Preparacin de Vector de Clonacin

Vector de clonacin
Un vector es una molcula de DNA con un origen de replicacin autnomo y que posee zonas
donde pueden introducirse fragmentos de DNA exgeno, el cual se replica como parte del
vector en la clula receptora y hospedadora; es decir, es el portador de la secuencia de DNA que
se desea clonar.
Debe presentar las siguientes caractersticas:

Una pequea secuencia de ADN fcil de aislar

Contener distintos puntos de ataque a enzimas de restriccin y que sean conocidos.
Poder ser incluido en la clula anfitriona con facilidad.
Replicarse de forma independiente al ADN de la clula anfitriona.
Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y seleccionar las clulas
clonadas.

Las etapas del proceso consisten en:

1. Cortar el vector con enzimas de restriccin, las mismas enzimas que se utilizaron para
cortar el ADN que se quiere insertar.
2. Unir el vector y el ADN que se va a clonar mediante los llamados extremos cohesivos, o
pegajosos, o escalonados.
Una vez que el ADN ha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto o inserto.
Los tipos de vectores que se utilizan suelen ser plsmidos, bacterifagos, cromosomas creados
de forma artificial y quimeras.

Tipo
de

Vectores
Plsmidos
Molculas de DNA bihebra circular o lineal extracromosmico
heredan de manera estable. Suelen conferir a la clula que
alguna caracterstica fenotpica como la resistencia a antibiticos.

que se
hospedan

Estn clasificados en dos grupos:

Estrictos, si su replicacin est acoplada a la del DNA de la clula hospedadora

Relajados, si se replican independientemente.

Para ser utilizados como vectores los plsmidos deben cumplir las siguientes caractersticas:

Pequeo tamao (mejor manipulacin y aislamiento);

Replicacin relajada (permite obtener el DNA clonado en grandes cantidades); y

Presencia de puntos de corte nicos (permiten seleccionar las clulas que porten el
plsmido recombinante).

Los plsmidos ms utilizados son los con origen de replicacin en bacterias y los con origen de
replicacin en levaduras

Bacterifago

Lambda

Es
un viru
s bacterifa
go que
infecta
a
la bacteria Escherichia coli, su genoma consta de un DNA bihebra, que presenta en sus extremos
5', 12 nucletidos monohebra con secuencias complementarias denominados extremos cos.
Para ser utilizado de vector, el tercio central de su cromosoma puede ser reemplazado por ADN
forneo, sin que ello afecte a la capacidad del fago de infectar clulas y formar cpsides.
Para clonar ADN utilizando este vector,
se purifica el ADN del fago y se corta
con una enzima de restriccin, con la
misma enzima de restriccin cortamos el
fragmento de ADN de inters y los
unimos con una ADN ligasa. Los
vectores lambda recombinantes se
empaquetan in vitro en las cpsides
proteicas del fago, y se introducen en
clulas husped bacterianas. Dentro de
las bacterias, los vectores se replican y
forman muchas copias del fago
infectivo, llevando todas ellas el
fragmento de ADN de inters en la
clonacin.