Mijloace Nano-Terapeutice in Medicina

IOSUD USAMVB Timioara
Scoala doctoral: Medicin Veterinar
Mijloace nano-terapeutice n medicin Introducere

Suport de curs electronic pentru studenii la doctorat
Disciplina: Farmacologie veterinar

ndrumtor tiinific: Prof. Romeo Teodor Cristina, PhD., DVM
2013
Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara
Nov. 2013
Prof. Dr. Romeo T. Cristina
Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere
Cuprins
1.
1.1.
1.1.1.
1.2.
1.2.1.
1.3.
1.3.1.
1.3.2.
1.3.3.
1.4.
1.4.1
1.4.2.
1.5.
1.5.1.
1.6.
1.7.
1.7.1.
1.8.
1.8.1.
1.8.2.
1.9.
1.9.1.
1.9.2.
1.9.3.
1.9.4.
1.10.
1.10.1.
1.11.
Mijloace nano-terapeutice n medicin

Nanotehnologia n biologie
Nanomedicina
Nano-materialele utilizate n biomedicin
Materialele magnetice
Aplicaii principale ale nanotehnologiei n biomedicin
Terapia n cancer
Aplica ii asupra ADN-ului
Separarea magnetic
Manipularea celulelor i biomoleculelor
Terapia prin nlocuire cromozomial
Detectarea de proteine
Nanofiltre cu barier (eng. gated nanosieves)
Imunoizolarea unor celule fa de organism
Nano-farmaceutice bazate pe fulerene
Aciunea asupra trombilor vasculari
Sonolysis microbule cu gaz pentru aplicaii terapeutice.
Ingineria esuturilor
Aplicaiile nanotehnologiei n ingineria esuturilor
Creterea de noi organe
Determinrile biologice
Coduri optice multicolore pentru determinri biologice
Nanotehnologia n msurarea oxigenului dizolvat
Nanoparticule ca biomarkeri
Detectorii de virus
Roboii biologici
Nanoroboii medicali de mine
Viitorul nano-biotehnologiei
Bibliografie
6
7
9
11
22
22
27
30
33
33
33
34
35
36
37
37
38
38
39
40
40
41
41
42
42
43
45
47
Nota:
La redactarea acestui material i-a adus aportul i doctoranda Andreia Chiril,
anul I PhD. - SDMVT
2
Nov. 2013
1. Mijloace nano-terapeutice n medicin

Preambul
Nanobiotehnologia este un cmp nou de cercetrare, constituind interfaa dintre
stiinele vieii i nanotehnologie. In acest domeniu unde dimensiunile cu care se
lucreaz sunt cuprinse ntre: 1 nm i 100 nm (1).
Acest domeniu propune exploatarea calitii biomoleculelor i a proceselor pe care
le implic pentru dezvoltarea unor materiale sau dispozitive cu activitate cert n
medicin. Medicamentele substane care, n general determin modificri favora bile n
organism dar pot de asemenea fi nocive datorit mai ales a:
efectelor nedorite,
reziduurilor,
fenomenelor de rezisten.
De exemplu, peste 70% dintre bacteriile care determin infecii intra-spitaliceti
sunt rezistente la cel puin un antibiotic!
Cel mai cunoscut exemplu este cel al tulpinilor meticilino-rezistente (figura 1)(1).
Figura 1. Tulpini Methicillin-Rezistente de Staphylococcus aureus (MRSA) evideniate prin Scanning

Electron Micrograph (SEM) Sursa: http://img.timeinc.net/time/daily/2007/0706/a_lantibiotics_0618.jpg
Un alt mecanism de supravieuire bacterian este: Ply Sly mechanism, n care

bacteriile pot evita i mai apoi e limina antibioticul, pompndu-l extracelular (figura 2).
3
Nov. 2013
Deci microorganismele care pot genera rezisten, posed forme de inteligen ,

aa c noile tipuri de substane active trebuie s identifice acele ci care le fac i mai
inteligente! Acesta a fost nceputul acestei tiine
(1).
Figura 2. mecanismul PlySly bacterian

Sursa: http://s3.amazonaws.com/readers/healthmad/2007/07/22/43701_0.jpg
n acest context nanotehnologia terapeutic caut s ofere caracteristici specifice

care pot reduce morbiditatea i mortalitatea la om i animale:
o terapie invaziv minimal,
funcii cu densitate nalt,
concentrarea n volume foarte mici.
FDA- definete un sistem de eliberare al farmaconilor ca fiind: ... un produs
destinat diagnosticului, tratamentului, prevenirii, sau diminurii unei boli sau a condiiilor
ei de apariie , sau care interfereaz o funcie sau structura organismului i care nu-i
atinge efectul su primar ca urmarea unei interaciuni chimice i care nu este
metabolizat (FDA) (1).
Aplicaiile iniiale, de pionierat ale nanobiotehnologiei au dat posibilitatea
reformulrii unor condiionri, considerate pna atunci a fi toxice n formule sigure i
mult mai eficiente (1).
Astfel nano-formulrile din prima generaie au inclus:
nanoparticulele de tip albumin-bound
chelaii (gadoliniu)
particulele oxido-feroase
4
Nov. 2013
nanoparticulele din argint

restorativele (n stomatologie) i
lipozomii (ca primi reprezentani ai celei de a doua generaii)
Dintre numeroasele studii on the topic fluidele magnetice sunt considerate a fi
printre primele aplicaii verificate ale nanotiinelor.
Un bun exemplu este folosirea cu succes al fluidelor magnetice n SIDA (1).
Totui aceste prime ncercri au au demonstrat n timp numeroase neajunsuri,
dintre care cele mai importante au fost:
biodisponibilizarea nesatisfctoare,
efectul limitat,
poteniala citotoxicitate,
tratamentele de lung durat i frecvente.
Nanodispozitivele (sin. nanocarriers) au depit aceste limitri .
Acestea sunt capabile s:
maximizeze activitatea terapeutic,
minimizeze efectele toxice secundare,
inteasc celule specifice i nu esuturile,
permit o micare uoar de suprafa.
Numeroase grupri funcionale pot fi plasate pe nanodispozitive pentru:
a crete / decreate solubilitatea,
penetraia mai uoar a membranelor celulare,
creterea imuno-compatibilitii,
favorizarea asimilrii celulare,
stabilirea cu certitudine a destinatiei finale a farmaconului.
Astfel, a doua generaie de nano-dispozitive a devenit mult mai sofisticat datorit
studiilor la nivel molecular acest fapt permind nano-dispozitivelor s:
1. inteasc,
2. identifice,
3. elibereze precis substana activ ,
4. monitorizeze eficacitatea terapeutic n timp real (1).
5
Nov. 2013
1.1. Nanotehnologia n biologie

Cele mai promitoare tehnologii ale secolului 21 sunt
biotehnologia i
nanotehnologia. Aceasta din urm este tiina structurilor nanometrice se ocup cu

crearea, investigarea i utilizarea sistemelor care sunt de 1000 de ori mai mici dect
componentele utilizate n prezent n domeniul microelectronicii (3).
Convergena acestor dou tehnologii rezult n dezvoltarea nanobiotehnologiei,
aceast combinaie interdisciplinar poate crea multe echipamente inovatoare
(3).
Nano-biotehnologia reprezint unirea biotehnologiei i a nanotehnologiei.

Aceast disciplin hibrid, nseamn deasemenea, producerea de dispozitive de
dimensiuni atomice prin imitarea sau ncorporarea sistemelor biologice la nivel
molecular, sau construirea de instrumente minuscule pentru a studia sau modifica
proprietile structurale atom cu atom.
Nanobiotehnologia poate avea o combinaie de microtehnologie clasic cu o
abordare a biologiei moleculare.
Biotehnologia utilizeaz cunotinele i tehnica din biologie pentru a manipula
procese moleculare, genetice i celulare, ca s dezvolte produse i servicii; este utilizat
n diverse domenii, de la medicin la agricultur (2).
Nanotehnologia este un nou domeniu al tiinei care implic lucrul cu materiale
(substane) sau dispozitive la nivel nanometric. Un nanometru este o miliardime dintr -un
metru; este aproximativ 1/80.000 din diametrul firului de pr, sau de 10 ori diametrul
unui atom de hidrogen.
Nanotehnologia manipuleaz proprietile chimice i fizice ale unei substane la
nivel molecular. Ea schimb modul de gndire, estompeaz graniele dintre fizic,
chimie i biologie, eliminarea acestei granie ridic multe provocri i noi direcii pentru
organizarea educaiei i cercetrii
(3)
Richard Feynman, n discursul din 1959, intitulat There is plenty of room at the
bottom scoate n eviden urmtorul concept:
Dac mini le voastre nguste, pentru confort, divid acest univers n buci, fizic,
biologie, geologie, astronomie, psihologie .a.m.d.. Amintii -v c natura nu tie asta!
(2,3)
.
6
Nov. 2013
1.1.1. Nanomedicina
Primele origini ale noiunii de nano-medicin provin din ideea vizionar a lui
Feynman a unor nanoroboi i a unor mecanisme asemntoare care ar putea fi
proiectate, construite, i introduse n organism pentru a efectua reparaii celulare la
nivel molecular (2, 3). Odat cu cristalizarea prioritior medicinei secol ului XX i mai ales
XXI, i namomedicina a luat avnt (Tabelul 1)
Tabelul 1.
Prioritile medicinei de azi (Sintez Cristina, 2009)
(1)
n general miniaturizarea instrumentelor medicale va asigura abordri mai precise,

mai controlabile, mai multilaterale, mai sigure, mai rapide pentru creterea calitii vieii.
Aceste idei au fost studiate i de ctre Drexler in anii 1980-1990, i n scrierile
tehnice ale lui Freitas n 1990-2000, dar primul om de tiin care a exprimat
posibilitile a fost fizicianul Richard P. Feynman (laureat al premiului Nobel)
R. A., 2004)(2,3)
(cit. De Freiatas
Aplicaiile biomedicale ale nanotehnologiei sunt rezultate directe a astfel de

convergene; totui provocrile, cu care se confrunt cercettorii i inginerii care
lucreaz n domeniul nanotehnologiei sunt, enorme i extraordinar de complexe.
Interesul crescut al nanotehnologiei n aplicaii medicale a dus la apariia unei noi
discipline cunoscute ca nanomedicin.
7
Nov. 2013
Pe larg, nanomedicina cuprinde procesul de diagnosticare, tratare i prevenire a

bolilor i traumatismelor, eliminarea durerii, pstrarea i ntrirea sntii utiliznd
unelte moleculare i cunotine moleculare ale organismului. Deci nanomedicina este
de fapt aplicarea nanotehnologiei n medicin (2, 10).
Utilitatea nanotehnologiei n tiinele biomedicale impune crearea de materiale i
dispozitive proiectate s interacioneze cu corpul la nivel subcelular, cu nalt grad de
specificitate. Utilizarea nanotehnologiei n tiinele biomedicale prezint multe
oportuniti revoluionare n lupta mpotriva cancerului, tulburrilor cardiace i
neurovegetative, infeciilor i altor boli.
Se ateapt ca tehnologia s creeze inovaii i s aib rol vital n varii aplicaii
biomedicale, nu doar n transportul de substane medicamentoase i n terapia genic,
dar i n imagistica molecular, biomarkeri i biosenzori
(11)
Nanotehnologia ar avea un rol mare n domeniul ceretrilor din terapia

medicamentoas cu specificitate de int i n metodele de diagnostic timpuriu a
patologiilor.
Simpozionul
intitulat
Nanoscience
and
Technology:
Shaping
Biomedical
Research din 2000 s-a adresat nanotiinei i nanotehnologiei din domeniile de

cercetare din biomedicin:
Sinteza i utilizarea nanostructurilor
Aplicarea nanotehnologiei n terapie
Nanostructuri biomimetice i biologice
Interfee biologice electronice
Dispozitive pentru detectarea precoce a bolilor
Instrumente pentru studierea unei singure molecule
Nanotehnologia i ingineria esuturilor
(3)
Nanomedicina variaz de la aplicaii medicale ale nanomaterialelor, la biosenzori

nanoelectronici, i ca posibile aplicaii viitoare ale nanotehnologiei moleculare.
Probleme curente ale nanomedicinei implic nelegerea problemlelor legate de
toxicitatea i impactul asupra mediului a materialelor nanometrice (12).
Nov. 2013
1.2. Nano-materialele utilizate n biomedicin

Nanoparticulele sunt comparabile, ca dimensiune, cu proteinele.
Organismele vii sunt alctuite din celule care au in general dimensiunea de 10 m,
componentele celulare sunt, ca dimensiune, din domeniul sub-micronic, iar proteinele
sunt i mai mici, avnd, n general, n jur de 5 nm (6).
n figura 3 este redat gradul de mrime comparativ al nano-moleculelor.
Figura 3. Gradul de mrime comparativ al nano-moleculelor

Sursa: www.fda.gov/consumer/ updates/nanotech072507.html
Se cunosc deja numeroase materiale cu abiliti n eliberarea medicamentelor.

Dintre acestea, primele substane cunoscute au fost polimerii care iniial aveau utilizri
non-biologice, dar care au fost selectate i n medicin datorit numeroaselor proprieti
dezirabile, de exemplu:
(1)
Materialele biocompatibile care prezint rspuns la cmpul magnetic extern i-au

gsit multe aplicaii interesante n arii variate ale biotiinelor i biotehnologiei, incluznd
diferite discipline medicale (10, 11).
Nov. 2013
Pentru a interaciona cu o int biologic, este necesar ataarea unui strat

biologic sau molecular care acioneaz ca o interfa bioanorganic; exemple de strat
bio: anticorpi, biopolimeri (colagenul, diferite monostraturi de molecule care fac
nanoparticula biocompatibil).
Tehnicile de detectare optic sunt foarte rspndite n biologie, astfel c
nanoparticulele ar trebui s aibe n plus un strat fluorescent sau unul care i schimb
proprietile optice. Un material de succes folosit pentru nano-formulri trebuie s fie:
inert chimic,
liber de impuriti filtrabile,
cu mbtranire minim,
uor procesabil,
cu structur adecvat.
Factorii care pot influena biodegradarea polimerilor pot fi:
a. Specifici
b. Tehnologici
c. Medicali
(1)
10
Nov. 2013
Comparaia nanoparticulelor cu proteinele, d o idee a utilizrii acestor sonde

foarte mici care ne permit spionarea funcionrii celulare, fr a produce prea multe
interferene. nelegerea proceselor biologice la nivel nanometric, este o for motric
puternic n spatele dezvoltrii nanotehnologiei
(6)
Pentru aplicaii biologice, cele mai utilizate proprieti sunt efectele optice i
magnetice, pe lng cele fizice. Nanoparticulele formeaz de obicei centrul (mijlocul)
nanobiomaterialelor. Pot fi utilizate ca suprafee pentru asamblare molecular, i pot fi
formai din material anorganic sau polimeric.
Se mai gsesc sub forma unor nano-vezicule nconjurate de o membran sau un
strat. Forma este de obicei sferic, dar poate fi i cilindric, plat (discoidal), sau alte
forme. Dimensiunea i distribuirea dimensiunii poate fi important, de exemplu atunci
cnd este necesar traversarea unei membrane celulare.
Un control strict al dimensiunilor medii ale particulelor i o distribuie limitat a
dimensiunilor a permis crearea unor sonde fluorescente care emit lunmin, ntr-o gam
larg de lungimi de und. Acest lucru permite crearea unor biomarkeri cu multe culori
bine definite (4).
Mijlocul nsui poate avea mai multe straturi i poate fi multifuncional, de exemplu
combinnd straturi magnetice i luminiscente, se pot detecta i manipula particulele.
Particula central este adesea protejat de mai multe monostraturi de materiale
inerte, de exemplu siliciu, sau molecule organice care sunt adsorbite sau chemisorbite
la suprafaa particulei. Peste se mai adaug un strat adiional de molecule de legare
pentru a fi funcional. Aceste molecule de legare sunt liniare i au grupri reactive la
ambele capete, unul pentru a se ataa de particul iar cellalt pentru ataarea
diverselor grupri biocompatibile (anticorpi, fluorofori n funcie de aplicaie) (6).
1.2.1. Materialele magnetice
Familia larg a materialelor controlabile prin cmp magnetic, includ att nano-, ct
i microparticule, structuri (nanotuburi, nanofire), pelicule subiri. Pot servi ca exemple:
ferofluidele (fluidele magnetice),
fluidele magnetoreologice,
polimerii magnetici,
11
Nov. 2013
materiale anorganice magnetice,

structurile biologice modificate magnetic,
particule magnetice cu biomolecule legate(5,7).
n multe cazuri materialele composite sensibile magnetic, constau din particule
magnetice mici (cel mai adesea formate din magnetit, maghemit sau diveri ferii), de
la scar nanometric la cea micrometric, dispersai n polimeri, biopolimeri sau matrice
anorganic; ca metod alternativ particulele magnetice pot fi adsorbite pe suprafaa
extern a unei particule diamagnetice (nu conine electroni desperecheai i deci nu
este atras de cmpul magnetic) (4, 5, 7).
n majoritatea cazurilor s-au dezvoltat nano-/ microparticule sintetice sensibile
magnetic, dar s-au produs cu succes i particule magnetice biologice (magnetozomi
produi de o bacterie magnetotactic) care au fost utilizai cu succes n bi oaplicaii
(4,5,10)
.
Sinteza nanoparticulelor magnetice
Multe procedeuri chimice s-au utilizat pentru a sintetiza nano-/microparticule
magnetice pentru bioaplicaii, de exemplu:

co-precipitarea clasic,
reaciile n medii constrnse (microemulsiike),
sintezele sol-gel,
reaciile sono-chimice,
microunde,
recii hidrotermale,
hidroliz i
termoliza precursorilor(4,5,8).
Cea mai simpl i eficient cale chimic de a obine particule magnetice este
tehnica coprecipitrii. Oxizii de fier, sub forma magnetitei (Fe3O4) sau maghemitei (Fe2O3), sunt preparai prin mbtrnirea mixturilor stoichiometrice de sruri feroase i
ferice n mediu apos alcalin. (stoichiometria = ramur a chimiei care studiaz raporturile
cantitative dintre elemente, n combinaii sau n reacii) (4)
Fe2+ + 2Fe3+ + 8OH- Fe3O4 + 4H2O
12
Nov. 2013
Magnetita (Fe3O4) nu este foarte stabil i este sensibil la oxidare ceea ce duce
la formarea maghemitei (-Fe2O3). Principalul avantaj al procesului de coprecipitare este
c se pot sintetiza o cantitate mare de nanoparticule; totui controlul distribuiei
dimensiunilor particulelor este limitat (4, 5).
Adugarea de anioni organici chelatani (carboxilai, ioni de -hidroxicarboxilai, acid
citric,
a.gluconic
sau
oleic)
sau
ageni
de
suprafa
complexani
(d extran,
carboxidextran, amidon, polivinilalcool), n timpul formrii magnetitei, poate ajuta

controlul dimensiunii nanoparticulelor (4).
Potrivit raportului molar dintre ionii organici i srurile de fier, chelaia acestor ioni
organici pe suprafaa ionilor de oxid de fier, poate previne nucleaia i duce la formarea
nanoparticulelor mai mari, sau inhib creterea nucleilor de cristal i duce la formarea
nanoparticulelor mici.
Metoda de coprecipitare clasic genereaz o distribuie larg a dimensiunilor.
Sinteza unor nanoparticule de oxid de fier cu dimensiuni uniforme se poate face n
nanoreactori sintetici i biologici, ca structuri micelare n solveni non -polari, cuti de
proteine de apoferitin, dendrimere, ciclodextrine i lipozomi
(4, 9, 10)
Sinteza hidrotermal a nanoparticulelor de magnetit este efectuat n medii

apoase n reactoare sau autoclave, unde presiunea poate fi mai mare de 2,000 psi (cca
13,8 Mpa), iar temperatura mai mare de 200C.
n acest proces, condiiile de reacie, cum ar fi solv entul, temperatura i timpul de
obicei au efect asupra produsului. Dimensiunea, particulelor din pudrele de magnetit, a
crescut odat cu prelungirea timpului de reacie i o cantitate mai mare de ap a
rezultat n urma reaciei de precipitare a particulelor mari de magnetit (4).
Procesul sol-gel este o cale umed adecvat pentru sinteza oxizilor metalici
nanostructurai. Acest proces se bazeaz pe hidroxilarea i condensarea precursorilor
moleculari n soluii rezultnd o so luie de particule nanometrice mai departe
condensarea i polimerizarea anorganic duce la o reea tridimensional de oxizi
metalici de gel umed.
Pentru c aceste reacii se efectueaz la temperatura camerei, sunt necesare
viitoare tratamente termice pentru a dobndi forma final cristalin.
13
Nov. 2013
Principalii parametrii care afecteaz cinetica, reacia de cretere, hidroliza, reaciile

de condensare i prin urmare, structura i proprietile gelului sunt: solventul,
temperatura, natura i concentraia srurilor precursoare folosite, pH-ul i agitaia (4,8).
Procesul poliol este o abordare chimic versatil pentru sinteza nanoparticulelor i
microparticulelor cu forme bine determinate i dimensiuni controlate.
Poliolii selectai (polietilen glicol) folosii ca solveni prezint constante diel ectrice
mari i pot dizolva compui anorganici. Datorit punctului de fierbere relativ nalt, ofer
o gam larg de temperaturi de operare pentru prepararea compuilor anorganici.
Poliolii pot servi ca ageni reductori i deasemenea ca stabilizatori pentru
controlul creterii particulelor i preveneriea agregrii interparticulare.
Nanoparticulele de magnetit neagregate (7 nm diametru) au fost sintetizate n
timpul reaciei trietilenglicolului cu Fe, la o temperatur ridicat
(4, 8)
Recent a fost dezvoltat o nou metod de sintez a nanoparticulelor de

magnetit sinteza prin injectare n flux (FIS = flux injection syntesis).
Tehnica const n amestecarea continu sau segmentar a reagenilor n regim de
flux laminar ntr-un reactor capilar. Prezint urmtoarele avantaje: reproductibilitate
mare si cauza curgerii n bloc i condiiilor laminare, omogenitate mare i oportunitate
pentru un control extern precis al procesului (4).
Nanoparticulele de magnetit obinute au dimensiuni cuprinse ntre 2-7 nm.
Pirolizele (pyrolisis) cu spray i laser sunt reprezentani tipici ai tehnologiei cu
aerosoli, sunt procese chimice continue care permit rata mare de producie a
nanopaarticulelor.
Prin piroliza cu spary, o soluie de sruri ferice i un agent reductor n solvent
organic este spray-at ntr-o serie de reactori, unde soluia de aerosoli condenseaz i
solventul se evapor. eziduul uscat rezultat este format din particule ale cror
dimensiuni depinde de mrimea iniial a picturilor originale
(4)
Particulele de magnetit cu dimensiuni ntre 5-60nm cu diferite forme au fost

obinute utiliznd diferii precursori de sruri de fier n soluii alcoolice.
S-au studiat o gam larg de reacii chimice accelerate prin iradieri cu microunde
a reactanilor. Recent s-a dezvoltat o metod cu microunde, simpl, rapid i eficient
14
Nov. 2013
pentru prepararea nanoparticulelor de magnetit relativ uniforme (805nm) direct din

sruri de Fe2+, formarea acestora necesit de la cteva secunde la cteva minute.
Deasemenea utiliznd aceast procedur se pot obine nanoparticule de
magnetit umplute cu nanoparticule de argint.
Pulberi de nanoparticule de magnetit se mai pot sintetiza pe cale mecanochimic. Mcinarea cu ajutorul morii cu bile a cloridului feros i feric cu hidroxid de
sodiu a dus la o mixtur de magnetit i clorur de sodiu.
Pentru a evita aglomerarea excesul de NaCl este adugat precursorului nainte de
moar. Pentru obinerea particulelor de diferite dimensiuni, pulberile mcinate au fost
renclzite la temperaturi de la 100 la 800 timp de o or (4, 5, 12).
Stabilizarea particulelor magnetice
Pentru a obine materiale sensibile magnetic biocompatibile de obicei este necesar
s se stabilizeze nanoparticulele de oxid de fier prin modificarea suprafeei lor sau prin
ncorporarea n matrici biocompatibile corespunztoare (4, 5).
Nanoparticulele magnetice modificate ar trebui sa fie stabile contra agregrii n
mediul biologic i n cmpul magentic.
Mai muli compui cu grupri funcionale de carboxil, fosfat i sulfa t sunt cunoscute
c se leag de particulele de magnetit i le stabilizeaz.
Acidul citric poate fi utilizat cu succes pentru stabilizarea fluidele magnetice pe
baz de ap prin coordonarea prin una sau dou grupri reziduuri de carboxil; acesta
las cel puin o grupare de acid carboxilic s fie expus solventului, care ar trebui s fie
responibil pentru a face suparafaa cu ncrcarea negativ i hidrofilic.alte ferifluide pot
stabilizate prin interaciuni ionice, utilznd de exemplu acid percloric sau hi droxid de
tetrametilamoniu.
n majoritatea cazurilor biopolimeri biocompatibili sunt utilizai pentru stabilizarea i
modificarea particulelor magnetice.
Materialele polimerice naturale sau sintetice utilizate
pentru stabilizarea
particulelor ar trebui s aibe proprietile: s fie biocompatibile, biodegradabile,

netoxice, netrombogenice, non-imunogenice i ieftine (4, 5).
15
Nov. 2013
Nanoparticulele ideale, compozite polimer biocompatibile sensibile mmagnetic

trebuie s aibe urmtoarele proprieti:
diametrul particulelor sub 100 nm,
stabilitate n snge,
s nu activeze neutrofilele,
s nu agregheze trombocitele,
s evite sistemul reticuloendotelial,
comportament neinflamator,
timp de circulaie prelungit,
posibila imobilizare a compuilor biologici corespunztori (anticorpi) i
producie ieftin.
Dextranul este un polimer de polizaharid compus exclusiv din uniti de Dglucopironil cu diverse lungimi de lan i ramificaii; a fost utilizat ca nveli de polimer
mai ales pentru biocompatibilitatea excelent (4,5).
Formarea magnetitei n prezena dextranului 40.000 a fost raportat pentru prima
dat n 1982.
Aceast procedur s-a utilizat pentru prepararea agentului de contrast pentru MRI
Ferumoxtran-10; acest material are un diametru hidrodinamic de dimensiuni mici,15-30
nm i prezint rezisten n snge, ceea ce permite acestor particule foarte mici s
acceseze macrofagele localizate adnc n esuturile patologice.
Ali biopolimeri care servesc ca nveli sunt formai din dextran carboximetilat,
carboxidextran, amidon, arabinogalactan sau glicozaminogalactan, iar ca polimeri
sintetici biocompatibili avem polietilen glicolul (PEG) i polivinil alcoolul (PVA).
Nanoparticulele magnetice adesea formeaz o parte magnetic dintr-un compozit
de microparticule sensibile magnetic format din diferii polimeri sintetici, biopolimeri,
materiale anorganice, celule microbiale sau materiale vegetale.
Microparticulele superparamagnetice monodisperse compuse dintr-o matrice de
polistiren cu nanoparticule de maghemit (cca. 8 nm diametru), cunoscute ca
Dynabeads (Invitrogen), au fost utilizate la un numr mare de bioaplicaii, mai ales n
biologia molecular, biologia celular, microbiologie i izolarea proteinelor (4,5).
16
Nov. 2013
Progrese recente
Particulele sensibile magnetic au deja multe aplicaii stabilite sau poteniale n
variate domenii din biotiine, biotehnologie i tehnologiile mediului nconjurtor
(4,5)
Aplicaiile referitoare la biomedicin sunt bazate n special pe utilizarea unor

proprieti selectate, cum ar fi separarea magnetic, intirea magnetic, producerea de
cldur, creterea contrastului MRI.
Proprietile magnetice a asemenea materiale au permis utilizarea lor n
numeroase domenii:
nano-/microparticulele pot fi separate din probele complexe utiliznd un cmp
magnetic extern (un separator magnetic, magnet permanent sau un
electromagnet). Aceast proprietate este important pentru c majoritatea
materialelor biologice au proprieti diamagnetice care permit separarea
selectiv eficient a materialelor magnetice.
particulele magnetice pot fi conduse i meninute la un loc anume utiliznd un
cmp magnetic extern.
supuse unui cmp magnetic alternativ cu frecven nalt, particulele
magentice, sunt capabile s genereze cldur. Acest fenomen este utilizat n
special n timpul hipertermiei pe baz de fluide magentice n tratamentul
cancerului (de exemplu).
nanoparticulele de oxid de fier magnetic genereaz un contrast T 2 negativ n
timpul RMN-ului, au rol de agent de contrast
pot fi utilizate pentru modificarea diamagnetic a materialelor biologice
(materiale derivate din celule sau plante), polimeri organici i materiale
organice, pentru etichetarea magnetic a compuilor biologici activi (anticorpi,
enzime, aptameri) (4,5).
Diagnoza medical i transportul adecvat i eficient al medicaiei sunt domeniile
medicale unde particulele nanometrice i -au gsit aplicaia practic.
Sunt
multe
alte
propuneri
interesante
pentru
utilizarea
nanomecanice n domeniul cercetrilor medicale i practic clinic
17
(3)
instrumentelor
Nov. 2013
Nanodispozitivele din tiinele medicale ar putea nlocui celule, care funcioneaz

defectiv sau necorespunztor, de exemplu respirocitele propuse de Freitas
(2)
Aceste eritrocite artificiale teoretic sunt capabile s furnizeze (asigure) oxigen mai
eficient dect un eritrocit natural.
Ar putea nlocui celulele roii defecte din circulaia sanguin. Aplicaiile
respirocitelor ar putea include nlocuitori de transfuzii de snge, tratamentul parial al
anemiei, probleme neonatale/prenatale i tulburri pul monare (3).
Nanodispozitivele ar putea administra medicamente direct n corpul pacientului.
Asemenea nanostructuri ar putea transporta medicamente n locuri bine determinate,
realiznd un tratament mai precis.
Mecanisme similare cu arme specifice ar putea fi utilizate pentru ndeprtarea
obstacolelor din sistemul circulator sau n identificarea i distrugerea celulelor tumorale.
Nanoroboii care funcioneaz n corp, ar putea monitoriza nivelul diferiilor
compui i nregistra informaia ntr-o memorie intern. Pot fi utilizai rapid n
examinarea unui anumit esut, prin controlarea caracteristicilor biochimice, biomecanice
i histometrice ale acestuia (2,3).
Biotehnologia i extinde sfera i eficacitatea privind opiunile tratamentelor
disponibile din nanomateriale. Nanotehnologia molecular va dezvolta eficacitatea,
confortul i viteza viitoarelor tratamente medicale i n acela timp le va scdea
semnificativ riscul, costul i invazivitatea
(3)
Biotehnologia permite fabricarea personalizat, biofarmaceutic i biotehnologic

a medicamentelor pentru a nvinge problemele asociate cum ar fi solubilitatea slab,
stabilitate chimic slab dup administre in vivo i in vitro (perioada de njumtire
scurt), biodisponibilitate slab i poteniale efecte secundare (3).
Nanoparticulele transportoare au fost dezvoltate ca o soluie pentru a depii
problemele de transport nanocristale de substane medicamentoase, nanoparticule
solide de lipide (SLN), transportoare lipidice nanostructurate (NLC), nanoparticule din
conjugate medicament-lipid (LDC) (3).
Transportorii (cruii) , dup cum a artat Muller i col. (cit.de Herbert Ernest i
Shetty Rahul), sunt adecvai pentru a rezolva problemele de livrare a medicamentelor
cu solubilitate diferit (3).
18
Nov. 2013
Quantum Dot (punctul cuantic) cu nanoparticule de o culoare specific, poate oferii

o verificare ieftin i uoar, a unei probe de snge, pentru prezena n acela timp a
diferte virusuri. n ceea ce privete cercetarea, capacitatea de a eticheta mai multe
biomolecule, att n exteriorul ct i n interiorul celulei, ar putea permite cercettorilor
s vad schimbri celulare complexe i evenimente asociate cu boala, furniznd indicii
valoroase pentru dezvoltarea viitoarelor produse farmaceutice i terapeutice
(3)
Prima nanosit artificial cu pori voltaice a fost fabricat de Charles R. Martin i

col. la Colorado State University n 1995 (2, 3).
Membrana lui Martin conine o matrice din nanotubi cilindrici de aur cu diametrul
de 1,6 nm. Cnd tubii sunt ncrcai pozitiv, sunt exclui ionii pozitivi i pot trece cei
negativi, iar cnd membrana primete voltaj negativ, pot trece doar cei pozitivi.
Pentru a obine un nanodispozitiv similar, dar cu specificitate molecular
semnificativ, ar putea combina porile volt aice cu dimensiunile i forma porilor pentru
a obine control asupra ionilor transportai
(2, 5)
Domeniul multidisciplinar al aplicaiilor nanotehnologice pentru descoperirea de noi

molecule i manipularea celor disponibile n mod natural, ar putea fi orbitoare n
potenialul su de a mbuntii ngrijirea sntii. Pe viitor, ne putem imagina o lume
n care nanodispozitivele medicale sunt implantate n mod curent sau chiar injecta n
circulaia sanguin pentru a monitoriza sntatea i a participa automat n repararea
sistemelor care au deviat de la funcionarea normal.
Avansarea continu n domeniul nanobiotehnologiei biomedicale este stabilirea i
colaborarea grupurilor de cercetare din domeniile complementare.
Asemenea colaborri trebuie meninute nu doar la nivelul domeniilor de
specialitatea ci i la nivel internaional. Ar trebui menionat faptul c nanotehnologia
insi nu este o disciplin unic n curs de dezvoltare ci mai degrab un punct de
ntlnire a tiinelor tradiionale cum ar fi chimia, fizica, biologia pentru a aduce
mpreun cunotine colective i expertiza necesar dezvoltrii acestei noi tehnologii.
n tabelul 2 se regsesc cteva domenii de aplicare ale nanotehnologiei
(3)
Abilitatea de a structura materiale i dispozitive la nivel molecular aduce beneficii

imediate i va revoluiona cercetarea i practica medical. S-au nceput experimente
teoretice i practice asupra biocompatibilitii nanomaterialelor i nanodispozitivelor
19
(2)
Nov. 2013
Tabelul 3 ofer o privire de ansamblu asupra acestui domeniu cu expansiune

rapid (2).
Tabelul 2
Aplicabilitatea nanotehnologiei (dup: Ernest H, Shetty R., 2005)
(3)
Nanomateriale brute
Simulare i diagnostic celular
Cercetare biologica
nveliul nanoparticulelor
Materiale nanocristaline
Chip-uri celulare
Simulatoare celulare
Nanobiologie
Nanotiia n tiinele vieii
Materiale nanostructurate
Manipulare ADN,
secvenializare, diagnostic
Transportul medicamentelor
Testri genetice
Micro-matrice ADN
Secveniere ADN ultra-rapid
Descoperirea de medicamente
Biofarmaceutice
ncapsularea de medicamente
Manipulare i control ADN
Medicamente inteligente
Instrumente i diagnosticare
Medicin molecular
Sisteme de detectare bacterian

Bio-chip-uri
Imagistic biomolecular
Biosenzori i biodetectare
Aplicaii de diagnostic i aprare
Roboi de endoscopie i
microscopie
Senzori bazai pe fulerene
Terapie genetic
Peptide ciclice
Dendrimere
Ageni detoxifiani
Fulerene
Transportori de medicamente
Nanoparticule pt. Scanare MRI
Nano-coduri de bare
Nano-emulsii
Nano-fibre
Nano-particule
Nanoshell
Nano-tubi de carbon
Nano-tubi noncarbon
Farmacogenomice
Enzime artificiale i controlul lor

Manipularea i controlul
enzimelor
Nanoterapeutice
Laborator pe un chip
Monitorizare
Nanoparticule antibacteriene i
antivirale
Farmaceutice bazate pe fulerene
Terapie fotodinamic
Anticorpi artificiali
Enzime artificiale
Nanosenzori
Radiofarmaceutice
Receptori artificiali
Micro-matricea proteinelor
Biologie sintetic i nanodispozitive primitive
Polimeri imprimai molecular
Scanare microscopic prin sondare
Controlul suprafeelor
Dispozitive intracelulare
puncte cuantice (quantum dots)
Locuri artificiale de fixare
Adezivi de suprafa artificiali

Suprafee biocompatibile
Suprimarea biofilmului
Suprafee prelucrate
Suprafee model
nveli filmat
Nanopori
Imunoizolare
Site i canale moleculare
Membrane nanofiltrante
Nanopori
Separare
Imagistic
Analize (teste) intracelulare

Biocomputere intracelulare
Senzori/reporteri intracelulari
Implante n celule
BioMEMS (microelectromechanical systems)

Materiale i instrumente
implantabile
BioMEMS, chip-uri, i electrozi
implantai
Protetic bazat pe MEMS
/nanomateriale
Ajutoare senzoriale (retin
artificial)
Micromatrice
Senzori bazai pe micro-structuri
Microfluide
Micro-ace
MEMS medical
Instrumente chirurgicale MEMS
20
Tecto-dendrimere
Nanoplatforme dinamice nanozomi
Celule i lipozomi artificiali
Micelii polimerice
Biotehnologie i biorobotic
Terapie viral biologic
Hibrizi bazai pe virui
Celule stem i clonarea
Organe artificiale
Nanobiotehnologia
Biorobotic i bioboi
Nanorobotic
Nanoroboi i dispozitive ADN
Nanoroboi bazai pe diamante
Dispozitive de reparare a celulei
Nov. 2013
Tabelul 3
Lista aplicabilitatea nanotehnologiei n tiinele biomedicale (dup Freitas Jr., 2004)
Nano-aplicaii
Biodetectarea patogenilor
Detectarea proteinelor
Cercetarea structurii ADN-ului
Distrugerea prin cldur a tumorilor (hipertermia)
Studii fagocinetice
Intensificarea contrastului MRI
Separarea i purificarea biomoleculelor i
celulelor
Markeri biologici fluoresceni
Transportul de medicamentente i gene
Celule artificiale
Construcia de proteine pentru transportul eficient
de electroni, sau cu proprieti mecanice
Biosenzori
Nanobiomotori
Biomineralizare
Nanorobotic
Nanocomputere
21
(2)
Nov. 2013
1.3. Aplicaii principale ale nanotehnologiei n biomedicin

1.3.1. Terapia n cancer
Dimensiunile mici ale nanoparticulelor i nzestreaz cu proprieti care pot fi foarte
folositoare n oncologie, mai ales n imagistic.
Punctele quantice (nanoparticule cu proprieti de confinare cuantic, ca de
exemplu emisia luminoas ajustabil dup dimensiune), utilizate n legtur cu MRI-ul,
pot produce imaginici exceptionale ale localizrii tumorale.
Aceste nanoparticule sunt mult mai luminoase dect coloranii organici i necesit
doar o surs luminoas pentru excitare. Acest lucru nseamn c particulele cuantice
fluorescente pot produce o imagine de contrast mai bun.
O alt proprietate a acestora este suprafaa mare raportat la volum, care permite
ataarea multor grupri funcionale la nanoparticule, care apoi caut i se conecteaz la
anumite celule tumorale.
Dimensiunea mic a nanoparticulelor (10 la 100nm) le permite acumularea
preferenial la localizarea tumoral (pentru c tumorile nu au un sistem limfatic efectiv)
(12)
.
Terapia anticanceros fotodinamic se bazeaz pe distrucia celulelor canceroase
cu ajutorul oxigenului atomic generat de laser, care este citotoxic.

Celula canceros preia o cantitate mai mare, fa de celulele sntoase, din
colorantul special care se folosete pentru obinerea oxigenului atomic, deci doar
celulele canceroase vor fi distruse (figura 4).
Din nefericire moleculele de colorant rmase migreaz n piele i ochi i produc
reacii de sensibilizare la expunerea solar, timp de aproape 6 sptmni.
Pentru evitarea acestui efect secundar, varianta hidrofobic a acestui colorant este
nchis ntr-o nanoparticul poroas.
Colorantul rmne n nanoparticul, nu se mprtie n tot organismul, dar nici nu
i pierde capacitatea de a produce oxigen atomic, care va fi eliberta prin pori de 1 nm
(6)
22
Nov. 2013
Figura 4. Utilizarea nanoparticulelor n terapia i diagnosticul imagistic al cancerului
(12)
Halas i West de la Rice University din Houston, au dezvoltat un sistem de

transportare a substanelor medicamentoase numit nanoshell nanosfere din metal
dielectric (siliciu acoperit cu aur).
Aceste nanosfere ncorporate n polimeri hidrogel care conin substane
medicamentoase anti-tumorale, sunt injectate n organism i se acumuleaz lng
celulele tumorale (figura 5).
Cnd sunt nclzite cu un laser infrarou, nanosferele (puin mai mari dect virusul
poliomielitei) absorb selectiv o frecven specific de infraroii, topesc polimerul i
elibereaz substana activ ntr-un loc specific (1,2).
Figura 5. Nanosfere de aur

(Sursa: http://english.cas.cn/Ne/CASE/201101/t20110121_64693.shtml
23
Nov. 2013
Dendrimerele sunt molecule sintetice de forma stelat cu diametrul de 5-20

nanometri, formate din structuri ramificate (figura 6).
Baker i Tomalia (cit. de Freitas R.A., 2004.,) sintetizeaz nanodispozitive
multicomponente numite tectodendirmere. Au n mijloc un dendrimer de care se
ataeaz alte tipuri de module dendrimerice, fiecare tip fiind proiectat pentru a ndeplinii
funcii necesare pentru a forma un nanodispozotiv terapeutic inteligent.
Un numr mare de combinaii se pot realiza pentru a fabrica (pr oduce)
nanodispozitivul dintr-o librrie de componente dendrimerice, care ndeplinesc
urmtoarele funcii: recunoaterea celulelor bolnave, diagnosticul bolilor, transportul de
substane medicamentoase, determinarea locaiei i determinarea rezultatului terapiei.
De exemplu, odat ce dendrimerele raportoare de apoptoz, intensificatoare de
contrast i eliberatoarele de chemoterapeutice sunt ataate la dendrimerul central,
exist posibilitatea de a produce cantiti mari din acest tectodendrimer.
Acest schelet poate fi modificat pentru a fi utilizat mpotriva unui tip anume de
cancer prin substituirea dendrimerelor pentru recunoatere tumoral, crend un
nanodispozitiv personalizat pentru a distruge doar un anumit tip de cancer, evitnd
celulele sntoase.
Figura 6. Exemple de dendrimere de la generaia 0 la 4

(Sursa: http://www.chemheritage.org/discover/online-resources/chemistry-in
history/themes/microelectronics-and-nanotechnology/tomalia.aspx)
La
nanodispozitive
sintetizate
utiliznd
generaia
de
dendrimere
din
poliamidoamid cu centrul din etilendiamin, cu acid folic, fluorescein i metotrexat

ataat covalent la suprafaa, acetia intesc celula tumoral, ajut n imagistic i au
capacitatea de a livra intracelular substana medicamentoas (livrarea intit a
mbuntit rspunsul citotoxic al celulelor la metotrexat de 100 de ori fa de cel liber).
24
Nov. 2013
Cteva tipuri de celule canceroase au fost asociate cu cel puin o protein unic
pe care dendrimerele de localizare ar putea s le foloseasc pentru identificarea
celulelor canceroase, i datorit progresiei genomice este foarte probabil s se
identifice proteine unice pentru fiecare tip de tumor.
Acelai tip de recunotere a proteineloar de suprafa ar putea fi utilizat mpotriva
celulelor infectate cu virusuri sau parazi i (1,2).
Hipertermia produs de fluide magnetice, bazat pe faptul c particulele magnetice
biocompatibile produc cldur prin diverse tipuri de pierdere energetic n timpul
aplicrii unui cmp magnetic AC.
Este o metod promitoare n terapia cancerului, datorit faptului c esuturile se
nclzesc la 42-46, ceea ce reduce, n general, viabilitatea celulelor canceroase i le
crete sensibilitatea la chemoterapice i radiaii.
Spre deosebire de chemoterapie i radiaii, hipertermia are mai puine efecte
secundare.
Pentru tratamentul prin hipertermie au fost utilizate diferite tipuri de nanoparticule
biocompatibile magnetice, cum ar fluidele magnetice stabilizate cu dextran, alte tipuri de
fluide
magnetice
biocompatibile,
nanoparticule
modificate
cu
aminosilan,
magnetolipozomi cationici sau magnetolipozomi cu afinitate (4).

Ageni de contrast
Particulele superparamagnetice sunt utilizate ca ageni de contrast n rezonana
magnetic (MRI) (figura 7).
Agenii de contrast particulai includ particule:
foarte mici (UPSIO = ultrasmall super-paramagnetic iron oxides) cu diametrul

ntre 10 i 40nm;
particule mici (SPSIO = small super-paramagnetic iron oxides) diametrul ntre

60-150 nm;
particule mari (sau orale) cu diametrul ntre 300nm-3,5m.
Agenii de contrast pe baz de oxizi de fier care se gsesc n comer sunt

stabilizai de obicei cu dextran, carboximetil dextran, carboxidextran sau copolimer de
steren divinil benzen (5).
25
Nov. 2013
de contrast
contrast, nanoparticule (stnga) i tehnici
Figura 7. Creierul la oarece utiliznd ca agenii de
convenionale (dreapta)
(Sursa: http://www.futurity.org/health-medicine/nano-painting-lights-up-brain-tumors/)
Noile abordri din imagistic utilizeaz reporteri bioluminisceni i fluoresceni

codai genetic (etichete de identificare ilumanate sau luminiscente) oferind o
perspectiv revelatoare asupra organismului viu, cum nu s-a mai observat nainte.
Informaiile oferite de aceti reporteri pot fi utilizate pentru a spori cunotinele n
biologie i dezvoltarea abordrilor terapeutice pentru boli care includ cancerul, infecia,
bolile neurovegetative i cardiovasculare.
Exemple de sisteme:
SPECT/CT sistem hibrid, captureaz / capteaz att informaiile funcionale n
procesele celulare i moleculare (cretere i activitate) ct i detaliile anatomice
(dimensiune i form) a unei structuri moleculare dorite, mai rapid, eficient i mai clar
dect dispozitivele imagistice standard. Imaginile obinute prin aceste sisteme pot ajuta
la identificarea rapid a tumorilor, studierea unui tratament adecvat, livrarea unei terapii
intite pentru a distruge celulele dorite i urmrire pentru evaluarea eficacitii
tratamentului.
ageni de contrast pentru ultrasunete au fost fabricai din microbule care
mprtie lumina i permit clinicianului s vad care parte a muchiului cardiac
funcio neaz slab.
26
Nov. 2013
NeutroSpec este un agent de radiodiagnosticare care eticheteaz celulele albe

din snge i precursorii mieloizi fr necesitatea ndeprtrii i re -injectrii
sngelui n pacieni.
Noul produs este, de exemplu, pentru pacienii cu semne neclare de apendicit
care au vrsta de peste 5 ani.
Faciliteaz deasemenea vizualizarea imaginilor generate prin camera gamma,
permind medicilor s determine uor i rapid sediul infeciei
(3)
Caracteristicile nanoparticulelor din fluidele magnetice (opacitate i absorbia

razelor X) permit utilizarea lor n examenele radiologice. Puterea de contrast a
nanoparticulelor, n cazul razelor X, este mai mare comparativ cu alte substane, ceea
ce rezultcreterea puterii de contrast cu pn la 50%
(9,10)
1.3.2. Aplicaii asupra ADN-ului

Secvenierea ADN ultrarapid
Branton i col. de la Harvard University, folosesc un cmp electric pentru a
conduce o varietate de polimeri ADN i ARN prin nanoporul central al unei -hemolizine
care avea ca suport un strat bilipidic asemntor cu membrana celular.
Branton a artat c nanoporul poate s fac diferena ntre segmentele de
pirimidin i purin dealungul unei molecule de ARN, iar n 2000 a demonstrat
discriminarea dintre diverse lanuri de ADN cu aceai lungime dar cu o compoziie
diferit. Cercetrile curente sunt direcionate spre fabricarea unor pori cu dimensiuni i
geometrie specific de o mare precizie, care ar putea recunoate fragmentul de ADN
dublu catenar, dar i pe cel monocatenar, care trece prin pori; i investi garea
beneficiilor adugrii unor conductori electrici la nanopori pentru a mbuntii
rezultatele. Aceti nanopori ar putea permite citirea a 1000 de baze/secund/ por (2,10).
Biomolecule radio-controlate
Jacobson a ataat antene minuscule pentru radiofrecven pe nanocristle de aur,
cu mrimea de 1,4 nm i sub 100 de atomi, care apoi au fost ataate ADN -ului.
Cnd se emite o radiofrecven de aproximativ 1 GHz ctre antene, curenii
turbionari alternativi indui n nanocristale produc nclzire induct iv foarte bine
localizat, n 2 secunde producnd separarea ADN-ului dublu catenar n dou catene
27
Nov. 2013
separate ntr-un prosec de dehibridizare reversibil, care las moleculele vecine

neatinse. Aplicarea pe termen lung ar prevede ataarea antenelor pe sisteme vii i
controlul expresivitii genelor printr-o comutare electric de la distan.
Nanocristalele de aur pot fi ataate deasemenea la proteine, deschiznd astfel
posibilitatea controlrii electronice a unor procese biologice mai complexe cum ar fi
plierea proteinelor i activitatea enzimatic
(2)
Tehnologia nano-ADN
Descoperirea PCR-ului (polymerase chain reaction) reacie polimerazic n lan a deschis drumul spre o nou er de cercetri biologice.
Impactul se simte nu doar n aria biologiei moleculare, dar i n alte domenii
tiinifice asociate. Au fost dezvoltate noi clase de conjugate semisintetice ADN protein, reele oligomerice formate din streptavidin i ADN dublu catenar, care se pot
transforma n nanocercuri supramoleculare bine definite.
Conjugatele ADN-streptavidin pot fi utilizate ca blocuri modulare de construcie
pentru producia unor noi reageni imunologici pentru analiza ultrasensibil a urmelor de
proteine i a altor antigeni, prin mijloacele metodologiei imuno-PCR.
Imuno-PCR-ul este o combinaie a specificitii unui test imuno bazat pe anticorpi
cu puterea exponenial de amplificare a PCR-ului, prin urmare rezult o cretere de
1000 de ori a gradului de sensibilitate comparativ cu metoda ELISA (enzyme linked
imunosorbent assay).
Conjugatele
ADN-streptavidin,
auto-asamblate,
au
fost
utilizate
nanotehnologie, conjugatele sunt utilizate ca sisteme model pentru reelele de

nanoparticule cu comutare ion dependent; ca blocuri de construcie programate,
pentru construcia raional a biomoleculelor cu arhitectur complex, care pot fi
utilizate ca abloane pentru dezvoltarea nanometric a dispozitivelor anorganice.
Conjugatele covalente de ADN monocatenar i streptavidin sunt utilizate ca
adaptori biomoleculari pentru imobilizarea macromoleculelor biotinilate la substrat solid
prin
hibiridizarea
acidului
nucleic.
Aceast
imobilizare,
ADN-dirijat,
permite
funcionarea selectiv i reversibil a substratelor solide cu metalele i nanoparticulele

semiconductoare, ori viceversa; permite funcionalizarea ADN -dirijat a nanoparticulelor
de aur cu proteinele, cum ar fi imunoglobulinele i enzimele. Fabricarea nano28
Nov. 2013
structurilor biometalice funcionale din nanoparticule de aur i anticorpi sunt utilizate ca

instrumente de diagnostic n bioanalitic (3).
Nanobiotehnologia n analiza cu randament crescut a polimorfismului
nucleotidelor unice.
Urmrind publicaii ale variaiilor hrii secvenelor genomice, care conine peste 2
milioane de polimorfisme nucleice unice (SNPs), urmtoarea provocarea ar fi
dezvolatarea unei noi tehnologii care s utilizeze aceast informaie ntr -o manier cost
efectiv.
Metodele de genotipare trebuiesc mbuntite pentru a crete randamentul
(productivitatea), pentru a permite cercetrilor farmaceutice, biotehnologice i
academice s descopere legturile dintre unele variante genomice i boal, cu potenial
consecvent pentru dezvoltarea de noi diagnostice i terapii.
Noile abordri ale extraciei i amplificrii ADN-ului au scurtat mult timpul necesar
acestor procedee la cateva secunde.
Dispozitive microfluidice permit detectarea polimorfismului prin separarea rapid a
fragmentelor utiliznd electroforeza capilar i cromatografie lichid, mpreun cu
amestecarea i transportul reagenilor i biomoleculelor n sisteme integrate.
Obiectivele de baz n dezvoltarea sistemului de extracie i purificare care vor fi
compatibile cu genotiparea SNP cu randament crescut:
Eliberarea ADN-ului din celule n soluie fr accidentarea enzimatic sau
mecanic a acestuia
ndeprtarea
debriurilor
celulare
(proteiene)
care
ar
putea
mpiedica
amplificarea sau hibridizarea ADN-ului

Prepararea de probe de ADN economice i cu radandament ridicat cu
protocoale simplificate, care reduc numrul procedeurilor implicate
Evitarea chimicalelor periculoase pe ct posibil pentru a minimiza costurile cu
manipularea i neutralizarea lor
Consecven att n calitatea ct i n cantitatea randamentului ADN -ului dintre
probe astfel nct cuantificarea s nu fie necesar iar amolificarea i/sau
hibiridizarea ulterioar s fie de un grad nalt de reproductibilitate.
29
Nov. 2013
Pentru a putea stabilii asociaii semnificative ntre gene i boli ar trebui determinat
un genotip de ordinul 107 pe zi (3).
1.3.3. Separarea magnetic
Separarea magnetic este o metod foarte simpl, rapid, eficient i delicat
pentru izolarea rapid a moleculelor dorite, organitelor celulare i celulelor din
amestecuri biologice complexe i probe crude brute cum ar fi sngele, mduva osoas,
omogenatele tisulare, urina, fecale sau alte materiale biologice (figura 8).
Separarea magnetic n eprubete este tehnologia de preferin cnd e nevoie de o
producie ridicat de compui puri i biologic activi i structuri biologice la scar mic
Separarea magnetic a fost folosit n principal pentru separarea imunomagnetic
(IMS) a celulelor eucariote (ex.celule canceroase, celule stem, sau limfocite T).
Progresul acestei proceduri a fost activat de ctre dezvoltarea anticorpilor
monoclonali i caracterizarea mbuntit a anigenilor specifici celular.
Este posibil separarea multor tipuri de celule specifice din populaii celulare mixte
din snge, mduv osoas i alte surse fr pierderi celulare sau deteriorri.
Sunt disponibile mai multe dispozitive comerciale care permit separarea celulelor
dorite dintr-un volum mare de snge sau suspensii celulare.
Sistemul CliniMACS
(Miltenyi Biotec, Germania)
este bazat pe MACSTechnology care
utilizeaz MACSMicroBeads (particule superparamagnetice de nanodimensiuni,

aproximativ 50 nm diametru, compui dintr-o matrice de fier dextran cupalt cu
anticorpi specifici) o unitate de separare magentic.
CliniMacs permite separarea automat a celulelor la scar clinic ntr-un mediu
nchis i steril.
Componentele cheie ale CliniMacs Plus Instrument sunt microcomputerul integrat,
unitatea de separare magnetic, pompa peristaltic i diferitele supape.
Sistemul Isolex 300 este un separator magentic de celule CD34 pozitive, ex
vivo, din snge periferal mobilizat, utiliznd anticorpi monoclonali anti CD 34 i
microsfere superparamagnetice. Dispozitivul const dintr-un instrument pentru
separarea Dynabeads din suspensia de celule mononucleare din sngele
periferic mobilizat.
30
Nov. 2013
Figura 8. Separare magnetic(http://www.nordicdiagnostica.com/magnetic-beads/2284 )
Separarea imunomagnetic (IMS), a bacterilor patogene importante (Salmonella,

Legionella i E.coli ve rotoxigen) i a unor parazii tip protozoare ( Cryptosporidium,
Giardia), a fost utilizat cu succes n microbiologia alimentar, medical i chiar i a
apei. Ca etichet se folosesc att particulele magnetice nanomtetrice ct i cele
micrometrice cau anticorpi specifici imobilizai.
IMS permite scurtarea timpului de detecie, un caracter important din punct de
vedere medical. Ca o alternativ la IMS s-au utilizat pentru scopuri similare particule
magnetice cu lectine imobilizate.
Particule magnetice cu anexin A5 (V) imobilizat au fost utilizate pentru
separarea simpl i eficient a celulelor apoptotice din culturi celulare normale.
Aceast procedur este bazat pe faptul c anexina V este o protein Ca 2+
dependent care leag fosfolipidele, cu afinitate mare pentru fosfatidilserin (PS), care
este redistribuit din interiorul membranei palsmatice spre exterior n cazul celulelor
apoptotice sau moarte.
31
Nov. 2013
Odat ce se gsete pe suprafaa celular, PS este accesibil pentru legarea la

anexina V i cu oricare dintre conjugaii ei
(1,4,10)
Magnetofecia
Localizarea magnetic a acizilor nucleici legai la particule magnetice n celulele
receptoare este baza magnetofeciei care este o metod simpl i foarte eficient de
transfecie (figura 9).
Nanoparticulele magnetice de oxid de fier sunt de obicei nvelite cu molecule
cationice specifice care se pot asocia cu vectori de gen (ADN, ARN antisens, ODNoligo-deoxinucleotida, virusuri). Apoi celulele magnetice sunt concentrate pe celulele
target prin influena unui cmp magnetic extern generat de magnei.
Asimilarea celular a materialului genetic este realizat prin endocitoz i
pinocitoz, dou procese biologice naturale. Prin urmare arhitectura i structura
membranar rmn intacte, fa de alte metode de tranfecie fizice, care deterioreaz
membrana celular.
Acizii nucleici sunt eliberai n citoplasm prin diferite mecanisme n funcie de
formularea folosit. Cuplarea nanoparticulelor magnetice cu vectorii de gene de orice fel
rezult ntr-o cretere dramatic a asmilrii acestor vectori i prin urmare rezult o nalt
eficien de tranfecie. Celulele transfectate pot fi separate de cele netransfectate
utiliznd tehnici de separare magnetic adecvate (4).
Figura 9. Magnetofecia
Nanoparticulele cu ADN i ARN antisens sunt incubate mpreun cu celulele, un cmp magnetic este aezat sub
suprafaa plcii n care se afl culturile celulare ceea ce apropie nanopartic ulele de celule (i) i le atrage dintr -o parte
n alta a celulei (ii) favoriznd mecanic endocitoza (iii). Odat ce complexul particul/ADN a fost endocitat se produce
ruperea endozomului (iv) i eliberarea ADN-ului (v), care apoi transcrie proteina inti
intit
t (vi)
Sursa: http://www.nano-reviews.net/index.php/nano/rt/printerFriendly/5167/5775
32
Nov. 2013
1.4. Manipularea celulelor i biomoleculelor

Nanoparticulele magnetizate i-au gsit multe aplicaii, incluznd separarea i
cercetarea celular. Majoritatea particulelor magnetice sunt sferoidale, ceea ce a limitat
n oarecare msur posibilitile de a le face multifuncionale.
Ar putea fi fabricate nanoparticule cilindrice prin electro-depoziia metalelor ntr -un
model nanoporos de oxid de aluminiu (III).
n funcie de model, raza cilindrului ar putea fi de la 5 -500 nm cu lungimea pn la
60 m, diferii liganizi pot fi ataai la diferite segmente; exemplu porfirine ataate cu
linkeri de tiol sau carboxil au fost ataai simultan de segmente de aur, respectiv nichel.
Este posibil crearea de nanofire cu pri fluorescente izolate spaial.
S-a artat c exist posibilitatea ca un nanofir s se autoasambleze ntr-o
suspensie, prin control magnetic extern, acest lucru ar putea permite o asamblare
celular controlat, de diferite forme (6).
1.4.1. Terapia prin nlocuire cromozomial
Nanoroboii ar putea intervenii la nivel celular, efectund citochirurgie in vivo.
Cea mai probabil localizare a unei funcii patologice ntr-o celul este nucelul, mai
specific cromozomul. ntr-o pricedur citochirurgical, nlocuirea cromozomial, un
nanorobot, controlot din exterior, ar putea extrage cromozomii, specifici unei anumite
boli, i s ii nlocuiasc cu ali cromozomi produi dup tiparul original al individului,
specifici celulei operate, dar fr gena defect. Astfel genele defecte motenite pot fi
nlocuite, astfel putndu-se trata bolile genetice (2).
1.4.2. Detectarea de proteine
Proteinele sunt importante n limbajul, structura i funcionarea celular, i
nelegerea modului de funcionare a acestora este extrem de important pentru
progresele viitoare.
Nanoparticulele de aur sunt larg utilizate n imunohistochimie, pentru identificarea
interaciunilor protein-protein. Totui capacitile acestei tehnici sunt limitate.
33
Nov. 2013
Spectroscopia difuz Raman este o tehnic bine pus la punct pentru detectarea
i identificarea moleculelor individuale de colorant.
Prin combinarea celor dou metode pe o singur nanoparticul se pot mbuntii
drastic capacitile de multiplexare n examinarea proteinelor.
Prof. Mirkin a proiectat o sond multifuncional care este construit n jurul unei
nanoparticule de 13 nm. Nanoparticula este nvelit n oligonucleotide hidrofilice care
conin colorant Raman la un capt i sunt terminate cu un element de recunoatere
(biotina). Aceast molecul este catalitic activ i va fi nvelit n soluie de argint i
hidrochinon.
Soluia de argint i hidrochinon reacioneaz cu substratul, i se produce legarea
sondei la molecule i o placare cu argint aproape de colorantul Raman, care permite
detectarea la un microscop Raman standard.
n afar de faptul c aceast sond este capabil s recunoasc molecule mici, ea
poate fi modificat s conin anticorpi la suprafaa pentru recunoaterea proteinelor.
Sonda nu prezint reactivitate ncruciat n determinarea proteinelor i a
moleculelor de dimensiuni mici (6).
1.5. Nanofiltre cu barier (eng. gated nanosieves)
Debitul substanelor prin nanopori poate fi controlat i extern. Prima sit nano cu
pori voltaj dependente a fost fabricat de Nishizawa i col. n anul 1995 la Colorado
State University, avea o matrice de nanotubi din aur cu diametrul intern de 1,6 nm.
Cnd nanotubii sunt ncrcai pozitiv, se permite doar transportul ionilor negativi,
cei pozitivi fiind exclui; cu un voltaj negativ vor fi transportai doar ionii pozitivi.
Nanodispozitive similare combin acum porile voltaj dependente cu dimensiunea
porilor, forma i tipul de ncrcare pentru a obine un control precis al ionilor transportai
cu semnificatic specificitate molecular (figura 10).
Eforturile recente ale lui Martin i Kohli au fost direcionate spre imobiliz area unor
molecule biochimice, ageni de recunoatere, cum ar fi enzime, anticorpi, alte proteine
i ADN, nuntrul nanotubilor pentru fabricarea unor nanosenzori biologic activi, pentru
separarea substanelor active sau pentru biocataliza selectiv (2).
34
Nov. 2013
Figura 10. Nanofiltru (http://www.nanowerk.com/spotlight/spotid=26485.php)
1.5.1. Imunoizolarea unor celule fa de organism

Unul din cele mai simple nanomateriale este reprezentat de o suprafa cu guri,
nanopori. n 1997 Desai i col. au creat ceea ce s-ar putea considera unul din primele
dispozitive terapeutice nanomedicale, utiliznd microprelucrarea n vrac, pentru a
fabrica camere minuscule n interiorul unor casete din silicon cristalin, n care se pot
aeza celule. Camerele interfereaz (comunic) cu mediul biologic nconjurtor printr-o
membran filtrant din silicon policristalin, cu nanopori simetrici de aproximativ 20nm.
Figura11. Diagrama unor membrane biodegradabile nanoporoase;

a-dispozitiv integrat; b- microcapsule; c- capsule PCL cu porti nanoporoase
(Sursa: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0142961208005115)
35
Nov. 2013
Aceti pori sunt destul de mari pentru a permite trecere moleculelor mici ca
oxigenul, glucoza i insulina, dar sunt destul de mici pentru a mpiedica pasarea
moleculelor mai mari din sistemul imun ca imunoglobulinele i particule virale.
n spatele acestei barieri artificiale, celulele pancreatice, de obolan, ncapsulate i
imunoizolate primesc nutrieni i rmn sntoase timp de mai multe sptmni,
secret insulin prin pori, n timp ce rmn ascunse fa de sistemul imun, care n mod
normal le-ar ataca i ar respinge celulele strine.
Microcapsule cu celule insulare pancreatice de porc ar putea fi implantate
subcutan la pacienii bolnavi de diabet, restaurnd temporal feedback-ul glucozei n
oraganism, n timp ce se evit folosirea unor imunosupresante puternice, care ar putea
duce la riscuri crescute de infecii. Furnizarea unor celule encapsulate organismului ar
putea fi de valoare n tratarea altor boli cu insuficien hormonal sau enzimal.
Pe viitor se i-a n considerare folosirea unor neuroni ncapsulai care ar putea fi
implantai n creier i apoi stimulai electric pentru eliberare de neurotransmitori, i
folosirea acestora n tratamentul bolii Alzheimer sau Parkinson.
Desai a activat n studierea imunoizolrii, transportului de medicamente i senzori
pe baz de celule (2).
1.6. Nano-farmaceutice bazate pe fulerene
Derivate solubile ale fulerenelor cum ar C60 (un aranjament din 60 atomi de carbon
pe molecul de forma unei mingi de fotbal) prezint mari promisiuni ca ageni
farmaceutici.
Figura 12. Fuleren C60(H20)80 (http://www.lsbu.ac.uk/water/buckmin.html)
36
Nov. 2013
Aceti compui, care sunt deja tema unor studii clinice, au o biocompatibilitate
bun i toxicitate relativ sczut chiar i la doze relativ mari.
Fulerenele pot fi utilizate ca i compui antivirali (mai ales mpotriva HIV), ageni
antibacterieni (E. coli, Streptococcus spp., Mycobacterium tuberculosis), ageni
terapeutici fotodinamici antitumorali i anticancer, ca ageni antioxidani i antiapoptotici
n terapia sclerozei laterale amiotrofice i bolii Parkinson
(1, 2)
1.7. Aciunea asupra trombilor vasculari

1.7.1. Sonolysis microbule cu gaz pentru aplicaii terapeutice.
Pentru dizolavarea trombilor vasculari, microbulele sunt administrate intravenos
sau injectate local ntr-o structur vascular specific, cum ar fi o gref vascular.
Ultrasunetul va fi aplicat extern (sau printr-un cateter intern) deasupra zonei cu
coagulului pentru a asigura aciune intit localizat.
Microbulele perfuzeaz coagulul, i acioneaz ca dispozitive micromecanice;prin
ultrasunete se sparg bulele din cmpul de aciune, ceea ce duce la dezintegrarea
coagulului.
Nanochirurgia sonolysis (sonolizare) reprezint o terapie nanoinvaziv localizat
pentru tratamentul trombozei vasculare (figura 13).
Comparat cu terapiile alternative pentru tromboz, sonoliza are meritul de a fi mai
puin invaziv dect trombectomia mecanic i
mai rapid dect terapia
medicamentoas convenional, cu mai puin risc de sngerare (3).
Figura 13. Tehnica Sonolysis

(http://rehabilitacionymedicinafisica.files.wordpress.com/2009/02/sonolysis2.jpg)
37
Nov. 2013
1.8. Ingineria esuturilor

Suprafaa osoas nu este neted, ea prezint denivelri (rugoz iti) care pot
ajunge pn la 100 nm dimensiune. Dac suprafaa implantului osos artificial ar fi
neted, organismul l-ar respinge, ar exista posibilitea ca implantul s fie acoperit de un
strat de esut fibros, lucru care reduce contactul dintre implant i os, care duce la
slbirea implantului i produce inflamaie. A fost demonstrat c prin crearea unor
rugoziti de dimensiuni nanometrice, pe protezele de old, genunchi, se poate reduce
rata respingerii i se stimuleaz producia de osteoblaste.
Osteoblastele sunt celule responsabile de creterea matrixei osoase. Efectul a fost
demonstrat cu materiale polimerice, ceramice dar mai recent i pe metal.
Mai mult de 90% dintr-o suspensie de celule osoase au aderat la nanostructurile
de pe suprafaa metalic. n final aceste constatri vor ajunge la proiectarea unor
proteze mai durabile (rezistente), i reduc ansele ca implantul s slbeasc.
S-a artat c utiliznd abordarea biomimetic, creterea nceat a unui film
nanostructurat de apatit din lichidele corporale stimulate, a rezultat formarea unui strat
nanoporos puternic aderent.
Startul a fost construit din 60 nm de cristale, i posed o structur nanoporoas
stabil i bioactivitate (6,10).
1.8.1. Aplicaiile nanotehnologiei n ingineria esuturilor
Prin ingineria esuturilor se refer la dezvoltare de noi esuturi in vitro, care mai
apoi vor fi plasai chirurgical n corp, sau stimularea refacerii in situ utiliznd implante
bioartificiale din celule vii, introduse aproape de locul afectat (3).
Un aspect crucial n transplantul celular este urmrirea i monitorizarea grefelor
celulare n beneficiarul transplatului.
Pentru a verifica celulele in vivo au fost utilizate nanoparticule superparamagnetice
de oxid de fier pentru etichetare celular, permind vizualizarea ulterioar in vivo pe
MRI. MRI-ul este o metod neinvaziv care se poate utiliza nu doar pentru a se
confirma c celulele s-au grefat, dar poate monitoriza i timpul scurs n migraia celular
i supravieuirea acestora n esutul dorit.
38
Nov. 2013
Aceste informaii ajut la optimizarea procesului de transplant n ceea ce privete

numrul de celule necesare, metoda, sau locul administrrii celulelor i fereastra
terapeutic eficient n ceea ce privete timpul scurs din momentul lezionrii i
eficacitatea transplantului (4).
Se folosete materie (material) de la acelai individ, pacient (autolog), sau de la
ali indivizi (alogenic), sau chiar de la alte specii de mamifere (xenogenic).
S-a luat n vedere, prin implicarea microelectronicii sau nanotehnologiei, crearea
de esuturi sau organe bioartificiale care pot lua locul unui organ care este bolnav
terminal (ochi, ureche, inim sau articulaie).
Dispozitivele
prostetice
implantabile
nanoschelele
pentru
dezvoltarea
(creterea) noilor organe sunt noile scopuri (inte) ale cercettorilot n nanotehnologie.
Un avans rezonabil s-a fcut n nanoingineriea hidroxiapatitei pentru nlocuirea
osoas. Pe viitor, ne putem imagina o lume unde nanodispozitevele sunt implantate n
mod curent sau chiar injectate n circulaia sanguin pentru a monitoriza starea de
sntate i a participa automat la repararea sistemelor care au deviat de la normal.
Aceti nanoroboi ar putea fi personalizai prin adaptarea lor la genotipul u
fenotipul pacientului pentru a optimiza intervenia n stadiile iniiale ale bolii exprimate
9)
(3,
.
1.8.2. Creterea de noi organe
Construirea de celule la scar nanometric poate fi realizabil prin replicarea lor
programat. Semnalele sunt transmise, nainte i napoi cu instruciile, pentru

dimensiunea i forma dorit, la locul construcie.
Cnd instruciunile complete sunt terminate, organele pot fi crescute conform
condiiilor specificate. Pentru a fi compatibile cu statutul imunologic al individului aceste
organe ar putea avea codat ADN-ul necesar.
Acest lucru ar putea spori (uura) integrarea structurilor artificiale cu esuturile vii,
mprumutnd interfaa adecvat sistemelor biologice, avnd avantajul absenei reaciei
imune, fa de organele donor care se utilizeaz.
n anii urmtori asta ar putea reprezenta un salt major n managementul
tulburrilor prin insuficien de organ
(3)
.
39
Nov. 2013
1.9. Determinrile biologice

1.9.1. Coduri optice multicolore pentru determinri biologice
Creterea numrului de cercetri n genomic i proteomic genereaz un numr
crescut de secvene de date i necesit dezvoltarea unei inalte tehnologii de screening.
Multe tehnologii de determinare ajung la saturaie cnd numrul elementelor
ajunge la cteva milioane.
O abordare tridimensional, bazat pe coduri de bare optice din particule de
polimeri n soluie; este limitat doar prin numrul redus de tag-uri (etichete) unice pe
care le poate produce i detecta.
Figura 14. Celule cancer mamar cu membrana celular roie datorit reaciei punctelor cuantice, i
nuclei colorai n albastru (http://www.nist.gov/mml/bmd/her2-021908.cfm)
Punctele cuantice (quantum dots) singulare au fost utilizate cu succes ca un

nlocuitor al coloranilor organici n diverse aplicaii de bio -tagging.
Aceast idee a fost dus mai departe prin combinarea a diferite puncte cuantice
de diverse mrimi, care au diferite culori fluorescente, combinndu-le n microsfere
polimerice. Selecia nanoparticulelor utilizate n acest experiment are 6 culori diferite de
coda
10 intensiti, i este de ajuns pentru a cod
a 1 milion de combinaii (6).
40
Nov. 2013
1.9.2. Nanotehnologia n msurarea oxigenului dizolvat

Oxigenul este unul din metaboliii majori n sistemul aeorobic, iar msurarea
oxigenului dizolvat este de importan major n aplicaii din medicin, industrie i
mediu. Interesele recente n metode de msurare a concentraiei oxigenului dizolvat sau aintit mai ales asupra senzorilor optici, datorit avantajelor pe care le au fa de
electrozii ampermetrici convenionali
Nanosenzorii optici PEBBLE
(3)
(eng. probes encapsulated by biologically localized embedding)
sonde
ncapsulate prin ncorporare biologic localizat au fost proiectai pentru oxigenul

dizolvat utiliznd silicai modificai organic (ormosil) ca matrice pentru nanoparticule.
Nanoparticulele
feniltrimetoxisilam
ca
de
ormosil
precursor
sunt
formate
urmat
de
dintr-o
formarea
particul
stratului
central
cu
nveli
cu
de
metiltrimetoxisilam ca precursor.
Structura foarte permeabil i natura hidrofobic a nanoparticulelor de ormosil,
precum i diemnsiunea lor mic, rezult un rspuns de fluorescen la oxigenul dizolvat
i un rspuns liniar n toat seria de laconcentraia 0% pn la cea de 100 % oxigen (3).
1.9.3. Nanoparticule ca biomarkeri
Nanoparticulele pot fi utilizate att pentru detecia cantitativ ct i calitativ a
celulelor tumorale in vitro. Sporesc procesul de detectare prin concentrarea i
protejarea markerilor mpotriva degradrii, n scopul de a face analiza mai senzitiv.
De exemplu nanosferele de polistiren fluorescent nvelit n streptavidin,
Fluorospheres- fluorescena verde i TransFluorospheres - fluorescena roie,
au fost utilizate pentru detectarea receptorului factorului de cretere epidermal (EGFR)
pe celule A431 (celule de carcinom epidermoid uman) prin metoda citometriei de flux cu
o singur culoare. Rezultatele au artat c nanosferele fluorescente asigur o
sensibilitate de 25 ori ma mare dect conjugatele streptavidin-fluorescein.
n studierea biomarkerilor este dezvoltarea unora care detecteaz timpuriu, cu
succes i mai bine bolile curabile.
Agenii de contrast pot fi ncrcai n nanoparticule pentru diagnosticul tumorilor.
Caracteristicile fizico-chimice ale nanoparticulei (dimensiunea, polarizarea suprafeei,
41
Nov. 2013
nveliul suprafeei, stabilitatea) permit redirecionarea i conce ntrarea markerilor la

locul de interes. Particule coloidale etichetate pot fi utilizate ca ageni de
radiodiagnostic. Pe de alt parte, nite sisteme coloidale ne-etichetate sunt deja
utilizate sau testate ca ageni de contrast n metode de diagnostic CT i RMN.
Pe viitor, nanoparticulele cu afiniti specifice de legare ar putea fi resuspendate n
fluide corporale recoltate, sau poate chiar injectate direct n circulaia sanguin.
Nanoparticulele mpreun cu moleculele legate, ar putea fi capturate direct prin
filtre i studiate prin spectrometrie cu rezoluie nalt
(3, 9)
1.9.4. Detectorii de virus

Grupul lui Lieber a reuit detectarea electric direct, cu selectivitate ridicat, a
particulelor virale. Au utilizat tranzistori cu cmp pentru a msura modificrile minore de
conductan caracteristice legrii i desfacerii pe matricea de nanofire modificat cu
anticorpi virali. Matricile detecteaz virusuri att din fluide corporale ct i din alte fluide.
Grupul a testat matrici cu receptori specifici pentru Virusul Influenzei tip A,
paramixovirusuri i adenovirusuri, i au constatat c detectorii pot diferenia ntre
aceste 3 virusuri, datorit faptului c s-au utilizat receptori specifici pentru fiecare n
parte, i pentru c fiecare virus se leag pentru o anumit perioad de timp la receptor;
astfel ansele unui rezultat fals pozitiv sunt minime
(2)
1.10. Roboii biologici

Bioroboii bacterieni pot fi construii de exemplu din aprox 300 de gene bine
pstrate (aproximativ 150000 baze) ceea ce constituie genomul minim pentru un
microtub funcional. Utilizai n medicin, aceti microtubi, ar putea fi proiectai s
produc selectiv vitamine, hormoni, enzime i citochine n organismul deficitar, sau s
absoarb i s metabolizeze selectiv n produi finali, inofe nsivi, substane duntoare,
otrvuri, toxine sau detritusuri intracelulare nedigerabile.
Egea Biosences este proprietara unei tehnologii de scrierea a genelor i
programarea proteinelor (GeneWriter and Protein Programming) cu o baz de date de
peste 1 milion de proteine programate, produce peste 200 de gene sintetice i proteine,
i a reuit sinteza celei mai mari gene sintetizate chimic (peste 16000 de baze).
42
Nov. 2013
Cercettorii de la Institute of Biological Energy Alternatives, ndeprteaz

materialul genetic din microorganisme (Mycoplasma genitalium), sintetizeaz un lan de
material genetic asemntor cu cel natural i sper ca lanul artificial s conin un
numr minim de gene de M. Genitalium pentru a susine viaa.
Cromozomul artificial va fi introdus n celula golit care va fi apoi testat pentru
abilitatea de a supravieuii i a se reproduce. Pentru a asigura sigurana, celula va fi
incapabil s produc infecii, i va fi limitat i conceput n aa fel nct s moar dac
ajunge n mediu (2).
1.10.1. Nanoroboii medicali de mine
Pe termen mai lung, poate n 10-20 de ani, sistemul de maini moleculare i
nanoroboi ar putea fi folosit de medici n lupta contra bolilor, n sntate i mbtrnire.
Materialele de construcie organice (proteinele) sunt foarte bune la autoasamblare,
dar cele mai performante dispozitive moleculare pot fi construite din materiale
diamantoide, cea mai puternic substan, dar proiectul nanoroboilor din aceste
materiale rmne controversat (2, 3).
Respirocitele
Un exemplu al unui nanorobot este celula roie (eritroc itul) artificial mecanic sau
respirocitul, un dispozitiv sferic de 1 m dimensiune, cu sistem de pompare activ prin
glucoz seric endogen, capabil s transporte de 236 de ori mai mult O2 dect
eritrocitul natural. Nanorobotul este format din 18 miliarde de atomi aranjai cu precizie
i umplui cu pn la 3 miliarde molecule de O 2 i CO2.
Mai trziu gazele se elibereaz din dispozitiv prin pompe moleculare.
Respirocitele imit aciunea eritrocitului, senzorii de concentraie a gazelor aflate la
exteriorul fiecrui dispozitiv reacioneaz, astfel nanorobotul tie cnd trebuie s se
ncarce cu O2 i cnd s descarce CO2 n plmni (figura 15).
Un nano computer i numeroi senzori chimici i de presiune ajut dispozitivul s
funcioneze corespunztor i s poat fi ajustat din exterior. Injectarea a 5 ml, doz
terapeutic, de respirocite 50% n soluie salin, adic 5 trilioane de nanoroboi, n
circulaia sanguin, ar dubla capacitatea de transport a oxigenului (studii efectuate la un
volum de aproximativ 5,4 l snge).
43
Nov. 2013
Figura 15. Schema prototipului unui respirocit (http://www.azonano.com/article.aspx?ArticleID=3034)
Aplicaii ale respirocitelor: substitueni n transfuzii, tratament n anemie, disfuncii

pulmonare, perinatale i neonatale, terapie i diagnostic n cancer, prevenirea asfixiei,
respiraie artificial
(2, 3)
Microbivorii
O celule alb (leucocit) mecanic de dimensiuni microscopice, care are ca fucie
distrugerea patogenilor din circulaia sa nguin, utiliznd digestia i eliminarea.
Prototipul are form sferiodal turtit, cu axul mare cu diametrul de 3,4 m, i axul
mic cu diametrul de 2,0 m.
Microorganismul intit se va lega la suprafaa dispozitivului datorit locaurilor
speciale de legare specifice de specie, dup care nite crlige telescopice stabilesc
ancorarea acestuia i introducerea lui n interiorul dispozitivului. Iniial patogenul va fi
mrinit ntr -o camer de 2 m3, apoi va fi tranferat ntr-o alt ncpere cu dimensiuni
similare unde va fi supus digestiei enzimatice, cu ajutorul a 40 de enzime sintetice.
n urma digestiei enzimatice vor rezulta produi ca aminoacizi, mononucleotide,
glicerol, acizi grai liberi i zaharuri simple. Aceste molecule inofensive, sunt eliminate
n torentul sanguin, tot procesul avnd durata de 30 de secunde.
44
Nov. 2013
Aceti nanoroboi pot fi de 80 de ori mai activi ca ageni fagocitani dect

macrofagele, i ar avea o durat de via mult mai lung.
O doz de civa ml de microbivori ar elimina n totalitate o infecie septicemic n
cteva minute la cteva ore, dup care microbivorii ar fi eliminai complet, din corp (2).
1.11. Viitorul nano-biotehnologiei
Majoritatea companiilor se axeaz pe dezvoltarea de aplicaii farmaceutice, cum ar
fi transportul de substan e medicamentoase.
Mai multe companii exploateaz efectele dimensiunii cuantice a nanocristalelor
semiconductoare pentru etichetarea biomoleculelor, sau utilizarea nanoparticulelor de
aur bio-conjugate pentru etichetarea diferitelor componente celulare.
Alte companii aplic materiale nano-ceramice n ingineria esuturilor i ortopedie.
Argintul coloidal este larg utilizat ca formulare antimicrobial, reactivitatea mare a
oxidului de titan, poate fi utilizat ca atare sau dup ce a fost iluminat cu raze UV ca
bactericid (tabelul i figurile 16 i 17).
Tabelul 4
Exemple de nanomateriale comercializate pentru aplicaii bio-medicale (dup Salata O.V., 2004)
Transportul de substane
medicamentoase
Filtrare prin membran

Past de dini
Dezinfectante de suprafa
Biomarkeri luminesceni
Detectarea i separarea pe
tipuri de celule
Filtre AiroCide
Nanoparticule de aur pentru
bioanaliz
Biomarkeri din aur
Bariere solare
Bandaje Acticoat
(6)
Nanoparticule polimerice pentru transportul medicaiei antitumorale care

poate traversa bariera hemato encefalic
Reducerea dimensiunii particulelor la 50-100 nm
Nanoparticule micelare pentru ncapsularea substanelor medicamentoase,
proteinelor, ADN-ului
Materiale ceramice nanoporoase pentru filtrarea endotoxinelor, separarea
ADN-ului i a proteinelor.
Nanoparticulele de hidroxiapatit par s mbunteasc suprafaa dintelui
Nanoemulsii
Puncte cuantice semiconductoare cu grupri amino sau carboxil la suprafa,
emit ntre 350-2500 nm (lungime de und)
Miez magnetic nconjurat de un strat polimeric cu anticorpi pentru capturarea
celulelor.
Oxitul de titan distruge patogenii din aer.
Nanoparticule de aur bio-conjugate pentru TEM sau misroscopie
fluorescent.
Coduri de bare de ADN ataate la nanosinde pentru identificare, PCR-ul este
utilizat pentru amplificarea semnalului
Nanoparticule transparente pentru absorbia razelor UV, i transformarea n
cldur
Argintul n form de nanocristale foarte activ asupra patogenilor
Implante ortopedice i dentale, exploatarea propietilor materiale a
siliconului nanoporos
45
Nov. 2013
Figura16. Bandaje Acticoat (http://www.woundsource.com/product/acticoat-7)
Figura 17. Filtrul de aer Airocid

(Sursa: https://www.airocide.com/how-it-works)
n forma actual, majoritatea nanoparticulelor comerciale, cu aplicaii n

medicin, duc ctre transportul de substane medicamentoase.
n biotiin, nanoparticulele nlocuiesc coloranii o rganici n aplicaii care
necesit fotostabilitate ridicat i deasemenea capaciti mari de multiplexare.
Sunt evoluii n direcionarea i controlarea nanoparticulelor, cum ar fi
conducerea nanoparticulelor magnetice ctre tumori, apoi ori elibereaz substana
medicamentoas ori doar produce hipertermie localizat, distrugnd esuturile din jur.
Tendina major n dezvoltrile viitoare a nanomaterialelor
este s le fac
multifunconale i controlabile la semanle exterioare sau de mediul local, astfel

transformndule n nanodispozitive (6).
46
Nov. 2013
Bibliografie
1. Cristina Romeo T. Nouti n nanomedicin, http://www.veterinarypharmacon.com/docs/585NANOMEDICINA.pdf, 2009
2. Freitas Robert A. Jr. What is nanomedicine. 1(1) 2-9, 2004
3. Herbert Ernest., Rahul Shetty Impact of Nanotechnology on Biomedical Sciences: Review of
Current Concepts on Convergencs of Nanotechnology with Biology, 2005
4. Safaric Ivo, Hiska Katerina, Safarikova Mirka Magnetic Nanoparticles for Biomedicine, in:
Intracelular delivery: Fundamentals and Applications, Fundamental Biomedical Technologies,
Ed. Prokop.Springer Bv, 2011, 363-372
5. Safaric Ivo, Safarikova Mirka - Magnetic nanobiocomposites and their possible applications,
NanoCon 20. - 22. 10. 2009, Ronov pod Radhotm, esk Republika
6. Salata O.V. Applications of nanoparticles in biology and medicine, Journal of
Nanobiotechnology, 2 (3), 2004
7. Sayed Z.M.,Telang S. D., Ramchand C.N. - Application of magnetic techniques in the field of
drug discovery and biomedicine, BioMagnetic Research and Technology 2003,
:http://www.biomagres.com/content/1/1/2
8. Silva A., Silva-Freitas E. et all. - Magnetic particles in biotechnology:from drug targeting to
tissue engineering, Advances in Applied Biotechnology, Ed. InTech, 2012, 237-258
9. incai Mariana,Vulpe Alexandara Iuliana Observaii asupra efectului protector al unor
nanocompui magnetici asupra pielii n condiii de expunere prelungit la UVR, Lucrare de
diplom, 2003
10. incai Mariana, Lupescu Ramona Camelia Efectul UV protector al unor compui cu
nanoparticule, Lucrare de diplom, 2007
11. ***Nanofluidics Wikipedia, http://en.wikipedia.org/wiki/Nanofluidics, 2013
12. ***Nanomedicine Wikipedia, http://en.wikipedia.org/wiki/Nanomedicine, 2013
13. *** http://rehabilitacionymedicinafisica.files.wordpress.com/2009/02/sonolysis2.jpg
14. *** http://www.azonano.com/article.aspx?ArticleID=3034
15. *** http://www.futurity.org/health-medicine/nano-painting-lights-up-brain-tumors/
16. *** http://www.lsbu.ac.uk/water/buckmin.html
17. *** http://www.nist.gov/mml/bmd/her2-021908.cfm
18. *** http://www.nordicdiagnostica.com/magnetic-beads/2284
19. *** http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0142961208005115
20. *** http://www.woundsource.com/product/acticoat-7
21. ****http://img.timeinc.net/time/daily/2007/0706/a_lantibiotics_0618.jpg
22. ***http://english.cas.cn/Ne/CASE/201101/t20110121_64693.shtml
23. ***http://s3.amazonaws.com/readers/healthmad/2007/07/22/43701_0.jpg
24. ***http://www.chemheritage.org/discover/online-resources/chemistry-inhistory/themes/microelectronics-and-nanotechnology/tomalia.aspx
25. ***http://www.fda.gov/consumer/ updates/nanotech072507.html
26. ***http://www.nano-reviews.net/index.php/nano/rt/printerFriendly/5167/5775
27. ***http://www.nanowerk.com/spotlight/spotid=26485.php
28. ***https://www.airocide.com/how-it-works
47

Mijloace Nano-Terapeutice in Medicina

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Mijloace Nano-Terapeutice in Medicina

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

IOSUD USAMVB Timioara

Scoala doctoral: Medicin Veterinar

Mijloace nano-terapeutice n medicin Introducere

Disciplina: Farmacologie veterinar

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

Mijloace nano-terapeutice n medicin

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

1. Mijloace nano-terapeutice n medicin

Figura 1. Tulpini Methicillin-Rezistente de Staphylococcus aureus (MRSA) evideniate prin Scanning

Un alt mecanism de supravieuire bacterian este: Ply Sly mechanism, n care

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

Deci microorganismele care pot genera rezisten, posed forme de inteligen ,

Figura 2. mecanismul PlySly bacterian

n acest context nanotehnologia terapeutic caut s ofere caracteristici specifice

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

nanoparticulele din argint

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

1.1. Nanotehnologia n biologie

nanotehnologia. Aceasta din urm este tiina structurilor nanometrice se ocup cu

Nano-biotehnologia reprezint unirea biotehnologiei i a nanotehnologiei.

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

n general miniaturizarea instrumentelor medicale va asigura abordri mai precise,

Aplicaiile biomedicale ale nanotehnologiei sunt rezultate directe a astfel de

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

Pe larg, nanomedicina cuprinde procesul de diagnosticare, tratare i prevenire a

Nanotehnologia ar avea un rol mare n domeniul ceretrilor din terapia

Research din 2000 s-a adresat nanotiinei i nanotehnologiei din domeniile de

Nanomedicina variaz de la aplicaii medicale ale nanomaterialelor, la biosenzori

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

1.2. Nano-materialele utilizate n biomedicin

Figura 3. Gradul de mrime comparativ al nano-moleculelor

Se cunosc deja numeroase materiale cu abiliti n eliberarea medicamentelor.

Materialele biocompatibile care prezint rspuns la cmpul magnetic extern i-au

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

Pentru a interaciona cu o int biologic, este necesar ataarea unui strat

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

Comparaia nanoparticulelor cu proteinele, d o idee a utilizrii acestor sonde

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina

Curs Mijloace nano-terapeutice n medicin - Introducere

materiale anorganice magnetice,

magnetice pentru bioaplicaii, de exemplu:

Scoala Doctoral Medicin Veterinar FMV Timioara

Prof. Dr. Romeo T. Cristina