Figure 4.

(a) First-order kinetics for the hydrolysis reaction of astaxanthin esters at

concentrations of 0. 0046 (A), O. 0094 (A), O. 0148 (0), O. 0180 ( ), O. 0210 (D), O. 0264
(I), and 0. 0362 M (X) of NaOH in the reaction mixtures at 22 C. (b) Effect of NaOH
concentration in reaction mixture on rate constant of hydrolysis reaction of astaxanthin
esters with the total astaxanthin concentrations of 10. 2 (0) and 29. 5 mg/L ( ) in
pigment extracts. (SE 12. 1% ; n = 3.)

Figure 4b shows the effect of NaOH concentration in reaction mixtures on the rate of
hydrolysis reaction of astaxanthin esters (Tt = 36. 576 cl. OH-0. 0355 ; R : Z : 0. 9804).
Different concentrations of pigment extracts (the astaxanthin concerntrations were
between 10 and 100 mg/L) were used to test the effect of the initial concentration of
astaxanthin esters on the rate constant of the hydrolysis reaction. The best fit of the
experimental data at two initial concentrations of astaxanthin esters shows that the rate
constant of the hydrolysis reaction of astaxanthin esters is independent of the initial
concentration of astaxanthin esters (Fgure 4b).
The results indicate that for the saponification of different concentrations of pigment
extracts (10-100 mg/L astaxanthin esters), the amount of NaOH and the saponification
time needed to complete the hydrolysis should be similar.
Degradation Reaction of Astaxanthin. Figure 5a shows the changes in astaxanthin
content in the trans-astaxanthin. A higher concentration of NaOH would result in a higher
rate of astaxanthin degradation reaction. As shown in Figure 5a, the plots of astaxanthin
content versus time give a straight line, indicating that the degradation of astaxanthin is
a zero-order reaction; that is, the rate constant k can be represented by
k = xt = k Ch : S'-C.. Jtt

(6)

Figure 5. (a) Changes in trans-astaxanthin content during degradation at concentrations

of 0. 0135 (0), O. 0180 (A), O. 0355 (a), and 0. 0568 M (I) of NaOH in the reaction
mixtures at 22 0 C. (b) Effect of NaOH concentration in reaction mixture on rate constant
of degradation reaction of staxanthin. (SE 1. 8% ; n = 3.)

Figure 6. Changes in free trans-astaxanthin content during saponification with 0. 0094 M

NaOH in the reaction mixtures at 22 and 40 C.

The result was similar to the degradation of B-carotene and capsanthin in anhydrous
media (Minguez-Mosquera and Perez-Galvez, 1995). Figure 5b shows the effect of NaOH
concentration in reaction mixtures on the reaction rate of astaxanthin degradation (k =
36. 937 CNaoH+ 0. 1055 ; R = 0. 9981).

Effect of Temperature on Astaxanthin Productivity. To test the effect of temperature

on the hydrolysis of astaxanthin esters and the stability of astaxanthin, an experiment to
hydrolyze astaxanthin esters at 40 C was carried out. Figure 6 shows the progress of
hydrolysis of astaxanthin esters at 22 and.. 40 C, respectively, with 0. 0094 M NaOH in
reaction mixtures.
The results indicated that a higher temperature (e. g., 40 C) favored the hydrolysis of
astaxanthin esters, but the degradation of astaxanthin was also promoted markedly at
the same time (Figure 6). Therefore, high temperature should be avoided during the
hydrolysis of astaxanthin esters.
Stability of Carotenoids to NaOH. Changes in the concentrations of lutein, B-carotene,
and canthaxanthin during saponification were determined for monitoring the stability of
these carotenoids to NaOH. Figure 7 indicated that, unlike astaxanthin, other carotenoids
such as lutein, B-carotene, and canthaxanthin were stable to hydroxide, which is in good
agreement with the results reported by Ittah et al. (1993) and MinguezMosquera and
Perez-Galvez (1998), Because the degradation of carotenoids can be relieved by applying
antioxidants to the solution during saponification (Lietz and Henrv, 1997), the presence of
a large amount of astaxanthin, the strong antioxidant, might be used to explain the
phenomenon that no losses of lutein, B-carotene, and canthaxanthin were observed.
Free astaxanthin is preferable to astaxanthin esters in terms of the utilization by animals
(Johnson and An 1991). It is not clear how astaxanthin esters are synthesized within the
cells. Nevertheless, esterification of astaxanthin with fatty acids may be enhanced by
light induction because the astaxanthin concentrated within lipid bodies in the cytosol ofthe algal cell can maximize the photoprotective efficiency (Yong and Lee, 1991 ; Rise et
al., 1994). Consequently, it is likely a biological process can be developed to maximize
the production of free astaxanthin through controlling the environmental conditions or
isolating mutants that do not esterify the astaxanthin, which would be preferred over a
downstream processing method.

La figura 4. (a) cintica De primer orden para la reaccin de hidrlisis de steres

astaxanthin en las concentraciones de 0. 0046 (A), O. 0094 (A), O. 0148 (0), O. 0180 (),
O. 0210 (D), O. 0264 (I), y 0. 0362 M (X) de NaOH en las mezclas de reaccin en 22 C.
(b) Efecto de concentracin NaOH en mezcla de reaccin sobre tarifa constante de
reaccin de hidrlisis de steres astaxanthin con el total astaxanthin las concentraciones
de 10. 2 (0) y 29. 5 mg/L () en extractos de pigmento. (SE 12. El 1 %; n = 3.) la Figura 4b
muestra el efecto de concentracin NaOH en mezclas de reaccin sobre la tarifa de
reaccin de hidrlisis de steres astaxanthin (Tt = 36. 576 cl. Ah 0. 0355; R: Z: 0. 9804).
Las concentraciones diferentes de extractos de pigmento (las concentraciones del
astaxanthin estaban entre 10 y 100 mg/L) fue usado probar el efecto de la concentracin
inicial de steres astaxanthin sobre la tarifa constante de la reaccin de hidrlisis. El
mejor ataque de los datos experimentales en dos concentraciones iniciales de steres
astaxanthin muestra que la tarifa constante de la reaccin de hidrlisis de steres

astaxanthin es independiente de la concentracin inicial de steres astaxanthin (Fgure

4b).
Los resultados indican que para la saponificacin de diferentes concentraciones de
extractos de pigmentos (steres de 10-100 mg / L de astaxantina ) , la cantidad de NaOH
y el tiempo de saponificacin necesario para completar la hidrlisis deben ser similares.
Reaccin de degradacin de astaxantina. La figura 5a muestra los cambios en el
contenido de astaxantina en el trans - astaxantina. Una mayor concentracin de NaOH se
traducira en una mayor tasa de reaccin de degradacin de astaxantina . Como se
muestra en la Figura 5a, las tramas de contenido de astaxantina en funcin del tiempo
dan una lnea recta, lo que indica que la degradacin de astaxantina es una reaccin de
orden cero ; es decir, la constante de velocidad k puede ser representado por
k = xt = k Ch : S'-C.. Jtt

Figura 5. ( a) Cambios en el contenido de trans- astaxantina durante la degradacin a

concentraciones de 0. 0135 ( 0 ) , O. 0180 (A) , O. 0355 ( a) , y 0. 0568 M ( I) de NaOH en
el mezclas de reaccin a 22 0 C. ( b) Efecto de la concentracin de NaOH en mezcla de
reaccin en la constante de velocidad de reaccin de degradacin de staxanthin . (SE 1. 8
% ; n = 3. )

Figura 6. Cambios en libre de contenido trans - astaxantina durante la saponificacin con

0. 0.094 M NaOH en las mezclas de reaccin a 22 y 40 C .
El resultado fue similar a la degradacin de B- caroteno y capsantina en medios anhidro
( Minguez - Mosquera y Prez - Galvez , 1995). La figura 5b muestra el efecto de la
concentracin de NaOH en mezclas de reaccin en la velocidad de reaccin de la
degradacin de astaxantina (k = 36. 937 CNaoH + 0. 1,055 ; R = 0. 9 981 ) .

Efecto de la temperatura sobre la astaxantina Productividad. Para probar el efecto de la

temperatura sobre la hidrlisis de steres de astaxantina y la estabilidad de la
astaxantina, un experimento para hidrolizar steres de astaxantina a 40 C se llev a
cabo. La Figura 6 muestra el progreso de la hidrlisis de steres de astaxantina a 22 y 40
C .., respectivamente, con 0. 0,094 M NaOH en mezclas de reaccin.
Los resultados indicaron que una temperatura ms alta (por ejemplo, 40 C) favoreci la
hidrlisis de steres de astaxantina, pero la degradacin de astaxantina tambin se
promovi marcadamente al mismo tiempo (Figura 6). Por lo tanto, la temperatura alta se
debe evitar durante la hidrlisis de steres de astaxantina.
Estabilidad de los carotenoides a NaOH. Los cambios en las concentraciones de lutena,
B-caroteno, cantaxantina y durante la saponificacin se determinaron para la supervisin
de la estabilidad de estos carotenoides a NaOH. Figura 7 indic que, a diferencia de
astaxantina, otros carotenoides como la lutena, B-caroteno, cantaxantina y eran estables
al hidrxido, que est en buen acuerdo con los resultados reportados por Ittah et al.
(1993) y MinguezMosquera y Prez-Galvez (1998), Debido a que la degradacin de los
carotenoides se puede aliviar mediante la aplicacin de antioxidantes a la solucin
durante la saponificacin (Lietz y Enrique el, 1.997), la presencia de una gran cantidad de

astaxantina, la fuerte antioxidante, podra ser utilizado para explicar el fenmeno de que
no se observaron prdidas de lutena, B-caroteno, y cantaxantina.

Astaxantina libre es preferible steres de astaxantina en trminos de la utilizacin por los

animales ( Johnson y An , 1991). No est claro cmo se sintetizan steres de astaxantina
dentro de las clulas . Sin embargo , la esterificacin de astaxantina con cidos grasos
puede ser mejorada por induccin luz porque la astaxantina se concentr dentro de los
cuerpos de lpidos en el citosol de la clula - algal puede maximizar la eficacia
fotoprotectora ( Yong y Lee , 1991; Rise et al., 1994 ) . En consecuencia , es probable un
proceso biolgico puede ser desarrollado para maximizar la produccin de astaxantina
libre mediante el control de las condiciones ambientales o aislar mutantes que no
esterificar el astaxantina , que se prefiere sobre un mtodo de procesamiento aguas
abajo.