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CURITIBA
2005
CURITIBA
2005
ii
AGRADECIMENTOS
Ao meu marido MARCO AURLIO e aos meus filhos EMANUELLE e MARCUS
VINCIUS que conseguiram driblar o tempo e a organizao do lar sem a presena
da mame.
Aos professores FOGAA e ROMILDO que confiaram em mim.
Ao professor ALEX que conhece os obstculos da pesquisa cientfica e que
nobremente cedeu os ces para este experimento.
Ao MARCOS VINCIUS que abriu mo do seu sbado e do seu conhecimento em
grficos para enriquecer este trabalho.
minha irm DANIELLE que me ajudou com os ces e no transporte de
documentos e filhos.
Ao meu sogro JOO CARLOS que me deu orientaes.
s mdicas veterinrias NANCY e KARINE e estagiria MARIAN que no mediram
esforos para assistir to bem os ces.
s bibliotecrias SIMONE e VERA que se esforam, e muito, contribuindo com as
informaes necessrias para que este e muitos outros trabalhos cientficos possam
ser concludos.
mdica veterinria MARIA LUZA, do Centro de Diagnstico Marcos Enrietti-SEABPR, que contribuiu com a bibliografia.
MARIA JOS, da Ps-Graduao do Departamento de Medicina Veterinria que
me atendeu prestativamente em relao aos prazos e documentaes exigidos.
Aos meus chefes TCel MELO e Maj STONOGA que me permitiram o tempo-livre.
E principalmente a ELE:
Que me encheu de gs, quando eu s pedi mais um pouquinho de fora;
Que s ps gente amiga no meu caminho;
Que me deu a luz necessria para enxergar alm;
Que me permitiu chegar ao fim;
Que a minha razo para continuar.
AGRADECIMENTO ESPECIAL
Ao meu orientador, Prof. Dr. JOS FRANCISCO, por ter me aceito; pelo constante
otimismo e bom-humor; por ser to incansvel; por no medir esforos; por envolver
a prpria famlia, abrindo mo do tempo e da privacidade; por nunca ter dito no;
pela vontade de descobrir e questionar; pelo envolvimento e disposio; pela
honestidade; e finalmente, por sempre dizer: Fica tranqila, vai dar tudo certo!
iii
SUMRIO
LISTA DE TABELAS
vi
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 - TTULOS
SOROLGICOS
PR-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PR-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PR
PS-VACINAIS
PARA
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
interrogans sorovar grippotyphosa aos 60, 90, 120, 150, 180 E 210
DIAS.....................................................................................................38
FIGURA 11 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
FIGURA 15 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
ix
ALT
Alanina Aminotransferase
AST
Fosfatase Alcalina
BUN
Clulas Completas
CP
Cilindros Protoplasmticos
DNA
cido Desoxirribonucleico
Ig
IOC
LDH
Desidrogenase Ltica
Mol
MAT
ME
Membrana Externa
NaCl
Cloreto de Sdio
OMC
PCR
RPM
SAM
UFPR
WHO
RESUMO
xi
ABSTRACT
xii
INTRODUO
governo,
os
laboratrios
indstrias
farmacuticas
comprometimento social.
Segundo dados do Centro de Informao em Sade para Viajantes (CIVES,
2005), entre 1985 e 1997, foram notificados no Brasil 35.403 casos de leptospirose,
com 3.821 bitos (letalidade mdia de 12,5%). Apenas os casos mais graves
(ictricos) so, geralmente, diagnosticados e, eventualmente notificados, o que
representa apenas uma pequena parcela (provavelmente cerca de 10%) do nmero
real de casos no Brasil (FUNASA, 2001) (ANEXO 10).
A Secretaria de Sade do Paran rene dados que apresentam uma taxa de
letalidade que atinge 17% verificando-se um aumento progressivo desde 1997
(SESA, 2004).
causar danos, sendo eliminada pela urina, s vezes por toda a vida do animal, o que
torna estes roedores o seu principal propagador. O homem infectado casual e
transitoriamente, no tendo importncia como transmissor da doena de uma
pessoa para outra (VASCONCELLOS et al., 1997; CIVES, 2005).
O controle da leptospirose urbana s poder ter sucesso atravs de um
programa de sade pblica adequado que vise prticas de higiene, eliminao de
roedores e isolamento de animais infectados, com conseqente tratamento
quimioterpico, aliado ao uso de vacinas na populao canina como medida
profiltica (RUSSELL, RUSSELL, 1994).
A vacinao contra a leptospirose em animais uma prtica comum e um
mtodo eficaz de controle, geralmente adotado por proprietrios que possuem
condies econmicas razoveis. Muitas vacinas esto disponveis comercialmente,
mas existem evidncias conflitantes em se tratando da eficcia das mesmas
(BLOOD, RADOSTITS, 2002). Pesquisas sobre o tempo de manuteno desta
imunidade ps-vacinal, que realmente seja capaz de neutralizar uma possvel
infeco, no so encontradas na literatura cientfica especializada.
A grande quantidade de vacinas sendo oferecida no mercado, a tendncia
ao uso de vacinas polivalentes, a distribuio sazonal da doena em um pas
2.1
REVISO DE LITERATURA
HISTRICO DA LEPTOSPIROSE
Esta sndrome ictrica com falncia renal foi descrita pela primeira vez em
1880, no Cairo, por Larrey, provavelmente introduzida na Europa pelo Rattus
norvergicus proveniente da sia no sculo XVIII. Os estudos deram seqncia
atravs dos trabalhos de Landouzy, em 1883, mas foi Weil, porm, que em 1886,
descreveu-a minuciosamente, observando quatro casos clnicos em seres humanos.
Posteriormente, a leptospirose foi designada, por Goldschmidt, como Doena de
Weil. A etiologia bacteriana foi estudada concomitantemente, em meados do ano de
1915, por Inada e Ido, no Japo, e por Uhlenhuth e Frommer, na Alemanha. Estes
ltimos detectaram as espiroquetas na corrente sangnea de porcos inoculados
com sangue de soldados infectados pela Doena Francesa. Porm, foram os
estudos de Inada que deram origem as primeiras publicaes de trabalhos sobre
leptospirose (LEVETT, 2001; WHO, 2003).
No Brasil, de acordo com RIQUELME (1985), o interesse pela leptospirose
canina, comeou com os estudos de Dacorso Filho, em 1940. Desde ento,
inmeras pesquisas foram realizadas por diversos autores, entre eles Hagiwara e
Santa Rosa (1975), que detectaram anticorpos contra 18 sorotipos de leptospiras em
7,5% de ces investigados na cidade de So Paulo. De acordo com este mesmo
trabalho, Guida (1949) encontrou, tambm em So Paulo, 31% de casos; Veronesi
et al. (1956) 9,6% e Santa Rosa (1970) 13,8%. Dando seqncia ao levantamento
epidemiolgico, Caldas e Sampaio (1977) investigaram 888 casos em Salvador (BA),
que resultaram em 15% de casos positivos para leptospirose. Yasuda et al. (1980),
em So Paulo, analisaram 1428 soros da espcie canina, detectando 21,6% de
soropositivos.
2.2
ETIOLOGIA E CLASSIFICAO
2.2.1 As Espiroquetas
A ordem Spirochaetales inclui a famlia Spirochaetaceae e Leptospiraceae,
cujos gneros de importncia em animais e humanos so: Serpulina, Treponema e
Borrelia (famlia Spirochaetaceae) e Leptospira (famlia Leptospiraceae) (ANEXO 6).
Como o prprio nome define, as espiroquetas so formas bacterianas gramnegativas que se apresentam como espiras delgadas, mveis, flexveis, unicelulares,
medindo de 0.1 a 0.3m de dimetro e 6 a 20m de comprimento. A parede externa
da clula bacteriana composta por uma membrana completamente coberta de
flagelos periplasmticos que compe o filamento axial ou endoflagelo, o qual permite
movimentos de saca-rolhas (spin) e de flexo-extenso facilitando a mobilidade
bacteriana no ambiente. O cilindro helicoidal (corpo celular) consiste de material
nuclear, citoplasma, membrana citoplasmtica e a poro de peptidioglicano da
parede celular. O flagelo periplasmtico envolvido pelo cilindro e est no espao
periplasmtico celular. A poro final de cada flagelo est inserida prxima a um
plo de cilindro protoplasmtico firmemente aderido por estruturas denominadas
discos de insero. O ponto distal de cada flagelo se estende para o centro da clula
e pode se sobrepor por flagelos originados no plo oposto (QUINN et al., 1994)
(ANEXO 1 e 2).
mesma
espcie.
Estudos
recentes
demonstraram
tambm
2.3
EPIDEMIOLOGIA
sorovares
universais,
como
por
exemplo,
L.
interrogans,
sorovar
veterinria,
medicamentos,
vacinas
testes
laboratoriais
para
10
11
2.4
PATOGNESE
resposta
imune
mediada
por
anticorpos
ao
sorovar
infectante,
os
12
para
provocar
extensa
hemoglobinria,
resultante
de
hemlise
13
ocorrer a septicemia ao dar-se a invaso nos rgos pelos quais a bactria tem
maior tropismo, como fgado, rins, bao, sistema nervoso central e globo ocular,
podendo ocasionar grandes danos teciduais. A Leptospira pode provocar petquias
ou equimoses, ictercia, infiltrado inflamatrio difuso de clulas plasmticas nos rins,
necrose focal de parnquima heptico, colestase intra-heptica com leso heptica
severa. Neste estgio da doena o animal poder sucumbir devido insuficincia
renal ou heptica. Ao final da bacteremia (sete a dez dias aps a infeco),
geralmente a febre diminui e a bactria eliminada da circulao sangnea devido
presena de anticorpos, o que possibilita a recuperao. Esta mais rpida
quanto menor forem as leses orgnicas. No entanto, as bactrias que se alojaram
em locais onde os anticorpos no tm acesso, como crneas e tbulos renais,
podem levar uvetes e leptospirria. O fenmeno de leptospirria ocorre em uma
fase mais tardia da enfermidade. Ela pode permanecer por meses, at mesmo anos,
constituindo-se uma fonte de contaminao ambiental e de infeco para os outros
animais. Nesses animais portadores e eliminadores da bactria, a concentrao de
anticorpos decai, j que o microorganismo se encontra situado nos tbulos renais,
no estimulando o sistema imune podendo apresentar-se soronegativos quando
testados (CIVES, 2005).
ACHA e SZYFRES (2001) descrevem a doena no homem e nos animais,
particularmente bovinos e ces, da seguinte maneira:
-
Em seres humanos em geral, distinguem-se dois tipos clnicos: o anictrico, que pode
ser discreto, sendo freqentemente rotulado de sndrome gripal ou virose; e o ictrico
ou hepatonefrtico (Doena de Weil) tipo clnico mais grave, com disfuno renal,
fenmenos hemorrgicos, alteraes hemodinmicas, cardacas, pulmonares e de
conscincia, associadas a taxas de letalidade que variam de 5% a 20% nas diversas
casusticas. Na forma clssica da Doena de Weil os sintomas se instalam bruscamente
com febre, dores de cabea, mialgias, conjuntivites, nuseas, vmitos, diarrias e
constipao. A prostrao marcante. Petquias na pele, hemorragias gastrointestinais
e proteinria so comuns.Se o paciente evolui at a cura, a diurese se restabelece e
diminui a ictercia. Qualquer sorovar pode determinar as diversas formas de
apresentao clnica, sendo que alguns esto mais comumente relacionados a casos
mais graves, como o sorovar icterohaemorragiae. Na forma anictrica muitas vezes o
curso benigno e o paciente se recupera dentro de um ms.
Em bovinos tm-se isolado mais de 13 sorovares onde os universais so pomona e
hardjo, este ltimo vem se comprovando com cada vez mais freqncia. A infeco
pode se dar na forma aguda, subaguda ou permanecer clinicamente inaparente. A
enfermidade se manifesta por uma febre de quatro a cinco dias, anorexia, conjuntivite e
diarria. A leptospiremia comea a desaparecer quando se formam os anticorpos,
desaparecendo as leptospiras da corrente sangnea em uma semana devido a
imunidade humoral. As leptospiras sobreviventes alojam-se nos tbulos convolutos dos
rins e a infeco passa a uma fase crnica. Nos primeiros meses a leptospirria elimina
grandes quantidades de leptospiras diminuindo ou cessando com o tempo. O sorovar
14
hardjo, cuja leptospirria mais prolongada que o pomona, caracteriza-se por causar
agalactia, ou reduo de leite e abortos ou crias fracas. Infeces por hardjo podem
residir nos rgos genitais o que pode indicar transmisso venrea. A infertilidade pode
ser seqela da infeco. Em casos graves h ictercia. So susceptveis animais de
todas as idades, sendo mais severa em bezerros.
Nos ces os sorovares predominantes no mundo so canicola e icterohaemorrhagiae. A
infeco pode variar desde uma forma assintomtica at quadros clnicos mais graves.
A hemorrgica a forma mais grave, instalando-se repentinamente em trs a quatro
dias com sinais de febre seguida por rigidez e mialgias dos membros posteriores,
hemorragias na cavidade bucal podendo levar a necrose e faringite, seguidas
posteriormente de hemorragias gastrointestinais, nefrite aguda e ictercia.
15
2.5
SINAIS CLNICOS
16
et
al.
(2005),
inocularam
cepas
virulentas
de
L.
17
nas taxas de uria, creatinina e bilirrubina total, alm de leses como petquias e
nefrite subaguda.
Em gatos os sinais clnicos so raros e variam de suaves a inaparentes
mesmo na presena de leptospiremia e leptospirria e inflamaes renais e
hepticas (GREENE, 1998; ACHA; SZYFRES, 2001).
LARSSON et al. (1985), com o objetivo de verificar a susceptibilidade dos
felinos infeco por leptospirose constataram que, dos dez gatos inoculados com
os sorovares icterohaemorrhagiae e canicola nenhum deles apresentou sinais
clnicos nem laboratoriais e, 90 % apresentaram aglutininas antileptospricas aps a
inoculao bacteriana, que ainda eram detectveis na urina por at 12 semanas.
Trabalho de NAVARRO et al. (1981) ao inocularem Leptospira interrogans
sorovar icterohaemorrhagiae em cinco ces, observaram sinais clnicos diferentes
que variavam de febre, como nica manifestao inicial detectvel, at severa
ictercia, uremia e morte. necropsia, foram detectadas petquias na mucosa
intestinal e hemorragia subpleural nos pulmes.
NAVARRO e KOCIBA (1982) dando seqncia a estes estudos verificaram
entre
os
dez
ces
inoculados
com
Leptospira
interrogans
sorovar
2.6
18
de
campo
escuro,
onde
aparecem
como
espirilos
delgados
apresentando extrema mobilidade. Este tipo de pesquisa pode ser realizado a partir
de uma gota de sangue, at o quarto dia de infeco, ou de uma amostra de urina,
entre a primeira e segunda semana. A demonstrao de microorganismos atravs
de microscopia de campo escuro em lquidos orgnicos e emulses teciduais,
colhidos necropsia, requer que os tecidos estejam frescos. A Leptospira pode ser
excretada na urina intermitentemente e ttulos de anticorpos, nesses animais
portadores podem variar consideravelmente, dificultando o diagnstico correto
(MURRAY et al., 1998).
19
20
21
sorolgicos
possuem
limitaes
por
isto,
devem
ser
22
23
2.7
DIAGNSTICO DIFERENCIAL
2.8
VACINAS
24
25
26
27
28
3.1
MATERIAL E MTODOS
ANIMAIS DO EXPERIMENTO
experimento
contou
com
animais
provenientes
do
Laboratrio
3.2
IMUNGENO UTILIZADO
(Duramune
Max5-CvK/4L)
contendo
os
seguintes
sorovares:
L.
3.3
VACINAES
29
3.4
3.5
3.6
30
31
RESULTADOS
As
tabelas
seguir
apresentam
os
resultados
dos
exames
de
4.1
TTULOS PR-VACINAIS
TABELA 1
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
Animais
L.grippoty
phosa
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1/25
1/25
1/25
1/25
1/50
1/50
1/25
1/100
1/25
1/25
1/25
1/25
32
FIGURA 1 - TTULOS
SOROLGICOS
PR-VACINAIS
PARA
Leptospira
PARA
Leptospira
13%
0% 0%
6%
25%
56%
No reagente - 4 (1/25) - 9
(1/50) - 2
(1/100) - 1
(1/400) - 0
FIGURA 2 - TTULOS
(1/200) - 0
SOROLGICOS
PR-VACINAIS
100%
No reagente - 16 (1/25) - 0
(1/50) - 0
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
33
4.2
Aps 30 dias da administrao da vacina comercial os resultados psvacinais obtidos para os sorovares copenhageni, canicola, pomona e grippotyphosa
esto descritos na Tabela 2; Figuras 3, 4, 5 e 6.
No se observou ttulo aglutinante para o sorovar icterohaemorrhagiae
(Tabela 2; Figura 7).
As amostras sorolgicas pertencentes aos animais nmeros 01, 02, 03, 13 e
16, que no exame pr-vacinal apresentaram ttulos 1/25, frente ao sorovar
copenhageni, tiveram os mesmos aumentados para 1/400. Nas amostras 04 e 10
observou-se uma alterao na titulao ps-vacinal de 1/25 para 1/200. A amostra
nmero 06 evoluiu de 1/50 para 1/200 no ps-vacinal e a amostra nmero 07 de
1/50 para 1/400. As amostras 05 e 08, inicialmente no reagentes, evoluram, para
1/200, e as amostras 09 e 11, igualmente no reagentes, aumentaram para 1/400. A
amostra 12, com ttulo inicial de 1/100, passou para 1/200. A amostra 14 de 1/25
aumentou para 1/100 e a amostra 15 de 1/25 para no reagente.
L.icterohae
morrhagiae
-
L.canicola
1/100
1/50
1/50
1/50
1/25
1/50
1/100
L.copenhagen
i
1/400
1/400
1/400
1/200
1/200
1/200
1/400
1/200
1/400
1/200
1/400
1/200
1/400
1/100
1/400
L.pomona
1/25
1/25
1/25
1/25
1/25
-
L.grippoty
phosa
1/25
1/25
1/25
1/25
1/50
1/25
1/25
1/25
1/50
34
FIGURA 3 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
PARA
Leptospira
53%
40%
No reagente - 0 (1/25) - 0
(1/50) - 0
(1/100) - 1
(1/400) - 8
FIGURA 4 - TTULOS
(1/200) - 6
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
0%
25%
0%
56%
6%
No reagente - 9 (1/25) - 1
(1/50) - 4
(1/100) - 2
(1/400) - 0
(1/200) - 0
35
FIGURA 5 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
13%
43%
44%
No reagente -7 (1/25) - 7
FIGURA 6 - TTULOS
(1/50) - 2
SOROLGICOS
(1/100) - 0
(1/200) - 0
PS-VACINAIS
0%
31%
69%
No reagente - 11 (1/25) - 5
(1/50) - 0
(1/100) -0
(1/400) - 0
(1/200) -0
(1/400) - 0
PARA
Leptospira
36
100%
No reagente -16
(1/100) - 0
4.3
(1/25) - 0
(1/50) - 0
(1/200) - 0
(1/400) - 0
37
SOROVARES
copenhageni,
pomona
icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,
DOS
canicola,
16
CES
EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
Animais
L.grippoty
phosa
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1/25
1/50
1/25
1/50
1/25
1/50
1/200
1/100
1/200
1/200
1/100
1/100
1/200
1/100
1/100
1/100
1/100
1/100
1/50
1/200
1/25
-
FIGURA 8 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
0%
13%
31%
6%
50%
No reagente
(1/25)-0
(1/50) - 1
(1/100) - 8
(1/200) - 5
(1/400) - 0
PARA
Leptospira
38
FIGURA 9 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
PARA
Leptospira
0%
0%
19%
62%
No reagente - 2 (1/25) - 0
(1/50) - 1
(1/100) - 8
(1/400) - 0
FIGURA 10 - TTULOS
(1/200) - 5
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
interrogans SOROVAR grippotyphosa AOS 60, 90, 120, 150, 180 E 210
DIAS
Sorovar grippotyphosa aos 60, 90, 120, 150, 180
e 210 dias
0%
100%
No reagente -16
(1/100) - 0
(1/25) - 0
(1/200) - 0
(1/50) - 0
(1/400) - 0
39
FIGURA 11 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
6% 0%
94%
No reagente -15
(1/100) - 0
4.4
(1/25) - 1
(1/200) - 0
(1/50) - 0
(1/400) - 0
40
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
Animais
L.grippoty
phosa
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1/25
1/25
1/25
1/25
-
FIGURA 12 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
0% 0%
0%
75%
No reagente - 12
(1/100) - 0
(1/25) - 4
(1/200) - 0
(1/50) - 0
(1/400) - 0
Leptospira
41
FIGURA 13 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
PARA
Leptospira
0%
100%
No reagente - 2 (1/25) - 0
(1/50) - 1
(1/100) - 8
(1/400) - 0
FIGURA 14 - TTULOS
(1/200) - 5
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
0%
100%
No reagente -16
(1/100) - 0
(1/25) - 0
(1/50) - 0
(1/200) - 0
(1/400) - 0
42
4.5
43
SOROVARES
copenhageni,
pomona
icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,
DOS
cani-cola,
16
CES
EXPERIMENTAIS
Animais
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
L.icterohae
morrhagiae
-
FIGURA 15 - TTULOS
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
1/50
1/25
1/25
1/50
1/25
1/50
1/25
1/25
1/50
1/50
1/25
1/25
1/50
1/50
1/50
1/50
1/50
1/50
1/25
1/25
1/50
1/50
1/50
1/50
1/50
1/25
1/50
1/50
-
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
0%
0%
44%
31%
No reagente - 7 (1/25) - 5
(1/50) - 4
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
L.grippoty
phosa
-
Leptospira
44
FIGURA 16 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
PARA
Leptospira
13%
13%
74%
No reagente - 12 (1/25) - 2
(1/50) - 2
(1/100) - 0
(1/400) - 0
FIGURA 17 - TTULOS
(1/200) - 0
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
0% 6%
19%
75%
No reagente - 1 (1/25) - 3
(1/50) - 12
(1/100) - 2
(1/400) - 0
(1/200) - 0
45
4.6
SOROVARES
copenhageni,
pomona
icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,
DOS
canicola,
16
CES
EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
Animais
L.grippoty
phosa
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1/25
-
1/50
1/200
1/100
1/100
1/100
1/50
1/25
1/100
1/25
1/50
1/50
1/25
1/50
1/25
1/25
1/50
1/25
46
FIGURA 18 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
6% 0%
25%
50%
13%
6%
No reagente - 8 (1/25) - 1
(1/50) - 2
(1/100) - 4
(1/400) - 0
FIGURA 19 - TTULOS
(1/200) - 1
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
94%
No reagente - 15 (1/25) - 1
(1/50) - 0
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
PARA
Leptospira
47
FIGURA 20 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
0%
0%
25%
44%
31%
4.7
No reagente - 7 (1/25) - 5
(1/50) - 4
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
Frente ao sorovar copenhageni, aos 180 dias, as amostras 03, 04, 05, 06,
08, 09, 10, 14, 15 e 16 foram no reagentes. As amostras 12 e a 13 apresentaram
ttulos de 1/25. A amostra 07 apresentou ttulo de 1/50. As amostras 01 e 11
apresentaram titulao de 1/100 e a amostra 02, ttulo de 1/200 (Figura 21).
Aos 180 dias no se obteve alterao de ttulo para o sorovar canicola nas
amostras 01, 02, 04, 07, 08, 11, 12, 14 e 15. As amostras 06, 09 e 10 apresentaram
titulao de 1/25 e as amostras 03, 05, 13 e 16 a titulao de 1/50 (Tabela 7; Figura
22).
Observou-se reao aglutinante para o sorovar pomona com os seguintes
resultados: no-reagentes (amostras: 04, 05, 06, 08, 10, 13 e 14), 1/25 (amostras:
01, 07, 11, 12, 15 e 16) e 1/50 (amostras: 02,03 e 09) (Figura 23).
Frente aos sorovares icterohaemorrhagiae e grippotyphosa no se obtiveram
amostras reagentes (Figuras 7 e 10).
48
SOROVARES
copenhageni,
pomona
icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,
DOS
canicola,
16
CES
EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
Animais
L.grippoty
phosa
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1/50
1/50
1/25
1/25
1/25
1/50
1/50
1/100
1/200
1/50
1/100
1/25
1/25
-
1/25
1/50
1/50
1/25
1/50
1/25
1/25
1/25
1/25
FIGURA 21 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
13%
6% 0%
6%
13%
62%
No reagente - 10 (1/25) - 2
(1/50) - 1
(1/100) - 2
(1/400) - 0
(1/200) - 1
Leptospira
49
FIGURA 22 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
PARA
Leptospira
25%
56%
19%
No reagente - 9 (1/25) - 3
(1/50) - 4
(1/100) - 0
(1/400) - 0
FIGURA 23 - TTULOS
(1/200) - 0
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
0%
0%
43%
38%
No reagente - 7 (1/25) - 6
(1/50) - 3
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
50
4.8
L.canicola
L.copenhageni
L.pomona
Animais
L.grippoty
phosa
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1/25
1/25
1/25
1/25
1/100
1/50
1/50
1/100
1/100
1/100
1/100
1/50
1/25
1/50
1/50
51
FIGURA 24 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
PARA
Leptospira
0%
32%
6%
31%
No reagente - 5 (1/25) - 1
(1/50) - 5
(1/100) - 5
(1/400) - 0
FIGURA 25 - TTULOS
(1/200) - 0
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
25%
0%
75%
(1/50) - 0
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
PARA
Leptospira
52
FIGURA 26 - TTULOS
SOROLGICOS
PS-VACINAIS
0%
100%
No reagente -16 (1/25) - 0
(1/50) - 0
(1/100) - 0
(1/400) - 0
(1/200) - 0
PARA
Leptospira
53
400
350
300
250
200
200
150
100
100
0
50
100
0 25 0
100
0
0
0
50
0
25 0 25 0
0
0
0
0
dia 0
0
60 dias
120 dias
180 dias
* - Reforo ps-vacinal
25 0
copenhageni
canicola
icterohaemorrhagiae
400
350
300
250
200
200
200
150
100
50
0
25 0
0
dia 0
0
0
0
0
050
0
30
dias
60
90
120
dias dias *
dias
* - Reforo ps-vacinal
0
0
50
0
0
0
0
150
dias
180
dias
50 0
0
copenhageni
210
dias
canicola
icterohaemorrhagiae
54
200
150
100
50
50
100
50
0
0
dia 0
0
30
dias
60
90
120
dias dias *
dias
50
0
0
150
dias
250
180
dias
210
dias
copenhageni
canicola
* - Reforo ps-vacinal
icterohemorrhagiae
400
350
300
250
200
200
150
100
50
50
0
0
0
dia 0
30
dias
0
0
0
60
dias
* - Reforo ps-vacinal
100
0
0
0
25 0 25 0
90
dias *
0
0
150
dias
0
120
dias
50
180
dias
0
210
dias
copenhageni
canicola
icterohaemorrhagiae
55
400
400
350
300
250
200
150
100
100
0
50
0
0
0
100
0
0
30
dias
60
dias
25 0
dia 0
100
050 25 0
0
0
90
120
dias * dias
150
dias
copenhageni
180
dias
* - Reforo ps-vacinal
210
dias
canicola
icterohaemorrhagiae
400
350
300
250
200
150
100
100
0
50
0
0
0
dia 0
0
0
60
dias
* - Reforo ps-vacinal
0
0
30
dias
100
90
dias *
120
dias
150
dias
0
180
dias
100
0
0
0
copanhageni
210
dias
canicola
icterohaemorrhagiae
56
DISCUSSO
57
de
58
De acordo com o Ministrio da Sade (FUNASA, 2001) o fenmeno da coaglutinao entre sorovares de ocorrncia comum dentro de um mesmo
sorogrupo. Tcnicas avanadas demonstraram que as espiroquetas s podem ser
verdadeiramente classificadas taxonomicamente atravs de tcnicas genticas
acuradas como a de Hibridizao de DNA, de modo que, diagnsticos e
classificaes taxonmicas baseados apenas em mtodos sorolgicos e antignicos,
como a que utiliza a Microaglutinao Microscpica, podem no ser confiveis o
suficiente
para
distinguir
icterohaemorrhagiae
sorovares
to
semelhantes
como
sorovares
59
cepa de
60
vacinal
no
haveria
necessidade
de
incluir
sorovar
61
62
anuais
desnecessrias.
Este
contra
as
infeces
procedimento
sendo
desvinculatrio
na
maioria
baratearia
das
vezes
os
custos
63
contra leptospirose canina confere imunidade por um ano, devendo os animais ser
imunizados com vacinas inativadas, com a primeira dose entre 10 a 12 semanas de
idade, e a segunda, duas a trs semanas aps, com reforos anuais.
Parece evidente que, o procedimento proposto pela presente pesquisa trar
aos clnicos veterinrios e aos proprietrios um maior grau de segurana para os
seus animais e familiares, e de uma forma indireta, para a sociedade em geral.
64
CONCLUSES
4. A avaliao da ativao clonal ps-vacinal deve ser realizada utilizandose titulaes mais baixas daquelas preconizadas para avaliao de
infeco.
65
REFERNCIAS
66
67
68
69
PHILLIPS, T.R.; JENSEN, J.L.; RUBINO, M.J.; YANG,W. C.; SCHULTZ, R.D. Effects
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70
71
ANEXOS
ALGUNS
SOROVARES
DA
Leptospira
SOROVARES
DO
GNERO
Leptospira
CONTENDO
AS
BACTERINAS
PARA
LEPTOSPIROSE...................................................................................82
72
73
SOROVARES
Icterohaemorrhagiae
Hebdomadis
Autumnalis
Pyrogenes
pyrogenes
Bataviae
Bataviae
Grippotyphosa
Canicola
canicola
Australis
Pomona
pomona
Javanica
javanica
Sejroe
Panama
panama, mangus
Cynopteri
cynopteri
Djasiman
djasiman
Sarmin
sarmin
Mini
mini, georgia
Tarassovi
tarassovi
Ballum
ballum, aroborea
Celledoni
celledoni
Louisiana
louisiana, lanka
Ranarum
ranarum
Manhao
manhao
Shermani
shermani
Hurstbridge
hurstbridge
74
SOROGRUPOS
L. interrogans
L. noguchii
L. santarosai
L. meyeri
L. wolbachiic
Codice
L. biflexa
Semaranga, Andamana
L. fainei
Hurstbridge
L. borgpetersenii
L. kirschneri
Grippotyphosa,
Autumnalis,
Cynopteri,
Hebdomadis,
Australis,
Pomona,
L. weilii
L. parva
L. alexanderi
Turneria
Manhao, Hebdomadis, Javanica, Mini
75
ESPCIES
Bataviae
L. interrogans, L. santarosai
Bulgarica
L. interrogans, L. kirschneri
Grippotyphosa
L. kirschneri, L. interrogans
Hardjo
Icterohaemorrhagiae
L. interrogans, L. inadai
Kremastos
L. interrogans, L. santarosai
Mwogolo
L. kirschneri, L. interrogans
Paidjan
L. kirschneri, L. interrogans
Pomona
L. interrogans, L. noguchii
Pyrogenes
L. interrogans, L. santarosai
Szwajizak
L. interrogans, L. santarosai
Valbuzzi
L. interrogans, L. kirschneri
76
ENTRE
OS
GNEROS
Leptospira,
Serpulina/Treponema E Borrelia
Leptospira
Morfologia
Serpulina/Treponema
6-14 espirais regulares
Borrelia
4-8
espirais
frouxos
Comprimento
6-20 m
5-20m
3-20m
Dimetro celular
0.1-0.2m
0.1-0.5m
0.2-0.5m
Flagelo periplasmtico
6-10
15-20
Discos de insero
3-5
Aa do peptidioglicano
c. diaminopimlico
ornitina
ornitina
Respirao
aerbio
Produo de catalase
presente
ausente
Fonte de energia
Transmisso por artrpodes
aminocido
no
no
Ausente
e/ou
carboidrato
sim
febre recidivante,
Enfermidade causada
leptospirose
enfermidade
Lymne
de
77
SOROGRUPO
SOROVAR
Australis
australis
bratislava
BOVINOS
SUNOS
CANINOS
EQUINOS
OVINOS
ROEDORES
SELVAGENS
+
Autumnalis
autumnalis
Ballum
ballum
Bataviae
bataviae
Canicola
canicola
Grippotyphosa grippotyphosa
Hebdomadis
hebdomadis
szwajizak
Ictero-
ictero-
haemorrhagia
haemorrhagiae
copenhageni
Pomona
pomona
Sejroe
balcanica
hardjo
saxkoebing
sejroe
Tarassovi
tarassovi
+
+
78
L. interrogans / SOROVARES
PRINCIPAIS HOSPEDEIROS
HOSPEDEIROS ACIDENTAIS
autumnalis
animais silvestres
ballum
animais silvestres
bratislava
canicola
caninos
grippotyphosa
animais silvestres
sunos/ bovinos
hardjo
bovinos
ovinos
icterohaemorrhagiae
roedores
pomona
sunos/ bovinos
79
SINAIS CLNICOS
Subclnica com ou sem leptospirria;
Sndrome da queda do leite com ou sem outros sintomas
(hardjo);
abortos
natimortos
(canicola,
pomona
icterohaemorragiae);
Febre, anorexia, ictercia, hemoglobinria e alta mortalidade de jovens
animais ( icterohaemorragiae).
Ces
Eqinos
Ovelhas
80
ANEXO 10 - LEPTOSPIROSE
NO
BRASIL:
CASOS
CONFIRMADOS
Regio/Ano
1989
1990
1991
1992
1993
1994
1995
1996
Norte
314
399
477
422
376
634
841
684
Nordeste
1483
1034
856
606
467
1026
1467
987
Sudeste
622
727
1356
728
621
747
1202
3065
Sul
87
241
312
308
255
427
679
509
Centro-Oeste
16
32
10
60
71
36
Total
2508
2409
3017
2096
1729
2894
4260
5281
EM
81
LOCAL
et
N DE
AMOSTRAS
REAGENTES
(%)
136
8 (5.9)
1428
308 (21.6)
425
143 (34.8)
114
23 (20)
185
34 (18.4)
775
119 (15.4)
120
102 (85.0)
410
61 (15.0)
1000
179 (17.9)
et Belo Horizonte-MG
Santa Rosa
al.,1974
Yasuda
1980
N DE
AMOSTRAS
EXAMINADAS
Pelotas - RS
Patos - PB
Mascolli
2002
Silva, 2003
et
de
al., Santana
Parnaba SP
Botucatu - SP
PRINCIPAIS
SOROVARES
icterohaemorrhagiae (2.9)
tarassovi (1.5)
pomona (0.7)
pyrogenes (0.7)
canicola (50.7)
icterohaemorrhagiae
(25.5)
grippotyphosa (7.8)
pomona (6.7)
canicola (58.1)
icterohaemorrhagiae
(20.9)
copenhageni (11.4)
grippotyphosa (2.7)
autumnalis (34.8)
grippotyphosa (13.0)
icterohaemorrhagiae
(10.3)
canicola (6.0)
copenhageni (4.9)
canicola (64.7)
pyrogenes (50.4)
icterohaemorrhagiae
(14.3)
copenhageni (14.3)
pomona (4.2)
grippotyphosa (1.6)
canicola (25.0)
icterohaemorrhagiae
(23.3)
autumnalis (35.0)
grippotyphosa (10.0)
pyrogenes (12.5)
pomona (1.6)
copenhageni (24.4)
canicola (16.0)
hardjo (16.0)
castellonis (28.7)
autumnalis (19.1)
pyrogenes (17.7)
icterohaemorrhagiae
(11.0)
canicola (9.6)
82
Espcies
C
SOROTIPOS/SOROVARES
canicola e icterohaemorrhagiae
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C
B
C
C
S
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bratislava.
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Fort Dodge
Fort Dodge
C
C
Lepto 5 Tipos
Lepto Bac
Lepto Bac 6
Merial
Fort Dodge
Fort Dodge
B
C
BES
Lepto-Bov-6
Valle
Leptoferm 5/2ml
Leptospirovac-B
Leptospirovac-C
Leptospirovac-S
Leptovac 6
Leptovacin
Pfizer
IRFA
IRFA
IRFA
Hertape
Bio-vet
Multi-Dog*
Hertape
Nobivac L
Octa-Cino-Vacin*
Parvo Lepto 6*
Intervet
Bio-vet
Fort Dogde
C
C
S
Poli-Cino-Vacin*
Six-Dog*
Suvaxyn L6
Bio-vet
Hertape
Fort Dogde
C
C
S
Tandem 9K*
Merial
Tissuvax 3*
Coopers
Tissuvax Max*
Tri-Cino-Vacin*
Tri-Dog*
Tridog*
Vacina Quadrivac*
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Coopers
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Bio-Vet
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Hertape
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Valle
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Leivas
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Vanguard 5/CV-L*
Pfizer
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Vanguard DA2PL*
Pfizer
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HTLP Pfizer
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Vanguard
5/CV-L*
Vencosix-Plus*
Vencofarma
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Vencothree*
Vencofarma
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Vencothree-Plus*
Vencofarma
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* vacinas associadas B: bovinos; C: ces, Cp: caprinos, E: eqinos, G: gatos, O: ovinos, S: sunos
FONTE: GARCIA, 2005