DEDICATORIA

A nuestros Padres quienes se han sacrificado

para poder llegar hasta donde estamos en este
momento y quienes lo dan todo por nosotros.
De igual forma a mis profesores, compaeros y
amigos quienes han sabido apoyarnos y darnos
nimos para continuar, pese a las dificultades
por las que uno pasa en el da a da

OBJETIVOS

Verificar la existencia de resveratrol en un vino tino.

Saber los beneficios y del resveratrol.
Manejar adecuadamente la tcnica de destilacin simple.
Poner todos nuestros conocimientos en practica para un buen desempeo

ndice
pg.
I. Introduccin

II. Objetivos..

III. Marco terico..

3.1 Historia........

3.2 Definicin....

3.3 Propiedades del resveratrol.

11

3.3.1 El resveratrol previene el colesterol y arteriosclerosis...

12

3.3.2 El resveratrol nos protege contra el cncer

12

3.3.3 El resveratrol conserva la vista..

12

3.3.4 EL resveratrol cuida de la salud mental........................

13

3.4 Efectos secundarios y advertencias

13

3.5 Mtodo Analitico del Resveratrol

15

3.5.1 EMtodo Analtico del Resveratrol........................

15

3.5.2 ETipo de Cromatografia HPLC........................

16

IV. Procedimiento experimental...

19

4.1 Destilacin simple................................................................

19

4.2 Materiales y reactivos

20

4.3 Procedimiento.

21

V. RESULTADOS..

26

VI. RECOMENDACIONES

27

VII. CONCLUSIONES

27

VIII. BIBLIOGRAFA ..

28

I
INTRODUCCIN
El resveratrol y todos estos compuestos estn presentes en el vino tinto (pero
no en el vino blanco), siendo este considerado como una de las fuentes ms
ricas de polifenoles de la dieta humana. Un vino tinto rico en taninos puede
contener hasta 3 g de polifenoles por litro y los bebedores moderados de vino
tinto absorben una cantidad de polifenoles superior a la media de la poblacin.
Tambin est presente en las frambuesas, moras, y en general todas las frutas
del bosque de color rojo. Se ha observado en ciertas poblaciones en las que a
pesar de sus dietas altas en grasas saturadas hay bajos ndices de enfermedad
cardiovascular debido al consumo frecuente de vino. El efecto benfico del vino
tinto se da con su consumo leve a moderado, con un mximo de 300 mL por
da. El contenido de resveratrol en 150 mL de vino tinto es de 0.29 a 1.89 mg y
una taza de uvas rojas contiene 0.24 1.25 mg.
La perdida celular, la acumulacin de clulas, mutaciones del ncleo
celular(ADN) y de las mitocondrias, la acumulacin de toxinas, intra y extra
celulares y el incremento de conexiones qumicas no deseadas son los pilares
del proceso de nuestro envejecimiento y de esta manera el proceso de
envejecimiento supone una puesta en marcha de numerosos factores.
El resveratrol al poder estimular y actuar de manera experimental sobre las
vas y las dianas (sirtuinas) de la longevidad, nos acerca la posibilidad de
prolongar la vida previniendo enfermedades que va acompaada a la edad.

II
RESUMEN
Muchos estudios recientes han reportado efectos benficos prometedores del
consumo de vino tinto. Los polifenoles en l poseen efectos protectores sobre
diversos sistemas corporales. Esta revisin pretende analizar los efectos
anticancergenos,
protectores
cardiovasculares,
neuroprotectores,
antidiabticos y antienvejecimiento que han sido descubiertos hasta el
momento. Se necesitan ms estudios que describan los precisos mecanismos
moleculares de estos potenciales efectos benficos del vino tinto en la salud de
la poblacin, ya que se trata de una alternativa prometedora y con pocas
reacciones adversas.
El resveratrol es un potente antioxidante natural del grupo de los polifenoles,
elaborado por ms de 70 especies de plantas en respuesta a situaciones
estresantes (radiacin ultravioleta, infecciones fngicas ). Se halla en las
partes leosas del pino, la vid, los frutos secos (nueces, cacahuetes), la piel de
las uvas y en el vino, especialmente el vino tinto, en las moras y otros frutos
silvestres. La cantidad de resveratrol en las diferentes fuentes es variable y
depende de varios factores, as por ejemplo, en la piel de la uva depende del
tipo de cultivo, origen geogrfico, etc. El resveratrol se encuentra en la
naturaleza en forma de ismero cis y trans, siendo la forma ms habitual en la
piel de la uva el transreveratrol. Se considera que dos copas de vino equivalen
a 400 mg de extracto de uva y que para obtener la dosis teraputica,
necesitaramos tomar 1.000 botellas de vino. En humanos, aunque el transresveratrol parece absorberse bien, cuando se toma por va oral su
biodisponibilidad es relativamente baja debido a su rpido metabolismo y
eliminacin renal (vida media aproximada de 8 horas) consiguiendo unos
niveles muy bajos, tanto intracelularmente como en plasma . Los estudios han
demostrado un polimorfismo en la absorcin intestinal, as como en la
metabolizacin heptica segn las especies utilizadas en los estudios. El
resveratrol es capaz de estimular la familia de genes SIRT1, que codifican las
sirtuinas (histonas deacetilasas NAD-dependientes), y por lo tanto poner en
marcha los procesos metablicos relacionados con la duracin de la vida, que
son los mismos que se desencadenan con regimenes hipocalricos,
mimetizando por ello la restriccin calrica. Los estudios realizados con
resveratrol muestran que presenta efectos antioxidantes - antienvejecimiento,
5

antitrombognicos, antiinflamatorios, antitumorales,

antimicrobianos (bacterias, virus, hongos).

antiosteoporticos

III
MARCO TERICO:
3.1 Historia
El resveratrol es un compuesto natural que se encuentra en ms de setenta
especies de plantas, entre ellas las nueces, las uvas, los pinos y ciertos tipos de
vid, como tambin en el vino tinto. Se cree que tenga una funcin importante
en la prevencin de la cardiopata. Gran parte de la investigacin se ha
focalizado en los beneficios que el resveratrol podra tener para la salud debido
a la "paradoja francesa", el descubrimiento de que el ndice de mortalidad es
ms bajo en Francia, donde es comn el consumo de vino tinto.
Los estudios preliminares han demostrado que el resveratrol posee efectos
antioxidantes, anticancergenos, antivricos y antibacterianos. Dado que el
resveratrol se encuentra en las uvas y los vinos, la investigacin preliminar se
focaliz en la relacin entre el resveratrol y los posibles beneficios para la salud
cardaca del consumo moderado de vino. No obstante, esta investigacin se ha
expandido

para

examinar

los

efectos

del

resveratrol

sobre

muchas

enfermedades, tales como el cncer, las infecciones virales y bacterianas, la

enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.
Si bien algunos estudios sugieren que el consumo de vino podra reducir el
riesgo de sufrir cncer o cardiopata, en este momento no existen estudios de
alta calidad en seres humanos que apoyen este beneficio.
3.2 Definicin:

El resveratrol es una fitoalexina presente en las uvas y en productos derivados

como vino y mosto, y en otros alimentos como las ostras, el man, (cacahuete)
y las nueces. Es producido por la planta como defensa ante ataques fngicos.
Cuando una planta es infectada por un agente patgeno, la primera respuesta
est localizada en las clulas que entran en contacto con dicho agente. Estas
clulas, en proximidad con el patgeno, reconocen su estructura, o como en el
caso de virus, algunas de las molculas fundamentales para el desarrollo de la
actividad vrica. La respuesta primaria ms frecuente de la planta es la
reaccin por necrosis en la que las clulas infectadas por el agente patgeno
mueren, fenmeno conocido como apoptosis o PCD (Programed Cell Death).

Otra, conocida como respuesta secundaria, se da en las clulas adyacentes a la

clula infectada, reconociendo las molculas difundidas desde la clula
primaria atacada y producidas en la interaccin primaria. Estas molculas que
alertan a las celulas adyacentes de la infeccin reciben el nombre de molculas
elicitadoras. El tercer tipo de respuesta defensiva es la asociada con una
resistencia adquirida sistmicamente e inducida hormonalmente en la planta, y
a travs de la que la planta forma compuestos (fitoalexinas), que tratarn de
frenar la actividad patgena.
El resveratrol tambin se produce por sntesis qumica. El resveratrol es
actualmente un tema de numerosos estudios sobre sus efectos en animales y
seres humanos. Los efectos del resveratrol en la esperanza de vida de muchos
organismos modelo siguen en controversia, con efectos inciertos en moscas de
la fruta, los gusanos nematodos y los peces de corta vida. En experimentos con
ratas y ratones se han reportado efectos beneficiosos anticancergenos,
antienvejecimiento,
hipocolesterolemiante,

antiinflamatorios,
y

otros

beneficios

antifibrtico,hipoglucemiante,
cardiovasculares.

Tambin

se

investiga sobre su utilidad para la mejora del equilibrio y la movilidad en

personas mayores. El resveratrol mitigara el dao producido por los radicales
libres,

producto de la degeneracin de la dopamina,

aumentando la

supervivencia celular. La mayor parte de estos resultados an no se han

replicado en los seres humanos.

En el nico ensayo positivo en humanos, han sido necesarias dosis

extremadamente altas (3-5 g) de resveratrol en una frmula patentada, para
bajar significativamente el nivel de azcar en la sangre.A pesar de su difusin
comercial alegando los efectos antienvejecimiento del resveratrol, no existe
evidencia cientfica para la aplicacin de estos crditos en mamferos.

Caractersticas qumicas
El nombre formal del resveratrol de acuerdo a la IUPAC es E-5 (4-hidroxiestiril)
benceno -1,3-diol. Varios aspectos de la qumica descriptiva del resveratrol an
se encuentran en estudio. Este compuesto existe en dos formas isomricas:
8

cis-(Z) y trans-(E); la forma trans, puede convertirse por isomerizacin a la

forma cis cuando se expone a radiacin ultravioleta.
RESVERATROL:
Estado Fsico : solido
Sinnimos: trans-Resveratrol. trans-3,4,5-Trihidroxiestilbeno.
Formula Molecular: C14H12O3
Peso Molecular: 228,24
Descripcin:

Antioxidante

natural

extrado

de

la

raz

de

Polygonum

cuspidatum (China).
Datos Fsico-Qumicos: Polvo beige o marrn claro. Insoluble en agua,
soluble en etanol.
Punto de fusin: 253 255 C.
Punto de ebullicin : 449.12 C at 760 mmHg
Densidad : 1.36 g/cm3

Polifenoles.
Los polifenoles son un conjunto heterogneo de molculas que comparten la
caracterstica de poseer en su estructura varios grupos bencnicos sustituidos
por funciones hidroxlicas.
Los compuestos fenlicos del vino incluyen, entre otros, a los cidos fenlicos
(cumarnico, cinmico, cafeico, gentsico, ferlico y vanlico) y flavonoides

(catequinas, quercitina y resveratrol), los que son sintetizados por una va

metablica comn a partir de la fenilalanina. Todos provienen de las uvas
moradas, particularmente de su piel, que los producen como una forma de
proteccin contra las relativamente altas temperaturas a que estn expuestas.
Los polifenoles son importantes para la fisiologa de las plantas pues
contribuyen a la resistencia de microorganismos e insectos y ayudan a
preservar su integridad por su continua exposicin a estresantes ambientales,
incluyendo radiaciones ultravioletas y relativamente altas temperaturas.
En el ser humano, parte de la actividad biolgica de los polifenoles se debe a
su capacidad de formar parte del sistema antioxidante celular.

Resveratrol y quercetina, los flavonoides del vino tinto ms

estudiados
Se ha planteado que la nica propiedad cardioprotectora del vino tinto radica
en la accin de sus flavonoides, mnimos en el vino blanco, no as en la
Champaa. Los mejores flavonoides investigados son el resveratrol y la
quercetina, con propiedades antioxidantes ms potentes que el alfa tocoferol.
El resveratrol

es una fitoaloxina con

varias propiedades biolgicas y

farmacolgicas y del que depende el color caracterstico del vino

Metabolismo de compuestos fenlicos por bacterias lcticas del vino
Los compuestos fenlicos son componentes muy importantes del vino puesto
que contribuyen en gran medida a sus caractersticas sensoriales (por ejemplo,
en el color, aroma y astringencia), bien directamente o mediante su interaccin
con protenas, polisacridos u otros compuestos fenlicos.
La composicin fenlica del vino depende del tipo de uva utilizada para la
vinificacin, de la extraccin, de los procesos utilizados durante la elaboracin
del vino y de las reacciones qumicas que ocurren durante el envejecimiento
del vino.1 Depende de numerosos factores entre los que se encuentran la
variedad de uva (blanca o tinta), el modo de estrujado, la posible inclusin o

10

eliminacin antes de la fermentacin de los hollejos, semillas y pulpa de la uva

(especialmente en las variedades tintas), el tipo de vinificacin (temperatura y
tiempo de maceracin) y el envejecimiento. Un mayor tiempo de fermentacin
con los hollejos, semillas y pulpa permite la extraccin de un mayor nmero de
compuestos fenlicos al vino porque el etanol producido acta como un
solvente para la extraccin de los fenoles. La composicin fenlica tambin se
modifica durante la fermentacin por la actividad de las levaduras las cuales
son capaces de metabolizar algunos de los compuestos fenlicos presentes. Y
en ltimo trmino, el contacto del mosto y del vino con la barrica de madera
tambin contribuye a la presencia de compuestos fenlicos en el vino. As,
algunos fenoles sencillos, como flavonoides y taninos hidrolizables son
extrados de la madera al vino.
ANTOCIANINA DE LA UVA Y EL VINO
En viticultura, los antocianos son un grupo de pigmentos rojos, morados y
azules que se forman en la piel de la uva tinta y pertenecen a los flavonoides,
polifenoles solubles en agua.
Estos pigmentos se comienzan a generar durante el envero en los hollejos de
las uvas para protegerlas de la radiacin solar, plagas, oxidaciones y la
degeneracin celular.
En enologa, estos antocianos la mayor parte pasan al vino durante la
maceracin, siendo responsables del color del vino tinto, y se fijan por reaccin
con otros compuestos fenlicos formando polimeros y coloides.

Los que contienen glucosa se denominan antocianinas (mayoritarios en vinos

tintos) y los que no, antocianidinas.
Son muchos los factores que influyen en el grado de coloracin que transmiten
a los vinos, como son la variedad de uva empleada, grado de maduracin,
tcnicas de extraccin, acidez fija, pH, etc. En general, a menor pH y acidez
fija, ms intensidad de color.

11

Los antocianos son sustancias que presentan una gran capacidad antioxidante
y que ofrecen numerosos beneficios para la salud. Ambos componentes
influyen decisivamente tanto en la calidad como en el color del vino, recolectar
las uvas en su momento ptimo de maduracin y conocer el contenido de
polifenoles y antocianinos es primordial para conseguir vinos de alta calidad.

3.3 Propiedades del resveratrol

Enfermedades cardiovasculares: este componente, junto con los flavonoides
catequinas, galocatequinas y antocianinas, es responsable de que los que
deben este lquido presente menos ataques al corazn.
La razn se halla en las propiedades que tienen estos polifenoles junto otros
componentes como los taninos, para disminuir el nivel de colesterol y
triglicridos en la sangre y fluidificarla, impidiendo la aparicin de trombos.
Todo

ello

parece

demostrar

que

aquellas

personas

que

consumen

moderadamente y habitualmente vino negro (tinto), tiene menos probabilidad

de sufrir accidentes vasculares, entre los que se encontraran los infartos de
miocardio, apoplejas, trombosis, mala circulacin, etc. Segn estos doctores,
son los polifenoles los que le otorgan esta propiedad.

12

3.3.1 El resveratrol previene el colesterol y arteriosclerosis

Los polifenoles son capaces de reducir hasta en un a30% la arteriosclerosis y
prevenir en un96% la aparicin de colesterol malo en la sangre.
Beber tres copas al da para los hombres y dos para las mujeres , junto con el
resto de alimentos , puede ser una buena manera de curar la salud del corazn
segn un estudio llevado a cabo en el hospital clnico de Barcelona.
3.3.2 El resveratrol nos protege contra el cncer
Adems de sus propiedades protectores del aparato circulatorio, se ha
comprobado

que

este

componente

posee

propiedades antioxidantes

anticancerosas, especialmente en los que se refiere a los tumores de pecho,

pie y prstata por su capacidad para impedir su formacin o inhibir el
desarrollo de las clulas cancerosas.
3.3.3 El resveratrol conserva la vista
Estas mismas propiedades son las que parecen influir positivamente en la
salud de la vista. Parece ser que los antioxidantes impiden el ataque de los
radicales libre a las clulas de la retina que son muy sensible a la oxidacin.
Valor antioxidante del resveratrol permite tener un efecto protector de la salud
ocular y evitar la aparicin de enfermedades es la visin, especialmente
aquellas que responde a un carcter degenerativo, como la perdida de
agudeza visual, producida por degeneracin macular, un hecho muy habitual a
partir del momento en que una persona se hace mayor.

3.3.4 EL Resveratrol cuida de la salud mental

Igualmente, se est estudiando la posibilidad que este componente puede
tener un efecto positivo en la prevencin de Alzheimer y otros problemas
neuronales como la demencia.

13

Estudios realizados hasta ahora parecen concluir que los que deben de una
manera habitual y moderada vino tinto tienen menos probabilidades de
desarrollar este tipo de enfermedad.
3.4 Efectos secundarios y advertencias

La investigacin limitada en los seres humanos sugiere que el resveratrol

podra ser seguro. Se encuentra comnmente en los alimentos y las
bebidas. Existe poca informacin de seguridad disponible sobre los
suplementos

de

resveratrol

solos.

En

general,

los

estudios

han

descubierto que el resveratrol se tolera bien y que son leves los efectos
secundarios.

El resveratrol podra aumentar el riesgo de hemorragia. Se sugiere

precaucin en pacientes con trastornos hemorrgicos o en aquellos que
consumen

medicamentos

que

podran

aumentar

el

riesgo

de

hemorragia. Podra ser necesario realizar ajustes en la dosis.

El resveratrol podra disminuir la presin arterial. Se sugiere precaucin

en los pacientes que ingieren medicamentos, hierbas o suplementos que
reducen la presin arterial.

El resveratrol podra afectar la sensibilidad a la insulina y los niveles de

azcar en la sangre. Se sugiere precaucin en las personas con diabetes
o hipoglucemia y en aquellas que ingieren medicamentos, hierbas o
suplementos que afectan los niveles de azcar en la sangre. Es posible
que sea necesario que los niveles de azcar en la sangre sean

controlados por un profesional de la salud calificado, incluyendo un

farmacutico; puede ser necesario realizar ajustes en la medicacin.

Usar con precaucin en las personas que toman agentes para regular la
frecuencia cardaca, dado que el resveratrol podra disminuir la
frecuencia cardaca.

14

Usar con precaucin en dosis mayores a 2,5 gramos por da, dado que
las altas dosis podran provocar malestar estomacal y diarrea.

Usar con precaucin en las personas con trastornos hormonales o en

aquellas

bajo

estrogenoterapia.

El

resveratrol

podra

afectar

el

metabolismo de los estrgenos.

Usar con precaucin en las personas que han sufrido un accidente

cerebrovascular o con problemas de memoria. El resveratrol podra
causar deterioro de la memoria.

Usar con precaucin en las personas con trastornos inmunitarios o en

aquellas que toman agentes que podran afectar el sistema inmunitario.
El resveratrol podra afectar la funcin inmunitaria.

Evitar el uso del vino tinto, que contiene resveratrol, en las personas con
antecedentes de alcoholismo.

Evitar el uso del vino tinto, que contiene resveratrol, en las mujeres
embarazadas. El Colegio Americano de Obstetras y Gineclogos (ACOG)
no recomienda el consumo de vino tinto en las mujeres embarazadas,
dado que el alcohol se transfiere al feto y puede provocar un dao
potencialmente mortal.

Evitar el consumo de grandes cantidades de vino tinto como una fuente

de resveratrol, dado el contenido de alcohol. El consumo de grandes
cantidades de vino tinto podra tener efectos negativos sobre el hgado.
La Asociacin Americana del Corazn (AHA) recomienda el consumo de
hasta dos bebidas diarias (ocho onzas de vino) para los hombres y una
bebida por da (cuatro onzas de vino) para las mujeres y advierte que el
consumo en exceso podra aumentar el riesgo de alcoholismo, presin
arterial alta, obesidad, accidente cerebrovascular, cncer de mama,
suicidio y accidentes.

Evitar en caso de alergia o hipersensibilidad al resveratrol, las uvas, el

vino tinto o los polifenoles del vino tinto. En un estudio de caso, se

15

inform una reaccin alrgica de la piel al pentilenglicol en una crema

hidratante, con sensibilidad posiblemente asociada al resveratrol.

3.5. Mtodo Analtico del Resveratrol

3.5.1.Cromatografa lquida de alta eficacia.- La Cromatografa lquida de
alta eficacia o High performance liquid chromatography (HPLC) es un tipo de
cromatografa en columna utilizada frecuentemente en bioqumica y qumica
analtica. Tambin se la denomina a veces Cromatografa lquida de alta presin
o High pressure liquid chromatography (HPLC), aunque esta terminologa se
considera antigua y est en desuso. El HPLC es una tcnica utilizada para
separar los componentes de una mezcla basndose en diferentes tipos de
interacciones qumicas entre las substancias analizadas y la columna
cromatogrfica.
Principal.-

En

la HPLC

isocrtica el compuesto pasa por la columna

cromatogrfica a travs de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con

pequeas partculas redondeadas con ciertas caractersticas qumicas en su
superficie) mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a travs
de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y
sus

componentes

se

retrasan

diferencialmente

dependiendo

de

las

interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que

adelantan por la columna. El grado de retencin de los componentes de la
muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composicin de la fase
estacionaria y de la fase mvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido
de la columna se denomina tiempo de retencin y se considera una propiedad
identificativa caracterstica de un compuesto en una determinada fase mvil y
estacionaria. La utilizacin de presin en este tipo de cromatografas
incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro la columna y reduce
as su difusin dentro de la columna mejorando la resolucin de la
cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua, el metanol y el
16

acetonitrilo. El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el

cido trifluoroactico, que ayudan a la separacin de los compuestos. Una
mejora introducida a la tcnica de HPLC descrita es la variacin en la
composicin de la fase mvil durante el anlisis, conocida como elucin en
gradiente. Un gradiente normal en una cromatografa de fase reversa puede
empezar a un 5% de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en
25 minutos. El gradiente utilizado vara en funcin de la hidrofobicidad del
compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una
funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil utilizada respecto a la
afinidad por la fase estacionaria. En el ejemplo, utilizando un gradiente
agua/acetonitrilo

los

compuestos

ms

hidroflicos

eluirn

mayor

concentracin de agua, mientras que los compuestos ms hidrofbicos eluirn

a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo, hace falta realizar una
serie de pruebas previas por tal de optimizar el gradiente de forma que permita
una buena separacin de los compuestos. nlisis de polifenoles en los vinos
mediante tcnicas de separacin .
3.5.2. Tipos de Cromatografa HPLC
a) Cromatografa de fase normal .- La cromatografa de fase normal o
"Normal phase HPLC" (NP-HPLC) fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en
el campo de la qumica, y se caracteriza por separar los compuestos en base a
su polaridad. Esta tcnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase mvil
apolar, y se utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar. El
compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de
adsorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la
interaccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en
comparacin a la fase mvil) aumenta el tiempo de retencin. La fuerza de
interaccin no slo depende de los grupos funcionales del compuesto de
inters, sino tambin en factores estericos de forma que los ismeros
estructurales a menudo se pueden diferenciar el uno del otro. La utilizacin de
disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de retencin de
los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos tienden a
aumentar el tiempo de retencin. La NP-HPLC cay en desuso a los aos
setenta con el desarrollo del HPLC de fase reversa o Reversed-phase HPLC
17

debido a la falta de reproductibilidad de los tiempos de retencin puesto que

los disolventes prticos cambiaban el estado de hidratacin de la silica o
almina de la cromatografa.
b) Cromatografa de fase reversa.-

La HPLC de fase reversa (RP-HPLC)

consiste en una fase inmvil apolar y una fase mvil de polaridad moderada.
Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo de cromatografa es
la silica tratada con RMe2SiCl, dnde la R es una cadena alquil tal como
C18H37 C8H17. El tiempo de retencin es mayor para las molculas de
naturaleza apolar, mientras que las molculas de carcter polar eluyen ms
rpidamente. El tiempo de retencin aumenta con la adicin de disolvente
polar a la fase mvil y disminuye con la introduccin de disolventes ms
hidrofbicos. La cromatografa de fase reversa es tan utilizada que a menudo
se lo denomina HPLC sin ninguna especificacin adicional. La cromatografa de
fase reversa se basa en el principio de las interacciones hidrofbicas que
resultan de las fuerzas de repulsin entre un disolvente relativamente polar, un
compuesto relativamente apolar, y una fase estacionaria apolar. La fuerza
conductora en la unin del compuesto a la fase estacionaria es la disminucin
del rea del segmento apolar del analito expuesto al disolvente.Este efecto
hidrofbico est

dominado por la disminucin de la energa libre de la entropa asociada con la

minimizacin de la interfase compuesto-disolvente polar. El efecto hidrofbico
disminuye con la adicin de disolvente apolar a la fase mvil. Esto modifica el
coeficiente de particin de forma que el compuesto se mueve por la columna y
eluye. Las caractersticas del compuesto de inters juegan un papel muy
importante en la retencin. En general, un compuesto con una cadena alquil
larga se asocia con un tiempo de retencin mayor porque aumenta la
hidrofobicidad de la molcula. Aun as, las molculas muy grandes pueden ver
reducida la interaccin entre la superficie del compuesto y la fase estacionaria.
El tiempo de retencin aumenta na Beln Casares Fauln

con el rea de

superficie hidrofbica que suele ser inversamente proporcional al tamao del

compuesto. Los compuestos ramificados suelen eluir ms rpidamente que sus

18

ismeros lineales puesto que la superficie total se ve reducida. Aparte de la

hidrofobicidad de la fase mvil, otras modificaciones de la fase mvil pueden
afectar la retencin del compuesto; por ejemplo, la adicin de sales inorgnicas
provoca un aumento lineal en la tensin superficial, y como que la entropa de
la interfase compuesto-disolvente est controlada precisamente por la tensin
superficial, la adicin de sales tiende a aumentar el tiempo de retencin. Otra
variable importante es el pH puesto que puede cambiar la hidrofobicidad del
compuesto. Por este motivo, la mayora de mtodos utilizan un tampn como
el fosfato de sodio para controlar el valor del pH. Estos tampones controlan el
pH, pero tambin neutralizan la carga o cualquiera resto de silica de la fase
estacionaria que haya quedado expuesta y actan como contraiones que
neutralizan la carga del compuesto. El efecto de los tampones sobre la
cromatografa

puede

variar,

pero

en

general

mejoran

la

separacin

cromatogrfica. Las columnas de fase reversa se echan a perder con menor

facilidad que las columnas de silica normales. Aun as, muchas columnas de
fase reversa estn formadas por silica modificada con cadenas alquil y no se
deben utilizar nunca con bases en medio acuoso puesto que stas podran
daar el esqueleto de silica subyacente. Las columnas se pueden utilizar en
cidos en medio acuoso pero no deberan estar expuestas demasiado tiempo al
cido porque puede corroer las partes metlicas del aparato de HPLC.
c) Cromatografa de exclusin molecular.- La cromatografa de exclusin
molecular, tambin conocida como cromatografa por filtracin en gel, separa
las partculas de la muestra en funcin de su tamao. Generalmente se trata
de una cromatografa de baja resolucin de forma que se suele utilizar en los
pasos finales del proceso de purificacin. Tambin es muy til para la

determinacin de la estructura terciaria y la estructura cuaternaria de las

protenas purificadas. La cromatografa de filtracin molecular es un mtodo de
cromatografa en columna por el cual las molculas se separan en solucin
segn su peso molecular, o ms precisamente, segn su radio de Stokes. En
esta

cromatografa,

la

fase

estacionaria

consiste

en

largos

polmeros

entrecruzados que forman una red tridimensional porosa. A los fines prcticos,

19

la columnas se empaquetan con pequeas partculas esferoidales formadas por

esos polmeros entrecruzados. En consecuencia, estas partculas son porosas, y
el tamao de los poros es tal que algunas molculas (las demasiado grandes)
no podrn ingresar a esos poros, en tanto que otras (las suficientemente
pequeas) podrn pasar libremente. Los poros quedan conectados formando
una malla o red, lo cual determina una serie de caminos a ser recorridos por las
molculas que acceden al interior de esta.
d)

Cromatografa

de

intercambio

inico.-

En

la

cromatografa

de

intercambio inico, la retencin se basa en la atraccin electrosttica entre los

iones en solucin y las cargas inmovilizadas a la fase nlisis de polifenoles en
los vinos mediante tcnicas de separacin estacionaria. Los iones de la misma
carga son excluidos mientras que los de carga opuesta son retenidos por la
columna. Algunos tipos de intercambiadores inicos son:
i) Resinas de poliestireno,
ii) intercambiadores inicos de celulosa y dextranos (geles) y
iii) Silica porosa o vidrio de tamao de poro controlado.
En general los intercambiadores inicos favorecen la unin de iones elevada
carga y radio pequeo. Un incremento en la concentracin del contrain
(respeto a los grupos funcionales de la resina) reduce el tiempo de retencin.
Un incremento en el pH reduce el tiempo de retencin en las cromatografas de
intercambio catinico mientras que una disminucin del pH reduce el tiempo
de retencin en las cromatografas de intercambio aninico. Este tipo de
cromatografa es ampliamente utilizado en las siguientes aplicaciones:
purificacin de agua, concentracin de componentes traza, Ligand-exchange
chromatography, Ionexchange chromatography of proteins, High-pH anionexchange chromatography of carbohydrates and oligosaccharides, etc.
e) Cromatografa basada en bioafinidad.- Este tipo de cromatografa se
basa en la capacidad de las sustancias biolgicamente activas de formar
complejos estables, especficos y reversibles. La formacin de estos complejos
implica la participacin de fuerzas moleculares como las interacciones de Van
der

Waals,

interacciones

electrostticas,
20

interacciones

dipolo-dipolo,

interacciones hidrofbicas y puentes de hidrgeno entre las partculas de la

muestra y la fase estacionaria.

IV PARTE EXPERIMENTAL
4.1 Destilacin simple.
Utilizamos el equipo de destilacin simple consta de un baln de destilacin
provisto de un termmetro .el baln de destilacin va unido a un refrigerante
por el circula agua en contracorriente. Finalmente el extremo inferior del
refrigerante se une a otro baln donde se recoge el destilado., se pueden
separar mezclas de dos componentes hierba con una diferencia de puntos de
ebullicin de al menos 60-80C Y mezcla de sustancias cuyo punto de
ebullicin diferente de 30-60C

Equipo de destilacin simple

EQUIPOS
Cocinilla electrica

4.2 Materiales y reactivos

21

Materiales
Matraz
Probeta
Tubos de ensayo
Gradilla
Beaker

Reacticvos
FeCl3
Granallas de magnesio
HCl
Gelatina
NaOH% EN H2O.

INSUMOS
Vino tinto tannat fco 750 ml

4.3 procedimiento
1. Se mide 125ml de la muestra (vino tinto) y colquelo en el balos de
destilacin, adicione ncleo de ebullicin. Amado ya el equipo de
22

destilacin e inicie el calentamiento en una ebullicin de no ms 76C

para retirar el alcohol.

2. Luego de haber destilado y separado el etanol del vino se colocar en

beaker.
3. La muestra del baln destilado se retira y se pone en un beaker .

23

4.

luego colocar la muestra en una cocinilla elctrica hasta que se evapore

el lquido.
5. Obteniendo la muestra en solido dejar enfriar.

24

6. Cuando la muestra este frio colocar 10ml aproximado de etanol obtenido

por la destilacin y agitar hasta obtener color.

7. Colocar en 5 tubos de ensayo, 2ml aproximadamente en cada tubo.

8. Enumeramos nuestros tubos

25

1.tubo de muestra
2 .tubo con la muestra
3. tubo con la muestra
4. tubo con la muestra
5. tubo con la muestra

1. tubo de muestra

+
+
+
+

FeCl3 (gotas)
granallas de magnesio + HCl ( gotas)
gelatina 2ml
NaOH% EN H2O.

2 .tubo colocar FeCl3

4. tubo colocar gelatina 2ml

3.tubo con granallas Mg + HCl

5. tubo colocar NaOH% EN H2O.

26

V. RESULTADOS

Tubo de muestra versus los reactivos:

Tubo 2: FeCl3
Presenta un color mas rojo, debido a que el cloruro frrico FeCl 3 reconoce
la presencia de compuestos fenlicos.
tubo 3: granallas de magnesio + HCl
cambia a un color rojo intenso, se ioniza rompiendo en lances, libera
energa. el Magnesio + HCl
flavonoides

(compuestos

(reactivo de

fenlicos

que

se

shinoda)reconoce
les atribuye

actividad

antioxidante) .se observa burbujeo.

tubo 4: gelatina
Hay presencia de turbidez, pequeas partculas de slido formando un

precipitado lo cual nos indica que hay presencia de taninos.

Tubo 5: NaOH%
Cambia a un color verde petrleo, lo cual indica que hay presencia de
Antocianinas

que es el que le da color al vino. Realiza una reaccin

acido-base
Por los flavonoides podemos decir que hay presencia de RESVERATROL.

27

VI. RECOMENDACIONES

Par poder armar el equipo destilacin simple es necesario verifica que

este bien sujetado a una soporte universal.

Percatarse de que las mangueras estn bien conectadas al tubo

refrigerante para evitar que se derrame.

Ver que el baln de destilacin este bien limpio y seco antes de empezar
a calentar.

VII. CONCLUSIONES

Se ha observado interesantemente la paradoja de que el resveratrol a

dosis bajas promueve la sobrevida celular, lo que le confiere sus efectos
benficos cardiovasculares y neuroprotectores, y a dosis altas promueve

la apoptosis, lo que le da sus propiedades anticancergenas.

El uso de resveratrol como tratamiento farmacolgico de diversas
enfermedades y factores de riesgo asociados con el envejecimiento es
una alternativa prometedora. Aunque an no se han terminado de
entender sus mecanismos de accin, especificidad tisular, dosis de
administracin y duracin de la terapia, es un objetivo bastante
alcanzable y necesario. Ya que la literatura cientfica presenta amplia
evidencia a favor de sus beneficios preventivos y teraputicos, el inters
pblico se ha expandido ampliamente, y la investigacin contina
amplindose

28

VIII. BIBLIOGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/Resveratrol
http://www.botica.com.py/informes/index.php?title=Resveratrol
http://www.binasss.sa.cr/revistas/rmcc/608/art19.pdf
http://www.botica.com.py/informes/index.php?title=Resveratrol
http://www.binasss.sa.cr/revistas/rmcc/608/art19.pdf
http://www.acofarma.com/admin/uploads/descarga/4089e34a71da3dd006ab3b348af729c9f46fad111885/main/files/Resveratrol.p

df
https://upcommons.upc.edu/pfc/bitstream/2099.1/10677/4/PFC_VOL_IV.p
df

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