UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA I

Recopilado por:
Cristina Luca Mora Arango
Elkin Galeano Jaramillo
Edison Osorio Durango

Medelln, Septiembre de 2012

PROGRAMA DEL CURSO DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA I

2012

Objetivo general: reconocer y evaluar los parmetros de calidad aplicados a las

materias primas de origen natural con inters farmacutico.

Temas del curso:

Unidad 1. INTRODUCCIN.
Presentacin del curso, normas de seguridad en el laboratorio (3 horas).

Unidad 2. RECONOCIMIENTO DE LA FLORA MEDICINAL.

Reconocimiento de las diferentes especies de plantas medicinales que se
encuentran en el entorno del Campus Universitario o en el Huerto de plantas
medicinales del Jardn Botnico (3 horas).

Unidad 3. MANEJO DE LA INFORMACIN BIBLIOGRFICA EN FARMACOGNOSIA.

Bsqueda bibliogrfica en bases de datos especializadas. Normas para reportar
adecuadamente las referencias bibliogrficas (3 horas).

Unidad 4. RECONOCIMIENTO DE LA MORFOLOGA VEGETAL.

Reconocimiento de la morfologa vegetal y tejidos internos en placas de coleccin
previamente

preparadas.

Reconocimiento morfolgico

externo de

plantas

medicinales aprobadas en Colombia (6 horas).

Unidad 5. RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS PRIMARIOS DE INTERS EN
FARMACOGNOSIA.

Reconocimiento de compuestos pertenecientes al metabolismo primario (grnulos

de almidn, aleurona y aceites fijos) mediante pruebas qumicas de coloracin y
anlisis microscpico de las estructuras, de acuerdo con la informacin reportada
en las Farmacopeas oficiales (3 horas).

Unidad 6. ANLISIS MICROSCPICO DE MATERIAL VEGETAL.

Reconocimiento de elementos de valor diagnstico en el material vegetal (cristales
de oxalato de calcio, grnulos de polen, pelos epidrmicos, vasos lignificados,
estomas), de acuerdo con la informacin reportada en las Farmacopeas oficiales
(3 horas).

Unidad 7. IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS.

Reconocimiento mediante pruebas qumicas de compuestos fenlicos, terpnicos
y nitrogenados en muestras vegetales conocidas (6 horas).

Unidad 8. RECONOCIMIENTO DE ADULTERACIONES Y/O FALSIFICACIONES EN EL

MATERIAL VEGETAL.

Aplicacin

de

ensayos

fsicos

(organolpticos-macroscpicos),

anlisis

microscpico (identificacin de elementos de valor diagnstico) y pruebas

qumicas de coloracin en la identificacin de adulteraciones y/o falsificaciones en
el material vegetal (3 horas).
Unidad 9. IDENTIFICACIN CROMATOGRFICA DE PLANTAS MEDICINALES.
Aplicacin de las tcnicas bsicas de cromatografa de capa fina para la
identificacin de plantas medicinales (3 horas).
Unidad 10. CONTROL DE CALIDAD DE PLANTAS MEDICINALES DE ACUERDO CON
FARMACOPEAS OFICIALES.

Pruebas de identidad general: identificacin de caractersticas organolpticas,

caractersticas macro y microscpicas, perfil cromatogrfico. Pruebas de pureza:
cuantificacin de material extrao. Ensayos qumicos: pruebas cualitativas
(6 horas).

Unidad 11. PRCTICA ESPECIAL.

Implementacin de pruebas preliminares de actividad biolgica: actividad
antioxidante, actividad larvicida, actividad fitotxica (12 horas).

PRESENTACIN

El Manual de Prcticas de Laboratorio de Farmacognosia I incluye la revisin y

actualizacin de las prcticas experimentales contenidas en el Manual de
Laboratorio de Farmacognosia preparado por las profesoras Luz Mariela Sorza y
Gloria Amparo Valencia (2000) y en el Manual de Prcticas de Laboratorio de
Farmacognosia y Fitoqumica recopilado y revisado por los profesores Alejandro
Martnez, Gloria Amparo Valencia, Nora Jimnez, Monica Mesa y Elkin Galeano.
En la presente actualizacin se incluye el desarrollo de nuevas prcticas
experimentales que hacen parte del programa acadmico de Laboratorio de
Farmacognosia I y estn dirigidas hacia la identificacin de los diferentes factores
involucrados en la produccin de drogas, aplicacin de tcnicas para el
reconocimiento de metabolitos primarios y secundarios, aplicacin de pruebas
especficas para el control de calidad de materia prima de origen natural y
evaluacin de la actividad biolgica de extractos de inters farmacutico.

CONTENIDO
Pg.
Programa de laboratorio de Faramacognosia I ..

Prctica No 2.

Reconocimiento de la flora medicinal..

Prctica No 3.

Manejo de la informacin bibliogrfica en farmacognosia................................

Prctica No 4.

Reconocimiento de la morfologa vegetal 8

Prctica No 5.

Reconocimiento de metabolitos primarios

de inters en farmacognosia......................................................................

16

Prctica No 6.

Anlisis microscpico de material vegetal... 25

Prctica No 7.

Identificacin de metabolitos secundarios... 28

Prctica No 8.

Reconocimiento de adulteraciones y/o

falsificaciones en el material vegetal

40

Prctica No 9.

Identificacin cromatogrfica de plantas medicinales...

45

Prctica No 10.

Control de calidad de plantas medicinales

de acuerdo con farmacopeas oficiales

50

Prctica No 2

RECONOCIMIENTO DE LA FLORA MEDICINAL

OBJETIVO
Reconocimiento de los ejemplares vegetales cultivados en el huerto de
plantas medicinales del Jardn Botnico y/o en la flora universitaria.
METODOLOGA
Para el desarrollo de esta prctica el estudiante en visita guiada a las instalaciones
del huerto de plantas medicinales del Jardn Botnico recibir la informacin y
capacitacin brindada por parte del profesor, relacionada con las caractersticas
botnicas y la actividad teraputica de las plantas medicinales. Una vez recibida la
capacitacin el estudiante proceder a la presentacin del respectivo informe que
debe contener una tabla en la que se incluyan las plantas observadas con el
nombre cientfico, nombre comn, uso teraputico, droga aprobada y una breve
descripcin botnica.

CONSULTA
Consultar sobre las 10 especies de plantas medicinales de mayor comercializacin
en Colombia, sus condiciones de cultivo y el uso teraputico aprobado por el
INVIMA.
BIBLIOGRAFA DE CONSULTA

FONNEGRA G. Ramiro, JIMNEZ R. Silvia Luz. Plantas Medicinales Aprobadas

en Colombia. Editorial Universidad de Antioquia. Segunda edicin. 2006.

Ministerio de Proteccin Social. Vademecum Colombiano de Plantas Medicinales.

Colombia. MPS. 2008.
6

Prctica No 3

MANEJO DE LA INFORMACIN BIBLIOGRFICA EN FARMACOGNOSIA

OBJETIVOS
Capacitar al estudiante el manejo de las bases de datos documentales y la
informacin consignada en la Biblioteca Central.
Explicar de manera prctica los modelos de bsqueda de informacin aplicada
a los temas de farmacognosia y plantas medicinales.
Aprender a reportar adecuadamente las referencias bibliogrficas.

METODOLOGA
Para el desarrollo de esta prctica el estudiante en visita guiada a las instalaciones de
la biblioteca central recibir la informacin y capacitacin sobre manejo de bases de
datos documentales por parte de los profesores encargados.

Una vez recibida la capacitacin el estudiante debe hacer entrega de un informe con
el siguiente contenido:

1. Consultar la monografa de una planta medicinal asignada por el profesor, teniendo

en cuenta los siguientes aspectos: nombre cientfico, descripcin botnica,
descripcin microscpica, uso teraputico aprobado, droga aprobada, reacciones
adversas, advertencias y contraindicaciones. Esta informacin se encuentra en las
farmacopeas oficiales y textos de referencia en farmacognosia.

2. Aplicar los conocimientos sobre la forma adecuada de reportar libros, artculos de

revistas y documentos electrnicos en cada uno de los informes de laboratorio.

Prctica No 4

RECONOCIMIENTO DE LA MORFOLOGA VEGETAL

OBJETIVOS
Identificar los tejidos internos de las plantas monocotiledneas y
dicotiledneas,

realizando

observacin

microscpica

sobre

cortes

histolgicos previamente preparados de races, tallos y hojas.

Aplicar los criterios para clasificar las plantas en monocotiledneas y
dicotiledneas a partir del anlisis de las caractersticas de morfologa
externa de las races, tallos, hojas y flores.
MARCO TERICO
La morfologa vegetal es la parte de la botnica que estudia las formas y
estructuras de las diferentes partes del cuerpo de la planta teniendo en cuenta
aspectos histolgicos y fisiolgicos en el proceso de modificacin y transformacin
de las plantas.

Para estudiar la estructura interna de un rgano, generalmente se realizan cortes

transversales y se utilizan colorantes para diferenciar los tejidos.

Raz
Es el rgano generalmente subterrneo en las plantas, en general las funciones
del sistema radical son: absorcin y conduccin de sustancias, sostn y fijacin de
la planta, almacenamiento de sustancias, reproduccin vegetativa en algunas
especies.

Raz de plantas dicotiledneas:

En el corte transversal de la raz de una planta dicotilednea a nivel de la zona
pilfera, se pueden identificar los siguientes tejidos:
1. Epidermis: capa de una clula de espesor en la parte externa de la raz, no
posee cutcula.

2. Crtex: grupo de tejidos que ocupa el mayor volumen de la raz, el cual est
comformado por: exodermis, parnquima cortical y endodermis.

2.1. Exodermis: clulas parenquimticas subepidrmicas que se asemejan a la

endodermis.

2.2. Parnquima cortical: clulas de pared celular delgada, especializadas en el

almacenamiento de sustancias.

2.3. Endodermis: capa de clulas prismticas que rodean el cilindro central, se

pueden identificar las clulas que hacen parte de las bandas de Caspary y las
clulas de paso.
3. Estela: corresponde al cilindro central del cuerpo primario de la raz y est
conformada por el periciclo, los tejidos vasculares primarios y el cambium vascular

3.1. Periciclo: tejido parenquimtico de una o varias clulas de espesor ubicado

inmediatamente despus de la endodermis hacia el centro de la raz, en el
proceso de diferenciacin, a partir de estas clulas se originan las races laterales
de la planta.

3.2. Tejidos vasculares primarios: constituidos por clulas del xilema y del floema.

3.3. Cambium vascular: tejido meristemtico de varias clulas de espesor con

paredes delgadas que bordean el xilema y lo separan del floema.

En la figura 1, se presenta un corte transversal de una raz dicotilednea a nivel de

la zona pilfera, deben identificar los diferentes tejidos de acuerdo con la
informacin anterior.

Figura 1. Fotografa del corte transversal a nivel de la zona pilfera de la raz de una
planta dicotilednea en la que se observa el tejido parenquimtico y los diferentes tejidos
que conforman el cilindro central.

Raz de plantas monocotiledneas:

En el corte transversal de la raz de una planta monocotilednea a nivel de la zona
pilfera, se pueden identificar los mismos tejidos presentes en las dicotiledneas a
excepcin del cambium vascular. El xilema en las races de las plantas
monocotiledneas posee muchos brazos y en el cilindro central se puede observar
una porcin de tejido parenquimtico que conforma la mdula.

10

A continuacin en la figura 2, se observa el corte transversal de una raz

monocotilednea a nivel de la zona pilfera, con el fin de que se identifiquen los
tejidos correspondientes.

Figura 2. Fotografa del corte transversal a nivel de la zona pilfera de la raz de una
planta monocotilednea. Se observan las diferencias en cuanto a la disposicin del xilema
y floema al interior del cilindro central.

Tallo
El tallo es el rgano de la planta generalmente areo que desempea las
siguientes funciones: produce y sostiene ramas y flores, conduce sustancias a
travs del xilema y el floema.
Tallo de plantas dicotiledneas:
En el corte transversal del tallo de una planta dicotilednea se pueden identificar
los siguientes tejidos, desde la parte externa hasta la ms interna:
1. Epidermis: primera capa de una sola clula de espesor cubierta por una
cutcula impermeable de cutina.

11

2. Crtex: est conformado por los tejidos comprendidos entre la epidermis y la

parte ms externa del haz vascular como colnquima, parnquima cortical,
clornquima, esclernquima.
3. Estela: es la parte central del tallo, conformada por los tejidos vasculares, el
cambium vascular y la mdula.

3.1. Tejidos vasculares: estructuras ovaladas conocidas como haces vasculares

conformadas por esclernquima, floema (elementos del tubo criboso y clulas
compaeras), cambium vascular y xilema (elementos del vaso, traqueidas y fibras
del xilema).

3.2. Mdula: regin central constituida por tejido parenquimtico.

En la figura 3 se presenta el corte transversal del tallo de una planta dicotilednea,

en el cual se deben identificar los principales tejidos.

Figura 3. Fotografa del corte transversal del tallo de una planta dicotilednea en la que
se identifica de manera representativa el tejido colnquima, los haces vasculares y la
mdula.

12

En el corte transversal del tallo de una planta monocotilednea, en general se

observan los mismos tejidos que en el tallo de una planta dicotilednea, con la
diferencia de que en estos tallos el tejido esclerenquimtico se presenta
internamente a la epidermis y los haces vasculares se encuentran dispersos en el
tejido parenquimtico y estn rodeados por una vaina de esclernquima que le
proporciona mayor resistencia a la planta. A continuacin se presenta la imagen
para identificar los principales tejidos.

Figura 4. Fotografa del corte transversal del tallo de una planta monocotilednea en la
que se observa el tejido esclernquima y la distribucin de los haces vasculares.

Hoja
La hoja es el rgano vegetativo de la planta, generalmente en forma laminar que
tiene como funcin principal el proceso de la fotosntesis, respiracin, transpiracin
y gutacin.

13

En el corte transversal de una hoja se observan los siguientes tejidos:

1. Epidermis: capa de clulas que protege la hoja ubicadas en la superficie del

haz y del envs, recubierta por una cutcula impermeable. En la epidermis se
pueden identificar clulas epidrmicas comunes, clulas de guarda (oclusivas) y
clulas adyacentes (subsidiarias).

2. Mesfilo: es el tejido ms abundante de la hoja, en el cual se realiza la

fotosntesis y est conformado por parnquima en empalizada y parnquima
esponjoso.

2. 1. Parnquima en empalizada: una o dos capas de clulas cilndricas ubicadas

en la parte superior de la hoja, presentan gran cantidad de cloroplastos.

2.2. Parnquima esponjoso: formado por clulas esfricas y clulas de forma

irregular que se distribuyen dejando espacios intercelulares denominados meatos
o cmaras subestomticas.

3. Nervaduras: son la continuacin del xilema y el floema del tallo. En un corte

transversal de la hoja, en cada nervadura se observa el haz vascular con el xilema
hacia el haz y el floema hacia el envs.

14

Figura 5. Fotografa del corte transversal de la hoja. Se observa el tejido epidrmico, las
clulas del mesfilo y los tejidos vasculares de las nervaduras.

METODOLOGA
Para el desarrollo de la prctica se divide el estudio en:
1. Aspectos correspondientes al anlisis de la morfologa interna (histologa).

El profesor pondr a disposicin de los estudiantes una serie de placas

previamente preparadas en las cuales deben identificar utilizando el microscopio
las estructuras y tejidos internos presentes en las races, tallos y hojas de plantas
monocotiledneas y dicotiledneas. El estudiante debe identificar y dibujar las
estructuras claramente diferenciadas en cada uno de los cortes observados e
incluir el anlisis de resultados en el informe.
2.

Aspectos

correspondientes

al

anlisis

de

la

morfologa

externa

(cuerpo de la planta).

De acuerdo con las caractersticas morfolgicas externas observadas en las

plantas

asignadas,

realizar

la

clasificacin

consignar

la

informacin

correspondiente en formato de tabla, incluyendo los siguientes aspectos para cada

una de ellas: nombre comn, nombre cientfico, anlisis de las hojas: complejidad,
filotaxia, caractersticas del peciolo y de las nervaduras; clasificacin del tallo:
herbceo, leoso; clasificacin de la raz: fibrosa, pivotante; nmero de verticilos
florales y clasificacin de acuerdo con las caractersticas externas en
monocotiledneas o dicotiledneas.
CONSULTA
Consultar la clasificacin de las races, tallos y hojas de acuerdo con las
caractersticas de su morfologa externa.
BIBLIOGRAFA
URIBE lvarez Frank. Botnica General. Editorial Universidad de Antioquia.
Segunda edicin. 1991.
15

Prctica No 5

RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS PRIMARIOS DE INTERS EN

FARMACOGNOSIA

OBJETIVOS
Aprender a identificar microscpicamente sustancias caractersticas de
plantas, formadas por molculas pertenecientes al metabolismo primario.
Identificar la presencia de almidn en diferentes fuentes vegetales
mediante reacciones qumicas y pruebas microscpicas.
Identificar microscpicamente la presencia de grnulos de aleuronas en
diferentes fuentes vegetales.
Identificar microscpicamente la presencia de grnulos de aceites fijos en
diferentes fuentes vegetales.

MARCO TERICO
El metabolismo primario es el grupo de procesos metablicos esenciales vitales
para los organismos vivos, estos procesos estn asociados a 4 grandes grupos de
reacciones anablicas/catablicas:
1. Metabolismo de los carbohidratos:
Los carbohidratos, tambin llamados hidratos de carbono glcidos, son un grupo
de molculas formadas principalmente por carbono, oxgeno e hidrgeno. Algunos
micro-organismos tienen la capacidad de bio-sintetizar carbohidratos conteniendo
azufre, fosforo y nitrgenos en sus estructuras.

Clasificacin de los carbohidratos: consultar y complementar el siguiente

diagrama.

16

El almidn: Est formado por unidades de glucosa y se encuentra en los cereales

como maz, arroz y trigo, y en tubrculos como papas, ame y yuca.
Frecuentemente se encuentra formado en un 25% por amilosa y un 75% por
amilopectina. A continuacin se presentan las estructuras qumicas de dos
polisacridos de importancia en los vegetales: celulosa y almidn.

CH2OH

CH2OH

OH

H
H

Celulosa

OH

CH2OH

Almidn

OH

OH

OH

CH2OH

CH2OH
H

O H
H
OH

O
H

OH

OH

O
H

O
CH2OH

O
OH

OH

HO

O H

OH
H

CH2OH
O H

OH
O

CH2OH

OH
H

O
H

OH

H
H

OH

HO

H
O

OH

Figura 6. Estructuras qumicas de la celulosa y el almidn.

2. Metabolismo de los lpidos:

Los lpidos, son un grupo de cidos grasos no voltiles, qumicamente se
encuentran generalmente como cadenas alifticas saturadas o insaturadas, en
17

general lineales; solubles en solventes orgnicos apolares (como cloroformo,

hexano), y son casi insolubles en agua. Los mamferos los acumulamos como
grasas, los peces como ceras y en las plantas en forma de aceites. Los
fosfolpidos y esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las
membranas biolgicas.

Consultar y complementar el siguiente diagrama sobre la clasificacin de los

lpidos:

A continuacin se presentan las estructuras qumicas de compuestos lipdicos de

mayor importancia a nivel biolgico.
O
OH

cido graso libre

HO

Colesterol
Triglecerido

O
O

Fosfolpido

O
O

HO

Figura 7. Estructuras qumicas de los principales lpidos de importancia biolgica.

18

3. Metabolismo de las protenas:

Las protenas son biomleculas formadas bsicamente por carbono, hidrgeno,
oxgeno y nitrgeno. Pueden adems contener azufre y en algunos tipos de
protenas: fsforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden
considerarse polmeros de unas de aminocidos unidos mediante enlaces
peptdicos.

Consultar y complementar el siguiente diagrama sobre la clasificacin de las

protenas:

A continuacin se encuentran las estructuras qumicas de tres aminocidos

importantes en el metabolismo vegetal (Ala, Arg, His) y un modelo de la estructura
secundaria de una protena.

NH

O
H C
3

OH
NH

Alanina (Ala)

HN

O
N

NH

OH
NH

Arginina (Arg)

N
H

OH
NH

Histidina (His)

Figura 8. Estructuras qumicas de algunos aminocidos y estructura secundaria de una

protena.

Aleuronas: las aleuronas, del griego aleuron que significa harina, son un grupo de
grnulos proteicos presentes principalmente en las semillas de las plantas,
19

localizado en la parte externa del endospermo y que tienen la funcin de ser

material de reserva para el crecimiento del embrin, se encuentran principalmente
en los cereales y algunas races.
METODOLOGA

Material vegetal:

Maz: _____________________ (nombre cientfico)

Yuca: _____________________

Arroz: _____________________

Papa: _____________________

ANLISIS QUMICO:
Cortar o rallar 15 g de material vegetal sin cscara y extraer con 10 ml de agua
(sin calentar). Filtrar y realizar las siguientes reacciones por separado en tubos de
ensayo:
2 ml almidn + lugol

_____________________________________________

2 ml almidn + 6 ml H20: Medir pH ____________________________________

ANLISIS MICROSCPICO:
Tomar 1 gota de la solucin filtrada para los anlisis qumicos y observar al
microscopio cada una de las muestras de almidn preparada (maz, yuca, papa y
arroz).
Almidn de papa: Se observa como grnulos pequeos circulares con hilum
cntrico y grnulos grandes de forma elpticas con hilum excntrico. El tamao
promedio de los grnulos es de 15 m con una desviacin estndar de 10 m;

20

Almidn de maz: Se observa como grnulos irregulares y poligonales con hilum

concntrico de forma mixta: se puede observar como un punto en forma de
asterisco, una lnea o una cruz. El tamao promedio de los grnulos es de 12 m
con una desviacin estndar de 6 m.

Almidn de yuca: Se observa como grnulos elpticos o redondeados, con hilum

concntrico de forma puntual. El tamao promedio de los grnulos es de 10 m
con una desviacin estndar de 5 m.
Almidn de arroz: Se observa como grnulos polidricos y poligonales pequeos,
en algunos casos formando agregados entre 2-150 unidades, con hilum
concntrico de forma puntual difcil de observa al microscpio convencional. El
tamao promedio de los grnulos es de 5 m con una desviacin estndar de 4
m.
Muestras de plantas medicinales que contienen almidn: canela, ruibarbo,
valeriana, ginseng, jengibre, regaliz.
RESULTADOS

Almidn
Anlisis

papa

maz

arroz

yuca

Muestra

Color
Textura
Olor
Sabor
pH
Tamao de
los grnulos
Hilum

21

1. Deteccin de celulosa: Colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un

portaobjetos. Verter 1 2 gotas de solucin de cloruro de zinc yodado (Disolver 20
g de cloruro de zinc y 6.5 g de yoduro de potasio en 10.5 ml de agua), dejar
reposar 2 minutos y agregar 1 gota de yodo (0.1 mol/L), dejar reposar 1 minuto,
remover el exceso de reactivo con una tira de papel filtro y agregar 1 gota de
H2SO4 60%. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio, las paredes de
celulosa se observan en colores desde el azul al violeta.
Muestras vegetales donde se pueden evidenciar las paredes de celulosa:
eucalipto, canela, lino, sen, entre otras.

A continuacin se presentan las fotografas de las placas microscpicas de los

montajes correspondientes para la observacin de celulosa en semillas de lino
molidas.

Figura 9. Fotografa de las paredes de celulosa presentes en las semillas de lino.

2. Deteccin de granos de aleurona: Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo

sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de solucin de yodo/etanol. Los grnulos
de aleurona se observan de color amarillo-caf o caf con un tamao promedio
entre 10-20 m. Agregar luego unas 2 3 gotas de trinitrofenol en etanol y los
granlos se tornarn amarillos.

22

Muestras de plantas medicinales que presentan grnulos de aleurona: lino,

nuez moscada, ans estrellado.

A continuacin se presentan las fotografas de las placas microscpicas de los

montajes correspondientes para la observacin de celulosa de grnulos de
aleurona presentes en semillas de lino molidas:

Figura 10. Fotografa de los grnulos de aleurona presentes en las semillas de

lino.
Deteccin de lpidos y aceites esenciales: mezclar bien la muestra en polvo,
colocar 2 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de
solucin de Sudan III y dejar actuar durante 2 3 minutos. Escurrir el lquido y
lavar bien con alcohol 70 %. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio con
los objetivos de 10x y 40x. Los lpidos aparecen como gotas de color rojo.

23

Muestras vegetales para la deteccin de lpidos y aceites esenciales: lino,

canela, eucalipto, jengibre.

A continuacin se presentan las fotografas de las placas microscpicas de los

montajes correspondientes para la observacin de aceites fijos presentes en
semillas de lino molidas:

Figura 11. Fotografa de las gotas de aceite fijo presentes en las semillas de lino.

Consulta
1. Funciones biolgicas en la clula vegetal de los carbohidratos, lpidos y
protenas.
2. Aplicaciones en Farmacognosia de los carbohidratos, lpidos y protenas.
3. Esquema de las reacciones realizadas en el laboratorio.

BIBLIOGRAFA
Evans, W.C. Trease & Evans Pharmacognosy. Ed. Saunders. 16o Edicin. China.
2009.

HEINRICH M., BARNES J. Gibbons S., WILLIAMSON E. Fundamentals of

Pharmacognosy and Phytotherapy. Ed. Churchill Livingstone. Spain. 2004.
24

Prctica No 6

ANLISIS MICROSCPICO DE MATERIAL VEGETAL

OBJETIVO
Reconocer elementos de valor diagnstico en el material vegetal: cristales
de oxalato de calcio, grnulos de polen, pelos epidrmicos, vasos
lignificados, estomas, de acuerdo con las monografas de plantas
medicinales textos de referencia y farmacopeas oficiales.

MARCO TERICO
El planteamiento sistemtico de la identificacin de drogas en polvo puede
realizarse por varios caminos, sin embargo cuando se trata de drogas
organizadas, todos los mtodos dependen del reconocimiento microscpico de los
tipos celulares caractersticos: fibras tabicadas, pelos epidrmicos, tricomas; as
como de los contenidos de las clulas: almidn, cristales de oxalato de calcio,
grnulos de aleurona. Estas estructuras pueden considerarse como elementos de
valor diagnstico porque resultan de gran valor para la identificacin del material
vegetal como materia prima.

Existen reactivos especficos que permiten destacar cada una de las estructuras,
para la observacin de los grnulos de almidn se realiza el montaje en agua y en
solucin de lugol, los cristales de oxalato de calcio se observan con mayor
facilidad en las placas de hidrato de cloral, mientras que el montaje con
fluoroglucina y cido clorhdrico facilita la observacin de los tejidos lignificados.

Cuando se trata de una mezcla de drogas es imprescindible una mayor

experiencia y prctica. Cuando se ha realizado un tanteo de la identificacin deben
llevarse a cabo posteriores observaciones y ensayos qumicos confirmativos, la
mayora de las drogas de farmacopea, poseen en la actualidad ensayos para su
reconocimiento mediante cromatografa de capa fina (CCF).
25

METODOLOGA
Bajo la orientacin del profesor el estudiante proceder a realizar las siguientes
actividades:

1. Ensayos preliminares para la identificacin de las caractersticas organolpticas

del material vegetal para identificar el color, el olor y el sabor.

Color: es importante analizar el color del material vegetal, cuando se trata de

races el color va desde blanco amarillento hasta pardo, en el caso de las
cortezas, en general el color es castao y en el caso de hojas y flores, el color
depende de la especie.

Olor: el olor se puede expresar como aromtico, ctrico, mentolado y cuando no es

posible establecer comparacion, se describe como caracterstico.

Sabor: los sabores se pueden describir como: autnticos (amargo, dulce, cido,
salado) o inspidos.

2. Preparacin de placas o montajes respectivos de las plantas medicinales secas

y en polvo sobre porta objetos, utilizando segn el caso agua, hidrato de cloral y
floroglucina. Recuerde colocar el cubreobjetos antes de la observacin.

Observacion de almidon: montar placa en agua, observar los diferentes grnulos y

ensayar si se trata de almidn mediante la adicin de agua de yodo (Lugol),
colocando 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos, verter 2 3
gotas de Solucin de Lugol diluida (1:5) en agua. Colocar el cubreobjetos y
observar al microscopio a 10x y 40x. Los granos de almidn se colorean de azulviolceo intenso.

Observacin de tricomas epidermicos y oxalato de calcio: una solucin de hidrato

de cloral (80 g de hidrato de cloral en 20 ml de agua) se utiliza como agente
26

clarificante. Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y

agregar de 2 -8 gotas que impregnen todo el material vegetal y calentar
suavemente.

El hidrato de clorar disuelve contenido celular y sustancias

extracelular (granos de almidn, granos de aleurona) y permite una mejor

visualizacin de tejidos celulares como: pared celular, fibras, vasos, cristales de
oxalato de calcio, tricomas, estomas y polen.

Observacin de lignina: colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un

portaobjetos y humedecer este material vegetal con una solucin alcohlica de
floroglucina (1% en etanol del 90%) y dejarlo secar a temperatura ambiente.
Agregar 1 gota de HCl concentrado, poner el cubreobjetos y observar los vasos
lignificados en colores desde el rosado hasta el color rojo carmn. Observar la
presencia de fibras, parnquima, esclereidas, pelos.

La informacin de los montajes anteriores puede complementarse mediante la

aplicacin de otros ensayos que permiten la observacin de otros tejidos y
estructuras como paredes de celulosa, granulos de aleurona y oleorresinas.

3. Observar las estructuras presentes en los ejemplares seleccionados de las

plantas medicinales, identificar los elementos de valor diagnstico en cada una de
las plantas y realizar el dibujo correspondiente.

CONSULTA
El estudiante debe consultar las estructuras internas a nivel microscpico de las
siguientes drogas en polvo: canela, ruibarbo, jengibre, regaliz, sen, digital,
calndula y sauco.

BIBLIOGRAFA
Gattuso M.A.,Gattuso S.J. Manual de procedimientos para el anlisis de drogas
en polvo. Cooperacin Iberoamericana Ciencia y Tecnologa para el desarrollo.
Universidad Nacional del Rosario. Argentina. 1999.
27

Prctica No 7

IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

OBJETIVO
Realizar pruebas qumicas rpidas de coloracin y precipitacin para la
identificacin de compuestos fenlicos, terpnicos y nitrogenados en
muestras vegetales conocidas.
MARCO TERICO
Los compuestos denominados metabolitos secundarios son subproductos de rutas
metablicas normales que ocurren en ciertas especies, siendo particulares dentro
de un grupo taxonmico, estado de vida o tejido presentando una distribucin
restringida dentro del Reino Vegetal dando origen a la quimiotaxonoma. Su
ocurrencia depende de condiciones externas tales como ataques de patgenos,
depredadores, cambios trmicos o lumnicos, deficiencias nutricionales o
presencia de otros organismos intra o interespecficos.

El

metabolismo

secundario

es

una

caracterstica

fundamental

de

la

especializacin, es decir que el compuesto resultante, puede no ser importante

para la clula

pero s para el organismo como un todo. Los metabolitos

secundarios pueden ser bioactivos, pero no jugar un papel esencial en los

procesos fisiolgicos del organismo.

Algunos metabolitos secundarios son

residuos bioqumicos, es decir, productos de actividad enzimtica de sustratos

no apropiados o productos de destoxificacin o de desecho que pueden ser de
importancia para la supervivencia y la buena condicin de los organismos. Con
pocas excepciones, los metabolitos secundarios pueden clasificados dentro de
cinco grupos, de acuerdo con su base biosinttica: fenilpropanos, acetogeninas,
terpenoides, esteroides y alcaloides.

28

Reconocimiento de metabolitos: el reconocimiento de metabolitos secundarios

se realiza por medio de pruebas fitoqumicas preliminares, las cuales son una
prueba cualitativa de caracterizacin consistente en una reaccin qumica que
produce alteracin rpida en la estructura molecular de un compuesto, por
ejemplo, la modificacin de un grupo funcional, la apertura de un sistema anular, la
formacin de un aducto o un complejo, lo cual genera como resultado una
manifestacin sensible como el cambio de coloracin, la formacin de un
precipitado o el desprendimiento de un gas, lo cual indica la presencia o ausencia
de un metabolito secundario en particular.

1. Alcaloides: los alcaloides son sustancias bsicas que contienen nitrgeno en

un anillo heterocclico, son derivados de aminocidos, presentan distribucin
taxonmica limitada y se encuentran en plantas superiores como sales de un
cido orgnico.

Figura 11. Estructura qumica de la nicotina

Atendiendo a su solubilidad, propiedad empleada para extraerlos y purificarlos, la

base del alcaloide es soluble en solventes orgnicos y pueden formar sales
solubles en solventes polares cuando se encuentra en cidos minerales diluidos.
2. Flavonoides: los flavonoides son compuestos polifenlicos con quince tomos
de carbono, cuya estructura qumica consta de 2 anillos de benceno unidos por
una cadena lineal de tres carbonos. El ncleo de los flavonoides se representa por
el sistema C6 C3 C6.

29

Figura 12. Estructura qumica de una catequina.

3. Cardiotnicos: las agliconas cardiotnicas qumicamente estan constituidas

por el sistema esteroidal (ciclo pentano perhidrofenantreno) con los grupos metilos
en las posiciones C18 y C-19, 7, un grupo hidroxilo en el carbono 3 y un anillo
lactnico

- insaturado de cuatro carbonos unido al carbono 17 del ncleo

esteroidal, como se observa en la estructura qumica de la digoxina que aparece a

continuacin.

Figura 13. Estructura qumica de la digoxina.

Estos compuestos han presentado actividad estimulante sobre el msculo

cardiaco, cuando estn en forma de glicsidos.

4. Saponinas: las saponinas son un grupo de glicsidos solubles en agua que

tienen la propiedad de hemolizar la sangre y disminuir la tensin superficial del

30

agua formando espuma abundante. Las saponinas por hidrlisis dan origen a las
llamadas sapogeninas.

Figura 14. Estructura qumica de la diosgenina.

La sapogenina puede tener el sistema anular esteroidal o el de un triterpeno

pentacclico. Los anillos E y F de la saponina estereoidal conforman el llamado
sistema espirostanal. El enlace glicosdico siempre se forma con el oxigeno del
carbono 3.

5. Cumarinas: las cumarinas son un grupo muy amplio de principios activos

fenlicos y tienen en comn la estructura qumica de 1-benzopiran-2-ona. Se
caracterizan porque presentan fluorescencia bajo la luz ultravioleta a 365 nm.

Figura 15. Ncleo qumico de las cumarinas.

Estructuralmente se clasifican en cumarinas simples, furanocumarinas y

pironacumarinas.

31

6. Taninos: los taninos son polmeros de polifenoles, sustancias con alto peso
molecular, comprendido entre 500 a 3000 g/mol. Se consideran productos de
excrecin de muchas plantas, involucrados como mecanismos de defensa de las
mismas, contra organismos parsitos. Se clasifican en:

Taninos hidrosolubles o piroglicos: son steres fcilmente hidrolizables formados

por una molcula de azcar (glucosa) unida a un nmero variable de molculas de
cidos fenlicos (cido glico o su dmero, el cido elgico). Son comunes en
plantas dicotiledneas.

Figura 16. Estructura qumica de los taninos hidrolizables.

Taninos no hidrosolubles condensados: tienen una estructura qumica similar a

la de los flavonoides. Por hidrlisis generan azcar y cido elgico, algunos
taninos condensados son conocidos como pro-antocianidinas porque por hidrlisis
cida producen antocianidinas y leucoantocinidinas.

32

Figura 17. Estructura qumica de los taninos no hidrolizables o proantocianidinas.

7. Esteroides: los esteroides son compuestos cuya estructura presenta el ncleo

ciclopentano perhidrofenantreno, metilos en los carbonos 10 y 13 y un radical
lineal en el carbono 17.

Figura 18. Estructura qumica del ergosterol.

Los esteroides son compuestos fundamentales en la estructura celular de

animales, vegetales, hongos y bacterias.
8. Quinonas y antraquinonas: las quinonas son dicetonas cclicas insaturadas
que por reduccin se convierten en polifenoles, siendo reversible esta reaccin.
Las quinonas derivan su nombre del miembro ms simple de la serie: la pbenzoquinona obtenida en 1838 por Woskresensky, como producto de oxidacin

33

del cido qunico. Las quinonas se pueden clasificar en benzoquinonas,

naftoquinonas y antraquinonas (las ms numerosas).

Figura 19. Ncleo qumico de las antraquinonas.

9. Antocianinas: las antocianinas son pigmentos flavonoides que se comportan

como indicadores cido base debido a la reaccin:

Figura 20. Reacciones qumicas de las antocianinas en diferente pH.

Estos pigmentos suelen presentarse en forma de glucsidos, lo que explica su

solubilidad en agua y la fcil extraccin con solventes acuosos. Se encuentran
en la savia de las plantas, y a menudo en forma de slidos amorfos o cristalinos
en las hojas de tejido leoso y frutos. Su color esta algunas veces enmascarado
por otros pigmentos vegetales como la clorofila.

34

METODOLOGA
Sobre el extracto de la planta seleccionada, el estudiante realizara pruebas
qumicas de coloracin y/o precipitacin, para identificar la presencia del
metabolito respectivo.

1. Reconocimiento de alcaloides
Los alcaloides son bases nitrogenadas, las cuales pueden convertirse en sus
respectivas sales mediante la adicin de un cido diluido y formar precipitados al
reaccionar con los reactivos especficos para alcaloides. En esta prctica
utilizaremos los reactivos de: Mayer y Dragendorff.

Obtencin del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco

macerar en un mortero y adicionar un volumen suficiente de cido clorhdrico al
5%, calentar al bao mara durante 10 minutos, enfriar y filtrar.

Prueba cualitativa: colocar en dos tubos de ensayo aproximadamente 0.5 ml del

filtrado cido y agregar a uno de los tubos 2 gotas del reactivo de Dragendorff y al
otro tubo 2 gotas del reactivo de Mayer. Si se observa turbidez o precipitado en
ambos tubos se considera como prueba presuntiva de la presencia de alcaloides.

2. Reconocimiento de esteroides y/o triterpenoides

Obtencin del extracto: en un beaker limpio y seco, tomar una pequea cantidad
de material vegetal seco y molido, adicionar diclorometano en cantidad suficiente
hasta que cubra la muestra (realice esta prueba bajo campana extractora de
gases) agitar con varilla de vidrio para realizar una mejor extraccin,
posteriormente filtrar sobre sulfato de sodio anhidro.

Prueba cualitativa (Ensayo de Lieberman Burchard): en un tubo de ensayo limpio y

seco tomar 1 ml del filtrado orgnico y agregar por la pared del tubo 1 ml de
anhdrido actico y con precaucin 1-2 gotas de cido sulfrico concentrado. La

35

aparicin de coloraciones: verdes, azules, rojas o violeta es prueba positiva para

esteroides y/o triterpenoides en la muestra.

3. Reconocimiento de saponinas
Obtencin del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco y
macerar en un mortero, adicionar suficiente cantidad de agua que cubra la
muestra, filtrar a travs de gasa.

Prueba cualitativa: pasar 4 ml del filtrado a un tubo de ensayo y agitar

vigorosamente durante un minuto, si se forma abundante espuma que permanece
estable durante 5 minutos es prueba presuntiva de la presencia de saponinas en
la muestra.

4. Reconocimiento de compuestos fenlicos y taninos

Obtencin del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco,
macerar en un mortero hidratando la muestra para facilitar el rompimiento de los
tejidos, pasar la muestra completamente macerada a un beaker y adicionar
cantidad suficiente de agua para cubrir la muestra, calentar en bao mara de 10
minutos y filtrar en caliente.

Prueba cualitativa: tomar 1 ml del filtrado en un tubo de ensayo y adicionar 2 gotas

de solucin de tricloruro frrico (FeCl 3 al 1%). La aparicin de un color verde, azul
o negro es prueba positiva para compuestos fenlicos.

En un segundo tubo de ensayo tomar 1 ml del filtrado y agregar unas gotas de la

solucin de gelatina-sal, si se presenta turbidez o formacin de precipitado es
prueba presuntiva de la presencia de taninos en la muestra.

36

5. Reconocimiento de flavonoides, leucoantocianidinas y cardiotnicos:

Obtencin del extracto: macerar en un mortero aproximadamente 10 g del material
vegetal finamente picado, adicionar suficiente cantidad de etanol, calentar al bao
mara durante 5 minutos, enfriar y filtrar.

Prueba cualitativa para flavonoides (Ensayo de Shinoda): tomar un 1 ml del filtrado

etanlico en un tubo de ensayo, agregar varias limaduras de magnesio y por la
pared del tubo dejar caer lentamente HCl concentrado (37%). La aparicin de
colores: naranja, rojo, violeta rosado, indican es prueba presuntiva de la
presencia de flavonoides en el material vegetal.

Prueba cualitativa para leucoantocianidinas: tomar 2 ml del filtrado en un tubo de

ensayo y adicionar 1 ml de cido clorhdrico concentrado (37%). Calentar en bao
mara durante 15 minutos. La aparicin de coloraciones rojas es prueba presuntiva
de la presencia de leucoantocianidinas en la muestra.
Prueba para la deteccin de cardiotnicos y lactonas , insaturadas: adicionar 1
ml de filtrado en un tubo de ensayo y agregar 0.5 ml de reactivo de Kedde
(mezclar 1 ml de solucin A con 1 ml de solucin B para preparar este reactivo
antes de usarlo). La aparicin de coloraciones violetas o prpuras es prueba
presuntiva de la existencia de cardiotnicos en la muestra.

6. Reconocimiento de quinonas
Obtencin del extracto: pesar 0,5 g de material vegetal en polvo en un beaker de
100 ml, adicionar 20 ml de etanol al 95% y calentar en bao mara durante 5
minutos hasta ebullicin, filtrar en caliente,

Hidrlisis: tomar 5 ml del filtrado y adicionar 3 ml de H 2SO4 al 10%, calentar en

bao mara durante 15 minutos hasta ebullicin, enfriar la muestra.

37

Extraccin con tolueno: adicionar 5 ml de tolueno al extracto previamente

hidrolizado, agitar suavemente sin emulsionar, utilizando la cabina de extraccin.

Prueba cualitativa: tomar 2 ml de la fase orgnica en un segundo tubo de ensayo,

adicionar 1 ml de la solucin previamente preparada de hidrxido de sodio al 5%
en amonaco al 2%. La aparicin de un color rojo cereza en la capa acuosa indica
presencia de quinonas en la muestra.

7. Reconocimiento de antocianinas
Obtencin del extracto: en un erlenmeyer colocar 100 g de muestra fresca
finamente desmenuzada, aadir 200 ml de agua, calentar a ebullicin durante 5
minutos y filtrar.

Prueba cualitativa: adicionar 2 ml del filtrado en un tubo de ensayo y aadir 1 ml

de NaOH diluido. Observar la coloracin formada.

En otro tubo de ensayo adicionar 2 ml del filtrado y aadir 6 gotas de algn cido
mineral diluido (HCl H2SO4 al 10%). Observar la coloracin formada.
Las antocianinas se reconocen por producir diferentes color es a diferentes pH.

8. Reconocimiento de cumarinas
En un tubo de ensayo grande adicionar 1 g de material vegetal fresco y macerado
y agregar cantidad suficiente de etanol comercial hasta cubrir la muestra. Con un
trozo de papel filtro blanco cubrir la boca del tubo de ensayo y sujetarlo con pinzas
o una banda elstica. Agregarle unas gotas de NaOH diluido en el papel filtro y
calentar hasta ebullicin durante 5 minutos, posteriormente enfriar y retirar el papel
filtro. Observar bajo luz ultravioleta a 365 nm la aparicin de una coloracin
fluorescente que puede ser: verde, amarilla o roja.

38

CONSULTA
Consultar las reacciones qumicas que se presentan en cada una de las pruebas
de identificacin de metabolitos secundarios.
BIBLIOGRAFA
DOMNGUEZ X.A. Mtodos de investigacin Fitoqumica. Ed.Limusa. Mxico.
1973.

Arango A. Gabriel J., Quijano T. Jairo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.

Marcha Fitoqumica Semicuantitativa. Universidad de Antioquia. Medelln.

39

Prctica No 8

RECONOCIMIENTO DE ADULTERACIONES Y/O FALSIFICACIONES EN EL

MATERIAL VEGETAL

OBJETIVO
Aplicar

los

ensayos

fsicos

(organolpticos-macroscpicos),

anlisis

microscpico (identificacin de elementos de valor diagnstico) y pruebas

qumicas de coloracin en la identificacin de adulteraciones y/o
falsificaciones en el material vegetal.
Identificar una muestra problema de material vegetal en polvo mediante sus
caractersticas organolpticas, macro y microscpicas y pruebas qumicas.
MARCO TERICO
El material vegetal es clasificado de acuerdo a sus caractersticas sensoriales,
macroscpicas y microscpicas. Un examen para determinar estas caractersticas
es en primer paso establecer la identidad y el grado de pureza del material, para
despus llevarse a cabo posteriores anlisis. Siempre que sea posible, patrones
del material o muestras de calidad farmacopica debe de estar disponible como
referencia.

Una inspeccin visual provee una simple y rpida medida para identificar el
material, pureza y, posiblemente, calidad. Si una muestra es encontrada ser
significativamente diferente, en trminos de color, consistencia, olor o textura, de
las especificaciones, se considera una no conformidad de los requerimientos. Sin
embargo, los juicios deben ser cautelosos con relacin al olor y la textura, debido
a las diferencias que existen entre personas o por la misma persona a diferentes
tiempos. Siendo entonces esta una habilidad sensorial que se afina con la
experiencia.

La identificacin macroscpica de una planta medicinal est basada en la forma,

40

tamao, color, caractersticas superficiales y textura. Sin embargo, mientras esas

cualidades son juzgadas subjetivamente y sustituciones o adulteraciones pueden
ser muy parecidas al material genuino, a menudo es necesario respaldarse en
anlisis microscpicos y/o fisicoqumicos.

La inspeccin microscpica del material vegetal es indispensable por la

identificacin del material en polvo, el material debe de ser tratado con reactivos
qumicos. Los ensayos microscpicos se deben asociar con otros mtodos
analticos para garantizar una completa identificacin, en los casos en los que la
comparacin con material de referencia revela algunas caractersticas no descritas
en los requerimientos, estos pueden ser atribuidos a material extrao, antes que
un a un constituyente normal.
METODOLOGA
1. Ensayos preliminares para la identificacin de las caractersticas organolpticas
del material vegetal para identificar el color, el olor y el sabor.

2. Deteccin histoqumica de tejido vegetal y su contenido.

Realizar las placas para la deteccin de celulosa, aleuronas, lpidos y aceites
esenciales, las cuales se describieron en la prctica No 4 y las pruebas para la
deteccin de almidn, oxalato de calcio y lignina descritas en la prctica No 6,
complementar esta informacin si es necesario con el montaje de las siguientes
placas:

Deteccin de concreciones de carbonato de calcio (cistolitos) y de cristales de

oxalato de calcio: colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos.
Verter 2 3 gotas de cido clorhdrico 2M, con la precaucin de que el reactivo
est en contacto con todos los componentes del polvo. Colocar el cubreobjetos y
observar inmediatamente al microscopio a 10x. La presencia de carbonato de
calcio est indicada por la aparicin de burbujas. Los cristales de oxalato de
calcio, que en general tardan ms tiempo en disolverse, no desprenden burbujas.
41

Deteccin de lpidos y aceites esenciales: colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo

sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de solucin de Sudan III (0.5 g Sudan III
calentados a reflujo en etanol o isopropil alcohol) y dejar actuar durante 2 3
minutos. Escurrir el lquido y lavar bien con alcohol 70 %. Colocar el cubreobjetos
y observar al microscopio a 10x y 40x. Los lpidos aparecen como gotas de color
rojo.

Deteccin de taninos: colocar 2 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y

verter 2 3 gotas de solucin de cloruro frrico al 5 %. Colocar el cubreobjetos y
observar al microscopio a 10x y 40x. La presencia de taninos se evidencia por la
aparicin de masas oscuras de color pardo, azul o negro.

Deteccin de celulosa: Colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un

portaobjetos. Verter 1 2 gotas de solucin de cloruro de zinc yodado (disolver 20
g de cloruro de zinc y 6.5 g de yoduro de potasio en 10.5 mL de agua), dejar
reposar 2 minutos y agregar 1 gota de yodo (0.1 mol/l), dejar reposar 1 minutos,
remover el exceso de reactivo con una tira de papel filtro y agregar 1 gota de
H2SO4 60%. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio, las paredes de
celulosa se observan en colores desde el azul al violeta.

Procedimiento: combinar la solucin A, solucin B y la Solucin C y agregar 2.5

ml de HCl con agitacin (No filtrar). Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre
un portaobjetos y adicionar 2 3 gotas del reactivo y calentar suavemente. Cubrir
con el cubreobjetos y observar los elementos lignificados de amarillo, sber de
marrn, lpidos de color rojo y almidn de color azul -violeta.

42

3. Pruebas qumicas rpidas

Solubilidad en agua: tomar en un tubo de ensayo aproximadamente un gramo de

muestra, adicionar agua en cantidad suficiente para cubrir la muestra; mezclar y
dejar en reposo durante 15 minutos. Al cabo de este tiempo observar concluir.
Los extractos acuosos y jugos concentrados se disuelven casi completamente, y
drogas como la goma arbiga, tragacanto y semillas de lino, ponen de manifiesto
su naturaleza gomosa o mucilaginosa.

Presencia de carbonato de calcio: tomar en un tubo de ensayo una pequea

cantidad de la muestra y adicionar unas gotas de cido sulfrico diluido, si hay
presencia de carbonato de calcio como adulterante, tiene lugar una efervescencia
seguida de disolucin.

Presencia de aceites fijos y/o aceites esenciales: para la prueba de aceites fijos se
debe comprimir una pequea cantidad de muestra en un pequeo trozo de papel
kraft, si aparece una mancha oleosa que persiste luego de someterla a
calentamiento a una temperatura de 50C, la muestra contiene aceite fijo. Ejemplo:
semillas de lino y man.

Los aceites esenciales se reconocen por su olor aromtico y a la temperatura de

50C desaparece la mancha oleosa, la deteccin del aroma tambin se puede
apreciar al calentar la muestra en el bao mara.

Prueba para saponinas, taninos y antraquinonas: en un tubo de ensayo tomar

aproximadamente 0,5 g de muestra, adicionar aproximadamente 15 ml de agua,
agitar durante un minuto. Si aparece espuma abundante sospechar la presencia
de drogas que contienen saponinas, hervir suavemente y anotar si aparece
desprendimiento de aceite esencial (por su olor aromtico). Filtrar y dividir el
filtrado en tres tubos de ensayo, dos para la prueba de taninos y uno para la

43

prueba de antraquinonas (5 ml). Realizar las pruebas de identificacin

correspondientes de acuerdo con el procedimiento descrito en la prctica No. 7.

BIBLIOGRAFA
WHO. Quality control methods for medicinal plant material. Geneva: WHO. 1998.
ISBN 92 4 154510 0.

TREASE G.E., EVANS W.C. Tratado de Farmacognosia. Editorial Bailliere Tindall.

12a Edicin. Mexico. 1989.

44

Prctica No 9

IDENTIFICACIN CROMATOGRFICA DE PLANTAS MEDICINALES

OBJETIVO
Aplicar las tcnicas bsicas de separacin cromatogrfica para la
identificacin de compuestos que sirvan como indicadores o marcadores
que permitan corroborar la autenticidad de plantas medicinales.
MARCO TERICO
La cromatografa (Chromo= color y Graphie=escritura, escribir en colores) fue
desarrollada en el ao de 1903 por el botnico ruso Mikhail Tswett, posteriormente
Ismailov y Scraiber utilizaron lminas de vidrio para colocar capas muy delgadas
de almina y luego aplicaron extractos vegetales y en 1956 Egon Stahl
estandariz los procedimientos, equipos y adsorbentes y le dio el nombre de
cromatografa de capa fina a esta tcnica de separacin de mezclas complejas
que ha resultado ser simple, econmica y eficiente.

En la cromatografa en capa fina, la muestra se aplica en la fase estacionaria y es

adsorbida en la superficie del material y la fase mvil asciende por capilaridad a
travs de la placa, de modo que la separacin ocurre de acuerdo con la constante
de afinidad de los componentes de la muestra por la fase mvil. Los componentes
del sistema cromatogrfico que se describirn a continuacin son: fase
estacionaria y fase mvil.
Fase Estacionaria (Adsorbente): es una de las dos fases que conforman un
sistema cromatogrfico. Puede ser un slido, un gel o un lquido. En el caso de
cromatografa en capa fina lo ms comn es utilizar las placas de slica gel 60 GF254.

45

Fase Mvil (eluente): es el fluido que se filtra a travs de la fase estacionaria, en

una direccin definida, en el caso de la cromatografa en capa fina se utiliza un
solvente o mezcla de solventes.
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (CCF)
Es la tcnica de separacin en la que la fase estacionaria est sobre un plano
formando una capa de partculas slidas extendida sobre un soporte, tal como una
placa de vidrio o aluminio (Thin Layer Chromatography, TLC), la muestra es
aplicada en puntos o en banda, para posteriormente ser eluda dentro de un
tanque cromatogrfico como se ilustra en la figura.

Figura 21. Representacin grfica del proceso de cromatografa en capa fina.

Si los componentes de la muestra no son coloreados, se requiere de mtodos que

permitan visualizarlos, este procedimiento se conoce como revelado de la placa.

Existen dos tipos de reveladores:

Reveladores qumicos: a travs de inmersin o aspersin de reactivos especficos
se obtienen derivados coloreados o fluorescentes de los componentes de la
muestra.
Reveladores fsicos (pticos): se utiliza la irradiacin de la placa cromatogrfica
con luz ultravioleta en longitudes de onda de 254 nm y 365 nm.

La cromatografa en capa fina como mtodo cualitativo y cuantitativo requiere

contar con un estndar de referencia para comparar su valor de factor de retardo
46

(Rf) y el color de la banda del estndar al ser revelada con agentes qumicos
especficos.

El factor de retardo o factor de retencin (Rf) es un valor relativo para cada

sustancia y depende de las condiciones cromatogrficas experimentales (fase
mvil, fase estacionaria, eluente y tiempo de saturacin de la cmara). Se define
como el cociente entre la distancia recorrida por el centro de la banda y la
distancia re corrida simultneamente por la fase mvil como se ilustra en la figura.

Figura 22. Esquema para ilustrar el clculo del factor de retencin (Rf)
cromatogrfico.

Rf para la mancha 1 = a / X
Rf para la mancha 2 = b / X
Rf para la mancha 3 = c / X
Los valores de Rf siempre son menores o iguales a uno (Rf = 1).

METODOLOGA
1. Reconocimiento cromatogrfico del flavonoide Rutina.
Muestras propuestas: flores de pensamiento (Viola tricolor), flores de calndula
(Calendula officinalis), flores de sauco (Sambucus nigra).

47

Obtencin de los extractos: pesar 1 g del material vegetal seco y molido y extraer
con etanol durante 10 minutos sobre un bao de agua a 60C. Filtrar y rotaevaporar.

Fase estacionaria: Silica Gel GF-254.

Fase mvil: Acetato de etilo: Acido frmico: Acido actico: Agua (100 : 11 : 11 : 26).
Revelador

qumico:

revelador

de

productos

naturales

(NP-PEG),

cido

difenilbrico (solucin 1) y polietilenglicol (solucin 2).

Revelador fsico: luz UV 365nm.
Procedimiento experimental: el extracto concentrado se aplica en las placas
cromatogrficas correspondientes, se puede utilizar el flavonoide rutina como
estndar de referencia. Posteriormente se introduce la placa en la cmara que
contiene la fase mvil y se deja eluir hasta alcanzar el frente del solvente, para
finalizar se observa con luz ultravioleta a 365 nm y se miden los Rf de cada uno de
los componentes.
2. Reconocimiento cromatogrfico del fenilpropano Anetol.
Muestras propuestas: Anis estrellado, hinojo, eneldo.
Obtencin de los extractos: pesar 1 g del material vegetal seco y molido y extraer
con 10 ml de diclorometano durante 15 minutos en la campana de extraccin. Filtrar y
rotaevaporar.

Fase estacionaria: Silica Gel GF-254.

Fase mvil: Tolueno: Acetato de etilo (93 : 7).
Revelador qumico: Vainillina- Acido sulfrico
Revelador fsico: luz UV 365nm.
Procedimiento experimental: el extracto concentrado se aplica en las placas
cromatogrficas correspondientes, se puede utilizar el fenilpropano anetol como
estndar de referencia. Posteriormente se introduce la placa en la cmara que
contiene la fase mvil y se deja eluir hasta alcanzar el frente del solvente, para
finalizar se observa con luz ultravioleta a 365 nm y se miden los Rf de cada uno de
los componentes.

48

3. Reconocimiento cromatogrfico del alcaloide Boldina.

Muestra propuesta: Hojas de Boldo
Obtencin del extracto: pesar 1 g del material vegetal seco y molido y extraer durante
15 minutos con 15 ml H2SO4 0.1 N en la campana de extraccin, filtrar y lavar el
filtrado hasta obtener un volumen final de 20 ml, adicionar 1 ml de NH 4OH. Realizar
dos extracciones cada una con 10 ml de ter dietlico, recoger esta fase orgnica y
secarla sobre sulfato de sodio anhidro, filtrar y rotaevaporar. Redisolver en 0.5 ml de
metanol.

Fase estacionaria: Silica Gel GF-254.

Fase mvil: Tolueno: Acetato de etilo: Dietilamina (70 : 20 : 10).
Revelador qumico: solucin spray del reactivo de Dragendorff.
Revelador fsico: luz UV 365nm.
Procedimiento experimental: el extracto concentrado se aplica en las placas
cromatogrficas correspondientes, se puede utilizar el alcaloide boldina como
estndar de referencia. Posteriormente se introduce la placa en la cmara que
contiene la fase mvil y se deja eluir hasta alcanzar el frente del solvente, para
finalizar se observa con luz ultravioleta a 365 nm y se miden los Rf de cada uno de
los componentes.
CONSULTA
Consultar sobre los valores de Rf correspondientes a cada uno de los compuestos
presentes en las plantas medicinales propuestas: rutina, boldina y anetol.
BIBLIOGRAFA
WAGNER H., BLADT S., ZGAINSKI M. Plant Drug Analysis. Springer Verlag.
1984.

49

Prctica No 10

CONTROL DE CALIDAD DE PLANTAS MEDICINALES DE ACUERDO CON

FARMACOPEAS OFICIALES

OBJETIVO
Realizar las principales pruebas de identidad general, pruebas de pureza y
ensayos qumicos para el aseguramiento de la calidad de diferentes plantas
medicinales.
MARCO TERICO
Cada planta medicinal y especficamente la parte utilizada (droga) contiene
principios activos o principales constituyentes con un perfil caracterstico que
puede ser usado para el control de calidad desde el punto de vista qumico y para
el aseguramiento de la calidad de los productos fitoteraputicos.

La monografa de una planta medicinal es aquel documento en el que se

especifican de manera detallada las caractersticas del material vegetal y los
lmites de aceptacin para el aseguramiento de la calidad en cada una de las
pruebas, las cuales se pueden clasificar en: pruebas de identidad general, pruebas
de pureza y ensayos qumicos.

Las pruebas de identidad general estn constituidas por los ensayos que permiten
la determinacin de las caractersticas macro y microscpicas de las plantas
medicinales y las que representan el perfil cromatogrfico y los compuestos
mayoritarios en cada droga vegetal.

Los ensayos fisicoqumicos o pruebas de pureza se realizan de acuerdo con la

legislacin y los requerimientos nacionales e incluyen una amplia gama de
pruebas como: pruebas microbiolgicas (de acuerdo con la gua WHO)
determinacin de cenizas totales, cenizas insolubles en cido, determinacin de
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sustancias extractivas acuosolubles y solubles en alcohol, residuos de pesticidas

metales pesados, residuos radioactivos, cuantificacin de material extrao y
cenizas sulfatadas.

Dentro de los anlisis qumicos se establecen los lmites inferiores en el porcentaje

de los principales compuestos de acuerdo con las tcnicas instrumentales, al igual
que los mtodos cromatogrficos que permiten la cuantificacin de los diferentes
compuestos y como resultado se presentan los principales compuestos y los
rangos de porcentajes en los que estn presentes en el material vegetal.

En la presente prctica el estudiante consultar la monografa oficial de una planta

medicinal asignada y realizar las pruebas de control de calidad correspondientes.
METODOLOGA
Plantas medicinales propuestas: alcachofa (Cynara scolymus L.), eucalipto
(Eucalyptus globulus St. Lag.), hinojo (Foeniculum vulgare Mill.), manzanilla
(Chamomilla recutita L.), quina (Cinchona succirubra Pavon), romero (Rosmarinus
officinalis L.).

1. Pruebas de identidad general.

Reconocimiento macroscpico: realizar la descripcin completa de la morfologa
externa de la planta medicinal asignada y verificar si cumple con los parmetros
farmacopicos.

Reconocimiento microscpico: identificar a nivel microscpico los principales

elementos de valor diagnstico presentes en el material vegetal: grnulos de
almidn, cristales de oxalato de calcio, pelos epidrmicos y tricomas para
comparar con la descripcin reportada en las farmacopeas oficiales.

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Perfil cromatogrfico: reproducir las condiciones de cromatografa en capa fina con

el fin de identificar los principales compuestos presentes en el material vegetal
objeto de anlisis.
2. Pruebas fisicoqumicas.
Porcentaje de materia extraa: en el caso de drogas completas una cantidad
pesada (100-500 g, acorde con el tipo de droga) de una muestra tomada
cuidadosamente es esparcida en forma de capa fina en un papel. Esta es
examinada a una magnificacin de 6X y la materia extraa es sacada y pesada
para calcular su porcentaje. Consultar la metodologa detallada en la BP 2003,
apndice XID.
3. Identificacin de metabolitos secundarios.
A partir del extracto de la planta medicinal, realizar las pruebas cualitativas de
coloracin para la identificacin de

compuestos fenlicos, terpnicos y

nitrogenados, de acuerdo con el procedimiento indicado en la prctica No 7 para

cada uno de los metabolitos.

CONSULTA
Consultar el procedimiento detallado para realizar las siguientes pruebas
fisicoqumicas en el material vegetal: determinacin de cenizas, determinacin de
sustancias extrables, determinacin de humedad y prdida por secado.

BIBLIOGRAFA
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ISBN 92 4 154510 0.
WHO. Monographs on Selected Medicinal Plants. Volume 1-4. 1999.

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1984.

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Aprobadas en Colombia. Editorial Universidad de Antioquia. Segunda edicin.
2006.

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Pharmacognosy and Phytotherapy. Ed. Churchill Livingstone. Spain. 2004.

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Medicinales. Colombia. MPS. 2008.

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