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UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud


Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

EXAMEN DE LABORATORIO.

Por: Alberto Aroz Vsquez


Matricula: 2152028961
Lic. En Medicina Veterinaria y Zootecnia

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

CUESTIONARIO.

1. Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
R= medios fsicos:
-Vapor saturado a presin: autoclave: es el medio ms especfico y efectivo de
menor costo para esterilizar la mayora de los objetos de uso hospitalario
-Calor seco: pupinel: este sistema elimina microorganismos por coagulacin de las
protenas de estos. Su efectividad depende de la cantidad de calor, la cantidad de
calor disponible y los niveles de perdida de calor, requiere largos periodos de
exposicin.
Medios qumicos:
-xido de etileno: este es un producto qumico con un alto poder desinfectante, su
presencia est en forma lquida y se volatiza formando un compuesto gaseoso que
elimina microorganismos por cualquier alquilacin de la pared celular del
microorganismo.
-Perxido de hidrogeno: es un agente qumico que se ha utilizado como
desinfectante de alto nivel y esterilizante por inmersin, esteriliza a baja
temperatura por medio de plasma de perxido de hidrogeno
-cido paracetico: esterilizante de alto nivel, es esporicida, por lo tanto esteriliza
en tiempos menores al glutaraldehido, hay dos formas por este agente: lquido y
plasma.
2. Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior e
indica cuando es recomendable utilizar cada uno de estos.
R= Fsicos: ventajas: ms efectivo y de bajo costo, eleva la temperatura tiempo
corto y no deja residuos txicos.
Desventajas: su efectividad depende de la cantidad de calor disponible, largos
periodos.
Qumicos: ventajas: alto poder desinfectante.
Desventajas: alto costo, largos periodos de esterilizacin y alto nivel de
infraestructura.

3. Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en la


desinfeccin.
R=Antispticos: alcoholes, tintura de yodo, povidona yodada, clorhexidina,
triclosan.
Desinfectantes: glutaraldehido, hipoclorito de sodio1%
4. Qu tipo de sustancias suele utilizarse continuamente para desinfectar
superficies?
R= para las superficies muy comnmente es usado el cloro y productos a base de
cloro, incluidas los compuestos de hipocloruro, yodoforos, amonio, cidos y lcalis
fuerte, fenol, agentes gaseosos.
5. Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estril
para el trabajo microbiolgico y seala que factores influyen en la creacin de la
zona estril.
R=el mechero te ayuda a crear corrientes de aire caliente que arrastran partculas
de polvo y microorganismos dispersos en el rea que rodea tu rea de trabajo, es
decir el aire caliente que genera la flama arrastra hacia afuera toda partcula y
microorganismo.
6. Menciona otros mtodos usados en la industria y en los laboratorios de
investigacin para crear zonas de trabajo estril.
R= se pueden realizar limpiezas con agua jabonosa, se limpian con una compresa
impregnada de alcohol al 70%
Limpieza de la cabina, desinfeccin de todo el material que se vaya a introducir a
la cabina sumergindola en un bao de alcohol.
7. Explica los riesgos que puede correr si no recoges el frasco, los tubos y las
pipetas despus de concluir cada sesin.
R= los riesgos que se corren son primero que el material pueda caerse y por lo
tanto romperse, tambin puede quedar sucio y contaminarse al hacerse una nueva
tcnica.
8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de
trabajo despus de concluir cada sesin.
R= al no lavar los materiales de laboratorio corremos el riesgo que queden sucios
y por lo tanto despus se contaminen o se infecten o algn virus se quede ah.

9. Realiza el diagrama del microscopio describe cada una de sus partes e indica
su intencin.

10. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.


R= se han encontrado bacterias como por ejemplo Vibrio, e-coli, pseudomonas.
11. Explica cul es el objetivo de sembrar diluciones del agua.
R=su principal propsito es disminuir la concentracin bacteriana de una muestra
especifica.
12. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.
R= es la tcnica ms utilizada, para aislar los microorganismos en un placa de
agar, se colocan muestras y se realiza un barrido con una asa inoculada hasta
lograr separar colonias individuales de la cepa de inters.
13. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
R= este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fcil
desarrollo aerobios y anaerobios facultativos.
14. Explica que se le llama medio de cultivo bacteriolgico.
R= son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y
condiciones fsicas optimas, permite el crecimiento de microorganismos.

15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.


R= son aquellos que adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan
una serie de factores, indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes. Este enriquecimiento se hace por medio de adicin de sangre u otros
tipos biolgicos.
16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.
R= son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una poblacin poli microbiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana
especfica.
17. Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias grampositivas
y gram negativas, resaltando las diferencias.
R= bacterias gram positivas: pared celular interna y una pared de peptiduglucano
que es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicacin y
supervivencia de la batera, no tiene membrana externa, no tiene espacio peri
plasmtico.
Bacterias gram negativas: pose una pared celular ms compleja , pared celular
interna, pared de peptiduglucano, bicapa lpida externa, membrana externa,
espacio peri plasmtico.
18. Cmo se diferencia las bacterias coliformes?
R= las bacterias del grupo coliformes totales que son capaces de fermentar
lactosa a 44-45 se conocen como coliformes termo tolerantes.
19. Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
R= lo que indica es que el agua est contaminada y por lo tanto no puede ser
consumida por el ser humano.
20. Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?
R=su importancia se debe que al ser analizadas se pueden crear procesos y
tratamientos para el agua y as lograr que el agua est libre de e-coli.
21. Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
R= todas estn y se considera que el Escheria coli es el ndice de contaminacin
fecal ms adecuado.

22. Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de enterobacterias en


la muestra de agua que colectaste?
R= puede contener parsitos en el agua y as desencadenar unan posible
contaminacin y un riesgo de una suma importancia de la salud humana.
23. Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua
contaminada con materia fecal?
R= Shigellae dysenteriae, Salmonella, Fiebre tifoidea, Salmonella ssp, Vibrio,
Escheria Colli.
24. Qu significan las siglas IMViC?
I: Indol, M: rojo de metilo, V: V-P (Voges- Proskauer), iC: citrato de Simons
25. Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?
R= se utiliza en la biologa para identificar bacterias. El resultado de test expresa
mediante smbolos de positivo o negativo (+,-) segn el resultado de cada prueba
siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del mtodo.
26. Por qu razn no es recomendable utilizar el asa bacteriolgica para realizar
la prueba de la oxidasa?
R= para las pruebas de oxidasa, se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual est
compuesto de alcohol osaomlico, p-dimetilamino- benzaldehdo, y cido
clorhdrico. El cido puede reaccionar con el metal y darles falsos positivos.
27. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24
horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a
partir de una sola bacteria (UFC) y estas de dividen en un promedio de 30
minutos.
R= el nmero de bacterias resultante depende mucho del tipo de muestra pero lo
aproximado es que se generen alrededor de unas 4 a 6 bacterias.

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud


Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

EXAMEN DE LABORATORIO.

Por: Alicia Maribel Curiel Rojo


Matricula: 2152026985
Lic. en Estomatologia

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

1.- Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
Garantizan la destruccin total de los microorganismos presentes en sustancias o
materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en
alguna experimentacin provengan de las muestras estudiadas y no de alguna
contaminacin del ambiente o de la persona.
Dentro de los mtodos fsicos se pueden encontrar:
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la accin
del calor, el cual provoca una desnaturalizacin de protenas, fusin
desorganizacin de las membranas en los microorganismos.
Radiaciones: se atribuye a la absorcin por DNA, existen uniones covalentes entre
residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y
se inhibe la sntesis del DNA, por tanto tambin el crecimiento y respiracin de los
microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.
Dentro de los mtodos qumicos: Pueden ser Gaseosos (xido de etileno) o no
Gaseosos (Aldehdos, cido peractico y perxido de hidrgeno)
Los antispticos son considerados venenos que al actuar sobre grmenes, estos
son destruidos. Algunos de ellos ejercen su accin nociva sobre todas las clulas y
otros actan sobre algunas especies bacterianas en especfico. Es ptimo para la
antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.

2.- Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior


e indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.
Mtodos fsicos:
Ventajas: Rpido calentamiento y penetracin, destruccin de bacterias en un
periodo corto, no hay residuos txicos, adems de que no es corrosivo.

Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a


esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algn dao o simplemente
el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no
penetran en slidos y pobremente en lquidos.

Mtodos qumicos:
Ventajas: el ciclo de esterilizacin dura de 54-75 minutos, el material sometido a
estos procesos no precisa de aireacin.
Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, txicas
y de muy alto costo.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en


la desinfeccin.
Los desinfectantes son productos qumicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehdo, hipoclorito de sodio
Los antispticos son sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de
los microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,

4.- Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desinfectar


superficies?
*Hipoclorito de sodio al 10%
*Solucin de benzal diluido 1:10

5.- Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala qu factores influyen en la
creacin de la zona estril.
Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a travs del calor, cuando se
trabaja con siembra de microorganismos.

Factores que influyen en la zona estril: Una manipulacin correcta de las


muestras y del material, evitar contaminar a travs de microorganismos propios
del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente
a su uso.
6.- Menciona otros mtodos usados en la industria y en los laboratorios de
investigacin para crear zonas de trabajo estriles.
Desinfectantes: son productos qumicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados
Antispticos: sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos
El calor es el mtodo ms utilizado para la esterilizacin y puede emplearse calor
seco con hornos con una temperatura de 170C por una hora o como calor
hmedo con autoclaves con una temperatura de 121C a 15 libras de presin por
pulgada durante 20minutos.

7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.
Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo
que puede causar algn accidente adems de que es importante recoger el
material y desinfectarlo para evitar la contaminacin bacteriolgica en especial si
los materiales sern usados despus.

8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa
de trabajo despus de concluir cada sesin.
De no limpiar la mesa se propaga la contaminacin, hay que tratar de mantener el
campo estril. Adems que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el
manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.

10.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.

Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas


pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae
y Proteus mirabilis.

11.- Explica cul es el objetico de sembrar diluciones de agua.


Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que
permiten trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas
viables as como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no
trabajar con una dilucin tan grande ya que el nmero de bacterias sera tan bajo
que podra impedir el detectar las colonias.

12. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.


El objetivo es obtener, a partir de elevado nmero de bacterias, un nmero
reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al
incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.
13. Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar macconkey.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras, opacas

14. Explica a qu se le llama medio de cultivo bacteriolgico.


Un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como
bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo para
favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un mtodo
fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana y veterinaria.

15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.


El enriquecimiento es una tcnica que utiliza un medio selectivo lquido para
permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene
una gran variedad de microorganismos. As, aquellos microorganismos para los
que el ambiente sea ms favorable crecern ms que los otros y finalmente sern
predominantes
Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una
serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos
biolgicos que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo.
El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas
sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo
(agar chocolate).
16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana
especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

17.- Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias


grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
Bacteria Gram Positiva:
a) Su envoltura celular comprende:
1. La membrana citoplasmtica
2. La pared celular.
b) La pared celular est compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o
murena (polmero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientacin -1,4
con N-acetil murmico), su grosor le confiere una gran resistencia, las
protege de una ruptura osmtica en ambientes acuticos, les confiere forma
y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la
tincin de Gram.
c) Presentan slo una membrana lipdica (membrana citoplasmtica) y la capa
gruesa de peptidoglicano.
Posee dos clases de cidos teicoicos: cido lipoteicoico (cido teicoico
unido a un lpido) y cido teicoico. Son polisacridos que se unen al cido
N-acetil murmico del peptidoglicano.
La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas
de cido lipoteicoico.
Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un rgimen de
limitacin de fosfato son incapaces de sintetizar cidos teicoicos, pero en su
lugar producen cidos teicurnicos. Los teicurnicos consisten en polmeros
aninicos formados por la alternancia de cidos urnicos (que tienen
grupos -COOH libres) y aminozcares como la N-acetil-galactosamina.
d) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o
capa superficial (es la parte ms externa de la envoltura celular bacteriana)
unida a la capa de peptidoglicano.
e) No existe presencia de endotoxinas.
Bacteria Gram Negativa:
a) Conformada por 4 zonas:
1. La membrana citoplasmtica.
2. El espacio periplasmtico, ubicado entre la membrana citoplasmtica y el
peptidoglicano.
3. Una fina capa de peptidoglicano.
4. Membrana externa que contiene fosfolpidos, el lipopolisacrido (LPS) y
protenas (protenas de membrana 6 externa). Esta capa est
estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de
la pared celular.

b) Su estructura didrmica, es decir, de doble membrana celular (una externa


y la otra citoplasmtica) est ntimamente ligada al color rosado tenue que
presentan ante la tincin de Gram.
c) Presentan dos membranas lipdicas (membrana citoplasmtica y membrana
externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano
Entre la membrana citoplasmtica interna y la membrana externa que
recubre la pared celular se localiza el espacio periplsmico, relleno de una
sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes
para la nutricin en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas protenas; entre ellas, las porinas o
canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, adems de
los lipopolisacridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacrido O
(antgeno O), una estructura polisacrida central (KDO) y el lpido A
(endotoxina).
d) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la
membrana externa.
e) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacrido (LPS)

18.- Cmo se definen a las bacterias coliformes?


Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entricas en forma de
bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades
bioqumicas:

Ser aerobias o anaerobias facultativas


Ser bacilos Gram negativos;
No ser esporgenas; (Si es Gram negativo NO esporula)
Fermentan la lactosa a 35C en menos 48 horas
Con produccin de cido y gas

Incluye los gneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante


mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminacin fecal, pero se ha
demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua
y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la
eficiencia de los procesos de sanitizacin y desinfeccin, as como de calidad
sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinacin
se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los
mtodos del nmero ms probable (NMP MPN por sus siglas en ingls) que es
un mtodo estadstico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy
bajas de coliformes. Tambin se pueden detectar por cuenta en placa utilizando
agar bilis-rojo violeta (ABRV RVBA por sus siglas en ingls) en el cual las

colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse


por filtracin en membrana (Millipore) e incubacin en medios adecuados, por
mtodos rpidos como Petrifilm y reacciones cromognicas o fluorognicas.
Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces
de fermentar la lactosa tambin a 44.5 C; se consideran el indicador ms
adecuado de contaminacin con heces de animales y humanos, por ejemplo en
pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinacin
se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del mtodo de NMP, cultivando
en caldo lactosado con incubacin a 44.5 C. Generalmente se combinan las
determinaciones, segn se requiere.
Escherichia coli: se considera indicador de contaminacin fecal reciente, humana
o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles,
y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme
termotolerante (fermenta lactosa a 44.5C) que produce indol a partir de triptofano
y produce -glucuronidasa, caractersticas que se usan para su identificacin en
laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros
mtodos, incluyendo Petrifilm.
19.- Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el
suministro de agua puede estar contaminado, ya sea con aguas negras u otro tipo
de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se
encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los
sedimentos del fondo.
20.- Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?
La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito
de la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer
dao) del agua destinada al consumo, evitando as epidemias gastrointestinales, y
adems de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.
21.- Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario
desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores
de contaminacin. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la
totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de
origen fecal).
Vase pregunta nmero 18.

22.- Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de


enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli as como
tambin de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.

23.- Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?
* Enf. trasmitidas por el agua: Clera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenteras,
Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.
* Enf. con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis,
Paraginimiasis, Esquistosomiasis.
* Enf. vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo,
Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).

24.- Qu significan las siglas IMViC?


I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons

25.- Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?


Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse
a travs de una serie de pruebas bioqumicas, que permiten determinar la
presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la
existencia de una secuencia metablica. Con este fin se han desarrollado diversos
esquemas de clasificacin, uno de los ms conocidos y utilizados corresponde al
IMVIC que se desarroll para clasificar especies de la familia antes mencionada y
correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aerbicas o
anaerbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporgenas que producen cido
y gas durante la fermentacin de la lactosa).

26.- Por qu razn no es recomendable utilizar el asa bacteriolgica para


realizar la prueba de la oxidasa?

Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema


citocromooxidasa que activa la oxidacin del citocromo, que es reducido por el
oxgeno molecular que produce agua o perxido de hidrgeno segn la especie
bacteriana.
Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas estn
ntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.
27. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24
horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
El nmero de bacterias totales segn su fusin binaria es de 281, 474, 976,
710, 656.

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Tronco Comn Divisional

Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

Cuestionario de Laboratorio.
Por: Carlos Martnez Martnez
Matricula: 2152026921
Lic. en Medicina Veterinaria y Zootecnia

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

Mtodos bsicos para el aislamiento e identificacin de enterobacterias del agua.


Cuestionario de Laboratorio.

1. Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
Depende de factores como tiempo, exposicin y temperatura. El calor se puede
aplicar como agente esterilizante de dos formas: El calor hmedo el cual destruye
a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El calor es
considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el
material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir algn dao.

2. Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior e


indica cundo es recomendable utilizar cada una de estas.
Mtodos fsicos:
-Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos.


Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas y sustancias
viscosas no voltiles.
-Desventajas
Requiere de mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo
debido a la baja penetracin del calor.

Mtodos qumicos:
-Ventajas

No deja ningn residuo txico.


Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso.
El material no precisa aeracin.
El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 min.
-Desventajas
No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa. Algodn, lquidos,
humedad o instrumental con lmenes largos y estrechos.
Es el mtodo de esterilizacin ms caro.

3. Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en la


desinfeccin.
Desinfectantes: Cloro y compuestos clorados, aldehdos, xido de etileno,
compuestos fenlicos, cidos y colorantes.
Antispticos: Alcoholes, Iodo, agentes catinicos y anfteros.

4. Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desinfectar


superficies?
Hipoclorito de sodio o solucin benzal.

5. Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala qu factores influyen en la
creacin de la zona estril.
Crea corrientes de aire caliente que arrastran partculas de polvo y
microorganismos dispersos en el aire que rodea el rea de trabajo, es decir el aire
caliente que genera la flama arrastra hacia fuera toda partcula y microorganismos.
(convencin de masas de aire).

6. Menciona mtodos usados en la industria y en laboratorios de investigacin


para crear zonas de trabajo estriles.
El uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminacin.
Lavar con hipoclorito de sodio al 10% la mesa de trabajo.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones o accidentes de contaminacin as como
romperse dicho material de vidrio y cortarse.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de


trabajo.
Se puede provocar un foco de infeccin.

9. Realiza el diagrama de un microscopio y describe cada una de las partes y


su funcin.

Brazo: Es la parte donde se debe sujetar.

Base o pie: Proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del
microoscopio.
Platina: Tiene en su centro una cobertura circular por la que pasar la luz.
Macromtrico: Permite hacer un movimiento rpido hacia arriba o hacia abajo del
tubo para localizar la imagen a observar.
Micromtrico: Permite colocar en posicin cualquiera de los objetivos que se
encuentran en l.
Tubo: Proporciona sostn a los oculares y los objetivos.
Ocular: Lentes que captan y amplian la imagen formada para los objetivos.
Objetivos: Pequeos cilindros colocados en el revolver quue proporciona poder de
resolucin del microscopio.
Fuente de luz: Foco de energa elctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el
sistema condesador.

10. Explica qu tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.


Enterobacterias como Shigella, Salmnoella, Yersina pestis.

11. Explica cul es el objetivo de sembrar diluciones del agua.


Trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas viables, as
como aislamiento adecuado de colonias.

12. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.


El objetivo es obtener a partir de un nmero elevado de bacterias, uno ms
reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al
incubar sta, cada una de las bacterias originar una colonia.

13. Explica qu tipos de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.

En un medio diferencial para la seleccin y recuperacin de enterobacterias y


bacilos gram negativas entricas relacionadas.

14. Explica a qu se le llama medio de cultivo bacteriolgico.


Sustancias que pueden ser lquidas o slidas que contienen los nutrientes
necesarios para que una bacteria pueda crecer y desarrollarse.

15. Explica a qu se llama medio de cultivo enriquecido.


Estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le
puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos. Ej.
sangre, suero, lquidos etctera. Se utiliza para microorganismos que tienen
grandes exigencias nutricionales.

16. Explica qu es un medio de cultivo selectivo.


Son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
fsicas del medio aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con
el fin de inhibir el crecimiento de especies qumicos cuyo crecimiento no interesa.
17. Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias gram+ y
gram-, resaltando sus diferencias.
Gram-positivas:
Se tien de azul oscuro o violeta.
Membrana citoplasmtica.
Capa gruesa de peptidoglicano.
cidos teicicos y lipoteicicos, que sirven como agentes quelantes y en
ciertos tipos de adherencia.
Polisacridos de la cpsula.

Gram-negativas:
Se tien de un color rosado oscuro.
Pobre membrana celular (externa y citoplasmtica)
Membrana externa.

Tanto las bacterias gram+ como las gram- pueden presentar una capa
superficial cristalina denominada capa S; en las gram- la capa S est unida
directamente a la membrana externa. Mientras que en las gram+, la capa S
est unida a la capa peptidoglicano.

18. Cmo se definen a las bacterias coliformes?


Coliforme signifca con forma de coli, refirindose a la bacteria del grupo, la
Escheriachia Coli. Pero en s consta de un grupo homogneo de bacterias que se
encuentran normalmente y en abundancia en el intenstino humano. Se utiliza
cmo ndice de contaminacin de las aguas y por lo general estn desprovistas de
peligrosidad.

19. Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?


Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos
pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua se halla exenta de
organismos productores de enfermedades.

20. Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?


La determinacin de la calidad bacteriolgica resiste gran importancia en el mbito
de la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al
consumo evitando as epidemias gastrointestinales.

21. Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?


No, tambin estn las coliformes totales que se encuentran en aguas
contaminadas (aguas negras y otro tipo de desechos en descomposicin).

22. Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de entero-bacterias


en la muestra de agua que se colect?
Cuando se tiene un nivel alto con presencia de entero-bacterias en el agua
pueden contener todo tipo de microorganismos tales como parsitos, bacterias y
virus causantes de enfermedades como infecciones urinarias, pulmona,

septicemia o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de


ciertos antibiticos, desnutricin, tc.

23. Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?
Fiebre tifoidea (Sallmonella typhi)
Disentera bacilar (Shigella dysenteriae)
Gastroenteritis infantil (Escherichia Coli)
Peste (Yersinia pestis)

24. Qu significa las siglas IMViC?


Se emplea en biologa para la identificacin de bacterias. I = Indo, M = Rojo de
Metilo, V = V-P (Voges Proskquer) y iC = Citrato de Simons.

25. Cul es el objeto de realizar las pruebas de IMViC?


Para la identificacin de enterobacterias (bacilos gram-, anareobios facultativos
con metabolismo fermentado).

26. Por qu razn no es recomendable utilizar el asa bacteriolgica para


realizar las pruebas de oxidasa?
Porque se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual est compuesto de alcohol y
cido clorhdrico. El cido puede reaccionar con el metal y dar falsos-positivos.

27. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24


hrs. de incubacin.
281, 474, 976, 710, 656 (aprx. 290, 00

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud


Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

Tema. Cuestionario sobre los mtodos bsicos


para el aislamiento e identificacin de
enterobacterias del agua

Por: Delfina Garca Betanzo


Matricula: 2152025960
Mdico Cirujano

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

Cuestionario Laboratorio
1.- Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de
esterilizacin
Garantiza la destruccin total de microorganismos presentes en sustancias o
materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en
alguna muestra provenga de la experimentacin y no de alguna contaminacin.

Fsicos:
a) Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la accin
del calor, el cual provoca una desnaturalizacin de protenas, fusin y
desorganizacin de membranas de los microorganismos.
b) Radiaciones: Se atribuye a la absorcin por DNA, existen uniones covalentes
entre residuos de pirimidina perteneciente a la misma cadena, distorsiona el DNA
e inhibe su sntesis por tanto el crecimiento. Su uso principal es para esterilizar
aire y superficies.

Qumicos:
a) Gaseosos: Los antispticos son considerados venenos que destruyen
grmenes, algunos ejercen su accin nociva sobre toda clula y otros sobre
algunas, son mas especficos. ptimos para antisepsia y en mesas de trabajo;
como el xido de etileno.
b) No gaseosos: Se encuentran los aldehdos, cido peractico y perxido de
hidrgeno.

2.- Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior


e indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.
a) Fsicos:
Ventajas: Son de rpido calentamiento y penetracin, destruyen bacterias en un
periodo corto, no hay residuos txicos y no son corrosivos.
Desventajas: El material a veces no soporta altas temperaturas y pueden sufrir
dao o incluso puede ser inflamable. Las radiaciones no penetran slidos y de
manera muy pobre a los lquidos.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en


la desinfeccin
-Desinfectantes: Productos qumicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados; como el glutaraldehdo, hipoclorito de sodio.
-Antispticos: Sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos; como los alcoholes, tintura de yodo.

4.- Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desinfectar


superficies?
Hipoclorito de sodio al 10%
Solucin de Benzal diluida 1:10

5.- Explica cual es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala que factores influyen en la
creacin de la zona estril.

Ayuda a mantener un ambiente de esterilidad, a travs del calor, cuando se trabaja


con siembra de microorganismos. Los factores que influyen: una manipulacin
correcta de la muestra y material ayudan a no contaminar, adems de evitar la
contaminacin por medio del aire externo o agentes provenientes del mismo
experimentador. De igual forma interviene aquel material que no es previamente
esterilizado para su uso.

6.- Menciona otros mtodos usados en la industria y en los laboratorios de


investigacin para crear zonas de trabajo estriles
El uso de desinfectantes, antispticos y empleo de calor, tanto seco, como
hmedo, el uso de una estufa y de un autoclave.
Tambin se pueden emplear rayos infrarrojos, filtracin, el mtodo de tindalizacin
(autoclave que se purga) y radiaciones ionizantes.

7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges en frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin
Se corre el riesgo de la ruptura del material Causa un accidente Es importante
recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminacin bacteriolgica

8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa
de trabajo despus de concluir cada sesin
Se propaga la contaminacin y genera una alteracin en los resultados

9.- Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e


indica su funcin.

10.- Explica que tipos de bacterias puedes aislarse en el agua


Enterobacterias, como: Shigella, Salmonella, E.Coli, klebsiellla pneumoniae, etc.

11.- Explica cul es el objetivo de sembrar diluciones del agua


Se recomiendan debido al alto contenido de bacteria, ya que permite trabajar con
un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas viables asi como el
aislamiento adecuado de las colonias

12.- Explica el fundamento de aislamiento por estra cruzada

El objetivo es obtener a partir de un nmero elevado de bacterias, un nmero


reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al
incubarla, cada una de las bacterias originar una colonia (UFC) Y adems puede
estimarse la cantidad relativa de microorganismos en la muestra original.

13.- Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey


Se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram (-) de fcil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa en
muestras clnicas, de agua y alimentos. Se pueden aislar en este tipo de agar,
todas aquellas bacterias que pertenecen a la familia de las enterobacterias.

14.- Explica a qu se le llama medio de cultivo bacteriolgico


Al proceso de crecimiento de microorganismos mediante la toma de bacteria de un
sitio de invencin (in vivo) por mtodos de recoleccin de muestra y crecimiento
en un ambiente artificial (in Vitro)

15.- Explica qu es un medio de cultivo enriquecido


Contiene nutrientes especficos requeridos para el desarrollo de determinados
patgenos; el enriquecimiento se hace por adicin de sangre y otros productos
biolgicos que aportan factores nutritivos al medio de cultivo y por tanto a las
bacterias.

16.- Explica qu es un medio de cultivo selectivo

Son aquellos medios que son utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas
bacterias; facilitan nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana
especfica.

17.- Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias Gram+ y


Gram-, resaltando sus diferencias
a) Gram (+) Tienen una capa gruesa de peptidoglucanos, presentan una gran
resistencia debido a esta capa que posee cidos lipoteicoicos y se tien de color
azul-prpura.
b) Gram (-) Poseen una capa de peptidoglucanos sin embargo es mas delgada, su
membrana externa contiene lipopolisacridos, fosfolpidos y protenas. Este tipo de
bacterias se tien de color rojo.

18.- Cmo se definen a las bacterias coliformes?


Se definen como indicadores de contaminacin fecal en el agua, que se
encuentran en el intestino del humano y animales homeotermos. Son bacterias
entricas en forma de bacilos cortos, Gram (-), aerobios o anaerobios facultativos,
no es pirgenos, fermentan lactosa y producen cido y gas.

19.- Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?


Indican que el agua esta contaminada, con aguas negras o de otro tipo de
desechos en descomposicin.

20.- Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?

Permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer dao) del agua destinada
al

consumo,

evitando

as

epidemias,

enfermedades

gastrointestinales

enfermedades de tipo diarreicas muy fuertes, que inclusive pudieran ser mortales.

21.- Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?


No, ya que las coliformes fecales, se encuentran en las coliformes totales.
22.-

Qu

implicaciones

epidemiolgicas

tienen

la

presencia

de

enterobacterias en la muestra de agua que recolectaste?


Una posible epidemia si es que esta agua se encuentra destinad apara el
consumo humano, epidemia de E. Coli, Salmonella, enfermedades diarreicas y
disentera.

23.- Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con material fecal?
Transmitidas por el agua: Clera, fiebre, tifoidea, paratifoidea, disenteras, polio,
hepatitis, salmonelosis.
Con base en el agua: Ascariasis, paragonimiasis.
Vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, filariasis, paludismo

24.- Qu significan las siglas IMViC?


I= Indol
M= Rojo de metilo
V= Vogues-Proskawer

iC= Citrato de Simmons.

25.- Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?


Las bacterias pertenecientes a la familia de enterobacterias pueden identificarse a
travs de una serie de pruebas bioqumicas, que permiten notar la presencia o
ausencia de ciertas enzimas y la existencia de una secuencia metablica. Por lo
tanto el IMViC sirve para clasificar especies de la familia de las enterobacterias y
dependiendo los resultados arrojados por dichas pruebas, saber de que bacteria
se trata.

26.- Por qu razn no es recomendable utilizar el asa bacteriolgica para


realizar la prueba de la oxidasa?
Porque los metales pueden inferir de manera oxidativa, ya que las enzimas estn
ntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones. La prueba
tiene como objetivo demostrar la presencia de un sistema citocromooxidasa que
activa la oxidacin del citocromo, el cual es reducido por el oxgeno molecular que
produce agua o perxido de hidrgeno, segn la especie bacteriana.

27.- Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de


las 24 horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
origina a partir de una sola bacteria (UFC) y stas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
281,474,976,710,656 bacterias en 24 horas.

UNIVERSIDAD AUTNOMA
METROPOLITANA
Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Tronco Comn Divisional

Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

CUESTIONARIO DE LABORATORIO
MTODOS BSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE
ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.

Alumna: Ventura Maqueda Diana

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

1.- Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
Agentes fisicos: el calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas:
el calor humedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacion de
las protenas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de
sus componentes celulares.
La radiacin, la emisin y propagacin de la energa puede ser utilizada como
agente para la eliminacin de microorganismos
Radiaciones ionizantes se pueden utilizar para esterilizar materiales platicos y la
luz uv para reas cerradas
Quimicos: capaces de daar los componentes clulares (protenas, membranas,
etc)
Gaseosos-----> oxido de etileno
No gaseosos ---------> alheidos ej: glutaraldehido cido paractico y peroxido de
hidrgeno
1. Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior e
indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.
La eleccin del mtodo, va a depender de las caractersticas del elementos que se
va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria,
entre otros factores.

Calor Hmedo
VENTAJAS

Rpido calentamiento y penetracin.

Destruccin de bacterias y esporas en poco tiempo.

No deja residuos txicos.

Bajo deterioro del material expuesto.

Econmico.

DESVENTAJAS

No se permite para emulsiones con agua.

Es corrosivo sobre algunos metales.

Calor Seco
VENTAJAS

No es corrosivo para metales e instrumentos.


Permiten esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas y de viscosas
no voltiles.
DESVENTAJAS

Mayor tiempo esterilizacin.

Baja penetracin del calor.

Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiacin, tiempo exposicin y dosis

QUIMICOS (Oxido de Etileno)


VENTAJAS

Esteriliza
material
termosensible,
cardiorrespiratorias, metal etc.

equipos electrnicos,

bombas

DESVENTAJAS

Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, ademas cancergeno.


Aldehdos
VENTAJAS

Mtodo rpido y nico esterilizanrte fro.


DESVENTAJAS

No se pueden esterilizar algunos objetos con celulosa, algodn,, lquidos,


humedad, madera, etc
Gas-Plasma de Perxido de Hidrgeno

VENTAJAS

No deja ningn residuo toxico.

Se convierte en agua y oxigeno al final del proceso.

Material sin aireacin.

Ciclo dura entre 54 y 75 min.


DESVENTAJAS

Mtodo mas costoso.

2. Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en la


desinfeccin.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).
Detergentes catinicos (compuestos de amonio cuaternario)
hipoclorito sdio 1%
cloroxilenol
Formaldehdo.
Glutaraldehdo.
Perxido de hidrgeno.
Dicloruro de mercurio.

Antispticos:
Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).
Tintura de Yodo
Providona yodada
Clorhexidina
Triclosn
3. Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desifenctar
superficies?

bactericidas, fungicidas,fungistatica y virusidas

4. Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala que factores influyen en la
creacin de la zona estril.
Al Trabajar cerca del mechero se crea una corriente de aire clido que no permite
que las bacterias entren a la zona de trabajo.

5. Menciona otros mtodos usados en la industria y en la industria y en los


laboratorios de investigacin para crear zonas de trabajo estriles.
El uso de equipo para evitar contaminacin (bata, guantes y cubrebocas) as
como el
lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido adems
del uso del mechero.

6. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.
Se puede sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de


trabajo despus de concluir cada sesin.
Riesgo de contaminacin (foco de infeccin.)

8. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e


indica su funcin.

PARTE
BRAZO

BASE O PIE

PLATINA

FUNCION
Es la parte de donde se debe sujetar, las
pinzas el carro el tubo del microscopio y
el revlver. Adems sirve para trasladar el
microscopio de un lugar a otro
Es una pieza que proporciona estabilidad
y sirve de soporte a todas las partes del
microscopio
Es una pieza metlica, cuadrada, que
tiene en su centro una abertura circular
por la que pasar la luz del sistema de
iluminacin.
Aqu
se
coloca
el
portaobjetos con la muestra a observar

PINZAS DE SUJECION

TORNILLO MACROMETRICO

TORNILLO MICROMETRICO

TUBO
OCULAR

OBJETIVOS

DIAFRAGMA

FUENTE DE LUZ

Parte mecnica que sirve para sujetar la


preparacin. La mayora de los
microscopios modernos tienen las pinzas
adosadas a un carro con dos tornillos,
que permiten un avance longitudinal y
transversal de la preparacin.
Permite hacer un movimiento rpido
hacia arriba o hacia abajo del tubo o la
platina, y se utiliza para localizar la
imagen a observar.
Parte mecnica de movimiento giratorio
que nos permite colocar en posicin
cualquiera de los objetivos que se
encuentran en l
Parte mecnica que proporciona sostn a
los oculares y objetivos.
Se localiza en la parte superior del tubo
ocular y son las lentes que Capta y
amplia la imagen formada en los
objetivos. Los primeros microscopios
eran monoculares, es decir, posean una
sola lente. Los microscopios actuales
poseen dos oculares, uno para cada ojo y
se les llama binoculares.
Se encuentran incrustados en el revlver
Son unos pequeos cilindros colocados
en el revlver que proporciona el poder
de resolucin del microscopio y
determinan la cantidad total de aumento.
Existe un diafragma en el condensador,
que elimina el exceso de luminosidad
para tener una buena iluminacin del
objeto a observar
Para observar la muestra microscpica
es necesario que sta se ilumine con
algn tipo de luz y nuestros microscopios
cuentan con un foco que da energa
elctrica que dirige sus rayos luminosos
hacia el sistema condensador

9. Explica qu tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.

Las enterobacteriaceae

10. Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.


Trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas viables, as
como un aislamiento adecuado de colonias.

11. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.


Proceso semicuantitativo.Tcnica que se utliza para obtener apartir de un elevado
nero de bacterias un nmero reducido de ellas distribuidas individualmente, cada
una originar una colonia.
12. Explica qu tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
El agar MacConkey es un medio diferencial para la seleccin y recuperacin de
Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas
y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como nica fuente de
carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.

13. Explica a que se llama medio de cultivo bacteriolgico.


Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,

14. Explica qu es un medio enriquecido.


Aquellos medios que han sido complementados con lquidos corporales, vitaminas
especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos como
tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al
mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.

15. Explica qu es un medio de cultivo selectivo.


Favorecen el crecimiento especfico de un microorganismo particular (o grupo de
microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a
partir de una poblacin microbiana mixta.

16. Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias


grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
*Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.
*No tiene membrana externa
* No tiene espacio periplasmtico
* La red de murena est muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas
* La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formacin de enlaces
peptdicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano
* No contiene LPS
* En la tincin de Gram, retienen la tincin azul
* Conservan el complejo yodocolorante
* Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
* Poseen otros componentes: cidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos
complejos.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS


Poseen una pared celular ms compleja:
-pared celular interna
-pared de peptidoglucano

- bicapa lipdica externa


Membrana externa: forma un saco rgido alrededor de la bacteria, mantiene
estructura y es barrera impermeable a macromolculas, ofrece proteccin en
condiciones adversas
Espacio periplasmtico: espacio entre la superficie externa de la membrana
citoplasmtica y la interna de la membrana externa.
La red de murena presenta una sola capa
La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de
lipopolisacridos situada en la parte externa de la pared celular.
Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa clulas B, liberacin
de IL, FNT, IL 6 por macrfagos.
En la tincin son rosas
Pierden el complejo yodocolorante
Pueden ser anaerobios o aerobios
Poseen protenas con concentraciones elevadas.

17. Cmo se definen a las bacterias coliformes?


Son un grupo de bacterias que se comparten caracteristicas bioquimicas en
comun y son utiles microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua
en el que se encuentran las enterobacterias
18. Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgnicos
19. Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?
Tiene gran importancia en el mbito de la salud pblica ya que permite saber la
calidad del agua destinada al consumo humano evitando as epidemias
gastrointestinales.

20. Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?


No, tambin existen coliformes de vida libre.

21. Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de enterobacterias


en la muestra de agua que colectaste?
Pueden sucitarse enfermedades leves como las infecciones agudas del odo,
hasta otras ms graves como la fiebre tifoidea y la hepatitis.

22. Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera

23. Qu significan las siglas IMViC?


es una prueba utilizada en biologa para la identificacin bacterias. Se compone de
cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

24. Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?


Se emplean fundamentalmente para la identificacin de las Enterobacterias
(bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

25. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24


horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y stas se dividen en un tiempo
promedio
de
30
minutos.

24hrs=281 474 976 710 656

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud


Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

CUESTIONARIO PRCTICA
MTODOS BSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA

Por: Eduardo Jernimo Hernndez


Matricula: 2152033604
Lic. Mdico Cirujano
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

1.-Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
Mtodos fsicos
Depende de factores como tiempo, exposicin y temperatura. El calor se puede
aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el cual destruye
a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que
destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El
calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de
dao.
Mtodos qumicos
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes
porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces
de daar los componentes celulares de los microorganismos (protenas,
membranas, etc.)

1. Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior e


indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.
La eleccin del mtodo, va a depender de las caractersticas del elementos que se
va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria,
entre otros factores.

Mtodo
Calor hmedo

Calor seco

Ionizantes RUV
Filtracin

Mtodos Fsicos
Ventajas
Rpido, no deja residuos
txicos, bajo deterioro del
material expuesto, econmico
No es corrosivo para metales
e instrumentos, permite
esterilizacin de sustancias en
polvo
Esterilizan superficies
Esteriliza aceites, pomadas,
soluciones oftlmicas

Desventajas
No se permite para emulsiones
con agua, es corrosivo sobre
algunos metales
Mayor tiempo de esterilizacin.
Baja penetracin del calor.
Radiaciones de acuerdo al
tiempo de radiacin.
Escasamente penetrantes
No retienen virus ni
microplasma.

Mtodo
xido de Etileno

Aldehidos

Gas-Plasma de
Perxido de
Hidrgeno

Mtodos Qumicos
Ventajas
Esteriliza material que es
termosensible, como equipos
electrnicos, et.
Mtodo rpido y nico
esterilizante fro.
No deja ningn residuo txico,
se convierte en agua y
oxgeno al final del proceso,
material sin aireacin, dura
aproximadamente entre una
hora y hora y media.

Desventajas
Peligroso por ser altmente
inflamable y explosivo, adem+s
de ser cancergeno
No se puede estrilizar objetos
con celulosa, algodn, lquidos,
humedad, madera, etc.
Muy costoso.

2. Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en la


desinfeccin.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).
Detergentes catinicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro.
Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sdico, dixido de cloro) Sulfato de
cobre. xido de etileno (gas). Formaldehdo. Glutaraldehdo. Perxido de
hidrgeno. Compuestos yodforos que contienen yodo en solucin. Dicloruro de
mercurio. Ozono. cido peractico. Compuestos fenlicos.

Antispticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que


contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes
catinicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de
benzalconio). Perxido de hidrgeno (solucin al 3%). compuestos yodorosos que
contienen yodo en solucin. Nitrato de Plata.
3. Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desifenctar
superficies?
Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas

4. Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala que factores influyen en la
creacin de la zona estril.
Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centmetros aproximadamente) crea
corriente de aire clido que impide la entrada a esta zona de bacterias
contaminantes esto creando un inoculo ms puro del microorganismo a trabajar.

5. Menciona otros mtodos usados en la industria y en la industria y en los


laboratorios de investigacin para crear zonas de trabajo estriles.
Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminacin.
Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10.
El uso del mechero.

6. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de


trabajo despus de concluir cada sesin.
Se puede provocar un foco de infeccin.

8. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e


indica su funcin.

PARTE
BRAZO

BASE O PIE

FUNCION
Es la parte de donde se debe sujetar, las
pinzas el carro el tubo del microscopio y
el revlver. Adems sirve para trasladar el
microscopio de un lugar a otro
Es una pieza que proporciona estabilidad

PLATINA

PINZAS DE SUJECION

TORNILLO MACROMETRICO

TORNILLO MICROMETRICO

TUBO
CREMALLERA

OCULAR

OBJETIVOS

DIAFRAGMA

FUENTE DE LUZ

y sirve de soporte a todas las partes del


microscopio
Es una pieza metlica, cuadrada, que
tiene en su centro una abertura circular
por la que pasar la luz del sistema de
iluminacin. Aqu se coloca el
portaobjetos con la muestra a observar
Parte mecnica que sirve para sujetar la
preparacin. La mayora de los
microscopios modernos tienen las pinzas
adosadas a un carro con dos tornillos,
que permiten un avance longitudinal y
transversal de la preparacin.
Permite hacer un movimiento rpido
hacia arriba o hacia abajo del tubo o la
platina, y se utiliza para localizar la
imagen a observar.
Parte mecnica de movimiento giratorio
que nos permite colocar en posicin
cualquiera de los objetivos que se
encuentran en l
Parte mecnica que proporciona sostn a
los oculares y objetivos.
Permite que el movimiento de los
tornillos macro y micromtrico sea de
mayor o de menor amplitud.
Se localiza en la parte superior del tubo
ocular y son las lentes que Capta y
amplia la imagen formada en los
objetivos. Los primeros microscopios
eran monoculares, es decir, posean una
sola lente. Los microscopios actuales
poseen dos oculares, uno para cada ojo y
se les llama binoculares.
Se encuentran incrustados en el revlver
Son unos pequeos cilindros colocados
en el revlver que proporciona el poder
de resolucin del microscopio y
determinan la cantidad total de aumento.
Existe un diafragma en el condensador,
que elimina el exceso de luminosidad
para tener una buena iluminacin del
objeto a observar
Para observar la muestra microscpica
es necesario que sta se ilumine con

algn tipo de luz y nuestros microscopios


cuentan con un foco que da energa
elctrica que dirige sus rayos luminosos
hacia el sistema condensador

9. Explica qu tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.


Las enterobacteriaceae

10. Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.


Trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas viables, as
como un aislamiento adecuado de colonias.

11. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.


La tcnica de estra cruzada es un procedimiento semicuantitativo.
Es una tcnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado nmero de
bacterias, unnmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la
superficie de la placa. Al incubar sta, cada una de las bacterias originar una
colonia.

12. Explica qu tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.


El agar MacConkey es un medio diferencial para la seleccin y recuperacin de
Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas
y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como nica fuente de
carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.

13. Explica a que se llama medio de cultivo bacteriolgico.


Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,

14. Explica qu es un medio enriquecido.


Aquellos medios que han sido complementados con lquidos corporales, vitaminas
especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos como
tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al
mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.

15. Explica qu es un medio de cultivo selectivo.


Son aquellos que favorecen el crecimiento especfico de un microorganismo
particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una poblacin microbiana mixta.

16. Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias


grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular interna y una


pared de peptidoglucano.

Poseen una pared celular ms compleja:

*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que


da consistencia y forma esencial para
replicacin y supervivencia de la bacteria.
No tiene membrana externa

-pared celular interna


-pared de peptidoglucano
- bicapa lipdica externa
Membrana externa: forma un saco rgido
alrededor de la bacteria, mantiene

estructura y es barrera impermeable a


macromolculas, ofrece proteccin en
condiciones adversas

No tiene espacio periplasmtico

Espacio periplasmtico: espacio entre la


superficie externa de la membrana
citoplasmtica y la interna de la membrana
externa.

La red de murena est muy desarrollada y


llega a tener hasta 40 capas

La red de murena presenta una sola capa

La penicilina mata a las gram positivas, ya


que bloquea la formacin de enlaces
peptdicos entre las diferentes cadenas del
peptidoglucano

La penicilina no mata a las Gram negativas,


a causa de la capa de lipopolisacridos
situada en la parte externa de la pared
celular.

No contiene LPS

Contiene LPS: estimulador de respuestas


inmunes: activa clulas B, liberacin de IL,
FNT, IL 6 por macrfagos.

En la tincin de Gram, retienen la tincin


azul

Quedan decoloradas.

Conservan el complejo yodocolorante

Pierden el complejo yodocolorante

Pueden ser anaerobios o aerobios


Son esporulantes y no esporulantes, como
Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Poseen otros componentes: cidos


teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos
complejos.

Poseen protenas con concentraciones


elevadas.

17. Cmo se definen a las bacterias coliformes?


Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten caractersticas
bioqumicas en comn y son tiles como microorganismos indicadores de sanidad
de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias.
Poseen morfologa bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No
forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo cido y
gas en 24 a 38 horas a 36 C.

18. Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?


Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgnicos
sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de
alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.

19. Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?


La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito
de
la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al
consumo
evitando as epidemias gastrointestinales.

20. Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?


No, tambin existen coliformes de vida libre.

21. Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de enterobacterias


en la muestra de agua que colectaste?

Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pblica.
Los volmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una
amplia gama de parsitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las
cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del
odo, hasta otras ms graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y
la hepatitis. Los gusanos parsitos y los patgenos bacterianos tales como
Salmonella, tambin se encuentran comnmente en el agua que da positivo en la
prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes fecales.

22. Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera

23. Qu significan las siglas IMViC?


IMVIC es una prueba utilizada en biologa para la identificacin bacterias. Se
compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

24. Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?


Se emplean fundamentalmente para la identificacin de las Enterobacterias
(bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

25. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24


horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y stas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
24hrs=281 474 976 710 656

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Tronco Comn Divisional

Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

CUESTIONARIO PRCTICA
MTODOS BSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE
ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.
Por: Dimas Guzmn Cristian.
Matricula: 2152031146
Lic. Mdico cirujano.

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

CUESTIONARIO PRCTICA

MTODOS BSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE


ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.

26. Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor
hmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las
protenas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de sus
componentes celulares.
El calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de
dao.
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes
porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces
de daar los componentes celulares de los microorganismos (protenas,
membranas, etc.)

27. Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior e


indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.
La eleccin del mtodo, va a depender de las caractersticas del elementos que se
va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria,
entre otros factores.
MTODOS FSICOS.
Calor hmedo.
Ventajas: Rpido, no deja residuos txicos, bajo deterioro del material expuesto,
econmico.
Desventajas: No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos
metales.
Calor seco.

Ventajas: No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilizacin de


sustancias en polvo.
Desventajas: Mayor tiempo de esterilizacin. Baja penetracin del calor.
Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiacin.
Ionizantes RUV.
Ventajas: Esterilizan superficies.
Desventajas: Escasamente penetrantes.
Filtracin.
Ventajas: Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftlmicas.
Desventajas: No retienen virus ni microplasma.
MTODOS QUMICOS.
xido de Etileno.
Ventajas: Esteriliza material que es termo sensible, como equipos electrnicos,
etc.
Desventajas: Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, adems de ser
cancergeno.
Aldehdos.
Ventajas: Mtodo rpido y nico esterilizante fro.
Desventajas: No se puede estrilizar objetos con celulosa, algodn, lquidos,
humedad, madera, etc.

Gas-Plasma de Perxido de Hidrgeno.


Ventajas: No deja ningn residuo txico, se convierte en agua y oxgeno al final del
proceso, material sin aireacin, dura aproximadamente entre una hora y hora y
media.
Desventajas: Muy costoso.

28. Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en la


desinfeccin.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).
Detergentes catinicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro.
Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sdico, dixido de cloro) Sulfato de
cobre. xido de etileno (gas). Formaldehdo. Glutaraldehdo. Perxido de
hidrgeno. Compuestos yodforos que contienen yodo en solucin. Dicloruro de
mercurio. Ozono. cido peractico. Compuestos fenlicos.

Antispticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que


contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes
catinicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de
benzalconio). Perxido de hidrgeno (solucin al 3%). compuestos yodorosos que
contienen yodo en solucin. Nitrato de Plata.
29. Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desifenctar
superficies?
Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas

30. Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala que factores influyen en la
creacin de la zona estril.
Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centmetros aproximadamente) crea
corriente de aire clido que impide la entrada a esta zona de bacterias
contaminantes esto creando un inoculo ms puro del microorganismo a trabajar.

31. Menciona otros mtodos usados en la industria y en la industria y en los


laboratorios de investigacin para crear zonas de trabajo estriles.
Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminacin.
Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10.
El uso del mechero.

32. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.

33. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de
trabajo despus de concluir cada sesin.
Se puede provocar un foco de infeccin.

34. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e


indica su funcin.

PARTE
BRAZO

BASE O PIE

PLATINA

PINZAS DE SUJECION

TORNILLO MACROMETRICO

TORNILLO MICROMETRICO

TUBO
CREMALLERA

OCULAR

FUNCION
Es la parte de donde se debe sujetar, las
pinzas el carro el tubo del microscopio y
el revlver. Adems sirve para trasladar el
microscopio de un lugar a otro
Es una pieza que proporciona estabilidad
y sirve de soporte a todas las partes del
microscopio
Es una pieza metlica, cuadrada, que
tiene en su centro una abertura circular
por la que pasar la luz del sistema de
iluminacin.
Aqu
se
coloca
el
portaobjetos con la muestra a observar
Parte mecnica que sirve para sujetar la
preparacin. La mayora de los
microscopios modernos tienen las pinzas
adosadas a un carro con dos tornillos,
que permiten un avance longitudinal y
transversal de la preparacin.
Permite hacer un movimiento rpido
hacia arriba o hacia abajo del tubo o la
platina, y se utiliza para localizar la
imagen a observar.
Parte mecnica de movimiento giratorio
que nos permite colocar en posicin
cualquiera de los objetivos que se
encuentran en l
Parte mecnica que proporciona sostn a
los oculares y objetivos.
Permite que el movimiento de los
tornillos macro y micromtrico sea de
mayor o de menor amplitud.
Se localiza en la parte superior del tubo
ocular y son las lentes que Capta y
amplia la imagen formada en los
objetivos. Los primeros microscopios
eran monoculares, es decir, posean una
sola lente. Los microscopios actuales

OBJETIVOS

DIAFRAGMA

FUENTE DE LUZ

poseen dos oculares, uno para cada ojo y


se les llama binoculares.
Se encuentran incrustados en el revlver
Son unos pequeos cilindros colocados
en el revlver que proporciona el poder
de resolucin del microscopio y
determinan la cantidad total de aumento.
Existe un diafragma en el condensador,
que elimina el exceso de luminosidad
para tener una buena iluminacin del
objeto a observar
Para observar la muestra microscpica
es necesario que sta se ilumine con
algn tipo de luz y nuestros microscopios
cuentan con un foco que da energa
elctrica que dirige sus rayos luminosos
hacia el sistema condensador

35. Explica qu tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.


Las enterobacteriaceae

36. Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.


Trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas viables, as
como un aislamiento adecuado de colonias.

37. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.


La tcnica de estra cruzada es un procedimiento semicuantitativo.
Es una tcnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado nmero de
bacterias, unnmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la
superficie de la placa. Al incubar sta, cada una de las bacterias originar una
colonia.

38. Explica qu tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.


El agar MacConkey es un medio diferencial para la seleccin y recuperacin de
Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas
y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como nica fuente de
carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.

39. Explica a que se llama medio de cultivo bacteriolgico.


Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,

40. Explica qu es un medio enriquecido.


Aquellos medios que han sido complementados con lquidos corporales, vitaminas
especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos como
tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al
mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.

41. Explica qu es un medio de cultivo selectivo.


Son aquellos que favorecen el crecimiento especfico de un microorganismo
particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una poblacin microbiana mixta.

42. Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias


grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
Bacterias Gram positivas.
1. Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.
Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial
para replicacin y supervivencia de la bacteria.
2. No tiene membrana externa.

3. No tiene espacio periplasmtico


4. La red de murena est muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas.
5. La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formacin de
enlaces peptdicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano.
6. No contiene LPS.
7. En la tincin de Gram, retienen la tincin azul.
8. Conservan el complejo yodocolorante.
9. Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
10. Poseen otros componentes: cidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos
complejos.
Bacterias Gram negativas.
1. Poseen una pared celular ms compleja:
Pared celular interna
Pared de peptidoglucano bicapa lipdica externa
2. Membrana externa: forma un saco rgido alrededor de la bacteria, mantiene
estructura y es barrera impermeable a macromolculas, ofrece proteccin
en condiciones adversas.
3. Espacio periplasmtico: espacio entre la superficie externa de la membrana
citoplasmtica y la interna de la membrana externa.
4. La red de murena presenta una sola capa.
5. La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de
lipopolisacridos situada en la parte externa de la pared celular.
6. Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa clulas B,
liberacin de IL, FNT, IL 6 por macrfagos.
7. Quedan decoloradas.
8. Pierden el complejo yodocolorante.
9. Pueden ser anaerobios o aerobios.
10. Poseen protenas con concentraciones elevadas.
43. Cmo se definen a las bacterias coliformes?
Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten caractersticas
bioqumicas en comn y son tiles como microorganismos indicadores de sanidad
de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias.
Poseen morfologa bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No
forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo cido y
gas en 24 a 38 horas a 36 C.

44. Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?

Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgnicos


sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de
alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.

45. Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?


La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito
de
la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al
consumo
evitando as epidemias gastrointestinales.

46. Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?


No, tambin existen coliformes de vida libre.

47. Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de enterobacterias


en la muestra de agua que colectaste?
Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pblica.
Los volmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una
amplia gama de parsitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las
cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del
odo, hasta otras ms graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y
la hepatitis.

48. Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera

49. Qu significan las siglas IMViC?


IMVIC es una prueba utilizada en biologa para la identificacin bacterias. Se
compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

50. Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?


Se emplean fundamentalmente para la identificacin de las Enterobacterias
(bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

51.-Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24


horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a
partir de una sola bacteria (UFC) y stas se dividen en un tiempo promedio de 30
minutos.
24hrs=281 474 976 710 656

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud


Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

EXAMEN DE LABORATORIO.

Por: Melina Trejo Lara


Matricula: 2152034003
Lic. en Enfermera

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

1.- Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.
Garantizan la destruccin total de los microorganismos presentes en sustancias o
materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en
alguna experimentacin provengan de las muestras estudiadas y no de alguna
contaminacin del ambiente o de la persona.
Dentro de los mtodos fsicos se pueden encontrar:
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la accin
del calor, el cual provoca una desnaturalizacin de protenas, fusin
desorganizacin de las membranas en los microorganismos.
Radiaciones: se atribuye a la absorcin por DNA, existen uniones covalentes entre
residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y
se inhibe la sntesis del DNA, por tanto tambin el crecimiento y respiracin de los
microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.
Dentro de los mtodos qumicos: Pueden ser Gaseosos (xido de etileno) o no
Gaseosos (Aldehdos, cido peractico y perxido de hidrgeno)

Los antispticos son considerados venenos que al actuar sobre grmenes, estos
son destruidos. Algunos de ellos ejercen su accin nociva sobre todas las clulas y
otros actan sobre algunas especies bacterianas en especfico. Es ptimo para la
antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.

2.- Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior


e indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.
Mtodos fsicos:
Ventajas: Rpido calentamiento y penetracin, destruccin de bacterias en un
periodo corto, no hay residuos txicos, adems de que no es corrosivo.
Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a
esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algn dao o simplemente
el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no
penetran en slidos y pobremente en lquidos.

Mtodos qumicos:
Ventajas: el ciclo de esterilizacin dura de 54-75 minutos, el material sometido a
estos procesos no precisa de aireacin.
Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, txicas
y de muy alto costo.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en


la desinfeccin.
Los desinfectantes son productos qumicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehdo, hipoclorito de sodio
Los antispticos son sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de
los microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,

4.- Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desinfectar


superficies?
*Hipoclorito de sodio al 10%
*Solucin de benzal diluido 1:10

5.- Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala qu factores influyen en la
creacin de la zona estril.
Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a travs del calor, cuando se
trabaja con siembra de microorganismos.
Factores que influyen en la zona estril: Una manipulacin correcta de las
muestras y del material, evitar contaminar a travs de microorganismos propios
del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente
a su uso.
6.- Menciona otros mtodos usados en la industria y en los laboratorios de
investigacin para crear zonas de trabajo estriles.
Desinfectantes: son productos qumicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados
Antispticos: sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos
El calor es el mtodo ms utilizado para la esterilizacin y puede emplearse calor
seco con hornos con una temperatura de 170C por una hora o como calor
hmedo con autoclaves con una temperatura de 121C a 15 libras de presin por
pulgada durante 20minutos.

7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.
Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo
que puede causar algn accidente adems de que es importante recoger el
material y desinfectarlo para evitar la contaminacin bacteriolgica en especial si
los materiales sern usados despus.

8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa
de trabajo despus de concluir cada sesin.
De no limpiar la mesa se propaga la contaminacin, hay que tratar de mantener el
campo estril. Adems que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el
manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.

10.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.


Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas
pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae
y Proteus mirabilis.

11.- Explica cul es el objetico de sembrar diluciones de agua.


Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que
permiten trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas
viables as como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no
trabajar con una dilucin tan grande ya que el nmero de bacterias sera tan bajo
que podra impedir el detectar las colonias.

12. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.


El objetivo es obtener, a partir de elevado nmero de bacterias, un nmero
reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al
incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.
13. Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar macconkey.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras, opacas

14. Explica a qu se le llama medio de cultivo bacteriolgico.


Un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como
bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo para
favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un mtodo
fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana y veterinaria.

15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.


El enriquecimiento es una tcnica que utiliza un medio selectivo lquido para
permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene
una gran variedad de microorganismos. As, aquellos microorganismos para los
que el ambiente sea ms favorable crecern ms que los otros y finalmente sern
predominantes
Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una
serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos
biolgicos
que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo.
El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas

sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo


(agar chocolate).
16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana
especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

17.- Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias


grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
Bacteria Gram Positiva:
d) Su envoltura celular comprende:
1. La membrana citoplasmtica
2. La pared celular.
e) La pared celular est compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o
murena (polmero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientacin -1,4
con N-acetil murmico), su grosor le confiere una gran resistencia, las
protege de una ruptura osmtica en ambientes acuticos, les confiere forma
y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la
tincin de Gram.
f) Presentan slo una membrana lipdica (membrana citoplasmtica) y la capa
gruesa de peptidoglicano.
Posee dos clases de cidos teicoicos: cido lipoteicoico (cido teicoico
unido a un lpido) y cido teicoico. Son polisacridos que se unen al cido
N-acetil murmico del peptidoglicano.
La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas
de cido lipoteicoico.
Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un rgimen de
limitacin de fosfato son incapaces de sintetizar cidos teicoicos, pero en su
lugar producen cidos teicurnicos. Los teicurnicos consisten en polmeros
aninicos formados por la alternancia de cidos urnicos (que tienen
grupos -COOH libres) y aminozcares como la N-acetil-galactosamina.
f) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o
capa superficial (es la parte ms externa de la envoltura celular bacteriana)
unida a la capa de peptidoglicano.

g) No existe presencia de endotoxinas.


Bacteria Gram Negativa:
f) Conformada por 4 zonas:
1. La membrana citoplasmtica.
2. El espacio periplasmtico, ubicado entre la membrana citoplasmtica y el
peptidoglicano.
3. Una fina capa de peptidoglicano.
4. Membrana externa que contiene fosfolpidos, el lipopolisacrido (LPS) y
protenas (protenas de membrana 6 externa). Esta capa est
estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de
la pared celular.
g) Su estructura didrmica, es decir, de doble membrana celular (una externa
y la otra citoplasmtica) est ntimamente ligada al color rosado tenue que
presentan ante la tincin de Gram.
h) Presentan dos membranas lipdicas (membrana citoplasmtica y membrana
externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano
Entre la membrana citoplasmtica interna y la membrana externa que
recubre la pared celular se localiza el espacio periplsmico, relleno de una
sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes
para la nutricin en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas protenas; entre ellas, las porinas o
canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, adems de
los lipopolisacridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacrido O
(antgeno O), una estructura polisacrida central (KDO) y el lpido A
(endotoxina).
i) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la
membrana externa.
j) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacrido (LPS)

18.- Cmo se definen a las bacterias coliformes?


Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entricas en forma de
bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades
bioqumicas:

Ser aerobias o anaerobias facultativas


Ser bacilos Gram negativos;
No ser esporgenas; (Si es Gram negativo NO esporula)
Fermentan la lactosa a 35C en menos 48 horas
Con produccin de cido y gas

Incluye los gneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante


mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminacin fecal, pero se ha
demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua
y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la
eficiencia de los procesos de sanitizacin y desinfeccin, as como de calidad
sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinacin
se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los
mtodos del nmero ms probable (NMP MPN por sus siglas en ingls) que es
un mtodo estadstico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy
bajas de coliformes. Tambin se pueden detectar por cuenta en placa utilizando
agar bilis-rojo violeta (ABRV RVBA por sus siglas en ingls) en el cual las
colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse
por filtracin en membrana (Millipore) e incubacin en medios adecuados, por
mtodos rpidos como Petrifilm y reacciones cromognicas o fluorognicas.
Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces
de fermentar la lactosa tambin a 44.5 C; se consideran el indicador ms
adecuado de contaminacin con heces de animales y humanos, por ejemplo en
pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinacin
se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del mtodo de NMP, cultivando
en caldo lactosado con incubacin a 44.5 C. Generalmente se combinan las
determinaciones, segn se requiere.
Escherichia coli: se considera indicador de contaminacin fecal reciente, humana
o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles,
y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme
termotolerante (fermenta lactosa a 44.5C) que produce indol a partir de triptofano
y produce -glucuronidasa, caractersticas que se usan para su identificacin en
laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros
mtodos, incluyendo Petrifilm.
19.- Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el
suministro de agua puede estar contaminado, ya sea con aguas negras u otro tipo
de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se
encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los
sedimentos del fondo.
20.- Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?
La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito
de la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer

dao) del agua destinada al consumo, evitando as epidemias gastrointestinales, y


adems de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.
21.- Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario
desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores
de contaminacin. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la
totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de
origen fecal).
Vase pregunta nmero 18.

22.- Qu implicaciones epidemiolgicas tienen


enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?

la

presencia

de

Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli as como
tambin de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.

23.- Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?
* Enf. trasmitidas por el agua: Clera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenteras,
Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.
* Enf. con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis,
Paraginimiasis, Esquistosomiasis.
* Enf. vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo,
Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).

24.- Qu significan las siglas IMViC?


I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons

25.- Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?


Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse
a travs de una serie de pruebas bioqumicas, que permiten determinar la

presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la


existencia de una secuencia metablica. Con este fin se han desarrollado diversos
esquemas de clasificacin, uno de los ms conocidos y utilizados corresponde al
IMVIC que se desarroll para clasificar especies de la familia antes mencionada y
correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aerbicas o
anaerbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporgenas que producen cido
y gas durante la fermentacin de la lactosa).

26.- Por qu razn no es recomendable utilizar el asa bacteriolgica para


realizar la prueba de la oxidasa?
Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema
citocromooxidasa que activa la oxidacin del citocromo, que es reducido por el
oxgeno molecular que produce agua o perxido de hidrgeno segn la especie
bacteriana.
Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas estn
ntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.
27. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24
horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
El nmero de bacterias totales segn su fusin binaria es de 281, 474, 976, 710,
656.

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Tronco Comn Divisional

Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales


Tema: CUESTIONARIO
MTODOS BSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE
ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.

Por: Thania Sarahi lvarez Romn.


Matricula: 2152025880
Lic. En Estomatologa.
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12ACUESTIONARIO
MTODOS BSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE
ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.

1. Explica el fundamento de los diferentes mtodos fsicos y qumicos de


esterilizacin.

Mtodos fsicos
Depende de factores como tiempo, exposicin y temperatura. El calor se puede
aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el cual destruye
a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que
destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El
calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de
dao.
Mtodos qumicos
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes
porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces
de daar los componentes celulares de los microorganismos (protenas,
membranas, etc.)

2. Explica las ventajas y desventajas de los mtodos de la pregunta anterior e


indica cundo es recomendable utilizar cada uno de stos.

La eleccin del mtodo, va a depender de las caractersticas del elementos que se


va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria,
entre otros factores.

Mtodo
Calor hmedo

Calor seco

Ionizantes RUV
Filtracin

Mtodos Fsicos
Ventajas
Rpido, no deja residuos

Desventajas
No se permite para emulsiones

txicos, bajo deterioro del

con agua, es corrosivo sobre

material expuesto, econmico


No es corrosivo para metales

algunos metales
Mayor tiempo de esterilizacin.

e instrumentos, permite

Baja penetracin del calor.

esterilizacin de sustancias en

Radiaciones de acuerdo al

polvo
Esterilizan superficies
Esteriliza aceites, pomadas,

tiempo de radiacin.
Escasamente penetrantes
No retienen virus ni

soluciones oftlmicas

microplasma.

Mtodo

Mtodos Qumicos
Ventajas
Esteriliza material que es

Desventajas
Peligroso por ser altmente

termosensible, como equipos

inflamable y explosivo, adem+s

electrnicos, et.
Mtodo rpido y nico

de ser cancergeno
No se puede estrilizar objetos

esterilizante fro.

con celulosa, algodn, lquidos,

Gas-Plasma de

No deja ningn residuo txico,

humedad, madera, etc.


Muy costoso.

Perxido de

se convierte en agua y

Hidrgeno

oxgeno al final del proceso,

xido de Etileno

Aldehidos

material sin aireacin, dura


aproximadamente entre una
hora y hora y media.

3. Indica los principales agentes desinfectantes y antispticos utilizados en la


desinfeccin.

Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).


Detergentes catinicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro.
Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sdico, dixido de cloro) Sulfato de
cobre. xido de etileno (gas). Formaldehdo. Glutaraldehdo. Perxido de
hidrgeno. Compuestos yodforos que contienen yodo en solucin. Dicloruro de
mercurio. Ozono. cido peractico. Compuestos fenlicos.

Antispticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que


contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes
catinicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de
benzalconio). Perxido de hidrgeno (solucin al 3%). compuestos yodorosos que
contienen yodo en solucin. Nitrato de Plata.

4. Qu tipo de sustancias suelen utilizarse comnmente para desifenctar


superficies?

Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas

5. Explica cul es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona


estril para el trabajo microbiolgico y seala que factores influyen en la
creacin de la zona estril.

Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centmetros aproximadamente) crea


corriente de aire clido que impide la entrada a esta zona de bacterias
contaminantes esto creando un inoculo ms puro del microorganismo a trabajar.

6. Menciona otros mtodos usados en la industria y en la industria y en los


laboratorios de investigacin para crear zonas de trabajo estriles.

Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminacin.


Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10.
El uso del mechero.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas despus de concluir la sesin.

Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de


trabajo despus de concluir cada sesin.

Se puede provocar un foco de infeccin.

9. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e


indica su funcin.

PARTE
BRAZO

FUNCION
Es la parte de donde se debe sujetar, las
pinzas el carro el tubo del microscopio y
el revlver. Adems sirve para trasladar el

BASE O PIE

microscopio de un lugar a otro


Es una pieza que proporciona estabilidad
y sirve de soporte a todas las partes del

PLATINA

microscopio
Es una pieza metlica, cuadrada, que
tiene en su centro una abertura circular
por la que pasar la luz del sistema de
iluminacin. Aqu se coloca el

PINZAS DE SUJECION

portaobjetos con la muestra a observar


Parte mecnica que sirve para sujetar la
preparacin. La mayora de los
microscopios modernos tienen las pinzas
adosadas a un carro con dos tornillos,
que permiten un avance longitudinal y

TORNILLO MACROMETRICO

transversal de la preparacin.
Permite hacer un movimiento rpido
hacia arriba o hacia abajo del tubo o la
platina, y se utiliza para localizar la

TORNILLO MICROMETRICO

imagen a observar.
Parte mecnica de movimiento giratorio
que nos permite colocar en posicin
cualquiera de los objetivos que se

TUBO

encuentran en l
Parte mecnica que proporciona sostn a

CREMALLERA

los oculares y objetivos.


Permite que el movimiento de los
tornillos macro y micromtrico sea de
mayor o de menor amplitud.

OCULAR

Se localiza en la parte superior del tubo


ocular y son las lentes que Capta y
amplia la imagen formada en los
objetivos. Los primeros microscopios
eran monoculares, es decir, posean una
sola lente. Los microscopios actuales
poseen dos oculares, uno para cada ojo y

OBJETIVOS

se les llama binoculares.


Se encuentran incrustados en el revlver
Son unos pequeos cilindros colocados
en el revlver que proporciona el poder
de resolucin del microscopio y

DIAFRAGMA

determinan la cantidad total de aumento.


Existe un diafragma en el condensador,
que elimina el exceso de luminosidad
para tener una buena iluminacin del

FUENTE DE LUZ

objeto a observar
Para observar la muestra microscpica
es necesario que sta se ilumine con
algn tipo de luz y nuestros microscopios
cuentan con un foco que da energa
elctrica que dirige sus rayos luminosos
hacia el sistema condensador

10. Explica qu tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.

Las enterobacteriaceae

11. Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.

Trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas viables, as


como un aislamiento adecuado de colonias.

12. Explica el fundamento del aislamiento por estra cruzada.

La tcnica de estra cruzada es un procedimiento semicuantitativo.


Es una tcnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado nmero de
bacterias, un nmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la
superficie de la placa. Al incubar sta, cada una de las bacterias originar una
colonia.

13. Explica qu tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.

El agar MacConkey es un medio diferencial para la seleccin y recuperacin de


Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas
y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como nica fuente de
carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.

14. Explica a que se llama medio de cultivo bacteriolgico.

Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,

15. Explica qu es un medio enriquecido.

Aquellos medios que han sido complementados con lquidos corporales, vitaminas
especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos como
tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al
mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.

16. Explica qu es un medio de cultivo selectivo.

Son aquellos que favorecen el crecimiento especfico de un microorganismo


particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una poblacin microbiana mixta.

17. Describe las caractersticas de la pared celular de las bacterias


grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular interna y una

Poseen una pared celular ms compleja:

pared de peptidoglucano.
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que
da consistencia y forma esencial para
replicacin y supervivencia de la bacteria.

-pared celular interna


-pared de peptidoglucano
- bicapa lipdica externa

No tiene membrana externa

Membrana externa: forma un saco rgido


alrededor de la bacteria, mantiene
estructura y es barrera impermeable a
macromolculas, ofrece proteccin en
condiciones adversas

Espacio periplasmtico: espacio entre la


No tiene espacio periplasmtico

superficie externa de la membrana


citoplasmtica y la interna de la membrana
externa.

La red de murena est muy desarrollada y

La red de murena presenta una sola capa

llega a tener hasta 40 capas


La penicilina mata a las gram positivas, ya

La penicilina no mata a las Gram negativas,

que bloquea la formacin de enlaces

a causa de la capa de lipopolisacridos

peptdicos entre las diferentes cadenas del

situada en la parte externa de la pared

peptidoglucano

celular.
Contiene LPS: estimulador de respuestas

No contiene LPS
En la tincin de Gram, retienen la tincin

inmunes: activa clulas B, liberacin de IL,


FNT, IL 6 por macrfagos.
Quedan decoloradas.

azul

Conservan el complejo yodocolorante

Pierden el complejo yodocolorante

Pueden ser anaerobios o aerobios


Son esporulantes y no esporulantes, como
Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Poseen otros componentes: cidos

Poseen protenas con concentraciones

teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos

elevadas.

complejos.

18. Cmo se definen a las bacterias coliformes?

Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten caractersticas


bioqumicas en comn y son tiles como microorganismos indicadores de sanidad
de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias.
Poseen morfologa bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No
forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo cido y
gas en 24 a 38 horas a 36 C.

19. Qu indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?

Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgnicos


sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de
alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.

20. Cul es la importancia clnica de las bacterias coliformes?

La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito


de
la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al
consumo
evitando as epidemias gastrointestinales.

21. Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?

No, tambin existen coliformes de vida libre.

22. Qu implicaciones epidemiolgicas tienen la presencia de enterobacterias


en la muestra de agua que colectaste?

Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pblica.
Los volmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una
amplia gama de parsitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las
cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del
odo, hasta otras ms graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y
la hepatitis. Los gusanos parsitos y los patgenos bacterianos tales como
Salmonella, tambin se encuentran comnmente en el agua que da positivo en la
prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes fecales.

23. Qu enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua


contaminada con materia fecal?

Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera

24. Qu significan las siglas IMViC?

IMVIC es una prueba utilizada en biologa para la identificacin bacterias. Se


compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

25. Cul es el objetivo de realizar las pruebas de identificacin IMViC?

Se emplean fundamentalmente para la identificacin de las Enterobacterias


(bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

26. Por qu razn no es recomendable utilizar el asa bacteriolgica para


realizar la prueba de oxidasa?
Pueden alterar el resultado dando falsos positivos

27. Determina el nmero de bacterias que hay en una colonia despus de 24


horas de incubacin. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y stas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
24hrs=281 474 976 710 656

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA


Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud


Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

Practica de Laboratorio.
Por: Loeza Coatzozon Grisel
Matricula: 2143026539
Lic. Agrnoma

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

1.- EXPLICA EL FUNDAMENTO DE LOS DIFERENTES MTODOS FSICOS Y


QUMICOS DE ESTERILIZACIN:
Garantizan la destruccin total de los microorganismos presentes en sustancias o
materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en
alguna experimentacin provengan de las muestras estudiadas y no de alguna
contaminacin del ambiente o de la persona.
Dentro de los mtodos fsicos se pueden encontrar:
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la accin
del calor, el cual provoca una desnaturalizacin de protenas, fusin
desorganizacin de las membranas en los microorganismos.
Radiaciones: se atribuye a la absorcin por DNA, existen uniones covalentes
entre residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el
DNA y se inhibe la sntesis del DNA, por tanto tambin el crecimiento y respiracin
de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.
Dentro de los mtodos qumicos: Pueden ser Gaseosos (xido de etileno) o no
Gaseosos (Aldehdos, cido peractico y perxido de hidrgeno)
Los antispticos son considerados venenos que al actuar sobre grmenes, estos
son destruidos. Algunos de ellos ejercen su accin nociva sobre todas las clulas y
otros actan sobre algunas especies bacterianas en especfico. Es ptimo para la
antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.
2.- EXPLICA LAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MTODOS DE LA
PREGUNTA ANTERIOR E INDICA CUNDO ES RECOMENDABLE UTILIZAR
CADA UNO DE STOS:
Mtodos fsicos:
Ventajas: Rpido calentamiento y penetracin, destruccin de bacterias en un
periodo corto, no hay residuos txicos, ademas de que no es corrosivo.
Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a
esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algn dao o simplemente
el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no
penetran en slidos y pobremente en lquidos.
Mtodos qumicos:
Ventajas: el ciclo de esterilizacin dura de 54-75 minutos, el material sometido a
estos procesos no precisa de aireacin.

Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, txicas


y de muy alto costo.
3.INDICA LOS
PRINCIPALES AGENTES
DESINFECTANTES
ANTISPTICOS UTILIZADOS EN LA DESINFECCIN:

Los desinfectantes son productos qumicos que matan a los microorganismos y


se utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehdo, hipoclorito de sodio
Los antispticos son sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de
los microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,
4.- QU TIPO DE SUSTANCIAS SUELEN UTILIZARSE COMNMENTE PARA
DESINFECTAR SUPERFICIES?
*Hipoclorito
de
*Solucin de benzal diluido 1:10

sodio

al

10%

5.- EXPLICA CUL ES EL OBJETIVO DE UTILIZAR EL MECHERO PARA


PREPARAR LA ZONA ESTRIL PARA EL TRABAJO MICROBIOLGICO Y
SEALA QU FACTORES INFLUYEN EN LA CREACIN DE LA ZONA
ESTRIL:
Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a travs del calor, cuando se
trabaja con siembra de microorganismos.
Factores que influyen en la zona estril: Una manipulacin correcta de las
muestras y del material, evitar contaminar a travs de microorganismos propios
del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente
a su uso.
6.- MENCIONA OTROS MTODOS USADOS EN LA INDUSTRIA Y EN LOS
LABORATORIOS DE INVESTIGACIN PARA CREAR ZONAS DE TRABAJO
ESTRILES:
Desinfectantes: son productos qumicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados
Antispticos: sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y no son lo suficientemente txicos para ser aplicados a los
tejidos vivos
El calor es el mtodo ms utilizado para la esterilizacin y puede emplearse calor
seco con hornos con una temperatura de 170C por una hora o como calor

hmedo con autoclaves con una temperatura de 121C a 15 libras de presin por
pulgada durante 20minutos.
7.- EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO RECOGES EL
FRASCO, LOS TUBOS Y LAS PIPETAS DESPUS DE CONCLUIR LA SESIN:
Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo
que puede causar algn accidente adems de que es importante recoger el
material y desinfectarlo para evitar la contaminacin bacteriolgica en especial si
los materiales sern usados despus.
8.- EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO LAVAS Y
DESINFECTAS LA MESA DE TRABAJO DESPUS DE CONCLUIR CADA
SESIN:
De no limpiar la mesa se propaga la contaminacin, hay que tratar de mantener el
campo estril. Adems que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el
manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.
10.- EXPLICA QUE TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN EL AGUA:
Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas
pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae
y Proteus mirabilis
11.- EXPLICA CUL ES EL OBJETICO DE SEMBRAR DILUCIONES DE AGUA:
Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que
permiten trabajar con un nmero apropiado de clulas para realizar cuentas
viables as como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no
trabajar con una dilucin tan grande ya que el nmero de bacterias sera tan bajo
que podra impedir el detectar las colonias.
12. EXPLICA EL FUNDAMENTO DEL AISLAMIENTO POR ESTRA CRUZADA:
El objetivo es obtener, a partir de elevado nmero de bacterias, un nmero
reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al
incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.
13. EXPLICA QUE TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN ANGAR
MACCONKEY:
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que

utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las


especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras, opacas

14. EXPLICA A QU SE LE LLAMA MEDIO DE CULTIVO BACTERIOLGICO:


Un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como
bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo para
favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un mtodo
fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana y veterinaria.
15. EXPLICA QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO ENRIQUECIDO:
El enriquecimiento es una tcnica que utiliza un medio selectivo lquido para
permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene
una gran variedad de microorganismos. As, aquellos microorganismos para los
que el ambiente sea ms favorable crecern ms que los otros y finalmente sern
predominantes
Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una
serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos

exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos


biolgicos
que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo.
El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas
sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo
(agar chocolate).
16. EXPLICA QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO:
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana
especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
17.- DESCRIBE LAS CARACTERSTICAS DE LA PARED CELULAR DE LAS
BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS, RESALTANDO SUS
DIFERENCIAS:
Bacteria Gram Positiva:
g) Su envoltura celular comprende:
1. La membrana citoplasmtica
2. La pared celular.
h) La pared celular est compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o
murena (polmero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientacin -1,4
con N-acetil murmico), su grosor le confiere una gran resistencia, las
protege de una ruptura osmtica en ambientes acuticos, les confiere forma
y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la
tincin de Gram.
i) Presentan slo una membrana lipdica (membrana citoplasmtica) y la capa
gruesa de peptidoglicano.
Posee dos clases de cidos teicoicos: cido lipoteicoico (cido teicoico
unido a un lpido) y cido teicoico. Son polisacridos que se unen al cido
N-acetil murmico del peptidoglicano.
La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas
de cido lipoteicoico.
Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un rgimen de
limitacin de fosfato son incapaces de sintetizar cidos teicoicos, pero en su
lugar producen cidos teicurnicos. Los teicurnicos consisten en polmeros

aninicos formados por la alternancia de cidos urnicos (que tienen


grupos -COOH libres) y aminozcares como la N-acetil-galactosamina.
h) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o
capa superficial (es la parte ms externa de la envoltura celular bacteriana)
unida a la capa de pptidoglicano.
i) No existe presencia de endotoxinas.
Bacteria Gram Negativa:
k) Conformada por 4 zonas:
1. La membrana citoplasmtica.
2. El espacio periplasmtico, ubicado entre la membrana citoplasmtica y el
peptidoglicano.
3. Una fina capa de peptidoglicano.
4. Membrana externa que contiene fosfolpidos, el lipopolisacrido (LPS) y
protenas (protenas de membrana 6 externa). Esta capa est
estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de
la pared celular.
l) Su estructura didrmica, es decir, de doble membrana celular (una externa
y la otra citoplasmtica) est ntimamente ligada al color rosado tenue que
presentan ante la tincin de Gram.
m) Presentan dos membranas lipdicas (membrana citoplasmtica y membrana
externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano
Entre la membrana citoplasmtica interna y la membrana externa que
recubre la pared celular se localiza el espacio periplsmico, relleno de una
sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes
para la nutricin en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas protenas; entre ellas, las porinas o
canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, adems de
los lipopolisacridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacrido O
(antgeno O), una estructura polisacrida central (KDO) y el lpido A
(endotoxina).
n) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la
membrana externa.
o) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacrido (LPS)

18.- CMO SE DEFINEN A LAS BACTERIAS COLIFORMES?


Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entricas en forma de
bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades
bioqumicas:

Ser aerobias o anaerobias facultativas


Ser bacilos Gram negativos;
No ser esporgenas; (Si es Gram negativo NO esporula)
Fermentan la lactosa a 35C en menos 48 horas
Con produccin de cido y gas

Incluye los gneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante


mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminacin fecal, pero se ha
demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua
y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la
eficiencia de los procesos de sanitizacin y desinfeccin, as como de calidad
sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinacin
se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los
mtodos del nmero ms probable (NMP MPN por sus siglas en ingls) que es
un mtodo estadstico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy
bajas de coliformes. Tambin se pueden detectar por cuenta en placa utilizando
agar bilis-rojo violeta (ABRV RVBA por sus siglas en ingls) en el cual las
colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse
por filtracin en membrana (Millipore) e incubacin en medios adecuados, por
mtodos rpidos como Petrifilm y reacciones cromognicas o fluorognicas.
Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces
de fermentar la lactosa tambin a 44.5 C; se consideran el indicador ms
adecuado de contaminacin con heces de animales y humanos, por ejemplo en
pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinacin
se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del mtodo de NMP, cultivando
en caldo lactosado con incubacin a 44.5 C. Generalmente se combinan las
determinaciones, segn se requiere.
Escherichia coli: se considera indicador de contaminacin fecal reciente, humana
o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles,
y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme
termotolerante (fermenta lactosa a 44.5C) que produce indol a partir de triptofano
y produce -glucuronidasa, caractersticas que se usan para su identificacin en
laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros
mtodos, incluyendo Petrifilm.
19.- QU INDICA LA PRESENCIA DE BACTERIAS COLIFORMES EN EL
AGUA?
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el
suministro de agua puede estar contaminada, ya sea con aguas negras u otro tipo

de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se


encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los
sedimentos del fondo.
20.- CUL ES LA IMPORTANCIA CLNICA DE LAS BACTERIAS
COLIFORMES?
La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito
de la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer
dao) del agua destinada al consumo, evitando as epidemias gastrointestinales, y
adems de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.
21.- TODAS LAS BACTERIAS COLIFORMES SON DE ORIGEN FECAL?
No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario
desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores
de contaminacin. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la
totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de
origen fecal).
Vase pregunta nmero 18.

22.- QU IMPLICACIONES EPIDEMIOLGICAS TIENEN LA PRESENCIA DE


ENTEROBACTERIAS EN LA MUESTRA DE AGUA QUE COLECTASTE?
Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli as como
tambin de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.

23.- QU ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES PUEDEN


TRANSMITIRSE EN EL AGUA CONTAMINADA CON MATERIA FECAL?

Enfermedades trasmitidas por el agua: Clera, Fiebre Tifoidea y


Paratifoidea,
Disenteras,
Poliomelitis,
Hepatitis,
Salmonelosis,
Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.
Enfermedades con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis,
Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis.
Enfermedades vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis,
Paludismo, Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).

24.- QU SIGNIFICAN LAS SIGLAS IMVIC?

I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons


25.- CUL ES EL OBJETIVO DE REALIZAR LAS PRUEBAS DE
IDENTIFICACIN IMVIC?
Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse
a travs de una serie de pruebas bioqumicas, que permiten determinar la
presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la
existencia de una secuencia metablica. Con este fin se han desarrollado diversos
esquemas de clasificacin, uno de los ms conocidos y utilizados corresponde al
IMVIC que se desarroll para clasificar especies de la familia antes mencionada y
correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aerbicas o
anaerbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporgenas que producen cido
y gas durante la fermentacin de la lactosa).

26.- POR QU RAZN NO ES RECOMENDABLE UTILIZAR EL ASA


BACTERIOLGICA PARA REALIZAR LA PRUEBA DE LA OXIDASA?
Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema
citocromooxidasa que activa la oxidacin del citocromo, que es reducido por el
oxgeno molecular que produce agua o perxido de hidrgeno segn la especie
bacteriana.
Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas estn
ntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.

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