RECUENTO

BACTERIANO
Lic. Leticia Diana
rea de Bacteriologa. Departamento de Ciencias Microbiolgicas
Facultad de Veterinaria UdelaR
2015

Generalidades
Replicacin bacteriana: fisin binaria (biparticin).

Aumento
exponencial en el
nmero de clulas
de la poblacin

Tipos de crecimiento
CRECEIMIENTO INDIVIDUAL:
La bacteria alcanza un tamao y peso fijo.
Constituye el paso previo a la divisin celular.

CRECEIMIENTO POBLACIONAL:
Es el incremento en el numero de clulas como
consecuencia del crecimiento y divisin celular

Mtodos de evaluacin del crecimiento

1. Determinacin del n de microorganismos (m.o):
A. Recuento microscpico directo (Cmara de
Neubauer)
B. Conteo electrnico (Citometra de flujo)
C. Recuento en placa
D. Recuento por filtracin en membrana
E. Nmero ms probable (NMP), en medio lquido

Mtodos de evaluacin del crecimiento

2. Determinacin de la masa celular:
A. Medida de la masa
B. Medida del volumen
C. Determinacin del contenido de C, N, P, etc.
D. Turbidimetra

Mtodos de evaluacin del crecimiento

2. Determinacin de la actividad celular:
A. Actividad enzimtica
B. Concentracin de determinado metabolito
C. Medida de respiracin.

Determinacin del n de m.o:

Recuento microscpico directo (Cmara de Neubauer)

Determinar el nmero total de organismos de una muestra:

Se utilizan cmaras de recuento (cmara de Petroff-Hauser o
Neubauer) y se visualiza al microscopio.
Es un mtodo rpido, pero no distingue entre viables o no
viables
Clulas muy pequeas no se ven bien
No es til para muestras con baja carga celular
Pueden contarse materiales del cultivo de manera errnea

Determinacin del n de m.o:

Recuento microscpico directo (Cmara de Neubauer)

BROCK. BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS (12 EDICION) JOHN MARTINKO , ADDISON-WESLEY, 2009

Determinacin del n de m.o:

Conteo electrnico (Citometra de flujo)

La citometra de flujo es una tecnologa biofsica basada en

la utilizacin de luz lser, empleada en el recuento y
clasificacin de clulas segn sus caractersticas
morfolgicas, presencia de biomarcadores.
Las clulas suspendidas en un fluido atraviesan un finsimo
tubo transparente sobre el que incide un delgado rayo de luz
lser, la luz transmitida y dispersada por el pasaje de las
clulas a travs del tubo se recoge por medio de unos
dispositivos de deteccin, permitiendo hacer inferencias en
cuanto a tamao y complejidad de las clulas.

Determinacin del n de m.o: Recuento en placa

Es un mtodo muy utilizado cuando se necesita determinar
el tamao de la poblacin bacteriana de una muestra
(alimento, productos farmacuticos, aguas, produccin de
vacunas).
Se basa en que cada uno de los microorganismos presentes
en la muestra desarrollar una colonia visible
Cada colonia observada se form a partir de por lo menos un
microorganismo. Entonces la colonia es considera una
unidad formadora de colonia (ufc) a los efectos de los
clculos.

Determinacin del n de m.o: Recuento en placa

Determinacin de
las ufc

Mtodo de recuento
incorporado

Mtodo de recuento
en superficie

Determinacin del n de m.o: Recuento en placa

Mtodo de recuento en superficie (recuento por extensin
en placa):
Preparar diluciones seriadas de 1/10, 1/ 100, 1/ 1.000, 1/
10.000 y 1/ 100.000 de la muestra anterior respetando un
volumen final de 5 a 9 ml.
Se rotulan 5 placas (una para cada dilucin) sembrar 0.1
ml (con pipeta limpia en cada una) de cada dilucin en
una placa de Petri con Agar Nutritivo o TSA y con ayuda de
un rastrillo extenderlo por toda la placa.
Incubar a 37 C durante 24 a 48 hs.

Determinacin del n de m.o: Recuento en placa

Una vez pasado el tiempo de incubacin se cuentan las colonias crecidas en la superficie.
Solo se cuentan las placas que tienen entre 30 a 300 colonias y luego se realiza un promedio.
Como calcular las ufc/ml:

Ufc/ mL de muestra = N de colonias contadas x Factor de dilucin

mL de la muestra sembrada
Factor de dilucin: Inversa de la dilucin

 Veamos un ejemplo con nmeros.

Ufc/mL= 159(colonias contadas) x 1000 (inverso del factor de dilucin que es 10-3)
1mL (volumen que sembr en la placa)
Ufc/mL = 159000 = 1,59 x 105 ufc/mL

BROCK. BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS (12 EDICION) JOHN MARTINKO , ADDISON-WESLEY, 2009

Para pensar:
Problema 1:
N de colonias contadas: 280
Dilucin: 10-3
Volumen sembrado: 1 mL
Ufc/mL: ????????
Problema 2:
N de colonias: 56
Dilucin: 10-4
Volumen sembrado: 0,2 mL
Ufc/mL:?????????

280 x 1000 / 1mL = 280.000 =2,8 x 105 ufc/mL

56 x 10000 / 0,2 mL =2.800.000 =2,8 x 106 ufc/mL

Determinacin del n de m.o: Recuento en placa

Mtodo de recuento incorporado (recuento por inclusin o recuento
por vertido en placa):
Preparar diluciones seriadas de 1/10, 1/ 100, 1/ 1.000, 1/ 10.000 y 1/ 100.000
de la muestra anterior respetando un volumen final de 5 a 9 ml.
Se rotulan 5 placas (una para cada dilucin) sin medio de cultivo. Fundir el
medio a utilizar y termostatizarlo a 45C no ms.
Sembrar en cada placa cada una de las diluciones (1mL) y luego colocar el
medio de cultivo termostatizado.
Agitar suavemente (homogenizar), esperar que solidifique el medio e incubar
a 37C durante 24 a 48 hs.

1/10000 (10-4)
1 mL

142 colonias

1/100000 (10-5)
1 mL

30 colonias

1/1000000 (10-6)
1mL

17 colonias

Ufc/mL= 142(colonias contadas) x 10000(inverso del factor de dilucin que es 10-4)

1mL (volumen que sembr en la placa)
Ufc/mL = 1420000 = 1,42 x 106 ufc/mL

Determinacin del n de m.o:

Recuento por filtracin en membrana

Se realiza por filtracin de un volumen de la

muestra a travs de un filtro de membrana de

tamao adecuado para retener a las bacterias (0.220.45 m)
El filtro se coloca sobre un medio de cultivo slido y
se incuba.
Luego se cuentan las colonias que crecieron en el
filtro.
Se utiliza con frecuencia para determinar el nmero
de bacterias en agua.

Determinacin del n de m.o:

Numero mas probable (NMP)

Nos proporciona un recuento de viables

Se basa en el principio de que una nica clula viva puede
desarrollarse y producir un cultivo turbio

Requiere la realizacin una serie de diluciones seriadas al

dcimo de la muestra de cultivo, en un medio lquido
adecuado para el crecimiento de dicho organismo

Puede emplearse para determinar la contaminacin del

agua potable o de alimentos

Ir a la tabla de NMP y buscar la cifra 531

CLCULO:

factor de dilucin (primero usado) x NMP (tabla) = N de clulas /mL

1000 x 11,0 = 11.000 clulas /mL=11 x 103 celulas/mL

Para pensar:
Se siembra un NMP con las siguientes diluciones :
1/ 10.000, 1/100.000 y 1/1.000.000 y el resultado al
saca los tubos de la estufa es el siguiente:
4 2 1
Indique cual es el resultado / mL de muestra

MUCHAS GRACIAS!!