Universidad Autnoma de Nayarit

Unidad Acadmica de Ciencias Qumico Biolgicas y

Farmacuticas
Q.F.B.

Bacteriologa Clnica
Prctica No. 1
Mtodos Generales de Bacteriologa
Docente:
Q.F.B Dora Liliana Luna Vzquez
Equipo No. 4
Integrantes:
Arroyo Lira Arlette Guadalupe.
Rubio Ortiz Margarita.
Snchez Gonzlez Brigette.
8 Semestre Clnicos

Tepic Nay. 21/Febrero/2008

RESULTADOS.
OBSERVACIONES.
Medios Inoculados.

Agar Sangre

Agar Saboraud

Tepic Nay. 21/Febrero/2008

Agar MacConkey

Agar Sal-Manitol

Tabla de resultados de tincin gram

Agar

Imagen

MacConkey

Observaciones
Los resultados observados fueron
bacilos gram positivos

Los resultados de la observacin al

microscopio fueron cocos gram
negativos

Sangre

Tabla de resultados de pruebas bioqumicas

Prueba

KLIGER

RM

VP

CITRATO DE
SIMMONS

MIO

Tepic Nay. 21/Febrero/2008

Imagen

Observaciones
Apareci un vire color amarillo en el
fondo del tubo (K/A), lo que nos
indica que fue lactosa negativo y
glucosa positivo; adems de haber
produccin de acido sulfrico.

Al agregar el rojo de metilo cambio

a una coloracin roja dando por lo
tanto un resultado positivo a RM
Al agregar el alfa naftol y KOH
apareci una coloracin verde por lo
tanto dando un resultado negativo a
VP
La revisin a 24hrs fue positiva
dando una coloracin azul en todo
el tubo.
Hubo presencia de una coloracin
amarilla y el color purpura enfondo
del tubo, nos indica la desaminacion
de ornitina.
Tambin se observo movilidad.

Dio negativa a LIA

Ya que el tubo no tubo ningn vire
de color solo la presencia de un
poco de precipitado negro.
(resultado esperado pico de flauta
rojo)

LIA

Hubo un cambio de vire en el tubo

a rosa mexicano, lo cual nos indica
que es positiva.
Al agregar el FeCl3 la superficie del
pico tomo una coloracin verde lo
cual nos indica
un resultado
positivo
de
la
fenilalanina
desaminasa

UREA

FAD

Tabla de resultados de la DNAsa y la sensibilidad a antibiticos.

Prueba

Imagen

Observaciones

DNAsa

Positiva

Sensibilidad a
Antibiticos

Polimixina = Resistente
Halo menor
Novobiocina = Sensible.
Halo mayor

Tepic Nay. 21/Febrero/2008

DISCUSIN
Con base en el anlisis de resultados consideramos que las muestras problema
corresponden a S. aureus (tubo 4) y P. mirabilis (tubo 9), y a continuacin se
discute el porque:
S. aureus (tubo 4).

Consideramos que el microorganismo problema del tubo 4 es S. aureus debido a

que:
En el medio Agar sangre se observaron colonias redondas, pequeas,
convexas, adems de un halo que nos indico -hemlisis.
En el medio Agar sal manitol se observo fermentacin del manitol mediante
el cambio de color de rojo a amarillo, caracterstica distintiva de S. aureus.
En el medio Agar MCK no se observo crecimiento, debido a que este medio
inhibe el crecimiento de organismos gram (+) en especial estafilococos y
enterococos, por la accin de las sales biliares en combinacin con el cristal
violeta.
Al realizar la tincin Gram a partir de una colonia caracterstica obtenida del
Agar sangre se observaron cocos gram (+).
Adems de que en la prueba de resistencia a antibitico presento
sensibilidad a Novobiocina y resistencia a polimixina.
En la prueba de la DNAsa obtuvimos un resultado negativo, posiblemente
por caducidad del medio, sin embargo el resultado esperado era DNAsa positivo.
Por ltimo, en Agar Sabouraud, tambin creci por la utilizacin de peptona
y digestivo pancretico (bases nutrientes del medio); pese a que este medio es
recomendado para el cultivo y crecimiento de hongos. El crecimiento fue factible
ya que para que dicho medio sea selectivo para hongos sobre bacterias se le debe
aadir cloranfenicol (0,5 g/L) y cicloheximida (0,05 g/L).
P. mirabilis (tubo 9).

Consideramos que el microorganismo problema del tubo 9 es P. mirabilis debido a

que:
Se sembr nicamente en Agar MCK la muestra del tubo 4 en conjunto con
la muestra del tubo 9; observndose crecimiento de colonias grandes, redondas,
planas, cremosas y con un olor fecaloide intenso. Este medio esta diseado
especficamente para aislamiento de organismos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae formada por bacilos Gram (-). Y al realizar la tincin Gram se
demostr la presencia nicamente de bacilos gram (-).

Tepic Nay. 21/Febrero/2008

Las colonias utilizadas para las pruebas bioqumicas se tomaron del Agar MCK. Al
observar las reacciones de las pruebas bioqumicas utilizadas en esta practica y
comparar con la bibliografa encontramos que P. mirabilis produce los siguientes
resultados en:
CITRATO. Prueba utilizada para la identificacin de la familia
Enterobacteriaceae de microorganismos gram (-). En el cual se observo un viraje
azul, el cual indica que la prueba es positiva.
LIA. Produce un color anaranjado en todo el medio, debido a la
desaminacin de la lisina; este producto de color naranja se combina con el
indicador de pH prpura de bromocresol para producir un color rojo caracterstico
en el pico de flauta. Lo cual indica desaminacin positiva de la lisina, propiedad
caracterstica de Proteus y Providencia.
UREASA. El indicador del ion hidrogeno rojo de fenol demuestra la
produccin de ureasa por el genero Proteus, esta actividad enzimtica se utiliza
para diferenciar los microorganismos Proteus de otros miembros de la familia
Enterobacteriaceae. El resultado positivo se evidencio por el viraje a rosa
mexicano.
KLIGLER. Los sustratos metabolizados en esta prueba permiten
diferenciar gneros o especies de la familia Enterobacteriaceae. Se observo
precipitacin de H2S, propiedad distintiva de Proteus.
FAD. La actividad de fenilalanina desaminasa es caracterstica de todas las
especies de Proteus, adems de Morganella morganii y Providencia. Observamos
una coloracin verde en el pico de flauta despus de agregar el FeCl 3.
MIO.
Movilidad (M): permite saber si un microorganismo es mvil o inmvil, se
manifiesta, como en nuestro caso por turbidez producida por la migracin del
microorganismo desde la lnea de siembra. Adems de que es importante
remarcar el echo de que P. mirabilis es un bacilo, y la movilidad se da por medio
de uno o muchos flagelos, los cuales aparecen sobre todo entre los bacilos.
Indol (I): determina la capacidad de un microorganismo para separar Indol a partir
del triptfano; ayuda a la diferenciacin de especies, en nuestro caso en particular
nos ha sido de utilidad para establecer que el microorganismo problema es P.
mirabilis (-) y no otra especie de Proteus (+); ya que el resultado de nuestra
prueba fue negativo.
Ornitina (O): determina la capacidad de un microorganismo de descarboxilar un
aminocido para formar una amina con la resultante alcalinidad. Esta prueba sirve
para la diferenciacin de especies de Proteus al igual que la prueba del Indol, sin
embargo en esta prueba P. mirabilis es (+) como en nuestro caso y el resto de
Proteus son (-).
Tepic Nay. 21/Febrero/2008

RM/VP.
Rojo de metilo (RM): determina la capacidad de un microorganismo para producir
y mantener estables los productos finales cidos a partir de la fermentacin de la
glucosa. Esta prueba aporta caractersticas valiosas para la identificacin de
especies que producen cidos fuertes a partir de glucosa. Todos los miembros de
las Enterobacteriaceae, son por definicin, fermentadores de la glucosa, y ya que
P. mirabilis pertenece a las Enterobacteriaceae nuestro resultado positivo es
congruente con lo propuesto en la bibliografa.
Voges-Proskauer: esta prueba determina la capacidad de algunos
microorganismos para producir un producto final neutro, acetona, a partir de la
fermentacin de la glucosa. Y puesto que la prueba de rojo de metilo (produccin
de cidos) resulto positiva, nuestro resultado negativo en VP es congruente, ya
que debido a que se inoculo en el mismo tubo y slo se reparti en dos porciones
para realizar estas pruebas independientemente, no podemos tener ambos
resultados positivos.
CONCLUSINES
Con base en el anlisis de resultados y la bibliografa consultada concluimos que
los microorganismos presentes en las muestras corresponden a S. aureus y P.
mirabilis
Adems, pudimos reafirmar que conocer los fundamentos de los medios de
cultivo, la tincin Gram y las pruebas bioqumicas nos ayudan a la correcta
identificacin y caracterizacin de microorganismos presentes en una muestra
problema.
Estos microorganismos tienen importancia clnica ya que S. aureus es una
bacteria que se encuentra en la piel y fosas nasales de las personas sanas, causa
gran variedad de infecciones, desde infecciones menores de la piel y abscesos
cutneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como
neumona, meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis. P.
mirabilis es un patgenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario,
produciendo las infecciones de tipo oportunista.

CUESTIONARIO
1.- explica el fundamento de los medios empleados en esta prctica.
AGAR SAL MANITOL Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta
concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol
acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de
una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin
exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la
coagulasa.
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En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente

de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el
agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es
el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin
de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen
en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los
estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como
colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que
no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona
del mismo color o prpura.
AGAR MAcCONKEY. Su accin diferencial esta basada en que los
microorganismos capaces de fermentar lactosa producen una cada de pH, junto
con una absorcin del colorante, apareciendo en la colonia el color rojo, las
colonias de microorganismos que no fermentan la lactosa permanecen incoloras
ya que contiene cristal violeta que inhibe microorganismos gram positivos, en
especial Staphylococcus y Enterococos.
AGAR SABOURAUD. Medio para la deteccin y aislamiento de hongos en
muestras mediante tcnica de filtracin por membrana. Para que ocurra el
crecimiento selectivo de hongos sobre bacterias en la muestra depende tan solo
de la reaccin cida (pH 5.6).
AGAR SANGRE. Medio de propsito general para el cultivo de una gran variedad
de microorganismos incluyendo los exigentes. Al aadirle sangre, puede utilizarse
para la determinacin de las reacciones hemolticas. El medio esta libre de
azucares reductores, ya que estos influiran de forma adversa en reacciones
hemolticas.
2.-Explica el fundamento de la tincin de Gram
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tien de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.El material de la
pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la
clula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de
peptidoglicano as como algo de cido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la
pared de la clula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula gramnegativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de
peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de
fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la
clula gram-negativa es peptidoglicano.
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una
solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son
lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las
clulas, tanto las grampositivas como las gram negativas, estn teidas de azul.
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La pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas es permeable al

violeta cristal. Sin embargo, la de las primeras no lo es al complejo de yodo y
colorante formado en el interior de la clula. Los resultados experimentales
obtenidos con una difusin celular exenta de protenas, y la escasa solubilidad del
complejo de yodo y violeta cristal en alcohol y acetona, parecen sustentar la
opinin de que la reaccin grampositiva consiste esencialmente en la formacin,
dentro de la clula, de una cantidad apreciable de complejo de yodo y colorante
difcil de eliminar con el disolvente. La pared celular de las bacterias
grampositivas, a diferencia de la de las gramnegativas, sera prcticamente
impermeable al violeta cristal. Los microorganismos aparecern teidos despus
de tratarlos con violeta cristal, por ser absorbido el colorante en la superficie
externa de la pared celular, y el disolvente eliminar sin dificultad el complejo
formado despus del tratamiento con yodo.
3.-Explica el fundamento de las pruebas bioqumicas empleadas
KLIGLER
Contiene sulfato ferroso como indicador de la formacin de H 2S, un indicador de
pH, glucosa, lactosa y sacarosa. Se utiliza: a) Para la valoracin de la
fermentacin de la lactosa o la sacarosa; lo que origina que el medio tome un color
amarillo b) Profundidad, Los bacilos fermentadores de la glucosa forman suficiente
cido para que el medio tome un color amarillo en la profundidad o medio
entubado, relativamente anaerobio, pero no en la superficie inclinada. La
formacin de gases es caracterstica en estas condiciones, lo cual hace que
aparezcan burbujas e inclusive desplazamiento del medio hacia la salida del tubo.
c) Sulfuro de hidrgeno ( H2S): Los bacilos productores de este gas hacen que el
medio tome un color negro cas siempre en la profundidad.
H2S determinar si se ha liberado enzimticamente acido sulfrico
gaseoso a partir de los aminocido azufrados para producir una reaccin
coloreada visible,negra , en presencia de un sistema indicador de acido sulfrico.
La protelisis de la protenas produce aminocidos individuales; cierta bacterias
heterotrficas pueden liberar
enzimticamente el azufre de los diversos
aminocidos azufrados (-SH),produciendo H 2S gaseoso. Peptona,cistina,
metionina y tiosulfto son fuentes de azufre, pero diferentes especies usan
diferentes compuestos o aminocidos azufrads para producir H 2S.Las enzimas
responsables de esa actividad son la cistena desulhidrasa.
Reaccin: el tiosulfato es un intermediario en la reduccin de sulfato H2S por las
bacterias reductoras del sulfato. La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio
en una reaccin de reduccin que da un a un sulfito y un sulfato.Debe haber unpH
acido y una fuente de iones H+ para que tenga lugar la reduccin del
tiosulfato.Haydos hidratos de carbono presentes ara proporionar la acidez y el
exceso de iones H+. Esteproceso de respiracin anaerbica en el cual el atomo de
azufre sirve comoaceptor de electrones para la oxidacin de los sutratos
organicos. El tiosulfato S2O23 reemplaza al sulfato como aceptador de electrones
y es la fuente de azufre del microorganismo.
El H2S es un gas incoloro; por consiguiente , es necesario un segundo indicador
para visualizar la produccin de H2S.
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El gas incoloro H2S reacciona con una sal fuerte de hierro, el citrato de amonio
frrico, para producir un precipitado negro insoluble de sulfato ferroso metalico. La
produccin de H2S se detecta cuando el gas entra en contacto con ciertos
metales, como plomo, hierro o bismuto y forma de estos sulfuros de estos
metales.
ROJO DE METILO
Es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo),
que se utiliza para visualizar la produccin de cidos por la va de fermentacin
cido mixta.
El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto intermediario en la produccin
de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada
a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
VOGES PROSKAVER
Esta reaccin se basa en la deteccin del acetilmetilcarbinol (acetona) un
producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es
metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis.
A partir del cido piruvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La produccin
de acetona es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las
bacterias.
Una molcula de acetona se forma por la descarboxilacin de dos molculas de
cido pirvico, la acetona es una etapa intermediaria en la conversin en 2,3butanediol.
CITRATO DE SIMMONS
Sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica
fuente de carbono y compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en
su metabolismo, Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn
multiplicarse en este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con la
eliminacin del citrato (cido), generar una fuerte basificacin del medio que ser
aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.
El metabolismo del citrato comprende una condensacin de acetilo con la
coenzima A y oxalacetato para entrar al ciclo de Krebs. Tambin el desdoblamiento
del citrato comprende un sistema enzimtico sin la intervencin de la CoA. Esta
enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa, la enzima requiere un catin
bivalente para su actividad, que s suministrado por el Mg o Mn. Se pens que la
descomposicin inicial del citrato daba oxalacetato y acetato. Sin embargo, se
considera que el oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismo del
citrato.
Citrato

Oxalacetato + acetato
Piruvato + CO2

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Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio.
Si el pH aumenta, se producen mas acetato y formato, con una disminucin de la
produccin de lactato y CO2. Por encima de pH 7 no hay produccin de lactato y
los productos son:
Citrato

CO2 + cido frmico

Con un pH cido, el acetilmetilcarbinol y el lactato son los principales productos de

utilizacin del citrato. Independientemente de los productos terminales producidos.
El primer paso de la fermentacin del citrato da por resultado la produccin de
piruvato. La degradacin de piruvato depende entonces del pH del medio.
Citrato
Oxalacetato

Oxalacetato + CO2 + lactato

Acetoina + CO2

Un organismo que es capaz de utilizar citrato como su nica fuente de carbono

utiliza tambin las sales de amonio como su nica fuente de nitrgeno. Las sales
de amonio de desdoblan en amonaco con la consiguiente alcalinidad.
MIO
Esta prueba bioqumica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la
reaccin de Indol a la descarboxilacin de la ornitina.
MOVILIDAD: Sirve para determinar si un organismo es mvil o inmvil. Las
bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos que se encuentran
principalmente entre los bacilos aunque existen algunas formas de cocos
mviles.El medio manitol movilidad permite la realizacin de esta prueba gracias a
ser semislido ya que presenta solamente 3,5 g/l de agar. En estas condiciones,
las bacterias mviles producirn un enturbiamiento homogneo del medio debido
a la distribucin aleatoria de los microorganismos. Por el contrario, las bacterias
inmviles permanecern en la misma lnea de la picadura en que se sembraron.
ORNITINA determinar la capacidad enzimtica de un microorganismo de
descarboxilar
un aminocido para formar
una amina con la resultante
alcalinidad.La descarboxilacion es el proceso por el cual las bacterias que poseen
enzimas descarboxilasas especificas atacan los aminocidos en su carboxilo
terminal (COOH) para una amina o una diamina y dixido de carbono.
La descarboxilacion esta restringida a aminocidos que posse por lo menos un
grupo qumicamente activo distinto de una amina(NH2) o un grupo carboxilo
(COOH) y la degra de loa aminocidos
ocurre en anaerobiosis. La
descarboxilacion es irreversible, no oxidativa y por lo general requiere una
coenzima comn, fosfato de piridoxal, que refuerza mas la actividad de
descarboxilasa.
El aminocido l-ornitinina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa
para formar la diamina putrescina y dixido de carbono.
Interpretacin de resultados
Tepic Nay. 21/Febrero/2008

Reaccin

Interpretacin

Enturbiamiento del
Agar.

Hay movilidad

Agar transparente desarrollo solo en picada

No hay movilidad

Azul (alcalino)

Descarboxila ornitina

Coloracin Amarilla (cido)

No descarboxila

Rojo (anillos)

Indol (+)

Amarillo (anillos)

Indol ( - )

INDOL
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y
particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para
formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas
triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs
o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden
apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de
siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por
la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato
siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.
LIA
Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen
descarboxilacin o desaminacin de la lisina. Se pude detectar ademas la
produccion de SH2 y es ms sensible que el TSI para la deteccin de S 2H. Es muy
utilizado par descartar Salmonella de aislamientos primaros. Proteus y providencia
producen un color nararanjado en todo el medio debido a la desaminacion de la
lisina; este producto de color naranja se combina con el indicador de pH purpura
de bromocresol para producir un color rojo caracterstico en el pico de flauta
(aerobiosis). Sin embargo, aun no se conoce cual es el compuesto formado
responsables del desarrollo del color rojo.
Interpretacin de resultados
Reaccin

Interpretacin

Azul (alcalino)

Hay movilidad

Rojo

No hay movilidad

Engrecimiento

Descarboxila ornitina

Ruptura del Agar

No descarboxila

Fondo Amarillo y
Tendido prpura

Descarboxilacin de lisina

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UREA
Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en dos
molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa, conla resultante
alcalinidad.El sustrato urea , una diamina del acido carbnico, a menudo se
designa como una carbamida. Todas las amidas son hidrolizadas con la
facilidad. La urea es hidrolizada por una enzima especfica, la ureasa (o urea
amidohidrolasa), para dar dos molculas de amoniaco. En solucion , laurea se
hidroliza carbono de amonio como producto final.La ureasa es una importante
enzima microbiana relacionada con la descomposicin de los compuestos
orgnicos. El pH optimo para la actividad de la ureasa es de 7.
FAD +
Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el
aminocido fenilalanina en cido fenilpirvico por su actividad enzimtica de
fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante. Esta actividad
enzimtica es caracterstica de todas las especies del gnero Proteus y del grupo
Providencia por lo que se usa para separar ambos gneros de otras
enterobacterias
El aminocido fenilalanina sufre la desaminacin oxidativa catalizada por un
aminocido oxidasa, una flavoprotena, para producir el cido cetnico, cido
fenilpiruvico. La desaminacin oxidativa da como resultado la extraccin del grupo
amino del aminocido para formar un doble enlace alfa-cetoacido y libre de NH 3.
En un principio, es extrado el H + dando un aminocido y el H + se combina con el
CO2 para formar H2O, luego el iminoacido es hidrolizado en un cetoacido.
PRUEBA DE LA DESOXIRRIBONUCLEASA (DNasa)
Esta prueba se utiliza para determinar la capacidad de un microorganismo de
producir la enzima desoxirribonucleasa. Adems esta prueba es utilizada sobre
todo como una prueba suplementaria para identificar estafilococos patgenos.
Ayuda a identificar posibles cepas de Staphylococcus aureus, que no dan una
reaccin positiva definida a la prueba de la coagulasa.
La DNasa es una endonucleasa extracelular que es especfica para la
hidrlisis del DNA. La mayora de las DNasas bacterianas requieren cationes
divalentes para su actividad, los cuales por lo general son proporcionados por las
peptonas en el medio de crecimiento o de prueba. Los lmites de pH para la
actividad ptima de la enzima varan entre 5,5 y 8,5.
Las DNasas estn presentes en los extractos de una variedad de
microorganismos; sin embargo, las DNasas extracelulares se informan en unas
pocas especies bacterianas como S. aureus, estreptococos del grupo A,
Corynebacterium diphtheriae, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa,
especies de Bacillus y especies de Vibrio.
NOVOBIOCINA
La novobiocina es un antibitico activo por va oral. Se utiliza para el tratamiento
de infecciones por S.aureus y para el tratamiento de infecciones urinarias
resistentes a otros frmacos. La novobiocina es bacteristatica e interfiere con la
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sntesis de la pared bacteriana. Este frmaco se utiliza muy poco debido que su
uso est asociado a una alta incidencia de reacciones adversas y a que
frecuentemente emergen cepas resistentes.
POLIMIXINA
La polimixina B es un antibitico polipeptdico producido por una cepa de Bacillus
polymyxa. Su espectro de actividad se limita a las bacterias gram-negativas. Hoy
da, la polimixina B se utilizada raras veces debido a su potencial nefrotoxicidad
y/o neurotoxicidad. Prcticamente slo se utiliza por va oftlmica, tica o tpica en
combinacin con otros antibiticos (bacitracina, clindamicina o neomicina) o con
antiinflamatorios (hidrocortisona)
Mecanismo de accin: la polimixina B se fija a los fosfolpidos de las membranas
de las clulas bacterianas gram-negativas. Esta unin destruye las membranas
bacterianas mediante un efecto detergente, aumentando la permeabilidad de la
membrana lo que se traduce en la muerte celular. La polimixina B es bactericida
frente a la mayor parte de los grmenes gram-negativos aunque algunos Proteus y
Serratia pueden ser resistentes. Los microorganismos generalmente susceptibles
a la polimixina B son las Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Haemophilus
influenzae, Enterobacter aerogenes, y Klebsiella pneumoniae. La actividad in vivo
de la polimixina frente a la Pseudomonas aeruginosa es reducida por la presencia
de iones divalentes que interfieren con la unin del antibitico a la membrana
bacteriana
4.-en la tcnica empleada para la siembra en caja para aislamiento de
colonias, Por qu es importante quemar el asa entre cada estriacin?
La siembra por estra es, en general, el mtodo ms til de sembrar en placa. El
asa de cultivo se esteriliza e introduce en una suspensin, convenientemente
diluida, de organismos y se utiliza luego para hacer una serie de estras paralelas,
sobre una placa de agar previamente solidificado. El inocul se va diluyendo
progresivamente con cada estra sucesiva, de tal manera que si las estras
iniciales proporcionan un crecimiento confluente, a lo largo de las ltimas estras
se van desarrollando colonias bien aisladas.
As la importancia de esterilizar el asa en cada estriacin estriba en el
hecho de conseguir que en las ltimas estras se desarrollen colonias bien
aisladas.
5.- En casos se emplea la siembra masiva?
Para tener un crecimiento abundante de microorganismos y realizar las pruebas
de sensibilidad a antibiticos, ya que este mtodo de siembra permite observar
claramente la formacin de halos.
BIBLIOGRAFIA

Tepic Nay. 21/Febrero/2008

GARCA-RODRGUEZ, JOS ANGEL.: MICROBIOLOGA MDICA, Harcourt

Brace, 1996.
PELCZAR, MICHEL J.: MICROBIOLOGA McGraw-Hill, 1982
KONEMAN ELMER W.; DIAGNSTICO MICROBIOLGICO: TEXTO Y ATLAS
COLOR . Mdica Panamericana, 1997
STANIER ROGER. MICROBIOLOGIA 2 edicin. Edit. Revert. Pag.18.
DELGADO-IRIBARREN ALBERTO. LABORATORIO CLNICO MICROBIOLOGA.
Edit. Interamericana McGraw Hill. Pag. 86, 89.

Tepic Nay. 21/Febrero/2008