INTRODUCCIN

La hemostasia secundaria se da gracias a una serie de reacciones enzimticas en forma de

cascada en donde intervienen los factores de la coagulacin que son protenas plasmticas
solubles y tienen como fin convertir el fibringeno y fibrina.
INTERACCIONES Y CONTROLES DE LA HEMOSTASIA
El tapn hemostsico primario plaquetario se ve reforzado con una especie de malla que forma la
fibrina para evitar que se pierda ms sangre, a esto se llama cogulo el mismo que es temporal y
estimula la reparacin del endotelio lesionado.
Despus que el vaso lesionado comienza a repararse la fibrina se degrada gracias a la plasmina
que se activa a plasmingeno.
FACTORES DE LA COAGULACIN
A los factores de la coagulacin los identifica con un nmero romano de acuerdo al orden en que
se descubrieron del I-XIII, se coloca una letra a cuando el factor se activa y tiene actividad
enzimtica, excepto el Factor II que se denomina trombina a su forma activada, al Factor I se le
denomina fibrina cuando se activa.
La fibrina no tiene caractersticas enzimticas, la tromboplastina tisular (Factor III) y el calcio
(Factor IV) no tienes forma activada, adems el Factor VI se elimin porque era una variante
activada del Factor V.
Dichos factores, el plasmingeno y los inhibidores de proteasas son sintetizados en el hgado.
Se pueden dividir en tres grupos de acuerdo a sus propiedades fsicas:
1. Grupo de la Protrombina: incluye a los factores II, VII, XI y X, tambin se los conoce como
Factores dependientes de la vitamina K.
2. Grupo del Fibringeno: incluye a los factores I, V, VIII y XIII, tambin se los conoce como
el grupo consumible porque se consumen durante la formacin de la fibrina.
3. Grupo de Contacto: incluye a los factores XI, XII, tambin la precalicrena y el CAMP.
CASCADA DE LA COAGULACIN
Se divide en tres vas:
1. Va Intrnseca, 2. Va Extrnseca; y3. Va Comn
Tanto la va extrnseca como la intrnseca convergen en la va comn que inicia con la activacin
del factor X y termina con la formacin de la fibrina.
VA INTRNSECA
Los componentes de esta va se encuentran todos en el torrente sanguneo, los factores que
participan son: XII, XI, IX, VIII, ciningeno de alto peso molecular (CAMP) y precalicrena.
Termina con la activacin del Factor X mediante el complejo IXa/ VIIIa, Calcio, FP.

Se inicia con la exposicin de los factores de

contacto (XI, XII, precalicrena y el cofactor
CAMP) con las estructuras subendoteliales
(colgeno y membrana basal).
Los primeros factores que se absorben en el
vaso lesionado son el factor XII y precalicrena.
El factor XII enlazado a la superficie transforma
la precalicrena en calicrena y sta con el CAMP
escinden proteolticamente el Factor XII que se
encuentra en la superficie en Factor XIIa.
El factor XIIa va actuar sobre el factor XI para
activarlo (Factor XIa) en presencia del cofactor
CAMP, adems activa el sistema fibrinoltico
porque acta como un proactivador del
plasmingeno.
El factor XIa acta sobre el factor IX en
presencia del calcio para activarlo (Factor IXa)
el cual forma un complejo con el factor VIII y el
calcio en la superficie fosfolpida de la plaqueta
para activar el factor X que converge en la va
comn.
VA EXTRNSECA
Se denomina as porque para su activacin requiere de un compuesto que no se encuentra en la
sangre como lo es el Factor Tisular, que es una protena que forma parte de la membrana celular
del endotelio, se encuentra distribuido
especialmente
en el encfalo, pulmones y placenta
tambin
se
requiere el Factor VII.
Al momento en que toman contacto el
la sangre el factor VIIa (no se conoce con
volverse activo) forma un complejo con
que en presencia del calcio actan sobre
activndolo.

subendotelio con
certeza si debe
el factor tisular
el
factor
X,

VA COMN
reacciones principales:

Incluyen tres

1. La activacin del factor X por los

vas intrnseca y extrnseca.
2. Conversin de la protrombina a
al factor Xa.

productos de las
trombina gracias

3. Conversin del fibringeno a fibrina por la

trombina.
El factor X se activa mediante: -Va
Intrnseca:
el
complejo formado por el factor IXa, VIIIa, Calcio.
-Va Extrnseca: el complejo
formado por el factor VIIa, III y Calcio.
El factor Xa forma un complejo con el cofactor factor
V, fosfolpidos y calcio para la activacin de
protrombina a trombina y sta a su vez acta sobre el
fibringeno para formar fibrina.
FACTOR XIII: este factor sirve para estabilizar el
polmero de fibrina, para su activacin se requiere de
la interacciones con iones de calcio.
El factor XIII se encuentra distribuido comnmente entre el plasma que se sintetiza en el hgado, y
tambin se encuentra en las plaquetas que se sintetiza en los megacariocitos.
CONTROL FISIOLGICO DE LA HEMOSTASIA
Los mecanismos fisiolgicos que controlan la coagulacin incluyen:
Flujo Sanguneo: no
1. Vasoconstriccin; y

se

forman cogulos al menos que suceda

2. Activacin de los factores de coagulacin

dos

cosas:

Depuracin Heptica: los hepatocitos retiran los factores activados, plasmina y fibrina.
Inhibicin por retroalimentacin: algunos factores activados destruyen otros factores.
Inhibidores bioqumicos: son protenas plasmticas solubles que regulan las reacciones
enzimticas como: antitrombina III, protena C, cofactor II de la heparina, protena S.

Disolucin fibrinoltica de la fibrina

SISTEMA FIBRINOLTICO
Se produce como respuesta a la cascada de coagulacin, en donde se activa la plasmina a partir
del plasmingeno, la plasmina tiene la capacidad de digerir la fibrina, el fibringeno y otros
factores de la coagulacin
De dicha digestin se forman fragmentos de protena conocidos como productos de la
degradacin de la fibrina (PDF), estos fragmentos se retiran de la circulacin gracias al hgado,
caso contrario pueden ejercer un efecto anticoagulante.
Los componentes fundamentales del sistema fibrinoltico son:
1.
2.
3.
4.

Plasmingeno
Activadores del plasmingeno
Plasmina
Fibrina

5. Productos de la degradacin de la
fibrina y del fibringeno
6. Inhibidores de los activadores del
plasmingeno y de la plasmina

7. El plasmingeno circula en la sangre como un zimgeno, se sintetiza en el hgado y durante

la formacin del cogulo se absorben grandes cantidades dentro de la masa de fibrina.
8. Los activadores del plasmingeno pueden ser extrnsecos (en los tejidos) o intrnsecos
(sangre).
3

9. Activadores Intrnsecos: estn implicados en la fase de contacto de la cascada en la va

intrnseca.
10.Activadores Extrnsecos son: los activadores tisulares del plasmingeno (t- PA), que son
derivados del endotelio y los activadores del plasmingeno similares a la urosinasa (u- PA).
11.Tambin se encuentran los inhibidores como son: el inhibidor del activador de
plasmingeno-1 (IAP-1) y el inhibidor del activador de plasmingeno-2 (IAP-2).
12.
Existe cierta interaccin entre la cascada de coagulacin con la fibrinlisis, ya que el
proactivador del plasmingeno se activa por el factor XIIa, a su vez la plasmina activa el
factor XII, al mismo tiempo degrada la plasmina los factores V, VIII y la fibrina.
13.
CONTROL
FISIOLGICO
Los inhibidores principales son:

DE

LA

FIBRINLISIS

2-antiplasmina: bloquea el sitio de enlace de lisina del plasmingeno libre y evita su

absorcin a la fibrina.
2- macroglobulina: neutraliza el exceso de plasmina cuando se satura la 2antiplasmina.
IAP-1: inhibe el t-PA y tcu-PA en el plasma; el IAP-2: inhibe el t-PA y tcu-PA, pero es menos
eficiente que el anterior; y el IAP-3: inhibe la tcu- PA.
14.
INVESTIGACIN DE LABORATORIO DE LA HEMOSTASIA SECUNDARIA Y DE LA
FIBRINLISIS
15.La muestra que se utiliza debe estar con citratado de sodio o con oxalato de sodio como
anticoagulante, los mismos que actan mediante el quelato del calcio, sin embargo el que
se recomiendo usar es el citrato (3.8%) porque conserva mejor el factor V y El factor VIII.
16.Se debe analizar dentro de 30 a 120 minutos. Se centrifuga a 1000 rpm durante 10 a 15
minutos.
17.Las pruebas de laboratorio para la hemostasia secundaria pueden dividirse en dos grupos:
pruebas de deteccin y pruebas especiales.
18.

PRUEBAS PARA LA HEMOSTASIA SECUNDARIA

19.Permite determinar el tiempo en que se forma el cogulo despus de agregar el calcio,

tromboplastina o un activador al plasma citratado.
20.El punto final de la fibrina se determina por tres medios que son: visual, electromecnico
(semiautomtico) y espectrofotomtrico (automtica).
21.
22.

PRUEBAS DE DETECCIN

23.Estn destinadas para comprobar la integridad general de las vas intrnseca, extrnseca y
comn, stas incluyen el TP, TTP y TT.
24.Tiempo de Protrombina (TP): analiza la va extrnseca, mide la activacin del factor X por
el complejo formado por el factor VIIa/Factor Tisular, adems las reacciones de la va
comn.
25.Mide los factores I, II, V ,VII y X, mediante la agregacin de tromboplastina tisular que activa
la va extrnseca, se incuba, se coloca el calcio y se observa el tiempo a la que se forma el
cogulo.
4

26.El tiempo normal es de 11 a 15 segundos, sin embargo est prolongado en enfermedades

hepticas o la administracin de anticoagulantes, el TP es la prueba predilecta para vigilar
el tratamiento con anticoagulantes.
27.Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (TTPa): mide todos los factores con
excepcin del VII y el XIII, para realizarla se incuba una sustancia activadora con el plasma
para activar los factores de contacto.
28.El tiempo normal en que se forma el cogulo es de 32 a 46 segundos.
29.Interpretacin de resultados:
TP anormal y TTP normal: el TP anormal se debe a una deficiencia del factor VII.
30.
TP normal y TTP anormal: se debe a una deficiencia de un factor de la va intrnseca.
31.
TP anormal y TTP anormal: debe considerarse una contaminacin con heparina osino
realizar estudios para determinar inhibidores circulantes.
32.

TIEMPO DE TROMBINA

33.Con esta prueba se mide nicamente la conversin del fibringeno a fibrina, se realiza
agregando trombina al plasma citratado y se mide el tiempo que tarde en formarse el
cogulo.
34.Un resultado prolongado demuestra la deficiencia de fibringeno o la presencia de
inhibidores circulantes como la heparina, la plasmina y PDF.
35.

PRUEBA DEL DMERO D

36.Es un anlisis que se emplea para la deteccin de los productos de la degradacin de la

fibrina, ya que el dmero D solo se forma por la digestin de la fibrina gracias a la accin de
la plasmina.
37.
38.
39.
40.
41.

42.

PRUEBA DE HAM

43.
44.Permite evaluar a los pacientes con sospecha de PNH (hemoglobinuria paroxstica nocturna)
o sospecha de anemia diseritropoytica congnita (CDA); el examen verifica si los glbulos
rojos se vuelven ms frgiles cuando se colocan en un cido suave.
45.
46.La PNH es positiva cuando el 10% a 50% demuestra lisis en los sueros acidificados no
inactivados. El diagnstico de PNH demuestra que las clulas rojas del paciente tienen una
alta sensibilidad a la hemlisis mediada por el complemento.
47.
48.Sin embargo la prueba de Ham est siendo reemplazada cada vez ms por un examen
llamado citometra de flujo.
49.
MTODO

50.Prueba de Ham con suero acidificado. La sospecha de PNH se da cuando los glbulos rojos
son lisados con suero normal acidificado o suero del paciente no acidificado. El suero
normal utilizado debe ser fresco y debe ser compatible ABO con los glbulos rojos del test.
51.

INTERPRETACIN

52.

Un examen negativo es normal, sin embargo el significado de los resultados

anormales pueden deberse a:

Hemoglobinuria paroxstica nocturna

Anemia diseritropoytica congnita

 LIMITACIONES
Su eficacia es limitada, porque puede dar resultados falsos negativos por el efecto de
transfusiones previas, y falsos positivos en la anemia diseritropoytica congnita tipo II.
Tambin pueden darse resultados falsos-positivos pueden ocurrir en otras enfermedades
hematolgicas: como en la esferocitosis hereditaria o adquirida, anemia aplstica, leucemia
y sndromes mieloproliferativos. En esas condiciones la hemlisis podra tambin ocurrir en
sueros acidificados inactivados.

TEST DE AGUA AZUCARADA

Es un examen de sangre para detectar glbulos rojos frgiles por medio de la evaluacin de
su capacidad para resistir una hinchazn en una solucin baja en sal.
Este examen se realiza si el paciente tiene signos o sntomas de hemoglobinuria paroxstica
nocturna (HPN) o anemia hemoltica de origen desconocido. Es muy probable que los
glbulos rojos en la HPN resulten daados por parte del sistema de complemento del
cuerpo.

MTODO
Identificacin visual de la hemlisis. Los glbulos rojos son incubados en una solucin
isotnica de sacarosa con una fuerza inica baja que aumenta la unin del complemento. Si
los eritrocitos son anormalmente sensibles al complemento, como en el caso de la PNH
(hemoglobinuria paroxstica nocturna), ocurre lisis despus de 30 minutos de incubacin.
INTERPRETACIN:
Negativo: descomposicin de glbulos rojos (hemlisis) de menos del 5%
Positivo: hemlisis de ms del 10%
Un examen negativo no descarta una HPN. Se pueden presentar resultados falsos negativos
si la parte lquida de la sangre (suero) carece de complemento.
Significado de los resultados anormales
Hemoglobinuria paroxstica nocturna (HPN)
La anemia hemoltica autoinmunitaria y la leucemia pueden dar resultados falsos positivos

LIMITACIONES
Resultados falsos-positivos pueden observarse en casos de anemia megaloblstica o
anemias hemolticas autoinmunes. Resultados falsos-negativos pueden ocurrir con el uso de
anticoagulantes como el EDTA o la heparina.

CITOMETRA DE FLUJO
Se trata de un mtodo analtico por el que se mide la emisin de mltiples fluorescencias y
la dispersin de luz de clulas o partculas microscpicas, alineadas secuencialmente
mediante una corriente lquida laminar, cuando son presentadas de una en una y a gran
velocidad (hasta miles de clulas/segundo) frente a un haz de luz lser de longitud de onda
adecuada.
PARMETROS
Caractersticas Morfolgicas de la clula: tamao y complejidad del citoplasma

 Caractersticas antignicas de la clula: Inmunofenotipo.

PARMETROS FSICOS
Su tamao relativo
Su granularidad relativa o complejidad interna

COMPONENTES
SISTEMA HIDRALICO: Controles neumtico y fluidos para establecer un flujo laminar que
permita a la suspensin celular atravesar la cmara de flujo.
SISTEMA PTICO: Lser (Argn con luz monocromtica de 488nm) , filtros , lentes y
detectores.
SISTEMA ELECTROINFORMTICO: Convierte la luz dispersa en seales elctricas y las
procesa para su anlisis.

REALIZACIN DE CITOMETRIA DE FLUJO

Se hace en 3 etapas independientes:
1. Fase pre-citometra: preparacin de los reactivos, preparacin de las clulas, diseo del
protocolo y coloracin de las clulas con los reactivos fluorescentes.

2. Fase de citometra de flujo: involucra el procesamiento de las clulas marcadas y la

recoleccin de los datos para cada una de las medidas (parmetros) realizados en cada
clula individual.

3. Fase de anlisis: anlisis de los datos recolectados

La mezcla de clulas teidas con diferentes fluorocromos es forzada a pasar a travs de

una aguja creando una delgada fila de lquido que contiene las clulas. A medida que cada
clula pasa en frente del lser, desva el rayo incidente y las molculas teidas unidas a la
clula van a ser excitadas y emiten luz fluorescente. Tubos fotomultiplicadores detectan
tanto la luz desviada y las emisiones fluorescentes, la informacin es digitalizada y
procesada por el computador. Los resultados son presentados a manera de histogramas.

APLICACIONES DE LA CITOMETRA DE FLUJO

Hematologa: tipificacin y conteo de clulas, reticulocitos y anlisis de medula sea.

Farmacologa :estudios de cintica celular

Inmunologa :subpoblaciones de linfocitos ,tipaje tisular

Oncologa : diagnstico y pronostico ,monitores de tratamientos

Microbiologa :diagnostico bacteriano y vrico ,estudios de sensibilidad a los antibiticos

Gentica: Cariotipo y diagnstico de portador y diagnstico prenatal.

 BIBLIOGRAFA:

http://www.lablasamericas.com.co/site/index.php/examen/prueba_de_ham/

https://www.clinicadam.com/salud/5/003672.html

http://www.lablasamericas.com.co/site/index.php/seccion/view/quimica_general/examenes/
Q01/P900

https://www.clinicadam.com/salud/5/003673.html

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/citometria.h
tm

http://www.uv.es/cytomics/Intro-CMF.pdf