Espectrometra Molecular

UV-Visible, Fotometra de
flama, Absorcin atmica
y Fluorimetra.
Efectos de la radiacin UV-Visible
cuando incide sobre una
sustancia.

Introduccin

Absorcin de rad. UV-Visible por sustancias

orgnicas e inorgnicas.
Ley de Lamber-Beer.
Fluorescencia.
Fotometra de llama, principio fundamentales
generales del mtodo, funcionamiento de un
fotmetro de llama. Fotometra de absorcin
atmica, principio fundamentales del mtodo,
espectrofotmetro de absorcin atmica.
Aplicaciones analticas dentro de cada mtodo
de anlisis

Absorcin de radiacin

Cuando la radiacin atraviesa una capa de un slido, un lquido o un

gas, ciertas frecuencias pueden eliminarse selectivamente por
absorcin, un proceso en el que la energa electromagntica se
transfiere a los tomos, iones o molculas que componen la
muestra.
La absorcin provoca que estas partculas pasen de su estado
normal a temperatura ambiente, o estado fundamental, a uno o
ms estados excitados de energa.
Segn la teora cuntica, los tomos, molculas o iones slo tienen
un nmero limitado de niveles de energa discretos
Para que ocurra la absorcin de la radiacin, la energa de los
fotones excitadores debe coincidir exactamente con la diferencia de
energa entre el estado fundamental y uno de los estados excitados
de las especies absorbentes

Absorcin de radiacin

Como estas diferencias de energa son caractersticas para cada

especie, el estudio de las frecuencias de la radiacin absorbida
proporciona un m edio para caracterizar los componentes de una
muestra

experimentalmente se define una representacin grfica de la

absorbancia en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia.

La absorbancia es una medida de la disminucin de la potencia

radiante, se define por la Ecuacin

Absorcin de radiacin

En el examen de las representaciones grficas se pone de

manifiesto que el aspecto de los espectros de absorcin vara
considerablemente; algunos estn constituidos por numerosos
picos agudos, mientras que otros consisten en suaves curvas
continuas.
En general, la naturaleza de un espectro est influida por
variables como la complejidad, el estado fsico y el entorno de
las especies absorbentes.
Sin embargo, las diferencias entre los espectros de absorcin
de los tomos y los de las molculas son ms profundas.

Absorcin atmica

El paso de radiacin policromtica ultravioleta o visible a

travs de un medio constituido por partculas monoatmicas,
como mercurio o sodio gaseosos, produce la absorcin de slo
unas pocas frecuencias bien definidas.

La relativa simplicidad de dichos espectros se debe al pequeo

nmero de posibles estados de energa de las partculas
absorbentes. La excitacin slo se puede producirse mediante
un proceso electrnico en el que uno o ms de los electrones
del tomo se promocionan a un nivel de energa superior.

Absorcin atmica

La excitacin slo puede producirse mediante un proceso electrnico en el que uno o ms de

los electrones del tomo se promocionan a un nivel de energa superior.
Por ejemplo, el vapor de sodio presenta dos picos de absorcin agudos, muy poco separados
entre s en la regin amarilla del espectro visible (589,0 y 589,6 nm), que son consecuencia
de la excitacin del electrn 3s a dos estados 3p que difieren muy poco en energa.
Tambin se observan, adems, otras lneas estrechas de absorcin correspondientes a otras
transiciones electrnicas permitidas. de pico ultravioleta a aproximadamente 285 nm proviene
de la excitacin del electrn 3s del sodio al estado excitado 5p, proceso que requiere una
energa significativamente mayor que para la excitacin al estado 3p .

Absorcin molecular

Los espectros de absorcin de las molculas poliatmicas,

especialmente en estado condensado, son considerablemente
ms complejos que los espectros atmicos, ya que el nmero
de estados de energa de las molculas es generalmente
enorme si se compara con el de los tomos aislados. La
energa E, asociada a las bandas de una molcula, est
formada por tres componentes.

Una m olcula no puede poseer una cantidad arbitraria

de E int , slo puede existir en ciertos estados de energa
perm itidos.

Absorcin molecular

Donde la Eelectrnica representa la energa electrnica de la molcula

que proviene de los estados energticos de sus distintos electrones
enlazantes.
Evibracional se refiere a la energa total asociada al elevado nmero de
vibraciones interatmicas presente en las especies moleculares. En
general, una molcula tiene muchos ms niveles cuantizados de
energa vibracional que niveles electrnicos
la Erotacional es la energa debida a los distintos movimientos
rotacionales dentro de una molcula; de nuevo, el nmero de
estados rotacionales es mucho mayor que el nmero de estados
vibracionales. As pues, para cada estado de energa electrnica de
una molcula, generalmente existen varios estados vibracionales
posibles y, a su vez, para cada uno de estos estados vibracionales,
son posibles numerosos estados rotacionales. En consecuencia, el
nmero de posibles niveles de energa para una molcula es
normalmente de unos rdenes de magnitud mayor que para una
partcula atmica.

Fluorescencia y Fosforescencia

La fluorescencia y la fosforescencia
Son procesos de emisin, de importancia analtica, en los que
los tomos o las molculas se excitan mediante la absorcin de
un haz de radiacin electromagntica; la emisin radiante se
produce cuando las especies excitadas regresan al estado
fundamental.
La fluorescencia sucede ms rpida que la fosforescencia y
generalmente finaliza unos 10-5 S despus del inicio de la
excitacin.
La emisin de fosforescencia tiene lugar durante perodos ms
largos de 10-5 S y, de hecho, puede continuar durante minutos
o incluso horas despus de que la irradiacin haya cesado.
La fluorescencia y la fosforescencia se observan ms fcilmente
a un ngulo de 90 grados respecto al haz de excitacin.

Mtodos basados en la
absorcin

Los mtodos cuantitativos basados en la

absorcin requieren dos medidas de
potencia: una, antes de que el haz haya
pasado a travs del medio que contiene al
analito (P0), y la otra, despus (P).
La transmitancia y la absorbancia son los
dos trminos que se utilizan ampliamente
en la espectrometra de absorcin y se
relacionan por la razn de P0 y P.

En la fig. se muestra un haz de

radiacin
paralelo
antes
y
despus de atravesar un medio
que tiene un espesor de b en cm
y una concentracin C de una
especie absorbente.
Como consecuencia de las
interacciones entre los fotones y
los
tomos
o
molculas
absorbentes, la potencia del haz
disminuye de P0 a P. La
transmitancia T del medio es la
fraccin de radiacin incidente
transmitida por el medio:

La cantidad de radiacin absorbida

puede ser medida en distintas formas:
Transmitancia, T = P / P0
% Transmitancia, %T = 100 T

A = log 10 P0 / P
A = log 10 1 / T
A= - log10 T
A = log 10 100 / %T
A = 2 - log10 %T

Ambas leyes se combinan en la ley de Bouguer-LambertBeer, o ms comnmente, ley de Beer, por ser la
concentracin el parmetro de mayor aplicacin en Qumica
Analtica.

Ley de Beer establece que un fotn de la radiacin puede

ser absorbido por una molcula slo s interacta con
sta. La probabilidad de tal interaccin es directamente
proporcional al nmero de molculas en el trayecto del
haz de radiacin.
Esta ley establece que la cantidad de radiacin absorbida
es proporcional al nmero de molculas absorbentes a
travs de las cuales la luz pasa.
La absorcin de una solucin, si la sustancia absorbente
de concentracin c est disuelta en un medio
transparente, ser proporcional a la concentracin de
aquella.

Estas relaciones vienen dadas por

A=a.b.c
donde a es una constante de proporcionalidad

denominada absortividad.
La magnitud de a claramente depender de las unidades
utilizadas para b y c.
Con frecuencia para disoluciones de una especie
absorbente, b se da en centmetros y c en gramos por

litro. Las unidades de la absortividad en ese caso son L g-1

cm-1

Cuando la concentracin c se expresa en moles

por litro y la longitud de la cubeta en
centmetros, la absortividad se denomina

absortividad molar y se representa por el

smbolo As, cuando b est en centmetros y
c en moles por litro,

A= .b.c
donde tiene las unidades de L mol-1cm-1

Medida de la transmitancia
y de la absorbancia
Normalmente, T y A no
pueden medirse directamente
ya que la solucin que
contiene al analito debe
colocarse en una cubeta.
En cada interface que separe
medios de diferentes valor
de n habr prdidas por
reflexin de radiacin.
Aproximadamente un 8.5%
de la radiacin se pierde
cuando
atraviesa
una
cubeta llena de agua.

Adems hay prdidas de radiacin cuando

la presencia de ciertas molculas grandes
dispersan la radiacin

DESVIACIONES DE LA LEY
DE BEER

Reales

Instrumentales

Radiacin no monocromtica
Radiacin parsita
Errores de lectura

Qumicas

Influencia del equilibrio

Influencia del disolvente
Influencia de la temperatura
Impurezas en los reactivos
Interaccin entre especies absorbentes

Evale las cantidades restantes de la tabla adjunta. Cuando sea

necesario use 200 como masa molecular del analito.

A = 0.172 = bc = -Log T

T = 10-A = 10-0.172 = 0.673; %T = 67.3%

La cafena (C8H10O2N4H2O) posee una absorbancia de 0.510 a 272 nm y 1 cm de paso ptico en disoluciones
de concentracin de 1 mg/ 100 mL. Una muestra de 2.5 g de caf soluble se diluye con agua a 500 mL. Se
toman 250 mL se aaden 25.0 mL de H2SO4 0.1 N y se diluye a 500 mL. Se mide la absorbancia a 272 nm
resultando ser 0.415. Calcular los gramos de cafena por Kg de caf soluble que tiene muestra .

Dato: Peso molecular (cafena)=212 g/mol

La disolucin de medida tiene una absorbancia de 0.415, la concentracin de esta disolucin:

Solucion: a) A=3.25 g/Kg

Se pipetean alcuotas de 10 mL de una muestra de agua mineral en matraces

aforados de 50 mL. Se adicionan a cada uno 0; 5;10; 15 y 20 mL de una
solucin estndar 11,1 ppm de Fe+3, con exceso de SCN- para dar Fe (SCN)6
3-. Despus de diluir a 50 mL las Absorbancias para las 5 diluciones fueron:
0,240; 0,437 ; 0,621 ; 0,809 y 1,009 respectivamente. Se trabaj con un
espesor de cubeta (b) de 0,982 cm. Calcular por los distintos mtodos la
concentracin de Fe+3 en la muestra de agua.
CdxVd=CcxVc Cd= CcxVc/Vd
Volumen Volumen Factor de
Muestra Estndar dilucin

Concentracin
en ppm

Absorbancias

10

0,240

10

0,222

1,11

0,437

10

10

0,222

2,22

0,621

10

15

0,222

3.33

0,809

10

20

0,222

4.44

1,009

Concentracin
en ppm

Absorbancias

X2

Y2

XxY

0,00

0,240

0,0576

1,11

0,437

1,2321

0,190969

0,48507

2,22

0,621

4,9284

0,385641

1,37862

3,33

0,809

11,0889

0,654481

2,69397

4,44

1,009

19,7136

1,018081

4,47996

Sumatoria

11,1

3,116

36,963

2,306772

9,03762

Promedios X y Y

2,22

0,6232

( xi ) 2
Sxx = x
=
n
2
i

Sxy = xy

( xi yi )
=
n

m=

Sxy
=
Sxx

Y = b + mX
__

__

b =Ym X =

X=
r=

b
=
m
S XY
=
(S XX )(. SYY )

Ttulo del grfico

1,2

y = 0,1721x + 0,2412
R = 0,9999

Ttulo del eje

0,8

0,6

0,4

0,2

-2,00

-1,50

-1,00

-0,50

0
0,00
-0,2

0,50

1,00

1,50

2,00

Ttulo del eje

2,50

3,00

3,50

4,00

4,50

5,00

Tras las diluciones oportunas de una disolucin patrn, se obtuvieron

disoluciones de hierro cuyas concentraciones se muestran en la tabla
mostrada a continuacin. Posteriormente se obtuvo el complejo de hierro
(II)-1,10-fenantrolina en alcuotas de 25.0 mL de estas disoluciones, a
continuacin cada una de ellas se diluy hasta 50 mL. Se obtuvieron las
siguientes absorbancias, a 510 nm.
Concentracin
en ppm

Absorbancias

X2

Y2

XxY

2,00

0,164

0,026896

0,328

5,00

0,425

25

0,180625

2,125

8,00

0,628

64

0,394384

5,024

12,00

0,951

144

0,904401

11,412

16,00

1,260

256

1,5876

20,16

20,00

1,582

400

2,502724

31,64

Sumatoria

61

4,846

889

5,569734

70,361

Promedios X y Y

12,20

0,9692

a) Construir una curva de calibrado a partir de estos datos.

b) Por el mtodo de los mnimos cuadrados, obtener una ecuacin que relacione la
absorbancia con la concentracin de Fe(II).
c) Calcular la desviacin estndar de la regresin.
d) Calcular la desviacin estndar de la pendiente

Concentracin
en ppm

Absorbancias

X2

Y2

XxY

2,00

0,164

0,026896

0,328

5,00

0,425

25

0,180625

2,125

8,00

0,628

64

0,394384

5,024

12,00

0,951

144

0,904401

11,412

16,00

1,260

256

1,5876

20,16

20,00

1,582

400

2,502724

31,64

Sumatoria

61

4,846

889

5,569734

70,361

Promedios X y Y

12,20

0,9692

( xi ) 2
Sxx = x
=
n
2
i

Sxy = xy

( xi yi )
=
n

m=

Sxy
=
Sxx

Y = b + mX
__

__

b =Ym X =

X =
r=

Y b
m
S XY
=
(S XX )(. SYY )

1,8
1,6
1,4

Ttulo del eje

1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0

10

15
Ttulo del eje

20

25

El mtodo desarrollado, antes expuesto, se aplic en la determinacin rutinaria

de hierro en alcuotas de 25.0 mL de aguas naturales y se troto similarmente
como los patrones. Determinar la concentracin (en ppm de Fe) de muestras
que dieron los datos de absorbancia que siguen (en cubetas de 1.00 cm).
Estimar las desviaciones estndar para las concentraciones calculadas. Repetir
los clculos considerando que los datos de absorbancia son la media de tres
medidas: 1) 0,107 2) 0,721 3) 1,538

X =

Y b
=
m

m=

__

Sxy
=
Sxx
__

b =Ym X =

Una muestra de 5.12 g de un pesticida se descompuso mediante

digestin hmeda y a continuacin se diluy hasta 200.0 mL en
un matraz aforado. El anlisis se complet tratando las alcuotas
de esta disolucin como se indica.

Se fortifica la muestra para que el efecto matriz sea igual en la

muestra problema y en el patrn, adems, si la concentracin de
analito es baja, aumentamos su seal
Se han tomado 50 mL de muestra y se han llevado a 100 mL,
luego la disolucin de la muestra est el doble concentrada
(100/50). La concentracin de Cu en la muestra es, por tanto:

Cm = 2 x C dm = 2x

ppm