la conjugacin de una variedad de especies,
desde molculas pequeas hasta protenas(34).

Figura 13: Espectro de absorcin de MNPs

funcionalizadas con FITC (EtOH)

6.2 ESPECTROSCOPA DE INFRAROJO (IR)

La utilizacin de la espectroscopa de IR est muy indicada
para el estudio de MNPs funcionalizadas dado que permite reconocer fcilmente y de forma no destructiva(39) la
presencia de carbonilos, tioureas, azidas, aminas, steres
o cidos. Como ejemplo, en la Figura 14 se muestra el espectro de IR de nanopartculas funcionalizadas con aminas
primarias. A continuacin las NPs se tratan con isocianato
de fluorescena (FITC) para generar el conjugado correspondiente. Si se comparan los espectros de IR de las NPs
funcionalizadas (Figura 14 b) con el de las mismas NPs sin
funcionalizar (Figura 14 a), se puede observar la aparicin
de toda una serie de bandas entre 1600 cm-1 y 1200 cm-1
que corresponden a la tensin de la lactona (1575 cm-1) y al
aumento de las flexiones C-H alrededor de 1400 cm-1.

5.5.2 INTERACCIN ELECTROESTTICA

La elaboracin de sistemas complejos que doten de funcionalidad a las NPs puede beneficiarse de la aplicacin
de conceptos de la qumica supramolecular. En particular
de todo tipo de interacciones dbiles (puentes de hidrgeno, formacin de complejos metlicos y pares inicos entre otras) y asociaciones entre macromolculas (polmeros
y biomolculas). Un ejemplo relevante de aplicacin biolgica es el recubrimiento de MNPs cargadas positivamente
en su superficie con aminas cuaternizadas y recubiertas
con cadenas de ADN aninicas(35-37).
Figura 14: IR MNPs sin funcionalizar a) y funcionalizadas con FITC b)

26

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

6.3
TERMOGRAVIMETRA
(TGA)
y
ANLISIS
ELEMENTAL (AE)
La termogravimetra s una tcnica destructiva de anlisis que consiste en monitorizar las cambios de peso de
una muestra en funcin de la temperatura y el tipo de atmsfera (oxidante, reductora). En particular, los estudios
de TGA sobre MNPs permiten determinar su contenido
en materia orgnica y estimar su grado de funcionalizacin(21). A modo de ejemplo, en la Figura 15 se muestra el
TGA de una muestra de nanopartculas no funcionalizadas
que se comparan con unas nanopartculas funcionalizadas con grupos amino por co-condensacin con APTES
(aminopropiltrietilsilano). As, como se puede observar en
la Figura 15a), se produce una primera prdida de masa
que corresponde a la prdida de agua. En cambio las nanopartculas funcionalizadas con grupos amino adems
de la prdida de agua, presentan otra prdida importante
de masa entre 300 oC y 550 oC. Comparando la cantidad
de materia orgnica que se encuentra presente en las
MNPs sin funcionalizar y funcionalizadas se estima que el
porcentaje de carga de materia orgnica proveniente del
APTES es del 17%. Es decir, hay alrededor de 2,810-7 mol
de grupos amino por miligramo de MNPs.

6.4 RESONANCIA MAGNTICA EN ESTADO SLIDO

(RMN-MAS)
A diferencia de lo que ocurre con las muestras en disolucin, la espectroscopa de resonancia magntica nuclear de muestras slidas no est tan extendida. La razn
proviene del gran ensanchamiento de las seales del espectro debido a las interacciones dipolo-dipolo entre los
momentos magnticos de los ncleos vecinos que caracteriza los espectros de slidos. Una tcnica comnmente
empleada, que minimiza estas interacciones y reduce la
anchura de las seales, consiste en la rotacin de la muestra con un ngulo de 54,44 con respecto a la direccin del
campo magntico. sta tcnica se conoce como RMN de
rotacin en ngulo mgico (RMN-MAS, Magic Angle Spinning). El desarrollo de sta y otras tcnicas han permitido
el uso del RMN en estado slido para el estudio estructural de sustancias poco solubles, como algunos polmeros,
vidrios, cermicas y resinas, entre otros, siendo una buena alternativa para materiales de baja cristalinidad que no
pueden ser estudiados por tcnicas de difraccin(40).
La aplicacin de la tcnica de RMN-MAS a MNPs permite
observar los protones provenientes tanto de la superficie
externa como de la interna. As en el caso de MNPs funcionalizadas con grupos APTES es posible observar los
tres grupos metileno acoplados entre s. Esta tcnica tambin permite conocer la existencia de algn tipo de interaccin entre las molculas y la slice o incluso que tipo
de conformacin puede ser la ms probable en funcin
del tipo de interacciones de los protones con el medio(41).

7. APLICACIONES DE MNPS EN BIOMEDICINA: NANOPLATAFORMAS TERANSTICAS

Figura 15: TGA de MNPs sin grupos APTES a) y con APTES b)

Tambin es posible realizar un estudio anlogo, aunque

no tan preciso, de las MNPs funcionalizadas utilizando
el anlisis elemental por combustin (AE). En efecto, esta
tcnica permite estimar la presencia de la fraccin orgnica por comparacin del porcentaje de carbono, hidrgeno
y nitrgeno de las MNPs sin funcionalizar con el de las
funcionalizadas. En el ejemplo de la Tabla 2, se comparan MNPs sin funcionalizar, con MNPs funcionalizadas
por co-condensacin con APTES. En este caso se puede
observar que se ha introducido un 1,9 %, de nitrgeno y
la fraccin orgnica ha aumentado aproximadamente el
doble. Adems se puede calcular que cada miligramo de
MNPs equivale aproximadamente a 1,410-6 mol de grupos amino.

Aunque las MNPs se desarrollaron inicialmente para catlisis, rpidamente se descubri su potencial para otras
muchas aplicaciones tales como sondas de imagen, sensores, materiales pticos, fotocatlisis, pilas de combustible, sistemas elctricos y sobretodo en el mbito de la
investigacin mdica. Es precisamente en este campo en
el que los cientficos han mostrado un mayor inters por
las MNPs como materiales biotecnolgicos(4, 42) debido a
su elevado potencial para albergar diferentes molculas
huspedes gracias a su elevada superficie especfica y
particular geometra. Estas caractersticas y su baja toxicidad hacen de las MNPs prometedores vehculos tiles
para la liberacin de frmacos (Controled Drug Release)
(43)
. Estos vehculos se conciben como nanoplataformas
capaces de desempear una doble funcin de diagnosis
y terapia al mismo tiempo, lo que hoy en da se conoce
bajo el concepto de teranstica(44) (derivado de terapia y
diagnosis) (Figura 16).

Tabla 2: AE MNPs y MNPs-(CH2)3NH2

Peso / mg

C/%

H/ %

N/%

MNPs
1,090

3,36

1,33

--

1,006

3,24

1,26

--

1,127

6,39

2,08

1,9

1,068

6,17

2,04

1,9

MNPs-(CH2)3NH2

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

Figura 16: Concepto de Teranstica

27

Por tanto se desea disear NPs con capacidad para detectar, visualizar y tratar(45-47). Para dotar de todas estas
funciones a las NPs es preciso funcionalizarlas y conjugarlas con los agentes activos necesarios (Tabla 3).

tuales(60) (p.ej. liposomas y polmeros biodegradables) ya

que es posible incorporar elevadas cantidades de carga
en sus mesoporos y a continuacin bloquear reversiblemente su salida, permitiendo un transporte selectivo y una
liberacin eficaz (Figura 18).

Tabla 3: Agentes activos utilizados para funcionalizar MNPs

Molcula

Propiedades

Frmaco

Tratamiento enfermedades

Anticuerpos

Selectividad del transporte

ADN/SiRNA

Transduccin gentica

Fotosensibilizadores

Terapia fotodinmica (PDT)

Proteinas

Centro activo, selectividad

Polmeros catinicos

Cruzar membranas

Polmeros biodegradables

Biodistribucin y estabilidad

Agentes de contraste

Imagen por Resonancia Magntica (IRM)

Figura 18: Liberacin de carga controlada

Para conseguir este objetivo es necesario disear nanopuertas inteligentes que se abran como respuesta a un
estmulo(4,42,61). Principalmente, se han utilizado dos tipos
de estmulos(62,63): los estmulos internos como cambios
de pH, medios reductores y actividad enzimtica, que
dependen de la homeostasis de la clula, y los estmulos
externos como son la luz, los ultrasonidos o los campos
magnticos, que pueden aplicarse segn se desee. Adems, los estmulos externos tienen la ventaja que pueden
controlarse en tiempo y localizacin (Tabla 4).

Fluorforo

Localizacin y reconocimiento

Sensor de iones o pH

Sensor, diagnstico

Fosfolpidos

Encapsulacin molculas

El modelo tpico de estas nanoplataformas (Figura 17)

consiste en incorporar un frmaco en el interior de la MNP
de forma reversible y decorar la superficie con elementos
que mejoren su biodisponibilidad (polietilenglicol (PEG)
(48-52)
y polmeros catinicos para cruzar membranas citoplasmticas(53)), aumenten su selectividad (anticuerpos
que permiten una gran selectividad hacia la zona afectada(16,17,54)) y localizen la NP (agentes de contraste,(30,31) molculas fluorescentes o nanocristales paramagnticos(24)).
Adicionalmente, la incorporacin de receptores de aniones y cationes ofrece informacin sobre la composicin
del entorno qumico ya sea el pH del medio (niveles bajos
asociados a clulas con un elevado metabolismo como
las clulas tumorales) o la presencia de ciertos aniones o
cationes (55- 59).

Tabla 4: Tipo de nanopuertas que se pueden utilizar

Nanopuertas
sensibles a:

Mediante

pH

Enlaces lbiles (hidracinas, steres, tioles)

Temperatura

Polmeros termosensibles

Reacciones redox

Puentes disulfuro

Luz

Ismeros cis-trans

Campos magnticos

Aplicacin de un campo magntico

sobre nanopartculas metlicas

Enzimas

Glucosa, enlace biotina-avidina, enlace

glicosdico, interaccin con aptmeros

A continuacin se describen tres sistemas de apertura de

las nanopuertas: apertura mediante un grupo bloqueador,
apertura mediante polmero y apertura mediante vlvulas
(64,65)
.

Figura 17: Ejemplo de una nanoplataforma

Otra modalidad de nanovehculo descrito en la literatura

consiste en MNPs recubiertas por cadenas de SiRNA unidas a la superficie de la nanopartcula por interacciones
inicas. Una vez la MNP se ha internalizado, la nanoplataforma se disocia liberando el SiRNA. Esta tecnologa se ha
utilizado en la transfeccin celular(26).

7.1.1 APERTURA POR ELIMINACIN DE UN GRUPO

BLOQUEANTE
Se trata de anclar un grupo bloqueador en los poros de
la MNP mediante un enlace reactivo capaz de escindirse
o sufrir isomerizacin a travs de un estmulo, liberndose as la carga contenida (Figura 19). Este tipo de control
mecnico se basara en enlaces covalentes (por ejemplo,
tioteres que son escindidos en medios reductores o amidas degradables por enzimas especficas(66-67)), grupos
voluminosos (por ejemplo, NPs de Au o nanocristales de
CdS) o molculas fotoisomerizables, como los azobencenos(68-69).

7.1 SISTEMAS DE LIBERACIN DE FARMACOS

Un importante requisito para el diseo de sistemas de liberacin de frmacos es que presenten una eficiente habilidad para transportar la carga a la regin adecuada y
liberarla dosificadamente. En este contexto, las MNPs se
presentan como una buena alternativa a los vehculos ac-

28

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

8. PERSPECTIVAS FUTURAS

Figura 19: Liberacin de carga mediante un grupo bloqueador

7.1.2 APERTURA MEDIANTE POLMEROS

Los polmeros se han utilizado como controles mecnicos
ya sea mediante absorcin o unin covalente a la superficie de las MNPs. Su mecanismo de accin se basa en
envolver fuertemente la superficie externa de las nanopartculas taponando la salida de los poros(62,70,71). A travs de
diferentes estmulos, los polmeros pueden inflarse, enrollarse o eliminarse lo que permite la apertura de los poros
bloqueados y la liberacin de la carga (Figura 20).

Con el fin de preparar MNPs para su utilizacin en aplicaciones biomdicas como nanoplataformas, una amplia
gama de propiedades, factores y condiciones de carcter
fsico, qumico, biolgico y fisiolgico deben cumplirse(74):
Deben ser biocompatibles y biodegradables
Deben permitir una elevada carga de agentes activos
Deben presentar un mecanismo de entrega de la carga especfico en el lugar adecuado excluyendo la liberacin en clulas normales y tejidos
No debe liberarse el frmaco de forma prematura
Deben presentar un mecanismo de liberacin controlado para proporcionar una dosis eficaz
Aunque gran parte de estos requisitos se han alcanzado,
desgraciadamente las interacciones que sufren las NPs
en el organismo son extraordinariamente complejas, lo
que explica, en gran medida, la dificultad del proceso de
optimizacin y evaluacin al que deben someterse las nanoplataformas para que estn listas para ser usadas en
aplicaciones clnicas. Aun as grandes progresos se han
conseguido en poco ms de una dcada (Figura 22).

Figura 20: Ejemplo de liberacin de carga mediante polmero

7.1.3 APERTURA MEDIANTE VLVULAS

El concepto de una nanovlvula supramolecular incluye el
uso de una molcula inmovilizada unida covalentemente a
la matriz de slice (eje) junto con una molcula cclica que
actuar a modo de tapn(62, 72,73). En el estado cerrado, la
molcula cclica se une al eje y este conjunto sirve como
barrera de las aperturas de los poros. Por otra parte, la
disociacin y la retirada de la tapa hace que la vlvula este
en la posicin abierta y se libere la carga del poro (Figura
21).

Figura 21: Liberacin de carga mediante vlvula

AFINIDAD LXXI, 565, Enero - Marzo 2014

Figura 22: Avance en el estudio de las MNPs

Sin duda, una cuestin fundamental que rodea el uso de

las MNPs es su toxicidad. sta depender siempre de los
sustituyentes y agentes activos que se encuentren anclados a las nanopartculas. Por lo que, en cada caso, se
deber estudiar la toxicidad de las nanopartculas funcionalizadas.
Otro aspecto crtico es la tendencia de las NPs a formar
agregados. Cualquier agregacin que ocurra en el torrente
sanguneo puede obstruir los capilares y resultar en una
embolia. En general, el hgado y el bazo son los principales
rganos dnde se acumulan las MNPs(75). Se cree que,
mayoritariamente, la eliminacin de las nanopartculas de
slice ocurre a travs de su descomposicin en cido orto
silcico y su posterior excrecin a travs del sistema renal(6). Se han observado nanopartculas de slice mesoporosa intactas en la orina pero el proceso de excrecin por
el cual ocurre todava no es conocido.
Si las nanopartculas son administradas mediante inyeccin por va intravenosa, el tiempo de circulacin en
sangre y su biodistribucin depende principalmente del
dimetro efectivo de las nanopartculas y de sus propiedades de superficie. Se sabe que las nanopartculas de
gran tamao, superiores a 100 nm de dimetro, o nanopartculas agregadas son rpidamente absorbidas por el

29

sistema retculo-endotelial (RES)(74). Del mismo modo, una

adsorcin de protenas no especficas en la superficie externa de las nanopartculas tambin produce aumento del
dimetro efectivo y puede conducir a mismo fenmeno de
absorcin por el RES. Por lo tanto, resulta muy importante
controlar el tamao y modificar adecuadamente la superficie de las MNPs para superar con xito los ensayos in
vivo.

9. CONCLUSIONES
Las MNPs se caracterizan por presentar unas cavidades
mesoporosas que permiten alojar y proteger una amplia
variedad de molculas orgnicas, mientras que en la superficie externa se pueden funcionalizar con agentes que
mejoren su biodistribucin, solubilidad, selectividad y especificidad. stos agentes pueden ser adsorbidos o covalentemente enlazados tanto en las paredes interiores de
los mesoporos cmo en su superficie externa. Las MNPs
se presentan como unos buenos candidatos para su aplicacin clnica como nanoplataformas multifuncionales
para el diseo de nanodispositivos capaces de desempear una doble funcin de diagnosis y terapia (teranstica).
No obstante, todava hay variables que deben ser estudiadas como su estabilidad y biocompatibilidad.

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