UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

Mtodos bsicos para el aislamiento e

identificacin de entero-bacterias del
agua.
Aura Ramrez Vega
Carlos Martnez Martnez
Claudia Larios Ayala
Irving Quiroz Martnez
Julia Mara Turcio Julia Mara

Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros
Grupo: BB12A

Introduccin
Considerando que estudio de las enfermedades transmisibles ocasionadas por
microorganismos patgenos.
Constituye el objeto de transformacin del mdulo Procesos Celulares
Fundamentales (PCE) del Tronco Comn Divisional de Ciencias Biolgicas y de la
Salud (TCD de CBS).

Objetivo

El Objetivo del presente texto es introducir a los alumnos de este mdulo en

el manejo de los mtodos bsicos empleados en el laboratorio de
microbiologa, tomando como modelo el aislamiento e identificacin de
entero-bacterias a partir de muestras de agua.

Objetivos Especficos.

El alumno aprenda a preparar la muestra y a sembrarla por estra cruzada

para obtener colonias aisladas.
El alumno aprenda a preparar la muestra y a sembrarla estra cruzada pata
Obtener colonias aisladas.
El alumno aprenda a observar y determinar las caractersticas
macroscpicas y microscpicas de las colonias aisladas. As como, obtener
cultivos puros.
El alumno conozca los fundamentos de las pruebas bioqumicas y realice
las que se requieren para identificar a las entero-bacterias.

Principios tericos
Las Enterobacteriaceae son bacilos gramnegativos, distribuidas en la naturaleza
en forma amplia. Se encuentran en el suelo, en el agua, sobre las plantas y como
su nombre lo indica se encuentran dentro del tracio intestinal dc los seres
humanos y de los animales. Se aslan con mucha frecuencia de clnicas,
La familia Enterobacteriaceae est formada por aproximadamente 31 gnero y
139 especies y miles de serotipos. Algunos miembros de la familia siempre se
asocian a enfermedades cuando se aslan en el hombre, por ejemplo: Shigella
Salmonella, Yersinia pestis. Mientras que otros son miembros de la flora normal
que producen infecciones oportunistas, por ejemplo: Escherichia coli, Klebsiella
pneumomiae, Proteus mirabilis.
Las entero-bacterias son causantes de un gran nmero de enfermedades
infecciosas en el humano, entre las ms comunes se encuentran los sndromes

diarreicos y disntricos, causados por cepas de Escherichia coli, Salmonella y

Shigella. La fiebre tifoidea, causada por especies de Salmonella. Se tienen casos
de neumona causados por Klebsiella pneumomiae. Especies de Proteus mirabilis,
E. coli y varios miembros del grupo Klebsiella Enterobacteriaceae se aslan de
heridas traumticas, contaminadas con tierra o material vegetal o de incisiones
abdominales despus de una ciruga. El shock endotxico es una manifestacin
potencialmente letal de la infeccin par entero-bacteria.

Metodologa y Resultados.
La metodologa descrita consta de cuatro sesiones:
1. Preparacin de las muestras y cultivo en un medio selectivo
2. Aislamiento y observacin de las caractersticas macroscpicas y
microscpicas de las enterobacterias
3. Pruebas bioqumicas para enterobacterias
4. Identificacin de las enterobactrias
Obtencin de la muestra:
La tcnica empleada para obtener la muestra con la que se trabajara en el
laboratorio, fue la misma que se emple en el resto de las unidades
pertenecientes a la Universidad Autnoma Metropolitana (UAM).
Es decir, se aplic la tcnica de medio chorro para la toma de muestra en un
frasco estril de 100mL. Las muestras totales recolectadas fueron cuatro,
pertenecientes a distintos medios donde se encuentra agua en diferentes
condiciones (charco de agua sucia, cubeta con agua de lluvia, agua de la llave y
agua estancada del rio Lerma), posteriormente las muestras recolectadas fueron
rotuladas con la finalidad de mantener cierto orden con los frascos. Cabe
mencionar que durante la toma de muestra, se trat de realizar de la manera ms
estril posible, esto con la finalidad de no contaminar el agua y que alterara a los
resultados; adems la toma de muestra se realiz el mismo da en el que se
realizara la parte experimental de la investigacin.
PRIMERA SESIN:

Antes de comenzar a trabajar fue importante realizar la esterilizacin de rea de

trabajo para evitar cualquier tipo de contaminacin.
Para el cultivo de la muestra estas fueron tratadas de dos maneras:
1. Dilucin de la muestra 1:10, que consiste en tomar 1ml de la muestra y
diluirla en 9ml de Solucin Salina Isotnica estril (SSI)
2. Muestra directa, sin ningn tipo de dilucin
En ambos casos el cultivo se realiz de la misma manera: Con ayuda de un el asa
bacteriolgica estril se tom una pequea cantidad de la muestra de agua y se
procede a estriar el inoculo en la caja de Petri sobre el agar siguiendo un patrn
de cuatro cuadrantes y una estra abierta.
Cada agar se sell con un pedazo de masking y se etiquet con los datos
requeridos; especificando el nmero de muestra y si era diluida o no diluida. Las
cajas de agar MacConkey se llevaron a incubar durante 24 horas.
SEGUNDA SESION:
Despus de que las muestra incubaron durante 24 horas se procedi a la
seleccin de colonias desarrolladas de agar MacConkey. En el caso de las
muestras obtenidas de: charco de agua sucia, cubeta con agua de lluvia, agua de
la llave y agua estancada del rio Lerma se encontr un crecimiento o desarrollo de
una colonia bacteriana observando mayor desarrollo en el cultivo no diluido a
comparacin con el cultivo diluido. Se procedi a realizar la resiembra de las
colonias desarrolladas en agar MacConkey para obtener cultivo puro de bacterias.
Posteriormente

se

realiz

la

observacin

microscpica

de

los

cultivos

seleccionados por Tincin de Gram. Siguiendo la metodologa de la prctica se

prepar el frotis y la tincin para la observacin microscpica de las colonias
cultivadas y as determinar si las enterobacterias presentes eran de carcter
Gram+ o Gram-

Al observar las tinciones al microscopio se determin que las enterobacterias

presentes en dicha muestra eran de carcter Gram + debido a que presentaban
una coloracin azul violeta.

TERCERA SESION:
Prueba Catalasa:
Enzima que descompone el perxido de hidrogeno en oxgeno y agua oxigenada.
Las bacterias que con Catalasa positiva liberan oxigeno que se manifiesta con la
liberacin de pequeas burbujas.

Prueba Oxidasa:
Todas las enterobacterias dan una reaccin negativa. Pseudomona y Neisseria
son positivas.
Las bacterias oxidasa positivas producen un color negro o azul intenso en 10seg.
La reaccin se considera positiva si ocurre entre los 10 y 60 segundos posteriores.
Si el desarrollo de color se da despus de 60 segundos la prueba se considera
Negativa.

Prueba
Catalasa
Oxidasa

Muestra 1
+
+

Muestra 2
+
+

Muestra 3
+
+

Muestra 4
+
+

Siembra en medios para pruebas bioqumicas:

1. Prueba Voges Proskauer / Rojo de metilo
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo ligero del cultivo puro de bacterias y
suspenderlo en un tubo con caldo VP-RM
2. Citrato de Simmons
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo ligero del cultivo puro y simbralo en
forma de una estra abierta sobre el rea inclinada del medio.
3. Indol
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo poco denso del cultivo puro de
bacterias y simbralo en el medio SIM a 3mm del fondo del tubo.

4. Caldo Urea
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo poco denso del cultivo puro de
bacterias y simbralo en el caldo urea.
5. Agar Hierro Triple Azcar (TSI)
Con el asa bacteriolgica se toma un inoculo poco denso del cultivo puro de
bacterias y simbralo por picadura en el fondo y en forma de una estra en la
superficie

Se realizaron los mismos pasos en cuatro ocasiones, una con cada muestra

diferente.
Todos los tubos se dejaron incubar durante 24 horas

CUARTA SESIN:
Interpretacin de las pruebas de identificacin bioqumica
1) Voges-Proskauer / Rojo de metilo
- Prueba positiva: Color rojo en el medio (presenciad e acetona)
- Prueba negativa: Color amarillo cobrizo en el medio
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
2)
-

Rojo de Metilo
Prueba positiva: Color rojo en el medio
Prueba retardada: Color anaranjado
Prueba negativa: Color amarillo en el medio

*El tubo control debe dar una reaccin negativa

3) Citrato de Simmons
- Prueba positiva: Crecimiento con color azul intenso en la zona inclinada del
-

pico de flauta
Prueba negativa: No se observa crecimiento ni cambio de color

*El tubo control debe dar una reaccin negativa

4) Indol
- Prueba positiva: Color negro en la picadura o en todo el tubo

Prueba negativa: Ausencia de color negro en todo el tubo

*El tubo control debe dar una reaccin negativa

5) cido Sulfhdrico (H2S)
- Prueba positiva: Aparicion de un color rojo 1 o 3 minutos despus de
-

adicionar el reactivo
Prueba negativa: Color amarillo

*El tubo control debe dar una reaccin negativa

6) Movilidad: Obsevar medio SIM
- Prueba positiva: El medio SIM debe encontrarse turbio
- Prueba negativa: solo debe existir crecimiento a lo largo de la picadura
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
7) Ureasa
- Prueba positiva: Color rosa fuerte en el caldo urea
- Prueba negativa: Color amarillo o sin cambio en el caldo urea
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
8) Agar Hierro Triple Azcar (TSI)
- Pico de flauta rojo/Profundidad amarillo: Medio Alcalino/cido (Alc/A).
-

Glucosa fermentada; lactosa o sacarosa no fermentada.

Pico de flauta amarillo/Profundidad amarillo: Medio cido/cido (A/A).
Glucosa, lactosa y/o sacarosa fermentada.

Resultados:
Prueba

Muestra 1

Muestra 2

Muestra 3

Muestra 4

Voges Proskaeur

Negativa

Negativa

Negativa

Positiva

Rojo de Metilo

Negativa

Positiva

Negativa

Negativa

Positiva
Presenta
crecimiento
con ligero
cambio de
coloracin
hacia un
tono azul

Positiva
Presenta
ligero
crecimiento
con cambio
de
coloracin
hacia un

Negativa
Presenta
ligero
crecimiento
con cambio
de
coloracin
hacia un

Positiva
Presenta
ligero
crecimiento
con cambio
de
coloracin
hacia un

Citrato de
Simmons

verdoso
Indol

Negativa

tono azul
intenso
Negativa

cido Sulfhdrico
(H2S)
Movilidad

Positiva

Negativa

Negativa

Positiva

Positiva

Negativa

Negativa

Negativa

Ureasa

Positiva

Negativa

Negativa

Positiva

Negativa
Pico de
flauta rojo y
Profundidad
amarillo.
Medio
Alcalino/cid
o (Alc/A).

Positiva
Pico de
flauta rojo y
Profundidad
amarillo.
Medio
Alcalino/cid
o (Alc/A).

Negativa
Pico de
flauta rojo y
Profundidad
amarillo.
Medio
Alcalino/cid
o (Alc/A).

Positiva
Pico de
flauta rojo y
Profundidad
amarillo.
Medio
Alcalino/cid
o (Alc/A).

TSI (hierro triple

azcar)

tono azul
intenso
Negativa

tono azul
intenso
Positiva

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Unidad Xochimilco
Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud
Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

Anlisis de las muestras recolectas de Rectora

Por:
Alicia Maribel Curiel Rojo
Delfina Garca Betanzo
Lucero Edith Gonzlez Cruz
Grisel Loeza Coatzozon
Melina Trejo Lara
Docente:Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros
Grupo: BB12A

Recoleccin de la muestra

El propsito de esta investigacin es evidenciar la presencia de Enterobacterias en

el agua de los bebederos de las distintas unidades de la UAM (Universidad
Autnoma Metropolitana)
Cabe resaltar que en la Rectora de la UAM no hay bebederos como en la UAM
X sin embargo cuentan con dosificadores de agua, de los cuales fueron
seleccionados 5 al azar para la toma de muestra.
En cada uno de los dosificadores seleccionados se aplic la tcnica de medio
chorro para la toma de muestra en un frasco estril marcado para identificar el
dosificador seleccionado y dicho frasco se mantuvo en un medio refrigerante
hasta el momento que se us en el laboratorio, lapso que no fue mayor a 1 hora.
Dispensadores seleccionados:
1) Dosificador de Coordinacin general de administracin y relaciones
laborales (2do piso)

2) Dosificador de Tesorera adjunta de control patrimonial (3er piso)

3) Dosificador de Direccin de recurso humanos (2do piso)

4) Dosificador de Direccin de Tecnologas de la informacin (1er piso)

5) Dosificador de la caseta de vigilancia en la entrada principal (planta baja)

Trabajo en laboratorio

PRIMERA SESIN: Sembrado en Agar MacConkey

Antes de comenzar a trabajar fue importante realizar la esterilizacin de rea de

trabajo para evitar cualquier tipo de contaminacin.
Para el cultivo de la muestra estas fueron tratadas de dos maneras:
1) Dilucin de la muestra 1:10, que consiste en tomar 1ml de la muestra y
diluirla en 9ml de Solucin Salina Isotnica estril (SSI)
2) Muestra directa, sin ningn tipo de dilucin
En ambos casos el cultivo se realiz de la misma manera:
-

Con ayuda de un el asa bacteriolgica estril se tom una pequea

cantidad de la muestra de agua y se procede a estriar el inocuo en la caja
de Petri sobre el agar siguiendo un patrn de cuatro cuadrantes y una estra
abierta.

Cada agar se sell con un pedazo de masking y se etiquet con los datos
solicitados; especificando el nmero de muestra y si era diluida o pura.

Las cajas de agar MacConkey se llevaron a la estufa para dejarlas incubar

a 37 C durante 24 horas.
SEGUNDA SESIN: Aislamiento y observacin de las caractersticas
macroscpicas y microscpicas de las Enterobacterias.

Despus de que las muestra incubaron durante 24 horas se procedi a la

seleccin de colonias desarrolladas de agar MacConkey. En el caso de las
muestras de Rectora de los 10 cultivos totales solo 2 presentaron desarrollo de
colonias bacterianas, ambas correspondieron a la muestra nmero 5 (Dosificador
de la caseta de vigilancia en la entrada principal) observando mayor desarrollo en
el cultivo puro a comparacin con el cultivo diluido.

Las colonias observadas presentaron las siguientes caractersticas:

COLONIA 1
Muestra Pura

COLONIA 2
Muestra 1:10

Forma

MORFOLOGIA COLONIAL
Circular
Circular

Color

Amarillo / Dorado

Amarillo / dorado

Elevacin

Umbilicada con rugosidad

Umbilicada con rugosidad

Borde

Indefinido

Indefinido

Consistencia

Viscosa

Viscosa

Tamao

Grande y puntiforme

Grande y puntiforme

Opacidad

Ausente

Ausente

Superficie

Irregular

Irregular

De las dos muestras sealadas se procedi a realizar la resiembra de las colonias

desarrolladas en agar MacConkey para obtener cultivo puro de bacterias.

Observacin microscpica de los cultivos seleccionados por Tincin de Gram.

Siguiendo la metodologa de la prctica se prepar el frotis y la tincin para la

observacin microscpica de las colonias cultivadas y as determinar si las
enterobacterias presentes eran de carcter Gram + o Gram-

Al observar las tinciones al microscopio se determin que las enterobacterias

presentes en dicha muestra eran de carcter Gram + debido a que presentaban
una coloracin azul violeta.

Tambin se observ la presencia de un hongo en segundo plano

TERCERA SESIN: Pruebas bioqumicas para Enterobacterias.

Pruebas de identificacin bioqumica de los cultivos puros seleccionados

Prueba Catalasa:
Enzima que descompone el perxido de hidrogeno en oxgeno y agua oxigenada.
Las bacterias que con Catalasa positiva liberan oxigeno que se manifiesta con la
liberacin de pequeas burbujas.
Prueba Oxidasa:
Todas las enterobacterias dan una reaccin negativa. Pseudomona y Neisseria
son positivas.
Las bacterias oxidasa positivas producen un color negro o azul intenso en 10seg.
La reaccin se considera negativa si ocurre entre los 10 y 60 segundos
posteriores. Si el desarrollo de color se da despues de 60 segundos la prueba se
considera Negativa.

Resultados obtenidos en las muestras de rectora:

COLONIA 1
Muestra Pura
PRUEBAS BIOQUIMICAS
CATALASA

COLONIA 2
Muestra 1:10
+

OXIDASA

Prueba Catalasa en
muestra pura

Prueba Catalasa en
muestra diluida 1:10

Prueba Oxidasa en
muestra pura

Prueba Oxidasa en
muestra diluida 1:10

Siembra en medios para pruebas bioqumicas:

1) Prueba Voges Proskauer / Rojo de metilo
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo ligero del cultivo puro de
bacterias y suspenderlo en un tubo con caldo VP-RM
2) Citrato de Simmons
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo ligero del cultivo puro y
simbralo en forma de una estra abierta sobre el rea inclinada del medio.
3) Indol
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo poco denso del cultivo puro de
bacterias y simbralo en el medio SIM a 3mm del fondo del tubo.
4) Caldo Urea
Con el asa bacteriolgica tomar un inoculo poco denso del cultivo puro de
bacterias y simbralo en el caldo urea.
5) Agar Hierro Triple Azcar (TSI)

Con el asa bacteriolgica se toma un inoculo poco denso del cultivo puro de
bacterias y simbralo por picadura en el fondo y en forma de una estra en
la superficie

Se realizaron los mismos pasos en tres ocasiones, la primera sin bacterias

para los tubo de control, la segunda para los tubos con la muestra pura y la
tercera para los tubos con las muestra diluida 1:10
Todos los tubos se dejaron incubar a 37 C durante 24 horas

CUARTA SESIN: Lectura de pruebas bioqumicas

Interpretacin de las pruebas de identificacin bioqumica

9) Voges-Proskauer / Rojo de metilo
- Prueba positiva: Color rojo en el medio (presenciad e acetona)
- Prueba negativa: Color amarillo cobrizo en el medio
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
10)Rojo de Metilo
- Prueba positiva: Color rojo en el medio
- Prueba retardada: Color anaranjado
- Prueba negativa: Color amarillo en el medio
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
11) Citrato de Simmons

Prueba positiva: Crecimiento con color azul intenso en la zona inclinada del
pico de flauta
Prueba negativa: No se observa crecimiento ni cambio de color

*El tubo control debe dar una reaccin negativa

12)Indol
- Prueba positiva: Color negro en la picadura o en todo el tubo
- Prueba negativa: Ausencia de color negro en todo el tubo
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
13)cido Sulfhdrico (H2S)
- Prueba positiva: Aparicion de un color rojo 1 o 3 minutos despus de
adicionar el reactivo
- Prueba negativa: Color amarillo
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
14)Movilidad: Obsevar medio SIM
- Prueba positiva: El medio SIM debe encontrarse turbio
- Prueba negativa: solo debe existir crecimiento a lo largo de la picadura
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
15)Ureasa
- Prueba positiva: Color rosa fuerte en el caldo urea
- Prueba negativa: Color amarillo o sin cambio en el caldo urea
*El tubo control debe dar una reaccin negativa
16)Agar Hierro Triple Azcar (TSI)
- Pico de flauta rojo/Profundidad amarillo: Medio Alcalino/cido (Alc/A).
Glucosa fermentada; lactosa o sacarosa no fermentada.
- Pico de flauta amarillo/Profundidad amarillo: Medio cido/cido (A/A).
Glucosa, lactosa y/o sacarosa fermentada.
- Pico de flauta rojo/Profundidad rojo: Medio Alcalino/Alcalino (Alc/Alc).
Reaccin negativa, no hay fermentacin de ninguno de los carbohidratos.

COLONIA 1
COLONIA 2
Muestra Pura
Muestra 1:10
PRUEBAS BIOQUIMICAS
Voges Proskaeur

Negativa

Negativa

Rojo de Metilo

Negativa

Negativa

Indol

Positiva
Presenta crecimiento con
ligero cambio de
coloracin hacia un tono
azul verdoso
Negativa

Positiva
Presenta ligero
crecimiento con cambio
de coloracin hacia un
tono azul intenso
Negativa

cido Sulfhdrico (H2S)

Negativa

Negativa

Movilidad

Positiva

Positiva

Ureasa

Positiva

Positiva

TSI (hierro triple azcar)

Positiva
Pico de flauta rojo y
Profundidad amarillo.
Medio Alcalino/cido
(Alc/A).

Positiva
Pico de flauta rojo y
Profundidad amarillo.
Medio Alcalino/cido
(Alc/A).

TSI

GA
S

H2S

VP

IND

Alc/A
Alc/A

-/+
-

Citrato de Simmons

TRIBUTO I:
Escherichiae
GNERO :
Escherichia
E.coli
GNERO: Shigella
Grupos: A,B,C
S.Sonnei
TRIBU II:
Edwarsiellae
GNERO:
Edwarsiella
E.Tarda
TRIBU III:
Salmonelleae
GENERO:
Salmonelleae
TRIBU IV:
Citrobactereae

RM

Alc/A

Alc/A

CIT

URE

MO
V

GENERO:
Citrobacter
C.freundii
C.koseri
TRIBU V:
Klebsielleae
GENERO: Klebsiella
K.pneumoniae
k.axytoca
GENERO:
Enterobacter
E.aerogenes
E.cloacae
GENERO: Hafnia
H. Alves
GENERO: Pantoea
P.agglomerans
GENERO: Serratia
S. marcescens
TRIBU VI: Proteeae
GENERO: Proteus
P. vulgaris
P.mirabilis
GENERO:
Morganella
M.morganii
GENERO:
Providencia
P.rettgeri
P.stuartii
P.alcalifaciens
TRIBU VII:
Yersinieae
GENERO:
Yersinieae
Y. enterocolitica

Alc/A

Alc/A

-/+

-/+

-/+

+/-

-/+

Alc/A

-/+

Alc/A

Alc/A
Alc/A

Alc/A

Alc/A
Alc/A
Alc/A

Alc/A

+/-

+
+
+

Las reas sombreadas indican las Reacciones clave

+ / - del 50% al 90% de las cepas Positivas
- / + del 50% al 90% de las cepas Negativas

Anlisis de resultados

Clasificacin de

Numero de

+/-

Reacciones Positivas

++
++

+
+

++

++

+
+/+

+/-

Enterobacterias

Reacciones
Positivas

TRIBUTO I:
GNERO: Shigella
Grupos: A,B,C

S.Sonnei

TRIBU II: Edwarsiellae

GNERO: Edwarsiella
E.Tarda
3
TRIBU III: Salmonelleae
GENERO:
5
Salmonelleae
TRIBU IV: Citrobactereae
GENERO: Citrobacter
C.koseri
6
TRIBU V: Klebsielleae
GENERO: Hafnia
H. Alves
5

* TSI Alc/A
* GAS
* TSI Alc/A
* GAS

* H2S
* VP
* H2S
* VP

* IND

* TSI Alc/A

* VP

* MOV

* TSI Alc/A
* VP

* IND
* CIT

* URE
* MOV

* TSI Alc/A
* H2S

* VP
* CIT

* URE
* MOV

* TSI Alc/A
* H2S

* RM
* IND

* MOV

* IND

GENERO: Pantoea
P.agglomerans

* TSI Alc/A
* GAS
* H2S

* RM
* IND
* CIT

* MOV

GENERO: Serratia
S. marcescens

* TSI Alc/A
* H2S

* RM
* IND

* CIT
* MOV

TRIBU VI: Proteeae

GENERO: Proteus
P. vulgaris

* URE

* MOV

P.mirabilis

* TSI Alc/A
* VP
* TSI Alc/A
* IND

* CIT
* URE

* MOV

* TSI Alc/A
* H2S

* VP
* URE

* MOV

* TSI Alc/A
* GAS
* H2S
* TSI Alc/A
* GAS

* VP
* CIT
* URE
* H2S
* VP

* MOV

GENERO: Morganella
M.morganii
5
GENERO: Providencia
P.rettgeri
7

P.stuartii

* CIT
* MOV

P.alcalifaciens

TRIBU VII: Yersinieae

GENERO: Yersinieae
Y. enterocolitica
5

* TSI Alc/A
* H2S

* VP
* CIT

* MOV

* TSI Alc/A
* GAS

* H2S
* VP

* URE

TSI Alc/A: Agar hierro triple azcar, Alcalino/cido

H2S: Sulfuro de Hidrogeno
RM: Rojo de Metilo
VP: Voges Proskauer
IND: Indol
CIT: Citrato de Simmons
URE: Ureasa (Caldo urea)
MOV: Movilidad
N (negritas y subrayado): Reacciones Clave

Despus de realizar las pruebas necesarias se pudo determinar la presencia de

Enterobacterias en las muestras del agua recolectadas en uno de los
dispensadores de la Rectora de la UAM que est localizado en la caseta de
vigilancia de la entrada principal y en base a la identificacin bioqumica las
posibles bacterias presentes en dicha muestra podran ser:
-

Shigella, Grupos A, B, C
Shigella, S. Sonnei
Edwarsiella, E. Tarda
Salmonelleae
Citrobacter, C. Koseri
Hafnia, H. Alves
Pantoea, P. Agglomerans
Serratia, S. Marcescens
Proteus, P. Vulgaris
Proteus, P. Miriabilis
Morganello, M. Morganii
Providencia, P. Rettgeri
Providencia, P. Stuartii
Providencia, P. Alcalifaciens

Es importante resaltar que le objetivo de esta investigacin es solo evidenciar la

presencia de las Enterobacterias, ya que si se desea especificar cul es el
organismo presente en dichas muestras se tendra que proceder a realizar las
pruebas especficas correspondientes.

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Unidad Xochimilco
Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud
Tronco Comn Divisional
Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

PRACTICA DE LABORATORIO.

lvarez Romn Thania Sarahi

Aroz Vsquez Alberto
Corrales Andrade Tania Gabriela
Navarrete Gonzlez Diana Alejandra
Valerio Ordua Sofa Lizeth
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

Resultados
Para estas sesiones se trabaj nicamente con las muestras de agua de los
bebederos de la UAM-Xochimilco, ya que los bebederos de la UAM-Iztapalapa se
encontraban sin servicio.
Primera Sesin
Preparacin de las muestras y cultivo en un medio selectivo
I.
II.
III.

Preparacin de la zona estril para trabajo microbiolgico

Cultivo de la muestra de agua en el medio MacConkey
Manejo de material contaminado

En la primera sesin se realiz los cultivos de las muestras de agua de los

bebederos de la UAM-X, y se realiz la dilucin 1:10 en agua en los tubos de
ensayo.
Se hizo la siembra y diluciones en medio MacConkey por estra cruzada, las
muestras se sembraron por duplicado y se dej incubar a 37 durante 24 horas.

Segunda Sesin
Aislamiento y observacin de las caractersticas macroscpicas y microscpicas
de enterobacterias
I.
II.

Solucin de las colonias desarrolladas en el agar MacConkey

Resiembra de las colonias desarrolladas de agar en MacConkey para

III.

obtener cultivo puro de bacterias

Observacin microscpica de los cultivos seleccionados

En esta sesin no hubo desarrollo de colonias en 24 horas, de los medio de cultivo

MacConkey de las muestras de agua de los bebederos de la UAM-X.
Realizamos la identificacin de colonias en medios de cultivo del agua de los
bebederos de Rectora.
Se realiz la observacin macroscpica de la morfologa de las colonias
seleccionadas del agar MacConkey

Se realiz de igual modo la resiembra de las colonias seleccionadas

desarrolladoras del agar MacConkey y se hizo la observacin microscpica con la
Tincin

de

Gram.

En este cuadro se muestra que estructura tie cada uno de los colorantes
utilizados.

Colorante
Lugol
Verde rpido
Giemsa
Acetocarmn
Azul alciano

Estructura que tie

Almidn, glicgeno, cilios, flagelos.
Citoplasma, ncleo.
Grnulos citoplasmticos, ncleo.
Cromosomas en clulas mitticas
Teido de estructuras con proporcin

Amarillo de Metanilo

de carbohidratos.
Micelios y levaduras.

Tabla 1. Resultados
Caractersticas de las bacterias observadas
COLONIA 1

COLONIA 2

Rectora

Rectora diluido

Morfologa Colonial
FORMA
COLOR
ELEVACIN
BORDE
CONSISTENCIA
TAMAO
OPACIDAD
SUPERFICIE
Tincin de Gram
CATALASA
OXIDASA
UREA
GLUCOSA
LACTOSA
SACAROSA
MOVILIDAD
Ac. SULFHIDRICO
INDOL
ROJO DE METILO

Irregular
Irregular
Marrn
Roja
Plana
Plana
Erosionado
Continuo
Mucosa
Mucosa
Mediana
Mediana
Opaco
Opaco
Lisa
Lisa
Morfologa Microscpica
Negativas
Negativas
Pruebas Bioqumicas
Positivo
Positiva
Positivo
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa

VOGES PROSKAUER
Negativa
CITRATO DE SIMMONS Positiva

Negativa
Negativa

Tercera Sesin
Pruebas bioqumicas para enterobacterias.
I.

Pruebas

de

identificacin

bioqumica

de

los

cultivos

II.

seleccionados.
Observacin microscpica de los cultivos puros seleccionados.

puros

En la tercera sesin se realizaron las pruebas para la identificacin de las

enterobacterias de los cultivos en los tubos de ensayo.
Realizamos 7 diferentes pruebas con distintas tcnicas para poder observar
posteriormente los resultados, las cuales fueron:

a) Prueba de catalasa:
Colocamos sobre el portaobjeto con el asa bacteriolgica una pequea
porcin del cultivo puro de las bacterias del medio Mac- Conkey y despus
agregamos una gotita de agua oxigenada sobre la muestra, las muestras
resultaron positivas, liberaron oxgeno.

b) Prueba
Con
el

de
asa

oxidasa:
bacteriolgica colocamos

una porcin del

cultivo

extendimos sobre

el

puro

papel

lo

filtro.

Le

agregamos 2 gotas de reactivo. Las bacterias resultaron positivas para la

muestra de rectora y se hizo lo mismo con las muestras de rectora diluida
(1:10) y sus resultados fueron negativos.

c) Prueba

Voges-

metilo:
Con
el

asa

Proskauer

Rojo

de

bacteriolgica tomamos

un inoculo denso

del

suspendimos

el tubo de caldo. Las dos

en

muestras resultaron negativas.

cultivo

lo

d) Citrato
Con
el

de
asa

Simmons:
bacteriolgica tomamos un

inoculo ligero del

cultivo y lo sembramos en

forma de estra

abierta. Se sembraron dos

muestras una de rectora diluida (1:10) y la otra fue de rectora no diluida.

La muestra de rectora diluida resulto negativa y La muestra de rectora no
diluida

e) Indol
Con

resulto

el

asa

colectamos
cultivo

un
lo

picaduras en el

positiva.

bacteriolgica
inoculo

denso

sembramos

del
por

medio SIM a 3 mm del

fondo del tubo. Las dos muestras resultaros negativas.

f) Caldo urea
Con
el
un

inoculo

asa

bacteriolgica colocamos

poco

denso del cultivo y los

sembramos den el

caldo

urea.

Las

dos

muestras resultaron negativas.

g) Agar

hierro

triple

azcar

inoculo poco denso

del cultivo y lo sembramos

por picadura en el

fondo y en forma de estra

por la superficie. Las

dos

negativas.

muestras

resultaron

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Unidad Xochimilco

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Tronco Comn Divisional

Mdulo: Procesos Celulares Fundamentales

REPORTE DE LABORATORIO

Por:
Cruz Hernndez Brenda
Dimas Guzmn Cristian
Hernndez Acosta Juan Carlos
Jernimo Hernndez Eduardo
Ventura Maqueda Diana
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amzquita Landeros

Grupo: BB12A

INTRODUCCIN
La microbiologa se ocupa generalmente de organismos tan pequeos que no
pueden ser vistos a simple vista por el ojo humano. Debido a la naturaleza de esta
disciplina, el microscopio tiene una importancia crucial; la mayor parte de los
conocimientos sobre los microorganismos se han descubierto con microscopio. 1.
La mayora de microorganismos patgenos presentan caractersticas fsicoqumicas, estas caractersticas son importantes para la deteccin de estos
microorganismos. Los mtodos empleados en el laboratorio son los siguientes 1.
preparacin de las muestras y cultivo en un medio selectivo, 2. Aislamiento y
observacin de las caractersticas macroscpicas y microscpicas de las
enterobacterias, 3. Pruebas bioqumicas para enterobacterias, 4. Identificacin de
las enterobacterias.
Las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae son los aislamientos
bacterianos recuperados con ms frecuencia de muestra clnicas; 2 como alumnos
del rea de ciencias biolgicas y de la salud, es imprescindible que estemos
familiarizados con la teora y prctica que implica el proceso de aislamiento e
identificacin de enterobacterias.
OBJETIVO GENERAL
-Identificar enterobacterias a partir de su morfologa y pruebas bioqumicas
especficas.
OBJETIVOS PARTICULARES.
-Aprender a sembrar por tcnica de estra cruzada para obtener colonias aisladas.
-Identificar caractersticas morfolgicas, macroscpicas y microscpicas de las
colonias aisladas.
-Obtener cultivos puros mediante el resembrado de colonias aisladas.
-Conocer los fundamentos tericos de las pruebas bioqumicas con la finalidad de
realizar una lectura apropiada de stas, as como contar con la tcnica adecuada
para realizar las pruebas seleccionadas de identificacin de enterobacterias.

1 Lansing M. Prescott, John P. Harley, Donald A. Klein, Microbiologa, quinta edicin,

editorial Mc Graw Hill, 2014, pgina 19.

2 Koneman et al., 1999, p. 172

MARCO TERICO.
Preparacin y tincin de las muestras
Aunque los microorganismos vivos se pueden examinar directamente con un
microscopio ptico, a menudo hay que fijarlos y teirlos para aumentar la
resolucin y acentuar las caractersticas morfolgicas para su estudio en el futuro.
Fijacin
Las clulas teidas que se observan en el microscopio deben parecerse lo ms
posible a las clulas vivas. La fijacin es un proceso por el cual se conservan y
fijan en su posicin las estructuras internas y externas de las clulas de los
microorganismos.
Colorantes y tincin simple:
Los numerosos tipos de colorantes empleados para teir microorganismos poseen
dos caractersticas en comn: 1. Todos poseen grupos cromfobos (grupos con
dobles enlaces conjugados que dan el color al colorante), 2. Pueden unirse a las
clulas mediante enlaces inicos, covalentes o hidrfobos. Por ejemplo, un
colorante cargado positivamente se une a estructuras cargadas negativamente de
la clula. Los colorantes ionizables se pueden dividir en dos clases generales
tomando como base la naturaleza de su grupo cargado.
Colorante bsico: Azul de metileno, fucsina bsica, cristal violeta, safranina, verde
malaquita.
Colorante cido: Eosina, rosa de bengala y fucsina cida.
Tincin diferencial.
Los mtodos de tincin diferencial clasifican a las bacterias en grupos diferentes
segn sus propiedades de tincin. La tincin de Gram, desarrollada por el mdico
Dans Christian Gram, en 1884, es el mtodo de tincin ms ampliamente
utilizado en bacteriologa. Se trata de un mtodo de tincin diferencial porque
divide a las bacterias en dos clases.
Gram negativas
Gram positivas

Agar MacConkey
Existen numerosos medios de cultivo con cualidades y usos distintos, en esta
prctica, por las razones expuestas a continuacin, se usar el Agar MacConkey,
el cual es un medio de cultivo selectivo para el aislamiento, recuperacin y

diferenciacin de Enterobacteriaceae. Por su contenido de sales biliares y cristal

violeta resulta inhibitoria de bacterias Gram-positivo y de algunas bacterias Gramnegativas exigentes; pues tales sales son secretadas al intestino para la digestin
de lpidos, siendo as un medio propicio para enterobacterias. Contiene, adems,
lactosa como nica fuente de carbono; fermentadores fuertes de lactosa, como
Escherichia, Kleibsiella y Enterobacter, producen colonias rojas; fermentadores
lentos, como Citrobacter, Providencia, Serratia y Hafnia, pueden aparecer sin color
despus de 24h o rosa plido en 24-48h; Proteus, Edwarsiella, Salmonela y
Shigella, producen colonias transparentes, al no fermentar lactosa. 3
Pruebas bioqumicas para identificacin de Enterobacteriaceae
En base a las caractersticas macroscpicas observadas en medios de cultivo y a
la tincin de Gram, se puede hacer una identificacin primaria de las
caractersticas morfolgicas de las colonias sembradas. Sin embargo, una
identificacin concluyente se basar en la presencia o ausencia de diferentes
enzimas, las cuales dirigen el metabolismo de las bacterias a lo largo de uno o
ms caminos que pueden ser detectados por medios especiales usados en las
tcnicas de cultivo in vitro4 Tales medios son las pruebas bioqumicas, sustratos
con indicadores sobre los cuales reaccionan estas enzimas, dependiendo de la
enzima a detectar ser la prueba aplicada; gracias a esto se puede determinar un
perfil bioqumico que permitir hacer una clasificacin de la especie bacteriana.
Las pruebas Utilizadas en la presente prctica son. 5
Prueba catalasa: Detecta la enzima catalasa con el uso de HO que se
descompone en oxgeno y agua; por lo que hay desprendimiento de burbujas.
Prueba oxidasa: Detecta la enzima citocromo oxidasa, que se encuentra en
organismos anaerobios y anaerobios facultativos.
Voges-Proskauer/Rojo de Metilo: Mide la conversin de acetona en diactilo;
identifica la produccin de cidos fuertes a partir de glucosa.
Citrato de Simmons: Detecta microorganismos que utilizan citrato de sodio como
nica fuente de carbono.
SIM: Sirve para detectar la presencia de la enzima triptofanasa a partir de la
produccin de indol; detecta movimiento bacteriano; identifica la liberacin de
azufre en forma de HS.
Caldo urea: Detecta la enzima ureasa a partir de la liberacin de amoniaco.
Kliger (TSI): Determina el tipo de azcares que fermenta la bacteria.
3 Koneman et al., 1999

4 Koneman et al. 1999, p 173

5 Bustos at al. 2007.

METODOLOGA
Para llevar a cabo la prctica es necesario tener contemplados varios aspectos
como lo son:
-Materiales y mesa de trabajo en perfecto orden y limpieza.
-Utilizacin de bata, guantes y cubrebocas.
-Entender perfectamente la metodologa de la prctica para obtener resultados y
conclusiones adecuadas y verdicas (una forma para evitar el olvido de algn rubro
es mediante la realizacin de una bitcora, en la que por cada sesin se escribir
el nombre de la prctica a realizar; precauciones; materiales; metodologa y as,
tambin, alguna recomendacin).

PRIMERA SESIN: Sembrado en Agar MacConkey

1. Esterilizacin: esterilizacin de rea de trabajo
2. Cultivo de la muestra de agua de los bebederos de la UAM Cuajimalpa y UAM
Lerma
En la primera sesin se procede a cultivar muestras
de agua en el agar MacConkey; la muestra HO 1 la
obtuvimos de los bebederos de la UAM Cuajimalpa, la
muestra HO 2 se obtuvo de los garrafones de la UAM
Lerma.

Se procedi a cultivar las muestras de agua, de las

cuales se hicieron 2 cultivos de cada uno de los
bebederos (uno diluido y otro sin diluir), en total se
hicieron 10 cultivos de cada una de las unidades de la
UAM.
La manera de cultivar las muestras fue la siguiente: 1) Se
esteriliz el asa bacteriolgica al rojo vivo en la flama del mechero y para enfriar
se sumergi en el agar (sto se realiz cada vez que se iba a hacer un cultivo). 2)
Se toma la muestra de agua con el asa y se procede a estriar la misma en el agar.
3) Cada agar se sell con un pedazo de masking y se etiquet con los datos
solicitados. 4) Las muestras se llevaron a la estufa para dejarlas incubar.

SEGUNDA SESIN: Tincin de Gram y Resembrado.

1. Seleccin de colonias desarrolladas de agar MacConkey
2. Resiembra de las colonias desarrolladas en agar MacConkey para obtener cultivo
puro de bacterias.
3. Observacin microscpica de los cultivos seleccionados por Tincin de Gram.

24 horas despus de la siembra de las muestras de agua de los bebederos

de las unidades Lerma y Cuajimalpa de la UAM en el agar MacConkey, no se
present desarrollo de las bacterias.
Debido a sto, para realizar la resiembra de las colonias, se tuvo que pedir
muestras en las cuales s hubo desarrollo de las colonias de bacterias (agua del
ro Lerma).
Se resembraron las colonias que tenan las siguientes caractersticas: 1) Colonias
rojas; 2) Colonias rosadas y 3) Colonias blancas. Se dividi un nuevo agar
MacConkey en 3 secciones y en cada uno se resembr cada una de las colonias.
Para resembrar la colonia se esteriliz el asa bacteriolgica al rojo vivo y para
enfriarla se sumergi en el agar, seguido de sto se colecto la colonia y se
deposit en la seccin que le corresponda en el nuevo agar (esto se realiz para
cada una de las resiembras). Al finalizar la resiembra se sellaron los agar con
masking y se llevaron a la estufa para la incubacin.

Para preparar el frotis se lavaron (con agua y jabn) y desengrasaron (con gotas
de alcohol-acetona) los portaobjetos, para que no resulte difcil la observacin de
las bacterias.
Se coloc una gotita de SSI en el portaobjetos seguido de una pequea porcin
del cultivo que fue resembrado y se mezclaron hasta quedar una mezcla
homognea, se extendi la muestra hasta quedar una fina capa y se fij pasando
el portaobjetos por la flama del mechero (a una altura hasta donde fuera
soportable el calor al dorso de la mano).
Para realizar la tincin de Gram, se cubri el frotis con cristal violeta durante 1
minuto, pasado el minuto se lav con lugol y posteriormente se elimin el exceso
de lugol con agua, seguido, se dej resbalar alcohol-acetona hasta que no se
desprendiera el color y se lav inmediatamente con agua, finalmente se coloc
una gota de safranina a la preparacin (durante un minuto) y se lav, se dej
secar perfectamente y se observ el resultado en el microscopio.

TERCERA SESIN: Pruebas bioqumicas para enterobacterias

Pruebas de identificacin bioqumica de los cultivos puros seleccionados

Prueba Catalasa: Procedimiento.

1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una
pipeta Pasteur
2. Suspender la bacteria
3. Detectar la formacin de burbujas
Prueba Oxidasa: Procedimiento.
1. Poner un trozo de papel de filtro sobre un portaobjetos.
2. Depositar una porcin del cultivo y extenderlo sobre el papel filtro
3. Aadir 2 gota del reactivo de oxidasa.
Siembra en medios para pruebas bioqumicas:
1. Siembra en TSI (medio inclinado color anaranjado) Con el asa bacteriolgica se
toma un inoculo ligero del cultivo puro y se siembra en forma de una estra abierta
sobre el rea inclinada del medio y se deja incubar.
2. Siembra en caldo urea (caldo de color rosa): Con el asa bacteriolgica tomar un
inoculo ligero del cultivo puro , se suspende en el caldo y se agita el asa dentro de
este. Dejar incubar el tubo.
3. Siembra en Citrato de Simmons (Medio inclinado color verde): Con el asa
bacteriolgica tomar un inoculo ligero del cultivo puro y simbralo en forma de una
estra abierta sobre el rea inclinada del medio y dejar incubar.
4. Siembra en caldo semislido de SIM (color ambar): Con el asa bacteriolgica
tomar un inoculo ligero de cultivo puro y sembrarlo por picadura en el caldo
semislido y dejar incubar el tubo.
5. Siembra en caldo Voges Proskauer/Rojo de metilo (Color ambar): Con el asa
bacteriolgica tomar un inoculo ligero del cultivo puro, suspenderlo en el caldo y
agitar el asa dentro de este. Dejar incubar el tubo
En la tercer sesin pudimos observar el re-aislamiento satisfactorio de las colonias
de las muestras del ro Lerma, se procedi a realizar las pruebas bioqumicas ya
enlistadas para as conocer caractersticas enzimticas de las colonias aisladas.
En relacin a las muestras de las unidades Cuajimalpa y Lerma de la UAM,
nuevamente no hubo desarrollo de bacterias 48 horas despus del cultivo.
CUARTA SESIN: Lectura de pruebas bioqumicas
1. Interpretacin de las pruebas de identificacin bioqumica: determinar los
resultados de las pruebas bioqumicas para saber el metabolismo de la bacteria
identificada y as saber su familia y especie
2. Manejo de material contaminado

COLONIA 1

COLONIA 2

MORFOLOGIA COLONIAL
FORMA

LOBULADO

ONDULADO

COLOR

BLANCA

ROJO

ELEVACION

PLANA

PLANA

BORDE

INDEFINIDO

BLANCO DELGADO

CONSISTENCIA

VISCOSA

VISCOSA

TAMAO

GRANDE

GRANDE

OPACIDAD

OPACO

-------------

SUPERFICIE

IRREGULAR

IRREGULAR

MORFOLOGA MICROSCPICA
TINCIN GRAM

NEGATIVA

NEGATIVA

PRUEBAS BIOQUIMICAS
CATALASA
OXIDASA
UREA

Positiva
Positiva

Positiva
Negativa

Positiva

Positiva

Positiva
Pico de flauta rojo y
Profundidad amarillo.
Medio Alcalino/cido
(Alc/A).
Positiva

Positiva
Pico de flauta rojo y
Profundidad amarillo.
Medio Alcalino/cido
(Alc/A).
Positiva

Ac. SULFHIDRICO

Negativa

Negativa

INDOL

Positiva

Positiva

ROJO DE METILO

Negativa

Negativa

VOGES PROSKAEUR

Negativa

Negativa

Positiva
Presenta crecimiento con
ligero cambio de
coloracin hacia un tono
azul verdoso

Positiva
Presenta ligero
crecimiento con cambio
de coloracin hacia un
tono azul intenso

TSI (hierro triple azcar)

MOVILIDAD

CITRATO DE SIMMONS

COLONIA 3
MORFOLOGIA COLONIAL
FORMA

LOBULADO

COLOR

ROSA

ELEVACION

CONVEXA

BORDE

IRREGULAR

CONSISTENCIA

VISCOSA

TAMAO

MEDIANA

OPACIDAD

SI

SUPERFICIE

IRREGULAR

MORFOLOGA MICROSCPICA
TINCIN GRAM

NEGATIVA
PRUEBAS BIOQUIMICAS

CATALASA

POSITIVA

OXIDASA

POSITIVA

UREA

NEGATIVA

GLUCOSA

POSITIVO

LACTOSA

POSITIVO

SACAROSA

POSITIVO

MOVILIDAD

POSITIVO

Ac. SULFHIDRICO

NEGATIVO

INDOL

NEGATIVO

ROJO DE METILO

POSITIVO

VOGES PROSKAEUR

NEGATIVO

CITRATO DE SIMMONS

POSITIVO

TSI
TRIBUTO I:
GNERO :
E.coli
GNERO:Shigella
Grupos: A,B,C
S.Sonnei
TRIBU
Edwarsiellae
GNERO:
Edwarsiella
E.Tarda
TRIBU
Salmonelleae
GENERO:
Salmonelleae
TRIBU
Citrobactereae
GENERO:
Citrobacter
C.freundii
C.koseri
TRIBU
Klebsielleae
GENERO:
Klebsiella
K.pneumoniae
k.axytoca
GENERO:
Enterobacter
E.aerogenes
E.cloacae

2:

Alc/
A
Alc/
A

GAS

H2S

RM

VP

-/+

Alc/
A

Alc/
A

IND

CIT

URE

3:

4:
Alc/
A

Alc/

5:

-/+

+/-

MOV

A
GENERO: Hafnia
H.alves

Alc/
A

GENERO: Pantoea
P.agglomerans
GENERO: Serratia
S. marcescens
TRIBU 6: Proteeae
GENERO: Proteus
P. vulgaris
P.mirabilis

Alc/
A

-/+

-/+

+/-

-/+

Alc/
A
Alc/
A

++
-

+/-

++
+

Alc/
A

GENERO:
Morganella
M.morganii

++
+

Alc/
A
Alc/
A
Alc/
A

GENERO:
Providencia
P.rettgeri
P.stuartii
P.alcalifaciens
TRIBU
Yersinieae
GENERO:
Yersinieae
Y. enterocolitica

-/+

++

+
+
7:

RESULTADOS:

Alc/
A

Alc/
A

+/-

+/-

CITRATO
DE
SIMMONS
CRECIMIENTO
OBSERVACIN DE BACILOS A 40x

DE

OBSERVACION DE
40X
CALDO UREA

HIERRO TRIPLE AZCAR

(CRECIMIENTO DE LA BACTERIA)

LA

BACTERIA

COCOS

VP-RM

CALDO SEMISOLIDO SIM

CULTIVO BACTERIANO

RESIEMBRA DEL