MICROBIOLOGIA

PRACTICA No. 5

Identificacin bioqumica de bacterias

OBJETIVO:
Dar las caractersticas bioqumicas a los cultivos axnicos que fueron tomados por la
utilizacin de sustratos especficos y as usarlos como mtodo para identificar bacterias.
MARCO TEORICO
Las pruebas bioqumicas se utilizan de gran manera para la identificacin o diferenciacin de
bacterias, se fundamentan en manifestar si el organismo tiene la funcin de fermentar azucares,
cuenta con enzimas, degrada compuestos, produce compuestos coloreados, etc. y as
categorizarla y conocer su tipo.
La funcin de las pruebas bioqumicas es conocer y determinar las caractersticas del
metabolismo de las bacterias. Algunas pruebas son mtodos rpidos que vara de unos segundos
a algunas horas, otras pruebas pueden durar hasta 48 horas ya que requieren el crecimiento de
microorganismos que detectan componentes metablicos o identifican que tan sensibles son
estos agentes
Procedimiento de la prctica en general:
1. Limpiar el nuestra mesa donde vamos a trabajar.
2. Obtener colonias de bacterias aisladas.
3. Tener el equipo y materiales que vamos a utilizar
4. Realizar las pruebas Bioqumicas.
4.1 Prueba de la oxidasa
4.2 Prueba de la catalasa
4.3 Prueba de oxidacin y fermentacin tambin conocida como OF.

5. Resultados
6. Recoger Material Utilizado
7. Limpiar mesa de trabajo.

Prueba de la oxidasa.
Esta prueba detecta la presencia de enzimas oxidasas y se debe al sistema citocromooxidasa
el cual es el encargado de activar la oxidacin del citocromo que es reducido por el oxgeno
y as produce agua o perxido de hidrgeno segn la bacteria. Estos organismos que tienen
la enzima citocromo-c-oxidasa se hacen ver ya que en presencia de oxigeno atmosfrico y
citocromo c, se oxida el sustrato en el papel pintndose un color rosado o fucsia.

Como realizar la prueba de la oxidasa.

123456-

Tener lista nuestra colonia de bacterias.

Color los papeles en una caja petri.
Verter unas gotitas de reactivo de Kovacs al papel.
Con una asa de plstico colocar el inoculo de la bacteria seleccionada,
Esperar no ms de 30 segundos para ver el resultado.
Si se pinta de rosa el resultado es positivo y si el papel no torna de color rosada el
resultado es oxidasa negativo.

Prueba de la catalasa.
La catalasa es una enzima hemoproteica que est presente en una gran cantidad de bacterias
aerobias estrictas, facultativa y anaerobias aerotolerantes. Esta enzima cataliza la oxidacin
de sustratos acoplada a la reduccin de perxido de hidrgeno y as forma agua e hidrogeno
molecular. En dicha prueba la reaccin se lleva acabo con 1 par de molculas de perxido
de hidrgeno, una acta como sustrato reducido y la otra como donador de tomos de
hidrgeno.
Pasos para realizar la prueba:
1- Tener la bacteria que someteremos a la prueba (cultivos frescos 24 o 48 horas).
2- Colocar el portaobjetos en una superficie plana.
3- Con una pipeta verter un poco de perxido de hidrgeno en el portaobjetos.
4- Con un asa transferir el inoculo de bacteria al portaobjetos.
5- Esperar de unos 20 a 30 segundos.
6- Observar y anotar los resultados obtenidos.

Prueba de oxidacin y fermentacin tambin

conocida como OF.
Las bacterias tienen la facultad de fermentar u oxidar a los carbohidratos. Las bacterias
anaerobias fermentan a los carbohidratos, las facultativas los fermentan o los oxidan y las
aerobias solo los oxidan. Para detectar esta accin es necesario utilizar un agar OF que
contiene peptona y azul de bromo timol como indicador de pH, este medio es color azul y
torna color amarillo cuando se fermentan o se oxidan los carbohidratos.

Tcnica de la prueba.
1. Se utilizan dos tubos donde tendrn el agar OF con la misma cantidad, solo la nica
diferencia es que verteremos de 1.5 a 2 ml de aceite mineral estril a uno de ellos.
2. Ahora se toma el inoculo de bacteria por el mtodo de picadura con un asa de metal,
se inserta en medio del agar OF sin tocar las paredes del tubo de vidrio.
3. El tubo con el aceite se cerrara completamente y el otro se dejar un poco abierto
para que el haya un intercambio de oxgeno.
4. Dejar en la incubadora 24h los tubos.
5. Observar y anotar los resultados.

Prueba de motilidad.
En esta tcnica se utiliza el indol, que es un producto de la degradacin metablica del
amino acido triptfano. Algunas bacterias producen triptofanasa que es una enzima que
hidroliza y desamina el triptfano, se basa en la formacin de un complejo rojo cuando el
Indol reacciona con el grupo aldehdo el p-dimetilaminobenzaldehido que es el principio
activo del reactivo de Kovacs.
Tcnica de la prueba:
1- Verter agar SIM a un tubo de ensayo.
2- Depositar el inoculo de bacteria por el mtodo de picadura con una asa de metal en
medio del agar sin tocar las paredes del tubo.
3- Dejar en la incubadora los tubos de ensayo de 24 a 48 horas.
4- Observar y anotar los resultados

Resultados obtenidos para cada una de las pruebas bioqumicas:

Prueba de catalasa
Fresa: Positiva
Axolote: Positiva
Prueba de Oxidasa:
Fresa: Negativa
Axolote: Negativa
Medio de cultivo
Caldo peptonado
Caldo Rojo de
Metilo

Prueba

PRUEBAS BIOQUMICAS PARA Gram Fundamento

Interpretacin de Resultados

Re

Caldo Rojo de
Metilo
Citrato de
Simmons

Medio de cultivo
Agar Nutritivo

Prueba

PRUEBAS BIOQUMICAS PARA Gram +

Fundamento
Interpretacin de Resultados

Agar Nutritivo
Medio SIM
Medio OF
Medio OF

Referencias
Nilda Rivas. (2012). Prueba Oxidacin- fermentacin (OF). 12/09/2015, de
Microbiologa
para
bioanlisis
Sitio
web:
http://microbiologiabioanalisis.blogspot.mx/2012/07/prueba-oxidacion-fermentacionof.html
Koneman, E.W., et al. 1997. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology,
5th ed. J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.
Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C
Evelyn Rodriguez, et al. (2005). Libros Ningn eBook disponible Editorial
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Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio. 12/09/2015, de Google
Books
Sitio
web:
https://books.google.com.mx/books?

Re

id=vwB0fgirgN0C&pg=PA275&lpg=PA275&dq=Prueba+de+oxidaci
%C3%B3n+y+fermentaci%C3%B3n+tambi
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