NDICE DE BIOQUMICA

Tema 1
Tema 2
Tema 3
Tema 4
Tema 5
Tema 6
Tema 7
Tema 8
Tema 9
Tema 10
Tema 11
Tema 12
Tema 13
Tema 14
Tema 15
Tema 16
Tema 17
Tema 18

Introduccin a la bioqumica
La clula
Estudio general del metabolismo de los hidratos de carbono
Estudio general del metabolismo de los lpidos
Estudio general del metabolismo de las protenas
24
Productos finales del metabolismo
Estudio del equilibrio hidroelctrico
Estudio de la orina
Estudio de los clculos urinarios
Tcnicas de separacin de sustancias
Tcnicas y mtodos instrumentales
Cromatografa
Electroforesis
Estudio de la funcin heptica
Principios bsicos de espectroscopia
Estudio: lquido pleural, pericrdico y peritoneal
La espectroscopia de absorcin molecular UV-V-IR
La espectroscopia de absorcin atmica con atomizacin
de llama ( F-AAS) y electrotrmica (GF-AAS)
Espectroscopia de emisin atmica (EEA)
Otras espectroscopias analticas
Equilibrio cido-base
Estudio del equilibrio gaseoso
Estudio del lquido sinovial
Enzimologa diagnstica
Refractometra y osmometra
Estudio de las heces
Estudio del lquido seminal
Estudio del lquido cefalorraqudeo
Monitorizacin de frmacos
Drogas de abuso
Marcadores tumorales
Tcnicas de biologa molecular: hibridacin de cido nucleicos
Tcnicas electroqumicas
Control de calidad en el laboratorio de anlisis clnicos

Tema 19
Tema 20
Tema 21
Tema 22
Tema 23
Tema 24
Tema 25
Tema 26
Tema 27
Tema 28
Tema 29
Tema 30
Tema 31
Tema 32
Tema 33
Tema 34
Resumen
Trabajo sobre las hormonas

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TEMA 1
INTRODUCCIN A LA BIOQUMICA
Los seres vivos estn integrados por molculas inanimadas que se ajustan a todas las
leyes fsicas y qumicas de la materia inerte pero adems poseen unos atributos extraordinarios
que no poseen la materia inanimada.
El atributo ms sobresaliente de los seres vivos es su complejidad y su alto grado de
organizacin. Poseen estructuras internas que contienen muchas clases de molculas complejas,
adems de presentarse en una variedad asombrosa de especies diferentes. Por contraste la materia
inanimada del contorno (ejemplo: agua, suelo, rocas,...) est formada por mezclas fortuitas de
compuestos qumicas sencillos de organizacin estructural escasa.
En los organismos vivos es legtimo preguntarse cual es la funcin de una molcula
determinada; pregunta que carece de sentido en la materia inerte, adems los primeros seres
vivos presentan la capacidad de extraer y transformar la energa de su entorno, a partir de materia
primaria sencilla y emplearla para mantener su propias estructuras.
Pero el atributo ms extraordinario de los seres vivos es su capacidad de producir una
rplica exacta de s mismos, lo que puede considerarse la quinta esencia de la vida y cosa que la
materia inanimada no es capaz de realizar.
La bioqumica es una ciencia muy joven que deriva de 2 lneas matrices:
1- De la medicina y fisiologa (investigacin de sangre, tejidos y orina).
2- De la qumica orgnica (estudio a cerca de la estructura de los compuestos orgnicos).
Surge como ciencia adulta por derecho propio con mtodos experimentales y visin de
prediccin de los fenmenos biolgicos en el ltimo cuarto de siglo. Esto es debido a 2 hechos:
A- El reconocimiento de los sistemas multi-enzimticos como unidades catalticas en las
rutas metablicas principales y el desarrollo de una hiptesis unitaria para la transferencia de
energa a las clulas vivas.
B- Reconocimiento de que la herencia descansa sobre base molecular racional. En la
actualidad la bioqumica est realizando interesantes pruebas en cierto nmero de reas
fundamentales de la biologa, como son la diferenciacin de las clulas y de los organismos, el
origen de la vida y la evolucin, el comportamiento y la memoria y las enfermedades humanas.
Pruebas que han demostrado que estos problemas bsicos pueden ser abordados por mtodos
bioqumicos.
Realmente el xito de la bioqumica en muchos fenmenos celulares ha sido tan grande
que muchos cientficos han llegado a la conclusin de que la biologa es qumica. Algunos
bilogos no comparten este punto de vista que mantienen que la esencia de los organismos vivos
complejos no pueden reducirse ni ahora ni nunca al nivel de molculas e interacciones
moleculares; pero este es un punto de vista minoritario.
En la actualidad es ms lgico admitir como filosofa de trabajo que todos los fenmenos
biolgicos descansan en ltimo trmino sobre una base molecular.
La lgica molecular de la vida es un conjunto nico de reglas fundamentales que
gobiernan la naturaleza, la funcin y las interacciones de los tipos especficos de molculas
presentes en los organismos vivos y los dotan de capacidad de organizarse y replicarse por s
mismos.
Las molculas halladas en la materia viva o biomolculas contienen compuestos
orgnicos de carbono en los cuales el elemento (carbono) se halla relativamente reducido o
hidrogenado aunque tambin contiene nitrgeno (mientras que estos 2 son abundantes en la
materia inanimada). Los compuestos orgnicos presentes en la materia viva presentan enorme
variedad y la mayor parte son extraordinariamente complejos. An las clulas ms sencillas
(bacterias) contienen un elevado nmero de diferentes molculas orgnicas; as por ejemplo la
Escherichia coli contiene aproximadamente 5.000 compuestos orgnicos diferentes y entre ellos

3.000 clases diferentes de protenas y 1.000 diferentes tipos de cido nucleicos. Estas molculas
son macromolculas (porque tienen un peso molecular muy grande) que paradjicamente estar
construidas con pilares o molculas sencillas, cada una de las cuales desempean ms de una
funcin en las clulas vivientes. Ejemplo: los aminocidos son pilares de molculas proteicas
pero tambin son precursores de hormonas. De ello, en fin, deducimos un axioma de la lgica
molecular de la vida, que es que en la organizacin molecular de las clulas existe una
simplicidad fundamental, esto quiere decir que, los millares de macromolculas presentes en las
clulas estn construidos con unas pocas molculas sencillas. Esto nos hace deducir que todos
los organismos vivos precedemos de un antepasado comn.
Debido a que cada organismo vivo posee su propio conjunto distintivo de cidos
nucleicos y protenas surge otro axioma.
La identidad de cada una de las especies de organismo est preservada por su posesin de
un conjunto distintivo de cidos nucleicos y protenas.
En la versatilidad funcional de esas biomolculas bsicas deducimos adems la existencia
de un principio fundamental de economa molecular.
RESUMEN: las clulas vivas solo contienen las molculas sencillas posibles en el
mnimo nmero de tipos diferentes, nada ms las indispensables para dotarlas del atributo de la
vida y de la identidad de especie en las condiciones ambientales en que viven.

TEMA 2
LA CLULA
DIBUJO DE UNA CLULA
1- Ncleo
2- Aparato de Golgi
3- Ribosomas
4- Retculo endoplasmtico rugoso
5- Retculo endoplasmtico liso
6- Mitocondrias
7- Orgnulos o vesculas secretoras
8- Centrolos
9- Cilio
10- Lisosoma
La clula es la unidad fundamental de toda materia viva. Una nica clula es una entidad
aislada de otras clulas por una membrana celular (y quizs por una pared celular) y conteniendo
dentro de ella una variedad de material qumicos y estructuras subcelulares.
La membrana celular es la barrera que separa el interior celular del exterior. Dentro de la
membrana celular se encuentran las diversas estructuras y sustancias que hacen que la clula
funcione.
Estructuras claves son:
El ncleo o nucleoide: donde se guarda la informacin necesaria para hacer ms clulas.
El citoplasma: donde se encuentra la maquinaria para el crecimiento y funcionamiento
celular.
Aunque cada tipo de clula tiene un tamao y una estructura definida una clula es un
unidad dinmica que constantemente sufre cambios y modifica sus constituyentes. Una clula
est constantemente tomando materiales del medio y transformndolo en su propio material. Al
mismo tiempo origina productos de deshechos que libera al medio. Una clula, es por tanto, un
sistema abierto que est en cambio continuo pero que permanece siendo la misma.
Tipos de clulas: tras cuidadosos estudios de la organizacin interna de las clulas se ha
puesto de manifiesto la existencia de 2 tipos bsicos: procariotas y eucariotas. Son 2 tipos
estructuralmente muy diferentes. Las eucariotas contienen un ncleo rodeado por una membrana
que encierra varias molculas de ADN y se divide por el conocido proceso de mitosis. Por el
contrario en las clulas procariotas el ncleo no est rodeado por una membrana, consta de una
sola molcula de ADN y su divisin no es mittica. Adems las clulas eucariotas contienen
normalmente adems del ncleo otras estructuras internas rodeadas por membrana como las
mitocondrias.
En la constitucin de toda clula eucariota podemos distinguir 3 partes fundamentales que
son: membrana, citoplasma y ncleo.
Membrana celular: es una capa o envoltura que delimita exteriormente las clulas. No
obstante debe tenerse en cuenta que no las aslan del medio que las rodean pues permite el
intercambio de materia y energa entre la clula y el exterior, ya que de lo contrario no podra
desarrollarse ninguna actividad en su interior. El aspecto y constitucin de la membrana celular
vara considerablemente en las clulas animales y vegetales, ya que las vegetales adems de la
membrana plasmtica suelen poseer por fuera una envoltura muy gruesa y resistente que recibe
en nombre de pares celular.
Citoplasma: es aquella parte de la clula contenida entre la membrana y el ncleo. Est
constituido por una sustancia semilquida de aspecto viscoso, sin estructura aparente y en la cual

se hallan inmersas unas series de estructuras o formaciones que constituyen los denominados
orgnulos y que son los siguientes:
1- Retculo endoplasmtico: est constituido por una amplia red de conductos y
cavidades denominadas cisternas distribuidos por todo el citoplasma. A veces establece
comunicacin con el exterior mediante poros que se abren en la membrana plasmtica.
2- Ribosomas: son pequeas granulaciones adosadas en su capa externa a la membrana
del retculo endoplasmtico aunque tambin se pueden encontrar libres en el citoplasma. Son
muy importantes pues es en ellos donde la clula fabrica sus protenas. Para fabricarlas los
ribosomas han de agruparse formando polisomas.
3- Aparato de golgi: est formado por un conjunto de vesculas o sacos que suelen ocupar
una posicin fija en la clula y el papel que desempea est relacionado con las funciones de
secrecin, es por eso, que est ms desarrollado en las clulas secretoras. Para desempear su
funcin se halla en comunicacin en el retculo endoplasmtico del que recibe las protenas, las
cuales despus pasan a los grnulos de secrecin, los cuales permanecen en el citoplasma o bien
pueden evacuarse al exterior.
~ NOTA: el retculo endoplasmtico es el orgnulo recolector de las protenas elaboradas
por lo polisomas adosados a su pared. De aqu las protenas van al aparato de golgi y de esta pasa
a los grnulos de secrecin los cuales pueden permanecer en el citoplasma o bien evacuarse al
exterior.
4- Lisosomas: son pequeas vesculas repartidas por todo el citoplasma que albergan en
su interior enzimas digestivas.
5- Mitocondrias: desempean un importantsimo papel ya que en ella se llevan a cabo la
respiracin celular la cual consta de 3 pasos: gluclisis, ciclo de Krebs, cadena de transporte
electrnico. Pueden albergarse en los recodos del retculo endoplasmtico y son grnulos de
forma alargada.
6- Plastos: son exclusivos de las clulas vegetales.
7 - Centrosomas: desempean un importante papel durante la divisin celular. Se halla
situado en las proximidades del ncleo a veces puede estar rodeado por el aparato de golgi. El
centrosoma contiene un par de centrolos que son 2 pequeos cilindros dispuestos
perpendicularmente.
8- Orgnulos vibrtiles: son cilios y flagelos. Pueden utilizarse como rganos
locomotores o bien para expulsar clulas extraas.
9- Vacuola: son espacios o cavidades dedicados a la clula. Almacenada sustancias de
deshecho de reserva.
El ncleo: es un corpsculo bien definido que se halla inmerso en el citoplasma y que
destaca con claridad. Es el centro rector de todas las funciones celulares y el portador de los
factores hereditarios. En l distinguimos: membrana nuclear, nucleolos (es un corpsculo de
forma esferoidal que tambin resulta muy visible debido a su viscosidad y contiene el ARN), los
cromosomas y el cario-plasma (que es la sustancia contenida por la membrana nuclear y por
donde flotan todos los elementos).
PREGUNTAS
Describe la funcin de los siguientes orgnulos:
Centrolos: son 2 cilindros importantes durante la divisin celular.
Mitocondrias: respiracin celular.
Retculo endoplasmtico: es el recolector de las protenas.
Ribosomas: se agrupan formando polisomas para fabricar protenas.
Lisosomas: son vesculas que contienen enzimas.
Aparato de Golgi: funcin de secrecin.

TEMA 3
ESTUDIO GENERAL DEL METABOLISMO DE LOS HIDRATOS
DE CARBONO
Las sustancias que el organismo recibe del exterior o aquellas que necesita sintetizar para
un adecuado funcionamiento orgnico y que van a ser transformadas por las mltiples reacciones
metablicas se conocen como principios inmediatos. Estos principios inmediatos son 3: hidratos
de carbono, lpidos y protenas.
HIDRATOS DE CARBONO
Tambin denominados azcares son compuestos orgnicos en cuya formacin entran a
formar parte fundamentalmente el carbono, el oxgeno y el hidrgeno. En funcin del nmero de
molculas de azcares sencillos que entran a formar parte de su estructura estos compuestos
pueden ser clasificados en:
Monosacridos: formados por una molcula de azcar.
Disacridos: formados por 2 molculas de azcar.
Oligosacridos: formados por 3-10 molculas de azcar.
Polisacridos: formados por ms de 10 molculas de azcar.
Los monosacridos se clasifican a su vez en:
1- Aldosa y cetosas: en funcin del grupo funcional aldehdo o cetona presentes en los
carbono terminales de su estructura,
2- Formas D y L: en funciones de la posicin (derecha o izquierda) del grupo funcional
OH en su cadena carbonada.
3- Formas y : en funcin de la posicin del grupo OH del carbono nmero 1 de su
molcula.
ORIGEN DE LOS HIDRATOS DE CARBONO
Los azcares o hidratos de carbono tienen su origen en la dieta y tambin en la sntesis
endgena.
Se digieren en la dieta en forma de polisacridos (por ejemplo: el almidn que se
encuentra en el arroz) o en forma de disacridos (por ejemplo: la fructosa) o monosacridos (por
ejemplo glucosa o galactosa); y una vez digeridos son absorbidos por la flora intestinal en forma
de monosacridos. Cuando el monosacrido absorbido no es glucosa se transforma en ella en el
nivel heptico).
El sistema endgena tiene lugar a nivel del hgado y rin partiendo de aminocido y
cido lctico mediante el proceso denominado gluconeognesis (produccin de nueva glucosa).
FUNCIONES DE LOS HIDRATOS DE CARBONO
Las funciones ms importantes son:
1- Fuentes de energa: es la funcin primordial.
2- Reserva energtica
3- Servir de base para la sntesis de otras estructuras como por ejemplo de los cidos
nucleicos.
La energa para consumo inmediato es obtenida de la degradacin de molculas de
glucosa (que es el monosacrido por excelencia) que puede tener lugar por 3 vas:
1- La gluclisis Embden-Meyerhof
2- Pentosas fosfato
3- Sorbitol

La primera va o gluclisis es la ms importante cuantitativamente y en condiciones de

anaerobios finaliza en piruvato. Este en presencia de oxgeno ingresa en el ciclo de Krebs y con
un gran rendimiento energtico proporciona 36 molculas de ATP (adenn trifosfato) por cada
molcula de glucosa degradada.
En la va de las pentosas aldosas se obtiene ribosa (fundamentalmente en la sntesis de
cido nucleicos) y NADPH (nicotinamida-adenina-di-nucletido fosfato reducido) es necesario
en muchos procesos metablicos de la clula.
El sorbitol proporciona molculas de fructosa.
La funcin de reserva energtica: la funcin de depsito es realizada por el glucgeno
sintetizado a partir de la glucosa por el proceso de gluconeognesis. El glucgeno se encuentra
tanto en el hgado (donde puede ser degradado hasta glucosa y utilizado como fuente energtica
en todo el organismo) como en la masa muscular (este nicamente puede ser usado como fuente
de energa para msculos).
Glucosa y glucgeno estn ntimamente relacionados a nivel metablico en virtud de los
procesos de glucogeneognesis y glucogenolisis (escisin de glucgeno liberando glucosa a la
sangre).
METABOLISMO DE LA GLUCOSA
La glucosa es el principal producto de energa del organismo (participa en el ciclo de
Krebs de las mitocondrias para generar energa en forma de ATP) por lo que determina la
capacidad de este para responder a las demandas de aporte y utilizacin de la energa.
La glucosa presente en la sangre tiene su origen en:
Los hidratos de carbono ingeridos en la dieta
la eventual glucogenolisis de glucgeno heptico.
La gluconeognesis a partir de las protena (aminocidos).
Tras la absorcin de la glucosa ingerida en la dieta esta pasa a la sangre y entonces los
niveles normales en ayunas o basales (de 60-90 mg/dl) se eleva hasta valores de 120-150 mg/dl o

incluso ms. En personas en cuyo metabolismo de hidratos de carbono funciona adecuadamente

estos niveles de glucosa disminuyen enseguida de manera que al cabo de 1 o 2 horas se vuelven a
alcanzar los niveles basales. Si una persona se mantiene en ayunas mucho tiempo el nivel de
glucosa desciende pero nunca debe descender por debajo de 50-60 mg/dl.

La glucosa es filtrada continuamente a nivel glomerular y vuelve en su totalidad a la

sangre ya que es reabsorbida en los tbulos renales.
En individuos con una funcin renal normal la glucosa aparece en orina (glucosuria)
cuando su nivel en sangre (glucemia) es superior a 160 mg/dl (umbral renal para la glucosa). Sin
embargo si el tbulo renal est daado puede aparecer glucosuria con glucemias normales.
El mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre entre las comidas se consigue
gracias al equilibrio que existe entre 2 procesos que son:
Utilizacin de la glucosa por los tejidos.
La glucogenolisis.
El metabolismo de los hidratos de carbono y el de la glucosa por tanto est regulado a
nivel hormonal mediante la insulina (producida por el pncreas) por otro lado un conjunto de
sustancias de accin antagnica denominadas contra-insulares:
Glucagn
Glucocorticoides (corteza suprarrenal)
Catecolamina (adrenalina y noradrenalina)
GH (hormona del crecimiento tambin llamada Somatotropina)
Destacar 3 funciones de la insulina (disminuye los niveles de glucosa en sangre) sobre los
hidratos de carbono:
~ Aumenta la glucogenognesis
~ Disminuye la glucogenolisis
~ Disminuye la gluconeognesis

ALTERACIN DEL METABOLISMO DE LOS HIDRATOS DE CARBONO

Pueden darse alteraciones debido a:
1- disminucin de la glucemia en sangre, es decir, hipoglucemia
2- Las ms importantes son debido a una alteracin de la tolerancia a los hidratos de
carbono que conduce a un aumento del nivel de glucosa en sangre denominado hiperglucemia,
dentro de las cuales la ms importante es la diabetes.
Hipoglucemia: estado fsico-patolgico de etiologa muy variada y que consiste en la
existencia de glucosa plasmtica menor a 45-50 mg/dl acompaada o no de signos clnicos (no
siempre aparecen al alcanzarse una misma cifra lmite de glucosa en sangre). Una hipoglucemia
se produce a consecuencia de un desequilibrio entre la glucosa que llega al torrente sanguneo
(procedente de la absorcin intestinal, gluconeognesis y glucogenolisis) y la que sale del mismo
como consecuencia del consumo de glucosa por los tejidos. Es una situacin poco frecuente ya
que mientras varias hormonas contribuyen al aumento de la glucemia una sola tiene efecto
hipoglucemiante (insulina).
Los sntomas o manifestaciones clnicas de una hipoglucemia son inespecficos y debidos
a 2 causas:
1- aumento de la liberacin de adrenalina (por una aumento de la actividad del sistema
nervioso simptico) cuya finalidad es restablecer los niveles de glucemia normales. Provocan
estos sntomas: temblores, taquicardias, hipertensin, sudoracin, sensacin de ansiedad y de
hambre, estos sntomas son precoces.
2- disfuncin del sistema nervioso central (en especial en la zona cortical cerebral) por
un dficit de glucosa. Estos sntomas son tardos y son: mareos, confusin, alteraciones de
percepcin visual, cefaleas, convulsiones, coma, y si la hipoglucemia es prolongada deterioro
mental, con lesiones irreversibles del sistema nervioso central.
Segn la causa desencadenante de la hipoglucemia hablaremos de 2 tipos: por ayuno y
por postprandial.
1- Por ayuno: se produce porque se va consumiendo progresivamente toda la glucosa (e
incluso el glucgeno) y se instaura por:
A- disminucin de la produccin de glucosa, esto puede ser debido a varias
causas:
A las hormonas hiperglucemiantes.
A una insuficiencia heptica grave.
A un elevado consumo de alcohol.
B- Un aumento del consumo de glucosa, este aumento puede ser debido a:
Tumores pancreticos (se segrega insulina en exceso y abundancia)
Tumores con metabolismo hiper-activo.
2- Postprandial: son frecuentes en personas que han sufrido la extirpacin parcial o total
del estmago, ya que el vaciamiento rpido del mismo provoca una absorcin brusca de la
glucosa (hiperglucemia) seguida de un excesivo aumento de la secrecin de insulina
(hipoglucemia).
Hiperglucemia: es una elevacin anormal de la concentracin de glucosa en sangre que
conduce a un sndrome clnico denominado diabetes cuyo signo clnico ms destacado es el
aumento de los niveles plasmticos de glucosa.
La diabetes o diabetes mellitus es una metabolopata compleja crnica que se origina en
consecuencia de un dficit de insulina que puede ser absoluto o relativo. En el absoluto la
secrecin de insulina es insuficientes para el metabolismo normal de los hidratos de carbono. En
el relativo la secrecin de insulina es normal o incluso est aumentado pero es insuficiente por
estar aumentados las necesidades.
Este dficit de insulina altera el metabolismo de los hidratos de carbono, lpidos y
protenas.

~ Dficit de insulina en los hidratos de carbono:

Disminuye el consumo de glucosa en el msculo y tejido adiposos,

como consecuencia aumenta la gluconeognesis.

Disminuye la sntesis de glucgeno.

Aumenta la glucogenolisis.

~ Consecuencias (de las 2 primeras causas del dficit de insulina): se produce

hiperglucemia y glucosuria.
~ Consecuencia con respecto a los lpidos: aumenta la liplisis lo que produce gran
cantidad de cidos grasos que se usan como fuente de energa y en el hgado se transforman en
cuerpos cetnicos (cetognesis) estimulado por el glucagn. Estos cuerpos cetnicos pasan a la
sangre y como no se pueden usar al ritmo que se producen se acumulan dando hiper-cetonemia y
se eliminan va urinaria dando cetonuria. Otra alteracin es que se altera el metabolismo de las
lipoprotenas
~ Respecto a las protenas (alteracin de su metabolismo): aumenta la liberacin al
torrente sanguneo de aminocidos pertenecientes a protenas musculares (aumenta el
catabolismo proteico) los cuales una vez en el hgado aumenta la gluconeognesis.
~ Dficit de insulina:
1- Hidratos de carbono (hiperglucemia y glucosuria):
A- Disminucin del consumo de glucosa: msculo y/o tejido adiposo
B- Disminucin del glucogenognesis
C- Aumento de glucogenolisis
2- Lpidos: aumento de liplisis aumento de cidos grasos hgado
aumento de cuerpo cetnicos sangre hipercetonemia cetonuria
3- Protenas: aumento de los aminocidos musculares en la sangre hgado
aumento de gluconeognesis
~ Tipos de diabetes de diabetes mellitus:
Primaria esencial:

o Insulino-dependiente, juvenil tipo I.

o No insulino-dependiente, diabetes del adulto o tipo II.
Secundaria sintomtica: causa conocida.

Si la causa del dficit de insulina es conocida hablamos de diabetes secundaria o

sintomtica. Si la causa es desconocida hablamos de diabetes primaria o esencial, la cual tiene un
elevado componente gentico. Esta diabetes primaria a veces se relaciona con defectos en los
receptores de insulina y tambin se relaciona con reacciones autoinmunes (anticuerpos). Esta
diabetes primaria se clasifica en:
1- Diabetes insulino-dependiente, tipo I juvenil.
2- Diabetes no insulino-dependiente, tipo II del adulto.
Las diferencias entre ellas son:
TIPO I INSULINO-DEPENDIENTE
Juvenil
Edades tempranas (Aprox. 30 aos)
Desaparicin de las clulas de los islotes
de Langerhans
Cursa con cetosis
Peso corporal inferior al normal
Se detectan anticuerpos contra los islotes

TIPO II NO INSULINO-DEPENDIENTE
Adulto
Madurez (mayor a 40 aos)
No se conoce la causa (disfuncin de las cl
resistencia a la insulina debido a defectos en el
receptor de la insulina
Raramente existe cetosis
Peso corporal superior al normal
Raramente no se detectaran Ac anti-islotes de L.

Imprescindible uso de insulina

No suele ser necesarios el uso de insulina
Debemos nombrar que aparte de estos 2 tipos de diabetes existen 2 ms:
La tolerancia anormal a la glucosa, tambin denominada diabetes

latente qumica: tiene hiperglucemia pero con cifras inferiores a las

anteriores, no tiene sntomas de diabetes y son obesos.
La diabetes gestacional que aparece por primera vez en el embarazo,

da mayor riesgo de morbi-mortalidad perinatal (en los recin nacidos)

y se diagnostica por la prueba de tolerancia oral a la glucosa (PTOG).
DIAGNSTICO DE LA DIABETES
Las pruebas diagnsticas ms usadas estn basadas en la demostracin de la tolerancia de
la glucosa anormal. En las personas en las que esta tolerancia est muy disminuida la
demostracin de que padecen hiperglucemia y glucosuria en ayunas es suficiente para establecer
un diagnstico de diabetes, de no ser a s hay que usar pruebas de provocacin.
En general para considerar a una persona como diabtica a de poder demostrarse
cualquiera de estas condiciones:
1- Un aumento de los niveles plasmticos de glucosa mayor a 198 mg/dl y la presencia
de sntomas de diabetes que son 4 fundamentales (las 4 Pes):
Polidipsia: aumento de la sed.
Poliuria: aumento de las veces del nmero de micciones
Polifagia: aumento de la sensacin de hambre.
Disminucin del peso corporal.
2- Una glucemia en ayunas mayor de 139 mg/dl obtenidas en 2 muestras de sangre.
3- Una glucemia en ayunas menor de 140 mg/dl (aunque mayor a los valores normales) y
2 PTOG con un nivel de glucosa a las 2 horas mayor a 198 mg/dl y al menos otro valor puntual
tambin mayor a 198 mg/dl.
Pruebas ms usadas para el diagnstico de la diabetes:
~ Las que determinan la glucosuria: para que la glucosa aparezca en orina la glucosa debe
ser superior a 160 mg/dl.
~ Las que determina la glucemia: en ayunas, post-prandial y las pruebas de sobrecarga de
glucosa (oral, intravenosa, sensibilizada con cortisol).
Pruebas que determinan la glucemia en ayunas: valores de glucemia plasmtica en ayunas
mayor de 120 mg/dl, son indicativos de diabetes mellitus mientras que los comprendidos entre
100-120 mg/dl se consideran valores dudosos que se deben confirmar con alguna prueba de
sobrecarga de glucosa.
La postprandial es ms sensible; se usa si la anterior no es definitiva y consiste en
determinar los niveles de glucosa en sangre obtenida 2 horas despus de haber ingerido una dosis
conocida de glucosa (normalmente 100 gr. De glucosa). Previo al anlisis se debe instaurar
durante 3 das una dieta rica en hidratos de carbono (mnimo 300 gr. diarios) e interrumpir el
tratamiento de frmacos que puedan influir en el metabolismo de los hidratos de carbono.
Prueba de sobrecarga oral se usan para establecer un diagnstico en los siguientes casos:
1- Personas con glucosuria que no tiene sntomas clnicos y que los niveles de glucosa en
ayunas y post-prandial son normales.
2- Personas que no existe glucosuria pero tiene sntomas y los niveles de glucosa en
ayunas y post-prandial son normales.
3- Personas con antecedentes de diabetes mellitus (para detectar diabetes latentes).
4- En mujeres que han dado a luz nios con peso elevado (4-45 o ms).
5- Mujeres embarazadas que presentan glucosuria.
Una de las pruebas ms usadas es la prueba de sobrecarga oral ( PTOG) reservando la
prueba de sobrecarga intravenosa a personas con problemas gastrointestinales.

Para descubrir pacientes pre-diabticos se puede realizar una prueba alternativa

denominada sobrecarga de glucosa sensibilizada con cortisona ( cortisol) en ella se evita tener
que usar una sobrecarga de glucosa tan grande (que podra desencadenar una diabetes) ya que la
cortisona es una hormona que aumenta la intolerancia a la glucosa.
PRUEBAS DE TOLERANCIA ORAL DE LA GLUCOSA ( prueba de sobrecarga oral de la glucosa PTOG)
Existen varios mtodos pero en general se realiza as:
Durante varios das (normalmente los 3 das) anteriores a la prueba hay que ingerir una
dieta rica en hidratos de carbono.
A de realizarse por las maanas porque vara la tolerancia a la glucosa a lo largo del da;
es mayor por la maana y menor por la tarde.
Hay que tener una absoluta precisin con el horario de administracin de la glucosa
(normalmente 75 gr. en ayunas) y con las sucesivas extracciones sanguneas (normalmente cada
30 minutos hasta un total de 2 horas tras la ingesta de la glucosa).
Durante toda la prueba la sangre debe tener la misma procedencia (o toda capilar o toda
venosa).
Algunas personas toleran mal la carga de glucosa con lo cual, si aparecen vmitos o
nuseas hay que anotarlo por se vara la interpretacin final de resultados.
La tolerancia a la glucosa disminuye con la edad por lo tanto la interpretacin de esta
prueba en ancianos es difcil.
Sea cual sea el mtodo la interpretacin de resultados debe ser por personal
especializado.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS

1- Glucosuria renal: existe glucosa en orina y la glucemia es normal. Esto quiere decir
que est alterado el umbral renal. Aparece glucosuria intensa a partir de la primera media hora,
sin embargo, no existe cetonuria.
2- Retraso en el almacenamiento de glucosa: aparece glucosuria pero no intensa y no
existe cetonuria.
3- Diabetes leve: existe glucosuria, pero no es intensa y tampoco existe cetonuria.
4- Diabetes grave: existe glucosuria muy intensa casi desde el principio y existe
cetonuria moderada hora y media despus de la ingesta.

DETERMINACIONES PARA VALORAR EL FUNCIONAMIENTO DEL METABOLISMO

DE LOS HIDRATOS DE CARBONO
Conocer el metabolismo de los hidratos de carbono (sobretodo la glucosa) permite valorar
las alteraciones en la concentracin plasmtica de la glucosa, que pueden ser:
Primarias: reflejan alteraciones del metabolismo de los hidratos de los hidratos de
carbono.
Secundarios: son manifestaciones que acompaan a otras enfermedades.
De todos aquellos proceso diagnsticos, adecuados para valorar el funcionamiento del
metabolismo de los hidratos de carbono, los ms importantes son:
1- Determinacin de la glucemia basal (en ayunas)
2- Determinacin de la glucosuria.
3- Determinacin de la cetonemia y de la cetonuria.
4- Prueba de sobrecarga oral de la glucosa.
5- Anlisis de hormonas relacionados con el metabolismo de los hidratos de carbono.
6- Determinacin de enzimas y sustratos hidro-carbonados en clulas y tejidos
7- Otros
1- Determinacin de la glucemia basal: a temperatura ambiente la glucosa presente en una
muestra de sangre entera sufre gluclisis (debido a los glbulos rojos o eritrocitos) de tal
importancia que al cabo de 6 horas puede desaparecer totalmente, proceso que puede verse
aumentado por la presencia de leucocitos en elevado nmero y contaminacin bacteriana. Por
ello debemos tener en cuenta:
A- Siempre que la muestra sea sangre total debemos realizar el anlisis de la glucosa
durante la media hora despus de la extraccin.
B- Si la anterior no es posible debemos aadir un conservador que inhiba la gluclisis,
por ejemplo fluoruro sdico.
C- Se recomienda usar plasma o suero par evitar la gluclisis.
Los mtodos de determinacin de la glucosa basal son:
Mtodos basados en el poder reductor de la glucosa son:
~ Mtodo de la orto-toluidina: es colormetro, por lo tanto espectrofotmetro. La cantidad
de color es directamente proporcional a la cantidad de glucosa que aparece en la muestra. Casi
no se usa debido a que la orto-toluidina es corrosiva y no se puede automatizar y es cancergena
y es un tcnica con muchas interferencias.
~ Mtodo de la reduccin del cobre: son mtodos antiguos. El ms conocido es el de
Benedict que detecta glucosa e hidratos de carbono reductores totales. Se siguen usando para la
determinacin semi-cuantitativa de azcares reductores totales en orina y determinacin de
efecto genticos de los hidratos de carbono en nios.
Cu+2 + Glucosa calentamientoCu2O + CuOH
Mtodos enzimticos:
~ Mtodo de la glucosa oxidasa (GOD): es la enzima que cataliza la reaccin de la
glucosa presente en la muestra. La cuantificacin de resultados se puede realizar por 2 mtodos
que son: mediante polarografa y el otro por determinacin de perxido de hidrgeno (H2O2)
formado.
Para la polarografa realizamos la medida del consumo de oxgeno

con un electrodo de oxgeno. La cantidad de glucosa de la muestra es

directamente proporcional a la cantidad de oxgeno consumido.
Glucosa + O2 cido glucnico + H2O2
Determinacin de perxido de hidrgeno: mediante la accin de una

peroxidasa, un cromgeno pasa de su forma reducida (que es

incolora) a su forma oxidada (coloreada). El ms usado son los

mtodo de Trinder en el cual la intensidad de color es directamente

proporcional a la cantidad de glucosa de la muestra.
Glucosa + O2 cido glucnico + H2O2
H2O2 + cromgeno compuesto coloreado (oxidado)
~ Hexoquinasa: este mtodo proporciona el mximo grado de especificidad. La
hexoquinasa cataliza el paso de glucosa a glucosa-6-fosfato. En una segunda reaccin se produce
la reduccin de NADP a NADPH (sustancia que absorbe el ultravioleta prximo visible). La
reaccin se mide en el espectrofotmetro a 340 nanmetros y el incremento de absorbancia es
directamente proporcional a la concentracin de glucosa.
Glucosa + ATP Glucosa-6-P + ADP
Glucosa-6-P + NADP NADPH + (a los UV prximos visibles)
Interpretacin de estos resultados: Los valores normales de glucemia basal en ayunas 80
mg/dl y valores mayores de 140 mg/dl de glucosa en 2 muestras califica a la persona como
diabtica.
2- Determinacin de glucosa en orina: valores normales; glucosuria negativa, debemos recordar
que la glucosa aparece en orina si se supera el umbral renal, es decir, la glucemia es mayor de
160-180 mg/dl.
3- Determinacin de cuerpos cetnicos: la determinacin se realiza en sangre (cetonemia) y en
orina (cetonuria) aunque derivan de los cidos grasos informan indirectamente sobre el
metabolismo de los hidratos de carbono.
4- Prueba de sobrecarga oral de la glucosa PTOG: nos permite diferenciar la intolerancia a la
glucosa y la diabetes.
La intolerancia a la glucosa: cuando obtenemos en la curva un valor de 200 mg/dl y l
obtenido a las 2 horas est entre 140-200 mg/dl.
Diabetes: si en 2 valores uno de los cuales es obtenido a las 2 horas la glucemia es
mayor a 200 mg/dl.
5- Anlisis de hormonas relacionados con el metabolismo de los hidratos de carbono: se
determina especialmente la insulinemia, se suele usar 2 mtodos:
RIA (Radio inmuno ensayo): se uso como marcadores isotpicos radiactivos.
Enzimo-inmuno anlisis (el ms usado es el test de Elisa): que utiliza marcadores
enzimticos.
A parte de determinar insulinemia tambin se puede determinar las hormonas contrainsulares como el glucagn y a veces se determina el pptido-C.
6- Determinacin de enzimas y sustratos hidro-carbonados en clulas y tejidos: estos mtodos
determinan enzimas del metabolismo de los hidratos de carbono o sustratos. Se realizan en
clulas y tejidos de biopsias de rganos. Son importantes para determinar ciertas metabolopatas.
Mtodo de la hemoglobina glicosilada: es una fraccin de la hemoglobina A unida por
enlaces covalentes a la glucosa. Su aparicin es directamente proporcional a la aparicin de
glucosa en sangre por lo tanto sirve para control de la diabetes en periodo prolongado. Pero en
cambio no es til para el diagnstico de la diabetes. Es muy especfico pero con sensibilidad
escasa.
Mtodo cromatogrficos inmunolgicos
7- Otras determinaciones:
Determinacin de micro-albuminuria: es la excrecin de pequeas cantidades de
albminas (menos de 20 mg/dl). Si la cantidad de albmina en orina es aproximadamente 20
mg/dl sera detectada mediante tiras reactivas. Esta determinacin sirve de control de personas
diabticas. Se determina mediante mtodos inmuno-qumicos: tienen buena sensibilidad
(detectan de 2-20 mg/dl), buena especificidad y son automatizables. La cuantificacin de
resultados es mediante tubidimetra y nefelometra.

 Determinacin inmunolgicas: consisten en la determinacin de anticuerpos especficos

frente a la insulina o a las clula pancreticas productoras de insulina. Los mtodos ms usados
son: enzimo-inmuno-anlisis e inmuno-fluorescencia indirecta.
Determinacin de receptores: la cantidad de receptores de insulina determina la
efectividad y absorcin como hormona hipoglucemiante.
PREGUNTAS
1- Nombrar las 3 vas por la cual utilizamos la glucosa como fuente de energa.
Gluclisis glucosa con oxgeno (ciclo de Krebs) a ATP, sin oxgeno a piruvato.
Pentosas fosfatos glucosa a ribosa-5-P (ADN y ARN) y NADPH
Sorbitol glucosa a fructosa
2- Qu orgenes tiene la glucosa presente en la sangre?
Tejido adiposo (triglicridos)
Hgado de la glucogenolisis del glucgeno heptico
Msculos de la gluconeognesis a partir de las protenas (aminocidos)
Intestino delgado de los hidratos de carbono ingeridos en la dieta.
3- Regulacin hormonal Por qu hormonas est regulado el metabolismo de los H de C?
Insulina
Sustancias de accin antagnica denominadas contra-insulares :glucagn, glucocorticoides, catecolamina (adrenalina, noradrelina) y GH somatotropina.
4- Diferencias entre la diabetes tipo I y tipo II
TIPO I INSULINO-DEPENDIENTE
TIPO II NO INSULINO-DEPENDIENTE
Juvenil
Adulto
Edades tempranas (Aprox. 30 aos)
Madurez (mayor a 40 aos)
Desaparicin de las clulas de los islotes No se conoce la causa (disfuncin de las cl
de Langerhans
resistencia a la insulina debido a defectos en el
receptor de la insulina
Cursa con cetosis
Raramente existe cetosis
Peso corporal inferior al normal
Peso corporal superior al normal
Se detectan anticuerpos contra los islotes
Raramente no se detectaran Ac anti-islotes de L.
Imprescindible uso de insulina
No suele ser necesarios el uso de insulina
5- Cul es el mtodo de referencia de determinacin de glucosa basal?
Mtodo de la hexoquinasa perteneciente al mtodo enzimtico de la glucosa basal.
Se mide por el espectrofotmetro.

TEMA 4
ESTUDIO GENERAL DEL METABOLISMO DE LOS LPIDOS
Los lpidos son molculas insolubles en agua. Son un grupo complejo y diverso que est
formado por:
1- Las grasas propiamente dichas entre las cuales estaran los triglicridos y cidos
grasos.
2- El colesterol.
3- Los fosfoglicridos
4- Los esfingolpidos
Entre los lpidos existen molculas esenciales (no pueden ser sintetizadas por el
organismo) otras que requieren ciertas modificaciones para ser funcionales y otras muchas no
esenciales cuya sntesis potencialmente posible para la mayor parte de las clulas se localiza
fundamentalmente en un rgano el hgado. Entre las variadas funciones de los lpidos destacan
los siguientes:
1- Fuente energtica: tienen mayor valor calrico que el resto de los principios
inmediatos.
2- Forma de almacenamiento de energa (al poder ser almacenados sin agua ocupan
menos espacio que los hidratos de carbono y protenas).
3- Componentes estructurales de las membranas celulares y de las lipoprotenas
plasmticas.
4- Son agentes emulsificantes.
5- Son compuestos funcionales de sustancias como las hormonas, prostaglandinas,
vitaminas.
CLASIFICACIN
Triglicridos: son compuestos formados por la esterificacin de la glicerina con 3 cidos
grasos:

Los triglicridos presentes en el organismo cuyos valores normales son inferiores a 160
mg/dl. Pueden tener un doble origen: los que proceden de la absorcin intestinal de las grasas
digeridas (origen exgeno) y aquellos que son sintetizados en el hgado (origen endgeno):
~ Sntesis en el hgado: directamente a partir de los cidos grasos disponibles o mediante
la transformacin de los hidratos de carbono.
La mayor parte de los lpidos que se ingieren en la alimentacin son triglicridos
(triacilgliceroles). En el tubo digestivo los enlaces tipo ester de los triglicridos se rompen, por
accin de las lipasas (especialmente la pancretica) dando origen a cidos grasos y glicerol.
Su principal funcin es la de transportar la energa hasta los rganos de depsitos y su
destino final es que sus cidos grasos sean almacenados o utilizados como fuente de energa.
Los lpidos almacenados en el organismo principalmente como triglicridos constituyen
la principal reserva energtica del cuerpo. En estados de inanicin, fro, ejercicio, etc se produce

una rpida movilizacin de los triglicridos que se hidrolizan pasando el glicerol y los cidos
grasos formados a la sangre.
Colesterol: presente en el organismo tiene tambin un doble origen: el que proviene de
la alimentacin (exgeno) (colesterol se encuentra en su mayor parte libre no esterificado). El
colesterol esterificado es hidrolizado por la colesterol esterasa pancretica dando lugar a
colesterol libre y cido grasos.
El colesterol endgeno aunque potencialmente puede ser sintetizado por todas las clulas
se va a formar principalmente a nivel heptico e intestinal. Va a ser eliminado por el hgado bien
por la bilis o bien utilizndose en la sntesis de cido biliares.
Las funciones principales de colesterol circulante son:
1- Componente estructural fundamental de las membranas celulares.
2- Precursor de unas hormonas sexuales y de las de la corteza suprarrenal.
3- Participa en la sntesis de los cidos biliares.
El colesterol circula en la sangre unido a las siguientes lipoprotenas:
A- Las LDL: transportan el 70% del colesterol
B- Las HDL: transportan de 15-20% del colesterol
C- El resto circula unido a las VLDL y los quilomicrones
Las lipoprotenas son biomolculas lipdicas que contienen lpidos y protenas con lo cual
las propiedades fsicas y qumicas caractersticas de sus componentes estn fusionadas para
cumplir funciones biolgicas especializadas.
El aumento de la concentracin plasmtica de colesterol se asocia a un incremento del
riesgo de sufrir enfermedades cardiovasculares, por lo que su regulacin en la poblacin en
general tiene un alto inters epidemiolgico.
cidos grasos libres: son los nicos lpidos que circulan por el plasma sin estar unidos a
una lipoprotena se denominan tambin cidos grasos no esterificados.
Los cidos grasos libres proceden de la liplisis que tiene lugar en el tejido adiposo y de
los triglicridos circulantes.
Los valores normales en plasma son entre 10-20 mg/dl.
Tienen como principal funcin la de servir como fuente inmediato de energa, para ello
los cidos grasos son degradados en las mitocondrias para obtener energa mediante un proceso
que se llama -oxidacin que en ltima instancia este proceso nos proporcionar unidades de 2
tomos de carbono (Acetil coenzima A Acetil CoA) ms energa para los distintos procesos
metablicos.
Cuando existe una intensa formacin de unidades de acetil CoA estas unidades se van a
utilizar para formar cido aceto-actico y cido -hidroxi-butrico, los cuales pueden ser
utilizados por otros tejidos como fuente de energa. Estos compuestos junto con la acetona van a
formar los denominados cuerpos cetnicos. Los cuerpos cetnicos sintetizados en el hgado
pasan a la sangre que los transportan a los tejidos perifricos donde son utilizados. Su
concentracin en sangre es normalmente baja, sin embargo, en algunas situaciones metablicas
como puede ser el ayuno prolongado y la diabetes mellitus aumenta los niveles plasmticos de
estos compuestos, lo cual ocasiona una disminucin del pH sanguneo que se conoce como
acidosis.
Fosfoglicridos: procedentes de la alimentacin son compuestos lipdicos que por la
accin de las fosfolipasas pancreticas dan lugar a glicerol. Fosfato. cido graso y bases
nitrogenadas.
LAS LIPOPROTENAS
La relativa especializacin de los diversos tejidos en el manejo de los lpidos hace
necesaria la existencia de un transporte plasmtico de los mismos de un lugar u otro. Para este

transporte es necesaria su incorporacin en unos complejos que permiten su solubilizacin y que

posean adems informacin necesaria para su correcta metabolizacin.
Aunque existe una gran cantidad de protenas transportadoras especficas de molculas
lipdicas concretas cuantitativamente destacan aquellas partculas destinadas al transporte del
colesterol, triglicridos y fosfolpidos que son los lpidos mayoritarios del organismo y estas
partculas se conocen como lipoprotenas.
Las lipoprotenas son macromolculas que poseen una estructura interna compuesta por
triglicridos y steres de alcohol. En su superficie tiene colesterol y fosfolpidos adems de
protenas (apoprotenas). La proporcin en que se encuentra cada uno de sus componentes
determina las propiedades fsico-qumica de las lipoprotenas, lo cual es de gran utilidad para
proceder a su reparacin y a su posterior estudio.
Las apoprotenas designadas (con letras desde la A a la F y algunas con varios subndices
por ejemplo APO-BI). Desempean diversas funciones:
1- Son componentes estructurales de las lipoprotenas y por tanto contribuyen a la
solubilizacin de los lpidos.
2- Actan como cofactores de diversas enzimas (los cofactores son aquellas sustancias
cuya presencia en pequeas cantidades es necesaria para la reaccin enzimtica
3- Permite que las distintas lipoprotenas sean reconocidas por receptores de la superficie
celular.
Las lipoprotenas son sintetizadas en el hgado y en el intestino grueso y posteriormente
sufren numerosas transformaciones, tanto en la sangre como en los tejidos. En general en funcin
de su contenido lipdico y del tipo de APO presentes en su superficie las lipoprotenas se pueden
clasificar en:
Quilomicrones
Lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL)
Lipoprotenas de baja densidad (LDL)
Lipoprotenas de alta densidad (HDL)
Lipoprotenas a
1- Quilomicrones: son partculas grandes que aparecen en el plasma tras la ingestin de grasas y
son sintetizadas en las clulas intestinales a partir de: triglicridos colesterol y fosfolpidos.
Su vida en sangre es muy corta (menos de 30 minutos) y su principal funcin es
transportar los triglicridos exgenos a los tejidos donde son hidrolizados por la lipoprotena
lipasa par dar glicerol y cidos grasos. Estos cidos grasos son utilizados o bien pueden ser
almacenados en los adipositos. Los residuos de los quilomicrones (tras perder los triglicridos)
son eliminados va heptica.
2- Las VLDL (very low density lipoprotein): las lipoprotenas VLDL son sintetizadas en el
hgado y en el intestino a partir de los lpidos exgenos y endgenos fruto del catabolismo de los
hidratos de carbono. Su funcin es la de transportar los triglicridos endgenos. Sus
triglicridos son tambin degradados por la lipoprotena lipasa y el resultado son unos residuos
muy ricos en colesterol, que bien pueden ser retirados de la circulacin o bien pueden ser
utilizados para sintetizar LDL.
3- Las LDL (low density lipoprotein): las lipoprotenas de baja densidad se originan como
consecuencia de la degradacin de las VLDL en el torrente circulatorio. Su funcin principal es
la de transportar el 80% del colesterol circulante hacia las clulas de lo tejidos, las cuales tienen
receptores especficos para las LDL. Aqu el colesterol es utilizado para la sntesis de las
membranas celulares y los sintetizan de hormonas esteroideas.
Las partculas de LDL son metabolizadas en los lisosomas de las clulas de los tejidos
perifricos originando colesterol libre que una vez suelto en el citoplasma celular va a ejercer
una triple accin:
A- Inhibe la sntesis endgena del colesterol.

B- Impide la entrada de colesterol a las clulas (por inhibicin de la sntesis de receptores

de LDL).
C- Estimula el proceso de esterificacin de colesterol libre en el citoplasma.
Las lipoprotenas de LDL son sintetizadas por el hgado a partir del: colesterol libre, de
los lpidos y de las apo-protenas C y E.
4- Las HDL (high density lipoprotein): captan el colesterol libre de las clulas de los
tejidos perifricos y este por accin de la enzima CLAT (lecitina-colesterol-acetil-transferasa) es
esterificado, dando lugar a una molcula hidrofbica que se sita en el interior de las HDL. Le
lugar perifrico que ha quedado libre es ocupado nuevamente por una nueva molcula de
colesterol libre que tambin procede de las clulas de los tejidos y as sucesivamente. De esta
manera se va eliminando el colesterol en exceso de los tejidos.
5- Lipoprotena a: esta se caracteriza por poseer en su estructura una apoprotena
peculiar que se llama APO-B100. Su concentracin en el plasma es baja y su sntesis a nivel
heptico- est regulada genticamente. Su marcado inters reside en su carcter aterognico (la
aterognesis) es el mecanismo por el cual se origina la placa de ateroma en el organismo. Esta
lipoprotena se la relaciona con la formacin de ateroma en los vasos sanguneos.
La alteracin de las distintas fracciones de lpidos circulantes en el torrente sanguneo es
un fiel reflejo de una serie de alteraciones orgnicas de diversas etiologas y gravedad, cuya
importancia clnica est relacionada fundamentalmente con la ateroesclerosis. En general dichas
alteraciones pueden estar relacionas con:
1- Aumento de las fracciones lipdicas circulantes (hiperlipemias)
2- Disminucin de las fracciones lipdicas circulantes (hipolipemias)
3- Aparicin en la sangre de lipoprotenas de estructuras anormal que es una
dislipoproteinemias.
ALTERACIONES DE LAS FRACCIONES LIPDICAS CIRCULANTES
Las alteraciones ms importantes son la que hacen referencia a un incremento de la
concentracin plasmtica de las diferentes fracciones lipdicas. Son las denominadas
hiperlipemias. Cuando se hace referencia a las lipoprotenas que las transportan se habla de
hiperlipoprotenemias.
Las hiperlipemias se clasifican en:
Hipertrigliceridemia: el aumento del nivel de triglicridos puede ser consecuencia del
aumento de la sntesis o una disminucin de la degradacin de los mismos. Puede estar causados
por dietas inadecuados, trastornos hereditarios o ser una manifestacin secundaria de otras
enfermedades. Cuando el problema es que hay un aumento en la sntesis de los triglicridos las
causas que lo provocan pueden ser:
1- Porque hay un aporte calrico excesivo, con lo cual los hidratos de carbono no son
utilizados como fuente de energa y en el hgado dan lugar a triglicridos y cidos grasos.
2- El alcoholismo: debido a que el alcohol estimula la sntesis heptica de cidos grasos
3- La diabetes: debido al dficit de insulina aumenta la liplisis en tejido adiposo,
liberndose cidos grasos que hacen que aumenten las VLDL.
4- Trastornos hereditario: son mecanismo de actuaciones complejos y en ocasiones no
totalmente precisados.
Cuando el problema es que hay una disminucin de la degradacin de los triglicridos,
las causas que lo provocan pueden ser:
1- La diabetes: la lipoprotena lipasa ve disminuida su accin por defecto de insulina.
2- Trastornos hereditarios: existe una alteracin de los mecanismos de degradacin de
los triglicridos.
Las consecuencias de ambas anomalas pueden ser:

1- Dolor abdominal: el aumento de los rganos produce un aumento de liberacin de

enzimas del pncreas el cual puede sufrir inflamacin dando lugar a pancreatitis.
2- Hepatoesplenomegalia: es debido al acumulo de macrfagos repletos de triglicridos
que hacen aumentar de tamao el hgado y el bazo.
3- Formacin de Xantomas: son pequeos ndulos amarillos o rosados que aparecen
bruscamente por acumulo de los triglicridos en los macrfagos de la piel.
4- Debido al aspecto opalescente que presenta el plasma de las personas afectadas. La
retina aparece con aspecto blanquecino.
Hipercolesterolemia: el aumento de los niveles de colesterol puede deberse a: un
aumento de la sntesis y a una desviacin de la degradacin de las lipoprotenas que se ocupan de
su transporte.
Por lo tanto es mayoritariamente un aumento de colesterol de las LDL. Puede estar
causado por dietas poco equilibradas, herencia o ser una manifestacin secundaria de otras
enfermedades. Cuando el problema es un aumento en la sntesis las causas que lo provocan
pueden ser:
1- Sndrome nefrtico (al existir dficit de albmina aumento la sntesis de LDL)
2- Ciertas enfermedades hereditarias.
Cuando el problema es una disminucin de la degradacin de las lipoprotenas las
causas que las provocan pueden ser:
1- Dietas ricas en cidos grasos y colesterol: que van a provocar una disminucin en la
afinidad en los receptores de las LDL o bien inhiben la sntesis de las propias receptores.
2- Dficit de hormona tiroideas que hacen que disminuya el catabolismo de las LDL.
3- Trastornos hereditarios como al hipercolesterolemia familiar, las LDL se acumulan en
el plasma debido a una deficiencia de los receptores para las LDL.
Las consecuencia son:
1- La Ateroesclerosis: es la consecuencia ms importante del aumento del colesterol. La
lesin ms caracterstica es la formacin de placas de ateroma (estas placas pueden estar
formadas por lpidos, monocitos, fibras musculares y tejido conjuntivo). Estas placas se forman
debido a:
A- Adhesin al endotelio vascular de plaquetas por la accin de las LDL
B- Debido a una agresin hacia el endotelio de los vasos sanguneos.
C- Monocitos y macrfagos presentes en las zona captan las LDL.
2- Alteraciones cornales
3- Formacin de ndulos o placas: similares a los xantomas en los prpados y piel por el
aumento de macrfagos cargados de colesterol.
Aumento de las HDL:
1- Hiper-alfa-hiperproteinemia familiar
2- Personas que realizan ejercicio fsico de forma regular.
3- Personas que beben alcohol moderadamente
4- Mujeres (debido a la mayor cantidad de estrgenos)
Las consecuencias son: es que se ha demostrado que un aumento de HDL protege del
desarrollo de la ateroesclerosis ya que las HDL retiran el colesterol de los tejidos y tambin de la
pared arterial hasta el hgado para proceder a su eliminacin.
Aumento de los cidos grasos libres: los cidos grasos libres son transportados por la
albmina, aumentan cuando hay hipersecrecin de hormona que al igual que las catecolamina
activan la liplisis en el tejido adiposo. Las causas que la provocan son:
1- Situaciones de estrs (aumenta la secrecin de catecolamina)
2- Feocromocituma (es una neoplasia de la mdula que debuta con secrecin de
catecolamina)

3- Ayuno y diabetes que pueden provocar un aumento de los cidos grasos tambin van a
ser captados por hgado y se va a producir una aumento de los cuerpos cetnicos y de las VLDL.
Las hipolipemias: los trastornos o alteraciones por disminucin de las fracciones lipdicas
circulantes son las hipolipemias. Son menos frecuentes y normalmente se producen a
consecuencia de:
1- Una disminucin en el aporte de nutrientes (personas mal nutridas que padecen
sntomas de malabsorcin)
2- Por una sntesis insuficiente de apoprotenas
3- Un aumento en la degradacin de la lipoprotenas.
La Abetalipoproteinemia: es un trastorno hereditario poco frecuente que se caracteriza
porque las personas que lo padecen no pueden sintetizar la APO-B. Debido a ello tampoco
pueden sintetizar las lipoprotenas que la contienen, quilomicrones, LDL y VLDL. Esta
enfermedad cursa con descenso plasmtico de los niveles de colesterol y triglicridos.
Cuando hay catabolismo de un tipo de lipoprotenas est aumentado la concentracin de
las fracciones lipdicas que transportan estas lipoprotenas en sangre disminuidas, as por
ejemplo un catabolismo acelerado de las LDL puede ser el responsable de una
hipocolesterolemia.
TRASTORNOS POR EL DEPSITO ANORMAL DE LOS LPIDOS EN EL ORGANISMO
A- Lipodistrofias: son atrofias ms o menos localizadas del tejido adiposo asociadas a
diversos trastornos metablicos. Como puede ser una reducida respuesta a la accin de la
insulina.
B- Hgado graso: cuando la sntesis de triglicridos supera la capacidad del hgado para
transformarlos en VLDL los hepatocitos se cargan de triglicridos. Esto ocurre en el alcoholismo
y/o diabetes.
C- Lipoidosis: son raras enfermedades hereditarias de tipo metablico caracterizadas por
un dficit de algunas enzimas encargadas de la degradacin lipdicas.
En general la acumulacin de aquellos lpidos que no son degradados afectan a la
funcionalidad celular. Si tiene lugar en las neuronas y en las primeras etapas de la vida puede dar
lugar a manifestaciones neurolgicas diversas e incluso mental. El acumulo en otros rganos
aumenta su volumen.
INVESTIGACIN EN EL LABORATORIO DE LAS DISLIPEMIAS
Con el nombre de dislipemias se conoce el conjunto de alteraciones patolgicas que
afectan al metabolismo de los lpidos. Caracterizadas por uno niveles anormales de los lpidos
circulantes.
En la actualidad a quedado bien establecido que las alteraciones en el metabolismo de
lpidos y lipoprotenas constituyen el factor casual ms importante en el origen de las
enfermedades cardiovasculares. El diagnstico y tratamiento de la poblacin que presenta
dislipemias conduce q una clara disminucin de la incidencia y gravedad de las enfermedades
cardiovasculares. An a s actualmente no existe unanimidad acerca del mtodo ms adecuado
para identificar a la poblacin que sufre alteracin del metabolismo lipdico y poder as reducir el
elevado riesgo que estas enfermedades suponen.
La realizacin de estudios masivos de screning a la poblacin en general, aunque
probablemente seran de gran inters sera factibles dadas las grandes dificultades que podran
acarrear (dificultad para estandarizar las pruebas, elevado coste,...). As que aparte de la
deteccin ocasional de una dislipemia en aquellas personas que acuden por primera vez a la
consulta mdica, puede recurrirse a mtodos de exploracin selectiva que bsicamente consiste
en el estudio de aquellas personas que:

 Son consideradas de alto riesgo en base a sus antecedentes familiares, de enfermedades

cardiovasculares o a la presencia d una hipercolesterolemia en un familiar de primer grado.
Presentan una gran habilidad de sufrir una hiperlipemia personas que padecen
alteraciones metablicas, como: diabetes, enfermedad renal crnica, o una hipertensin arterial
(HTA)
Sea cual sea el camino seguido a la hora de realizar en el laboratorio un estudio analtico
fiable de lpidos hay que tener en cuenta algunas fuentes de error que podran impedir un
diagnstico correcto y en consecuencia un tratamiento inadecuado a la persona tratada.
Algunas causa de error ms importancia previas a la determinacin analtica son:
1- Biolgicas: existen diferencias apreciables en los niveles lipdicos en funcin del sexo,
de la edad, de la raza, ...
2- Socio-ambientales: dieta, obesidad, consumo de sustancias txicas (como tabaco y
alcohol), ejercicio fsico, ...
3- Manipulacin de la muestra: ayuno previo a la recogida, la muestra con
anticoagulante, almacenaje, el transporte,...
4- De tipo clnico: tratamiento farmacolgico, embarazo y enfermedades concurrentes
(crnicas).
Estas fuentes de variacin pueden minimizarse adoptando las siguientes precauciones
generales:
1- Ayuno mnimo de 12 horas previo a la extraccin
2- Mantener al paciente en su dieta y estilo de vida habitual durante 2 3 semanas
previas al estudio analtico.
3- Suspender cualquier medicacin al menos 1 mes antes que puede interferir en el
resultado del anlisis como por ejemplo estrgenos, anticonceptivos orales, salicilatos,...
4- Debemos retrasar la extraccin 3 semanas despus de una enfermedad leve y 3 meses
despus d una enfermedad grave (infarto)
5- Confirmar el diagnstico repitiendo la determinacin 2 3 veces en un intervalo de 2
3 semanas.
6- realizar la determinacin d colesterol y triglicridos totales en las 48 horas posteriores
a la extraccin.
7- Para la separacin de lipoprotenas debe aadirse a la muestra una solucin
conservante. En este caso la determinacin y procesamiento se llevar a cabo en lo 2 3 das
posteriores a la extraccin
8- Conservar todas las muestras refrigeradas.
MTODOS DIAGNSTICOS
Los mtodos de laboratorio que se utilizan en el estudio de las lipoprotenas pueden
clasificarse en 2 grupos:
1- Mtodos generales: determinan alteraciones orgnicas generales de una dislipemia.
2- Mtodos especficos: su objetivo es el diagnstico gentico d una dislipemia.
En general las determinaciones ms importantes a realizar para el estudio de los lpidos
son los siguientes:
Anlisis de colesterol
Determinaciones de triglicridos
Determinaciones de fosfolpidos
Determinaciones de lipoprotenas
A- Mtodos generales de diagnstico: que pueden ser realizado en el laboratorio, general y
especializado.
Los resultados en el laboratorio general son:

1- Anlisis de colesterol y triglicridos totales: estas determinaciones se realizan por

mtodos enzimticos.
2- Anlisis del colesterol: se determina tras la precipitacin del resto d las lipoprotenas
mediante reactivos. El colesterol HDL se determina en el sobrenadante por mtodos enzimticos.
3- Deteccin de quilomicrones: puede sospecharse su presencia en el suero por el aspecto
lechoso y opalescente del mismo. En estos casos se confirma su presencia dejando el suero toda
la noche a 4C de forma que formen una capa cremosa flotante.
4- El anlisis de colesterol-LDL: puede determinarse mediante l frmula de friedlwald.
Siempre y cuando los triglicridos sean inferior a 200 mg/dl. En caso de que los triglicridos
sean mayores de 200 mg/dl puede dar errores. Ch-LDL = Ch-total TG/5 Ch-HDL.
5- Determinacin de las apolipoprotenas AI y B: esta prueba se ha incluido
recientemente debido a que existe una fuerte relacin entre la presencia entre las
apolipoprotenas y las enfermedades cardiovasculares. Se ha descubierto que un aumento de la
APO-B aumenta el riesgo de enfermedades cardiovasculares. Mientras que una APO-A I es un
factor de riesgo en la cardiopata isqumica.
Mtodos generales de diagnstico en el laboratorio especializado: en ellos el estudio de
los lpidos se realiza mediante la separacin de las diferentes fracciones de lipoprotenas. Las
diferentes fracciones obtenidas por cualquiera de los mtodos se determina colesterol,
triglicridos, fosfolpidos y protenas. Existen 3 mtodos bsicos de separacin:
1- Mtodo combinado es el recomendado para la separacin rutinaria. Tiene 2 fases:
A- Ultra-centrifugacin sin ajuste de densidad, en esta fase se separa la fraccin
VLDL en el sobrenadante.
B- Se precipitan las LDL del infranadante quedando las HDL en el sobrenadante.
2- La centrifugacin secuencial: se separan las distintas familias de lipoprotenas
mediante ultra-centrifugacin sucesivas, ajustando en el infranadante la densidad de aquella que
se quiere separar.
En las fracciones separadas se llevan a cabo las determinaciones que corresponden.
3- La ultra-centrifugacin en gradiente de densidad: la separacin de las lipoprotenas se
lleva a cabo en un nico ciclo de ultra-centrifugacin gracias a un gradiente continuo de
densidad a lo largo del tubo. Cada lipoprotena flota a la altura correspondiente a su densidad.
B- Los mtodos especficos son determinaciones muy especficas encaminadas al diagnstico de
una dislipemia concreta.
PREGUNTAS
1- Definicin bsica de lpidos
Los lpidos son molculas orgnicas insolubles en agua.
2- Valores normales de triglicridos en el organismo
Son inferiores a 160 mg/dl
3- Principales funciones de colesterol circulante
Componente estructural fundamental de las membranas celulares
Precursor de unas hormonas sexuales y de las de la corteza suprarrenal
Participa en la sntesis de los cidos biliares
4- Principal funcin (explicando) de los cidos grasos libres
Su principal funcin es la de servir como fuente inmediato de energa, para ello los cidos
grasos son degradados en las mitocondrias para obtener energa mediante un proceso que se
llama -oxidacin que en ltima instancia este proceso nos proporcionar unidades de 2 tomos
de carbono (Acetil CoA) ms energa para los distintos procesos metablicos.

5- Las LDL
Son lipoprotenas de baja densidad se originan como consecuencia de la degradacin de
las VLDL en el torrente circulatorio. Su funcin principal es la de transportar el 80% del
colesterol circulante.
6- Consecuencias de una hipertrigliceridemia
Dolor abdominal: el aumento de los rganos produce un aumento de liberacin de
enzimas del pncreas el cual puede sufrir inflamacin dando lugar a pancreatitis.
Hepatoesplenomegalia: es debido al acumulo de macrfagos repletos de triglicridos que
hacen aumentar de tamao el hgado y el bazo.
Formacin de Xantomas: son pequeos ndulos amarillos o rosados que aparecen
bruscamente por acumulo de los triglicridos en los macrfagos de la piel.
Debido al aspecto opalescente que presenta el plasma de las personas afectadas. La retina
aparece con aspecto blanquecino.
7- Consecuencias de un aumento de las HDL
Protege del desarrollo de la ateroesclerosis ya que los HDL retiran el colesterol de los
tejidos y tambin de la pared arterial.
8- Menciona las fuentes de variacin que pueden ser causa de error a la hora de
determinar en el laboratorio una dislipemia
Biolgicas: diferencias en los niveles lipdicos en funcin de sexo, edad, raza, ...
Socio-ambientales: dieta, obesidad, consumo de sustancias txicas, ejercicio fsico, ...
Manipulacin de la muestra: ayuno, anticoagulante, almacenaje, el transporte,...
Tipo clnico: tratamiento farmacolgico, embarazo y enfermedades concurrentes,...
9- Para que sirven los mtodos especficos.
Diagnstico gentico de una dislipemia.

TEMA 5
ESTUDIO GENERAL DEL METABOLISMO DE LAS PROTENAS
Son macromolculas constituidas por la polimerizacin de las unidades estructurales
bsicas denominadas aminocidos (a veces compuestos derivados de los mismos) que se unen
entre s mediante enlaces peptdicos (tipo Amida).
Dos aminocidos unidos entre s por un enlace peptdico forman un dipptido, sin son 3
seran un tripptido y as sucesivamente. Los compuestos as formados por menos de 100
aminocido se denominan pptidos (o polipptidos) cuando el nmero de aminocidos es mayor
de 100 el compuesto se denomina protena.
Aminocidos: son compuestos qumicos caracterizados por poseer un grupo funcional
amino (-NH2) y otro cido (-COOH) unidos a una cadena lateral (-R). [Si el grupo R es un
hidrgeno se habla de glicocola R = H)

De todos los aminocidos conocidos (ms de un centenar) simplemente 20 son

componentes naturales de las protenas, el resto son productos intermedios o finales del
metabolismo. Los aminocidos bsicamente se diferencian entre s, por la naturaleza de la
cadena lateral y es debido a ella que cada aminocido tenga propiedades nicas y caractersticas.
Las diferentes cadenas R se diferencian entre s en funcin de:
Su forma y tamao
La carga
Por la reactividad
Por la capacidad de formar enlaces puentes de hidrgeno (puentes de H)
De entre los 20 aminocidos naturales algunos no pueden ser sintetizados por el propio
organismo y se denomina aminocidos esenciales. Los aminocidos no esenciales pueden ser
sintetizados mediante una reaccin de transaminacin.
La eliminacin renal de los aminocidos es inapreciable porque aunque se filtre a travs
del glomrulo (por su pequeo tamao) son reabsorbidos en el tbulo proximal.
Su catabolismo (destruccin) sucede mediante transaminacin o desaminacin oxidativa
y tiene lugar en el hgado y en el msculo. El destino de la cadena hidrocarbonas (-R), es la
sntesis de glucosa mediante gluconeognesis o el ingreso en el ciclo de Krebs para la obtencin
de energa.
El grupo amino cuando no es utilizado para la transaminacin es degradado hasta
amoniaco (NH3) que en el hgado se transforma en urea y glutamina.
Algunos aminocidos son utilizados en la sntesis de gran inters biolgico (por ejemplo
hormona).
CARACTERSTICAS DE LOS AMINOCIDOS

1- Los aminocidos son compuestos anfteros ya que en funcin del pH del medio
pueden comportarse como cido (dador de protones) como bases (aceptor de protones).
2- Cada aminocido tiene su punto isoelctrico (PI) caracterstico a cuyo pH tiene un
carcter neutro, es decir, no presenta carga neta alguna. El carcter bsico de su grupo amino
(NH3+) es suficiente para hacerlo reaccionar con el grupo carboxilo (COO -) formndose un in
dipolar tambin denominado Zwitterion cuya carga total es nula. Este proceso se denomina
neutralizacin.

3- En disolucin acuosa en los aminocidos existe un equilibrio entre la forma catinica

y aninica.

Los principales aminocidos: los 20 aminocidos que forman parte de las protenas son:

ESENCIALES
FENILALANINA (PHE)
LEUCINA (LEU)
VALINA (VAL)
TRIPTOFANO (TRP)
METIONINA (MET)
LISINA (LIS)
ARGINIA (ARG)
HISTIDINA (HIS)
TREONINA (THR)
ISOLEUCINA (ILE)

NO ESENCIALES
ALANINA (ALA)
GLICOCOLA (GLY)
PROLINA (PRO)
SERINA (SER)
TIROXINA (TIR)
CISTEINA (CYS)
GLUTAMINA (GLN)
CIDO GLUTMICO (GLU)
ASPARAGINA (ASM)
CIDO ASPRTICO (ASP)

Las alteraciones de los aminocidos: son errores metablicos congnitos y se conocen como
aminocidopatas. Son debido 2 causas:
1- Debido a un dficit enzimtico:
A- Fenil-cetonuria: es un acumulo de fenilalanina y sus derivados (txicos para el
cerebro) en sangre y orina debido a un dficit de fenilalanina-hidroxilasa.
B- Son trastorno del ciclo de la urea: sera hiperamoniemia (que significa un
aumento de amoniaco) por dficit de enzimas implicados.
C- Albinismo: falta de pigmentacin en la piel debido a que la tiroxina no puede
ser transformada en melanina debido a la falta de la enzima tiroxinasa.

2- Un fallo en el transporte de aminocidos: puede ser tanto a nivel renal (falla la

reabsorcin tubular), como a nivel intestinal (falla la absorcin). La alteracin ms conocida es la
cistinuria que consiste en que alguno aminocidos al no ser reabsorbidos en el tbulo pasan a
orina, uno de ellos, la cistina puede precipitar formando clculo renales
LAS PROTENAS
La secuencia de aminocidos de una protena (estructura primaria) le confiere una
identidad propia que es responsable de la funcin biolgica que lleva a cabo. Pero esta funcin
biolgica para que se lleve a cabo las protenas deben estar dotadas de una estructura
tridimensional que puede ser secundaria, terciaria y cuaternaria.
La estructura secundaria: las cadenas d aminocidos se pliegan sobre s mismas dando
estructuras de hlice (alfa) o de lmina plegada (beta)
Estructura terciaria: las estructuras anteriores se pliegan sobre si mismas.
La estructura cuaternaria: es a consecuencia de la forma en que las distintas cadenas
polipeptdicas se unen entre s.
Las protenas son compuestos nitrogenados en los cuales entre tambin a formar parte el
carbono, el oxgeno, el hidrgeno y a veces el azufre o el yodo. Son coagulables por el calor y
por los aminocidos minerales. Son insolubles en ter y en alcohol.
Los mecanismos mediante los cuales las protenas son incorporadas y metabolizadas en el
organismo son:

Clasificacin de las protenas: las protenas se clasifican segn varios criterios:

A- Atendiendo a su composicin: pueden ser:
~ Simples: compuestas solo por aminocidos
~ Conjugadas: formadas por un componente proteico (aminocidos) y un
componente no proteico (grupo prosttico). Segn este grupo prosttico se dividen a su vez en:
o Nucleoprotenas: formadas por la asociacin con cidos
nucleicos.
o Fosfoprotenas: asociadas con fsforo.
o Cromoprotenas: tiene como grupo prosttico un colorante
(Hb)
o Glucoprotenas: unidas a un compuesto hidrocarbonado.
o Lipoprotenas: unidas a lpidos en proporcin variable.

B- Segn su disposicin espacial: se clasifican en fibrosas y globulares. Las protenas

formadas por cadenas polipeptdicas paralelas a un eje y unidas por un puente disulfuro y
de hidrgeno recibe el nombre de protenas fibrosas (colgeno).
Aquellas formadas por una ms hlices alfa enrolladas sobre s mismas sobre
una estructura compacta se denomina globulares (la mayor parte de los enzimas, de las
hormonas y de los anticuerpos).
C- Segn su funcin biolgica: se clasifican en:
~ Protena estructural: mantienen unidas las estructuras. Por ejemplo el colgeno
~ De transporte: transportan molculas o iones en el organismo. P.E.: albmina.
~ Catalizadores biolgicos: son enzimas. P.E.: catalasa, fosfato deshidrogenasa.
~ Mensajeros qumicos: hormonas como la calcetonina insulina
~ Defensa inmunolgico: son protenas que activan como anticuerpos como por
ejemplo la Ig G e Ig M.
D- Localizacin: pueden ser de 2 tipos: hsticas (tejido) y hemticas (sangre)
PROTENAS PLASMTICAS
Son las protenas presentes en el plasma. Son ms de 125 diferentes y tienen distintas
funciones en el organismo que son:
1- fuentes de nutricin para los tejidos, ejemplo albmina
2- participacin activa en el mantenimiento del equilibrio osmtico, es decir, mantiene la
adecuada distribucin hdrica en los distintos compartimentos del organismos, ejemplo albmina
3- importante funcin como amortiguadores o tampones (mantiene el equilibrio del pH)
4- importantes funciones de transporte, ejemplo albmina y frmacos
5- funciones defensivas, ejemplo gammaglobulinas
6- otras funciones:
A- factores de coagulacin (fibringeno)
B- inhibidores enzimticos
Definicin de protenas plasmticas: es la suma de las concentraciones de todas y cada una de
las protenas presentes en el plasma. Su valor normal en el organismo es de 7-8 gr/dl.
El aumento de la cifra de protenas totales suele deberse a una disminucin relacionada
con el volumen plasmtico debido a: hipovolemia (disminucin del lquido circulante) y
deshidratacin (lo que vara no es la cantidad de protenas sino la proporcin entre estas y el
nivel hdrico del organismo).
La disminucin de la cantidad de protenas totales tiene tambin varias causas:
1- el aumento del volumen plasmtico a consecuencia de una retencin excesiva de
lquidos.
2- la disminucin de sntesis de albmina por ejemplo en desnutricin o alteraciones
hepticas
3- la disminucin en la produccin (hipogammaglobulinemias) de las gammaglobulinas
o aumento en las prdidas de la fraccin de las globulinas, por ejemplo: quemaduras
Clasificacin de protenas plasmticas:
~ Pre-albmina:
Tiene poca utilidad a la hora de valorar el estado nutricional.
Es reactante en fase aguda negativa.
Es transportadora de vitamina A.
Disminuyen su valor en desnutricin proteica y hepatopata.
~ Albmina:
Es esencial en los mecanismos de nutricin del organismo
Es fcilmente metabolizable
Tiene todos los aminocidos esenciales

Es la principal responsable de la presin osmtica (retiene agua)

Interviene en la regulacin del equilibrio cido-base, es decir, acta como tampn
Es transportadora de mltiples sustancias (frmacos)
Se une a los lpidos formando lipoprotenas
Sus valores normales son 35-52 gr/dl.
Su vida media es de 15 das
Las causas de su aumento son: deshidratacin lo que produce volemia
Las causas de su disminucin son: desnutricin, hepatopatas, enfermedades renales,
neoplasias e enfermedades crnicas.
~ Globulinas:
Las globulinas son un grupo muy heterogneo constituido por protenas y protenas
conjugadas. (Con hidratos de carbono seran glucoprotenas y con lpidos, lipoprotenas).
Mediante electroforesis se separan bsicamente en 3 grupos: globulinas, globulinas y
globulinas.
globulinas:
Son un 15% del total.
Su concentracin normal es de 03-07 gr/dl.
Tienden a aumentar cuando hay dao hstico activo.
Su hallazgo en plasma es inespecfico ya que aparece en traumatismos, procesos
malignos, inflamatorios,...
Se divide en 2 fracciones:

1:

1 anti-tripsina:
Es la sub-fraccin mayoritaria.
Su funcin es que inhibe la tripsina
Est aumentado en reacciones inflamatorias agudas
Est disminuido en enfisema pulmonar y en cirrosis heptica infantil.
1 lipoprotenas:
Transportan colesterol y vitaminas liposolubles
Est aumentado en enfermedades hepticas
Transcobalamina:
Transportan vitamina B12
Est disminuida en la mala nutricin
Protrombina:
Es un factor de coagulacin ya que es precursor de la trombina
Est disminuida en hepatopatas y en tratamientos con dicumarnicos

2:
Ceruloplasmina:
Es transportadora de cobre
Est aumentada en la gestin, es reactante en fase aguda
Haptoglobina:
Transporta la hemoglobina
Est aumentada en procesos inflamatorios agudos y crnicos, es reactante en fase
aguda
Est disminuida en hepatopatas y en algunas anemias
2 lipoprotenas:
Son transportadoras de lpidos
Estn aumentados en hiperlipemias
Est disminuido en insuficiencia heptica

Eritropoyetina
Intervienen en la formacin de eritrocitos
Est aumentada en ciertos tipos de anemias
Est disminuida en nefropatas (rin), enfermedades autoinmunes e insuficiencia
renal
Alfafetoprotena:
Es la protena principal del feto
Est aumentada en el embarazo y en neoplasias hepticas
globulinas:
Representan un 12% de las globulinas totales.
Su concentracin normal es de 04-08 gr/dl.
Esta fraccin no suele aparecer alterada.
Las globulinas se sub-dividen en:
Transferrina:
Es transportadora de hierro.
Est aumentada en las anemias ferropnicas.
Est disminuida en hepatopatas y neoplasias
-lipoprotenas:
Es transportadora de colesterol, fosfolpidos y hormonas
Est aumentado en el sndrome nefrtico e hiperlipemias
Est disminuido en casos de nutricin.
C3 y C4:
Son componente del sistema del complemento
Est aumentado en procesos infecciosos agudos e infarto de miocardio
Est disminuido en la anemia hemoltica autoinmune y en el curso eritematoso.
Hemopexina:
Transporta el grupo hemo de la hemoglobina
Es reactante en fase aguda por tanto est aumentada en inflamaciones agudas.
Est disminuida en hepatopatas.
globulinas:
Se divide en:
Ig G, Ig A, Ig M, Ig D e Ig E (anticuerpos):
Constituyen la mayor parte de las inmunoglobulinas.
Su composicin qumica es semejante.
Su movimiento electrofortico es variable, por lo tanto, forman una banda ancha
en el proteinograma.
Son anticuerpos que constituyen la inmunidad humoral
Los valores normales son de 06-11 gr/dl.
Estn aumentados en procesos inflamatorios crnicos y en enfermedades
autoinmunes
Estn disminuidos en casos de hipogammaglobulinemia en edad avanzada, en
inmuno-supresin.
Protena C reactiva:
Es reactante de fase aguda, es altamente sensible
Est aumentada en inflamaciones agudas y en necrosis hsticas (muerte de
tejidos).
~ Fibringeno:
La concentracin normal es de 03 gr/dl.
En electroforesis migra entre las fracciones b y c.
Es reactante de fase aguda.

La funcin ms importante es la coagulacin, es precursor de la fibrina

Est aumentada en el embarazo y durante el uso de anovulatorios
Est disminuida en hepatopatas y coagulopatas por consumo.
DETERMINACIN DE LAS FRACCIONES PROTEICAS
Aparte de la determinacin de protenas totales es importante clnicamente la
determinacin cualitativa y cuantitativa de los diferentes tipos proteicos de plasma, es decir, la
cuantificacin de las fracciones proteicas. Se usan los siguientes mtodos: electroforesis,
inmuno-electroforesis o inmuno-difusin radial.
Electroforesis: es una tcnica fsico-qumica relativamente sencilla que va a permitir
separar y posteriormente cuantificar las fracciones ms importantes de protenas presentes en el
plasma. Obteniendo as lo que se conoce como patrn electrofortico o proteinograma. Mediante
una electroforesis normal es posible separar aquellas fracciones de protenas plasmticas cuyo
peso molecular oscila entre 66.000-700.000. Cuando el soporte usado para llevar a cabo el
desarrollo electrofortico es acetato de celulosa las principales fracciones proteicas son: la
fraccin albmina y las fracciones , , globulinas y globulinas.

Cada fraccin est formado por un conjunto de protenas con un movimiento

electrofortico semejante aunque muy diferente en cuanto a estructuras y funciones.
El fibringeno puede aparecer cuando la muestra usada es plasma. En cambio no
aparecer en el suero (porque se consume en el proceso de coagulacin).
Inmuno-electroforesis: tiene mayores niveles de sensibilidad y especificidad consiste en
combinar la separacin electrofortica con la provocacin de reacciones inmunolgicas entre las
protenas y anticuerpos especficos frente a ellas. Las diferentes fracciones proteicas se detectan
mediante la aparicin de arcos de precipitacin.

Tiene gran utilidad ya que permite detectar gran nmero de fracciones proteicas y adems
permiten detectar inmunoglobulinas anormales
Inmuno-difusin radial: es una tcnica nicamente de tipo inmunolgico. Consiste en
colocar el suero a analizar en un orificio (pocillo) practicado en una palca de agar impregnado de
anticuerpos dirigidos especficamente contra la protena que se desea valorar.

La reaccin protena-anticuerpo forma un anillo de precipitacin cuyo dimetro es

proporcional a la cantidad de protena presente en la muestra que se pretende valorar.
La tcnica se puede cuantificar mediante el uso de patrones.
ALTERACIONES DE LAS PROTENAS PLASMTICAS
Por la gran diversidad de funciones de las protenas plasmticas son muchas las
alteraciones que pueden aparecer. Se clasifican en:
Disproteinemias: son alteraciones en las fracciones obtenidas tras una electroforesis.
Paraproteinemias: presencia en el plasma de alguna inmunoglobulina anormal y/o
alguno de su fragmentos.
Crioglobulinemias: es la circulacin en el plasma de inmunoglobulinas que precipitan al
descender la temperatura.
Alteraciones de alguna banda: son defectos aislados de alguna fraccin.
Alteraciones de la proteinemia total: son alteraciones en la cantidad total de las
protenas totales.
1- Disproteinemias:
A- Hipo-albuminemia: es la disminucin de la concentracin de la albmina.
Puede ser debido a:
~ Una sntesis insuficiente, por ejemplo mal nutricin, insuficiencia heptica.
~ Una eliminacin y degradacin excesivas. Por ejemplo: sndrome nefrtico,
alteraciones intestinales, quemaduras extensas,...
B- Hipogammaglobulinemia: es una disminucin de las globulinas pro dficit en
el sistema inmunitario.
C- Hiper-globulinemia:
~ Un aumento de las globulinas. Por ejemplo: inflamaciones aguda , tumores,...
~ Un aumento de las a y b globulinas. Por ejemplo: sndrome nefrtico
~ Aumento de las globulinas. Por ejemplo: inflamaciones y enfermedades del
colgeno.
2- Paraproteinemias gammapatas monoclonales: se consideran inmunoglobulinas
anormales. Son productos de una actividad espontnea (sin estmulo antignico previo) y
excesiva de un clon proliferante d linfocitos B. Se observara en:
A- Mieloma mltiple
B- Leucemias y linfomas

C- Lesiones renales
D- Sndrome de hiper-viscosidad de la sangre.
3- Crioglobulinemias: las crioglobulinas son un grupo de inmunoglobulinas que
precipitan al disminuir la temperatura pueden dar lugar a trastornos circulatorios en las regiones
distales de las extremidades cuando se exponen al fro o tambin inflamaciones de los vasos
(vasculitis).
4- Alteraciones de alguna banda: reflejan defectos de los protoplasmticos. Son debidas a
trastornos de la sntesis proteico tanto de tipo hereditario como adquirido:
5- Alteracin de la proteinemia total:
A- Hiper-proteinemia autntica: no a consecuencia de la hemo concentracin) es
siempre debida a un aumento de las inmunoglobulinas.
B- Hipo-proteinemia es debida a la disminucin de las 2 fracciones
electroforticas ms importantes y son la albmina y las globulinas.
MTODOS DE DETERMINACIN DE LAS PROTENAS PLASMTICAS
Existen gran variedad de mtodos. Los ms usados son:
Los que determinan la cantidad de protenas totales
Los que determinan alguna de las fracciones proteicas ms importantes en el plasma
Podemos tener 2 tipos de muestras: sangre y orina
Sangre: puede usarse suero, plasma (dar resultados mayores que en el suero por el
fibringeno). La sensibilidad de las protenas en suero y plasma es de:
~ Una semana si la conservacin de la muestra esa temperatura ambiente
~ Un mes si se conserva la muestra refrigerada
~ Dos meses si se conserva congelada
* Determinaciones de protenas totales en sangre:
1- Kjeldahl
2- Biuret
3- Mtodos refractomtricos
4- Otros
A- Absorcin en el ultravioleta
B- Lowry
* Albmina: mtodo de fijacin de colorantes.
Determinaciones de protenas totales en sangre:
1- Kjeldahl:
Determinar el nitrgeno proteico.
Es poco usado porque es lento y complejo.
2- Biuret:
Es el mtodo de referencia.
Es colorimtrico tiene gran especificidad y precisin.
Tiene una gran capacidad para los resultados y pocas interferencias.
Permite su automatizacin.
Consiste en la formacin de un compuesto coloreado en presencia de sales de
cobre y en medio bsico.
3- Mtodo refractomtricos:
Son bastantes usados ya que tienen bastante precisin y exactitud y elevada
rapidez.
El inconveniente es que est sujeto a interferencias. Por ejemplo muestras
hemolizadas y lipmicas.
Consiste en la determinacin del ndice de refraccin de la muestra el cual vara
en funcin de la variedad de protenas totales.

4- Otros:
A- Absorcin en el ultravioleta:
Consiste en que al enlace peptdico las protenas presentan absorcin en el
ultravioleta que se puede medir a 260 nanmetros.
Es un mtodo muy preciso, muy sensible y muy exacto.
B- El mtodo Lowry:
Es el ms usado en orina.
Tiene gran sensibilidad pero muchas interferencias.
Consiste en la determinacin del color producido a consecuencia de la
adicin de reactivos en medio bsico.
Determinacin de la albmina: son mtodos de fijacin de colorantes que permiten determinar
slo albmina. Tiene gran importancia clnica. Consiste en la fijacin ms o menos especfica de
ciertos colorantes concretamente el verde de bromocresol, nicamente o la fraccin de la
albmina.
Orina: la proteinuria es un ndice del estado del rin concretamente de la lesin renal.
La determinacin de protenas en orina es ms compleja que en sangre y la sensibilidad del
mtodo depende del tipo de protenas presentes en la muestra y de la cantidad de sustancias no
proteicas interferentes. Existen 3 mtodos de determinacin de protenas totales de orina:
~ Biuret:
Es colorimtrica.
Est basado en la formacin de un compuesto coloreado en presencia de sales de
cobre y medio bsico.
Tiene escasa sensibilidad y bastantes interferencias.
~ Mtodos turbidimtricos:
El ms usado es el mtodo de tricloroactico.
Es muy usado por su gran exactitud y precisin.
Consiste en determinar espectroscpicamente la turbidez debida a las presencias
de protenas.
~ Mtodos que fijan colorantes:
El colorante ms usado es el azul brillante de coomasie (menos usados es el rojo
de ponceau)
Es un mtodo muy usado por su gran rapidez y consiste en que el colorante se une
+
al grupo NH3 de las protenas.
PREGUNTAS
1- Qu es la fenil-cetonuria?
Es un dficit enzimtico de las alteraciones de los aminocidos. Es un acumulo de
fenilalanina y sus derivados en sangre y orina debido a un dficit de fenilalanina-hidroxilasa.
2- Qu son las protenas conjugadas? Tipos.
Son protenas formadas por un componente proteico (aminocidos) y un componente no
proteico (grupo prosttico). Segn este grupo prosttico pueden ser: nucleoprotenas,
fosfoprotenas, cromoprotenas, glucoprotenas y lipoprotenas.
3- Funciones de las protenas plasmticas
1- fuentes de nutricin para los tejidos, ejemplo albmina
2- participacin activa en el mantenimiento del equilibrio osmtico, es decir, mantiene la
adecuada distribucin hdrica en los distintos compartimentos del organismos, ejemplo albmina

3- importante funcin como amortiguadores o tampones (mantiene el equilibrio del pH)

4- importantes funciones de transporte, ejemplo albmina y frmacos
5- funciones defensivas, ejemplo gammaglobulinas
6- otras funciones: factores de coagulacin (fibringeno) e inhibidores enzimticos
4- Tres funciones de la albmina
Es la principal responsable de la presin osmtica (retiene agua)
Interviene en la regulacin del equilibrio cido-base, es decir, acta como tampn
Es transportadora de mltiples sustancias (frmacos)
5- Clasificacin de las -globinas (slo nombrar)
Transferrina: transportadora de hierro
-lipoprotenas: transportadora de colesterol, fosfolpidos y hormonas
C3 y C4: componentes del sistema de complemento
Hemopexina: transporta el grupo hemo de la hemoglobina
6- Proteinograma normal.

PREGUNTAS DE REPASO DE LOS TEMAS 3, 4 Y 5.

1- Definicin de hiperglucemia y de hipoglucemia
Hiperglucemia: es una elevacin anormal de la concentracin de glucosa en sangre que
conduce a un sndrome clnico denominado diabetes
Hipoglucemia: estado fsico-patolgico de etiologa muy variada y que consiste en la
existencia de glucosa plasmtica es menor a 45-50 mg/dl acompaada o no de signos clnicos. Es
una consecuencia de un desequilibrio entre la glucosa que llega al torrente sanguneo y la que
sale del mismo
2- Cmo afecta la diabetes al metabolismo de los lpidos?
Aumenta la liplisis lo que produce gran cantidad de cidos grasos que se usan como
fuente de energa y en el hgado se transforman en cuerpos cetnicos. Estos cuerpos cetnicos
pasan a la sangre, hiper-cetonemia y se eliminan va urinaria dando cetonuria.
3- Interpretacin de los resultados de la PTOG
Glucosuria renal: existe glucosa en orina y la glucemia es normal. El umbral renal est
alterado. Aparece glucosuria intensa a partir de la primera media hora, pero no existe cetonuria.
Retraso en el almacenamiento de G: aparece glucosuria no intensa y no existe cetonuria
Diabetes leve: existe glucosuria, pero no es intensa y tampoco existe cetonuria.
Diabetes grave: existe glucosuria muy intensa casi desde el principio y existe cetonuria
moderada hora y media despus de la ingesta.
4-Catabolismo proteico
Sucede mediante transaminacin o desaminacin oxidativa y tiene lugar en el hgado y en
el msculo. El destino de la cadena hidrocarbona (-R), es la sntesis de glucosa mediante
gluconeognesis o el ingreso en el ciclo de Krebs para la obtencin de energa. El grupo amino
cuando no es utilizado para la transaminacin es degradado hasta amoniaco (NH3) que en el
hgado se transforma en urea y glutamina.
5- En qu consiste el mtodo Biuret?
Es el mtodo de referencia. Es colorimtrico. Consiste en la formacin de un compuesto
coloreado en presencia de sales de cobre y en medio bsico.
6- Principal funcin de los triglicridos
Su principal funcin es la de transportar la energa hasta los rganos de depsitos
7- Definicin de lipoprotenas
Son macromolculas que poseen una estructura interna compuesta por triglicridos y
steres de alcohol. Son protenas transportadoras especficas de molculas lipdicas, entre las que
destacan aquellas partculas destinadas al transporte del colesterol, triglicridos y fosfolpidos
que son los lpidos mayoritarios del organismo.
8- Valores normales de los cidos grasos libres en sangre
Los valores normales en plasma son entre 10-20 mg/dl.
9- Quilomicrones
Son partculas grandes que aparecen en el plasma tras la ingestin de grasas y son
sintetizadas en las clulas intestinales a partir de: triglicridos, colesterol y fosfolpidos. Su vida
en sangre es muy corta. Su principal funcin es transportar los triglicridos exgenos .
10- Qu es la ateroesclerosis?
Es la consecuencia ms importante del aumento del colesterol. La lesin ms
caracterstica es la formacin de placas de ateroma (estas placas pueden estar formadas por
lpidos, monocitos, fibras musculares y tejido conjuntivo).

TEMA 6
PRODUCTOS FINALES DEL METABOLISMO
LA UREA
Constituye el principal compuesto de excrecin del amoniaco y que se forma en el
transcurso de metabolismo de aminocidos y protenas (producto final del catabolismo proteico).
Es sintetizada en el hgado a partir de aminocidos y de all pasa a la sangre, finalmente se
elimina a nivel renal.
La expresin nitrgeno-ureico procede del echo de que tradicionalmente la urea se ha
venido determinando a partir de nitrgeno contenido en el amoniaco, el cual se forma por la
accin de una enzima que es la ureasa sobre la propia urea de la sangre, aunque es un trmino
similar no es equivalente al de urea y se puede establecer una correlacin entre ambos mediante
la siguiente expresin: UREA (mg) = nitrgeno-ureico (mg) X 214.
La urea es eliminada por va renal siendo filtrada fcilmente a nivel glomerular. Una vez
filtrada se reabsorbe en un 40% en los tbulos proximales.
La concentracin de urea en el filtrado glomerular es igual a la del plasma (aunque
existen pequeas variaciones en funcin del sexo y de la edad los valores normales oscilan entre
107-365 mg/dl) y sobre el nivel plasmtico de urea influyen otros factores:
1- Grado de ingesta proteica
2- Efectividad de la funcin heptica
3- Nivel de catabolismo proteico endgeno
El aumento de la concentracin de urea en sangre est estrechamente relacionado con
alteraciones en su eliminacin (la concentracin de urea en sangre es la uremia) y por tanto es un
claro indicador de insuficiencia renal aunque no tan claro como la creatinina, la cual detecta esta
situacin muy rpidamente. Tiene adems una gran utilidad como mtodo sencillo de una
insuficiencia renal ya instaurada.
Dicho aumento puede ser debido a causas extra-renales o nefropatas. Cuando la
funcionalidad renal est asegurada el origen del aumento de urea en sangre puede ser debido a:
1- alteracin heptica
2- hemorragia digestiva
3- aumento en la formacin de urea (a consecuencia de un catabolismo aumentado o bien
a un exceso proteico en la dieta).
Si descartamos la posibilidad extra-renal de la uremia la causa renal ms frecuente es la
insuficiencia renal la cual puede ser aguda crnica. La insuficiencia renal aguda puede estar
causada por necrosis tubular, enfermedad renal (pelo-nefritis aguda), neoplasias, enfermedades
generales (diabetes lesin del rin) y obstruccin de las vas urinarias por clculos renales,
etc. La insuficiencia renal crnica puede ser consecuencia de glomrulo nefritis, hipertensin
arterial, diabetes y neoplasias.
La determinacin de urea: como la urea es degradada rpidamente por la accin
bacteriana las muestras tomadas para proceder a su determinacin deben ser refrigeradas
(aproximadamente 4C) hasta su procesamiento. Dicha determinacin puede ser realizada tanto
en sangre como en orina por el mtodo Berthelot-Searcy. Este es un mtodo enzimtico
colorimtrico, basado en la siguiente reaccin:
UREA + H2O CO2 + 2NH3
2NH3 + SALICILATO + HIPOCLORITO DERIVADO INDOFENLICO (COLOR)
La intensidad del color es proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra
problema.

CIDO RICO
Es el producto final de la degradacin de las purina que son la adenina, guanina e hipoxantina, procedentes de catabolismo de los cidos nucleicos (ADN y ARN) por accin de la
enzima xantin-oxidasa.
Las purinas pueden tener una doble procedencia por un lado exgeno (a travs del
consumo de protenas) y por otro lado endgeno (la ms importante). Las purinas al combinarse
con un azcar da lugar a los nuclesidos que al unirse a una ms molculas de fosfato forman
los nucletidos como el ADN, el ARN, el ATP, etc estn formados por nucletidos.
En el organismo existen alrededor de 1.200 mg de cido rico de los cuales son
eliminados diariamente unos 700 mg. El 60% posteriormente es reabsorbido en los tbulos
renales al 90% del total. El resto es filtrado con la bilis (va heptica) y los jugos pancreticos y
gstricos.
La determinacin de cido rico: se lleva a cabo tanto en sangre (uricemia) como en
orina (uricuria) y los trastornos de su metabolismo se van a manifestar con hiperuricemia o
hipouricemia. Los trastornos del metabolismo de cido rico se expresan en una alteracin por
exceso o por defecto de los niveles sricos de cido rico. Los valores normales en sangre son
entre 36-77 mg/dl para el hombre siendo para la mujer un 20% ms bajos.
Hiperuricemia: es el aumento de los niveles sricos de cido rico y puede tener un
doble origen:
A- Hiperuricemia metablica: las causas pueden ser:
~ Una dieta rica en purinas: cualquier dieta rica en protenas de origen animal
sobre todo vsceras que aportan ncleos celulares). Es una fuente de cido rico de escasa
importancia.
~ Aumento de la lisis celular: as el cido rico que procede del catabolismo de los
nucletidos aumenta si el nmero de clulas desintegradas aumenta.
~ Aumento del consumo de ATP
~ Ciertos trastornos metablicos hereditarios del metabolismo de las purinas
B- Hiperuricemia renal: las causas pueden ser:
~ Insuficiencia renal: disminuye la cantidad de cido rico filtrado en los
glomrulos.
~ Niveles aumentados de otros metabolitos como puede ser el cido lctico y los
cuerpos cetnicos. Los cuales inhiben competitivamente la secrecin tubular.
Las consecuencias de la hiperuricemia son:
1- El depsito en forma de uratos que provocan una reaccin inflamatoria en diversas
localizaciones:
~ Si es en las partes blandas de las articulaciones da un cuadro de gota aguda.
~ Si se da en el cartlago articular y hueso subyacente da un cuadro de gota crnic
~ Otras localizaciones que pueden tener se denomina TOFOS. Pueden ser
cartlago de la oreja, tendones bajo la piel.
2- Insuficiencia renal aguda por obstruccin de los tbulos.
3- Clculos de las vas urinarias.
Hipouricemia: pueden ser debido a:
1- Disminucin de la sntesis de cido rico debido a una deficiencia en xantn-oxidasa.
Esto constituye un rato trastorno hereditario en el que hay un dficit de la enzima encargada del
paso de hipo-xantina a xantina. Si esto no ocurre hay dficit de cido rico

2- Aumento de la eliminacin renal debido a: secrecin inadecuada de la hormona antidiurtico (ADH). Tambin puede ser debido a una lesin del tbulo proximal de la nefrona lo que
provoca que no haya reabsorcin.
3- Forma esencial :debido a un fallo de la reabsorcin tubular o una excesiva secrecin a
nivel renal.
NOTA importante: cuando la sntesis de cido rico es insuficiente disminuye de forma
paralelo la uricemia y la uricuria. Cuando la causa de la hipouricemia es un aumento de la
eliminacin renal la uricuria es desproporcionadamente elevada con respecto a la uricemia.
Uno de los mtodos mas utilizados par ala determinacin de cido rico tanto en sangre
como en orina es el enzimtico colorimtrico (por ejemplo uricasa-PAP). Este compuesto e
convertido en una sustancia coloreada cuya intensidad de color es proporcional a la
concentracin de cido rico en la muestra problema.
AMONIACO
Es uno de los productos finales por la accin de las bacterias sobre las protenas y por la
hidrlisis de la glutamina (protena) en el rin. Normalmente el hgado elimina la mayor parte
del amoniaco en sangre, que fluye por la vena porta y la convierte en urea. Una elevacin
considerable de los niveles de amoniaco en sangre podra afectar seriamente al equilibrio cidobase y a la funcin cerebral, para evitar, este compuesto es transformarlo a nivel heptico en urea
y posteriormente es eliminado por el rin.
La determinacin de amoniaco en laboratorio es til para:
1- Evaluar el metabolismo heptico
2- Determinar la evolucin de una hepatopata grave.
3- Valorar el grado de respuesta al tratamiento instaurado
Se presentan cifras aumentadas de amoniaco en las siguientes situaciones:
A- Una enfermedad heptica
B- Un coma heptico (causado por hepatitis grave o cirrosis).
C- Insuficiencia cardiaca grave.
A la hora de determinar este compuesto en el laboratorio es importante saber que:
1- El ejercicio previo al anlisis puede causar un aumento de la concentracin de
amoniaco.
2- Los niveles de amoniaco varan con la ingestin de protenas.
3- Hay muchos frmacos que pueden afectar a estos niveles en sangre.
CREATINA
Es un compuesto nitrogenado no proteico cuya sntesis tiene lugar en los riones,
intestino delgado, pncreas e hgado. A partir de los aminocidos: metionina, arginina y
glicocola.
Tras su sntesis la creatina pasa inicialmente a la sangre y posteriormente va a ir hacia las
clulas del tejido muscular. El contenido de creatina es proporcional a la masa muscular.
Este compuesto es importante para metabolismo muscular porque constituye un
importante mecanismo de almacenamiento de fosfato de alta energa mediante la formacin de
fosfo-creatina. Mediante la hidrlisis de fosfo-creatina se obtiene :creatinina y fosfato energtico,
el cual puede aportar energa directamente o a travs de su acoplamiento con una molcula de
ADP para formar ATP. Del total de creatina presente en el organismo la mayor parte se encuentra
a nivel muscular en forma de fosfo-creatina. Una pequea parte se encuentra en el plasma y en
los glbulos rojos (2%).
CREATININA

Es un producto final del metabolismo muscular. Se forma a partir de la creatina mediante

una reaccin espontnea e irreversible y su formacin tiene relacin directa con la masa
muscular. Tras pasar a la sangre se elimina en su mayora va renal mediante filtrado glomerular
y solo una pequea cantidad se elimina por las heces.
Su nivel plasmtico es bastante constante de manera que no se modifica ni con el
ejercicio ni con las variaciones del catabolismo. Adems es mucho menos dependiente del aporte
diettico de la urea (la cantidad de creatinina ingerida con la dieta (exgeno) es insignificante).
La produccin endgena de creatinina se mantendr constante tanto tiempo como la masa
muscular se mantenga constante.
En general todo incremente del nivel srico de este compuesto indica insuficiencia renal y
este aumento es paralelo aunque ms lento al de la urea.
Todas las causas de lesin renal, pre-renal, sistmicas o vasculares con afectacin del
rin u obstructivas, pueden ser responsables de la elevacin de la creatinina ya que evitan su
excrecin.
La determinacin de la eliminacin de la creatinina es una medicin muy especfica y
muy til para determinar la funcin renal, especialmente la filtracin glomerular. En realidad lo
que se mide es la velocidad con lo que la creatinina es depurada o aclarada de la sangre por el
rin.
Se define a aclaracin de una sustancia como el volumen imaginario en ml/minutos
de plasma del cual dicha sustancia debe ser extrada por completo par que el rin excrete es
a cantidad en 1 minuto.
DETERMINACIN ANALTICA DE CREATINA Y CREATININA
Una gran parte de los mtodos analticos utilizados para la determinacin de creatina y
creatinina estn basadas en la reaccin de Jaffe en la cual a partir de la creatinina presente en al
muestra analizada se obtiene un compuesto coloreado que puede ser cuantificado
fotomtricamente.
Aunque es un mtodo de gran sencillez presenta como inconvenientes:
1- Estar sujeto a gran cantidad de interferencias (glucosa, protenas, y otros cromgenos
no derivados de la creatinina).
2- La reaccin es muy sensible a la temperatura y variaciones del pH destinadas a una
mejora en la sensibilidad y especificidad del ensayo para la creatinina. Adoptando esta reaccin
a un mtodo cintico de determinar (tiempos) se consigue una gran especificidad ya que la
creatinina reacciona con mayor rapidez que los posibles cromgenos interferentes presentes en la
muestra.
El incremento de color detectado al poco tiempo de iniciarse la reaccin ser debido
nicamente a la concentracin de creatinina presente y por tanto no valorar las interferencias
presentes.
Puesto que los eritrocitos poseen cantidades considerables de cromgeno no derivados de
la creatinina, es preferible utilizar como muestra para su determinacin en plasma o suero
siempre que no estn hemolizados en lugar de sangre total.
Por su parte la creatina se determina previa conversin en creatinina, APRA lo cual se
procede acidificando y calentando la muestra problema.

TEMA 7
ESTUDIO DEL EQUILIBRIO HIDROELCTRICO
INTRODUCCIN
El agua es el componente ms importante del cuerpo humano. Constituye entre el 60-70%
del peso corporal total, en funcin de factores tan diversos como el sexo, la edad y la cantidad de
grasa presente en el organismo del individuo. En condiciones normales el total de agua en el
organismo se mantiene bastante constante debido a un ajuste entre ingestin y eliminacin. As:
Ingestin (diaria): 1.000 ml que proceden de los lquidos ingeridos
800 ml que estn contenidos en los alimentos slidos.
400 ml que se producen en diferentes reacciones metablicas.
2.200 ml
Eliminacin (diaria):
1.000 ml que perdemos a travs de la piel y de la respiracin
1000 ml con la orina
200 ml con las heces
2.200 ml
El agua corporal total se distribuye equilibradamente en distintos compartimentos. Son
bsicamente 2: el intracelular y el extracelular. Separados entre s por una membrana
semipermeable que es la membrana celular.

El intracelular es el ms grande con un 40% del peso corporal total y presenta neutralidad
elctrica (las sustancias disueltas con cargas negativas es igual a las sustancias disueltas con
carga positivas).
El extracelular supone slo el 20% y se encuentra rodeando a las clulas,
proporcionndoles un ambiente externo constante. Posee tambin neutralidad elctrica y a su vez
est formado por 3 componentes principales:
1- El plasma: es la fraccin de sangre del organismo libre de clulas. Ocupa el espacio
intracelular y posee un elevado contenido en protenas.
2- Lquido intersticial: est localizado entre las membranas de las clulas y la pared de
los vaso. Supone aproximadamente el 15% del peso corporal total (en funcin de la edad y del
contenido en grasa del organismo). Transporta las sustancias entre las clulas y el plasma

sanguneo(es un compartimento amortiguador entre el plasma y el lquido intracelular) tiene una

concentracin escasa de protenas.
3- El lquido trascelular: representa el 1% del peso corporal total aunque en diversas
situaciones patolgicas se puede incrementar de manera importante. Est formado
principalmente por secreciones digestivas, lquidos: intraocular, cfalo-raqudeo, pleural,
pericrdico, peritoneal, seminal, xenobial (articulaciones) y lquido sinovial.
El intercambio de lquido entre plasma y lquido intersticial se produce a travs de las
paredes de los vasos capilares, e influyen en el volumen total de lquido extracelular y depende
principalmente de los siguientes factores:
1- La presin hidrosttica de la sangre en los capilares (mayor en el extremo arteriolar
que en el venoso).
2- La permeabilidad capilar: es la rapidez por la cual una sustancia disuelta atraviesa una
membrana. Las paredes del endotelio capilar actan como una membrana semipermeable.
Permitiendo el paso del agua y de soluciones difusibles, pero no de compuestos de gran peso
molecular (como las protenas)
3- La diferencia de presin onctica entre el plasma y el lquido intersticial (debida
bsicamente a la protena plasmtica).
NOTA: la presin onctica es la presin osmtica de las sustancias coloides. Qu es
una solucin coloide? Es un estado de subdivisin de la materia en que las partculas
individuales son de tamao sub-microscpico y consiste en molculas pequeas. Estas
partculas representan en su conjunto una fase dispersa ms menos uniformemente distribuido
en un medio de dispersin.
La presin osmtica es el exceso de presin que se debe aplicar a una solucin para
impedir que penetre en ella el disolvente, cuando este ltimo se halla separado de la solucin
por una membrana impermeable.
4- EL drenaje linftico: (el drenaje de lquido intersticial ser de gran importancia
cuando existan trastornos del equilibrio hdrico entre este y el plasma).
NOTA: El sistema linftico es el sistema conductor de la linfa constituido en el hombre
por los ganglios y los vasos linfticos, adems de formaciones linfoides diversas como el timo
(es un rgano del cual no est muy clara su funcin, est situado detrs del esternn, entre
ambos pulmones, y delante del corazn, se relaciona con el sistema inmunolgico), el bazo (se
ocupa de la formacin de linfocitos y monocitos guardando relacin con la inmunidad adems
posee afinidad selectiva por determinadas bacterias fijan las toxinas y producen los
anticuerpos). Todos los rganos que reciben vasos sanguneos poseen vasos linfticos porque
son sistemas paralelos.
Por su parte los sistemas respiratorios y renal regulan la composicin del fluido
extracelular que a su vez influye en gran medida en la composicin del lquido intracelular.
Dicha composicin debe mantenerse dentro de unos lmites ajustados. Con el fin de que los
procesos metablicos intracelulares alcancen la mxima eficacia.
EQUILIBRIO HIDROELCTRICO
Inmersas en los diferentes compartimentos corporales, estn presentes, una gran cantidad
de sustancias. En general la distribucin de lquidos en los diferentes compartimentos dependen
sobre todo de la cantidad y concentracin de esas sustancias, tanto de las que pueden difundir
(iones) como las que no pueden hacerlo. Un in es un tomo o grupo de tomos que ha ganado o
perdido 1 varios electrones con lo que adquieren 1 varias cargas elctricas que pueden ser
ms menos. El in cargado positivamente se denomina catin y el in cargado negativamente
es un anin.
De todas las sustancias disueltas, los iones libres que existen en los lquidos corporales,
(electrolitos) contribuyen de forma decisiva al mantenimiento de la composicin del medio

interno (homeostasis : es un trmino que expresa la tendencia de los organismos a mantener en

equilibrio su masa anatmica, composicin y metabolismo, y tambin sus niveles funcionales
mediante el empleo de mecanismos especiales de regulacin), en aspectos tan importantes como
la osmolaridad, el estado de hidratacin y el pH, de manera que:
1- Los iones y el agua del organismo estn en continuo intercambio con el exterior, y
aunque no estn distribuidos uniformemente se mantiene en un equilibrio fundamental para la
vida
2- Existe una igualdad entre el total de aniones y cationes en los compartimentos lquidos
corporales. En condiciones normales existe un estado de neutralidad elctrica de manera que
todo aumento de un determinado anin va acompaado de la disminucin de otro o de un
aumento de uno ms aniones.
Los principales electrolitos disueltos en el organismo son:
Cationes
Aniones

Ca+2
Cl-

Mg+2
Na+
HCO 3 (bicarbonato) HPO-3 (Bifosfato)

K+

Aunque la naturaleza de las sustancias disueltas (iones-molculas) es diferente para cada

compartimiento, en ausencia de actividad funcional la presin osmtica es uniforme en todos sus
lquidos corporales.
Cuando localmente en alguna zona del organismo se presenta actividad (por ejemplo: un
determinado rganos) aparece variaciones que se denomina gradientes de presin osmtica que
desaparece cuando dicha actividad cesa. En general una alteracin en la carga de solutos o en la
cantidad de agua hace que esta difunda de uno u otro compartimiento de forma proporcional al
tamao del mismo., hasta equilibrar las fuerzas osmticas.
El mantenimiento del equilibrio hidroelctrico depende sobre todo del equilibrio entere el
ingreso y prdida., agua y electrolitos ingresan normalmente en el organismo con la bebida y la
comida que son excretadas con la orina, las heces, exudados y el aire espirado.
Las alteraciones del equilibrio hidroelctrico se presenta en clnica frecuentemente como
resultados de un complicacin de una enfermedad de base. No debe por ello considerarse como
identidades aisladas sino que han de ser estudiadas en el mbito fsico-patolgico en el que se
desarrolla par cada situacin concreta.
21- Osmolaridad de los lquidos corporales: es una propiedad de las soluciones que puede
definirse como: el nmero de partculas de soluto, por unidad de volumen de una disolucin
expresada en miliosmoles de soluto en un litro de solucin (mOsm/L)
En condiciones normales la concentracin osmolar delos lquidos corporales es de 290+
10 mOsm/L. No obstante esta osmolaridad puede variar en funcin de:
A- La cantidad de partculas disueltas.
B- El grado de hidratacin del organismo.
En principio independientemente de su tamao y carga cada partcula disuelta
proporciona una osmolaridad de 1 mOsm. Sin embargo en las sustancias ionizables cada in
contribuye a la osmolaridad en igual medida que una molcula de una sustancia no ionizable (por
ejemplo la glucosa). De entre los electrolitos orgnicos ms importantes tenemos:
~ El sodio y los aniones que lo acompaan (principalmente cloro y bicarbonato)
constituyen entre el 90-95% de los solutos osmticamente activos del lquido extracelular.
~ El potasio, magnesio y fosfato orgnicos los son pero del lquido intracelular.
Hasta el momento las teoras fsico-qumicas de la difusin no han explicado
adecuadamente esta desigual distribucin de la mayora de los solutos, entre los compartimientos
intra y extracelulares. Pero est ampliamente demostrado que:
~ Las membranas celulares no se comportan nicamente como barreras semipermeables,
en las cuales los diferentes solutos se distribuyen mediante un mecanismo de difusin simple.

~ Algunos membranas celulares tienen permeabilidad selectiva para ciertas molculas.

~ En muchos casos hay mecanismo de transporte activo que actan a travs de las
membranas celulares, ligados ntimamente a procesos metablicos de estas (gasto de energa).
La importancia de la osmolaridad delos fluidos corporales radica en su papel regulador de
la distribucin del agua entre los diferentes compartimientos del organismo. El agua difunde en
general, de una zona de menos concentracin osmolar a uno de mayor concentracin para igualar
osmolaridad. Empricamente se demuestra que la osmolaridad de una disolucin influye sobre su
punto de ebullicin (aumentndolo) y sobre su punto de congelacin (disminuyndolo). En base
a ello la determinacin de osmolaridad se realiza mediante un osmmetro, dispositivo que mide
el descenso del punto de congelacin de una disolucin.
MANTENIMIENTO DEL EQUILIBRIO HIDROELCTRICO
En el tubo digestivo desembocan diariamente 9 litros de lquido:
~ Ingesta ---------- 15 litros
~ Saliva ------------ 15 litros
~ Jugo gstrico --- 3 litros
~ Bilis -------------- 05 litros
~ Jugo pancretico 1-2 litros
~ Jugo intestinal un volumen no determinado
La absorcin de esto lquidos se realiza sobre todo en el intestino delgado y una pequea
parte en el colon, pasando unos 100 cc diarios a las heces.
Las necesidades de electrolitos en la dieta son muy variables pero en general:
~ Deben ingerirse en pequeas cantidades (Na+, K+, Mg+2)
~ Cuando el consumo es escaso, pueden acumularse
~ Algunas como el calcio y el potasio se eliminan continuamente por lo que han de
consumirse de forma regular par evitar su carencia.
~ El exceso en su consumo normalmente es compensado por unas mayor eliminacin,
generalmente con la orina.
En general estos electrolitos se absorben por un mecanismo de transporte activo (con
gasto energtico) con difusin pasiva debida a una diferencia de gradiente (sin gasto energtico)
acompaando al agua en una respuesta a una diferente del gradiente osmtico y esto se denomina
arrastre por solvente (llamado difusin facilitada).
En la regulacin del equilibrio hidroelctrico interviene el aparato respiratorio que acta
variando las velocidades de la respiracin y los riones que son los principales responsables de
mantener el equilibrio hidroelctrico del organismo existiendo un equilibrio entre sustancias
excretadas e ingeridas. Si este equilibrio se rompe aparecen trastornos bioqumicos.
El rin es el principal rgano encargado de regular la osmolaridad de los lquidos
corporales. Es el rgano que elabora la orina, fluido biolgico cuya concentracin vara en
funcin de las necesidades de forma que: si el organismo necesita retener agua los mecanismos
de reabsorcin entran en funcionamiento y por lo tanto aumenta la osmolaridad de la orina.
Si hay un exceso de agua el flujo urinario aumenta y disminuye la osmolaridad.
Mediante estos mecanismos de concentracin y aumentacin del flujo urinario, en
condiciones fisiolgicas de normalidad, el rin regula la concentracin de solutos y pese a las
grandes fluctuaciones en la ingestin de agua y sales, mantienen la osmolaridad de los lquidos
orgnicos dentro de unos lmites estrictos.
En ltima estancia la absorcin y secrecin de agua y electrolitos son procesos mediados
por hormonas y neurotransmisores, de manera que :
~ Un aumento de la osmolaridad del suero o plasma estimula la secrecin de hormona
anti-diurtica. La reabsorcin de agua aumenta y la orina se concentra.

~ Una disminucin de la osmolaridad del suero inhibe o incluso llega a suprimir la

liberacin de la hormona anti-diurtica. La reabsorcin de agua disminuye y la orina se diluye.
NOTA: hormona anti-diurtica (ADH): la P.O. del plasma debido a que provoca un
en la reabsorcin de agua disminuyendo as la cantidad de orina y aumenta la [] de esta.
EVALUACIN DEL EQUILIBRIO HIDROELCTRICO
Una forma de evaluar la capacidad del rin como regulador del equilibrio electroltico es
determinar cualitativa y cuantitativamente los solutos presentes en la orina:
A- Calculando la densidad de la muestra
B- Midiendo su osmolaridad (la osmolaridad urinaria, la densidad urinaria suelen
coincidir siempre que no halla ninguna patologa que contribuya a eliminar por la orina
sustancias de alto peso molecular.
C- Determinando los electrolitos presentes.
En general consiste en valorar el estado del equilibrio hidroelctrico y poder determinar
as aspectos tan importantes como:
1- El estado de hidratacin
2- La funcionalidad de la hormona anti-diurtica.
3- La gravedad de un estado de coma en un paciente.
ESTUDIO DE LOS ELECTROLITOS ORGNICOS MS IMPORTANTES
Por su gran accesibilidad el suero o plasma ese el fluido biolgico de eleccin a la hora
de evaluar la composicin en cationes y aniones del organismo. De entre todos los electrolitos
orgnicos tanto cationes como aniones, vamos a describir a los ms importantes:
1- EL SODIO (Na+): es el electrolito sanguneo ms abundante con unas necesidades mnimo de
15 miliequivalentes/da. Existe una estrecha relacin entre el metabolismo del sodio y del agua.
El nivel del sodio orgnico depende de la relacin entre la cantidad ingerida ms cantidad
excretada con la orina.
Es el principal catin extracelular (al 90% del sodio est fuera de la clula) siendo el
contenido del sodio el que rige el volumen del compartimiento.
La natremia normal es entre 135-148 miliequivalentes/litro.
A- HIPERNATREMIA: concentracin de sodio en suero superior a 150 mEq/L. Ocurre
con poca frecuencia y solo se consideran graves los niveles que superan los 160 mEq/L. Las
causas que la provocan pueden ser:
1- Incremento del aporte: elevada ingesta de sal o de bicarbonato sdico, etc.
2- Disminucin de la eliminacin renal: esto ocurre en la diabetes inspida.
3- Una alteracin endocrina como puede ser la enfermedad de Cushing (es una afeccin
que afecta sobre todo a mujeres jvenes, caracterizada por adiposidad exagerada en cara, cuello y
tronco, aspecto pletrico, hipertensin y retencin de agua entre otros sntomas),
4- Secundaria a una prdida relativa de agua, bien por disminucin de aporte o por
prdida excesiva.
B- HIPONATREMIA: valores de sodio en suero inferiores a 130 mEq/L que
normalmente refleja un exceso relativo de agua en el organismo ms que un valor disminuido
del total de sodio. Una hiponatremia se considera grave con valores inferiores a 125 mEq/L y la
rapidez con la cual se alcanza este valor es un dato muy significativo a la hora de valorar la
gravedad del cuadro ms que la cifra alcanzada, la hiponatremia relativa (falsa hiponatremia) es
la consecuencia de un aporte excesivo de agua que se traduce en un dilucin del sodio
plasmtico. Las causas que la pueden originar son:
~ Disminucin en el aporte de sodio.
~ Aumento de las prdidas intestinales y gstricas (vmitos y diarreas)
~ Aumento de las prdidas renales (diurticos salinos, fracaso renal agudo)

~ Alteracin endocrina, enfermedad de Adisson cursa con astenia fsica, psquica,

coloracin bronceado de piel, mucosas, con trastornos digestivos, anorexia, dolor de estmago
(epigastralgia), vmitos y diarrea, hipotensin arterial y adelgazamiento analticamente habr
hiponatremia).
~ Otras: quemaduras grave, sudoracin excesiva acompaada de ingestin masiva de
agua.
El diagnstico se realiza atendiendo a las pruebas complementarias de laboratorio y
permite clasificar las hiponatremias en:
1- Isovolmicas: disminuye en la ingesta de sodio.
2- Hipovolmicas: vmitos y diarreas
3- Hipervolmicas: sndrome nefrtico
C- MECANISMOS DE INCORPORACIN Y ELIMINACIN:
~ La filtracin: el sodio se transporta a travs de las membranas celulares mediante un
sistema de transporte activo (bomba de sodio) que consume energa.
~ La excrecin: se excreta filtrando a travs del glomrulo siendo una excrecin renal
regulada con gran exactitud y que se adapta al contenido de la dieta; siendo la excrecin extrarenal de sodio rarsima en individuos sanos.
~ La reabsorcin: es reabsorbido en su mayora a nivel del asa de Henle gracias a un
proceso regulado por la Aldosterona (umbral renal = 11-130 mEq/L). La cantidad de sodio
ingerida con al dieta sufre graves variaciones, sin embargo el organismo tiene tendencia a
mantener constantes los niveles de sodio en el plasma y en los lquidos extracelulares. Por ello,
an en condiciones patolgicas solo se observan pequeos cambios. Su concentracin es
controlada por los riones y por el sistema nervioso central que acta a travs del sistema
endocrino.
D- FUNCIONES BIOLGICAS MS IMPORTANTES:
1- Conservacin qumica de la presin osmtica
2- Mantenimiento del equilibrio cido-base
3- Participa en la transmisin de impulsos nerviosos.
E- MECANISMOS DE REGULACIN DE SODIO EN EL ORGANISMO:
~ Flujo de sangre renal: si el flujo de sangre en el glomrulo aumenta, aumenta la
excrecin renal de sodio. Si el flujo de sangre en el glomrulo disminuye, disminuye la excrecin
renal de sodio.
~ Anhidrasa carbnica: la inhibicin de la actividad de este enzima provoca un aumento
de la reabsorcin de sodio en los tbulos renales.
~ Aldosterona: es una hormona que acta:
1- Aumentado la reabsorcin de sodio y cloruro
2- Disminuyen la concentracin de potasio
La secrecin de aldosterona est en funcin de el sistema Renina-angiotensina y
de concentracin de sodio y potasio.
NOTA: sistema renina-angiotensina: la renina es una sustancia capaz de transformar el
angiotensingeno en angiotensina (es una sustancias que produce vasoconstriccin perifrica e
hipertensin).
~ Otros esteroides: especialmente aquellos cuya concentracin plasmtica es regulada por
la hipfisis y pueden causar retencin de agua y sal. Por ejemplo: progesterona y estrgenos que
provocan cambios en la retencin de agua y sodio durante el ciclo menstrual.
~ Renina: esta enzima regula el flujo de sangre en el rin. La filtracin glomerular y la
excrecin de sodio y agua, es un estmulo potente para la secrecin de aldosterona. En
enfermedades renales cantidades excesivas de renina excretadas dentro del plasma originan
retencin de agua y sal lo que da lugar a una hipertensin.

~ Hormona anti-diurtica, ADH vasopresina: su secrecin es causa de cambios en el

volumen de lquido extracelular. Regula la reabsorcin de agua en los tbulos distales del rin.
F- Clnica de la hipernatremia e hiponatremia:
1- Hipernatremia: aumento del volumen de agua lo que nos va a dar un estado
hipertnico. Los sntomas son: hipertensin (aumento del volumen), edema, sed, fiebre y
alteraciones del sistema nervios central (como por ejemplo: agitacin, excitacin,
neuromuscular,...)
2- Hiponatremia: entrada masiva de agua en el interior de las clulas. Esto va a dar lugar
a un estado hipotnico. Las posibles enfermedades patolgicas son: edema cerebral, fibrilacin
muscular, calambre, estupor, desorientacin, coma,...
G- Determinacin:
1- A nivel plasmtico permite valorar cambios bruscos en el equilibrio hidroelctrico.
Cuando los cambios son leves la utilidad de esta determinacin es relativa.
2- A nivel urinario: el sodio urinario es un indicador ms sensible que el plasmtico para
descubrimiento precoz de pequeos cambios. Observaciones:
~ La concentracin de sodio puede realizarse en suero (plasma)
~ La sangre heparinizada puede dar resultados errneos si se utiliza heparina sdica.
~ Es necesario procesar las muestras antes de 3 horas (evitando as desplazamientos del
in entre el interior y el exterior de la clula).
~ Hay muchos frmacos que pueden ser causa de concentracin falsamente aumentada o
disminuida de sodio en sangre.
3- Mtodos analticos:
~ Qumicos: han sido muy utilizados los colorimtricos, hoy en desuso.
~ Absorcin atmica o fotomtrico de llama: se utilizan 2 tipos de fotometra de llama: la
de lectura directa y la de patrn interno. Es una de los mtodos ms utilizados.
~ Potenciometra: utiliza el mtodo del electrodo in selectivo; hoy por hoy es uno de
los ms utilizados y se han adoptados para sistemas automatizados (autoanalizadores).
2- EL POTASIO (K+): es como el sodio, un catin especialmente importante en la regulacin
del equilibrio cido-base. Las necesidades de potasio en una persona adulta oscila entre 80-200
mEq/da, siendo la dosis mxima tolerable de 400 mEq/da incluso aunque o halla ingestin de
potasio, por lo que una ingestin diaria insuficiente de potasio puede ocasionar graves
patologas. La localizacin del 90% de este catin est dentro de la clula, es decir, intracelular.
La porcin extracelular es en pequeas cantidades situada en los huesos y en la sangre.
La determinacin de nivel plasmtico de este in que es la potasemia, es un mal
indicativo de su contenido total, en el cuerpo humano ya que solo el 04% del potasio presente en
el organismo est en el plasma. Los valores normales son entre 35-5 mEq/L.
A- HIPERPOTASEMIA HIPERKALEMIA: se considera hiperpotasemia a valores
mayores a 55 mEq/L. Las causas pueden ser:
~ Aumento del aporte (cuando hay una destruccin celular como el caso de los
aplastamientos, quemaduras, intervencin quirrgicas,... se libera mucho potasio a la sangre).
~ Perfusiones de potasio
~ Disminucin de la excrecin renal (por una insuficiencia renal).
~ Acidosis metablica (el potasio sale de las clulas)
B- HIPOPOTASEMIA HIPOKALEMIA: se considera hipopotasemia con valores de
35 mEq/L. Las causas que lo provocan pueden ser:
~ Aporte de potasio disminuido (malnutricin, sndrome de malabsorcin,...)
~ Abundantes prdidas gastro-intestinales (vmitos, diarreas)
~ Alteraciones endocrinas (sndrome de Cushing)
~ Determinados tratamientos farmacolgicos.

La excrecin urinaria de potasio vara en funcin de la dieta, dentro de varios lmites,

siendo la potasuria normal entre 15-35 g/24 horas (menos de 90 mEq/da).
C- REGULACIN DE LA INCORPORACIN Y ELIMINACIN: el nivel plasmtico
de potasio est regulado por su excrecin renal, diariamente se pierden aproximadamente 50
mEq/da.
1- Absorcin: el potasio es reabsorbido a nivel intestinal, filtrado por el glomrulo y
generalmente es reabsorbido en los tbulos casi en su totalidad.
2- Excrecin: a continuacin se elimina por la orina de un modo eficaz a nivel de los
tbulos distales.
Normalmente entre el 80-90% de las clulas es excretadas con la orina tras filtrar por el
glomrulo, el resto es excretado por el sudor y las heces, siendo esta una prdida pequea que
puede verse sensiblemente aumentada en estados diarreicos.
NOTA IMPORTANTE: no existe umbral renal para el potasio. Esto implica que incluso
en estados carenciales de potasio, podamos seguir eliminando este catin. Se necesita por tanto
una ingestin diaria y regular de este alimento.
D- FUNCIONES BIOLGICAS: el potasio intervine en:
~ Conduccin nerviosa.
~ Contraccin muscular.
~ Regulacin de la presin osmtica
~ Regulacin junto con el calcio y el magnesio del gasto cardiaco (es la velocidad y
fuerza con que se contrae el corazn).
Es fundamental saber evaluar los cambios de potasio en el organismo y reconocer excesos
o deficiencias aunque la concentracin en sangre sea casi normal. A menudo los signos y
sntomas de la hiperpotasemia y de la hipopotasemia suelen ser de tipo nervioso y/o muscular.
Adems suelen ser muy inespecficos.
E- CLNICA:
1- Hiperpotasemia: se consideran valores por encima de 655 mEq/L. Esta cifra es
normalmente indicativa de problemas cardiacos, con una hiperpotasemia grave se puede producir
la muerte por fallo cardiaco. La clnica se divide en:
~ Alteraciones cardiacas /bradicardia (despacio).
~ Fibrilacin (alteracin del ritmo)
~ Paro cardiaco
~ Encontramos tambin cambios significativos en el electrocardiograma.
~ Por otro lado va a dar lugar a alteraciones neuromusculares (debilidad muscular,
contracciones y/o temblores, parlisis,...)
2- Hipopotasemia: aparece muy frecuentemente en personas que reciben lquidos
intravenosos sin proceder a compensar la prdida de potasio que se produce por la orina. Con
valores menores a 25 mEq/L pueden aparecer problemas cardiacos e incluso la muerte. La
clnica se divide en:
~ Alteraciones neuromusculares: debilidad y dolor muscular, en general dbil en los
msculos respiratorios, una hipotensin, apata, mareo, incluso nuseas y coma.
~ Alteraciones cardiacas: bsicamente arritmias y cambios en el electrocardiograma.
Suele aparecer sudoracin intensa.
F- DETERMINACIONES DE POTASIO: la utilidad es el diagnstico de alteraciones del
equilibrio cido-base y del equilibrio hidroelctrico. Observaciones:
~ Si utilizamos sangre venosa hay que evitar la hemlisis al extraerla.
~ Utilizar material desechable (ya que cualquier resto de detergente o leja puede alterar
considerablemente los valores obtenidos).
~ Evitar errores de dilucin de la muestra (si la persona tiene suero hay que pincharle en
el otro brazo).

~ Separar las clulas del suero centrifugando y procesar la muestra lo antes posible. Si
puede ser antes de 4 horas. As se evita que el potasio salga del interior de las clulas y de un
resultado falsamente aumentado.
~ Determinados frmacos intervienen en la determinacin de este catin de penicilina
potsica por va intravenosa puede provocar hiperpotasemia.
F1- Mtodos analticos: gravimtricos, turbidimtricos, absorcin atmica, fotometra de
llama y electrodos selectivos.
METABOLISMO FOSFO-CLCICO: el hueso participa en el proceso de homeostasis fosfoclcica por ellos est sometido a la influencia de diferentes factores que regulan el metabolismo
del calcio y del potasio. Los metabolismo de ambos electrolitos y tambin del magnesio estn
estrechamente relacionados, ya que:
1- Todos son parte integrante del hueso, que es su principal reservorio, as el 99% del
calcio, el 81% del fosfato y el 65% del magnesio se encuentran en los huesos.
2- Existen numerosos mecanismos homeostticos comunes a ellos.
3- Siempre existe entre ambos iones (calcio y fsforo) una reaccin inversa, de forma
que cuando las concentraciones de calcio disminuyen las de potasio aumentan y viceversa.
Un exceso de las cifras sricas de una de las dos hace que los riones excrete al otro, esta
es la explicacin de porque estn inversamente proporcionados (las cifras de fsforo siempre son
evaluadas con las de calcio).
En el hueso estos elementos se encuentran como cationes intra y extra celulares
ejerciendo importantes funciones orgnicas: tampones cido-base y factores de coagulacin, etc.
Por todo ellos las alteraciones del metabolismo de estos elementos causa alteraciones orgnicas
que se traduce en enfermedades seas muy frecuentes ,tales como:
Osteoporosis: en ella est disminuida la masa sea. Los niveles de calcio, los de fsforo
y la PTH van a ser normales. Sin embargo el calcitriol vitamina D3 activa est disminuida.
Osteomalacia: en ella est disminuida la mineralizacin sea. El calcio, el fsforo van a
estar disminuidos. La PTH est aumentada y el calcitriol puede estar normal o disminuido.
Ostetis fibrosa: inflamacin seas. El calcio va a estar normal o aumentada. El fsforo
va a estar aumentado disminuido. La PTH va a estar aumentada y el calcitriol puede estar
aumentado o disminuido.
REGULACIN HORMONAL DEL CALCIO (Dibujo): a nivel endocrino los niveles de
calcio y fosfato se encuentran regulado por 3 hormona: la paratohormona, la calcitonina o
tirocalcitonina y calcitriol vitamina D3 activado.
Paratohormona (PTH): es una hormona sintetizada y secretadas por las glndulas
paratiroides (son glndulas de 8 mm redondeadas y situadas en la cara dorsal del tiroides). Tanto
la sntesis como la secrecin de PTH sucede mediante un mecanismo Feed-Back de la
concentracin de calcio inica plasmtica de forma que si la concentracin de calcio inica
plasmtica disminuye, aumenta la sntesis y secrecin de PTH y viceversa.
~ Funciones de la PTH:
1- Mantenimiento de los niveles plasmticos de calcio por su accin sobre el hueso a
nivel renal e intestinal:
Aumenta la reabsorcin de calcio en los huesos.

Aumenta la reabsorcin tubular de calcio

Aumenta la absorcin intestinal de calcio

Disminuye la reabsorcin de fosfato renal

Disminuye la reabsorcin de sodio, potasio, agua y aminocidos.

Aumenta la produccin del 1,25-(OH)2CC.

2- Interviene en la formacin de tejido seo nuevo.

~ Su regulacin es en funcin de la concentracin plasmtica de calcio
~ Efectos sobre el metabolismo fosfo-clcicos de la PTH:
1- Regular la concentracin de calcio extracelular
2- Acta sobre el hueso y el rin produciendo 3 efectos bsicos:
Aumenta la concentracin srica de calcio

Disminuye la concentracin srica de fosfato

Aumenta la forma activa de la vitamina D3.

Calcetonina tirocalcetonina: es una hormona producida por la tiroides.

Sus funciones son:
Tiene una funcin contraria a la PTH, por tanto, inhibe la reabsorcin de calcio y
facilita el depsito de calcio nuevo (su accin es a nivel seo fundamentalmente), por
tanto disminuye la calcemia.
Su regulacin es debida al nivel de calcio plasmtico total. As, si existe
hipercalcemia aumenta su secrecin y viceversa.
Los efectos sobre el metabolismo fosfo-clcico son:
A- Disminuye la reabsorcin tubular de calcio, fosfato, sodio, potasio y magnesio.
B- Disminuye la secrecin de gastrina (se produce en el estmago)
C- Aumenta la secrecin en el intestino delgado de sodio, potasio, cloro y agua.
Calcitriol, vitamina D3 activa 1,25-(OH)2CC: es la forma activa de la vitamina D3 en
algunos productos animales y en algunas plantas existen precursores de la vitamina D 3 que
requieren la incidencia de los rayos ultravioletas par sintetizarse. Esta sntesis es completada en
el hgado y en el rin (por 2 hidroxilaciones sucesivas) obteniendo un hidrgeno, el calcitriol
que no es ms que la forma activa de la vitamina D3.
~ La funcin del calcitriol es aumentar los niveles plasmticos de calcio. Por lo tanto es
una accin sinrgica (ayuda) y paralela a la PTH.
~ La regulacin del calcitriol es mediante un mecanismo de Feed-Back, es decir, cuando
el mecanismo requiere calcio (hipocalcemia) aumenta la sntesis de vitamina D3 (aumentara su
activacin en el rin). Sin embargo cuando el calcio no es necesario su activacin en el rin
disminuye.
~ Los efectos sobre el metabolismo fosfo-clcico son:
1- Aumenta la absorcin de calcio en el intestino delgado.
2- Aumenta la reabsorcin de calcio del tejido seo (sinrgicamente con la PTH)
3- Aumenta la reabsorcin tubular del calcio en el rin.
4- Aumenta directamente la reabsorcin intestinal de fosfatos con independencia de su
accin sobre el calcio
5- Aumenta la velocidad de excrecin urinaria de calcio
6- Interviene en la diferenciacin de las clulas seas.

3- EL CALCIO (Ca): es el catin ms cuantioso del organismo. De todo el calcio plasmtico

(calcio libres) es la funcin inica (Ca+2) la que puede ser usada en los procesos vitales del
organismo. La localizacin del calcio es:
98% en el esqueleto seo (incluido los dientes)
2% calcio plasmtico, del cual:
~ 46% calcio inico (Ca+2 activo) (reacciones biolgicas)
~ 40% calcio unido a protenas:
o Albminas 80%
o Globulinas 20%
~ 20% Calcio formando complejos solubles de: bicarbonato, citrato, fosfato,
sulfato.
La concentracin srica de calcio total calcemia total los valores normales son 85-105
mg/dl. El calcio total debe expresarse siempre con el nivel de protenas plasmticas ya que
cuando estas disminuyen, sobre todo la albmina, pueden obtenerse el valor real del calcio
aplicando la siguiente frmula: Ca+2 (mg/dl) = Calcio total 08 X [albmina]srica (mg/dl).

Los valores normales de calcio inico son: 448-492 mg/dl. Estos valores estn
influenciados por el pH, as si existe acidosis se favorece la disociacin por lo que se favorece el
calcio inico.
Las alteraciones ms frecuentes de la calcemia total son hipercalcemia e hipocalcemia.
A- HIPERCALCEMIA: cuando el calcio es mayor a 105 y si es mayor a 135 mg/dl es
grave. Las causas de hipercalcemia son:
1- Un aporte elevado, que es en el caso de hipervitaminosis A y D.
2- Tumoral
3- Endocrina
4- Secundaria a hipertiroidismo
5- Otras: enfermedades en las que exista un aumento de la reabsorcin sea
(inmovilizacin prolongada).
B- HIPOCALCEMIA: sucede cuando la calcemia es menor a 85 mg/dl. Las causas son:
1- Aporte disminuido, por ejemplo en la malabsorcin.
2- Endocrina, por ejemplo hipotiroidismo.
3- Secundaria a hiperfosfatemia
4- Otras causas: por ejemplo un error analtico.
C- El CALCIO INICO: tambin puede estar aumentado disminuido en diversos
proceso as el calcio inico est disminuidos en: hipoparatiroidismo primario o con el uso de
diurticos tiacdicos. Las causas de aumento de calcio inico son hiperparatiroidismo primario,
ingestin excesiva de vitamina D, diversas enfermedades malignas y hormona paratiroidea
ectpica (fuera de lugar).
D- CALCIURIA: es la concentracin de calcio en orina. Tiene gran inters clnico. Los
valores de referencia son de 50-200 mg/24 horas.
1- Causas de hipocalciuria: raquitismo y en general cualquier enfermedad en la que est
disminuida la absorcin de calcio a nivel intestinal.
2- Causas de hipercalciuria: hiperparatiroidismo, hipertensin y mieloma mltiple.
E- MECANISMO DE INCORPORACIN Y ELIMINACIN DEL CALCIO: en la
homeostasis del calcio intervienen el intestino, el hueso, el rin y el sistema endocrino,
sobretodo la PTH y la calcitonina.
El hueso intercambia calcio con la sangre aunque slo una pequea parte de este est
disponible para un intercambio rpido. Se encuentra en un proceso constante de remodelacin
resultante del equilibrio entre formacin y reabsorcin (equilibrio que puede inclinarse hacia un
lado u otro segn la situacin del organismo).
La absorcin del calcio sucede a nivel intestinal y se realiza por un mecanismo de
transporte activo, dependiente del calcitriol.
La eliminacin del calcio sucede por 2 vas:
~ Es elevada a nivel renal sobretodo en forma de fosfato clcico y regulado por la PTH.
~ Es baja por las heces.
La regulacin de la incorporacin y eliminacin del calcio se lleva a cabo mediante las
siguientes sustancias:
1- PTH: elevados niveles del calcio (estimulada por el calcitriol).
2- Calcitonina: disminuye los niveles del calcio.
3- Calcitriol: aumenta los niveles de calcio
4- Estrgenos: aumenta los depsitos de calcio en el hueso.
5- Andrgenos: estimulan la corteza suprarrenal o bien la glndula tiroides y pueden
causar descalificacin de huesos e hipocalcemia.
6- Ciertos alimentos: algunos hidratos de carbono como por ejemplo la lactosa aumenta
la absorcin intestinal del calcio (leche)

F- FUNCIONES BIOLGICAS DEL CALCIO:

1- Es el constituyente principal del esqueleto seo.
2- Intracelularmente influye en los mecanismos de regulacin hormonal.
3- Extracelularmente activa el paso de fibringeno a fibrina, y adems tiene un papel
importante como estabilizador de la membrana celular (interviene en la excitabilidad
neuromuscular y es trasmisin nerviosa).
G- DIAGNSTICO DE HIPERCALCEMIA E HIPOCALCEMIA:
1- Diagnstico de hipercalcemia: se define como el aumento de la concentracin de
calcio total en sangre. Para valorar la hipercalcemia es necesario conocer los niveles de
albmina:
~ En caso de hiperalbuminemia: por cada mg/dl de albmina srica disminuye el calcio
en 08 mg/dl.
~ En caso de hipoalbuminemia: por cada mg/dl de albmina srica aumenta el calcio en
08 mg/dl.
NOTA: hipoalbuminemia: no altera la concentracin de calcio inico.
2- Diagnstico de hipocalcemia: se define como la disminucin de la concentracin de
calcio total en sangre. Existen pseudo-hipercalcemias o hipercalcemias falsas que se observan en
personal con hipoalbuminemia, pero en realidad la disminucin de las protenas es la que causa
los bajos niveles de calcio. As tambin un uso excesivo de lquido por va intravenosa puede
disminuir la concentracin de albmina y por tanto la de calcio.
H- CLNICA DE LA HIPERCALCEMIA E HIPOCALCEMIA: si los niveles de calcio
total son normales y si otras pruebas complementarias dan normales podemos decir que el
metabolismo del calcio s normal.
Si la absorcin de fsforo es anormal significa que hay problemas en la absorcin de
calcio ya que va a ver una alteracin de la actividad o de la secrecin de la PTH.
Si hay hipoalbuminemia va a existir hipercalcemia
Los sntomas clnicos de la hipercalcemia son:
1- Trastornos del electrocardiograma
2- Trastornos neuromusculares con debilidad y confusin
3- Trastornos digestivos con nuseas y vmitos
En la hipocalcemia existen los siguientes sntomas:
1- Tetania
2- Espasmos
3- Calambres (contracciones pequeas hasta la convulsin y muerte)
4- Hipotensin
5- Alteraciones del electrocardiograma
5- Cuadro sictico y depresin.
I- DETERMINACIN DEL CALCIO: la utilidad de la determinacin del calcio:
1- Medir la actividad de la PTH.
2- Para valorar la funcionalidad del metabolismo del calcio.
3- Para valorar determinadas enfermedades malignas (destrucciones seas).
En los mtodos de determinacin de calcio podemos hacer estas observaciones que son:
1- Las muestras a analizar, generalmente de venas.
2- Muchos frmacos puede aumentar o disminuir los niveles de calcio, por lo tanto dan
valores errneos si se administran poco antes de la toma de la muestra.
3- Ante la sospecha de que la persona tiene alguna alteracin del equilibrio cido-base se
solicitar paralelamente el anlisis de calcio inico y del pH.
4- Utilizar material de un solo uso (plstico) vidrio qumicamente limpio (Tratado con
cido)

5- No utilizar como anticoagulantes: oxalato (precipitante del calcio) ni EDTA (salvo

mtodos complexomtricos) ni en la muestra no est disponible para anlisis.
Los mtodos analticos del calcio son:
1- Mtodos tradicionales: estn basados en que el calcio precipita mediante la adicin de
determinados aniones. Despus se hace una determinacin del calcio precipitado mediante
mtodos volumtricos, espectrofotomtricos, etc
Las caractersticas de estos mtodos es que tiene poca precisin, exactitud. Poca
sensibilidad por lo que hoy estn en desuso. Por ejemplo mtodo de Clark y Collip (mtodo
volumtrico)
2- Mtodos espectrofotomtricos: el principio de estos mtodos es la formacin de
compuestos coloreados entre el calcio y diversas molculas orgnicas.
Caractersticas tienen poca precisin poca exactitud pero son muy sencillos. Se usan en
la actualidad ya que han sido adaptados para autoanalizadores. Ejemplos:
~ Ortocresolftaleina: es colorimtrico el calcio se une al reactivo formndose un
cromgeno cuya intensidad de color se mide en el espectrofotmetro. Sirve tambin para
determinar calcio en muestra de orina. El inconveniente es que la presencia de magnesio puede
producir interferencias.
~ Otros: todos tienen el mismo fundamento que el anterior variando el reactivo usado.
Los ms usados son: mtodos de la Alisaran y el mtodo del azul de metiltimol.
3- Mtodos complexomtricos: se utiliza un indicador fluorescente y una sustancia
acomplejante del calcio. Cuando la muestra entra en contacto con una sustancia fluorescente
emite luz fluorescente de una determinada longitud de onda dependiendo de la sustancia elegida.
La desaparicin de la fluorescencia indica que todo el calcio presente en la muestra que
formado un complejo. Muestra (calcio) + sustancia aquelante (EDTA) + fluorescena.
Las caractersticas del mtodos son: determinar el calcio de forma directa. Tiene elevada
sensibilidad y rapidez.
La utilidad es para anlisis de sangre y orina sobretodo en urgencias y pequeos
laboratorios. Ejemplos: mtodo que usan EDTA como agente acomplejante y fluorescena como
indicador fluorescente.
4- Mtodo de fotometra de llama: es una tcnica de espectroscopia de emisin atmico
que estudia la emisin de radiacin que produce una muestra que ha sido previamente atomizada
por diversos sistemas.
Caractersticas: tiene gran exactitud, precisin y rapidez. Se puede usar tanto en suero,
como en orina. Es el mejor mtodo despus del de espectroscopia de masa con difusin
isotpica.
5- Mtodo del electrodo in-selectivo: se usan electrodos de membrana que permiten
mediante medidas potenciomtricas directas determinaciones rpidas y selectivas de muchos
aniones y cationes (tambin del pH). Se usa para determinar el calcio inico.
6- Mtodos de espectroscopia de masas con dilucin isotpica: es el mtodo definitivo
frente al cual se deben comparar todas las dems. Se basa en la posibilidad de separar sustancias
mezclados debido a sus compartimiento en le suero de un gas y despus incidir sobre ellas con
un haz de electrones de elevada energa. Las molculas se descomponen en fragmentos y esta
fragmentacin es la huella caracterstica de molculas.
4- EL FSFORO (P): su presencia en el plasma es el resultado del equilibrio mediado por
PTH, calcitonina y vitamina D entre los siguientes aspectos:
1- Aporte con la dieta.
2- Capacidad del tubo digestivo para variar su absorcin.
3- Distribucin de los diferentes compartimientos del organismo
4- Los mecanismos de reabsorcin tubular y excrecin a nivel renal.

Se distribuye por igual entre los compartimientos intra y extra-celulares pero se

considera que es el principal anin intracelular:
A- LOCALIZACIN:
Intracelular:
~ Aumento del porcentaje del fosfato orgnico, forma parte de macromolculas,
fundamentalmente los fosfolpidos y fosfoprotenas.
~ Disminuye el porcentaje de fosfato inorgnico, forma parte de ATP.
Extracelular:
~ El 15% del plasma: de este un 12% est unido a protenas, un 10% como in
hidrgeno fosfato (PO4H-2), un 75% como in monohidrgeno fosfato (HPO 4-2),
NaHPO4-)
~ En cuanto a la concentracin srica de fsforo los valores normales son:
o En nios: 4-65 mg/dl
o En adultos: 3-5 mg/dl
Revisten especial gravedad, valores mayores a 9 y menores a 1 mg/dl.
En general, la concentracin plasmtica de fosfato varan en funcin de:
o pH
o Del momento del da, es decir, existe un ritmo circadiano,
concretamente por la noche, los valores disminuyen
o Aspectos fisiolgicos concretos, por ejemplo: embarazo y
menopausia est disminuidos los valores de fsforo.
Las alteraciones de las concentraciones sricas de fsforo son:
B- HIPERFOSFATEMIA:
~ Un aporte elevado.
~ Alteracin endocrina, por ejemplo hipoparatiroidismo.
~ Aumento de procesos catablicos, por ejemplo quemaduras.
~ Insuficiencia renal.
~ Neoplasias (carcinomas osteolticas).
~ Usos de frmacos como esteroides anabolizantes.
~ Otras: alcalosis.
C- HIPOFOSFATEMIA:
~ Alcoholismo crnico.
~ Disminucin del aporte (mal nutricin, maladsorcin).
~ Trastorno del equilibrio hidroelctrico (hipocalcemia).
~ Alteraciones renales (por prdida renal).
~ Alteraciones endocrinas.
~ Otras: como embarazo.
D- FOSFATURIA concentracin urinaria de fsforo: la concentracin urinaria normal
de fsforo es de 05-3 g/24 horas, vara en funcin de lmites amplios en funcin de la dieta.
En la prctica ms que su cuantificacin se procede al examen microscpico del
sedimento y en l el fsforo se presenta en forma de:
~ Fosfato biclcico
~ Fosfato triclcico
~ Fosfato amnico-magnesio
La fosfaturia generalmente no suele deberse a una prdida excesiva de fosfatos sino a su
precipitacin en la orina ya emitida. Al alcalinizarse por fermentacin amoniacal de la urea.
La absorcin de fsforo sucede a nivel intestinal mediante un mecanismo de transporte
regulado por la vitamina D.
En cuando a la excrecin es por va urinaria y es mediante un mecanismo regulado por la
PTH.

E- FUNCIONES DEL FSFORO:

1- Forma parte de diferentes estructuras del organismo. Como por ejemplo: la matriz,
sea, el sistema nervioso y la clula (forma parte de protenas celulares y membrana celular).
2- Colabora en el mantenimiento del equilibrio cido-base por el tampn fosfato que es
el sistema HPO4-2/ H2PO4- presente en el plasma
3- Participa en los mecanismos de absorcin y en el metabolismo de los principios
inmediatos.
4- Interviene en la contraccin muscular
F- SNTOMAS CLNICOS:
1- Hipofosfatemia:
~ Fracturas seas
~ Acidosis metablica
~ Insuficiencia cardiaca
~ Hemlisis
~ Irritabilidad a nivel muscular
~ Parestesia (parlisis)
~ Obnubilacin (Ido)
~ Convulsiones
~ Si los valores son menores de 2 mg/dl se producen alteraciones en la musculatura
respiratoria con insuficiencia respiratoria.
2- Hiperfosfatemia: cuando los niveles de fsforo aumenta rpidamente (por encima de 9
mg/dl) los de calcio disminuyen. Entonces es necesario vigilar al paciente por si aparecen
arritmias o contracciones musculares.
G- DETERMINACIONES DEL FSFORO: los mtodos de determinacin del fsforo
no miden el fsforo elemental (que se encuentra en una cantidad inapreciable en el organismo)
sino los fosfatos inorgnicos: PO4H2-, PO4H-2. En la determinacin del fsforo intervienen:
~ La edad: aumenta en los nios.
~ Hemlisis de la muestra. Nos dara valores falsos aumentados (valor aumentado)
~ Presencia de vitamina D (valores aumentados)
~ Frmacos (valores disminuidos)
~ Uso de laxantes y enemas que contengan elevada cantidad de fosfato sdico.
Entonces para evitar falsos resultados debemos tener en cuenta ciertos aspectos prcticos:
1- Para evitar la salida de fosfato (principal anin intracelular) el suero usado como
muestra debe separarse lo antes posible de las clulas.
2- Evitar la contaminacin de tubos y pipetas, usando material desechable y
dispensadores automticos para los reactivos.
Los mtodos analticos ms usados estn basados en la espectrofotometra y destacan dos
tipos:
~ Mtodo del fosfomolibdato: consiste en la reaccin de iones fosfato con el reactivo
molibdato y se forma el fosfomolibdato que puede ser medido bien directamente en el
espectrofotmetro o bien reducindolo con diferentes agentes reductores en azul de molibdeno,
leer el color formado con el espectrofotmetro.
~ Mtodos enzimticos: estn basados en una serie de reacciones enzimticas en cadena,
cuyo resultado final es la formacin de un compuesto cromgeno cuya intensidad de color se
mide por espectrofotmetro.
5- EL MAGNESIO (Mg): el estudio del magnesio tiene escaso valor clnico. El tratamiento
para apaliar la disminucin de los niveles del mismo es administrar sales de este catin. Es
despus del potasio el catin intracelular ms importante. Los valores normales de magnesio son:
18-29 mg/dl (15-25 mEq/L).

Las alteraciones de las concentraciones sricas del magnesio son:

A- HIPERMAGNESEMIA: es poco frecuente y se considera que existe cuando la
concentracin de magnesio es mayor de 35. puede ser debida a diversas causas:
~ Excesivo aporte
~ Deshidratacin
~ Trauma tisular
~ Insuficiencia renal
~ Diabetes controladas
B- HIPOMAGNESEMIA: las causas son:
~ Diarrea crnica
~ Malnutricin
~ Alcoholismo crnico
~ Hemodilisis
~ Frmacos como ciertos diurticos o el citrato
~ Pancreatitis aguda
~ Hipoparatiroidismo
C- SNTOMAS CLNICOS:
1- Hipermagnesemia :
~ Hipotensin
~ Nuseas
~ Vmitos
~ Prdidas de reflejos
~ Obnubilacin (a partir de 7 mg/dl)
~ Coma
~ Depresin respiratoria si las cifras superan los 12 mEq/L.
2- Hipomagnesemia:
~ Alteraciones cardiacas tales como taquicardia, fibrilaciones
~ Reflejos hiperactivos.
~ Alteraciones musculares tales como convulsiones, temblores y tetania
~ Insomnio
~ Intolerancia al calcio y al potasio
~ Vmitos
D- REGULACIN DE LA INCORPORACIN Y ELIMINACIN DEL MAGNISMO
AL ORGANISMO: todos los alimentos naturales son ricos en magnesio por tanto es difcil que
aparezca deficiencia con una dieta normal. As por ejemplo en una dieta rica en leche y
legumbres quedan cubiertas todas las necesidades. Cuando se produce una disminucin de la
funcin renal se retienen mayor cantidad de magnesio y por tanto aumenta su concentracin en le
suero.
Un aumento de la cantidad de magnesio absorbido trae consigo un aumento paralelo del
calcio absorbido.
La aparicin de un exceso de magnesio en el suero no es frecuente debido a la capacidad
que posee el rin para excretar su exceso.
Una dieta pobre en potasio dificulta el proceso de absorcin del magnesio y tambin del
calcio.
Una deficiencia del magnesio provoca descalificacin sea.,
La absorcin del magnesio se produce en el intestino delgado concretamente en le
duodeno y el ileon (animal) y dicha absorcin no depende de la vitamina D.
La excrecin del magnesio se produce a travs del rin. Prcticamente el 95% del
magnesio filtrado a nivel glomerular se reabsorbe en el tbulo y el exceso es eliminado va renal
por medio de la regulacin de la PTH.

E- FUNCIONES BIOLGICAS DEL MAGNESIO: todas estn relacionadas con las

funciones del calcio en el organismo:
1- Participa en el mantenimiento de una baja concentracin de calcio a nivel intracelular
2- Ejerce un importante papel en el equilibrio neuromuscular (junto al calcio).
3- Participa en forma de ATP en los procesos de interferencias de energa de las clulas.
4- Acta como cofactor en varios sistemas enzimticos. Por ejemplo el de la ATPasa.
(Cofactor: es una molcula de peso molecular pequeo termo-estable, orgnico inorgnico, que
se necesita para la accin de enzimas).
5- Es necesario para el metabolismo de hidratos de carbono, sntesis de protenas y
sntesis de cidos nucleicos).
G- MTODOS DE DETERMINACIN DEL MAGNESIO: la utilidad de estas
determinaciones es:
~ Para valorar la actividad metablica del organismo
~ Para valorar la funcionalidad renal
Hay que tener en cuenta 2 factores:
1- La hemlisis de la muestra invalida la prueba ya que del magnesio presenta en al
sangre estn dentro de los eritrocitos.
2- Algunos frmacos alteran los resultados. As los salicilatos y las sales de litio o
magnesio dan concentraciones elevadas que son falsas. Otros frmacos seran gluconato de
calcio que daran concentraciones disminuidas.
La cuantificacin del magnesio no refleja el contenido real del organismo ya que
solamente entre el 1-5% del magnesio es extracelular.
Mtodos analticos:
1- Mtodos tradicionales: destacan 3:
Precipitacin: el magnesio precipita en forma de sales insolubles las cuales se
determinan por gavimetra (peso).
Complexometra: es la determinacin de un complejo formado entre el reactivo usado
y el magnesio. Se usan reactivos quelantes por ejemplo el EDTA.
Fluorimetra: es la formacin de complejos fluorescente. Por ejemplo con fluorescena
2- Mtodo espectrofotomtrico: se usan diversos mtodo pero todos estn adaptados para
su uso en autoanalizadores. Son bastantes usados. Se van a usar 2:
Mtodo de azul de metiltimol: consiste en la reaccin entre el magnesio y el reactivo.
De un compuesto coloreado cuya intensidad de color se mide en el espectrofotmetro. La
cantidad de color es proporcional a la cantidad de magnesio.
Mtodo de calmagite: es un colorante usado para determinar directamente el magnesio
(sin desproteinizacin previa). El reactivo (de color azul) forma un compuesto rosado (cuando
reacciona) cuyo color se mide en el espectrofotmetro. La cantidad de color es proporcional a la
cantidad de magnesio de la muestra.
3- Mtodo de absorcin atmica: es el mtodo de referencia. Consiste en someter la
materia a irradiacin con una longitud de onda capaz de ser absorbida por sus tomos. Los
electrones de los tomos se vuelven inestables y por lo tanto. Van a emitir energa para poder
volver a su estado fundamental, se forma as el espectro electromagntico que es propio de cada
sustancia.

4- Otros mtodos:
Activacin neutrnica con dilucin isotpica: es el mtodo definitivo.
Mtodo enzimticos: usan reacciones enzimticas acopladas. Se mide la formacin de
NADPH cuya lectura se hace a 340 nm.
TRATAMIENTO DE LA DEFICIENCIA DE AGUA Y ELECTROLITOS
Cualquier tratamiento a personas afectadas de alteraciones de homeostasis del agua y/
electrolitos debe estar basado en aspectos tales como:
El estado clnico inicial
Un anlisis plasmtico que determina: la concentracin de sodio, potasio, bicarbonato
fundamentalmente, las protenas plasmticas y la urea en sangre.
Dicho tratamiento debe tener como objetivo la reposicin inmediata de agua y electrolitos
suministrando las cantidades necesarias, para ellos usaremos lquidos diferentes en composicin
y cantidad.
A- DEFICIENCIAS DE AGUA: el primer sntoma que indica deficiencia de agua es la
sed. La confirmacin en el laboratorio se obtiene cuando:
El nivel de electrolitos en el suero est aumentado.
la concentracin proteica en el plasma tambin va a estar aumentada
El ndice del hematocrito est aumentada
Un tratamiento eficaz frente a una deficiencia hdrica puede considerar:
1- Debe ser ingerida una cantidad de lquido suficiente para que el volumen de orina
eliminada diariamente sea mayor a 1 litro.
2- Aunque no es conveniente cuando no sea posible dicha ingesta (imposibilidad para
tragar) puede usarse teraputicamente la inyeccin intravenosa de una solucin de glucosa en
agua del 5%. Las caloras que aporta la glucosa generalmente benefician a las personas con
deficiencia hdrica.
3- Nunca debe administrarse soluciones salinas (cloruro sdico al 9%) a un deficiente
hdrico. Esto es debido a que el cloruro sdico aumenta la hipertonicidad del lquido extracelular.
Para eliminar este cloruro sdico por va renal se necesita agua por lo que la deshidratacin se
acenta an ms.
4- Es imprescindible determinar diariamente la concentracin de electrolitos en plasma
hasta alcanzar el nivel de hidratacin adecuada.
B- EXCESO DE AGUA: una intoxicacin debido a un exceso de agua (esto puede
suceder en caso de oliguria poca orina-) se manifiesta clnicamente con estos sntomas:
1- Anemia
2- Bradicardia (disminucin de la frecuencia del corazn)
3- Letargo
4- Delirio
5- Convulsiones
El tratamiento adecuado es administrar la cantidad necesaria de solucin salina
hipertnica.
C- DEFICIENCIAS DE ELECTROLITOS:
1- SODIO: la deficiencia de sodio es la ms frecuente y cuando aparece vemos que:
La persona se encuentra mal y est aletargada
La concentracin de sodio y de cloro en el plasma est disminuida.
Las protenas plasmticas van estar aumentadas
En ocasiones aparece sed.

~ Tratamiento:
a- Controlar constantemente el estado clnico de la persona:
La prdida moderada de sodio de lquido extracelular provoca vmitos
Una prdida intensa (ms de 1/3 del sodio del lquido extracelular) puede
desencadenar la muerte.
b- Instaurar cuanto antes la administracin va oral de una solucin salina (9 gr/l de
cloruro sdico con sabor a limn y glucosa), evitando los problemas de sobre-tratamiento.
c- Cuando no se puede por va orla se administra solucin salina intravenosa de forma
totalmente emprica (a ojo) y se controla haciendo determinacin frecuentes de los diversos
electrolitos. Tambin se debe vigilar el estado clnico del paciente.
d- En todos los casos es imprescindible controlar el tratamiento mediante valoraciones
frecuentes de electrolitos protenas plasmticas y hematocrito.
e- El tratamiento instaurado debe prolongarse hasta que el contenido de electrolitos halla
vuelto a la normalidad.
2- POTASIO: los sntomas ms frecuentes de la disminucin de niveles de potasio son:
Alteraciones musculares debilidad o incluso parlisis.
Alteraciones intestinales (atona total parcial (prdida del tono muscular))
Alteraciones del electrocardiograma
Los dficit de potasio aparecen en las siguientes situaciones:
En el coma diabtico
Por prdida masiva de secreciones gastrointestinales; es menos frecuente que en el sodio
porque las secreciones gastrointestinales tienen menor concentracin de potasio que de sodio.
Las prdidas de potasio slo se evidencian cuando se han normalizado los niveles de sodio
mediante el tratamiento.
Durante el tratamiento con diurticos: ya que los riones siguen excretndolo a pesar de
que exista deficiencia y sigue disminuyendo su valor.
~ Tratamiento:
a- Ingestin de zumo de frutas (pltanos)
b- ingestin de sales potsicas por va oral.
La administracin de potasio por va intravenosa es peligrosa y solo se debe realizar
cuando se cuenten con instalaciones que permitan determinar rpidamente el potasio srico y
cuando la eliminacin urinaria sea abundante.
El tratamiento debe prolongarse normalmente durante varios das hasta que el potasio
comience a elevarse en el suero.
3- MAGNESIO: esta deficiencia es poco frecuente ya el rin en situaciones de dficit
regula su excrecin.
Sin embargo se detectaron casos de dficit de magnesio en personas que tras sufrir
prdidas continuas y prolongadas de secreciones gastrointestinales o padecer problemas graves
de absorcin intestinal se encuentran sometidos a teraputica intravenosa.
~ Clnica:
Tetnica
Sntomas psiquitricos en prdidas prolongadas de secreciones gastrointestinales.

PREGUNTAS
1- Compartimiento extracelular. Caractersticas y composicin.
Supone solo el 20% y se encuentra rodeando a las clulas proporcionndoles un ambiente
externo constante. Posee tambin neutralidad elctrica y a sus vez est formado por 3
componentes principales: plasma, lquido intersticial y lquido trascelular.
2- Dos formas mediante las cuales los electrolitos contribuyen al mantenimientos de la
homeostasis.
Los iones y el agua del organismo estn en continuo intercambio con el exterior y aunque
no estn distribuidos uniformemente se mantiene en un equilibrio fundamental para la vida.
Existe una igualdad entre el total de aniones y cationes en los compartimientos lquidos
corporales. En condiciones normales existe una estado de neutralidad elctrica de manera que
todo aumento de un determinado anin va acompaado de la disminucin de otro.
3- Definicin de osmolaridad y cual es la concentracin osmolar normal de los lquidos
corporales.
Es una propiedad de las soluciones que puede definirse como el nmero de partculas de
soluto, por unidad de volumen de una disolucin, expresada en miliosmoles de soluto en un litro
de solucin. La concentracin osmolar normal es de 290 10 miliosmoles/litro
4- Cmo se realiza la determinacin de osmolaridad?
Se determina mediante un osmmetro, que es un dispositivo que mide el descenso del
punto de congelacin de una disolucin.
5- Tres recomendaciones para cubrir las necesidades de electrolitos en la dieta.
~ Debe ingerirse en pequeas cantidades
~ Cuando el consumo es escaso, pueden acumularse
~ Algunas como el calcio y el potasio se eliminan continuamente por lo que han de
consumirse de forma regular par evitar su carencia.
6- Causas que originan una hiponatremia
~ Disminucin en el aporte de sodio
~ Aumento de las prdidas intestinales y gstricas
~ Aumento de las prdidas renales
~ Alteracin endocrina, enfermedad de Adisson
~ Otras: quemaduras graves, sudoracin excesiva acompaada de ingestin masiva de H2O
7- Clnica de la hipernatremia
Aumento del volumen de agua lo que dar lugar a: hipertensin, edema., sed, fiebre y
alteracin del sistema nervioso central.
8- Causas de la hiperpotasemia
~ Aumento del aporte
~ Perfusiones de potasio
~ Disminucin de la excrecin renal
~ Acidosis metablica
9- Qu consecuencias tiene que no exista umbral renal para el potasio?
Indica que incluso en estados carenciales de potasio, podemos seguir eliminando este
catin. Se necesita por tanto una ingesta diaria y regular de este alimento.

10- Porqu el metabolismo del fsforo y del calcio estn estrechamente relacionados?
1- Todos son parte integrante del hueso, que es su principal reservorio, as el 99% del
calcio, el 81% del fosfato y el 65% del magnesio se encuentran en los huesos.
2- Existen numerosos mecanismos homeostticos comunes a ellos.
3- Siempre existe entre ambos iones (calcio y fsforo) una reaccin inversa, de forma
que cuando las concentraciones de calcio disminuyen las de potasio aumentan y viceversa.
11- Qu es la osteoporosis?
En ella est disminuida la masa sea. Los niveles de calcio, los de fsforo y la PTH van a
ser normales. Sin embargo el calcitriol vitamina D3 activa est disminuida
12- Funciones de la calcitonina.
Tiene una funcin contraria a la PTH, por tanto, inhibe la reabsorcin de calcio y facilita
el depsito de calcio nuevo, por tanto disminuye la calcemia.
13- Regulacin del calcitriol.
La regulacin del calcitriol es mediante un mecanismo de Feed-Back, es decir, cuando el
mecanismo requiere calcio (hipocalcemia) aumenta la sntesis de vitamina D 3 (aumentara su
activacin en el rin).
14- Qu factores intervienen en la homeostasis del calcio?
Intestino, huesos, riones y sistema endocrino sobretodo la PTH y la calcitonina
15- Definir hipercalcemia y que ocurre cuando existe hiperalbuminemia.
Cuando los niveles de calcio total es mayor a 105 y si es mayor a 135 mg/dl es grave.
Si hay hiperalbuminemia por cada mg/dl de albmina srica disminuira el calcio en 08
mg/dl, por lo tanto, existira una hipocalcemia.
16- Cul es el principio de los mtodos espectrofotomtricos en la determinacin el
calcio?
Es la formacin de compuestos coloreados entre el calcio y diversas molculas orgnicas
(cantidad de color).
17- Principios de los mtodos complexomtricos en la determinacin de calcio.
se utiliza un indicador fluorescente y una sustancia acomplejante del calcio. Cuando la
muestra entra en contacto con una sustancia fluorescente emite luz fluorescente de una
determinada longitud de onda dependiendo de la sustancia elegida.
18- Cmo sucede la absorcin del fsforo?
Sucede a nivel intestinal, mediante un mecanismo de transporte regulado por la vit D.
19- Funciones del fsforo.
a- Forma parte de diferentes estructuras del organismo (matriz, sea, el sistema nervioso
y la clula).
b- Colabora en el mantenimiento del equilibrio cido-base por el tampn fosfato
c- Participa en los mecanismos de absorcin y en el metabolismo de los principios
inmediatos.
d- Interviene en la contraccin muscular

20- Mtodos del fosfomolibdato.

Consiste en la reaccin de iones fosfato con el reactivo molibdato y se forma el
fosfomolibdato que puede ser medido bien directamente en el espectrofotmetro o bien
reducindolo con diferentes agentes reductores en azul de molibdeno, leer el color formado con
el espectrofotmetro
21- Absorcin del magnesio.
Se produce en el intestino delgado, concretamente en el duodeno e ileon terminal y dicha
absorcin no depende de al vitamina D.
22- Tratamiento de la deficiencia del sodio.
a- Controlar constantemente el estado clnico de la persona:
La prdida moderada de sodio de lquido extracelular provoca vmitos
Una prdida intensa (ms de 1/3 del sodio del lquido extracelular) puede
desencadenar la muerte.
b- Instaurar cuanto antes la administracin va oral de una solucin salina (9 gr/l de
cloruro sdico con sabor a limn y glucosa), evitando los problemas de sobre-tratamiento.
c- Cuando no se puede por va orla se administra solucin salina intravenosa de forma
totalmente emprica (a ojo) y se controla haciendo determinacin frecuentes de los
diversos electrolitos. Tambin se debe vigilar el estado clnico del paciente.
d- En todos los casos es imprescindible controlar el tratamiento mediante valoraciones
frecuentes de electrolitos protenas plasmticas y hematocrito.
e- El tratamiento instaurado debe prolongarse hasta que el contenido de electrolitos halla
vuelto a la normalidad.

TEMA 8
ESTUDIO DE LA ORINA
APARATO URINARIO
Es el encargado de librar a la sangre de las sustancias de deshecho que se acumula en el
torrente circulatorio, eliminndolas al exterior a travs de la orina. Est constituido por: riones,
urteres, vejiga urinaria y uretra.
Riones: son 2 rganos (derecho e izquierda) con forma de juda. Estn situados en las
fosas lumbares, detrs del peritoneo a ambos lados de la columna vertebral (entre la doceava
vrtebra dorsal y la tercera lumbar). Tiene una longitud entre 12-14 cm, una anchura de 7 cm y
un grosor de 3 cm. En le polo superior de cada rin se encuentra la cpsula suprarrenal que no
tiene relacin con la funcin renal.

Estructura macroscpica: en un corte longitudinal del rin distinguimos

microscpicamente 2 partes: corteza y mdula. La corteza es la zona perifrica, tiene un color
amarillento y aspecto granulosos. La mdula tiene olor rojizo y est constituido por una serie de
conos: son las pirmides de Malpighi. Estos conos tienen su base dirigida hacia la corteza y el
vrtice termina en las papilas renales. La orina al salir de las papilas renales es recogida por unas
pequeas bolsas llamadas clices renales. Esto se rene entre s par formar la pelvis renal que se
contina con el urter. Al pelvis renal tiene forma de embudo con una parte que est dentro del
rin y otra externa al rin.
Estructura microscpica: LA NEFRONA

Microscpicamente el rin est formado por multitud de nefronas. En el hombre el

nmero de nefronas es aproximadamente un milln en cada rin. La nefrona es la unidad
estructural y funcional del rin y est constituidas por el corpsculo renal o de malpighi y el
sistema tubular.
~ Corpsculo renal: est constituido por la cpsula de Bowman y el glomrulo. El
glomrulo es un ovillos de capilares formado por las sucesivas ramificaciones de la arteria renal.
La cpsula de Bowman es una especie de saco de doble pared que rodea al glomrulo.
~ Sistema tubular: est constituido a continuacin de la cpsula de Bowman y consta de
las siguientes partes:
Tbulo contorneado proximal: que es la primera porcin

Asa de Henle: tiene 2 porciones o ramas; la ascendente y la

descendente
Tbulo contorneado distal

Tbulo colector: que es la ltima porcin.

~ El tbulo colector se dirige en trayecto rectilneo hacia el vrtice de las pirmides.

Varios tbulos colectores de diferentes nefronas confluyen en el extremo de la papila dejando
caer la orina en el cliz correspondiente.
La orina baja por el urter desemboca en la vejiga y sale por la uretra y sale al exterior.
MECANISMOS DE LA FUNCIN RENAL
El glomrulo tiene una extensa red capilar, por la cual circula cada minuto 12 litros de
sangre. Su funcin principal es la de filtrar el plasma (alrededor de 25 ml de sangre/minuto) para
conseguir depurarla, eliminando todas aquellas sustancias intiles y nocivas para el organismo.
En total a lo largo del da circula por el glomrulo 150 litros de plasma. A nivel del glomrulo
adems de agua filtrar bsicamente: urea, cido rico, creatinina, aminocidos, glucosa, protenas
de bajo peso molecular.
La filtrado por el glomrulo es recogido es recogido en la cpsula de Bowman y de ah se
dirige hacia la red tubular donde se lleva a cabo un proceso de reabsorcin selectiva, porque solo
e van a reabsorber sustancias concretas y que necesitamos.
La red tubular tiene bsicamente 2 funciones que son: la de recoger y transportar aquello
que se ha filtrado al glomrulo y modificar la composicin del filtrado:
Retirando agua
Retirando ciertos alimentos aunque hayan sido filtrados son tiles para el organismo
como: glucosa, aminocidos,...
Permitiendo la secrecin e otras sustancias que por su toxicidad deben ser
posteriormente eliminadas mediante la miccin. Como amonio (Derivados), hidrogeniones, (H +),
etc.
La modificacin de la composicin del filtrado se debe a diversos mecanismos fsicoqumicos (transporte activo, difusin facilitada, etc) entre las clulas de la red tubular y el
filtrado glomerular. El agua y las sustancias disueltas que no son recuperadas forman la orina.
Tras la intervencin de los tbulos, del total de plasma filtrado por el glomrulo se elimina
nicamente alrededor de 1 ml/minuto (1500 ml/diarios).
CUADRO / ESQUEMA
1- Filtracin glomerular: el glomrulo filtra el plasma desde los capilares que lo
envuelven hasta la cpsula de Bowman.
2- Reabsorcin tubular: el producto obtenido en la filtracin glomerular ve modificada su
composicin en la red tubular. Se reabsorbe agua, glucosa sodio, cloruro, potasio y urea. El
lquido obtenido se concentra.

3- Secrecin tubular: se produce un transporte de sustancias desde la red capilar hacia los
tbulos renales, destaca la secrecin activa de iones H+ que permite la regulacin del equilibrio
cido-base en el organismo.
RECOGIDA DE MUESTRAS DE ORINA
La informacin obtenida tras un estudio riguroso de una muestra de orina va a estar muy
determinada por la forma y condiciones en que se realice su recogida (toma de muestras).
La orina supone una muestra de fcil obtencin y en genera de carcter no traumtico
para el paciente. No obstante para poder garantizar la calidad de los resultados es necesario
sistematizar los procedimientos de obtencin de la misma en funcin de los objetivos
perseguidos de las caractersticas del paciente, etc. Una vez determinado por el personal
facultativo el tipo de muestra necesaria para el anlisis se proceder (si es posible por escrito) a:
1- Informar a la persona objeto del anlisis.
2- Indicar el tipo de muestra deseada (primera de la maana, 24 hora, ...)
3- Orientar acerca de la tcnica de obtencin de la misma
4- Cuando la muestra sea tomada fuera del laboratorio indicar las pautas del
almacenamiento y transporte ms adecuadas.
5- Insistir en la importancia de la higiene y de la limpieza en general cuando se procede a
la recogida de la muestra (evitando la contaminacin involuntaria).
6- Describir el tipo y caractersticas ms adecuadas del recipiente utilizado.
A la hora de elegir el mtodo ms adecuado para llegar a cabo la recogida de una muestra
de orina, es muy importante tener en cuenta:
1- Capacidad del paciente para evacuar la vejiga de forma voluntaria.
2- La necesidad de utilizar muestras tcnicas ms o menos invasivas para obtener la
orina en condiciones adecuadas.
CUADRO / ESQUEMA
Miccin espontnea: el paciente es el responsable de la misma. El objetivo es obtener
una muestra sin contaminacin. Para prevenir la contaminacin eliminamos la primera porcin
de la miccin y debemos asegurarnos de que el paciente realice un lavado minucioso y previo de
los genitales.
Indicaciones:
~ Anlisis fsico-qumico de rutina
~ Estudio del sedimento
~ Cuantificacin de la excrecin de solutos en funcin de la concentracin de creatina
~ Microbiologa (en ocasiones)
Los inconvenientes son: la posibilidad de contaminacin, bien por la flora presente, en
toda la uretra femenina y en la terminal masculina o bien por la flora del rea perineal.
Cateterismo vesical sondaje: requiere para su colocacin personal especializado. Existe
peligro de contaminacin cuando permanece colocado demasiado tiempo. Est indicado en
paciente que presentan dificultades en la miccin y a veces con mujeres para evitar la
contaminacin vaginal.
Los inconvenientes son las posibilidades de introducir grmenes en al vagina y producir
una infeccin delas vas urinarias.
Puncin supra-pbica: es una tcnica invasiva que debe ser realizada por personal
especializado. Las indicaciones son: diagnstico de infeccin por microorganismos extraos en
nios y cuando la muestra de orina recogida por los otros mtodos no renan las condiciones
necesarias.
Los inconvenientes son: la posible contaminacin por la flora cutnea y est
contraindicada en mujeres embarazadas o con tumores ginecolgicos.
TIPO DE MUESTRA

En cada caso el tipo de muestra depender del anlisis solicitado y estar directamente
condicionado por 2 importantes factores: El tiempo y La interferencia de la contaminacin en el
anlisis a realizar.
Para poder comparar los resultados obtenidos algunas sustancias deben determinarse en
un periodo de tiempo establecido previamente (en ocasiones hasta 24 horas) tal en el caso de:
1- Sustancias cuya eliminacin obedezca a ciclos metablicos circadianos (varan a lo
largo del da).
2- Compuestos que se excretan en funcin de la cantidad de hormonas presentes.
3- Sustancias cuya excrecin vara en funcin de la dieta.
En las muestras que requieren un anlisis bacteriolgico, o en aquellas que contienen
sustancias fcilmente degradables por las bacterias es muy importante extremar las medidas de
limpieza e higinicas para evitar las interferencias debidas a la contaminacin. Cuando evitar la
contaminacin sea imprescindible la toma de muestra deber estar supervisada o ser
directamente tomada por personal especializado.
En nios (que todava no han adquirido el control sobre la miccin) se utilizan mtodos
especiales que proporcionan muestras aceptables evitando en los posible tcnicas invasivas.
El mtodo ms utilizado consiste en usar bolsas de poliestireno estriles que se adhiere a
la piel perineal envolviendo completamente los genitales del nio.
A- TIPOS DE MUESTRA PARA UN ANLISIS DE ORINA SIN SUPERVISIN:
1- Primera orina de la maana: es una muestra de 8 horas y se recomienda porque la
concentracin de soluto es variable a lo largo del da y est en relacin con la ingesta de lquido.
Sus indicaciones son:
Anlisis rutinario de orina.
Determinaciones de la capacidad de concentraciones del rin.
Es la ms adecuada para realizar estudios fsico-qumicos.
2- Orina toma al azar: es una muestra al azar que puede dar mal los resultados (por
ejemplo por excesiva dilucin). Sus indicaciones son:
Examen rutinario siempre que ese haya retenido un tiempo la orina
Determinacin de la capacidad del rin para concentrar la orina
3- Orina minutada: se elige un intervalo de tiempo y se comienza vaciando la vejiga,
anotando la hora y va recogiendo la muestra hasta que finaliza el periodo elegido. Al recogida
concluye vaciando completamente la vejiga. Las indicaciones son:
Sustancias cuya eliminacin sea variable a lo largo del da.
Sustancias que se excretan en funcin de la cantidad de hormona presente
Sustancias cuya eliminacin est en funcin de la dieta.
3.1- En funcin del tiempo puede ser:
~ Fraccionada: es de gran utilidad en el seguimiento de pacientes diabticos.
Recogindose durante el da 3 muestras y determinndose en ella glucosuria y cetonuria. Las
fracciones son: desayuno-comida, comida-cena y cena-desayuno.
~ De 2 horas: es muy poco utilizada.
~ De 24 horas: es necesario asegurarse de recoger todas las micciones realizadas en esas
24 horas. Tcnica:
Se vaca la vejiga a primera hora de la maana (normalmente a las 8

horas) y se deshecha la orina emitida.

Se recoge toda la orina emitida incluyendo la de la misma hora de la

maana siguiente.
Se mezcla y se homogeniza toda la orina recogida.

Se reparte en alcuotas (en porciones similares)

Se lleva a analizar

B- TIPOS DE MUESTRA PARA UN ANLISIS DE ORINA CON SUPERVISIN: se

denomina orina de media miccin o chorro medio. Intenta evitar la contaminacin por la flora
uretral que es arrastrada por la primera miccin. Tambin debe evitarse la miccin debida a la
flora peritoneal. La tcnica de realizacin es deshechar la primera porcin de la miccin y la
ltima, aprovechndose sola la porcin intermedia de la miccin.
C- TIPOS DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA RECOGIDA POR PERSONAL
SANITARIO:
Cateterismo vesical (sondaje): es una tcnica invasiva con un apreciable riesgo de
infeccin urinaria y facilita la tomada muestra de orina para anlisis bacteriolgico y fsicoqumico. Las normas de realizacin son:
~ Realizarla nicamente cuando sea imprescindible.
~ Utilizar guantes y equipos en condiciones de esterilidad.
~ Mantener el campo de operaciones estril durante todo el proceso.
~ Cuando sea posible utilizar equipos de sondaje de circuito cerrado (la bolsa de recogida
va unida a la sonda)
~ Mantener permeable la luz de la sonda.
~ Evitar que se produzcan reflujos d orina.
~ Cambar el sistema cada 10-15 das.
~ Realizar controles peridicos para detectar la aparicin de bacteriuria.
Para un anlisis bacteriolgico extraemos la orina directamente de la vlvula que une la
sonda con la bolsa de recogida, mediante aguja y jeringa estriles. Una vez que se haya
desinfectado el punto de puncin.
Para un anlisis fsico-qumico se recoge la orina directamente del a bolsa recolectora.
Puncin suprapbica: es una tcnica invasiva muy utilizada para el diagnstico de
infeccin urinaria en nios cuando se sospecha de la presencia de microorganismos extraos. Es
la nica muestra til para el cultivo de anaerobios. Las normas de realizacin son:
~ Utilizar siempre material asptico.
~ Evitar la posible infeccin por la flora cutnea.
~ Esperar al llenado completo de la vejiga.
~ A continuacin, puncin entre el ombligo y la snfisis pbica.
~ Recoger la muestra en un recipiente estril.
RECOGIDA DE LA MUESTRA
De una forma general para poder obtener la mayor cantidad de informacin posible la
preparacin de recogida, es decir, la toma de muestras debe ajustarse en la medida de lo posible a
las siguientes reglas bsicas:
1- Que la muestra utilizada sea homognea (es fundamental homogenizar la muestra
antes de realizar dicho anlisis).
2- Que sea representativa del total. Si la muestra que tomamos no los es, los resultados
sern errneos.
3- Que sea formada en condiciones adecuadas segn sea el objeto del anlisis de orina.
Hay que procurar alterarlo lo menos posible, especialmente si lo han de transportar.
4- Utilizar los recipientes ms adecuados en cada caso.
5- Conservarla adecuadamente cuando no pueda ser analizada de forma inmediata.
6- Etiquetar adecuadamente e identificar correctamente a la muestra haciendo constar
datos como: datos personales (nombre, apellidos, lugar de residencia, etc), tipo de anlisis
solicitado, fecha y hora exacta de la recogida, en caso necesario indicar conservadores utilizados
y otros datos complementarios.

El recipiente en el cual vamos a recoger la muestra debe ser el ms adecuado, teniendo

una serie de caractersticas fundamentales:
~ Limpios y/o estriles en funcin del tipo de anlisis a realizar (siempre han de estar
limpios y secos, aunque no siempre es indispensable que sean estriles).
~ Con una tapa ancha consistente y con un capacidad entre 50-100 ml.
~ Normalmente de material transparente que permite ver el interior (excepto para la
determinacin de sustancias que son fotosensibles, como la bilirrubina, urobilingeno,
catecolaminas, porfirinas, etc, en cuyo caso deben utilizarse de material opaco).
~ Posibilidad de colocar etiquetas de identificacin (que no se desprenda fcilmente).
Los tipos son:
~ Estriles
~ Limpios
~ Envases de 24 horas (de unos 2000 ml)
~ Bolsas peditricas (estriles). Actualmente los ms utilizados son los de poliestireno.
Una vez recogida la muestra en el recipiente ms adecuado para su procesamiento en le
laboratorio es conveniente utilizar tubos que seas:
~ Ms manejables
~ De volumen ms reducido (10-15 ml)
~ De fcil manejo y almacenamiento
~ Normalmente de fondo cnico
~ Transparentes
~ Fcilmente rotulables
~ Preferentemente con dispositivos de cierre.
CONSERVACIN DE LAS MUESTRAS
Las muestras de orina deben ser analizadas frescas siempre que sean posible y
mantenidas en las mejores condiciones de conservacin.
Deben guardarse siempre, parte de la muestra analizada por su fuese necesario efectuar
algn otro anlisis de comprobacin, o por s durante el anlisis se deteriora sin haber obtenido
resultados fiables.
En general es conveniente analizar la muestra de orina recin emitida. Si esto no es
posible, una conservacin adecuada es fundamental para evitar en lo posible la alteracin de los
componentes de la muestra original. No se recomienda utilizan para un anlisis muestras de ms
de 3 4 horas desde el momento de la recogida, ya que pasado este tiempo las sustancias
contenidas en la muestra comienza a degradarse con rapidez. Esto es debido a que algunas
bacterias producen amoniaco que harn que aumente el pH debido a lo cual pueden destruirse
posibles cilindros (el cilindro urinario es un cuerpo cilndrico uniforme de la orina o de un asa de
henle, se distinguen tipos de cilindros en casos patolgicos: creos, granulosos, hemticos,...) y
clulas de todo tipo que pudiera haber. Vamos a utilizar 2 tipos de mtodos de conservacin:
1- Mtodos fsicos:
A- Refrigeracin: utilizada para anlisis rutinario de orina u otras determinaciones
especficas. Consiste en conservar la muestra a 4C hasta el momento del anlisis en que se
atempera (se lleva a temperatura ambiente). No es conveniente refrigerar las muestras de orina,
que vayan a analizarse antes de 3 4 horas (excepto para anlisis microbiolgico). Ocurre que ha
medida que aumenta la temperatura puede aparecer turbidez. Ser importante preservar la
muestra de la luz para evitar la degradacin de sustancias fotosensibles presentes en ella. Por
ejemplo: la bilirrubina.

B- Congelacin: menos utilizada que la refrigeracin y se emplea sobre todo cuando las
muestra a analizar deben enviarse a laboratorio de referencia.
2- Sustancias conservadoras: su utilizacin estar bsicamente en funcin de:
~ El tipo de parmetro a analizar
~ El tiempo transcurrido desde la toma de la muestra
~ El tiempo que necesita hasta ser analizada.
No se recomienda su utilizacin en anlisis rutinario:
A- Aceites de parafina: forman una pelcula que impide el contacto de la muestra con el
aire. Evita la prdida de dixido de carbono (voltil) en las pruebas de acidificacin.
B- Cloroformo: es txico e interfiere en el examen microscpico. Se usa para la
determinacin de aldosterona.
C- Clorhexidina: en proporcin de 200 gr/l previene el crecimiento bacteriano. Esto
permite almacenar hasta 6 semanas muestras de orina para el anlisis de glucosa.
D- Formaldehdo: es formalina al 37% que conserva bien los elementos formes, pero
interfiere en la determinacin de glucosa. Se usa para anlisis de sedimento.
E- Tolueno: forma una capa sobre la muestra que la protege del aire e inhibe el
crecimiento bacteriano. Es inflamable y difcil de separar de la muestra una vez aadido. Se usa
para determinacin de acetona, cido diactico, protenas,...
F- Timol: poco utilizado porque produce falsos positivos en la determinacin de ciertas
sustancias como las protenas, resulta til para bastantes determinaciones.
G- Tabletas comerciales: conservan bien los elementos forme e interfieren en la
determinacin de iones hormonas y en la densidad. Es til para el transporte de muestras de orina
H- cidos:
~ Con cido clorhdrico: que tiene un pH alrededor de 3 se destruyen los elementos forme
~ Con cido brico no se produce este efecto.
Con excelentes conservantes siempre que no interfieran en la determinacin.
I- lcalis: normalmente se lleva a cabo con carbonato sdico. Su utilidad ms importante
es la determinacin de porfirinas y urobilingeno.
TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS DE ORINA: el transporte y
almacenamiento va a depender del tiempo que deba permanecer la muestra almacenada y el tipo
de muestra.
Muestras para anlisis bacteriolgicos: deben ser realizadas en el mismo centro donde
vayan a ser analizadas. Siempre que esto no sea posible se debe mantener a 4C un mximo de
24 horas.
Muestras para anlisis de rutina: utilizar conservadores adecuados y refrigerar siempre
que sea posible par preservar los elementos formes.
Muestras para determinacin especiales: seguir en cada caso las recomendaciones de
conservacin ms adecuada.
ANLISIS DE ORINA
Es un procedimiento tcnico encaminado a examinar los componentes que lo integran, su
cantidad, y la proporcin en que se encuentra. El estudio de una muestra de orina, cuando es
realizada correctamente, va a proporcionar una gran informacin acerca de mltiples alteraciones
orgnicas y de muy diversa etiologa tanto del rgano donde se forma la orina como de torso
muchos rganos y procesos metablicos. A menudo el anlisis de orina permite detectar una
alteracin de carcter patolgico. En ocasiones sin embargo sirve para poner en evidencia
estados fisiolgicos particulares no patolgicos (pone en evidencia la existencia de embarazo)
determinar el buen funcionamiento renal, etc). En general dicho estudio va a estar muy

condicionado por la forma en que se lleve a cabo la recogida de la muestra sometida a examen.
Los objetivos fundamentales de cualquiera examen de orina son:
1- Obtener informacin del estado general del rin, as como de las lesiones que
pudieran afectarlo.
2- Detectar la existencia de una alteracin a nivel de las vas urinarias por donde se
excreta la orina ya formada.
3- Teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan por va urinaria, detectar
alteraciones funcionales de otros rganos de nuestra anatoma.
4- Poner de manifiesto la existencia de alteraciones metablicas de muy diversa
etiologa, que pueden ser detectables por un aumento o disminucin anormal de ciertos
metabolitos en la orina.
Al analizar la orina, por tanto, se intenta encontrar por un lado sustancias que
normalmente, no se encuentran en la misma y por otro lado alguna alteracin en la concentracin
(por defecto o por exceso) de componentes que habitualmente se encuentran en ello.
Es muy frecuente en la prctica clnica solicitar al laboratorio el estudio de orina de un
paciente bajo denominaciones muy variadas, como:
~ Anlisis elemental de orina.
~ Anlisis completo de orina.
~ Anlisis rutinario
~ Anormales y sedimento
Realmente lo que se est pidiendo con todas estas denominaciones es la investigacin de
ciertos parmetros bioqumicos como pueden ser los siguientes: densidad, protenas, bilirrubina,
urobilingeno, cuerpos cetnicos, glucosa,...
El estudio de los distintos parmetros bioqumicos deber siempre ir acompaado de una
investigacin microscpica de la muestra obtenida tras concentrar la orina original (estudio del
sedimento urinario).
Actualmente todo queda muy simplificado por la utilizacin de la llamada qumica seca
(mediante tiras reactivas) que incluyen adems de estos parmetros otros como pueden ser: la
valoracin bioqumica de la presencia de hemates y leucocitos, que facilitan la valoracin previa
del sedimento.
Aunque hoy en da un anlisis de orina, tiene un inters clnico indiscutible se admite de
forma generalizada y presenta 2 inconvenientes bsicos que pueden restarle fiabilidad.
1- La muestra sobre la que se realiza el anlisis de orina es a menudo poco representativa
y suele ser recogida, transportada (en su caso) y conservada no siempre en condiciones idneas.
2- El procesamiento que se le da a la muestra en el laboratorio no es a menudo el ms
adecuado (falta a menudo rapidez, profesionalidad y eficacia).
En general para apaliar en la medida de los posible estos inconvenientes resultan muy
eficaces medidas como:
~ La utilizacin de protocolos de trabajo preestablecidos.
~ La incorporacin de sistemas de automatizacin e informatizacin.
~ Realizar la seleccin previa de los sedimentos a analizar.
Una vez obtenidas la muestra de orina en condiciones adecuadas, si es posible (hay
tiempo, disponibilidad de reactivos y recursos humanos) se procede normalmente a realizar un
anlisis general de la misma que consiste en:
A- Fsico / macroscpico: cantidad, aspecto, turbidez, color, olor, densidad y pH.
B- Qumico / anormales: protenas, glucosa, cuerpos cetnicos, sangre hemoglobina,
bilirrubina, pigmentos biliares, urobilingeno y nitritos.
C- Microbiolgicos: estudio microscpico de estructuras cristalinas y de formas amorfas
en suspensin:

~ Estudio citolgico (citologa: rama de la biologa cuya finalidad es el estudio

morfolgico y funcional de la clula).
~ Estudio bacteriolgico
D- Microbiolgico:
1- Urocultivos urinocultivos
2- Identificacin del germen (mediante pruebas bioqumicas de identificacin o tipacin
bacteriana)
3- ATB (antibiograma): son pruebas de laboratorio destinadas a medir la sensibilidad de
ciertos grmenes para los antibiticos.
E- Parasitologa:
1- Tcnicas especficas de visualizacin macroscpica de parsitos
2- Estudio microscpico en la muestra de orina (podemos encontrar parsitos enteros,
partes de ellos, huevos quistes que son formas de resistencia).
Para ello la realizacin correcta de un anlisis de orina debemos establecer el siguiente
origen cronolgico:
1- Obtener las caractersticas fsicas (color, olor, cantidad,...)
2- Examen bacteriolgico cuando este haya sido solicitado (Evitando as contaminar la
muestra).
3- Llevar a cabo todas las pruebas necesarias de tipacin bioqumica
4- Determinar la densidad
5- Obtencin y observacin microscpica del sedimento urinario.
NOTA IMPORTANTE: la muestra de orina sobrante debe guardar adecuadamente hasta
que la analtica haya concluido. NUNCA TIRARLA ANTES DE ACABAR. Es necesario revisar
los resultados de los estudios realizados para determinar si los datos obtenidos despus del
sedimento concuerdan con las pruebas qumicas. Adems es necesario comprobar que todas las
anomalas detectadas han sido confirmadas adecuadamente.
EXAMEN FSICO-MACROSCPICO
Proporciona una informacin sobre posibles alteraciones tanto propias (nefropatas) o
ajenas (diabetes) al sistema excretor urinario. Los datos obtenidos en cada caso son orientativas y
nunca definitivos a la hora de diagnosticar una determinada patologa y por tanto deben ser
confirmadas con otros anlisis complementarios. Es importante tener presente que existen
determinadas situaciones fisiolgicas (la menstruacin, grado de hidratacin), que altera algunas
de las caractersticas de la muestra de orina analizada. Conociendo las principales caractersticas
de una orina normal es posible detectar determinadas alteraciones, a menudo por causas
fisiolgicas, pero que en ocasiones pueden orientarnos hacia el diagnstico de una determinada
patologa.
CANTIDAD: la diuresis normal es de 800-2000 ml/24 horas siendo muy frecuente un
volumen de 1200-1500 ml/24 horas.
Posibles alteraciones en la cantidad:
~ Oliguria: se emite menor cantidad de orina de la normal.
~ Poliuria: se emite mayor cantidad de orina de la normal.
~ Anuria: no hay emisin de orina.
El volumen se ve influenciado tanto por factores fisiolgicos como patolgicos. As la
ingestin de lquidos y de sustancias que puedan ayudar en su eliminacin (bebidas diurticas
como el t y el caf, frmacos diurticos, alcohol, nerviosismo, fro, etc) son factores fisiolgicos
que aumentan el volumen.

 ASPECTO / TURBIDEZ: la orina recin emitida es clara y transparente, mientras que la

orina almacenada pueden aparecer elementos en suspensin, puede aparecer:
~ un sedimento blanquecino que normalmente indica fosfato y carbonatos
~ un sedimento rojizo significa presencia de uratos los cuales desaparecen al calentar la
orina a 60 C
Las posibles alteraciones son:
~ Aspecto gelatinosos: indica presencia de leucocitos (se denomina piuria que es la
presencia de pus en orina normalmente asociado a una infeccin.
~ Aspecto opalescente: puede ser opalescente uniforme (crecimiento bacteriano) y no
uniforme (que indica que la muestra tiene contaminacin por secrecin vaginal y/o moco).
~ Turbidez con sedimento rojo: indica hemates.
~ Espuma persistente: indica normalmente que hay protenas normalmente albmina, en
este caso si hay dudas resulta conveniente realizar pruebas de deteccin de protenas en orina.
Observaciones:
~ La turbidez a menudo se debe a precipitacin de sales o de una piuria y para poder
distinguir ambas causas es importante medir el pH ya que fosfatos y carbonatos aparecen en
orinas bsicas. Adems si se trata de piuria la turbidez desaparece al calentar la orina a 60C.
~ La turbidez debida al crecimiento bacteriano no desaparece al acidificar la orina y
dems al microscopio se pueden detectar los microorganismos.
~ Tambin puede aparecer turbidez a la presencia de espermatozoides o de lquido
prosttico que tampoco desaparecen al calentar ni al acidificar.
~ Hay que asegurarse que la espuma persistente no procede de restos de detergentes para
lo cual es necesario utilizar frascos de recogida hermticos y deshechables.
COLOR: lo normal es amarillo mbar (en funcin de la concentracin).
Las posibilidades de alteraciones son:
~ Incolora amarilla claro: diabetes inspida o en las poliurias.
~ Amarilla amarilla verdoso amarilla marrn: ictericia
~ Marrn-pardo-oscuro (como el coac o la coca-cola): hepatitis una cirrosis heptica.
~ Naranja: por medicamentos normalmente por antibiticos
~ Blanquecina-lechosa: infeccin de las vas urinarias.
~ Amarilla oscuro: fiebre aguda
~ Roja-marrn rojiza: sangre [hematuria (rojo turbio) y hemoglobinuria (rojo
transparente)] a medicamentos.
OLOR: aromtico y muy caracterstico (ligeramente amoniacal)
Alteraciones:
~ Putrefacto: es patolgico y se da en infecciones urinarias
~ Claramente amoniacal: envase cerrado durante mucho tiempo.
~ Acetona: presente de esta sustancia en orina (manzana)
~ A ratn: indica fenil-cetonuria
DENSIDAD: normalmente es entre 1010 y 1030 pero si es a primera hora de la maana
es entre 1020 y 1025 pudiendo determinar si por tiras reactivas, urodensmetros o por
refractometra.
Alteraciones:
~ Disminuye: diabetes inspida, alteraciones renales.
~ Aumenta: debido a las alteraciones renales o a estados febriles.
2 Observaciones:
~ Cuando el volumen de orina es inferior al necesario aadir agua destilada y despus
realizar una correccin de la tincin.

~ Si la temperatura de la orina difiere de la calibrada del urodensmetro se har una

correccin de la temperatura, sumar o restar 0001 a la densidad obtenida experimentalmente por
cada 3C de diferencia.
pH: valores normales entre 45-82 aunque lo normal es un pH de 6.
Alteraciones:
~ cido: indica fiebre, acidosis o tuberculosis renal.
~ Alcalino: lceras gstricas, cistitis tratamiento con anticidos.
El pH puede variar en funcin de la alimentacin: un exceso de carne en la dieta acidifica
la orina y una dieta muy rica en vegetales basifica la orina.
EXAMEN BIOQUMICO. DETERMINACIN DE ANORMALES
Habitualmente en un examen bioqumico de orina se investiga: protenas, glucosa,
cuerpos cetnicos, hemoglobina, pigmentos biliares, urobilingeno y nitritos.
En condiciones normales los mtodos de anlisis no detectan en la orina estas sustancias
(de ah el concepto de anormales) debido a que su concentracin es menor que la sensibilidad
dichos mtodos.
Se denomina sensibilidad de un mtodo analtico para una sustancia determinada a la
mnima concentracin de esa sustancia que el mtodo es capaz de detectar. Es tambin la
concentracin mnima de una determinada sustancias que es necesaria en la muestra analizada
para que de positivo.
Ejemplo: Si tenemos un mtodo A que tiene una sensibilidad 08 mg/dl y un mtodo B
que tiene una sensibilidad 03 mg/dl. El ms sensible es el mtodo B.
En la actualidad el estudio de anormales en una muestra de orina se lleva a cabo mediante
la utilizacin de la qumica seca(tiras reactivas de diferentes tipos) y los resultados obtenidos
con ellas son cualitativos semi-cuantitativos.
Cuando debido a las caracterstica de la enfermedad que se pretende diagnosticar se
precisan valores ms exactos y no aproximaciones orientativas y se proceder a la realizacin de
pruebas bioqumicas cuantitativas.
1- Protenas: proteinuria es la eliminacin de protena en orina superando los valores
normales.
En condiciones normales las protenas se encuentran en orina en cantidades muy
pequeas (130-150 mg/da) y que vara segn el volumen de orina eliminada. Sin embargo en los
recin nacidos sobre todo en los 3 primeros das de vida es normal encontrar de 2-8 mg/100 ml
Las protenas que se eliminan en orina son bsicamente:
Albmina: es lo que se denomina albuminuria fisiolgica y es normal despus de un
ejercicio fsico intenso, fiebre,...
Globulinas
Protenas de Tamm-Horsfall (T-H): es una mucoprotena de estructura viscosa que no se
encuentra en el plasma. Se forma en el tbulo contorneado distal y constituyen la matriz de los
cilindros. Supone 1/3 de la proteinuria total.
Otras: transferrina, Ig A, ...
Las protenas con peso molecular inferior a 50-60.000 atraviesa en condicione normales
la membrana glomerular y se filtran, reabsorbindose despus a nivel tubular en su mayor parte.
La albmina con peso molecular 69.000 se filtra solo en una mnima cantidad.
Tipos de proteinuria:
A- Segn la cantidad de protena eliminada puede ser proteinuria
Intensa mayor 4 gr/da. Ocurre cuando existe un dao renal grave, por ejemplo en el
sndrome nefrtico o en la glomrulo-nefritis aguda crnica.
Moderada: cuando es de 05-4 gr/dl sera en estadios menos graves de las enfermedades
anteriores, pelo-nefritis con hipertensin, nefropata diabtica.

 Leve: menos de 05 gr/dl sera en lesiones renales incipientes (comenzando)

B- En funcin de la zona renal afectada:
Proteinuria de patrn glomerular: el glomrulo pierde la permeabilidad en la filtracin,
por lo tanto la filtracin es inadecuada pro lo tanto aparece en orina albmina y otras protenas
de tamao y cargas similares (antitrombina, transferrina, pre-albmina). A mayor tamao de las
protenas aparecidas mayor lesin glomerular.
Proteinuria de patrn tubular: cuando hay lesin tubular aparecen en orina protenas de
pequeos tamaos que en condiciones normales se reabsorberan a este nivel, por ejemplo las
mioglobulinas. La funcin glomerular no est alterada y por tanto no se filtra protena de gran
tamao.
C- En funcin de la duracin: puede ser:
Intermitente o transitoria: aparecen pacientes sin causa renal aparece; puede ser
fisiolgica pero habra que comprobarla.
Persistente: se mantiene en el tiempo suele cursar con hematuria y su pronstico es peor
A parte de todas las proteinurias anteriores (de causa renal) existen otras proteinurias de
causas extra-renal:
Proteinuria de Bence-Jones plasmacitoma: en la cual las clulas plasmticas tumorales
liberan cadenas ligeras (L) de las inmunoglobulinas que atraviesan el filtro glomerular.
Falsa o fisiolgica: producida pro contaminacin con protena de procedencia ajena a la
orina, por ejemplo: de semen.
2- Glucosa: las variaciones de los niveles de glucosa en sangre y por lo tanto su
presencia en orina pueden significar:
Alteraciones primarias del metabolismo de los hidratos de carbono
Alteraciones secundarias: que acompaan a otra patologa.
La orina normal carece casi por completo de g de glucosa, porque aunque es
continuamente filtrada pro nivel glomerular vuelve casi toda a sangre pro reabsorcin tubular.
(La glucemia normal es de 80-120 mg/dl).
La mxima concentracin de glucosa en sangre que los tbulos son capaces de reabsorber
se denomina umbral renal que es de 160 mg/dl.
La glucosuria es el aumento de la concentracin de glucosa en orina por encima de los
valores normales.
Las causas fundamentales de glucosuria son:
A- un aumento de la glucemia por encima de lumbral renal.
B- una alteracin renal o tbulopata: sucede cuando aparece a la vez normoglucemia
(valor de glucosa en sangre normal) y glucosuria.
3- Cuerpos cetnicos: se conocen como cuerpos cetnicos a los siguientes compuestos:
el cido acetil-actico, cido -hidroxi-butrico, acetona.
En personas sanas los cuerpos cetnicos se sintetizan en el hgado que se metabolizan por
completo de forma que en la orina aparecen la concentracin mnima (indetectables).
La cetonuria es la aparicin de cuerpos cetnicos detectables en orina. La presencia de
estos en orina y su aumento en sangre implica que no se realiza correctamente el catabolismo
oxidativa de los cido grasos.
Las causas fundamentales de cetonuria son:
~ Sobrecarga de lpidos en la dieta.
~ Diabetes mellitus
~ Vmitos (nios y embarazadas).
~ Bajo consumo de hidratos de carbono o alteraciones en su metabolizacin. El
organismo al no poder usar los hidratos de carbono utiliza las grasas y algunas protenas como

fuentes de energa, a consecuencia se agotan las reservas alcalinas del organismo y se produce
acidosis.
~ Ayuno prolongado

4- Hemoglobina: no aparece en orinas normales si la cantidad es muy elevada se puede

observar a simple vista.
Causas de hemoglobinuria:
Enfermedad renal de vas altas.
Anemias hemolticas
Reacciones transfusionales
Infecciones como la malaria
5- Pigmentos biliares: bilirrubina y biliverdina. Se forma en el bazo, hgado y mdula
sea por degradacin fisiolgicas de la hemoglobina .
Pueden distinguirse 2 tipos diferentes de bilirrubina:
Bilirrubina unida a albmina que tambin se denomina libre, indirecta o insoluble
Bilirrubina unida a cidos glucurnico: tambin llamada conjugada soluble directa.
Aparece bilirrubina y pigmentos biliares en orina siempre que aumente la bilirrubina
unida a glucurnicos en sangre. Estos se da en las siguientes condiciones:
1- La enfermedad obstructiva o ictericia obstructiva: la bilirrubina unida a glucurnico
no puede pasar al intestino delgado y se acumula en la sangre por lo tanto se excreta en orina.
2- Lesiones hepticas por ejemplo hepatitis o hepatotoxicidad
Frecuentemente estas sustancias aparecen en orina antes de que se manifiestan otros
signos de la propia enfermedades.
6- Urobilingeno: la bilirrubina unida a glucurnico (conjugada) se sintetiza en el
hgado y con la bilis pasa a intestino delgado donde por accin del flora bacteriana se transforma
en urobilingeno.
Este compuesto se elimina de 2 formas: con las heces en elevada proporcin (color
marrn oscuro) y con la orina en menor concentracin (que le da el color mbar).
La cantidad de urobilingeno aumenta en la orina en las hepatitis y en las anemias
hemolticas.
La determinacin de este compuesto debe realizarse rpidamente en orina ya que se
transforma en urobilina ms oxgeno dando un falso resultado negativo.
7- Nitritos: su aparicin en orina indica crecimiento bacteriano (bacteriuria) de grmenes
capaces de reducir los nitratos ingeridos en la dieta hasta nitritos. Por ejemplo: enterobacterias.
Un resultado negativo de la prueba de los nitritos nos indica ausencia de
microorganismos ya que:
~ Estos pueden no ser productores de nitratos por ejemplo estreptococos o los
estafilococos.
~ Habiendo crecimiento por enterobacterias el resultado puede ser negativo por ausencia
de nitratos ingeridos en la dieta.
EXAMEN MICROSCPICO DE ORINA. SEDIMENTO URINARIO.
El estudio del sedimento urinario comprende la investigacin hallazgo e interpretacin de
una serie de elementos o estructuras del ms variado origen y composicin que aparecen
suspendidos en la orina y que proporcionan una ayuda par el diagnstico y la evolucin de las
enfermedades renales.

Siempre que sea posible la muestra debe examinarse antes de transcurridas 3-4 horas de
sus recogida ya que algunas estructuras presentes se lisan fcilmente (clulas, cilindros,...)
Para la obtencin del sedimento vamos a seguir los siguientes pasos:
~ Homogeneizar bien la muestra
~ Colocar 10 ml de orina en un tubo de centrfuga (preferiblemente de fondo cnico)
~ Centrifugar a 2.00 R.P.M. durante 5 minutos.
~ Decantar completamente el sobrenadante.
~ Resuspender el sedimento residual
~ Montar una preparacin en fresco del sedimento (es decir, colocar una gota entre porta
y cubre). Es muy importante evitar la formacin de burbujas.
~ Observar sin demora al microscopio a 40 aumentos con intensidad lumnica media y
condensador a media altura.
Estructuras del sedimento urinario: nos vamos a encontrar en el sedimento urinario con:
estructuras organizadas, no organizadas y artefactos.
Estructuras organizadas:
~ Clulas
o Clulas hemticas
Glbulos rojos o hemates
Glbulos blancos leucocitos
o Endgenas
Epitelio columnar cuboideo
Epitelio transicional urotelio
Epitelio escamosos
o Neoplsicas
o Otras clulas
Clulas prostticas
Clulas vaginales escamosas
Espermatozoides
~ Cilindros
o Hialinos
o Granulosas
Cilindros granulosos finos
Cilindros granulosos gruesos
o Celulares
Epiteliales
Hemticas
Leucocitario
Bacterianos
o Creos
o Grasos
~ Microorganismos
o Bacterias
o Levaduras
o Parsitos microscpicos
Estructuras no organizadas:
~ Cristales elementos mineraloides
o Cristales endgenos normales
o Cristales endgenos patolgicos

o Cristales exgenos
pH cido
cido rico
Oxalato clcico monohidratado
Oxalato clcico dihidratado
Uratos amorfos
Cistina
Leucina
Tiroxina
Bilirrubina
pH bsico
Fosfato clcico
Fosfato clcico triple (amnico-magnsico)
Carbonato clcico
Uratos amnicos
o Cristales de creatina
~ Grnulos orgnicos
o De grasa
De vaselina
o De mucina
o De amilceos
Artefactos
~ Propios de paciente
o Pelos
o Hilos
o Polvo
~ Procedentes del recipiente donde se ha recogido la muestra
o Polen
o Moho
~ Artefactos debido al observador
o Portaobjetos en mal estado
o Preparaciones con burbujas de aire
Estructuras organizadas:
~ Clulas
Hemticas

o Hemates: pueden proceder de cualquier parte del sistema

renal. La cifra normal es de 0-1 hemates / campo. Su
presencia en gran nmero sugiere infeccin, traumatismo,
neoplasias o litiasis renal (clculo o piedras en el rin).
En general la presencia de 1-2 hemates / campo no debe
considerarse anormal. Tampoco cuando una orina procede de una
mujer ya que puede deberse a contaminacin menstrual. Puede
confundirse con levaduras y ciertas formas de cristalizacin de oxalato
clcico monohidratado. Si se procede a una tincin de Gram los
hemates aparecen en rojo, las levaduras en violeta, y los cristales
aparecen incoloros.

Es muy importante distinguir entre macrohematuria y

microhematuria. La macrohematuria se observa macroscpicamente
la presencia de hemates en el sedimento por el color rojo del mismo.
La microhematuria se detecta nicamente la presencia de cierta
cantidad de hemates al microscopio.
Tambin es importante diferenciar si el color rojo observado
microscpicamente es debida a los hemates o a la hemoglobina ya que
si se trata de esta ltima al centrifugar el sedimento el color rojizo
permanecer.
o Leucocitos: pueden proceder de cualquier parte del sistema
renal. Las cifras normales son:
En hombres de 1-2 leucos/campo
En mujeres de 2-6 leucos/campo
En nios tambin de 2-6 leucos/campo.
Ms del 50% de los leucocitos se lisan al permanecer ms de 2 3
horas a temperatura ambiente. Cualquier cifra superior a los valores
normales en el sedimento se denomina piuria.
Generalmente la presencia de ms de 5 leucos/campo puede indicar
infeccin (cistitis, pelo-nefritis, ...)
La mayor parte de los trastornos renales o del tracto urinario cursan
con un aumento de la cifra de leucocitos esencialmente neutrfilos.
Endgenas: el rbol urinario se halla revestido por 3 tipos
embriolgicamente diferentes de epitelio.
o Epitelio columnar o cuboideo: proviene de cpsulas de
Bowman, o de los tbulos: proximal, distal colector.
o Epitelio transicional urotelio: proviene de pelvis renal,
urteres, vejiga y uretra.
o Epitelio escamoso: proviene de la uretra.
En condiciones normales se produce a todos los niveles una escasa
descamacin que se ve sin duda alterada (en ritmo y profundidad) ante
elementos como microorganismo, productos qumicos, cuerpos extraos
(sonda), procesos generativos y proceso invasivos destructivos. Todos ellos
de forma directa o indirecta participan aumentando dicha descamacin
A- Clulas del epitelio columnar cuboideo: tienen un tamao
un tercio mayor que los leucocitos. Su forma es rectangular o cbica.
Tienen un ncleo grande y a menudo excntrico. No se detectan apenas en
un sedimento normal.
Su presencia indica normalmente patologa renal, as enfermedades
de origen infeccioso pelo-nefritis , enfermedades de causa no infecciona
que afectan a las nefronas como la glomrulo-nefritis (inflamacin que
afectan a glomrulos y tbulos), normalmente secundarias a una infeccin)
B- Clulas del epitelio transicional o urotelio: es pluriestratificado ya que constan de 3 capas, una basal, una intermedia y una
tercera superficial. Las clulas que lo componen en general son de un
tamao 2-4 veces mayor que los leucocitos. Su forma es redondeado o
piriforme (forma de pera) y tienen un ncleo generalmente pequeo.
La aparicin en el sedimento de elevadas cantidades de estas
clulas en grandes masas celulares exige un estudio citolgico ms
completo ya que cabe la posibilidad de un carcinoma en cualquier punto
situado entre la pelvis renal y la vejiga.

C- Clulas del epitelio escamosos: son planas y tienen abundante

citoplasma. Su ncleo es central y pequeas a menudo sin bordes aparecen
dobladas y replegadas. Las cifras normales son: en hombres de 1-3 por
campo y en mujeres 2-5 por campo. Ni su ausencia ni su presencia en
cantidades significativas tiene importancia clnica alguna.
Neoplsicas: la presencia de las mismas en el sedimento puede ser

debida a un proceso tumoral asintomtico.

Otras clulas:

o Clulas prostticas: no suelen encontrarse en condiciones

normales pueden aparecer como consecuencia de una
palpacin prosttica.
o Clulas vaginales escamosas: no tiene significacin clnica.
En condiciones normales son indistinguibles de las del tercio
distal de la uretra
o Espermatozoides: bsicamente est formado por cabeza y
cola. En el hombre es muy frecuente la aparicin de
espermatozoides en le sedimento (eyaculacin, recuento,
poluciones nocturnas, etc). En la mujer aparecen despus de
haber mantenido relaciones sexuales. Es decir, tanto en
hombres como en mujeres indica contaminacin por lquido
seminal.
~ Cilindros: bsicamente los cilindros no son sino el resultado de la consolidacin de las
protenas en los tbulos distal, proximal y colector de las nefronas.
En individuos normales pueden encontrarse algunos (sobretodo Hialinos) en el
sedimento pero en personas con alguna enfermedad renal pueden aparecer en gran
nmero y de estructuras muy diferentes.
Comienzan a desintegrarse en la orina a pH alcalino. As como en presencia de
bacterias, probablemente porque muchas de ellas contribuyen a la alcalinizacin del
medio.
Se acepta que esta consolidacin de lugar a lo que conocemos como cilindros es
necesario que concurran aisladamente o en conjunto las siguientes condiciones:
1- disminucin del pH de la orina
2- aumento de la densidad o concentracin de los solutos
3- Un cierto grado de estancamiento en la orina, normalmente producido por una
disminucin del filtrado glomerular.
En lugar de la nefrona en el que se forma determinan el tamao y la forma de los
cilindros:
A- Cilindros estrechos ms o menos contorneados y son los que proceden de los
tbulos distales.
B- Cilindros anchos son los que se originan en los tbulos colectores.
Los principales tipos de cilindros son:
Hialinos: cifras normales en hombres y en mujeres son: 1-2

hialinos/campo, aunque no es frecuente este tipo de cilindros se

puede encontrar en grandes cantidades en orina, por ejemplo en casos
de deshidratacin o de estrs fsico. Tambin puede encontrarse en
diversos tipos de nefropatas.
No obstante su aparicin en el sedimento no tiene significacin clnica.
Para visualizarlos mejor en el micro hay que evitar un exceso de
iluminacin dada su escasa refringencia.

Normalmente sus contornos se aprecian con suficiencia nitidez y uno de

sus extremos en romo (forma de un dedo de un guante)
A menudo se habla tambin de cilindros granulosos hialinos muy
semejantes a los hialinos pero con alguna incrustacin en su estructura.
Tampoco tiene significacin clnica.
Granulosas: en este tipo de cilindros predomina la estructura granular
y desaparece casi completamente el aspecto hialino. Se puede
distinguir 2 tipos bien diferenciados de cilindros granulosos.
o Cilindros granulosos finos: su apariencia recuerda a los
hialinos en tamao y forma pero tienen mayor refringencia
debido a la presencia masiva de pequeos grnulos de
inclusin.
o Cilindros granulosos gruesos: tiene una estructura diferente
a los anteriores ya que tienen mayor tamao. Su aspecto es
rgido y tienen mayor refringencia. Sus bordes son muy
contrastados y angulados. Aunque pueden aparecer en orinas
normales su presencia suele sugerir una nefropata.
Celulares: la presencia de este tipo de cilindros en la orina nunca es
normal. En este grupo pueden encontrarse los siguientes tipos:
o Epiteliales: la matriz del cilindro engloba una serie de clulas
epiteliales que se ha desprendido de la luz tubular.
Si es posible reconocer las clulas que se encuentran en el seno del
cilindro la identificacin no presentar problema alguno (pero a veces
se forman acmulos celulares muy densos). A menudo la degeneracin
que sufren las clulas durante el recorrido por los tbulos dificulta la
tarea.
Gran variedad de nefropatas cursa con este tipo de cilindros pero
frecuentemente se deben a lesiones del epitelio tubular debidas a:
diversos txicos industriales, medicamentos y virus (hepatitis).
o Hemticas: tambin se llaman eritrocitarias. Aparecen en
sedimento con hematuria son un signo indudable de lesin a
nivel del parnquima renal, normalmente se tratan de lesiones
vasculares aunque en ocasiones se trata de pelo-nefritis.
El grado de empaquetamiento y la integridad de los hemates en el
seno del cilindro son muy variables.
La cantidad de ellos es muy escasa (incluso en pacientes con
hematuria clara) lo cual dificulta su localizacin.
o Leucocitario: son relativamente fciles de reconocer ya que
los leucocitos presentes en su matriz se conservan
relativamente estables durante el trayecto por los tbulos.
Su presencia normalmente acompaada de una piuria ms o menos
intensa indica a menudo infeccin localizada en el parnquima
renal (pelo-nefritis) aunque tambin pueden aparecer en lesiones
del parnquima renal de tipo inflamatorio (glomrulo-nefritis
aguada).
o Bacterianos: se parecen a los granulosos toscos. Si se
identifican en un sedimento generalmente unidos a piuria
probablemente se trate de pelo-nefritis.

Creos: son altamente refringentes, rgidos, de apariencia dura, con

una superficie ligeramente rugosa y brillante (recuerda la cera de las
velas) y con sus extremos angulados. No suelen contener grnulos y
son generalmente de gran tamao.
Su presencia en el sedimento es un sntoma claro de una alteracin renal
importante, suelen estar inmersos en una cilindruria en los que estn
representados la mayora delos diferentes tipos de cilindros.
Grasos: son cilindros granulosos o celulares en los que aparecen

pequeas inclusiones de material lipdico (gotitas de grasa). Poseen

una alta refringencia y una tonalidad amarillenta en los lugares en los
que aparecen dichas inclusiones. La deteccin de este tipo de
cilindros sugiere la existencia de alguna nefropata todava no
manifiesta.
~ Microorganismos:
Bacterias: la orina es un lquido biolgico estril y por lo tanto no

contiene bacteria en condiciones normales. No obstante dado su

composicin es un excelente medio de cultivo para el crecimiento de
microorganismos. Es muy constante la aparicin de bacterias
analizadas en laboratorio. Aunque en la mayora de las ocasiones las
bacterias encontradas son fruto de una contaminacin debida en gran
parte (sobre todo en mujeres) a la flora saprofita alojadas en zonas
prximas al meato urinario (zona anal, perineal, vaginal,...)
Por todo lo anterior salvo en orinas tomadas de un forma y en unas
condiciones ideales la frecuente presencia de bacterias en sedimento no debe
se tenida en cuente, salvo que vaya acompaada de piuria.
Levaduras: la gran mayora de las veces aparecen como consecuencia

de una contaminacin. Cuando son encontradas acompaadas de

piuria puede ya pensarse en una infeccin de las vas urinarias por
esto microorganismos. Las orinas de personas diabticas debido a la
glucosuria parecen facilitar el crecimiento mictico.
Su identificacin es relativamente sencilla gracias a su forma cuboidea y a
la frecuente presencia de clulas en estado de gemacin. Debido a que tiene
una refringencia muy parecida a los hemates y un tamao ligeramente mayor
en ocasiones pueden confundirse con estos.
En raras ocasiones la presencia de levaduras en orina corresponde a una
autntica infeccin urinaria. Cuando esto ocurre suele tratarse de una vaginitis
causada la mayora de las veces por candida albicans
Parsitos microscpicos: cuando aparecen protozoos normalmente se

tratan de tricomonas vaginales que es relativamente frecuente en

sedimento de mujer y ms raro en el de los hombres. Su aspecto es
piriforme de mayor tamao que los leucocitos y con una gran
movilidad debido a la presencia de flagelos. Cuando la motilidad est
muy mermada precipita, su identificacin resulta ms complicadas
debido a ir acompaada de piuria y al tener una tamao semejante al
de los leucocitos. A menudo conviene solicitar una nueva muestra
cuando la movilidad sea ms intensa. La importancia clnica de la
determinacin de este parsito radica en que la piuria que la
acompaa puede hacer pensar errneamente en una infeccin
bacteriana. Se descarta esta posibilidad al obtener urocultivos
sistemticamente negativos. Si aparecen en la orina de las mujeres

normalmente proceden de la vaginitis que puede ser asintomtica.

Otros parsitos cuya aparicin indica siempre contaminacin de la
muestra de orina con material fecal son: huevos de parsitos
(schistosoma Spp), quistes trofozoitos de: giardia, tricomonas
hominis.
Estructuras no organizadas:
~ Cristales elementos mineraloides: la presencia de formaciones cristalinas en la orina
(algo muy frecuente se conoce como cristaluria). En general estos cristales que aparecen en la
orina son productos finales del metabolismo que se excretan a nivel urinario. En determinadas
condiciones fsico-qumicas de la orina (pH, densidad, temperatura, ...) algunos de estos
metabolitos adoptan formas cristalinas.
De todos los factores el pH de la orina es el ms determinante en la formacin de los
cristales.
Entre las formaciones cristalinas ms frecuentes en el sedimento urinario pueden
distinguirse 3 grandes grupos bien diferenciados
Cristales endgenos normales: no corresponden a alteraciones

metablicas ni funcionales. Son de muy frecuentes de aparicin en el

sedimento. Puede aparecer en orinas recin emitidas.
Cristales endgenos patolgicos: reflejan trastornos metablicas o

afectacin grave de algn rgano o sistema. Raras veces aparece en

orina.
Cristales exgenos: aparecen en la orina tras la introduccin en el

organismo (va enteral va intestinal-, o parenteral intravenosa-) de

sustancias diversas. Ejemplo: contrastes radiolgicos, va
endovenosa, sulfamidas.
Los cristales los podemos clasificar segn aparezcan: en orinas de pH
cido que seran cristales de predominio cido y en orinas de pH bsico que
seran cristales de predominio bsicos.
o pH cido:
cido rico: aparecen en orinas cidas. Son
birrefringentes. Tienen formas variadas (huso, rombo,
rosetas,...) el color es marrn rojizo, amarrillo e
incluso incoloras. Su presencia no indica una situacin
patolgica o concentracin anormal del aumento de
cido rico.
Oxalato clcico monohidratado: aparecen en orinas
cidas. Son menos frecuentes que las anteriores. Se
presentan en forma de prismas incoloros (casi nunca
aislados) a modo de haces unidos por un punto medio
(pesas de gimnasia) y redondeados finamente estriados
incoloros y con una depresin central (radios de
bicicleta).
Oxalato clcico dihidratado:
Uratos amorfos: aparecen en orinas cidas se
presentan como un precipitado amorfo coloreado
debido a la presencia de pigmentos coloreados de
color amarillo-naranja.
Cistina: suelen cristalizar en orinas de pH cido. Son
los nicos cristales que tienen significacin clnica por

si solos, ya que aparecen en orinas como consecuencia

de un exceso de eliminacin urinario de dicho
compuesto (cistinuria).
Su aspecto es incoloro y adopta la morfologa de placas
hexagonales, regulares, finas y transparentes.
Es imprescindible confirmar la presencia de estos cristales
con la existencia de una elevada concentracin de cistina en la
orina.
Leucina y Tiroxina: estos cristales raramente se
observan en orina, ambos son productos finales del
metabolismo proteico, suelen aparecer juntos siempre
en orinas cidas y en condiciones clnicas graves, en
las que existe una destruccin o necrosis tisular
importante fundamentalmente en el tejido heptico.
Por ejemplo cirrosis, hepatitis.
Los cristales de tiroxina aparecen formando manojos de
tiras finas.
Los de leucina aparecen como grnulos esfricos de estras
radiales y concntricas de aspecto oleoso o graso y muy
refringente.
Ambos presentan coloracin amarilla o marrn.
Bilirrubina: aparecen en orinas cidas. Se presentan
en orinas de pacientes que cursan con bilirrubinemia.
Se observan como agujas de color marrn-rojizo.
o pH bsico:
Fosfato clcico: aunque no de forma muy frecuente
pueden aparecer en orina, normal, alcalina, neutra. Se
presentan en forma de prismas largos, y afilados a
modo de agujas que en ocasiones se agrupan formando
estrellas o rosetas. A veces tambin pueden aparecer
como placas granulares amorfa se incoloras. No tienen
clasificacin clnica aunque a veces su aparicin
parece ligado a alteraciones como la hipertrofia de
prstata o algunas infeccin urinarias crnicas.
Muchos clculos urinarios contiene fosfato clcico.
Fosfato clcico triple (amnico-magnsico): su
presencia en orinas en alcalinas o neutras es
relativamente frecuente. Su forma cristalina ms
frecuente es la de tapa de atad aunque pueden verse
como octaedros y de forma muy simular a la de sobre
de carta (que en realidad es la forma tpica de los
cristales de oxalato clcico) solo que en vez de tener
un vrtice presentan una pequea arista. Tiene tamao
variable y no tiene significacin clnica.
Carbonato clcico: pueden encontrarse en orinas
alcalinas o neutras. Son cristales que no se ven muy
frecuentemente. Aparecen como un material a orfo o
granulado en ocasiones pueden encontrarse como
pequeos lazos y ms raramente como pequeas
esferas incoloras.

Pueden aparecer en orinas tras la ingesta de vegetales pero

no tienen significacin clnica alguna.
Uratos amnicos: suelen aparecer en orinas muy
alcalinas. Presentan color amarillo-marrn muy
intensos morfolgica-mente predominan formaciones
esfricos de distintos tamaos. No tienen significacin
clnica, pero puede estar asociados a infeccin del
tracto urinario por bacterias productoras de ureasa
(aumentan la concentracin de amonio en orina y por
tanto aumentan el pH, es decir, se basifican).
Cristales de creatina: raramente encontradas en orinas de personas

adultas. Son frecuente en cambio en orinas de ni@s antes de la

pubertad. La creatina es un metabolito resultante de la degradacin
endgena del metabolismo muscular cuando este proceso se acelera
aparecen en la orina cristales de creatina. Por ejemplo las distrofias
musculares. Presentan forma pseudo-hexagonal caracterstica.
~ Grnulos orgnicos: pueden ser de varios tipos:
De grasa:

o De vaselina: (lubricante) de la sonda vesical

De mucina: por contaminacin vaginal, inflamacin

De amilceos: (de algodn) a menudo proceden de contaminacin

fecal.
Artefactos: pueden tener diferentes orgenes:
~ Propios de paciente:
Pelos

Hilos

Polvo

~ Procedentes del recipiente donde se ha recogido la muestra:

Polen:

Moho:

~ Artefactos debido al observador:

Portaobjetos en mal estado

Preparaciones con burbujas de aire

INFORME DEL SEDIMENTO URINARIO

Una vez identificadas las estructuras presentes en la muestra de orina analizada se
procede a la elaboracin del informe del sedimento. Para que dicho informe tenga una verdadera
utilidad diagnstica debe presentar una estructura ms o menos estandarizada. De forma general
un informe del sedimento urinario debe: Cuadro 11.14
EXAMEN MICROBIOLGICO DE ORINA
La orina es un flujo orgnico hasta el momento de la miccin hasta que se contamina. No
obstante es un perfecto medio de cultivo para eventuales microorganismos patgenos que pueden
causar infecciones en el aparato excretor urinario
Riones, urteres y vejiga son estriles y por tanto en condiciones normales carecen
totalmente de flora bacteriana.
La infeccin del tracto urinario es extremadamente frecuente y la variedad de
microorganismo aislado en l es muy grande. La mayora de los rganos patgenos del tracto
urinario proceden de la flora intestinal.
De entre los grmenes causantes de infecciones a nivel urinario destacan:

Bacilo GRAM negativos:

Escherichia Coli
Proteus Spp
Pseudomonas Aeruginosa
Klebsiella Pneumoniae
Cocos GRAM positivos:
Sterptococcus Grupo D
Stafilococcus
Levaduras:
Cndida Spp
La toma de muestras para el anlisis microbiolgico de orina requiere una serie de
cuidados especiales ya que entre otras cosas debe ser obtenida bajo condiciones aspticas y por
tanto recogida en recipientes estriles evitando en todo momento la contaminacin. El paciente
debe ser instruido en la forma ms adecuada (diferencias entre hombres y mujeres) de llevar a
cabo esta recogida.
El protocolo a seguir a la hora de realizar el anlisis microbiolgico de una muestra de
orina es:
1- Diluir la muestra si procede. Preparar un inculo
2- Sembrar ya sea en superficie o en profundidad:
En superficie podemos utilizar varios medios:
~ Medio Cled: es un medio que por sus caractersticas impide la invasin del
mismo por Proteus.
~ Medio MacConkey: es un medio selectivo y diferencial para GRAM negativo.
~ Medio agar-centrimide: es un medio muy eficaz para la bsqueda de
pseudomonas.
Se pueden usar otros muchos medios que por sus caractersticas permiten el
crecimiento de aquellos grmenes presentes en la muestra.
Sembrar un profundidad es muy poco frecuente.
3- Incubar: la incubacin de la muestra debe realizarse a la temperatura ptima de
crecimiento de los microorganismos buscados. Habitualmente es de 37C.
4- Realizar el recuento debe procederse al recuento de los microorganismos que hallan
crecido tras la incubacin, presumiblemente las causantes de la infeccin.
Si hay menos de 10.000 microorganismos/ml de orina decimos que no hay infeccin
urinaria. Puede hacer infeccin y no haber sido detectada por diferentes causas:
~ Por haberse instaurado ya un tratamiento con antibiticos
~ Por existir una obstruccin a nivel de las vas renales
~ Por haber obtenido la muestra por puncin suprapbica (sin pasar por al uretra
donde est la flora saprofita)
Si hay ms de 100.000 microorganismos/ml de orina existe infeccin urinaria.
Si aparece entre 10.000-100.000 microorganismos/ml de orina decimos que el
diagnstico es incierto.
Una vez determinada la infeccin hay que resembrar en medios selectivos para proceder a
la identificacin (tipacin) del germen causal de la misma.
Ejemplo de medios selectivos el EMB que asla el E. Coli.

TEMA 9
ESTUDIO DE LOS CLCULOS URINARIOS
INTRODUCCIN
Los clculos renales son concreciones (acmulos, depsitos) anormales presentes en el
rin o en las vas urinarias denominndose a este fenmeno litiasis renal. Estas concreciones
pueden ser de diferentes tamaos clasificndose segn este criterio en: arenillas, arna gruesas y
clculos. Normalmente los clculos de mayor tamao se encuentran en la vejiga y los menores en
el rin.
Aunque en ocasiones estn compuestos por sustancias extraas (sulfamidas silicatos) se
forman generalmente a partir de productos del metabolismo presentes en el filtrado glomerular
normal que precipitan debido a cualquier alteracin en la orina (sobresaturacin de un producto,
cambios de pH, etc). Su estructura est constituido por una matriz de naturaleza orgnica que
representa aproximadamente el 25% del peso seco total y es el ncleo central alrededor del cual
se disponen varias capas concntricas de naturaleza cristalina que constituyen el autntico
clculo.

El paso del clculo por los urteres o uretra provoca el clico renal. Este consiste en un
episodio de dolor intenso, usualmente irradiado a las ingles con vmitos persistentes y anorexia;
el paciente est plido y sudoroso. Puede haber polaquiuria (frecuencia exagerada de micciones)
y hematuria. Los sntomas suelen acabar cuando el clculo a pasado. Otros pacientes pueden
expulsar arenillas, acompaadas de disuria (miccin difcil y dolorosa) y hematuria (sntomas
que pueden confundirse con una infeccin urinaria.
COMPOSICIN QUMICA
Segn el nmero de componentes que interviene en la formacin del clculos, estos se
clasificacin en:
Clculo simple: cuando tiene un nico componente.
Clculo mixto: cuando tiene 2 ms constituyentes.
Muchos clculos renales son de composicin mixta, pero es normal que un componente
est presente en cantidades dominantes. Los constituyentes habituales de los clculos son: cido
rico, cistina, y muy raramente xantina, colesterol, y sulfamidas. Segn su composicin se
clasifican en:
1- Clculos que contienen calcio: oxalato clcico fosfato clcico.
2- Clculos de fosfato amnico-magnsico estruvita .
3- Clculos que contienen cido rico.
4- Clculos que contienen cistina.
MECANISMOS DE FORMACIN
Aunque pueden formarse en cualquier parte de las vas urinarias, ms del 80% son de
origen renal urotlico. Se producen por la precipitacin de compuestos urinarios en forma de
cristales. Estos cristales se van depositando en la superficie de las papilas renales, formndose
agregados cristalinos que van aumentando de tamao, se fragmentan y emigran al urter
pudiendo quedar en l vejiga o salir al exterior.
En el proceso de formacin de un clculo intervienen varios factores diferentes siendo
principalmente 4:
A veces se puede producir por una excrecin anormalmente aumentada del cristaloide en
cuestin, ya sea debido a una elevada concentracin en plasma o a un fallo en la reabsorcin
tubular normal.
1- Aumento de la concentracin urinaria de las sustancias formadoras de clculos: se
pueden producir por reduccin del volumen urinario, aun con funcin renal normal debido a la
restriccin de lquidos a la prdida de los mismos durante largos periodos de tiempo
(deshidratacin). A veces se puede producir por una excrecin anormalmente aumentada del
cristaloide en cuestin, ya sea debida a una elevada concentracin en plasma o a un fallo en la
reabsorcin tubular normal.
2- Cambios en el pH urinario: las alteraciones del pH urinario tienen un gran efecto sobre
la solubilidad de ciertas sustancias, favorecindose la precipitacin de las mismas. Una orina
cida reduce notablemente la solubilidad del cido rico y aumenta as la probabilidad de
formacin de clculos de uratos, mientras que un pH alcalino disminuye la solubilidad del
fosfato, favoreciendo la formacin de clculos mixtos de fosfatos.
3- Anormalidades de las vas urinarias: la infeccin o estasis (es la deteccin o
estancamiento, especialmente de la sangre, en alguna parte del cuerpo apareciendo los vasos
dilatados y llenos de una masa de eritrocitos) de tracto urinario desempean un papel importante
en la formacin de clculos. La infeccin particularmente pro microorganismos metabolizadores
de la urea, eleva el pH y la concentracin de amoniaco en la orina. Ambos factores favorecen la
formacin de clculos mixtos de amonio y fosfatos. Las xtasis del tracto urinario proporciona
mayor tiempo par que ocurra la cristalizacin si existen las condiciones adecuadas.

4- Promotores e inhibidores de la cristalizacin: existen determinados compuestos

presentes en la orina que pueden favorecer determinados compuestos presentes en la orina que
pueden favorecer o inhibir la formacin de clculos. As ciertos cristales en solucin pueden dar
lugar a un aumento de la cristalizacin de otros solutos, mientras que otros compuestos como los
pirofosfatos inhiben la precipitacin y la agregacin de cristales.
No est claro el papel que desempea la matriz en la formacin del clculo. Inicialmente
se pens que la mucoprotena que formaba la matriz influenciaba en su crecimiento, pero ms
tarde se vio que la matriz acta como un coprecipitante inespecfico que no como una sustancia
promotora de la formacin del clculo.
INVESTIGACIN CLNICA
Ante la sospecha de litiasis renal se realizan estudios con la finalidad de:
Determinar la etiologa de la formacin del clculo.
Establecer el grado de lesin renal que pueda haber.
Los estudios efectuados son de 2 tipos:
1- Pruebas radiolgicas:
~ Radiografa simple de abdomen
~ Urografa intravenosa
~ Cistografa miccional (con contraste, vaciado de vejiga)
~ Pelografa retrgrada (se introducen medios de contraste radiolgicos similares
a los utilizados en urografa directamente en la va urinaria con introduccin de
sonda urolateral, llegando a visualizarse el rin).
2- Pruebas de laboratorio: se le har:
~ Bioqumica srica:
o Calcio
o Fsforo
o Pruebas de funcin renal (urea, creatinina)
o Electrolitos
o Protenas
o cido rico
~ Anlisis de orina:
o estudio del sedimento y del cultivo
o pH
o calcio
o fosfato
o cido rico de 24 horas
o oxalato
o aclaracin de creatinina y cistina
~ Anlisis del clculo pueden ser:
o qumico
o cristalografa ptica
o difraccin por rayos X
o espectroscopia con rayos infrarrojos
ANLISIS DE ORINA
Comprenden:
determinaciones bioqumicas de parmetros urinarios. La proteinuria se presenta slo si
existe lesin tubular. Es importante el estudio del pH urinario para saber cuales son el tipo de
cristales urinarios que es probable que cristalicen

 pruebas de funcionalismo renal: existir un aclaramiento de creatinina disminuido

cuando se afecta a la filtracin glomerular debido al calor.
estudio del sedimento: la hematuria es un hallazgo constante incluso cuando los clculos
son asintomticos. No aparecen cilindros o son raros. Si existe excrecin aparecer leucocitos.
Pueden aparecer acmulos de clulas de transicin (que recubre urteres, pelvis renal y vejiga) y
ello contribuye al diagnstico de clculos insospechados. Pueden encontrarse cristales o no.
ANLISIS DE CLCULO RENAL
A- ANLISIS MACROSCPICO: las caractersticas fsicas de los diferentes clculos rara vez
bastan par identificarlos, aunque ayudan en su estudio. Los clculos pueden tener diferentes
tamao y formas, los grandes y redondeados son caractersticos de la vejiga y las coraliformes o
asta de ciervo son caractersticas de la pelvis renal. El examen macroscpico constituyen en:
~ Lavar el clculo para eliminar los restos de sustancias que pudiera podido arrastrar en
su salida al exterior (pus, tejidos, sangre y moco).
~ Medirlo en centmetros
~ Describir sus caractersticas macroscpicas: aspecto (poroso, compacto, brillo no)
color y forma.
~ Cortar y observar su aspecto interno, buscando cualquier cuerpo extrao que haya
servido de ncleo.
Caractersticas fsicas de los clculos usuales:
~ cido rico, uratos: suelen ser amarillos, rojos pardos. Normalmente lisos,
redondeados y sin brillo. Consistencia entre moderada y dura. Tamao pequeo y friables (que se
rompen con facilidad). En ocasiones en asta de ciervos, grandes no visibles con rayos X.
~ Fosfatos y carbonatos: plidos y frgiles. Aspecto parecido al yeso. Forma de bolas o de
la cavidad que los contiene.
~ Oxalato clcico: generalmente de color oscuro y con brillo cristalino. Muy duros.
Superficie rugosa caracterstica. Al aplastarlos aparece un polvo grisceo.
~ Cistina: color amarillo-pardo. Tacto grasiento, aspecto de jabn.
B- EXAMEN QUMICO CUALITATIVO: consiste en realizar una serie de determinaciones
qumicas sobre laicotas de clculo pulverizado para poner en evidencia las diferentes sustancias
que lo componen. Este proceso se denomina Marcha Analtica Del Clculo. Existen diversas
tcnicas, aunque generalmente se emplean kits comerciales que contiene los diferentes reactivos
necesarios ya preparados.
Reactivos:
NaCO3 (carbonato sdico) al 20%

NaOH (hidrxido sdico) al 20%

NH4OH (hidrxido amnico) al 10%

Reactivo Nessler (comercial)

Molibdato amnico al 3%

Amino-naftol- sulfnico al 25%

Este y el anterior se pueden sustituir por el reactivo comercial de fsforo

HCl (cido clorhdrico) al 10%

cido actico al 4%

Oxalato amnico al 4%

Solucin alcohlica de: p-nitro-benceno-azorresorcinol al 005% (guardar en

frasco de polietileno y en lugar oscuro)

Reactivo cido rico (comercial)

Cianato sdico (NaCN) al 5% (preparar en el momento del luso)

cido ntrico (HNO3)

Nitro-prusiato sdico al 5% (preparar en el momento del uso)

Marcha analtica para el estudio del clculo: se coloca el clculo con una pinzas dentro
de un mortero triturndolo hasta convertirlo en polvo. De este polvo se separan 4 partes
(aproximadamente de 10 mg cada una; si hay suficiente) y se dispone en 3 tubos de ensayos (I,
II, III) y en una cpsula de porcelana (IV) reservndose una parte que se utilizar para la
investigacin de sustancias, extraas. Se realizarn las pruebas segn la secuencia habitual,
siempre que exista cantidad suficiente de clculo.
1- Prueba de los carbonatos: en un tubo de ensayo (I) con aproximadamente 10 mg de
clculo pulverizado, se aaden entre 10 y 15 gotas de solucin de cido clorhdrico al 10%. Se
echa lentamente por la pared del tubo y si se observa efervescencia, la prueba de los carbonatos
es positiva, debido a la formacin de CO2 en el curso de la reaccin.
En el mismo tubo (I) se aaden 3 ml de agua destilada. Se calienta a ebullicin y se deja
enfriar, separndose el sobrenadante que se reparte en 5 tubos.
~ Tubo 1: Determinacin del calcio: aadir 2 3 gotas de cido actico al 10% y 2 ml de
oxalato amnico al 4%. Lectura de la prueba: si hay calcio aparecer un precipitado blanco de
oxalato clcico y la prueba es positiva.
~ Tubo 2: Determinacin de amonio: aadir al tubo con el sobrenadante 2-3 gotas de
hidrxido sdico al 20% y 2-3 gotas de reactivo de Nessler. Si aparece un precipitado pardo
anaranjado la prueba es positiva.
~ Tubo 3: Determinacin de fosfato: aadir al tubo con el sobrenadante 1 ml de
molibdato amnico al 3% y 025 ml de amino-naftol-sulfnico al 25%. Esperar 5 minutos y
observar la formacin de color azulado que indicar la presencia de fosfatos.
~ Tubo 4: Determinacin de oxalato: aadir al tubo con sobrenadante 2-3 gotas de
hidrxido sdico al 20% y 2-3 gotas de cido actico al 10%. Mezclar y si se observa la
formacin de un precipitado blanco, insoluble al agitar, la prueba e positiva. Esta precipitacin
corresponde al oxalato sdico formado.
~ Tubo 5: determinacin de magnesio: aadir al tubo con sobrenadante hidrxido
amnico al 10% en exceso para neutralizar y formar hidrxido de magnesio. Una vez aqu aadir
2-3 gotas del reactivo p-nitro-benceno-azorresorcinol en solucin alcohlica al 005%. La
presencia de una coloracin azul indica que la prueba es positiva.
2- Prueba de cido rico (II): en el segundo tubo de ensayo con el clculo pulverizado se
aade una gota de carbonato sdico. Si la prueba es positiva se obtiene rpidamente un color azul
intenso. Si el color e azul plido el resultado se considera negativo.
3- Prueba de cistina (III): en el tercer tubo de ensayo con el clculo pulverizado se echa
una gota de hidrxido amnico al 10% y otra gota de cianuro sdico al 5%. Transcurrido 5
minutos se aaden 2 3 de nitro-prusiato sdico al 5%. La reaccin positiva se reconoce por un
color rojo oscuro o anaranjado.
4- Prueba de xantina (IV): se realiza con la alicota de la muestra pulverizada en una
cpsula de porcelana (IV). Para ello se aaden 2 gotas de cido ntrico concentrado y se evapora
sobre bao de vapor. Obtenindose un residuo amarillo. Se enfra ligeramente y se aade 1 gota
de hidrxido sdico al 20% formndose un color anaranjado. Se calienta ligeramente y el color
anaranjado pasar a color rojo si hay xantina en la muestra.
Informe del anlisis qumico de un clculo: se informa del resultado de todas las
pruebas practicadas al clculo y de la composicin qumica deducida.
Ejemplo: producto a analizar Detritus Clculo Renal. Examen qumico
Carbonatos ----------------- negativo
Cistina ---------------------- negativo
Fosfatos -------------------- positivo
Magnesio ------------------- positivo

Calcio ----------------------- negativo

Amonio --------------------- positivo
cido rico ---------------- negativo
Oxalatos -------------------- negativo
Resultado: detritus de fosfato amonio magnesio
C- EXAMEN POR ESPECTROSCOPIA DE INFRARROJOS (IR): mediante la espectroscopia
de infrarrojos puede determinarse la composicin semicuantitativa de un clculo. Es l tcnica
ms utilizada en la realidad en los laboratorios cuyo volumen de muestras permite l adquisicin
de este tipo de espectrmetros.
Se trata de una espectroscopia de absorcin y por tanto consiste en la determinacin de la
cantidad de infrarrojos absorbida por las sustancias examinadas midiendo a distintas longitudes
de ondas para obtener el espectro caracterstico de cada sustancia. El espectro de infrarrojos e un
compuesto proporciona una huella nica con una caractersticas que se distinguen de los modelos
de absorcin del resto de los compuestos por lo que puede ser fcilmente identificable por
comparacin con espectros conocidos.
Se obtiene el espectro de absorcin completo de la muestra de diferentes longitudes de
ondas y se registra automticamente en forma de grficas sobre el papel.
ETIOLOGA, INVESTIGACIN CLNICA Y TRATAMIENTO DE LOS CLCULO MS
COMUNES
A- CLCULOS QUE CONTIENEN CALCIO: la precipitacin de calcio en las vas urinarias
est favorecida por el aumento de su concentracin, y el tipo de sal formada depender del pH de
la orina y de la disponibilidad de oxalato y fosfato. As en el hiperparatiroidismo aparecen
clculos de calcio ya que la excrecin de calcio est muy aumentada.
Un aumento de la excrecin de oxalato favorece la excrecin de oxalato clcico, sal muy
insoluble. El pH adecuado para la formacin del pH de oxalato es neutro ms bien clcico. El
origen del aumento de oxalato en la orina puede encontrarse en la dieta ya que ciertos alimentos
como esprragos, coles, manzanas, uvas, lechuga o espinacas contienen oxalato que se elimina
sin transformar en la orina del metabolismo de lpidos, hidratos de carbono y protenas. En
enfermedades del intestino delgado y en individuos que ingieren grandes cantidades de vitamina
C se produce tambin hiperoxaliuria y litiasis. Como causa muy rara del aumento del oxalato en
orina est la hiperoxaliuria primaria (error congnito del metabolismo oxlico).
B- CLCULOS DE FOSFATO AMNICO-MAGNSICO: un pH alto favorece la formacin
de este tipo de clculos junto con las de fosfato clcico. Este tipo de calcio des muy frecuente en
las infecciones urinarias crnicas por alcalinizacin de la orina debida al metabolismo bacteriano
(infeccin por proteus). Son frecuentes tambin en personas con espina bfida y lesiones
medulares. Aparecern bacteria y leucocitos en orina. El tratamiento sera antibioterapia segn
antibiograma y acidificacin urinaria.
C- CLCULOS DE CIDO RICO: se asocian frecuentemente a hiperuricemia favorecindose
la precipitacin por el pH cido, aunque en un gran nmero de casos no se haya ninguna causa
predisponente. Las posibles causas son: gota, diuresis escasa, enfermedad intestinal crnica
(como una diarrea crnica) tratamiento antitumoral (quimio para una leucemia),... Estos clculos
son transparentes a los rayos X y el tratamiento adecuado sera elevar el pH urinario y evitar
alimentos ricos en purina: carnes, pescado y mariscos.
D- CLCULOS DE CISTINA: son muy raros. En las cistinurias (error congnito del
metabolismo de la cistina) la concentracin de este aminocido en la orina rebasa los lmites de
solubilidad y aparecen clculos renales radio-opacos como el cido rico, la cistina es menos
soluble a pH cido por lo que el tratamiento consistira en alcalinizar la orina y ralentizar el
aporte de lquidos 3-4 litros/das.

E- CLCULOS DE XANTINA: son poco frecuentes y pueden ser debidas a un error congnito
del metabolismo de la xantina con dficit de metabolizacin de lo mismo y presencia de
xantiuria.
PREGUNTAS
1- Definicin de litiasis renal.
La litiasis renal son concreciones anormales presentes en el rin en las vas urinarias.
2- Clasificacin de los clculos segn su composicin qumica
Clculos que contienen calcio: oxalato clcico fosfato clcico.
Clculos de fosfato amnico-magnsico estruvita .
Clculos que contienen cido rico.
Clculos que contienen cistina.
3- Menciona los 4 mecanismos de formacin de los clculos
Aumento de la concentracin urinaria de las sustancias formadoras de clculos
Cambios en el pH
Anormalidades de las vas urinarias
Promotores e inhibidores de la cristalizacin
4- En que consiste el examen macroscpico del calcio
Lavar el clculo para eliminar los restos de sustancias que pudiera podido arrastrar en su
salida al exterior
Medirlo en centmetros
Describir sus caractersticas macroscpicas: aspecto, color y forma.
Cortar y observar su aspecto interno, buscando cualquier cuerpo extrao que haya servido
de ncleo.
5- Clculos de xantina.
Son poco frecuentes y pueden ser debidas a un error congnito del metabolismo de la
xantina con dficit de metabolizacin de lo mismo y presencia de xantiuria.

TEMA 10
TCNICAS DE SEPARACIN DE SUSTANCIAS
Frecuentemente en la prctica diaria de un laboratorio de bioqumica es necesario recurrir
hacia otras tcnicas para poder separar unas sustancias de otras el objetivo final de dicha
separacin suelo ser la posterior identificacin de aquello que se ha conseguido separar y
tambin frecuentemente su cuantificacin. Las tcnicas ms usadas actualmente para la
separacin de sustancias en cualquier laboratorio estn basadas en los siguientes principios:
Diferencias de densidad entre las distintas sustancias:
~ Centrifugacin
~ Decantacin
Diferencias de tamao:
~ Filtracin

~ Dilisis
Diferencias de solubilidad:
~ Extraccin
Diferencias en cuanto a carga elctrica:
~ Electroforesis
Diferencias en cuanto a solubilidad, capacidad de absorcin, absorcin, etc:
~ Cromatografa
CENTRIFUGACIN
Gran cantidad de determinaciones en el laboratorio comienzan con una centrifugacin de
la muestra que en general va a permitir separar el material ms denso o pesado del resto
(sobrenadante).
El aparato utilizado para ello denominado centrfuga genera un campo de fuerza tal que
las partculas de material centrifugado de mayor densidad migaran ms rpidamente que las de
menor densidad.
Lo ms importante con respecto a la potencia de una centrfuga relativa que viene dada
en g y que puede calcularse numricamente mediante la expresin siguiente:
FcR = k r (r.p.m.)2
k constante que depende que depende de la velocidad angular. Tiene un valor de
1118 10-5
r radio en centmetros entre el eje de la centrfuga y el centro del tubo que se est
centrifugando.
r.p.m. nmero de vueltas que gira la centrfuga por cada minuto.
O tambin mediante el nomograma que relaciona la FcR con el radio en centmetros y las
r.p.m.
En el caso de las microcentrfugas (para centrifugar tubos capilares) se deben de alcanzar
las 10.000 g. En general cuando lo que se pretende separar es suero o plasma se utilizan
alrededor de 2.000 g aunque estos valores pueden ser siempre modificados segn las
necesidades.
Para separaciones analticas o cuando la centrfuga persigue la preparacin de la muestra
para posteriores analticas pueden utilizarse las denominadas ultracentrfugas que pueden llegar
a superar valores de 100.000 g.
En general para una misma centrfuga la duracin de la sedimentacin de las partculas y
su aceleracin centrfuga son inversamente proporcionales de manera que si se duplica la
aceleracin y el tiempo de centrifugacin puede reducirse a la mitad y viceversa.
En el nomograma la determinacin de la potencia de una centrfuga se hace mediante el
uso de una regla. Se une el radio (escala de la izquierda) con el nmero de r.p.m. (escala de la
derecha) y el punto de interseccin de esta recta con la escala central nos va a indicar la potencia
de la centrfuga expresada en g.
FILTRACIN
Es la separacin de las partculas de un slido del lquido con el que se encuentra en
contacto mediante la utilizacin de un cuerpo permeable y poroso denominado filtro a travs de
cuyos poros pasa fcilmente el lquido (filtrado) y quedando el slido (residuo) retenido. Los
filtros ms usados en el laboratorio son:
Papel de filtro
Placas filtrantes
El papel de filtro se utiliza muy poco en el laboratorio qumico. Presenta poros cuyo
dimetro es variable y permite elegir en cada caso el ms conveniente en funcin del tamao de
las partculas. El objetivo final de cualquier filtracin es que esta sea rpida y que la retencin

del slido sea total para lo cual una eleccin adecuada del tamao del poro es fundamental.
Cuando este tamao es excesivamente grande el slido atravesar el filtro mientras que si es
demasiado pequeo la filtracin ser muy lenta.
Los filtros de papel son de un solo uso y para su correcta utilizacin han de colocarse en
un embudo adecuado.
Existen filtros de papel endurecidos que por sus caractersticas presentan mayor
resistencia al agrietamiento por la humedad y la accin qumica de cido y bases aunque para
apaliar estos problemas es recomendable el uso de las membranas filtrantes: stas estn
formadas por polvo de vidrio aglomerado y normalmente estn ya montadas sobre un embudo o
sobre un crisol. Permiten llevar a cabo repetidas filtraciones aunque es imprescindible proceder a
una adecuada limpieza cada vez que se utilizan son muy resistentes a la agresin qumica.
Mtodos de filtracin:
El paso del slido a travs del filtro puede realizarse por accin del a gravedad o por
succin.
La filtracin por gravedad utiliza papel de filtro (liso o de pliegues) colocado en un
embudo en posicin vertical por el cual desciende el lquido por accin de la gravedad. El filtro
liso es el ms indicado cuando se pretende recoger el slido tras la filtracin. El filtro de pliegues
aunque est comercializado puede prepararse fcilmente en le laboratorio. La filtracin se lleva a
cabo vertiendo a un ritmo adecuado aquello que se desee filtrar en el interior del embudo. Para
evitar salpicaduras es conveniente que la varilla del embudo toque la pared interior, del vaso
colector (el que recoge el filtrado). Dicha varilla ha de estar a la suficiente altura como para que
se encuentre siempre por encima del nivel de filtrado.
Siempre que sea posible se debe dejar reposar la muestra antes de mezclar para que las
partculas slidas se sedimenten y la filtracin sea ms rpida. El filtro no debe llenarse nunca
hasta el borde. Cuando tras la filtracin el filtrado no aparece claro hay que pensar que el filtro
no tena la porosidad adecuado.
La filtracin por succin utiliza como medio filtrante un papel de filtro colocado en un
embudo especial provisto de una placa perforada (Bchemer) o bien una placa filtrante montada
en un embudo o crisol. El embudo se ajusta perfectamente a la boca del recipiente de recogida
mediante una junta de goma, la filtracin se produce por succin para ello se conecta el matraz
(kitasato) mediante una tubuladura lateral a una bomba de vaco como consecuencia el lquido
que se encuentra en el embudo es aspirado y la filtracin se produce con cierta rapidez. Es
imprescindible que todas las conexiones estn bien ajustadas para evitar que entre aire en el
interior del matraz, cuando se usa un papel de filtro este debe recortarse perfectamente ajustado a
la medida del embudo. Al comenzar a filtrar es conveniente usar un vaco moderado para evitar
que las partculas ms finas puedan atravesar el filtro o bien obstruyan los poros. Finalizada la
filtracin es conveniente desconectar el dispositivo antes de cerrar el grifo de lo contrario es
posible que entre agua y se mezcla con el filtrado.
DILISIS
En la dilisis una bolsa o vaina con estructura de membrana semipermeable se llena con
la muestra, las macromolculas presentes en la misma quedan retenidas mientras que el lquido y
las molculas de menor tamao atraviesan la membrana. El intercambio de material se produce
por difusin y por tanto es un proceso lento. Un mtodo para acelerarlo consiste en ejercer una
presin sobre la muestra que se ha de realizar por filtracin molecular. Las membranas utilizadas
tienen un dimetro de poco comprendido entre 15 y 0025 micrmetros (10 -3). La filtracin
molecular se puede utilizar para el enriquecimiento proteico de fluidos biolgicos que como la
orina o el lquido cefalorraqudeo son pobres en protenas. El agua, las pequeas molculas y los
electrolitos presentes en ellos atraviesan la membrana mientras que las macromolculas
(especialmente las protenas) al no poder atravesarla se van concentrando.

DECANTACIN
Es un mtodo de separacin consiste en mantener la mezcla a separar en reposo durante
un cierto tiempo para que el slido sedimente totalmente en el fondo del recipiente y
posteriormente extraer cuidadosamente el sobrenadante con ayuda de una pipeta pasteur o
similar por succin.
Un mtodo alternativo utilizado para el estudio del sedimento urinario consiste en inclina
cuidadosamente el recipiente que contiene la muestra tras la sedimentacin vertiendo lquido
sobrenadante y manteniendo el slido en el fondo.
Es un mtodo menos eficaz que la filtracin. Esto ltima tcnica cuando se realizada
despus de un decantacin es ms rpida.
EXTRACCIN
Es la separacin de una o ms constituyentes de una mezcla mediante un disolvente. Para
conseguir una buena extraccin el disolvente utilizado debe:
Tener un buen poder separador, es decir, ser capaz de disolver perfectamente la
sustancias que se quiere extraer sin disolver las restantes.
Poder ponerse en contacto con la sustancia a extraer.
Este procedimiento se utiliza en el laboratorio con cierta frecuencia para:
Eliminar impurezas de una muestra
Conseguir el enriquecimiento de ciertos compuestos qumicos.
Bsicamente se distinguen 2 tipos de extraccin:
Slido-lquido: consiste en la separacin de una o ms componente de una mezcla
slida mediante un disolvente lquido y tiene lugar en 2 etapas fundamentales:
1- El contacto del disolvente con el slido
2- La separacin de la disolucin del resto del slido
en la primera de ellas tiene lugar la separacin de 1 ms componente de una mezcla
slida mediante un disolvente lquido el proceso puede llevarse a cabo a temperatura ambiente o
en caliente en cuyo caso para evitar prdida de disolvente puede recurrirse a una ebullicin a
reflujo.
Cuando interesa recuperar el soluto hay que completar el proceso con otra tcnicas como
la destilacin y la evaporacin.
Una variante de la extraccin que se utiliza para evitar el consumo de grandes cantidades
de disolventes es la denominada extraccin continua que mediante el empleo de una serie de
dispositivos especiales permite llevar a cabo buenas extracciones con pequeas cantidad de
disolventes. Este mtodo es muy til cuando la sustancia que se desea extraer es poco soluble en
el solvente o cuando queremos despus de la extraccin recuperar el soluto ya que evita tener
que evaporar grandes cantidades de disolvente.
Uno de los sistemas de extraccin continua ms utilizado es el Soxhlet (extraer grasa de
los alimentos)
Lquido-lquido: la sustancia que interesa extraer forma parte de una disolucin lquida
y se extrae mediante un disolvente lquido para que la extraccin sea efectiva el lquido extractor
debe ser insoluble o muy poco soluble en la disolucin.

Este mtodo de extraccin est basado en la denominada ley de reparto segn la cual la
relacin existente entre las concentraciones de un mismo soluto en 2 disolventes no miscibles
que estn en contacto es una constante (coeficiente de reparto).
La forma ms sencilla para efectuar una extraccin en el laboratorio consiste en agitar
vigorosamente durante unos minutos la mezcla disolucin-lquida extractos en una ampolla de
vidrio denominada embudo de decantacin este embudo debe manejarse con las 2 manos de
forma que con una de ellas se sujeta el tapn de la parte superior y con la otra se manipula la
llave situada en la parte inferior. Tras la agitacin de la mezcla puede producirse una sobrepresin en el interior del embudo que debe ser eliminada peridicamente durante el proceso de
extraccin colocndolo invertido y abriendo la llave ligeramente. Finalizada la extraccin se
procede a separar las 2 capas de lquido (fases) para ello se deja reposar el embudo de
decantacin en posicin vertical el ms necesario. La capa situada en la parte inferior se extrae
por la llave mientras que la superior se extrae por la parte de arriba debido al pequeo dimetro
del embudo de decantacin a la zona cercana a la llave la separacin resulta mucha ms sencilla
y exacta.
DESTILACIN
Es un procedimiento que consiste en la separacin (por accin del calor) de un lquido
voltil de una sustancia no voltil o bien de otro lquido cuyo punto de ebullicin sea distinto
(cuanto ms diferente sea mejor ser la separacin) recogiendo los vapores en un recipiente
apropiado tras su condensacin. Se desarrolla en 2 etapas. Durante la primera el lquido alcanza
su punto de ebullicin y pasa a vapor en la segunda se condensa y es recogido en un recipiente
diferente. La destilacin se clasifica en 2 tipos fundamentales:
Simples: permite separar un lquido de un slido o 2 lquidos cuyos puntos de ebullicin
difieren en ms de 80C.
Un destilador en general consta bsicamente de:
~ Un matraz donde hierve el lquido
~ Un refrigerante en el que se condensan los vapores
~ Un recipiente colector en el que se recoge el lquido ya condensado.
Fraccionado: se utiliza para separar mezclas de 2 lquidos cuyo punto de ebullicin es
muy aproximados. Por ejemplo el agua a 100C y el etanol a 645C. una destilacin normal no
permite separarlos ya que el vapor formado contiene una mezcla de ambos. El componente ms
voltil de la muestra (en este caso de alcohol) se va a encontrar en mayor proporcin en el vapor
formado que en el lquido de manera que si el vapor condensa y hervimos este lquido en el
nuevo vapor formado habr un aumentado la proporcin de alcohol. De esta manera por medio
de varias destilaciones sucesivas podran separarse ambos lquidos. Para simplificar y acelerar
este proceso se pueden emplear las denominadas columnas de destilacin de las cuales las ms
usadas en el laboratorio son:
~ Las de relleno: en su construccin pueden usarse materiales y formas diferentes.
~ Las de Vigreux: son enteramente de vidrio y presentan una serie de hendiduras que
aumenta la superficie de contacto entre este y el vapor formado.

TEMA 11
TCNICAS Y MTODOS INSTRUMENTALES

CLASIFICACIN DE LAS TCNICAS Y MTODOS INSTRUMENTALES

CRITERIO
TCNICA y/o MTODO
A) Seal detectada
Radiacin
Emisin
Espectroscopia de emisin:
Ultravioleta (UV)
Rayos X
Visible (V)
Electrnica
Fluorescencia de rayos X, UV y/o V
Fosforescencia de X, UV y/o V
Absorcin
Espectroscopia de absorcin

Dispersin
Difraccin
Refraccin
Rotacin ptica
Elctrica

Resistencia
Potencial
Carga
Corriente

Razn masa a carga

Radiactividad
Velocidad de reaccin
Propiedad trmica
B) Tipo de medida
nica
Dos
Varias
Directamente el analito
Compuesto relacionado
Presencia / ausencia
Concentracin

Medida puntual
Dos medida
Variacin / tiempo

Aproximada
Exacta

C) Tipo de reactivo
Enzima
D) Tipo de muestra
Muestra problema
Muestra referencia
E) Otros

X
UV
V
Infrarrojos (IR)
Resonancia magntica nuclear (RMN)
Resonancia de Spin electrn (RES)
Espectroscopia Raman
Turbidimetra
Nefelometra
Difraccin de rayos X
Interferometra
Polarimetra
Dispersin rotatoria ptica
Dicrosmo circular
Conductimetra
Potenciometra
Crono-potenciometra
Coulombimetra
Polarografa
Amperometra
Electrometra de masas
Anlisis de activacin isotpica
Anlisis de dilucin isotpica
Cintica de reacciones
Conductividad trmica
Mtodos de entalpa
A punto final
Dos puntos
Cintico
Directos
Indirectos
Cualitativos
Semi-cuantitativos
Cuantitativos
Enzimticos
Analtico
Control de calidad

Patrn
Patrones

Mtodo de adiccin de patrn interno

Mtodo de las adiciones
Mtodo combinado recuperacin-adicin
Mtodo de la recta de calibrado

PARMETROS ESTADSTICOS MS EMPLEADOS

A- Media de la muestra: es el promedio de un conjunto finito de datos.
X: media

: sumatorio de todos los componentes de la muestra. Siendo i = 1

N: total de la muestra

B- Desviacin estndar de la muestra: Se aplica al denominador n - 1 al considerar que

la muestra de un laboratorio de anlisis clnico es una muestra finita, no se refiere a toda la
poblacin.

C- Desviacin estndar relativa: es el valor de la desviacin estndar con respecto a la

X de la muestra expresado en %, , etc.
Si a = 2 la desviacin estndar relativa se conoce tambin como el coeficiente de
variacin (C.V.%)

D- Varianza: es el cuadro de la desviacin tpica.

Ejemplo:

Explicacin:
Y=a+b*x
b = pendiente = h/k
a = blanco = 0 (de la muestra)
y = averiguar (sensibilidad)
x = concentracin del analito (conocida)
a = ya lo sabemos porque es el valor (del blanco para la muestra) que nos la da el
aparato. Lo que nos falta es y, es decir, en que punto de la pendiente estamos (siempre que siga
la linealidad). Siguiendo la frmula hayamos la de la recta de adicin.
PARMETROS ANALTICOS MS EMPLEADOS

Describen las caractersticas de un mtodo, tcnica equipo instrumental en unas

condiciones determinadas son las siguientes:
A- Sensibilidad: de un equipo instrumental, tcnica y/o mtodo analtico se define
como la capacidad de poder diferenciar 2 seales muy parecidas del mismo analito o lo que es
lo mismo entre 2 magnitudes (concentracin, actividades y/o cantidades) similares del mismo.
Si se representa de forma grfica la variacin de la seal que se registra con respecto a
la variacin de un analito en diferentes situaciones patrn, el mtodo, tcnica o equipo
instrumental ms sensible es el que da lugar a una recta de calibracin de mayor pendiente.
Esto significa que con la misma concentracin, un aparato, tcnica o mtodo de mayor
sensibilidad registra una seal de valor superior y tambin que con soluciones de concentracin
muy similares es capaz de registrar una mayor diferencia de seales.

La sensibilidad depende del analito del equipo instrumental, del mtodo y de la matriz
de la muestra (suero, sangre completa, orina, lquido cefalorraqudeo,...) tambin se define
como la mnima cantidad, concentracin y/o actividad que es capaz de detectar par unas
condiciones determinadas de tcnica, equipo y muestra.
Existe un trmino en espectroscopia relacionado con la sensibilidad que es la
sensitividad, que se define como la concentracin de un analito capaz de producir una
absorbancia de 004 (siendo la absorbancia la cantidad de radiacin absorbida).
B- Lmite de deteccin (LD): de una tcnica, mtodo y/o instrumental se define como
la mnima cantidad o concentracin del analito que es capaz de detectar para un nivel de
confianza dado.
Esta magnitud depende de la seal analtica y de la seal del blanco. Cuando la
concentracin del analito de la muestra biolgica problema es similar al LD. Las seales
obtenidas para esta muestra son del mismo orden de las del blanco.
Para su clculo se realiza una recta de adicin con soluciones patrn del analito en una
matriz similar a la muestra biolgica (se va a analizar sueros, preparar las soluciones en suero
fisiolgico) y se registran al menos 20 medidas del blanco. La mayor concentracin del patrn
que se distingue del blanco al menos en 3 veces el valor de su desviacin estndar se considera
como el lmite de deteccin.
Siendo S n - 1 la desviacin estndar de la muestra y b es la pendiente de la recta de
adicin.

C- Lmite de cuantificacin (LC): su valor es el de la menor concentracin del patrn

que se distingue del blanco al menos en 10 veces de su desviacin estndar.

D- Lmite de linealidad (LL): es el valor mximo de concentracin para que la seal

registrada por el instrumento de medida y la concentracin son directamente proporcionales.
Para su clculo se realiza la recta de adicin con concentracin creciente del analito en
las soluciones patrn, hasta que se pierde la linealidad. Al representar grficamente la seal con
respecto a la concentracin se observa el valor de este lmite.

E- Intervalo de concentracin aplicable (ICA): el intervalo de concentracin aplicable

de un mtodo y/o tcnica es el comprendido entre el lmite de cuantificacin y el lmite de
linealidad.

F- Selectividad: es la capacidad de discriminacin entre el analito y otras especies de la

muestra.
Cuanto mayor es la selectividad de un mtodo y/o tcnica analtica, menos se ve
afectada por la interferencias que daran lugar a una lectura errnea del parmetro que se est
analizando. Cuando se optimiza una tcnica analtica se van adaptando las condiciones de
medida con la finalidad de aumentar su selectividad.
Esta magnitud suele expresarse en mtodos relativos como coeficientes de selectividad
(C.S.) de la especie interferente (I) con respecto al analito (A).
Siendo CSI,A coeficiente de selectividad de la especie interferente con respecto al analito
(A). si su valor es 0 se dice que no hay interferencias en al muestra para ese parmetro o
analito A. Si su valor es negativo se interpreta como que la especie interferente ocasiona una
reduccin de la seal con respecto a la que se obtendra con respecto a se esta especie no
estuviera en la muestra, con lo que la concentracin obtenidas sera errnea por defecto. Si es
positiva indica lo contrario la seal obtenida es superior y la concentracin es errnea por
exceso.
bI y bA son los valores de los respectivos puntos de la recta de adicin obtenidas
empleando concentraciones crecientes de la especie interferentes que se pretende evaluar y del
analito.
G- La precisin: es el grado de concordancia entre diferentes medidas de analito
obtenidas en pruebas analticas realizadas en las mismas condiciones.

Esta magnitud describe la reproductibilidad de los resultados. Para indicar la precisin

de un instrumento, mtodo y/o tcnica es necesario explicar las condiciones exactas en las que
se han realizado el anlisis. Se expresa en trminos de coeficientes de variacin cuyo valor
porcentual es el de: coeficiente de variacin CV (%) =
La precisin es mayor cuanto menor es el coeficiente de variacin par que una tcnica
y/o mtodo se considere fiable se establece unos valores ptimos de este coeficiente. A medida
que la tcnica y/o mtodo presenta una mayor complicacin (elevada cantidad de reactivos,
difcil preparacin de los mismos, largos tiempos de medida, variacin de las condiciones
durante el anlisis, etc) o cuando la concentracin del analito en la muestra es reducida, se
permite coeficiente de variacin superiores.
Un resultado elevado de coeficiente de variacin suele indicar la presencia de errores
aleatorios como por ejemplo: la contaminacin de un reactivo o la desviacin de un pH por
aadir una sustancia de forma no intencionada, etc. Pueden considerarse varios tipos de
coeficientes de variaciones segn las condiciones de medidas:
CV instrumental: hace referencia a la precisin-imprecisin del instrumento de
medida. Se calcula realizando el anlisis del mismo alcuota un nmero de veces mayor a 20 y
detecta posibles irregularidades en el aparataje.
CV del mtodo: se calcula preparando una 20 alcuotas de la muestra y midiendo la
seal obtenida en cada una, una sola vez.
CV interda; se calcula midiendo la seal de una alcuota cada da. Nos puede indicar
la tendencia de alguna alteracin en el aparataje.
H- Exactitud: es el grado de concordancia del valor de concentracin cantidad
obtenido por el analista y el valor del analito en la muestra biolgica considerado como real.
El valor real de la concentracin del analito es conocido en el material de referencia de
la misma naturaleza que la muestra problema y analizado en las mismas condiciones que esta.
Hay laboratorios y/o casas comerciales autorizados que preparan estas muestras para la
evaluacin del control de calidad del laboratorio de anlisis clnicos.
Un resultado inexacto al analizar el material de referencia suele indicar la presencia de
errores sistemticos en la medida. Estos errores est definidos, tienen una causa determinada y
afectan do la misma manera a los resultados. Su se repite el anlisis en las mismas condiciones
que cuando aparece el error. Los errores sistemticos se clasifican en:
Errores instrumentales (propios del aparato): circuito electrnico, fugas y/o prdidas,
alteraciones del fluido, alteracin del voltaje, prdida del calibrado.
Errores personales: son fallos en la destreza y forma de trabajo del operador.
Errores del mtodo: prdidas del analito, alteraciones del analito, reacciones qumicas
y/o alteradas, inestabilidad de los reactivos, etc.
Para evaluar la exactitud se establecen unos criterios en los que se indican los lmites
permitidos y el grado de exactitud que se considera para cada intervalo. Se emplean en
adjetivos como adecuado - inadecuado, correcto - incorrecto, excelente - muy bueno - bueno
-regular, inexacto - exacto.
Un ejemplo sera considerar los valores incluidos en el intervalo de la media y la
primera desviacin estndar, como correcto, muy bueno o excelente, los comprendidos entre 1
y 2 desviaciones estndar como adecuado buenos y los valores superiores o inferiores a la
media ms o menos 2 desviaciones estndar como malos, inadecuados incorrectos. Este
intervalo se emplear a medidas que aumentan la dificultad en la tcnica analtica.
Para validar los resultados obtenidos en la analtica hay que refrendarlos adjuntando los
valores de precisin y exactitud obtenidos al analizar material de referencia.
La exactitud se expresa en trminos de error, este puede ser absoluto [Ea] relativo
[Er]. El error absoluto se expresa como una diferencia entre el valor obtenido en la analtica
[X] y el considerado como el real [Xr]

El error relativo se expresa como el porcentaje del absoluto con respecto al resultado
real.
SELECCIN DEL MTODO ANALTICO
Para seleccionar el mtodo analtico correcto de un parmetro en una muestra
determinada hay que responder adecuadamente a varias preguntas y ponderar el resultado
valorando la relacin-efectividad-riesgo-coste de los medios que cada laboratorio dispone.
Criterio de seleccin del mtodo analtico:
CRITERIO RELACIONADO CON A TENER EN CUENTA

Analito
Muestra biolgica

Tcnica aplicada
Resultado
Coste
Operadores

tomo, molcula
Funcin fisiolgica / patolgica
Intervalo de concentracin
Tejido y/o fluido
Cantidad / volumen
Interferencias posibles
Procedencia y nmero de especimenes
Aparataje/ rapidez/ facilidad-dificultad analtica
Interferencias
Precisin instrumental y del mtodo
Rapidez en su entrega (dificultad/ facilidad de obtencin)
Precisin/ exactitud exigidos, necesidad de validacin
Destino (particular, investigacin, exposicin,...
Reactivos, analticas, funcionamiento, aparataje
Destreza
Experiencia en la tcnica

MTODOS USUALES EN EL LABORATORIO DE ANLISIS CLNICO (LAC):

Mtodos analticos ms usuales en bioqumica: en el laboratorio de anlisis clnicos se
realizan las determinaciones de los parmetros analitos en las muestras biolgicas que en l
se reciben y procesan. Las diferentes casa comerciales preparan reactivos para que aadidos a
las muestras biolgicas convenientemente preparadas, en lasa proporciones adecuadas y
establecidas pro ellas, permiten la determinacin de la presencia/ ausencia/ cantidad/
concentracin y/o actividad de los analitos, dependiendo de la sustancias que se vaya a
analizar.
Al unirse la muestra biolgica con los reactivos comerciales, se desencadenan una serie
de reacciones que dan lugar a un cambio apreciable y mesurable (medida) por el equipo
instrumental gracias al cual se puede obtener informacin sobre la presencia- ausenciaconcentracin-cantidad y/o actividad del analito. A + B + C D + E. A es la muestra (analito)
B y C son reactivos con lo que su mezcla da algo diferente que es lo que va a medir.
Las tcnicas analticas son los diferentes procedimientos de anlisis basados en el
comportamiento de la materia ante la energa (elctrica, radiante). Esta unidad didctica se
centra en la espectroscopia, tcnica que estudia el comportamiento de la materia al incidir

sobre ella con energa radiante. En el laboratorio de anlisis clnico los anlisis ms usuales
suelen realizarse con un equipo de espectroscopia cuya fuente de radiacin es ultravioleta y
visible, es decir, con un espectrofotmetro ultravioleta y visible. La seal que registra el
aparato es la absorbancia (cantidad de radiacin absorbida) directamente la concentracin.
Los mtodos analticos se consideran aplicaciones de las tcnicas en casos
determinados, con parmetros y protocolos concretos y suelen recibir nombres que hacen
referencia a alguno de los reactivos empleados (mtodo del verde de bromocresol); a la
persona que optimiz el mtodo (mtodo de Biuret); o a alguna caracterstica analtica (mtodo
de las adiciones), etc.
A veces se emplean indistintamente los trminos mtodo y tcnica sobretodo en anlisis
de rutina. Los mtodos pueden clasificarse en varios grupos dependiendo del criterio
empleado.
A- Segn el desarrollo de la reaccin:
Mtodo a punto final: la reaccin entre la muestra y los reactivos se produce hasta el
final, es decir, se agotan A, B y/o C y se forma D y/o E. En las determinaciones con reactivos
comerciales suele haber exceso de reactivos para asegurar que el parmetro (analito) reaccione
en su totalidad en las condiciones de temperatura, pH, tiempo, etc indicados en su protocolos.
La concentracin del parmetro es directamente proporcional a la concentracin de
alguno de los productos formados en la reaccin bien de forma directa, variacin en la
estructura del parmetro al unirse con algn reactivo; o bien de forma indirecta al aparecer o
desaparecer algn compuesto mesurable por la presencia del parmetro de la muestra
biolgica.
La ley de Lambert-Beer se cumple generalmente en las condiciones establecidas por el
protocolo comercial. En caso de no cumplirse se dan instrucciones que adecuadas de dilucin
de la muestra y el factor de correccin para que se encuentre dentro del rango lineal.
A=bc
A = absorbancia = cantidad de radiacin absorbida igual a la concentracin
a = = absortividad = absorcin de una solucin de concentracin de 1 mol/l a una
determinada longitud de onda y un espesor de cubeta de 1 cm. Es una magnitud caracterstica
de cada sustancia y su valor est tabulado para unas condiciones de pH, longitud de onda,
temperatura., disolvente previamente establecidos.
b = trayecto ptico = su valor est estandarizado en 1 cm. Es la longitud de la muestra
que atraviesa la radiacin cuando esta se encuentra depositada en una cubeta. Es una medida
estandarizada para todos los espectrofotmetros.
c = concentracin de la sustancias analito = suele expresarse en moles/l (con la
absortividad molar) o gr/l )absortividad). Por lo tanto = coeficiente de extincin molar si
c = moles/l. = coeficiente de extincin si c = gr/l.
Para la determinacin de la concentracin problema (la del parmetro) se suele emplear
una solucin acuosa patrn del mismo parmetro, de concentracin conocida e indicada por la
casa comercial. Si aplicamos la ley de Lambert-Beer para la solucin patrn y para la muestra
problema: Apt = b cpt y Apr = b cpr. Como el valor de es el mismo y b es igual a 1
cm en las 2 ecuaciones, si se divide y se despeja el valor de la concentracin del parmetro en
la muestra se obtiene que este valor es:

Mtodos cinticos: se mide la velocidad de la reaccin antes de que esta concluya. Es

muy importante mantener las condiciones de la reaccin descritas en los protocolos

comerciales sobre la temperatura, tiempo de medida, etc, para garantizar la fiabilidad de los
resultados.
En estas determinaciones analticas la absorbancia no es directamente proporcional a la
concentracin del parmetro biolgico en la muestra problema. Es la variacin de la
absorbancia durante una unidad de tiempo establecida lo que es proporcional a la
concentracin y/o actividad del parmetro.
Esto es debido a que la presencia del parmetro en la muestra va a dar lugar a la
aparicin o desaparicin de sustancias capaces de absorber la radiacin a la longitud de onda
de medida. La presencia del parmetro, incluso es a veces el mismo parmetro biolgico el que
vara por accin de los reactivos. La ley de Lambert-Beer que se aplicar en estos caso queda
modificada o adaptada como A = b c. Siendo la letra griega delta la que representa la
variacin de la magnitud que viene a continuacin, en este caso la absorbancia (A tambin se
llama extincin (E) densidad ptica (DO)) por lo que tambin se expresa como
A = DO.
Generalmente se toma el minuto como la unidad de tiempo de medida de la DO por lo
que se expresa DO/minuto = b c.
Al ser b, 2 valores constantes se expresa su producto como un factor numrico su
producto como un factor numrico que a menudo lo proporciona las casas comerciales de tal
manera que la concentracin del parmetro la expresaramos como DO/min = e b c
La reaccin que da lugar a una variacin de la absorbancia se desencadena al aadir los
reactivos a la muestra biolgica convenientemente preparada y con las condiciones de reaccin
controlada.
A mayor concentracin del parmetro biolgico mayor ser la variacin de la
absorbancia en la unidad de tiempo. En el caso de que el parmetro sea una enzima y que lo
que se est determinando sea su actividad enzimtica la DO en la unidad de tiempo ser
directamente proporcional a su actividad.
B- Segn algunas caractersticas de la reaccin:
Mtodos colorimtricos: se denomina as las determinaciones analticas que se miden
empleando por dentro del visible. Tambin se pueden llamar as haciendo referencia a un tipo
de reactivos los cromgenos que son sustancias coloreadas o capaces de formar compuesto
colorados y que por lo tanto absorben el visible. Estos compuestos pueden:
1- Unirse al parmetro y formar un compuesto coloreado.
2- Aparecer en el medio como consecuencia de la existencia del parmetro (se genera
en el medio de la reaccin a causa de la presencia del parmetro buscado).
3- Desaparecer a causa del parmetro.
En cualquier caso la intensidad de color o su variacin es directamente proporcional a
la concentracin del parmetro a determinar. Para determinar la concentracin se pueden
emplear patrones acuosos y la siguiente expresin:
Ya que suelen ser generalmente reacciones a punto final y aunque a veces tambin pueden ser
reacciones colorimtricas y cinticas.
Mtodos enzimticos: son aquellos mtodos analticos en los que algunos de los
reactivos son enzimas. No tienen porque ser mtodos donde lo que se mida sean actividades
enzimticas. El enzima aadido como parte de los reactivos al unirse al parmetro desencadena
una reaccin que permite su determinacin bien con la aparicin de un compuesto coloreado
(reaccin a punto final), o bien por D/ut (mtodo cintico.
C- Otros mtodos usuales en el laboratorio de anlisis clnico:

 Mtodo de la curva o recta de calibracin: se produce in vitro una reaccin qumica en

la que participa el analito, bien puede ser una reaccin fisiolgica o bien otro tipo de reaccin
basado en alguna propiedad fsica qumica para ello se dispone de diferente soluciones patrn
de cantidad, concentracin actividad conocida del analito y se desencadena esta reaccin con
cada uno de los puntos.

Los valores de los estndares don del orden de los que normalmente se encuentran en
las muestra biolgicas para los parmetros o analitos estudiados. La matriz de las soluciones
estndar a de parecerse lo ms posible a la matriz biolgica de la muestra, por ejemplo: si el
analito se encuentra en el suero se prepara los estndares en suero fisiolgico.
Se representa la seal detectado (eje de ordenadas variable dependiente Y)con
respecto a la magnitud conocida de las soluciones patrones (eje de abscisas variable
dependiente X) y as queda registrado el comportamiento del ante la escala de valores.
Entre la seal y la magnitud (concentracin) existe una relacin directamente
proporcional cuya representacin se aproxima a una recta aunque tambin, este mtodo, se
conoce como el de la curva de calibracin porque no es un relacin lineal para todos los rangos
de concentraciones sino que cuando la magnitud analizada alcanza valores elevados se pierde
la linealidad. Debidos a los errores aleatorios no sigue exactamente una relacin lineal como
ocurrira en una representacin terica. La ecuacin de la recta es y = a + b x, siendo a el
origen de coordenadas, y b la pendiente de la recta.
Cuando se analicen la muestras problemas se provoca una reaccin idntica a la
realizada con los patrones y se emplean los mismos reactivos. Para calcular la cantidad ,
concentracin actividad del analito, se interpola (intercala) la respuesta del parmetro a
analizar en la recta grfica de calibrado en la ecuacin del recta y as se encuentra la
magnitud buscada que es x. Siempre que se disponga de los reactivos con los que se ha
elaborado la recta, puede emplearse los datos obtenidos en la grfica o registrados en el
ordenador del equipo instrumental.
La preparacin de las solucin estndares es laboriosa pro lo que slo tiene sentido el
empleo de este mtodo si el volumen del trabajo a realizar es elevado; si hay que analizarse
muchas muestras.
Mtodo de la adiccin de patrn: se emplea cuando existe un gran nmero de
variables que pueden interferir en el anlisis y/o para comprobar que la determinacin no
existen prdidas de analito ni contaminaciones con otras sustancias diferentes a l que dara
lugar a resultados errneos por exceso o por defecto respectivamente
Para ello se aade tanto a las muestras problemas como a las soluciones estndares una
cantidad conocida del analito (solucin patrn). La relacin entre la seal obtenida por el
analito sin adicin y la obtenida tras la adicin interno se utiliza para el clculo de la magnitud
a analizar.
Para comprobar si existe prdida o contaminacin del analito se realiza un ensayo de
recuperacin de la cantidad aadida. Si se conoce es recomendable aadir una cantidad 3 veces
mayor al intervalo de concentraciones que se espera encontrar en la muestra problema.

Se analiza la muestra adicionada, la muestra sin adicional y el blanco. Para calcular el

porcentaje de patrn aadido se aplica la siguiente expresin:
Recuperacin (%) = 100
MA = concentracin del analito en la muestra adicionada
MX = concentracin del analito en la muestra SIN adicionar.
Mad = concentracin aadida del analito

Mtodo de las adiciones: se aplica cuando existe interferencias de matriz (fluido

biolgico que contiene el analito, suero, orina, sangre completa) cuando la concentracin del
analito es bastante pequea.
Para ellos se aade a varias alcuotas de la muestra problema una cantidad conocida de
un patrn del analito preparando la muestra sin adicionar aadiendo la misma cantidad de agua
que en el patrn se aada en el resto de las muestras. Se registra la seal de cada muestra y se
calcula la recta de adiciones cuya expresin ser y = a + b x donde b es la pendiente de la
recta x es la concentracin del analito y es la seal registrada (absorbancia) y a ese el origen de
coordenadas. La concentracin del analito en la muestra se calcula despejando el valor de x.
Las clasificaciones no son excluyentes sino que permite la descripcin ms detallada
del mtodo analtico como se muestra en el siguiente cuadro (fotocopia).

TEMA 12
CROMATOGRAFA
DEFINICIN
Conjunto de tcnicas de separacin que se basa en los diferentes afinidades de los
componentes de una mezcla por 2 fases diferentes una mvil y otra estacionaria.
La fase mvil es un fluido, lquido gas en el cual estn disueltos los solutos que se van
a separar y la fase estacionaria (lquido slida) es el lecho a travs del cual va a fluir la fase
mvil.
Los componentes de la mezcla se desplazarn a diferentes velocidades segn su mayor
menor afinidad por la fase estacionaria: a menor afinidad mayor velocidad y viceversa.

A consecuencia de esta diferencias de movilidad las distintas sustancias que componen

la muestra se separan en una serie de bandas que pueden ser analizadas tanto cualitativamente
como cuantitativamente.
Las ventajas de la cromatografa como mtodos de separacin de sustancias son las
siguientes: gran rapidez, simplicidad, coste moderado, tiene gran aplicacin como mtodo de
separacin y la posibilidad de proporcionar resultados cuantitativos.
CLASIFICACIN
1- Segn el estado fsico de la fase mvil
Cromatografa lquida LC
Lquido (fase mvil) Lquido (fase estacionaria) (Cromatografa de reparto)
Lquido (fase mvil) Slido (fase estacionaria) (Cromatografa de adsorcin)
Intercambio inico
Exclusin por tamao
Cromatografa gaseosa GC
Gas (fase mvil) lquido (fase estacionaria)
Gas (f mvil) fase enlazada (son especies orgnicas enlazadas a una superficie
slida
Gas (fase mvil) slido (fase estacionaria)
Cromatografa de fluidos supercrticos
Fase mvil es un fluido supercrtico y la fase estacionaria son especies orgnica
enlazadas a una superficie slida.
Los fluidos supercrticos son compuestos con densidades, viscosidades y otras
propiedades intermedias entre las de unas sustancias en estado gaseoso y el lquido.
Propiedades es una tcnica hbrida ente la cromatografa de g as y la lquida se realiza
en columna se analizan compuestos que no pueden ser analizados ni por cromatografa
de gas ni por cromatografa de lquidos, compuestos no voltiles a los que no se le
puede aplicar cromatografa de g as y compuestos que no poseen grupos funcionales
que hacen posibles aplicar cromatografa de lquido.
2- Segn la disposicin de la fase estacionaria:
Cromatografa plana: la fase estacionaria se encuentra extendida en una superficie plana.
Cromatografa en papel: la fase estacionaria es agua retenida entre las fibras de celulosa
de una hoja de papel.
Cromatografa en capa fina: el soporte es una capa fina de un material porosos
extendido sobre una placa de vidrio, plstico o metal (por lo que fluye la fase mvil por
capilaridad).
Cromatografa en columna: la fase estacionaria se encuentra empaquetada en el interior de
un tubo de longitud y dimetros variables.
3- Segn el tipo de interaccin entre fase estacionaria y los componentes que vamos a separar
(fase mvil):
Cromatografa de adsorcin: retencin inespecfico de molculas sobre un slido.
Cromatografa de reparto: los solutos se separan por su diferente solubilidad ente una fase
mvil y una fase estacionaria inmiscibles (no solubles) entre s.
Cromatografa de intercambio inico: la separacin se basa en la interaccin electrosttica
entre grupos ionizables de los componentes de la mezcla y de los grupos cargados de la fase
estacionaria por tanto se separan en base a la diferencia en cuanto al signo y magnitud de sus
cargas.
Cromatografa de penetrabilidad filtracin en gel exclusin molecular: los diferentes
componentes se separan en funcin de su forma y tamao.

Cromatografa de afinidad: la separacin se basa en interacciones especficas entre 2

molculas. Ejemplo: antgeno-anticuerpos.
CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
Normalmente se realiza en columna que se llene de la sustancia adsorbente adecuada
las sustancias a separar en la parte superior de la columna.
Los diferentes disolventes que van pasando a lo largo de la columna separan los
diferentes componentes de la muestra.
Tras la cromatografa cada componente va a salir de la columna en momentos
diferentes pudiendo as ser separados (Elusin: es el paso de la fase mvil hasta la salida de los
solutos).
Los adsorbentes ms usados son albmina, slice y carbonato clcico (CO 3Ca) y los
disolventes ms usados son ter de petrleo tetracloruro de carbono (Cl 4C), ter etlico,
acetona, benceno, metanol, etanol y agua.
La utilidad ms importante es la separacin de diferentes sustancias en orina por
ejemplo las catecolaminas.
CROMATOGRAFA DE REPARTO
Permite separar sustancias en base a la diferente distribucin (diferente solubilidad) de
estas en una fase orgnica y en una fase acuosa. Puede realizarse: en papel, en capa fina o en
columna.
La cromatografa en papel es fundamentalmente una tcnica de reparto lquido-lquido
en la que el agua suele actuar como fase estacionario y distintos disolvente orgnicos como
fase mvil.
Se define como Rf (factor de retencin coeficiente de reparto) como el coeficiente
(entre la distancia recorrida ms dicha sustancia y la distancia recorrida por el frente
cromatogrfico, es caracterstico de cada sustancia y vara con la temperatura, pH del medio y
cantidad de muestra aplicada.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO
Estn basadas en las interacciones electrosttica entre grupos ionizables de las
sustancias a separar y grupo cargados unidos a un soporte inerte (Resina).
Los cambiadores inicos (resina) son sustancias insolubles que contienen grupos
cargados unidos covalentemente a iones mviles de signo contrario que neutralizan los grupos
fijos.,
Estos mviles pueden intercambiarse de forma irreversible con otros iones de la misma
carga.
Los cambiadores tanto catinicos como aninicos pueden ser fuertes o dbiles. El
mecanismo de accin de esta cromatografa es la unin reversible entre los compuestos o
separar y los cambiadores de manera que una vez introducidos en la columna los diferentes
componentes se quedan ms o menos retenidos dependiendo de la interaccin con los
cambiadores presentes en la columna.
A continuacin se introduce un tampn a pH adecuado que va a permitir que las
sustancias separadas y retenidas se liberen de la unin con el cambiador y salgan ya separadas
de la columna.
La utilidad de este mtodo es la aplicacin bioqumica para la separacin de
aminocidos, pptidos, protenas, nucletidos y en general para compuestos de naturaleza
inica (hemoglobina, isoenzimas,...)
CROMATOGRAFA DE PENETRABILIDAD

Se separar las sustancias en funcin de sus forma y tamao. La fase estacionaria es un

gel (polmero anhidro deshidratado, muy hidrfilo) que se hincha al sumergirlo en agua o en
solucin electrolticas.
La fase mvil es agua o cualquier solucin electrolticas
La elusin o salida de las sustancias de la columna slo depende de la forma y tamao y
es independiente del eluyente o fase mvil utilizado, de su pH y de su fuerza inica.
Una vez introducidas en el gel cuanto menor, sean las molculas de la sustancia que
separan ms tardarn en salir de la red y por tanto diluirn ms tarde.
Utilidad: separacin de sustancias de peso molecular elevado (por ejemplo pptidos,
protenas polisacridos o tambin purificacin de ciertas sustancias).
ANLISIS CUALITATIVO
A nivel cualitativo la cantidad de informacin obtenida a partir de una cromatografa es
limitada: obtenemos datos de tiempo de retencin y datos de posicin de la sustancia en la fase
estacionaria tras la evolucin; comparadas con otras tcnicas como la espectroscopia de masa o
la resonancia magntica nuclear.
La cromatografa es una tcnica muy usada para detectar la ausencia de determinados
componentes en mezclas con un nmero limitado de compuestos de los cules se conoce una
determinada sustancia no quiere decir que est ausente si no que puede estar presente a una
concentracin menor al lmite de deteccin del sistema utilizado.
ANLISIS CUANTITATIVO
Las tcnicas cromatogrficas pueden tambin proporcionar:
En cromatografa plana el rea cubierta por las sustancias separadas sirve como
parmetro para el anlisis cuantitativo.
En cromatografa en columna se usa la altura o rea de los diferentes pocos obtenidos
al compararlos con determinaos patrones.
El mtodo ms senillo es someter a una cromatografa, una serie de diluciones
obtenidas a partir de un punto cuya composicin es similar a la de la muestra problema.
Seguidamente se obtienen los cromatogramas de los diferentes patrones y se representan
grficamente las alturas o reas de pico en funcin de la concentracin.
La representacin de los datos deben dar una lnea recta que pase por el origen de
coordenadas. Los anlisis cuantitativos estn basados en la grfica as obtenida.
CROMATOGRAFA PLANA
Integra un conjunto de tcnicas en que la fase estacionaria se encuentra extendida en
una superficie plana y la fase mvil lquida se desplaza por capilaridad o adsorcin.
Destacan la cromatografa en papel (PC) y cromatografa en capa fina (TLC Thin
Layer Chromatography).
Cromatografa en papel: es esencialmente una cromatografa de reparto en donde la
fase estacionaria es el agua retenida entre las fibras de celulosa de una hoja de papel y la fase
mvil suele ser un disolvente orgnico o bien una mezcla de disolventes, es por tanto una
cromatografa lquida-lquida.
La tcnica consiste:
~ Aplicacin de la muestra (1 gota de forma que el dimetro de la muestra no sobrepase
los 5 ml) sobre el papel sobre un extremo de este con un capilar o una micropipeta. Esperas a
que se seque.
Las caractersticas del soporte del papel influyen decisivamente en la velocidad de
desarrollo y por tanto en la eficacia de la separacin.

~ Una vez seco introduccin del soporte (tira de papel) en una cmara que consiste en
una cubeta de vidrio bien cerrada que contiene el eluyente lquido de desarrollo y en posicin
vertical.
~ Se deja que fluya el eluyente por capilaridad a travs de la tira de papel, arrastrando a
su paso los componentes de la tira de la muestra. Dichas componentes se irn separando en
funcin de reparto entre las 2 fases de forma que en sustancias muy solubles en el lquido de
desarrollo se movern libremente con este mientras que las que sean muy solubles en agua
quedarn retenidas.
~ Cuando el solvente a alcanzado el frente del papel se quita la tira de la cmara y se
deja secar. Se marca el nivel exacto alcanzado por el solvente o eluyente.
~ Las sustancias separadas se detectan mediante el revelado: bien directamente si son
coloreadas bien por algn mtodo de deteccin que las haga visibles (fsicas qumicas).
Los diferentes solutos habrn avanzado ms menos segn su coeficiente de reparto la
distancia avanzada se mide en relacin con la distancia avanzada por el frente del soluto este
nmero que expresa esta distancia es Rf.
Este nmero Rf es caracterstico para cada soluto para unas condiciones de trabajo
constante y sirven por tanto para la identificacin de sustancia (anlisis cualitativo). Este Rf
est condicionado por varios factores:
~ La composicin del lquido en desarrollo
~ La temperatura de realizacin de la tcnica cromatogrfica
~ Caractersticas del soporte (papel) usado (grosor, tamao del poro,...)
La eleccin del lquido de desarrollo es fundamental para obtener una buena separacin
y esta va a depender de la naturaleza de las sustancias que se desean separar, as:
~ Para separar compuestos polares se usan eluyentes con agua.
~ Para sustancias poco polares eluyentes no acuosos.
Para determinaciones cuantitativas usamos fotometra y comparacin con patrones.
El revelado de las manchas se pueden realizar por mtodos fsicos y qumicos.
Los mtodos fsicos consiste en pulverizar una sustancia fluorescente (fluorescena)
sobre el soporte de papel de manera que al iluminarlo con una fuente de luz ultravioleta se
observan las diferentes manchas oscuras sobre un fondo fluorescente. Los procedimientos
qumicos ms usados consiste en pulverizar el soporte de papel con agentes reveladores que
dan reacciones coloreadas con los diferentes componentes de la muestra problema. Podemos
usar 2 sustancias:
~ Ninhidrina al 025% en acetona ( bien al 3% en etanol): para revelado de aminocid
~ Nitrato de plata amoniacal ftalato de anilina al 25% en butanol para el revelado de
azcares.
En los tipos de cromatografa en papel el proceso puede desarrollarse de 3 formas:
~ Ascendente: el eluyente sube por el soporte.
~ Descendente: el papel se mantiene colgado de la parte superior del recipiente y el
eluyente va descendiendo.
~ Bidimensional: consiste en ejecutar una segunda cromatografa girando el papel 90 y
empleando un disolvente diferentes de forma que sustancias que en una primera separacin
quedaron muy juntos se podran separar en el segundo proceso.
Cromatografa en capa fina: en este tipo de cromatografa el soporte es plano y
consiste en una cromatografa de un material poroso extendido sobre una placa, vidrio, plstico
metal por el que fluye la fase mvil por capilaridad.
Es un tcnica de reparto en la que tambin son muy importantes las interacciones por
adsorcin.
El material poroso puede ser:
~ Gel de slice silica-gel

~ Celulosa
~ Poli amida
~ Gel de xido de aluminio
~ Gel de silicato magnesio
La aplicacin de muestras y el desarrollo cromatogrfico es similar a la cromatografa
en papel con la salvedad de que siempre es ascendente. Frecuentemente se usa la tcnica
tridimensional combinando 2 sistemas distintos de disolvente. La cromatografa en capa fina
Eq-100, es una tcnica ms rpida y sensible que la cromatografa en papel y se usa para
separar sustancias de bajo peso molecular (aminocidos, lpidos, e carbohidratos). La elusin
de los componentes se realiza mediante raspado de las distintas manchas en el soporte y
posterior extraccin con disolventes adecuados. Una vez extrados se procede a su
identificacin y cuantificacin.
CROMATOGRAFA EN COLUMNA
Los mtodos en columna se emplean para varios tipos de cromatografa tanto en
cromatografa lquida como gaseosa, tanto en fase estacionaria lquida como slidos.
Los mecanismos en virtud de los cuales se produce la separacin son de diferentes tipos
~ Adsorcin
~ Reparto
~ Intercambio inico
En este mtodo de cromatografa la fase estacionaria se dispone como el relleno de un
recipiente cilndrico abierto por varios extremos y de longitud y ancho variable que se
denomina columna, este relleno denominado tambin lecho cromatogrfico puede ser la propia
fase estacionaria o ir asociada a un lquido que constituye la fase estacionaria.
La fase mvil es un solvente que se hace pasar a travs de la columna o bien un gas.
El flujo de la fase mvil puede estar propiciado por la accin de la gravedad (sera una
cromatografa convencional) bien por un sistema de bombeo de alta precisin (Sera una
HPLC).
La muestra se deposita sobre la parte superior del lecho cromatogrfico se abre la
columna por el extremo opuesto y se deja que vaya fluyendo hacia el interior del lecho. Antes
de que se seque se aade nueva fase mvil y se contina as hasta el final del proceso.
El eluido es fraccionado en tubos de ensayo de forma que se obtiene distintas fracciones
de fase mvil que contiene concentraciones elevadas de los distintos solutos.
El desplazamiento de los diferentes componentes de la muestra solo puede ocurrir en la
fase mvil y por tanto la velocidad de emigracin va a depender del tiempo que cada
componente permanezca en esta fase. Esta fraccin de tiempo de tiempo va a ser pequea para
aquellas sustancias que son retenidas fuertemente por la fase estacionaria y viceversa. En
cualquier caso la diferencia de velocidad de los diferentes componentes va a permitir su
separacin, objetivo final de la cromatografa.
Como detector debe ser utilizado aquel que sea capaz de identificar cada una de las
fracciones de la muestra. Si la seal recogida por el detector es representada en funcin del
tiempo se obtiene una grfica (registro cromatograma) donde aparecen una serie de picos que
pueden ser utilizados tanto par el anlisis cualitativo como cuantitativo
La composicin de la fase mvil puede ser constante o variar (mezcla de uno ms
eluyentes en gradiente continuo o discontinuo).
Para que la columna pueda ser reutilizada hay que regenerarse despus de cada uso para
que no queden restos de la separacin anterior. Normalmente se mantienen refrigeradas entre
2-4C.
CONCEPTOS TERICOS IMPORTANTES

Volumen de retencin (VR) volumen de elusin (Ve): es el volumen de fase mvil que
ha de pasar a travs de la columna para que eluya un soluto determinado. Este volumen est
relacionado con la constante de distribucin Kd.
Vm = Vo = volumen de exclusin o volumen vaco = es el volumen de fase mvil
requerido para eluir un compuesto sin afinidad por la fase estacionaria. Kd = constante de
distribucin.
Tiempo de retencin (TR): es el tiempo al que un soluto sale eluido. El tiempo tomado
como referencia ser aquel al que salga eluida una sustancia no retenida en la fase estacionaria.
VR = TR F
F = velocidad de flujo de la elusin (ml/minuto)
VR y TR: son especficos para cada sustancia en condiciones de trabajo constantes por
tanto sirve para determinar las sustancias.
Selectividad (): es el factor que describe la capacidad de separar 2 solutos. Es la
relacin entre los coeficientes de distribucin de los 2 solutos en estudio. En la separacin
entre 2 sustancias se busca que sea lo mayor posible y normalmente que sea mayor que 1.

Resolucin: capacidad del sistema para que las sustancias queden separadas lo mejor
posible. En el cromatograma obtenido tras la elusin y lectura de las fracciones stas nos
aparecen en picos sucesivos correspondiendo cada pico a una sustancia. En el cromatograma se
mide:
~ La distancia a la que aparecen los picos desde un punto de referencia (inyeccin de la
muestra). Las distancias pueden ser medidas como VR y TR.
~ El ancho de la base de cada pico que se mide en las mismas unidades que la anterior.
La resolucin se calcula como:

Para considerar que una separacin cromatogrfica es buena se requiere un valor de

resolucin mayor de 125.
CROMATOGRAFA DE PENETRACIN
Es un tipo de cromatografa lquida. La fase mvil es lquida y la estacionaria es slida.
Se realiza en columnas. El soporte son microesferas formadas por enrejado de un
polmero (agarosa, dextrano, poliacrilamida y metacrilato) que pueden tener diferentes tamaos
de poros. Los huecos o porros de estos enrejados tendrn un tamao determinado por la
concentracin de fibras y el grado de entrecruzamiento de las mismas, seleccionando el ms
adecuado al tipo de separacin y deseamos realizar.
El fundamento de separacin es el tamao molecular y puede influir la forma de la
molcula: la solucin da las sustancias a separar es introducida en la columna de manera que
aquellas cuyo tamao sea superior al poro del soporte pasan sin ser retenidas y aquellas que

tienen un tamao menor que el porto penetran en el gel y son retenidas siendo eluidas ms
tarde.
Aplicaciones:
~ Purificacin de macromolculas biolgicas (virus, protenas,...)
~ Determinacin de pesos moleculares.
~ Desalado de muestras: la separacin de solutos de las sales que las acompaan.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO
Es un tipo de cromatografa lquida. La fase mvil es lquida y la estacionaria es slida.
Tambin se realizan en columnas. En este tipo de cromatografa la fase estacionaria
denominada resina de intercambio inico tiene grupos cargados que interaccionan con iones de
signo contrario de la fase mvil por tanto las sustancias se separan en base a las diferencias
entre el signo y al magnitud de sus cargas. Si la resina poseen grupos cargados positivos se
denominan resinas intercambiadores de aniones. (resinas+ Cl- intercambiadores de aniones).
Si son negativos serian resinas intercambiadores de cationes ( resinas- Na+).
Las resinas intercambiadoras de aniones tienen sus grupos cargados unidos a
contraiones (Cl- / Na+ / Ca+2) de forma que el conjunto sea elctricamente neutro. Los solutos
ionizados se intercambian con los contraiones as:

Las variantes ms importantes a considerar en vistas a controlar el equilibrio de cambio

de in son:
~ pH del eluyente: ya que altera la carga del soluto modificando la posicin del
equilibrio anterior desplazndolo hacia la izquierda o derecha segn se adquiera ms menos
carga.
~ Fuerza inica del eluyente que tambin puede desplazar el equilibrio anterior.
Aplicaciones:
~ Primeras etapas de purificacin de biopolmeros.
~ Separacin de protenas y nucleoprotenas
~ Anlisis de aminocidos
CROMATOGRAFA DE GASES
En esta tcnica de separacin la muestra se volatiliza y posteriormente es inyectada en
una columna cromatogrfica. El proceso de elucin es llevado acabo por la accin de un gas
inerte (fase mvil) cuya nica funcin es la de transportar la muestra a travs de la columna.
En funcin de la naturaleza de la fase estacionaria la cromatografa de gases puede ser:
~ Cromatografa gas-lquido (GLC) cromatografa de gases
~ Cromatografa gas-slido (GSC)
La cromatografa gas-slido (GSC) necesita una fase estacionaria slida en la cual
mediante la adsorcin fsica son retenidos los diferentes componentes de la muestra problema.
Su aplicacin bastante limitada se reduce a la separacin de ciertas sustancias gaseosas
de bajo peso molecular.
La cromatografa gas-lquido o de gases (GLC) es ampliamente utilizada y est basada
en la distribucin de la muestra entre una fase mvil gaseosa y una fase lquida retenida sobre
la superficie de un slido inerte.
Actualmente dada su gran utilidad existe una gran variedad de quipo de cromatografa
de gases y todos cuentan con:

~ Un soporte informtico que permite el control automtico de la mayor parte de los

parmetros que de una forma y otra pueden influir en el desarrollo cromatogrfico. Una
tecnologa que permite un alto grado de rendimiento a coste moderado.
~ Unas columnas capilares capaces de separar gran cantidad de sustancia en un tiempo
relativamente corto.
De todos los componentes bsicos de un cromatgrafo de gases destacan por su
importancia los siguientes:
El gas portador

El sistema de inyeccin de la muestra

La columna de desarrollo

Sistema de deteccin

El gas portador debe de ser qumicamente inerte y su eleccin debe estar determinado
por el tipo de detector utilizado en cada caso. Debe ser administrado a la presin indicada y
estar libre de agua e impurezas. Los gases ms usados son: helio, nitrgeno, hidrgeno y
dixido de carbono.
El tamao de la muestra y la forma que esta es introducida en al columna determina en
gran parte la eficacia del proceso. Concretamente la inyeccin lenta de muestras demasiado
grandes da lugar a bandas anchas y por tanto a una deficiente resolucin en el proceso de
separacin. El sistema ms usado para la inyeccin de la muestra consiste en la utilizacin de
una microjeringa aplicada a la cabeza de al columna.
El volumen de muestra inyectado depende del tipo de columna usado (ordinaria
capilar). Cuando la columna es capilar el volumen de muestra requerido es tan pequeo que se
utiliza un divisor que nicamente deja pasar a la columna una pequea parte de la muestra y
deshecha el resto. Podemos utilizar 2 tipos de columnas de desarrollo: columna de relleno o
empaquetadas y columnas capilares o tubulares abiertos.
Columna de relleno
Dimetro interno
2-4 mm
Longitud
1-6 m
Tamao muestra
10-106 ngr
Presin relativa
Alta
Velocidad relativa
Lenta
Material de fabricacin Vidrio, slice fundido, acero
Forma
Helicoidal

Columna de capilares
01-075 mm
10-100 m
10-10000 ngr
Baja
Rpida
inoxidable y tefln
Helicoidal

Aunque las columnas de relleno han sido muy usadas hoy por su gran rapidez y eficacia
las columnas capilares las han desplazado.
Un detector ideal para la cromatografa de gases debera reunir al menos las siguientes
caractersticas:
~ Adecuada sensibilidad
~ Buena estabilidad
~ Gran reproductibilidad (repetir resultados)
~ Amplio margen de temperatura de trabajo posible (Desde temperatura ambiente hasta
350C)
~ Reducido tiempo de respuesta independientemente de la cantidad de muestra
detectables.
~ Alta fiabilidad
~ Fcil manejo
~ No destruye la muestra

Los detectores ms utilizados son:

~ De ionizacin de llama: son los ms usados y los ms tiles
~ De conductividad trmica: de los primeros en usarse pero hoy no tienen gran
utilizacin
~ Termoinicos: son selectivos de los compuestos que contiene fsforo y nitrgeno
~ De captura electrnica: son de respuesta selectiva muy sensible a los compuestos que
contiene grupos funcionales electro-negativos (halgenos, perxidos, insecticida clorados) e
insensibles a grupos funcionales tipo aminas, alcoholes e hidrocarburos.
~ De emisin atmica: son los ms recientes y estn basado en la espectroscopia de
emisin atmica.
Aplicaciones: es inmejorable para muestras orgnicas complejas compuestos rganometlicos y sistema bioqumicos.
Para el anlisis cualitativo puede recurrirse a TR VR.
Para el anlisis cuantitativo se usan los picos reas del cromatgrafo obtenidos.
CROMATOGRAFA DE LQUIDO DE ALTA RESOLUCIN (HPLC)
Constituye la forma ms eficaz de llevar a cabo el proceso cromatogrfico. La fase
mvil se bombea a travs de la columna bajo una presin elevada. Lo que la caracteriza es su
elevada resolucin que se traduce en picos de elusin estrechos. En este tipo de cromatografa
la fase estacionaria est mucho ms finamente dividida y a de estar formada por partculas de
mayor rigidez mecnica para evitar que se deformen o rompan a someterlos a elevadas
presiones. Las columnas utilizadas son de acero inoxidable si las presiones son elevadas.
En este tipo de cromatografa pueden realizarse los diferentes tipos de cromatografa
vistas.
CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
Este tipo de cromatografa la separacin se basa en al funcionalidad biolgica de las
molculas. La mayor parte de las funciones biolgicas son el resultado de interacciones muy
especficas entre 2 biomolculas por ejemplo hormona-receptor, antgeno-anticuerpo.
En este tipo de cromatografa el soporte cromatogrfico (Agarosa) se ancla
covalentemente uno de los componentes de tales sistemas biolgicos (por ejemplo anclar el
antgeno).
Si el segundo componente viaja en la fase mvil (anticuerpos) y ambos estn
funcionalmente activos se producir su funcin especfica, es decir, su retencin en al columna,
de esta forma se pueden purificar biomolculas a partir de mezclas muy complejas ya que la
mayora de los solutos pasarn de largo y podrn ser lavados de la columna. Para la elusin del
componentes retenidos pueden utilizarse eluyentes especficos (alterando la fuerza inicos del
eluyente, el pH la temperatura)
Agarosa-antgeno mezcla (Ac) agarosa-antgeno-anticuerpo eluyente

TEMA 13
ELECTROFORESIS
Se define como electroforesis aquel proceso en el cual las especies cargadas (iones
partculas coloidales) se separan en funcin de su diferente velocidad de emigracin, cuando se
encuentran sometidas a la accin de un campo elctrico.

La velocidad con que las diferentes sustancias se desplazan durante el transcurso de al

electroforesis se denomina velocidad de migracin.
Dicha magnitud depende bsicamente de la densidad de la carga y esta a su vez est
condicionado por una serie de parmetros (pH, fuerza inica, diferencia de potencial del campo
elctrico aplicado, naturaleza de la muestra, interacciones de la misma con el soporte elegido)
que van a acondicionar el desarrollo experimental de la tcnica electrofortica. La
electroforesis es una herramienta prctica para el anlisis de mezclas que compuestos
biolgicos, ya que permite separar macromolculas en una mezcla, sirviendo tanto como
mtodo analtico como preparativo para la posterior realizacin de otras tcnicas analticas.,
para que esta separacin tenga lugar es necesario que la sustancia se encuentre cargada de
manera que al colocarla en el seno de un campo elctrico se desplace hacia un polo u otro en
funcin de su carga.
De forma general las sustancias cargadas positivamente se dirigirn hacia el polo
negativo, es decir, el ctodo y las cargadas negativamente hacia el polo positivo que es el
nodo. Es necesario que todos los componentes de la mezcla a separar se encuentran cargados
de igual forma (todos positivos o todos negativos). De manera que despus de hacer la siembra,
es decir, depsito de al muestra sobre el soporte en uno de los polos, se dirijan todos hacia el
polo contrario, separndose unos de toros en funcin de la diferente velocidad de emigracin.
El desplazamiento de los distintos componentes de la muestra durante el transcurso de
la electroforesis depende bsicamente de:
~ La carga de la sustancia
~ Voltaje del capo elctrico cerrado
~ El coeficiente de friccin (rozamiento entre el soporte y la sustancia depositada en el
mismo se opone al movimiento-)
La velocidad de migracin de los diferentes componentes de la muestra que queremos
separar durante su desarrollo electrofortico por unidad de tiempo recibe el nombre de
movilidad electrofortica ().
El proceso electrofortico desde su inicio a sufrido mltiples variaciones encaminadas a
obtener un mayor rendimiento y mejores resultados. Actualmente existen una gran variedad de
cmaras de electroforesis en el mercado (generalmente cada casa comercial elabora el modelo
adecuado en funcin del soporte a utilizar). En general son preferibles aquellas cuyo tamao es
reducido por:
~ Presentan una menor superficie de evaporacin.
~ Las diferentes temperaturas se minimizan entre un compartimiento y otro.
~ Permite una reduccin del tamao de las aplicaciones con lo que se pueden procesar
un mayor nmero de muestras al mismo tiempo.
FACTORES QUE INTERVIENEN EN EL DESARROLLO ELECTROFORTICO
Los principales parmetros que influyen o afectan en el desarrollo de una electroforesis
y que condicionan su utilidad en el laboratorio son bsicamente:
A- Carga neta de la sustancia en migracin: el grado de ionizacin y por tanto la
carga neta de las distintas sustancias de la muestra sometida a electroforesis depende del pH
del medio en el que se lleva a cabo todo el proceso. A su vez este parmetro queda determinado
por el tampn elegido que permite utilizar el pH ms adecuado.
La influencia del pH sobre la carga neta es especialmente importante, ya que hay
sustancia que dado su carcter anftero (como es el caso de las protenas que son compuestos
que presentan cargas positivas y negativas sobre la misma molcula siendo el nmero de unas
u otras dependientes del pH del medio) pueden encontrarse cargadas positivamente
negativamente.

Se define punto isoelctrico (PI) como aquel valor de pH al cual el balance de cargas
positivas negativas superficiales de una sustancia es 0 (carga neta nula). Al pH de su PI una
sustancia no presenta carga neta alguna y por tanto al ser sometida a un proceso
electrofortico no migra (permanece inmvil en el punto de aplicacin). Cuando el pH es
superior al PI, la sustancia se encuentra cargada negativamente (el nmero de cargas
negativas supera a la de positivos) y sometido a electroforesis migrarn hacia el polo positivo,
el nodo. Cuando el pH de medio es inferior al de su PI la sustancia cargada positivamente se
dirigir hacia el ctodo que es el polo negativo.
B- Fuerza inica del medio: al igual que el pH final la fuerza inica depende del
tampn elegido para la electroforesis.
En un proceso electrofortico la corriente elctrica es transportada por todos los iones
presentes, tanto a los debidos a la muestra en solucin como los de tampn, mayor es la
proporcin de corriente transportado por los iones del tampn y menor la transportada por la
muestra que se desea separar, de manera que esta ltima migrar ms despacio. En cualquier
proceso electrofortico de concentracin de tampn elegido sirve en cada caso para:
~ Mantener constante el pH adecuado.
~ Proporcionar una fuerza inica que permita el movimiento de cargas.
Cuando la concentracin del tampn es superior a la requerida la migracin de las
sustancias presentes en la muestra es ms lenta y pero la separacin conseguido.
C- Estructura y tamao de la sustancia: aunque estos factores no influyen por igual
en todos los procesos electroforticos en ocasiones son de gran importancia. Tal es el caso de
aquellas electroforesis en las que el soporte elegido permite el paso selectivo de las molculas
en funcin de su tamao (retiene las partculas ms grandes y deja pasar las de menor tamao).
D- Potencial del campo elctrico aplicado: como se ha visto anteriormente la
movilidad electrofortico de una sustancia es mayor cuanto mayor es el potencial elctrico
aplicado. No obstante recurrir a un gran aumento de voltaje para alterar el proceso
electrofortico presenta el inconveniente de que se produzca un aumento de la temperatura que
a su vez es el responsable de:
~ Alteraciones debidas al calor de la muestra sometida a electroforesis (cuando se trata
de protenas plasmticas se produce su desnaturalizacin por calor).
~ Evaporacin del tampn utilizado.
Como consecuencia de la evaporacin el tampn queda ms concentracin aumento se
fuerza inica y se dificulta el desarrollo electrofortico.
E- El soporte: en general una electroforesis puede realizarse directamente en una
solucin tamponada de la sustancia que se desea separar (electroforesis libre) puede hacerse
sobre un soporte de manera que una vez terminado el proceso las acciones queden
permanentemente separadas y sea fcil proceder a su cuantificacin, esto se denomina
electroforesis zonal.
La electroforesis zonal se usa ampliamente en laboratorio clnico. Los soportes ms
comnmente utilizados son:
~ Acetato de celulosa
~ Gel de agarosa
~ Gel de almidn
~ Gel de acrilamida
La eleccin del tipo de soporte depende muy directamente del objetivo del anlisis.
Para la mayor parte de los diagnsticos clnicos es suficiente un soporte de acetato de celulosa
o de gel de agarosa.
En los ltimos aos el gel de agarosa a aumentado su popularidad ya que ofrece ciertas
ventajas, sobre otros soportes como pueden ser:
~ Mayor resolucin

~ Ausencia de efectos cromatogrficos (no capta el colorante dando colores de fondo no

deseables)
~ Transparencia completa.
Al poseer una elevada y uniforme porosidad favorece la migracin uniforme de las
sustancias cargadas, de manera que al moverse a la misma velocidad producen una banda
homognea y ntida con lo cual se traduce en un incremento de la resolucin.
Debido a su gran contenido en agua el gel de agarosa es totalmente transparente y por
ello evita la distorsin en el trazado electrofortico y los posibles trazados errneo producidos
por efectos hipercrmicos que si se producen en toros medios opacos.
Concretamente el acetato de celulosa es un material opaco que debe ser transparentado
con disolventes orgnicos lo cual puede hacer desaparecer las bandas ms dbiles.
Soportes electroforticos: todos los soportes son slidos, de consistencia gelatinosas
que incluyen el solvente en su preparacin. Esta puede ser:
Homognea: misma concentracin de gel en todo el soporte. Se utiliza normalmente
para soportes planos.
En gradientes: la concentracin del gel vara a lo largo del soporte de una forma
continua (gradiente continuo) o discontinuo (gradiente discontinuo), segn los casos, los
soportes se clasifican en:
Soportes no restrictivos: las sustancias depositadas sobre este tipo de soporte

puede moverse libremente de forma que su separacin electrofortica tiene

lugar nico en funcin de su carga elctrica. En realidad no hay un soporte
que sea completamente no restrictivo, pues las sustancias cuyo peso
molecular es elevado pueden verse frenadas en su desplazamiento o no
desplazarse en absoluto.
o Papel: fue el primer soporte utilizado en electroforesis de zona. En la
actualidad prcticamente no se utiliza.
o Acetato de celulosa: se obtiene a partir de la reaccin de anhdrido
actico con los grupos hidroxilos de la celulosa. Su estructura deja
gran cantidad de huecos llenos de aire. En el momento de ser
utilizado las membranas de acetato se sumergen en el tampn, que
penetra en los huevos llenndolos. Este tampn es el encargado de
llevar la corriente elctrica a travs del soporte, permitiendo as el
soporte electrofortico. El ms utilizado es el Cellogel y sus
principales ventajas son:
Fcil manipulacin
Rapidez de ejecucin
Elevada reproductibilidad
Fcil lectura
o Gel de agarosa: est formado por agarosa, uno de los componentes
del agar (es un compuestos de agarosa y agaropectina). Debido al
elevado tamao del poro (mayor del de otros geles) las sustancias
depositadas en l migran nicamente en funcin de su carga
elctrica. Las sustancias de alto peso molecular se ven totalmente
frenadas en su desplazamiento. Presentan las siguientes ventajas:
Carece de cargas elctricas que podran intervenir en la
migracin electrofortica. No presenta problemas de
endsmosis (en muy importante cuando se utiliza agar para
electroforesis no agarosa- y es atribuible a gran nmero de
grupos cargados negativamente sulfato y carboxilos presentes

en el agar. Se traduce en que debido sobre todo al

movimiento de lquido y a la distancia calidad del agua
presentes en diferentes grupos componentes de la muestra
sufren un arrastre de tipo osmtico hacia el polo contrario).
No captan el colorante (no dan lugar a colores de fondo no
deseables) y son muy adecuados para la cuantificacin de las
distintas fracciones por densitometra.
Soportes restrictivos: ejercen algn tipo de resistencia al desplazamiento

electrofortico de las sustancias depositadas en ellos. Dicha resistencia

depender fundamentalmente de:
El tamao del poro de la sustancia que forma el soporte
El tamao y caractersticas estructurales de las sustancias que
vayan a desplazarse en el mismo. En general presentan la
ventaja de proporcionar buenas separaciones de la distintas
fracciones.
o Gel de almidn: su uso es limitado debido a los dificultades
derivados de su preparacin. Proporciona un mayor nmero de
fracciones de la muestra a separar que otros soportes. Por ejemplo: el
gel de agarosa. Presenta entre otro los siguientes inconvenientes:
Considerable dificultad para obtener un soporte de espesor y
porosidad uniforme.
La preparacin del gel extemporal
o Geles de poliacrimilamida: son el resultado de la polimerizacin de
la acrilamida con diferentes compuestos. Son los que proporcionan
un mayor nmero de fracciones y la mejor resolucin de las distintas
bandas utilizndose sobretodo en laboratorio de investigacin. El
tamao del poro puede variarse variando la composicin del gel, de
manera que las sustancias depositadas en este tipo de geles se
separan en funcin de su carga y su tamao. Presentan las siguientes
ventajas:
Qumicamente inertes
Porosidad variable
Elevada resolucin (obtencin de bandas, estrechas y ntidas)
Transparencia (permite cuantificacin por densitometra)
Pueden ser utilizados para electroforesis especiales (permiten
la introduccin en su estructura de diferentes compuestos.
Aplicacin de la muestra: la aplicacin de la muestra en el soporte directamente en la
superficie dejando que penetre o bien en el interior de orificios o ranuras practicadas en el seno
de los geles (inmuno-electroforesis). Tambin se puede incluir en el propio gel durante el
proceso de polimerizacin o formacin.
En general para incrementar la resolucin debe tener las siguientes caractersticas:
~ Ser lo ms estrecha posible
~ No poseer una cantidad de muestra excesiva
~ Ser homognea
F- Caractersticas generales de la corriente aplicada: el voltaje aplicado durante la
electroforesis influye de forma decisiva en el resultado obtenido. En general cuanto mayor es el
voltaje aplicado, mejor es la resolucin obtenida. No obstante el calor generado en el desarrollo
electrofortico provoca la evaporacin de parte del agua contenida en el soporte y puede
deteriorar la muestra.

Los voltajes a los que habr que trabajar en una electroforesis estarn limitados por el
exceso de calentamiento que pueda tener lugar. En el caso de una electroforesis convencional
sobre gel de agarosa, esto no es ningn problema, dado la breve duracin del proceso (unos 20
minutos) y el moderado voltaje. En cambio los sistemas que utilizan voltajes elevados deben
estar provistos de dispositivos de refrigeracin capaces de mantener constantes la temperatura
durante todo el proceso.
G- Revelado: para el revelado de los trazados obtenidos correspondientes a cada una
de las fracciones separadas de al muestra puede recurrirse a diversos procedimientos, en
funcin de la sustancia y de la sensibilidad requerida en cada momento.
En el caso ms tpico el de la electroforesis de protenas plasmticas la sensibilidad
mejor considerablemente con la introduccin de los primeros colorantes histoqumicas que
seran el azul de bromo-fenol y el negro amido, que han sido desplazados por colorantes que
como el azul brillante de coomasie proporciona una mayor sensibilidad siendo capaces de
detectar desde medio microgramo de protenas.
La utilizacin de sustancias fluorescentes como la fluorescena aumenta la sensibilidad
hasta 1 nanogramo mientras que la tincin de plata mejora unas 100 veces la sensibilidad
obtenida con el colorante de coomasie.
ELECTROFORESIS DE PROTENAS SRICAS
Se utiliza tampn veronal cuya composicin es la siguientes:
~ Barbital sdico
~ cido dietil-barbitrico
~ cido brico
~ Hidrxido sdico
Al pH proporcionado por el tampn veronal todas las fracciones proteicas se encuentran
cargadas negativamente y por tanto, sometidas a una corriente elctrica y aplicando la muestra
en el ctodo migrarn hacia el nodo, que el polo positivo.
El procedimiento general consiste bsicamente en:
~ Sumergir durante 10 minutos las tiras de acetato de celulosa en el tampn.
~ Colocar las tiras en el puente de la cubeta de electroforesis una vez eliminado el
exceso de humedad.
~ Proceder al depsito individual de la muestra sobre el soporte mediante el aplicado.
~ Introducir el puente en la cubeta en contacto con el tampn depositada en la misma.
~ Una vez tapado convenientemente conectar todo el dispositivo a una fuente de
corriente continua (regulando la intensidad de la corriente en funcin de las necesidades).
~ Una vez transcurrido el tiempo adecuado de migracin desconectar el equipo y
proceder al revelado de las tiras normalmente mediante el empleo de colorantes adecuados que
se fijan especficamente a la muestra elegida.
Cuando el soporte elegido para la electroforesis es acetato de celulosa de la muestra de
suero se obtiene 5 bandas que son:
1- Albmina: es la que ms migra respecto del punto de aplicacin de la muestra (es
decir el ctodo)
2- Alfa 1 (1)
3- Alfa 2 (2)
4- Beta (): cuando el soporte de gel es de agarosa esta banda se divide en 2: 1 y 2.
5- Gamma (): es la que menos se desplaza y en sueros no patolgicos la banda ms
ancha.
Finalizado el revelado, tras la tincin y decoloracin de las tiras, proceden a la
cuantificacin de cada una delas fracciones obtenidas, a partir de la muestra inicial. Para ello
normalmente se recurre a la espectrofotometra o a la densitometra.
Espectrofotometra:
~ Recortar cuidadosamente cada una de las bandas obtenidas tras la electroforesis.

~ Introducir cada banda en un tubo conteniendo una sustancia capaz de disolverla

completamente.
~ Realizar la lectura del color as obtenido utilizando el espectrofotmetro (la densidad
ptica obtenida para cada una de las banda es proporcional a la concentracin de las sustancia
contenida en la misma).
Densitometra:
~ Proceder al transparentado del fondo de la tira mediante la utilizacin de una
sustancia transparentadora adecuada. Resulta importante conseguir el punto ptimo de
transparentado de las tiras.
~ A continuacin introducir la tira en un densitmetro. Se obtiene una grfica en la que
aparecen cuantificadas cada una de las fracciones presentes en la sustancia sometida a la
separacin electrofortica.
~ Precauciones generales:
1- Sumergir completamente las tiras utilizadas como soporte. Evitando la formacin de
burbujas sobre la superficie que podran dar lugar a manchas opacas sobre la tira.
2- Aplicar cuidadosamente la muestra en forma di lnea fina mediante un aplicador,
evitando el exceso de muestra que podra dar lugar o distorsin en el trazado.
3- No utilizar tampn para ms de 2 3 separaciones.
4- Asegurarse siempre de que el contacto con los electrodos (preferentemente del
grafito) sea adecuado.
5- Garantizar la correcta limpieza de la cubeta y de todos los recipientes utilizados.
6- Mantener en todo momento un estado de hidratacin de las tiras adecuado (ni
demasiada humedad para evitar la difusin de las bandas ni demasiada sequedad que podra
propiciar el depsito de protenas en exceso.
Electroforesis de muestras de orina:
El objetivo fundamental de electroforesis en una muestra de orina es la deteccin de la
muestra de orina es la deteccin de la protena de Bence-Jones. Aparece como 1 2 bandas en
al zona b-x y ms raramente en la zona de 2 1. el mtodo electrofortico es el
procedimiento ms seguro para su determinacin ya que el llamado test del calor proporciona
bastantes falsos positivos y negativos y las tiras reactivas que reaccionan en orina no son tiles
para el hallazgo de protenas de Bence-Jones.
Inmunoelectroforesis:
De forma parecida a la descrita para las protenas sricas se realiza frecuentemente en el
laboratorio la electroforesis de otras sustancias de gran inters clnico como las lipoprotenas,
hemoglobina y otras sustancias susceptibles de ionizacin en funcin del pH y por tanto de
desplazarse en el seno de un campo elctrico.
INTERPRETACIN DE LOS DISTINTOS TRAZADOS ELECTROFORTICOS
La mayora de las ocasiones el examen visual del trazado electrofortico realizado por
una persona experta es suficiente para poder llevar a cabo una interpretacin. Frecuentemente
proporciona mayor informacin sobre una determinada patologa que las concentraciones
numricas de las distintas fracciones de manera que exista una gran relacin entre los distintos
trazados o patrones electroforticos y ciertas patologas. As por ejemplo en una respuesta
inflamatoria aguda (un operatorio inmediato, est aumentada la a, anti-tripsina y el fibringeno
y estn disminuidas la albmina y la transferrina).
REALIZACIN PRCTICA DE LA ELECTROFORESIS DE PROTENAS SRICAS:
Preparacin de la cubeta:
~ Cubeta limpia y seca
~ Rellenar con tampn varios lados sin que entren en contacto
~ Tapas para evitar la evaporizacin del tampn

Preparacin del soporte inerte:

~ Coger la tira por un extremo utilizando pinzas
~ Si no tiene ninguna marca que indique cual es la cara absorbente realizar un corte en
la parte inferior derecha.
~ Sumergir las tiras de 5-15 minutos en la solucin tampn de la cubeta con la cara
absorbente hacia arriba y procurando que no queden adheridas.
~ Extraerlas con pinzas y eliminar el exceso de tono colocndolas entre 2 papeles de
filtro.
~ Colocar las tiras sobre el puente de la cubeta con la cara absorbente hacia arriba
quedando los extremos en contacto con el tampn. Ponen el extremo inferior derecha en al
zona del ctodo negativo.
~ Tapa la cubeta y esperar de 2-5 minutos para la estabilizacin de las tiras en el medio.
Aplicacin de las muestras:
~ Poner en contacto el aplicador con al muestra, este tomar la cantidad adecuada.
~ Depositar la muestra sorbe la tira a 1 cm del borde catdico por simple contacto del
aplicador con la tira.
Migracin electrofortica:
~ Conectar la cubeta a la fuente de alimentacin
~ Poner en marcha el alimentador y regular. Pondremos una intensidad de 01
Amperios, 35 minutos a 2.000 voltios
Revelado:
~ Introducir las tiras en una cubeta con colorante (negro amido) durante 10 minutos.
~ Introducir las tiras en 3 4 cubetas con decolorante agitando suavemente hasta que el
fondo de la tira no tenga color y nicamente se aprecie las bandas electroforticas teidas.
~ Eliminar el exceso de decolorante situando la lira entre 2 hojas de papel de filtro.
Cuantificacin por espectrofotometra:
~ Poner en 6 tubos de ensayo el disolvente de la siguiente forma
Tubos 1,3,4,5, y 6 con 3 ml de disolvente.
Tubo 2 con 9 ml de disolvente
~ Cortar las fracciones de la tira y poner la fraccin de albmina en el tubo nmero 2
(fraccin de ms color). El tubo nmero 1 es el blanco y los restantes tubos se llamar 1, 2,
. marcar todos los tubos e introducir las fracciones de la tira correspondiente.
~ Tapar cada tubo con parafilm y agitar hasta que al fraccin quede disuelta.
~ Medir en el espectrofotmetro la absorbancia de cada tubo
~ Mirando la relacin con los valores de absorbancia y concentracin obtener los
valores de concentracin y porcentaje de las diferentes porciones.

TEMA 14
ESTUDIO DE LA FUNCIN HEPTICA

El hgado es un rgano de naturaleza glandular profusamente (abundante) vascularizado

rodeado por una cpsula fibrosa denominada cpsula de Glison con un peso aproximado de
25% del peso corporal (kilo y medio). Presenta la particularidad de la circulacin doble, recibe
a la vez sangre de la arteria heptica y la vena porta de manera que cada minuto recibe 1.4001.600 ml de sangre (alrededor del 25% del gasto cardiaco es el volumen de sangre
expulsada por el corazn en 1 minuto y los lmites normales en reposos son de 4-8 litros).

Debido a su especial vascularizacin (la arteria heptica canaliza la sangre procedente

del tronco celiaco [25%] y la vena porta la que procede del intestino y del bazo [75%]) el
hgado puede actuar sobre los productos recin absorbidos a nivel intestinal mediante el
circuito entero-heptico.
Histolgicamente en el hgado pueden distinguirse: clulas hepticas, hepatocitos,
elementos vasculares y parnquima.
Las clulas hepticas hepatocitos se caracterizan por:
~ Su membrana poseen mecanismos que permiten el transporte activo de diferentes
sustancias: glucosa, aminocidos y algunos de los electrolitos ms importantes del organismo
como sodio y potasio.
~ En su citoplasma se acumulan grandes cantidades de glucosa
~ Sus mitocondrias (donde se lleva a cabo la respiracin celular) son muy activas en
ellas mediante la oxidacin celular de los principios inmediatos, se obtiene energa en forma de
ATP.
~ Su aparato de Golgi elimina los productos de deshecho (consecuencia de la gran
actividad metablica del hepatocito) con gran efectividad.
~ Elementos vasculares: se componen tanto de vasos sanguneos (que conducen tanto la
sangre arterial como la venosa) como de vasos linfticos (portadores de linfa) y vas biliares
(que canalizan la secrecin biliar). Las vas biliares constan de:
1- Un conducto denominado conducto heptico el cual contina con el coldoco y de la
vescula reservoria de unos 40 ml de capacidad que desemboca en el intestino delgado
(duodeno) mediante un orificio cuya luz es regulada por el esfnter de ODDI.
2- La pared de todas las vas biliares estn formadas por glucosa y tejidos fibromuscular y su funcin e la de conducir la bilis desde el hgado hasta el duodeno. La vescula
sirve para almacenar la bilis formada en los periodos nter-digestivos y verterla al intestino
cuando se est produciendo la digestin.
3- Las vas biliares son un rgano tubular lo que determina que la mayor parte de las
alteraciones que impiden su normal funcionamiento estn relacionadas con un problema de

obstruccin. Las causas ms frecuentes es la presencia de la luz de concreciones slidas

denominadas clculos normalmente formados por bilirrubina por colesterol.
Parnquima heptico: est formado por un complejo entramado de hepatocitos
dispuestos de manera que el contacto entre las clulas y la sangre que circulan por el hgado
tanto de entrada como de salida es mximo. Tradicionalmente se ha considerado como unidad
heptica bsica tanto a nivel estructural como funcional un pequeo fragmento de 2 ml de
dimetro , seccin hexagonal y contorno poco parecido denominado lobulillo heptico. Cada
lobulillo contiene:
~ Una estructura fibrilar que le sirve de armazn.
~ C. hepticas hepatocitos, dispuestas en finas lminas de una sola clula de espesor
~ Clulas de Kupffer forman parte del sistema inmunitario de organismo.
~ Capilares biliares: por donde fluye la bilis segregada por los hepatocitos
~ Sinusoides: ocupan el espacio que separan las distintas lminas de hepatocitos y en su
pared (provista de pequeos orificio se encuentran las clulas de Kupffer).
~ Espacio de Disse: situado entre los sinusoides y la membrana de los hepatocitos son
equivalentes a los vasos linfticos en el hgado y a travs de ellos se produce el intercambio
entre la sangre y los hepatocitos.
En el lugar en el que confluyen varios de estos lobulillos se distinguen los denominados
espacios porta. Cada uno de estos espacios contiene pequeas ramificaciones de la vena porta
(rama portal) y de la arteria heptica (rama arterial) y un pequeo conducto biliar. En el centro
de cada lobulillo se sita la vena centrolobulillar.
Ms recientemente, Rappaport, propuso para el hgado una nueva unidad funcional
llamada acino.
FUNCIN HEPTICA
En el hgado se llevan a cabo las principales transformaciones metablicas del
organismo siendo el rgano encargado de las transformaciones bioqumicas de los principios
inmediatos ingeridos en la dieta y absorbidos a nivel intestinal as como su distribucin en todo
su organismo.
Para conseguirlo (funciones del hgado):
1- Interviene activamente en el metabolismo d los principios inmediatos.
2- Participe junto a la medula sea y el bazo en los procesos de sntesis y regeneracin
sangunea.
3- Forma la bilis
4- Es el rgano encargado de la eliminacin de los productos generalmente txicos
para el organismo (detoxificacin por biotransformacin).
5- Participa en el metabolismo de hormonas y vitaminas: sintetiza protenas que
transportan hormonas y vitaminas a la sangre (fibringeno, protombina, albmina, globulinas)
degrada las hormonas y facilitar su eliminacin, sirve de almacn de ciertas vitaminas
(vitamina A y vitamina K) y participa en el metabolismo de la vitamina D3 activa.
Caractersticas generales de la secrecin biliar:
A- Composicin:
Sales biliares 3-45 mEq/L
Bilirrubina
< 1 mEq/L
Urobilingeno < 1 mEq/L
Colesterol 2-6 mEq/L
Agua
Fosfolpidos
Electrolitos:
~ Sodio 145-165 mEq/L

~ Potasio 27-49 mEq/L

~ Cloro 88-115 mEq/L
B- Las funciones de esta secrecin biliar son:
1- Sirve de vehculo para la eliminacin de colesterol y bilirrubina
2- Sirve para mantener disuelto el colesterol.
3- Sirve para favorecer la digestin y absorcin de las grasas a nivel del
intestino delgado (por las sales biliares)
C- La formacin de las sales biliares colestasis: es debida a un gradiente de presin
osmtica y por tanto a la salida de agua desde el plasma hacia el espacio biliar. Depende de
entre otros factores de dieta, sexo, edad, permeabilidad del epitelio vascular y el estado
gestacional.
Actuacin heptica en el metabolismo de los principio inmediatos
El hgado es el encargado de proporcionar a los tejidos energa (glucosa y cidos
grasos) en los periodos nter-digestivos (aquellos en los que no se produce la ingestin de
alimentos) interviniendo en el metabolismo de los principios inmediatos de la siguiente forma.
A- Respecto de los hidratos de carbono:
~ Despus de las comidas, el hgado almacena la glucosa en forma de glucgeno
triglicridos.
~ Entre las comidas descomponen el glucgeno proporcionando glucosa a la sangre
(glucogenolisis) y por otro lado sintetiza glucosa a partir de glicerol, lactato y aminocidos
mediante el proceso de gluconeognesis.
B- Respecto a los lpidos:
~ Moviliza cidos grasos procedentes del tejido adiposo.
~ Sintetiza cidos grasos a partir del exceso de glucosa y aminocidos con ellos se
sintetizan los triglicridos que entran a formar parte de algunas lipoprotenas importantes como
la VLDL y la HDL.
~ Utiliza cidos grasos para sintetizar los cuerpos cetnicos que son fuente de energa
para el hgado y el resto del organismo.
~ Sintetiza colesterol (Entre 15-2 gr/diarios).
C- Respecto a las protenas:
~ Metaboliza selectivamente los aminocidos aromticos
~ Utiliza el amoniaco procedente de la degradacin de estos aminocidos, del rin y
del intestino para la sntesis de urea y glutamina.
~ Sintetiza protenas plasmticas entre ellas la albmina
Actuacin heptica; la secrecin biliar: el hgado es el encargado de formar el bilis,
excrecin formada bsicamente por sales biliares, bilirrubina, colesterol, fosfolpidos,
electrolitos y agua, que desempean las siguientes funciones:
~ Servir de vehculo para la eliminacin de bilirrubina, colesterol y otras sustancias.
~ Mantener disuelto el colesterol.
~ Facilitar la digestin y absorcin de grasas a nivel intestinal.
Accin heptica; en la detoxificacin por biotransformacin: Los distintos productos de
carcter txico tanto endgenos (bilirrubina) como exgeno (txicos frmaco) sufren en el
hgado diversas transformaciones encaminadas a:
~ Modificar su actividad reduciendo o eliminando su toxicidad orgnica.
~ Hacerlos hidrosolubles y por tanto fcilmente eliminables, ya sea va biliar va
urinaria.
Actuacin heptica; a nivel del sistema monocito macrfago del organismo: el sistema
denominado retculo-endotelial (SER) lo componen un conjunto de elementos celulares
difundido por todo el organismo fundamentalmente en hgado, bazo, ganglios linfticos y
mdula sea al que se atribuyen las siguientes funciones:

~ Hematopoyticas
~ Respuesta inmunitaria tanto especfica como inespecfica
~ Funciones de tipo metablico
~ Formacin de pigmentos
El hgado participa a travs de las clulas de Kupffer y que entre otras funciones llevan
a cabo la fagocitosis de agentes extraos y tambin la sntesis de bilirrubina.
Actuacin heptica en el metabolismo de hormonas y vitaminas: el hgado sintetiza protenas
transportadoras de hormonas en el torrente sanguneo, adems se encarga de degradan loas
hormonas y de facilitar su eliminacin. A nivel heptico se almacenan vitaminas y algunas
como al vitamina D3 activa se encuentran sometidas a la entero-heptica.
El hgado sintetiza tambin protenas transportadoras de vitamina en la sangre.
TRASTORNOS HEPTICOS
Las diversas alteraciones del hgado se engloban bajo el nombre de hepatopatas. Son
difciles de clasificar porque a menudo se ignora su causa y evolucin no obstante segn la
zona heptica que se encuentra alterada pueden distinguirse los siguientes grupos de
alteraciones hepticas:
Alteraciones del parnquima heptico: estn localizadas en la propia masa glandular,
es decir, localizacin intra-heptica.
Alteraciones de las vas biliares enfermedades hepato-biliares.
Alteraciones vasculares por problemas en al circulacin sangunea a nivel heptico.
Enfermedad del parnquima intra-hepticas:
1- Hepatitis: pueden ser de origen viral txico. Tipos: aguda y crnica.
2- Cirrosis: puede ser de origen alcohlico de tipo:
~ Biliar, por hemocromatosis (trastorno metablico ms frecuente en hombres,
caracterizado por la acumulacin de hierro, cirrosis y disminucin de tolerancia de los
hidratos de carbono).
~ Fibrosis qustica pancretica
3- Infiltrados: pueden ser:
~ De grasa (triglicridos y colesterol)
~ De glucgeno
~ De tipo amiloide
~ Otros (leucemia, linfoma y granuloma)
4- Lesiones que ocupan un especio (en el hgado): tumores, quistes abscesos
(acmulo de pus).
5- Trastornos funcionales que cursan con ictericia: por ejemplo la supresin
deteccin del flujo de bilis (colestasis) en el embarazo, sndromes diversos.
Enfermedad hepato-biliares:
Son el resultado de alteraciones en las vas biliares destacan la obstruccin biliar extraheptica y la colangitis (que es una inflamacin de los conductos biliares).
Enfermedades vasculares:
Son de origen circulatorio y podemos englobar:
~ Malformaciones arterio-venosos
~ Trombosis de la vena heptica vena porta
~ Congestin pasiva crnica
Como consecuencia de los distintos trastornos y en funcin de la gravedad de los
mismos el hgado va a ser incapaz de desarrollar adecuadamente las diferentes funciones
fisiolgicas que tiene encomendados dango lugar a una insuficiencia heptica cuya
consecuencia para la salud pueden llegar a ser muy graves.

Vamos a analizar los trastornos ms frecuentes de la funcionalidad heptica que son

principalmente:
1- Trastornos del metabolismo de los principios inmediatos:
A- Hidratos de carbono: en una insuficiencia heptica se observa hiper e hipoglucemia.
La hiperglucemia (siempre que los niveles de insulina no sean inferiores a lo normal) puede ser
debida a una reduccin de l capacidad del hgado para metabolizar la glucosa. Esta reduccin a
su vez puede ser debida a una disminucin del nmero de hepatocitos y alteraciones de la
propia estructura heptica.
La hipoglucemia que slo aparece en insuficiencia heptica grave es consecuencia de la
incapacidad del hgado:
~ Para sintetizar glucosa (gluconeognesis)
~ Almacenar la glucosa (glucogenognesis)
~ Liberar glucosa (glucogenolisis) al torrente sanguneo.
B- Lpidos: una insuficiencia heptica puede ser la causa de un dficit de ciertas
enzimas que intervienen decisivamente en el metabolismo lipdico, como consecuencia la va
metablica que regulan estos enzimas se alteran dando consecuencias de diferente gravedad.
As por ejemplo un dficit de lecitil-colesterol-acil-transferasa (LLAT) (Enzima que regula la
esterificacin de colesterol en sangre) tiene como resultado un aumento del colesterol libre que
al depositarse sorbe la membrana de los hemates hace aumentar su superficie como
consecuencia, estos glbulos rojos adaptan formas anmalas, normalmente se vuelven ms
frgiles y pueden causar anemia hemoltica.
C- Protenas: la urea (NH2-CO-NH2) se sintetiza en el hgado a consecuencia de la
neutralizacin del anin bicarbonato (CO3H-) con el in amonio (NH4+). Una insuficiencia
heptica puede afectar a este proceso provocando:
~ Alteraciones cerebrales graves (encefalopata heptica) como consecuencia del
acmulo de amoniaco en sangre.
~ Alcalosis metablica por disminucin del consumo de bicarbonato.
~ Una disminucin del nivel de urea en plasma por disminucin en su sntesis.
Por otra parte cualquier alteracin en la sntesis de protena cuyo origen es heptico, es
decir, causada por una alteracin de la funcin de este rgano va a afectar a todos aquellos
proceso en los que dichos protenas intervengan por ejemplo alteraciones de tipo hemorrgico
debidas a un fallo a nivel heptico de la sntesis de factores de coagulacin (De carcter
proteico).
2- Trastornos de la funcin biliar: las consecuencias ms importantes de la alteracin
de esta funcin heptica son la ictericia y al deteccin del flujo de bilis (sndrome de
colestasis).
A- Ictericia: es un signo sntoma consistente en la coloracin amarillenta de piel y
mucosas consecuencia de la acumulacin de un pigmento denominado bilirrubina en los
tejidos. Cuando este pigmento se encuentra en la sangre en concentraciones superiores a 2
mg/dl.
La concentracin normal de bilirrubina es de 05-1 mg/dl.
La ictericia indica trastornos en al formacin captacin, conjugacin y eliminacin de
bilirrubina por el hgado. De todos ellos la eliminacin es el proceso ms difcil por lo tanto el
que ms fcilmente puede fracasar.

Una pequeas parte de la bilirrubina tiene su origen en el catabolismo de ciertas

enzimas hepticas (citocromos y catalasas) y en la destruccin de l mdula sea de eritrocitos
inmaduros.
En su mayor parte la bilirrubina procede del catabolismo de la hemoglobina presente en
el interior de los eritrocitos, que tiene lugar en las clulas del sistema retculo endotelial (bazo,
hgado y ganglios linfticos, principalmente).
Los glbulos rojos que ya han completado su ciclo vital (120 das) son desintegrados
liberando al torrente circulatorio la hemoglobina que contenan en su interior, una vez en el
sistema retculo endotelial la hemoglobina se desdobla en 2 partes:
El grupo HEM conteniendo es su interior un tomo de hierro ferroso (Fe+2)
Las cadenas de una protena llamada globina.
El grupo HEM que tiene estructura de anillo se desdobla abrindose y libera el tomo
de hierro el cual pasa a la sangre para llegar finalmente a la mdula sea, para participar en la
sntesis de nuevos glbulos rojos.
Al abrirse en grupo HEM se transforma en una cadena lineal formada por 4 anillos
denominados anillos pirrlicos que son la estructura bsica de los denominados
genricamente pigmentos biliares.

El primer pigmento formado es la biliverdina que tras una reduccin se transforma en

bilirrubina, esta recin incorporada al torrente sanguneo es insoluble y se denomina bilirrubina
indirecta, libre, no conjugada liposoluble no esterificada y circula en la sangre unida a la
albmina. Esta bilirrubina indirecta no puede ser excretada va biliar ni urinaria y en caso de
excesiva acumulacin (hemlisis masiva) se acumula en zonas del organismo ricas en lpidos
(cerebro, tejido celular subcutneo) originando importantes trastornos. (Esquema)
Una vez en el hgado la bilirrubina libre se separa de la albmina y en el hepatocito
sufre una conjugacin en el cido glucurnico transformndose en bilirrubina hidrosoluble o lo
que es lo mismo conjugada directa esterificada. Una pequea parte la bilirrubina directa
regresa al torrente circulatorio pero. La mayor parte accede al intestino delgado a travs de un
orificio cuya apertura est regulada por el esfnter de Oddi. La bilirrubina conjugada que a
atravesado el hgado y lleg al intestino va a sufrir la accin de la flora all presente la cual la
transforma en una serie de derivados que en conjunto se denomina urobilingeno. Este es en
parte reabsorbido para ser eliminado de nuevo por la bilis y en pequea proporcin por el rin
con la orina el resto es eliminado por las heces proporcionndoles su color caracterstico.
La bilirrubina conjugada que antes de atravesar el esfnter de Oddi refluy una vez
reabsorbida en el intestino delgado se encuentra en el torrente circulatorio necesaria debe ser
eliminada pro el organismo y para ello usar 2 vas:
~ Una pequea parte lo har por la orina
~ La mayor parte a travs de la vena porta volver al hgado y desde esta al intestino
delgado cerrando el ciclo: Circulacin Entero-heptica.
La cantidad de bilirrubina en sangre se conoce como bilirrubinemia y sus variaciones
pueden ser de 2 tipos:
Hiperbilirrubinemia: aumento de la concentracin de bilirrubina en sangre, puede ser
fisiolgica o patolgica.
Hipobilirrubinemia: disminucin de la concentracin de bilirrubina en sangre,
aparecen anemias intensas.

Las hiperbilirrubinemia de tipo fisiolgica, por ejemplo: en recin nacidos y por

permanecer a altas temperaturas y de tipo patolgico da lugar a: ictericia preheptica, heptica
y/o post-heptica.
La hipobilirrubinemia puede aparecer en anemias intensas tanto ferropnicas como
aplsicas.
Tipos fisiolgicos de la ictericia:
Tipo 1: aumento en la produccin de bilirrubina:
~ Aparece anemias hemolticas
~ El hgado no es capaz de asumir el aumento de bilirrubina debida a la ruptura masiva
de eritrocitos, como consecuencia se acumula en sangre bilirrubina no conjugada.
Tipo 2: captacin anormal de la bilirrubina por los hepatocitos: aparecen determinados
sndromes como el de Gilbert, falla en el hgado la protena transportadora y por tanto la
captacin heptica de bilirrubina es anormal pro consiguiente se acumula en sangre.
Tipo 3: alteracin en el proceso de conjugacin de la bilirrubina:
~ Es el nico trastorno en la ictericia del recin nacido.
~ Es debida a una inmadurez de la glucuronil-transferasas, enzima responsable de la
conjugacin heptica de la bilirrubina se produce y por tanto una retencin en sangre de
bilirrubina indirecta.
Tipo 4: trastornos en la eliminacin de la bilirrubina conjugada por los hepatocitos:
ocurre en la hepatopatas difusas y algunas enfermedades congnitas. Existe una incapacidad
de los hepatocitos para eliminar la bilirrubina conjugada por medio de la bilis, se produce por
tanto una acumulacin en sangre de bilirrubina conjugada.
Tipo 5: trastornos del flujo biliar de la bilirrubina: aparecen diversos trastornos en los
que las vas biliares estn obstruidas. La bilirrubina conjugada al no poder seguir por las vas
normales refluye o regurgita a la sangre se produce una acumulacin en sangre de bilirrubina
directa.
(Esta bilirrubina directa pasa a la sangre (refluye) de 2 maneras: a travs de los
hepatocitos o bien por los espaciaos intercelulares de la pared de los conductos biliares de
pequeo calibre).

Las hiperbilirrubinemias pueden dar lugar a:

Ictericia preheptica hemoltica: su causa ms frecuente es la hemlisis masiva por
causa patolgicas. Las caractersticas de esta ictericia la hacen identificable con el tipo
fisiolgico 1( aumento en la produccin de bilirrubina). Caractersticas:
~ Orinas no colricas (no tiene color oscuro)
~ Heces pleiocrmicas (con un aumento del color)
~ Est aumentada la bilirrubina indirecta en suero
~ El urobilingeno en orina est aumentado
Ictericia heptica hepatocelular: en ella existe una incapacidad de los hepatocitos
para captar, conjugar y eliminar la bilirrubina. Caractersticas:
~ Orina colrica
~ Heces normales hipoclicas
~ Aumento en el suero la bilirrubina directa y la indirecta
~ El urobilingeno en orina es variable
Ictericia post-heptica u obstructiva: se produce por alteraciones del flujo biliar.
Caractersticas:
~ Orina colrica
~ Heces hipoclicas aclicas
~ Aumento en el suero la bilirrubina directa
~ El urobilingeno en orina est disminuido ausente.
Colestasis: es la alteracin de la formacin de la bilis o de su excrecin hacia el duodeno que
puede producirse tanto por un mal funcionamiento de las clulas hepticas como por
obstruccin de las vas de evacuacin de la bilis.
Las manifestaciones clnicas de esta alteracin depende bsicamente del tiempo
transcurrido desde que esta se manifieste y de la duracin de la misma. Inicialmente se
observa: ictericia, coluria, hipocolia o acolia y prurito (picos).
Si la colestasis se prolonga posteriormente aparece: xantomas (costra de color amarillo)
esteatorea (heces con exceso de grasas) y sndrome de maladsorcin.
La colestasis puede ser de origen intra extra-heptico.

Para efectuar el diagnstico de una colestasis puede recurrirse a al ecografa o a la

tomografa axial computarizada (TAC) resulta de gran utilidad poder contar con algunos datos
de laboratorio que ayuden al diagnstico.
3- Trastornos de la capacidad de detoxificacin por biotransformacin: como
consecuencia de la insuficiencia heptica para eliminar ciertos componentes puede aparecer
una cierta intolerancia a aquellas sustancias (frmacos) que deben ser metabolizadas vas
heptica, debida a esto, estas sustancias se acumula y llega a provocar mltiples trastornos.
4- Trastornos en el metabolismo de hormonas y vitaminas: dada la gran importancia
del hgado en el metabolismo de hormonas y vitaminas una insuficiencias heptica puede ser la
causa de alteraciones cualitativas y cuantitativas en estos metabolitos y por tanto de
importantes alteraciones fisiolgicas. Ejemplo: trastorno en el desarrollo observados en
personas cuyo sistema heptico no es capaz de sintetizar la somatomedina hormona

imprescindible para el normal funcionamiento para la hormona del crecimiento (GH)

somatotropina.
DETERMINACIN DE LA FUNCIONALIDAD HEPTICA
A la hora de determinar la causa (diagnstico) de una determinada hepatopata resulta
imprescindible recurrir a una completa exploracin del hgado que proporciona la mayor
cantidad de informacin posible, dicho exploracin puede ser:
~ De tipo fsico
~ De tipo instrumental
~ De tipo funcional
TIPO FSICO
La exploracin fsica por simple palpacin y percusin del abdomen proporciona
informacin de aspecto tales como la sensibilidad, consistencia y textura de la superficie
heptica y del aumento del tamao del hgado (hepatomegalia) la cual puede orientar hacia
alteraciones hepticas tales como:
Tumores, quistes y otras lesiones que ocupen espacio
Insuficiencia cardiaca (el acmulo de sangre que tiene lugar puede explicar el
aumento de tamao del hgado)
Obstruccin de las vas biliares (acumulacin de bilis)
Hepatitis (por la inflamacin heptica)
TIPO INSTRUMENTAL
Para esta exploracin se recurre a tcnicas de tecnologa y diagnostico avanzadas y
precisas.
Radiologa: se existe aumento del tamao del hgado el diafragma derecho es
desplazado hacia arriba, y esto lo podemos detectar con radiologa de trax.
Gammagrafa: se administra un istopo radiactivo con afinidad sobre los hepatocitos y
las clulas de Kupffer. La radiacin emitida por el istopo es registrada y nos ofrece una
imagen del rgano.
La existencia de lesiones como abscesos, quistes y tumores que no tiene capacidad para
fijar el compuesto radiactivo no se registran.
TAC: es una tcnica diagnstica que usa radiacin X. El haz de rayos X atraviesa la
zona abdominal a diferentes niveles /Cortes transversales) realizando un barrido. La
informacin obtenida, registrada adecuadamente y procesada informticamente, proporcionan
un imagen del hgado en funcin de la diferente densidad radiolgica. La informacin obtenida
es:
~ Forma y tamao del hgado
~ Existencia de lesiones y a veces su naturaleza
~ Calibre d las vas biliares
Ecografa: tcnica que usa ondas sonoras. Informacin que nos da:
~ Tipo de lesin, es decir, si es slida o contiene lquido (abscesos quiste)
~ Calibre de los conductos biliares infrahepticos
Laparoscopia: est basado en al introduccin de un dispositivo ptico en al cavidad
abdominal. Permite observar directamente el hgado.
Puncin biopsia: permite la obtencin de una muestra biolgica de tejido heptico
para su posterior estudio mediante anatoma patolgica.

PRUEBAS FUNCIONALES HEPTICAS

Las pruebas funcionales hepticas son aquellas que permiten determinar la capacidad
global del hgado para llevar a cabo las funciones que le son propias, fundamentalmente las
detoxificacin, la sntesis y las de tipo metablico.
Estas pruebas son en su mayora inespecficas, ya que otros rganos distintos al hgado
y otros mecanismos de regulacin influyen en los resultados obtenidos. Adems algunas de las
pruebas de exploracin funcional no lo son en realidad pues informan acerca de aspectos
parciales como una obstruccin en las vas biliares, lisis de los hepatocitos, etc.
Todas aquellas pruebas seleccionadas para determinar la gravedad y la evolucin de una
enfermedad heptica, debe valorar distintos parmetros bioqumicos, en funcin de la propia
evolucin de la enfermedad; y deben ser interpretados segn el contexto clnico global.
No todas aquellas determinaciones clnicas que reflejan la gravedad y evolucin de una
enfermedad heptica son realmente pruebas funcionales.
Las distintas pruebas que determina ciertos componentes sanguneos, que al variar su
concentracin plasmtica ponen en evidencia una lesin en el hepatocito o una falta de la
permeabilidad de las vas biliares (son los que se conocen como marcadores sricos de
enfermedad heptica), no valoran en realidad la funcionalidad de este rgano y no son por tanto
estrictamente pruebas funcionales hepticas. Tampoco lo son, algunas pruebas bioqumicas de
gran especificidad muy utilizadas actualmente, que permiten diagnosticar una determinada
enfermedad heptica /(hepatitis vrica, tumores heptico, etc) pero que no evalan realmente el
funcionamiento del hgado. No obstante por razones de tipo prctico unas y otras suelen
incluirse en cualquier clasificacin de las pruebas funcionales hepticas.
MARCADORES SRICOS DE LAS HEPATOPATAS
Son constituyentes sanguneos, tiles en el reconocimiento de la enfermedad heptica,
aunque no sirve para medir la funcionalidad heptica global, su alteracin refleja
fundamentalmente el dao del hepatocito o del rbol viral. El nivel srico de todas las enzimas
est en funcin de la lesin celular y de la alteracin de su sntesis, de manera que:
En aquellas enfermedades en que exista dao celular habr rotura de clulas y las
enzimas, que se encuentran en el interior, saldrn al exterior aumentando en el suero.
Aquellas enfermedades que se manifiesten y una inhibicin de la sntesis de las
enzimas, reflejarn una disminucin de sus niveles sricos respecto de los valores normales.
Las enzimas hepticas idneas como marcadores de una lesin a nivel heptico, sern
aquellas que proporcionan un mayor grado de sensibilidad y especificidad. Algunas de las
utilizadas en la actualidad son:
~ Transaminasas:
1- GOT Aspartato-aminotransferasa ASAT
2- GPT alaninamino-transferasa ALAT
~ Fosfatasa alcalina ALP
~ Leucn-amino-peptidasa LAP
~ 5-Nucleotidasa 5-NT
~ Gammaglutamil-transferasa -GT
~ Lactato deshidrogenasa LDH
En concreto la citolisis heptica (necrosis hepatocelular) es una situacin clnica de
origen muy diverso que se manifiesta fundamentalmente por un aumento plasmtico de las
transaminasas. En algunos casos aumentan tambin la ALP, aunque su aumento en relacin a
los valores normales es ms moderado.
A- Transaminasas: se conoce con este nombre a 2 enzimas, la transaminasa
glutmico-oxalactica (GOT) y la transferasa glutmico-pirvica (GPT), presente en el interior

de diversas clulas (especialmente en las hepticas aunque tambin se encuentran en las

musculares).
GOT: se localiza tanto en el citoplasma como en las mitocondrias y los valores
plasmticos normales son 5-34 U/L. Se ve aumentado en:
~ Lesiones hepticas: en las hepatitis agudas los niveles aumentan muchsimo incluso
ms de 3.000 U/L y en las hepatitis crnicas hay aumento pero ms moderado:
~ Necrosis del miocardio
~ Proceso que afectan a las clulas musculares como esta triquinosis.
~ Necrosis tisulares (por ejemplo: embolia pulmonar infarto pulmonar).
Esta enzima es muy difcil que se vea disminuida y si esto ocurre indica desaparicin
del parnquima heptico.
GPT: es una enzima intracelular presente solo en el citoplasma. Los valores normales
son menores a 55 U/L. Se ve aumentada slo en enfermedades que afecten al hgado: hepatocarcinoma, hepatitis aguda y crnicas, metstasis hepticas, etc.
En general se considera que pueden detectarse niveles elevados de GPT en lesiones
hepticas de poca entidad, mientras que es necesario que la lesin sea ms grave para que se
encuentran elevados los niveles de GOT. La determinacin de estas enzimas, aunque tiene un
escaso valor pronstico, es de gran utilidad a la hora de determinar la actividad de las
enfermedades hepticas que cursan con lisis celular.
Triquinosis: enfermedad producida por las larvas de Trichinella Spirallis. El hombre la
contrae por la ingestin de carne de cerdo infestada por Trichinella, cruda mal cocida y de
embutidos en idnticas condiciones., provocan diarrea, vmitos y nuseas. Seguido de un
periodo con estado febril y adinmico, con dolores musculares. Por ltimo un periodo de
enquistamiento en el cual sobreviene la caquexia (adelgazamiento extremo sobretodo a nivel
de los msculos, glteos, diafragma y pectorales).
B- Fosfatasas alcalina: son un conjunto de enzimas (isoenzimas) cuya actividad total
en sangre ese encuentra aumentada fundamentalmente en 2 tipos de procesos: las alteraciones
seas y hepticas.
NOTA: todos los isoenzimas (cada una de las formas en que puede presentarse una
enzima en el organismo) tiene las mismas propiedades catalticas, pero difieren en sus
propiedades fsicas, qumicas e inmunolgicas. [catalizador acelera o frena una reaccin].
Su concentracin normal en el suero es de 25-85 U/L. En concreto la isoenzima
heptica aumenta cuando existe obstruccin biliar, total o parcial, una lesin que ocupa un
espacio en el hgado. La elevacin de la actividad de la fosfatasa alcalina heptica es
indicadora de:
~ Colestasis: se define como patrn de colestasis la elevacin de al fosfatasa alcalina
heptica ms la elevacin de la -GT, mantenindose normales los niveles de las
transaminasas.
~ Cirrosis heptica
~ Metstasis hepticas, carcinoma de vescula biliar, etc.
Niveles sricos inferiores a los normales de fosfatasa alcalina pueden hallarse en
personas con hipotiroidismo y nios que presentan retraso en el crecimiento.
C- LAP (Leucn-amino-peptidasa) y 5-NT (5-Nucleotidasa): ambas enzimas son de
gran utilidad a la hora de aumentar la especificidad de la fosfatasa alcalina, ya que se
encuentran elevadas en las enfermedades hepticas y en cambio no lo hacen en los trastornos
de tipo seo. Un aumento de la fosfatasa alcalina acompaado de un aumento de estas 2
enzimas indica una alteracin heptica, sin embargo un aumento de fosfatasa alcalina con
niveles normales de la LAP y 5-NT, indica que la elevacin tiene otro origen.
D- -GT (Gammaglutamil-transferasa): esta enzima es un marcador de gran
sensibilidad a la hora de determinar una alteracin heptica (indica tanto y que hay rotura de

clulas como colestasis). Cuando el valor heptico de esta enzima es normal, la probabilidad de
que no haya ninguna alteracin a nivel heptico es muy elevada. Se utiliza en combinacin de
la fosfatasa alcalina para diferenciar el origen heptico u seo de una alteracin.
E- LDH (Lactato deshidrogenasa): es una enzima presente en la mayor parte de las
clulas del organismo. Est formada por varios isoenzimas, de los cuales la LDH-5 es de
localizacin heptica. Su aumento plasmtico es indicativo de necrosis hepatocelular o de
carcinoma metasttico de hgado.
PRUEBAS BIOQUMICAS QUE VALORAN LA FUNCIN HEPTICA
Una vez conocida la utilidad que para el diagnstico de las hepatopatas supone la
determinacin de las diferentes marcadores sricos, conviene destacar la importancia de las
pruebas bioqumicas capaces de valorar los aspectos ms importante de la funciones hepticas
y que son fundamentalmente los siguientes:
A- Pruebas que valoran la capacidad de sntesis: una lesin heptica puede provocar
una disminucin de los niveles sricos de aquellas protenas cuya sntesis se realice nicamente
en el hgado (albmina, protombina y fibringeno).
En general la determinacin de la protenas en el suero va a proporcionar una valiosa
informacin acerca de la capacidad de sntesis del hgado. As unos niveles anormalmente
bajos de estas protenas va a indicar una disminucin de dicha capacidad.
Algunas determinaciones utilizadas ms habitualmente para valorar la sntesis heptica
son las siguientes:
Determinacin de albminas y globulinas
Determinacin de los factores de coagulacin
Medida del amoniaco en sangre
Estas pruebas realmente resultan de escasa utilidad para evaluar la funcin heptica
total, puestos que:
~ No son indicadoras absolutas de lesin heptica
~ No permiten distinguir entre las distintas hepatopatas
~ Su descenso srico no es especfico de la enfermedad heptica
B- Pruebas indicadoras de la capacidad excretora heptica: determinar la capacidad del
hgado de eliminar de la sangre las sustancias, tanto endgenas como exgenas, que pueden
resultan nocivas para el organismo. Tambin valoran su posterior excrecin (directamente a la
bilis tras sufrir alguna transformacin en toros rganos)., algunas de las ms utilizadas son:
Las que determinan los niveles de ciertos metabolitos en sangre, orina heces:
bilirrubina urobilingeno.
Las que miden la velocidad de captacin y/o excrecin a nivel heptico de diversas
sustancias tanto endgenas como exgenas: colorantes, cidos biliares y/o frmacos.
C- Pruebas que valoran la actividad metablica heptica: las distintas pruebas
bioqumicas que valoran la actividad metablica heptica estn basados en la gran influencia
que el hgado posee en el metabolismo de las distintas principios inmediatos. Estas pruebas
deben determinar el buen funcionamientos heptico del metabolismo de lpidos, hidratos de
carbono y protenas.
Pruebas funcionales metablicas:
1- Pruebas que valoran el metabolismo de hidratos de carbono
~ Curva de la glucosa
~ Hiperglucemia adrenalnica
~ Prueba de sobrecarga de galactosa
~ Lacticidemia de esfuerzo (Es la presencia de cido lctico en sangre)
2- Pruebas que valoran el metabolismo lipdico
~ Determinacin del colesterol esterificado

3- Pruebas que valoran el metabolismo proteico:

~ Determinacin de albmina plasmtica
~ Determinacin de muco-protenas
~ Determinacin de protena de la coagulacin sangunea
~ Sntesis de protombina
~ Amoniemia (Determinacin de la presencia de carbonato amnico en al sangre).
En general en funcin del aspecto que dentro de la funcin heptica global pretende
valorar las distintas pruebas de exploracin funcional, se pueden clasifican en:
~ Pruebas que valoran la funcin hepatocelular
~ Pruebas de colestasis
~ Pruebas que determinan el funcionamiento de las clulas de Kupffer.
~ Pruebas que valoran la destruccin lisis de los hepatocitos.
Las pruebas que valoran la funcin hepatocelular estrictamente (tambin denominadas
pruebas del parnquima o pruebas metablicas) aportan informacin acerca de aspecto tan
importante como:
~ La funcin metablica heptica
~ La capacidad de biotransformacin heptica
~ La reutilizacin de los cidos biliares por los hepatocitos.
Las pruebas de colestasis ponen en evidencia, principalmente, retenciones del flujo
biliar normal.
Las pruebas que determinan la funcionalidad del as clulas de Kupffer son aquellas
encargadas de poner en evidencia un aumento de -globulinas, que caracteriza este tipo de
trastornos. Cuando ciertos antgenos procedentes del intestino acceden al hgado son
normalmente neutralizados por la accin de las clulas del sistema monocito-macrfago a nivel
heptico (clulas de Kupffer). Cuando esta funcin no puede ser realizada correctamente, se
estimula la sntesis de anticuerpos especficos frente dichos antgenos, pudiendo detectarse
entonces un aumento de las -globulinas (anticuerpos).
Por ltimo las pruebas que valoran la destruccin de los hepatocitos son aquellas que
permiten determinar el aumento plasmtico de las enzimas presentes en el interior de las
clulas hepticas y que tras la lisis de las clulas hepticas salen al exterior.
PRUEBAS DE EXPLORACIN FUNCIONAL HEPTICA
A- Pruebas que valoran la insuficiencia hepatocelular:
1- Determinacin de albmina:
R.S1.: hipoalbuminemia
S.C2.: ~ Es muy buen indicador de la gravedad de una hepatopata
~ Aparece en hepatitis grave y otras enfermedades graves.
~ No informa de una insuficiencia heptica de reciente instauracin
OBS3.:
~ Las clulas hepticas tienen un importante papel en la sntesis proteica
y cuantitativamente la albmina es la ms importante, siendo los valores
plasmticos normales entre 35-5 gr/dl
~ Tiene una vida media (ms menos) de 20 das, por lo que la
disminucin de los niveles en plasma tardan en detectarse.
~ Para su determinacin puede recurrir a tcnicas de electroforesis o
inmuno-electroforesis (De mayor sensibilidad y especificidad).

R.S.: resultado significativo

S.C.: significado clnico
3
OBS.: observaciones
2

2- Determinacin de globulinas:
R.S.: hiperglobulinemia
S.C.: ~ Hepatopatas crnicas como hepatitis crnica activa, cirrosis, hepatitis
~ Cirrosis
~ Hepatitis vrica subaguda
~ Alteraciones extra-hepticas
OBS: ~ globulinas (inmunoglobulinas) sintetizadas a nivel heptico y siendo
sus valores normales de 2-35 gr/dl
~ Son menos especficos de enfermedades hepticas ya que tambin pueden
encontrarse alteradas en procesos extra-hepticos.
3- Determinacin de bilirrubina:
R.S.: Hiperbilirrubinemia mixta
S.C.: ~ Indica insuficiencia hepatocelular. Falla la captacin, conjugacin y
eliminacin de la bilirrubina, apareciendo ictericia.
OBS: ~ Aparece tanto bilirrubina directa como indirecta por eso se denomina
hiperbilirrubinemia mixta.
4- Determinacin de factores de coagulacin:
R.S.: ~ Tiempo de protombina elevada
S.C.: ~ Indica insuficiencia hepatocelular
R.S.: ~ Tiempo de tromboplascina parcial elevada
S.C.: ~ Indica hepatopatas graves
OBS: ~ El hgado sintetiza en exceso algunos de los ms importantes factores de
coagulacin: como el fibringeno (factor I), protombina (factor II), y los
factores V, VII, IX y X. Una lesin heptica grave puede dar lugar a dficit de
algunos factores, con lo cual se podran haber alterado el mecanismo de la
hemostasia (Deteccin espontnea de un flujo sanguneo o hemorrgico).
~ La vida media de los factores de coagulacin es corta, as que estas pruebas
detectan una insuficiencia hepatocelular reciente.
5- Determinacin de amoniaco en sangre (amoniemia):
R.S.: Amoniaco plasmtico elevado (hiperamoniemia)
S.C.: ~ Incapacidad heptica par transformar el amoniaco en urea (este amoniaco
puede ser eliminado en forma de urea con la bilis y pasa a l circulacin sistmica
ocasionando hiperamoniemia).
OBS: ~ El hgado es el encargado de transformar el amoniaco (compuesto nitrogenada
de marcado carcter neuro-txico) en urea y eliminarlo por la bilis. Su
acumulacin puede causar trastornos neuro-txicos como una encefalopata
heptica.
~ Para su deteccin se utilizan tcnicas enzimticas normalmente adaptadas al
empleo de autoanalizadores.
6- Determinacin de glucosa:
R.S.: Hipoglucemia
S.C.: ~ Necrosis heptica aguda (muy rara)
OBS: ~ En general no es un ndice muy claro de enfermedad heptica
~ En caso de enfermedad del hgado pueden encontrarse muy alterados la
gluconeognesis y la glucogenognesis, con lo cual la tolerancia a l glucosa se
ve afectada.
~ Con cirrosis heptica la prueba de sobrecarga oral intravenosa de glucosa
aparece claramente alterada.

7- Determinacin de colesterol plasmtico total:

R.S.: Colesterol elevado
S.C.: ~ Ictericia obstructiva
R.S.: Colesterol con valores normales
S.C.: ~ Ictericia hepatocelular
R.S.: Colesterol con niveles bajos
S.C.: ~ hepatitis grave y cirrosis
OBS: ~ Todas las clulas dl organismo sintetizan colesterol, pero el hgado y el
intestino son su mayores productores.
~ El colesterol heptico es til para la estructura de las membranas celulares del
hgado y para el catabolismo de las sales biliares
~ Es excretado por la bilis estereficado para su almacenamiento.
8- Determinacin de triglicridos:
R.S.: triglicridos aumentados
S.C.: ~ Ictericia obstructiva
~ Alcoholismo, etc
OBS: ~ Junto a la determinacin de colesterol de triglicridos es fundamental par
distinguir las distintas hiperlipoprotenemias
9- Determinacin de bilirrubina:
R.S.: Aclaracin heptico disminuido de la sustancia elegida para la prueba
S.C.: ~ Valoran la capacidad del hgado para extraer colorantes de la sangre
OBS: ~ Los ms utilizados par esta pruebas son:
a- Bromosulftalena: es una prueba de gran sensibilidad pero su realizacin es
muy compleja (tiene peligrosos efectos secundarios para el paciente) y por ello muy
poco utilizada en la actualidad. Consiste en la introduccin intravenosa del colorante y
normalmente se determina la velocidad de excrecin mediante sucesivas
determinaciones en plasma. Se considerara normal un retencin de colorante por
encima del 6% de la dosis administrada. Su utilidad es el diagnstico diferencial de
ciertas hepatopatas, valoran la gravedad de una enfermedad heptica o determina el
grado de recuperacin de la misma.
b- Rosa de Bengala: este se utiliza habitualmente par el diagnstico diferencial
de ictericia infantil. Su administracin se realiza por va parenteral y la excrecin se
mide por orina y heces. Por su baja sensibilidad a l hora de determinar la capacidad
excretora heptica se usa cada vez menos.
10- Medida de l excrecin de cidos biliares:
R.S.: ~ cido clico plasmtico aumentado
~ cido quenodesoxiclico plasmtico aumentado
S.C.: ~ Insuficiencia hepatocelular
OBS: ~ Ambos cidos biliares conjugados con glicina y taurina son secretadas con la
bilis y almacenados en al vescula biliar si hay ayuno o vertidos al intestino
durante la digestin.
~ Su eliminacin de la sangre es muy similar a la de la bilirrubina y de los
colorantes
~ Debido a la complejidad de los mtodos utilizados (cromatografa de gases,
radio-inmuno-anlisis y enzimo-inmuno-ensayo). Su determinacin se limita a
la investigacin clnica.
11- Medida de la excrecin de frmacos: se determina tanto la rapidez con que los
frmacos son aclarados del plasma por el hgado como al aparicin de productos metablicos
en plasma y orina. Son pruebas difciles de aplicar a la prctica clnica cotidiana.

B- Pruebas de colestasis:
1- Determinacin de bilirrubina:
R.S.: bilirrubina directa en sangre aumentada
S.C.: ~ Colestasis
OBS: ~ La bilirrubina conjugada (Directa) no puede ser transportada al intestino con
lo cual vuelve a la sangre. Los niveles estn aumentados en el plasma.
2- Determinacin de enzimas en plasma:
R.S.: Fosfatasas alcalinas aumentadas
S.C.: ~ Colestasis
OBS: ~ La sntesis de estas enzimas en actividad a nivel heptico y son liberadas a la
sangre donde se incrementa su presencia.
~ Debe descartarse una procedencia de la fosfatasa alcalina distinta de la
heptica (de origen seo) para ello hay que comprobar que la que est alterada
es la isoenzima heptica.
~ Simultneamente a las fosfatasas alcalinas pueden detectarse otras enzimas
como al 5-NT que aumenta tambin en la colestasis.
C- Insuficiencia de las clulas de Kupffer:
1- Determinacin de gammaglobulinas sricas:
R.S.: las gammaglobulinas en el suero aumentan
S.C.: ~ Hepatopatas crnicas
OBS: ~ En las hepatopatas crnicas diversos agentes procedentes del intestino no son
eliminados por las clulas de Kupffer y por tanto estimulan la sntesis de los
correspondientes anticuerpos.
D- Pruebas que determinan la hepatolisis:
1- Determinacin de enzimas en el suero:
R.S.: Aumento plasmtico de ciertas enzimas
S.C.: ~ Necrosis de los hepatocitos
OBS: ~ Las enzimas que pueden encontrarse aumentadas en suero son sobretodo las
Transaminasas y los lctico deshidrogenasas, aunque tambin puede haber otras.
~ La destruccin de las clulas hepticas liberan al suero las enzimas que
contiene, aumentado los niveles sricos que contienen
NOTA: el diagnstico de estas enfermedades hepticas en el laboratorio todava no es
totalmente satisfactorio. Ocasionalmente sirven apareciendo hepatopatas crnicas en las que
todas las pruebas bioqumicas arrojan resultados normales. Adems slo en casos
excepcionales pueden demostrase una relacin causa-efecto entre determinadas pruebas por un
lado y la etiologa y/o la alteracin detectada a nivel heptico por el otro. Normalmente lo que
sucede es que la prueba funcional, la causa de la alteracin heptica y la patologa no se
encuentren en estricta relacin.
HEPATITIS
Bajo el nombre se engloba a todo aquel proceso que causa con inflamacin ms
menos aparentes del hgado. Aunque esta alteracin heptica puede estar originada por causas
muy diversas (txicos, frmacos, etc) requieren una especial atencin las hepatitis de origen
infeccioso y muy en particular aquellas cuyo agente etiolgico es de origen vrico (hepatitis
infecciosas vricas).
En general sea cual sea la etiologa, una hepatitis puede manifestarse de forma puntual e
intensa (hepatitis aguda) de una forma menos intensa aunque recurrente en el tiempo, y con
un pronstico incierto que puede ir desde la curacin lenta, graves alteraciones hepticas como
cirrosis procesos de tipo neoplsicos (hepatitis crnicas).

Los ms frecuentes agentes productores de hepatitis en nuestro medio son los virus. En
concreto son los virus de las hepatitis A, B, C (hasta el momento han sido identificados 5 de
esto virus A, B, C, D y E) los causantes de la gran mayora de los casos.
1- Hepatitis vricas: la infeccin por los virus antes mencionadas induce en el husped una
respuesta inmune que se materializa en al formacin de anticuerpos especficos., loa deteccin
en el plasma de dichos anticuerpos (normalmente mediante tcnicas inmunolgicas de notable
sensibilidad y especificidad) as como en su caso la de distintas estructuras de carcter
antignico propias del virus causante de la hepatitis, va a permitir una adecuada orientacin
diagnstica en cada caso.
A- Hepatitis vricas agudas: clnicamente las hepatitis vricas agudas se manifiestan mediante
sntomas tan diversos como: abstemias, fiebre, anorexia, nuseas, cefaleas, dolor abdominal,
erupciones (especialmente urticaria).
Las formas que cursan con ictericia representan menos de un 10% de los casos,
pudiendo aparecer tambin manifestaciones de origen extra-heptico (alteraciones
glomerulares, anemia, aplasia medular,...)
Tras una anamnesia orientativa, para proceder al diagnstico de la hepatitis aguda se
recurre inicialmente al estudio de los siguientes parmetro biolgicos:
Transaminasas: en las hepatitis sus niveles plasmticos aumentan entre 01-100 veces
los normales.
Pruebas de coagulacin: la ms utilizada es el tiempo de quick ( protombina)
(cuando se reduce ms de la mitad es necesario proceder a la hospitalizacin).
Serologa:
~ Investigacin de la presencia de ciertos antgenos procedentes del virus causantes de
la hepatitis.
~ Determinacin de los distintos anticuerpos especficos (especialmente de tipo IgM e
IgG) que aparecen en el plasma de las personas afectadas.
B- Hepatitis vricas crnicas: en general son procesos inflamatorios del hgado originados por
el virus de la hepatitis B y C (los virus de la hepatitis A no desarrollan cronicidad que puedan
acabar favorablemente o desembocar en lesiones hepticas graves y que se caracterizan por que
cursan con lesiones hepticas que van desde necrosis de los hepatocitos hasta infiltrados de
tipo inflamatorio, permitiendo su clasificacin en: persistentes, lobulares y activas.
Actualmente en funcin del agente causal las hepatitis vricas pueden clasificarse en 5
tipos diferentes A, B, C, D y E.
A- Hepatitis A: este tipo de hepatitis cursa normalmente con ictericia, hepatomegalia y
esplenomegalia. La necrosis de las clulas hepticas ocasionan la liberacin a la sangre de
enzimas y bilirrubina. Tienen un periodo de incubacin de entre 2-6 semanas. Es fulminante en
menos del 02% de los casos y no provoca tumor heptico.
La transmisin de este tipo de hepatitis se produce va entrica, una mejor higienecalidad de las aguas de consumo se va a traducir en un descenso de los nuevos caso aparecidos.
En el serodiagnstico de la hepatitis A es prioritario determinar los anticuerpos antivirus
A , es decir, los anti-VHA. Dichos anticuerpos pueden ser de tipo IgM (Dan positivos cuando
es una infeccin reciente IgG.
Se dispone de una vacuna efectiva que est especialmente recomendada en los
siguientes casos:
Personal hospitalario
Personas, sobretodo nios, que viven en colectividad. Por ejemplo: guarderas, centros
escolares,...
Entorno de los afectados por la infeccin
Personas que viajan a pases donde la hepatitis A es endmica.
Personas implicadas en la cadena alimentaria y tratamiento de aguas.

B- Hepatitis B: el virus de la hepatitis B recibe el nombre de partcula DANE.

Estructuralmente pueden distinguirse en l las siguientes partes:
Genoma viral: contiene la informacin para la replicacin viral.
Cpsula: es la parte externa de la estructura y se denomina antgeno de superficie
HBsAg.
Ncleo-cpside core: formado por DNA y protenas, y se denomina HBcAg
Actualmente este virus es el causante de dos millones de fallecidos/aos de entre los
aproximadamente trescientos millones de portadores crnicos identificados en todo el mundo.
La enfermedad se trasmite principalmente por 3 mecanismos:
~ Va parenteral: contacto con sangre o derivados sanguneos, hemodilisis, compartir
agujas o jeringas en drogadiccin intravenosa.
~ Va sexual
~ Va perinatal
Cursa con ictericia, tiene un periodo de incubacin de entre 1-6 meses, es fulminante en
el 1% de los casos, y tiende a cronificarse en un 15-20% de los casos. En las personas
afectadas existe un mayor riesgo que en la hepatitis A de sufrir procesos neoplsicos malignos.
Un estudio serolgico adecuado va a permitir:
Establecer la etiologa (Aguda crnica de la infeccin) y determinar en cada caso su
estado evolutivo.
Detectar las mujeres gestantes portadoras del virus de la hepatitis B.
Detectar la enfermedad crnica asintomtica en nios de madres portadoras del virus.
Determinar el estado inmune previo a la vacunacin de individuos con riesgo de
infectarse.
Realizar estudio epidemiolgico.
Para la realizacin de dicho estudio serolgico de la infeccin por el virus de la
hepatitis B es necesario valorar la ausencia o presencia as como el estudio de los siguientes
marcadores:
~ HBsAg: es el denominado antgeno Australia antgeno de superficie y forma parte
de al estructura externa del virus. Su presencia en el suero indica infeccin actual del virus de
la hepatitis B, pero no informa de si la infeccin es aguda crnica. Un HBsAg negativo no
excluye necesariamente una infeccin por el virus.
~ HBcAc: son anticuerpos originados en respuesta al estmulo antignico del core.
Aparece en fases muy temprana de la infeccin (concentraciones altas) y suelen mantenerse
durante muchos aos en bajas concentraciones en personas que ya estn curadas.
En concreto la presencia de anticuerpos del tipo IgM (HBcAc IgM) es indicacin de
infeccin activa reciente. Es l prueba ms til para diagnosticar una hepatitis aguada, ay que si
sale positiva la confirma y si da negativa permite descontarla.
~ HBsAc: son anticuerpos contra el HBsAg. Se detectan como nicos marcadores en
las personas vacunadas, en los recin nacidos de madres portadoras.
~ HBeAg: es el antgeno e del virus de la hepatitis B. Su presencia indica replicacin
activa del virus y por tanto la posibilidad de contagio de la enfermedad.
~ HBeAc: son anticuerpos contra el antgeno e de la hepatitis B. Suele aparecer 2
semanas despus del inicio de los sntomas y persiste durante muchos meses. La aparicin de
esto anticuerpos y la desaparicin simultnea del HBeAg indica un buen pronstico.
~ DNA y RNA del virus de la hepatitis B: su positividad implica generalmente
replicacin activa del virus.
La vacuna en el caso de la hepatitis B debe proponerse a aquellas personas que
presenten un mayor riesgo de padecer la enfermedad:
personal sanitario
toxicmanos por va parenteral

 cualquier persona que consulte por u a enfermedad de transmisin sexual

entorno de afectados y portadores del antgeno de superficie del virus (HBsAg)
personas portadoras del VIH y sus parejas sexuales
politransfundidos
hemodializados
Un recin nacido de una madre portadora del HBsAg presenta aun mayor riesgo de
padecer la infeccin y que esta evolucione hacia la cronicidad. Es por ello aconsejable (en
algunos pases es obligatorio) detectar a las madres que sean HBsAg positivas en el ltimo
trimestre del embarazo, en cuyo caso ser imprescindible:
~ realizar un diagnstico completo de la enfermedad
~ aplicar medidas de profilaxis al entorno para prevenir el contagio
~ proceder a la serovacunacin del recin nacido en las hors siguientes al nacimiento
~ par proceder al diagnstico clnico de la hepatitis B se recurre en la actualidad a
tcnicas inmunolgicas que permiten identificar anticuerpos especficos frente a diversas
protenas antignicas del virus, o que hacen posible la deteccin en el suero de l persona
afectada del propio antgeno viral. Las principales tcnicas utilizadas para ellos son:
Enzimoinmunoanlisis (EIA): son tcnicas que detectan antgenos y anticuerpos en
una muestra en base a reaccin colorimtricas que utilizan enzimas como marcadores para
detectar la presencia de antgenos anticuerpos especficos.
Radioinmunoanlisis (RIA): este tipo de tcnicas utilizan istopos radiactivos como
marcadores para detectar la presencia de antgenos anticuerpos especficos.
Inmunoelectroforesis: son tcnicas inmunolgicas de precipitacin en las que para
aumentar la sensibilidad y especificidad a la hora de determinar la presencia de antgenos y
anticuerpos se aplica una electroforesis. Una de las ms utilizadas es la contrainmunoelectroforesis (Reaccin doble y bidimensional).
C- Hepatitis C: se transmite por va parenteral (no transmisin sexual). En la actualidad el
virus C es el responsable de la mayor parte de las hepatitis post-transfusionales.
La enfermedad cursa con ictericia, tiene un periodo de incubacin entre 2-16 semanas y
su aparicin fulminante es muy poco frecuente. Aunque la transmisin vertical (madre-hijo)
parece ser dbil tiene lugar frecuentemente cuando la madrea es adems VIH positiva.
Alrededor e la mitad de las personas afectadas desarrollan una infeccin crnica
(presenta una mayor tendencia a la cronicidad que la hepatitis B) y un 20% cursa con cirrosis.
Aparece ser que las personas afectadas de hepatitis C tienen una mayor riesgo de padecer
tumores malignos. Todava no se dispone de una vacuna adecuada.
Para su diagnstico actualmente slo tiene inters la determinacin de los anticuerpos
frente al virus de la hepatitis C, HCAc, aunque esta no es til en la fase aguda de al
enfermedad, puesto que estos anticuerpos pueden tardar meses en aparecer.
D- Hepatitis D: solo aparece en personas portadoras de infeccin por el virus de la hepatitis.
Se transmite por va parenteral a personas que padecen o han padecido hepatitis B. Cursa
normalmente con ictericia mayor frecuentemente provocan un agravamiento de la cronicidad
de la hepatitis B. Existe un probable incremento del riesgo de padecer un proceso neoplsico
maligno.
Para su diagnstico es til la determinacin de los siguientes marcadores:
HDAg: antgeno del virus de la hepatitis D. Slo se detecta en la fase aguda.
HDAc: anticuerpos antivirus de la hepatitis D. El lbulo es alto en infeccin agudas
crnicas activas y bajo en infecciones ya pasadas.
RNA del virus de la hepatitis D: es positivo en las hepatitis crinicas activas.

E- Hepatitis E: cursa normalmente con ictericia. Se transmite va oral-fecal, en epidemias

causadas por fuentes de agua contaminadas. Tiene un periodo de incubacin de 3-9 semanas no
provoca infeccin heptica crnica, se desconoce el riesgo de provocar tumores malignos. Para
este tipo de hepatitis no se conoce vacuna.
Tiene especial gravedad cuando aparecen en mujeres embarazadas (Es mortal entre 1040% de los caos) especialmente cuando se infecta en el primer trimestre del embarazo.
Es desaconsejable los viajes de estas pacientes a zonas donde la hepatitis E sea
endmica.

TEMA 15
PRINCIPIOS BSICOS DE ESPECTROSCOPIA
La espectroscopia se encarga del estudio de la interaccin de la energa radiante con la
materia (tomos, molcula, iones,..)
La espectrofotometra se encarga del estudio de la interaccin de la radiacin
electromagntica (REM) con la materia (tomos, molculas, iones).
INTERACCIN DE AL ENERGA RADIANTE CON LA MATERIA
La energa radiante puede manifestarse como movimientos ondulatorios (REM es
energa radiante que lleva asociados un movimiento ondulatorio) o como si estuviese integrada
por un flujo de partculas indiscretas paquetes ondulatorios energticos denominados fotones,
es decir, presentante propiedad electromagnticas y energticas.
Estos 2 modelos de la energa radiante no son excluyentes sin o complementarios.
PARMETROS ONDULATORIOS
La radiacin electromagntica es una forma de energa radiante (asociada a un
movimientos ondulatorio) por lo tanto tiene propiedades ondulatorias propagndose en forma
de ondas. En este fenmeno ondulatorio se define:

Amplitud (A): es la longitud del vector elctrico en el mximo de la onda.

Longitud de onda (): es la distancia entre 2 puntos que se encuentran en el mismo
estado de vibracin. Se identifica con la letra griega Lambda () y se suele expresar en
nanmetros (nm). 1 nm = 10-9 m. tambin se puede expresar en Angstrons (A) = 10-10 m; en
micrmetros (mm) = 10-6 m (IR).
Cada sustancia absorber a una longitud de onda caracterstica que depender de su
estructura, el medio en el que este, etc.
Periodo (T): es el tiempo en segundos y tarda una partcula en realizar una oscilacin
completa.
Frecuencia (): es el nmero de ciclos por segundo, es el nmero de oscilaciones
completas que una partcula realiza en una unidad de tiempo generalmente un segundo. La
unidad de la frecuencia es el Hertz = seg.-1. Es la inversa a la longitud de onda. C = velocidad
de la luz y = longitud de onda.
Velocidad de propagacin (v): es el resultado del producto de la frecuencia por la
longitud de onda. Depende del medio de propagacin de la radiacin.
Nmero de onda (1/): es el parmetro descriptivo cuyos valores es l inversa de la
longitud de onda. Se mide en cm-1.
Potencia (P): es la energa del haz de radiacin que llega hasta un rea determinado en
la unidad de tiempo.

Existe una relacin entre la energa radiante y la longitud de onda de la radiacin que se
expresa en la ecuacin siguiente.

En la cual ambos parmetros son inversamente proporcionales de manera que cuanto

mayor sea la longitud de la radiacin electromagntica menor va a ser su energa y viceversa.
COMPORTAMIENTO DE LA MATERIA ANTE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA

La materia est constituida por tomos, iones o molculas. En los tomos los electrones
se disponen en orbitales ms menos alejados del ncleo, adoptando una configuracin
caracterstica. En las molculas los enlaces covalentes entre tomos se forman porque los
electrones que los constituyen se localizan alrededor de los 2 centros atmicos de tal manera
que se minimizan las fuerzas de repulsin. Las zonas interatmicas ocupadas entre los
electrones enlazantes se conocen como orbitales moleculares, y se pueden considerar como la
superposicin de orbitales atmicos. Cuando se incide sobre la materia con una energa
radiantes tiene lugar determinadas transiciones electrnicas (desplazamiento de electrones)
desde unos orbitales a otros.
Las molculas cualquiera que sea su posicin y el estado fsico estn en constante
movimiento de vibracin, rotacin y traslacin.
Los movimientos que experimentan los tomos y molculas va asociados a una energa
que se denomina vibracional, rotacional y traslacional, y por ello presentan diferentes estados
energticos. Tanto las molculas como los tomos solo pueden presentar determinados estados
de energa discontinuos y cuantificados definidos por su configuracin electrnica y su
disposicin espacial. La energa emitida absorbida ser aquella que permite la transicin
entre 2 estados energticos diferentes.
La diferencia de energas entre los estados vibracionales, rotacionales y/o electrnicos
es nica y comn para los tomos o molculas de la misma especie qumica y por ello solo
absorben energa radiante de caractersticas definidas , etc). En base a este
comportamiento se aplican las tcnicas analticas espectroscpicas para identificar y/o
cuantificar en muestras biolgicas los parmetros, indicadores de estados fisiolgicos y/o
patolgicos.
ABSORCIN ATMICA DE ENERGA
En los tomos los electrones ocupan alrededor del ncleo determinados niveles
energticos que definen orbitales caractersticas para cada tipo de tomo. Un tomo en estas
condiciones se encuentran en su estado fundamental de menor energa (Eo). Su configuracin
electrnica es estable y tiende a mantenerla y a recuperarla si esta a sido alterada. Cuando estos
tomos iones o su agrupaciones se someten a la accin de energa de excitacin se van a
producir una serie de transformaciones y/o desplazamiento dependientes de las caractersticas
de la energa. En el caso de radiacin electromagntica la respuesta del tomo est relacionada
con los parmetros ondulatorios de la radiacin incidente (,...).
De acuerdo con la regla de Kirschhoff una sustancia que es sometida a excitacin al
recuperar su estado fundamental no puede emitir ms energa de la que es capaz de absorber en
las mismas condiciones de la irradiacin.
La emisin de energa puede realizarse de una sola vez o en varios estadio intermedios
denominados mximos de emisin. Cuanto ms elevado sea el nivel de excitacin alcanzado
mayor ser el nmero de desplazamientos electrnicos posibles y por tanto mayor el nmero de
lneas espectrales (cada desplazamiento electrnico da lugar a una lnea espectral)

Si esta excitacin se produce a gran escala, la emisin produce espectros continuos

como consecuencia del gran nmero de lneas que no dejan margen para la aparicin de
discontinuidades finitas.
Los tomos tiene espectros de lneas y las molculas de bandas.
En el caso de radiacin correspondiente a la banda espectral del ultravioleta y/o del
visible la radiacin tiene la energa suficiente como para producir el desplazamiento de los
electrones de enlace (molculas) a posiciones ms en energtica y por tanto menos estables
denominados estados excitados (En). Los tomos tienden a estar en el estado de mayor
estabilidad que coincide con el estado fundamental (Eo) menos energtico por lo que los
electrones al volver parcial o total a este estado en el proceso denominado relajacin la energa
que fue previamente ligada a la cantidad de energa incidente.
Cada desplazamiento electrnico al que corresponde una determinada cantidad de
energa (E = h ) produce un determinado mximo de absorcin emisin denominado lnea
espectral. Para cada elemento existe un nmero de desplazamientos posibles dependiendo de su
configuracin electrnica, por lo tanto unas lneas espectrales concretas.
Cada elemento determinado n de electrones n de lneas espectrales determinadas
La energa emitida y reabsorbida est en funcin del tipo de energa incidente y de la
estructura electrnica de la materia.

Slo se absorben aquellos fotones cuya energa es compatible con el paso de los
electrones del estado fundamental al excitado y a la inversa [un fotn es un cuanto de energa
de luz], la energa de los fotones es inversamente proporcional a la longitud de onda de la luz.
Este fenmeno es la base de tcnicas espectroscpicas de anlisis tales como:
~ Absorcin atmica
~ Emisin
~ Fotometra de llama (emisin atmica)
~ Fotoluminiscencia (fluorescencia y fosforescencia)
~ Dispersin Raman
~ Nefelometra
~ Turbidimetra
Cuando la radiacin incidente es ms energtica como la radiacin X se produce
excitacin en electrones ms internos que acceden a orbitales ms energticos y los huecos
ocasionados pueden ocuparse por otros electrones que emiten esa energa para alcanzar
posiciones cercanas al ncleo. Este fenmeno es la base de las tcnicas analticas
espectroscpicas de: absorcin, emisin, difraccin, dispersin y fluorescencia de radiacin X

Los niveles de energa no se afectan por el tipo de combinacin qumica del tomo ni
por estado qumico del elemento por lo que la absorcin y emisin de radiacin X se aplica
para la identificacin de elementos en las muestras.
En el caso de la radiacin mucha ms energtica y penetrante su accin se localiza a
nivel nuclear donde ocasiona transmutacin y desintegracin en el ncleo dando lugar a otro
elemento que puede ser radiactivo. Este fenmeno es la base del anlisis de activacin aplicado
para la identificacin de elementos en las muestras.
ABSORCIN MOLECULAR DE ENERGA
Las molculas (agrupaciones atmicas) presentan estados magnticos bien definidos
que se denominan estados permitidos o Eigestates. Los niveles de energa asociados a dichos
estados reciben el nombre de niveles energticos permitidos tambin denominados Eigenvaues.
El nivel de energa ms elevado es el momento magntico que se describe con la letra mu ().
Tambin existen estados energticos intermedios entre el fundamental y los excitados.
Las molculas se encuentran en constante movimiento de rotacin, traslacin y
vibracin a los que se encuentran asociados energticos vibracionales, rotacionales y
electrnicos.
Una molculas presenta muchos ms niveles cuantizados de energa vibracional que
niveles electrnicos y a su vez mayor nmero de niveles energticos rotacionales que
vibracionales.

Los espectros de absorcin de las molculas poliatmicas son ms complejos que los
espectros atmicos, al presentar un nmero y de transiciones entre sus numerosos estados
energticos. Para cada estado energtico electrnico existen varios vibracionales y para cada
vibracional varios rotacionales, lo que supone una gran cantidad de lneas espectrales, tantas
que se superponen entre ellas dando lugar a los espectros de bandas que abarcan un intervalo
considerables de longitud de onda. La energa asociada a las bandas de una molcula presenta
por tanto 3 componentes, el rotacional, el vibracional, y el electrnico.

Las molculas se encuentran en constante movimiento y se distinguen:

A- Un movimiento de vibracin de los tomos que constituyen la molcula de tal
manera que se alejan y se aproximan entre s o se mueven en varios planos. La energa
asociada a estos movimientos se presentan tambin en estados bien definidos (es decir, tiene
eso valores y no otros), se denomina energa vibracional. Solo son posibles determinados
estados energticos vibracionales, entre los que se producen transiciones moleculares en
direccin a estados excitados ms inestables y energticos (Estados vibracionales) a incidir con
energa radiante sobre la muestra. El tipo de energa que provoca estas transiciones es la
radiacin infrarroja insuficiente para ocasionar transiciones electrnicas. A causa de las
transiciones rotacionales pueden surgir una serie de picos para cada estado vibracional pero en

muestras lquidas y slidas la rotacin est impedida y las pequeas diferencias de energa no
se detectan en el espectro.
B- Un movimiento de rotacin por el que las molculas giran en el espacio llevando
asociadas una energa rotatoria que existe solo en estados energticos bien definidos. Al incidir
sobre la muestra con energa radiante de unos determinadas caractersticas s producen unas
transiciones moleculares a estados energticos rotacionales superiores o excitados en los que
gira con mayor rapidez. As se origina el espectro rotacional. Las radiaciones que producen
este tipo de transiciones son de baja energa y elevada longitud de onda como por ejemplo la
radiacin microondas. Los gases muestran espectros rotacionales puros en esta banda espectral.
C- Un movimiento electrnico ocasionado tras la irradiacin, es decir, transiciones
electrnicas hacia estados energticos ms inestables, excitados en los que permanecen un
periodo corto. Como en los casos anteriores slo son posibles determinados estados energticos
dependiendo de la configuracin electrnica de los tomos que forman las molculas y a su vez
slo se permiten transiciones en los electrones de las capas ms externas es la radiacin
correspondiente a las bandas visible y ultravioleta del espectro.

En general podemos decir que la irradiacin sobre las molculas de las muestras
ocasionan un aumento de la rotacin y vibracin. La vibracin y la rotacin molecular depende
de la estructura y disposicin de los tomos as como de la masa de sus componentes y sus
grupos funcionales.
Si la irradiacin incidente es de radio-frecuencia es capaz de producir excitacin
electrnica. Sin embargo su accin se localiza a nivel nuclear donde ocasiona un cambio den la
distribucin de cargas de las capas ms internas. Este fenmeno se aplica en analtica clnica y
en diagnstico ms imagen (ecografa).
EMISIN DE ENERGA
Cuando la materia excitada se relaja a niveles menos energticos cede su exceso de
energa en forma de fotones
La excitacin puede originarse por diversos mecanismos:
A- Bombardeando la materia con electrones u otras partculas elementales (neutr y prot
B- Exposicin de la materia a una chispa de corriente alterna de elevado potencial.
C- Tratamiento trmico con arco llama
D- Irradiacin con radiacin electromagntica
Los tomos o iones atmicos muy separados entre s como ocurre en la materia gaseosa
son capaces de emitir energa radiante de escaso nmero de longitud de onda al haber sido
excitada previamente con lo que el espectro ser discontinuo de lneas.
Los espectros continuos de bandas son aquellos constituidos por un elevado nmero de
longitud de onda tantas que la discriminacin de las mismas es difcil y resultan de la
excitacin de slidos lquidos en el que los tomos no tiene mucho espacio entre ellos o bien
de la excitacin de molculas.
Cuando la energa incidente es una radiacin electromagntica tan penetrante como
para arrancar electrones de capas cercanas al ncleo y desplazarlos hasta niveles superiores, al

volver al estado fundamental se emite radiacin (a travs de transiciones electrnicas

cuantizadas) presentado espectro discretos e emisin de radiacin X formados por lneas
caractersticas de la materia que han sido irradiada.
La fluorescencia es un fenmeno de emisin atmica y/o molecular que se produce tras
al relajacin de la materia previamente irradiada y cuya duracin es del orfen de 10 -5 segundos
desde el inicio d la excitacin.
Se distinguen varios tipos de fluorescencia:
Fluorescencia de resonancia: se manifiesta cuando la radiacin reemitida es de la
misma frecuencia y energa que al empleada en al a excitacin.
Fluorescencia no resonante: ocurre cuando la materia irradia son molculas en
solucin lquida o en estado gaseosos donde la radiacin de relajacin est desplazado al ser
menos energtico. Posee una frecuencia menor y una longitud de onda mayor que la excitacin
este desplazamiento de parmetros ondulatorios se denomina desplazamiento de Stokes.
La fluorescencia de las molculas puede ocasionar radiacin de resonancia no
resonante.
Otro caso de emisin es la fosforescena donde se produce tras la irradiacin de la
materia un cambio en el Spin de los electrones con lo que la emisin energtica posterior se
mantiene durante un tiempo que oscila desde unos pocos segundos o minutos incluso horas.
Este fenmeno fluminiscente tiene lugar cuando una molcula excitada vuelve a niveles menos
energticos denominados estados tripletes emitiendo una radiacin de mayor longitud de onda
que la de excitacin (por lo tanto se produce desplazamiento de Stokes)
Los 2 fenmenos (fluorescencia y fosforescencia) se conocen en conjunto con el
nombre de fotoluminiscencia.
Existe otro fenmeno fotoluminiscencia denominado quimioluminiscencia que se
produce en el transcurso de una reaccin qumica. En algunas ocasiones no es el analito el que
experimenta el proceso de excitacin-relajacin si no una especie formada por la reaccin del
analito y los reactivos qumicos utilizados en la prueba.
LEYES DE ABSORCIN
La radiacin electromagntica es una propagacin de la energa y se considera como un
conjunto de fotones que lleva asociadas una onda.
El espectro electromagntico es el conjunto de radiacin electromagntica cubre un
amplio intervalo de energa de radiacin y est divido en varias regiones bandas espectrales
caracterizadas por varios parmetros como: longitud de onda, frecuencia, etc. La relacin de la
longitud de onda con la frecuencia y la energa de radiacin es inversa por lo que las
radiaciones ms energticas (las ms penetrantes) son a su vez las de mayor frecuencia y
menor longitud de onda.
La regin visible del espectro es la zona de longitud cuya energa radiante es capaz de
detectar el ojo humano y va desde el violeta al rojo.

Al incidir sobre el material biolgico con una (radiacin) intensidad inicial (Io) las
molculas y/o tomos del mismo absorben parte de esa radiacin denominada Ia, otra parte la
dispersa denominada Id y otra atraviesa la muestra It. La cantidad de radiacin absorbida (Ia)
se ajusta a las leyes fsicas concretas dependientes delas caractersticas tanto de la radiacin
como de la materia sorbe la que se irradia.
La radiacin incidente ser igual a la radiacin absorbida, la dispersada y la q atraviesa
la muestra sin entrar en contacto con los tomos y molculas de la misma (Io = It + Id + Ia)
La relacin entre la radiacin incidente (Io) y la trasmitida (It) se llama transmitancia
se representa por t y se expresa por la ecuacin
Indica la radiacin no absorbida ni dispersada y sus valores se expresan en porcentajes.
El porcentaje de transmitancia es % t =
La cantidad de radiacin absorbida se conoce como absorbancia se representa por A y
tambin denominada densidad ptica (DO) o de extincin (E) y se expresa por la siguiente
ecuacin
LEY DE LAMBERT BOURGER
Esta ley expresa que la cantidad de radiacin absorbida (A) es proporcional a la
absortividad (a) de la muestra y al trayecto ptico (b) suponiendo que el parmetro ondulatorio
y la muestra no varen:

LEY DE BEER
Esta ley muestra que existe una relacin entre la absorbancia de radiacin por parte de
la muestra (A) y la concentracin del analito de la misma, siendo constantes la longitud de
onda y el trayecto ptico (=1 cm). Expresado en la ecuacin:

LEY DE LAMBERT-BEER
Es el resultado de combinar ambas leyes de absorbancia e indica la relacin
directamente proporcional que existe entre la absorbancia de una muestra y su concentracin,
el ser constantes los valores del trayecto ptico (b = 1 cm), la longitud de onda de la radiacin
incidente y la absortividad, expresada como absortividad molar ().
A = a b c = b c (moles/L)
Nos indica que mayor mayor va a ser la absorbancia, significa que el mtodo va a
tener mayor sensibilidad.

Entonces la ley de Lambert-Beer la escribimos de la siguientes forma:

Siendo:
Io: intensidad de la radiacin incidente
It: intensidad de la radiacin final, despus de haber atravesado la cubeta de la muestra
A: absorbancia: es la medida de la absorcin de la radiacin por parte de la muestra,
tambin se denomina densidad ptica extincin, es una magnitud adimensional, generalmente
los espectrofotmetros expresan la absorbancia hasta las milsimas (0---). Suelen ser
magnitudes que oscilan entre 0 y 1. aunque en determinados anlisis en los que se mide la
variacin de la absorbancia con el tiempo se pueden obtener valores superiores.
b = trayecto ptico: su valor est estandarizado en 1 cm, la longitud de la muestra que
atraviesa la radiacin cuando esta se encuentra depositadas en una cubeta.
c = concentracin de las sustancias (analito) en la muestra: suele expresare sen moles/L)
(con la absortividad molar -) gr/l si se utiliza absortividad.
: la constante se define como la absorcin de una solucin de 1 mol/L a una
determinada longitud de onda y un espesor de cubeta de 1 cm. Es una caracterstica de cada
sustancia y su valor est tabulado para unas condiciones de pH, longitud e onda, temperatura,
disolvente, etc previamente establecidos.
LIMITACIONES DE LA LEY DE LAMBERT-BEER
La relacin directamente proporcional entre la absorcin de la radiacin por parte del
analito y su concentracin en al muestra, no es lineal len cualquier situacin. Si representamos
grficamente entre la absorbancia y la concentracin obtenemos una lnea recta. Existe unas
condiciones limitantes desviacin de esta ley que depende de determinadas caractersticas del
analito o que tiene un origen instrumental qumicos en los que la relacin no presenta
linealidad. Estas desviaciones son:
1- Dependientes de las caractersticas del analito:
A- Cuando la concentracin del analito (tomo, molcula y/o iones) es relativamente
pequea y adems existe en la muestra concentracin elevadas de electrolitos que son capaces
de alterar mediante interacciones electrostticas, la del analito. Este hecho ocasiona una
alteracin en al absorcin que la desva de la linealidad.

B- Cuando la concentracin del analito es elevada. Se considera que si supera el valor

de 001M la distancia media entre las especies responsables de la absorcin disminuye tanto
como para alterar la distribucin la carga elctrica y por tanto su capacidad de absorcin de la
radiacin. A veces aunque la concentracin del analito sea inferior a 001M el tamao de las
molculas absorbentes es tal que las interacciones electrostticas originadas alteran la
capacidad de absorcin.
C- Cuando existen impurezas (Sustancias situaciones distintas al analito) en la
muestra que presentan emisin absorcin de radiacin a la longitud de onda del anlisis)
2- Limitaciones qumicas: cuando por las caractersticas de la tcnica o del analito si
produce una interaccin qumica (asociacin, disociacin reaccin) de este con otras
sustancias de la muestra de los reactivos. Resultando un compuesto que presenta un espectro
de absorcin distinto al analito.

3- Limitaciones instrumentales: cuando por las caractersticas del aparato ptico de

medida se detecta una cantidad de radiacin denominada radiacin parsita diferentes a la
absorbida por el analito.
El cumplimiento de la ley de Lambert-Beer nicamente es estricto cuando la radiacin
incidente es monocromtica, echo que es muy difcil de conseguir dado que los dispositivos
que discriminar la longitud e onda no son tan selectivos. Esta desviacin de la ley no es
perceptible cuando el rango de longitud de onda discriminados es relativamente estrecho.
La radiacin parsita puede llegar a medirse cuando la radiacin incidente es poco
energtica y la concentracin de analito es elevada.
Los reactivos comerciales estn preparados para que las diferentes tcnicas de anlisis
se realicen dentro del campo lineal de la ley de Lambert-Beer.
LA ESPECTROSCOPIA EN ANALTICA CLNICA
Muchos de los mtodos analticos espectroscpicos resultan de la aplicacin de la ley
de Lambert-Beer. La selectividad en la absorcin o emisin de energa por parte de la materia
ha hecho posible el desarrollo de mtodos analticos cuya finalidad es la deteccin en fluido y
tejidos biolgicos de:
ausencia o presencia de parmetros analticos
la cuantificacin de la concentracin de estos parmetros
actividad de numerosas enzimas
Estos parmetros analticos son indicadores de determinados estados tantos fisiolgicos
como patolgicos y junto a otras pruebas permiten la prevencin, el diagnstico y el
tratamiento ola evaluacin del seguimiento de este estados de salud.
Conociendo la longitud de onda ptima (ptima) a los que absorben los parmetros
biolgicos o analitos (o especies directamente relacionadas con ellos) y aplicando las leyes de
espectrofotometra se pueden realizar las analticas en los laboratorios clnicos.
Al incidir la radiacin electromagntica sorbe la muestra biolgica lquida (por su
naturaleza o por que se ha sido preparada en el laboratorio en ese estado para su anlisis) las
molculas, iones y/o tomos de la misma, se van a comportar de diferentes formas
dependiendo de :
~ El tipo de muestra
~ El tipo de parmetro para identificar o cuantificar
~ La concentracin del analito en la muestra
~ Las caractersticas de la radiacin que incide sobre la muestra ()
Si se selecciona una longitud de onda a la que slo o preferentemente absorbe ese
analito especie directamente relacionada con l y se mide la cantidad de radiacin absorbida
se podr cuantificar la concentracin de analito en la muestra
Esta longitud de onda de medida es caracterstica de cada analito, y tcnica de
determinacin y se denomina longitud de onda ptima de medida (ptima) no tiene porque ser la
longitud de onda de mxima absorbancia a no ser que sea una sustancia pura en al muestra
(ejemplo: en la determinacin de glucosa plasmtica por el mtodo de la glucosa oxidasa la
longitud de onda es de 620 nm).
SISTEMAS PTICOS ESPECTROSCPICOS
Los mtodos pticos utilizados en espectroscopia tienen su base en 4 fenmenos:
~ Absorcin
~ Emisin
~ Dispersin
~ Luminiscencia: fluorescencia, fosforescencia y quimioluminiscencia

El aparataje utilizado tiene muchos componentes comunes diferencindose en su

composicin dependiendo del tipo de medida que se realice. Como esquema general de un
espectroscopio se puede decir que sus componentes son:
A- Fuentes de radiacin
B- Sistema de depsito de la muestra
C- Selectores de longitud de onda
D- Detector de radiacin
E- Sistema de registro y lectura
El conjunto de los elementos ordenados constituyen la ptica del aparato y dependiendo
de la colocacin se diferencian los aparato de haz sencillos y los de doble haz. En la mayora
de los equipos los componentes C, D, y E son comunes y se disponen en ese orden; son en los
componentes A y B en los que se encuentran las variaciones dependiendo del tipo de medida.
COMPONENTES DE UN EQUIPO ESPECTROSCPICO
Veremos un esquema general de un equipo espectroscpico de haz simple y de doble
haz. La diferencia entre ambos radica en la divisin del haz incidente en 2 haces de similares
intensidades: el de referencia y el de la muestra.
Es sistema de desdoble puede ser un espejo plano que refleja aproximadamente la mitad
de la radiacin incidente hacia la muestra con orificios que permiten atravesar la radiacin no
reflejada (radiacin referencial) hacia el sistema de deteccin. Con esta disposicin se evitan
errores analticos debidos a fluctuaciones ocurridos en la fuente de radiacin.

A- Fuente de radiacin: es el origen de la emisin energtica en forma de radiacin

electromagntica lo suficientemente porten y estable para que sea su deteccin y su medida una
vez a atravesado la muestra a analizar. Su diseo depende del tipo de radiacin que se pretende
aplicar a la muestra (rangos de longitud de onda).
Para que se considere una fuente de radiacin adecuada a de cumplir 2 condiciones
fundamentales:
~ Debe cubrir toda la banda de longitud de onda del espectro que se van a utilizar en la
determinacin
~ La intensidad de la radiacin ha de ser elevada, constante y sin fluctuaciones
Existen varios tipos de fuentes:
Fuentes continuas
Fuentes de lneas
Lser

 Las fuentes continuas se utilizan sobre todo en adsorcin y fluorescencia. Se conocen

tambin como lmparas y pueden ser: monocromticas (emiten radiacin de longitud de onda
de un rango pequeo de longitud de onda) y policromticas.(emiten radiacin en determinadas
bandas de longitud de onda).
Ejemplos de fuentes continuas:
~ Lmparas de filamentos de Tungsteno y de halgenos para el visible y el ultravioleta
prximo (est entre 250-350 nm)
~ Lmparas de hidrgeno y/o deuterio con radiacin del ultravioleta (220-370 nm)
~ Lmparas de arco con xenn mercurio a elevada presin para el visible
~ Lmparas de infrarrojos constituidos por slidos inertes calentados por la temperatura
de 2.000C.
Las fuentes de lneas emiten radiacin en forma de lneas discretas y se aplica con
espectroscopia de adsorcin atmica, de fluorescencia atmica, de fluorescencia molecular y
en espectroscopia Raman.
Ejemplo de estas fuentes:
~ Lmpara de vapor de mercurio
~ Lmparas de vapor de sodio
~ Lmparas de ctodos huecos que se usa en espectroscopia de adsorcin atmica y
fluorescencia
~ Lmparas de descargas sin electrodos, en espectroscopia de adsorcin atmica y
fluorescencia
Lser (light amplification by stimulated emission of radiation) resulta de gran utilidad
debida a su aumento de radiacin y a su pequea anchura de bandas. Se emplea en
espectroscopia Raman, en espectroscopio de adsorcin molecular, espectroscopia de emisin y
en algunos tipos de espectroscopia infrarroja. El dispositivo lser se activa con una radiacin o
una descarga elctrica externa que consigue que unos pocos fotones energticos den lugar a
una haz extenso y definido. El interior del medio lser puede estar constituido y un cristal
slido, un material semiconductor, una solucin de un colorante un gas (el ms conocido es
el de rub).
Ejemplo:
~ Lser en estado slido:
Lser de rub

Lser de neodimio en un cristal de granate de aluminio e itrio

~ Lser de gas:
Lser de tomos de helio-nen

Lser de iones de argn kriptn

Lser de molculas en medio CO2 N2

Lser excimeros de helio, flor y argn, kriptn xenn

B- Dispositivo que contiene la muestra biolgica: el dispositivo en espectroscopia de

adsorcin molecular ultravioleta-visible es una cubeta o celda que debe de estar fabricada de
un material que no absorba el material incidente sobre la muestra para evitar errores. Si se mide
con luz visible suelen ser de plstico (ms baratas y operativas al ser desechables) vidrio. En
caso de radiacin ultravioleta se emplean cubetas de cuarzo slice fundida.
El ancho est estandarizado en 1 cm. Las capacidades que pueden presentar son: 05 ml
(microcubetas), 05-2 ml (semi-microcubetas), mayor de 2 ml (macrocubetas).
En energa atmica donde los analitos son tomos los dispositivos que contiene las
muestras constan de un sistema de atomizacin y del recipiente propiamente dicho, situado en
el trayecto ptico de la radiacin. En el caso de un sistema de atomizacin electrotrmica el
espectrofotmetro se conoce con el nombre de cmara o horno de grafito y el recipiente es un

tubo de grafito de unos 2 cm de longitud y 05 de dimetro con un orificio poro el que se

deposita la muestra lquida con una micropipeta. Para esta misma cmara pueden emplearse
una variante del tubo de grafito que dispone de una plataforma adicional denominada
plataforma de L`vov cuya finalidad es la de conseguir una temperatura homognea en toda la
superficie e interior de al gota de muestra.
En el caso de un sistema de atomizacin trmico el espectrofotmetro se conoce con el
nombre de llama y esta es la que contiene a la muestra que accede aspirada y nebulizada a
travs de un capilar hasta el interior de la llama. A veces es necesario producir en la llama una
reaccin qumica para conseguir optimizar la atomizacin. El recipiente es un dispositivo de
material termo-resistente, situado en el trayecto ptico del haz incidente.
C- Sistemas de seleccin de longitud de onda: su funcin es la de discriminar
seleccionar una banda estrecha de longitud de onda de las procedentes de las fuentes de
radiacin con la finalidad de aumentar la sensibilidad de la medida de absorbancia.
Esta radiacin seleccionada ser o tendr incluida la longitud de onda ptima del analito
Se emplean diferentes tipos de selectores variando su capacidad para discriminar
radiacin, desde los ms grosero (seleccionan rangos ms amplios del espectro) a los ms
selectivos (seleccionan rangos ms estrechos de longitud de onda). Algunos ejemplos de estos
sistemas son:
Filtros: que absorben la mayor parte de la radiacin, exceptuando una banda estrecha
de la misma, en al que se incluye la longitud de onda de medida, ya que es muy difcil
discriminar con una sola longitud de onda. Los filtros ms empleados son los de absorcin para
medidas en el visible y los de interferencias que operan en las regiones espectrales del
ultravioleta infrarrojo.
Monocromadores: diseados para poder realizar mediadas en un intervalo de longitud
de onda. Los que se emplean con fuentes de radiacin visible, ultravioleta, infrarrojos estn
constituido con componentes similares:
Rendijas de entrada

Lente espejo que produce un haz de radiacin paralelo

Redes prismas que dispersan la radiacin en sus longitudes de onda

individuales
Un elemento focalizador que enfoque la imagen

Una rendija de salida que asla la banda espectral de medida

D- Detectores: son sistemas que amplifican y transforman la energa radiante no

absorbida (It) por la muestra de energa elctrica y al convierten en una seal elctrica y
cuantificable.
Las propiedades de un bien detector son:
Cubrir un amplio intervalo de longitud de onda
Elevada sensibilidad
Elevada relacin seal-ruido
Respuestas rpida y constante
Mnima seal en ausencia de radiacin incidente
Seal directamente proporcional a la potencia de energa radiante que detecta.
Ejemplo:
1- Detectores de fotones:
~ Fotoclulas
~ Clulas fotovoltaicas
~ Clulas de capa-barrera
~ Fototubos multiplicadores
~ Detectores de fotoconductividad
~ Fotodiodos de slice

2- Detectores multicanal de fotones

~ Tubos vidicon multicanal
~ Detectores de transferencia de carga
3- Detectores de calor
E- Registro y presentacin de datos: la seal elctricas producida es amplificada por el
procesador de seal que lo transforma en dgitos numricos que nos puede indicar la
transmitancia o la absorbancia de analito de al muestra su concentracin; dependiendo de
cmo se programe el espectrofotmetro en cada caso, ya que debe contar con la capacidad de
poder realizar operaciones matemticas.
Se puede registrar el papel para almacenar los resultados y poder realizar posteriores
estudios. Los ms utilizados son los procesadores de conteo de fotones.

PREGUNTAS
1- En un movimiento ondulatorio definimos longitud de onda como:
2- Definicin de frecuencia
3- En los enlaces covalentes de las molculas los electrones que las forman ocupan las zonas
interatmicas denominadas?
4- Las diferencias de energa entre los estados vibracionales, rotacionales y/o electrnicos de
los tomos y/o molculas es nica y comn para los tomos y molculas de la misma especie
qumica V F?
5- En los tomos los electrones ocupan alrededor del ncleo determinados niveles energticos,
que definen orbitales caractersticos para cada tipo de tomo. Un tomo en estas condiciones se
encuentra en ............
6- Regla de Kirschoff
7- En el caso de al radiacin ultravioleta y/o visible tiene suficiente energa como para
producir el desplazamiento de los electrones de enlaces de estados excitados. Estos al volver a
su estado fundamental mediante el proceso denominado ............... la energa previamente
absorbida a ser .............. en forma de .............. de longitud de onda ligada a al cantidad de
energa incidente.
8- Para cada elemento cada desplazamiento electrnico de un mximo de absorcin o emisin
denominado ...........
9- La radiacin tiene accin a nivel .............. donde ocasiona ............ ........ en el ncleo
dando lugar a otro elemento
10-. Las molculas se encuentran en constante movimiento de .......... .......... y ............. a los
que se encuentran asociados ......... ............. vibracionales, rotacionales y electrnicos
11- Una molcula presenta mayor nmero de niveles energticos .......... que ......... que a su vez
son mayores que los ................
12- La radiacin del espectro que produce transiciones moleculares a estados energticos
vibracionales excitados es:
13- La radiacin del espectro que produce transiciones moleculares a estados energticos
rotacionales excitados es de ....... energa y ........... longitud de onda como la de ...............
14- La .......... ................ provoca transiciones electrnicas hacia estados energticos excitados
15- Los tomos o iones de la materia gaseosa son capaces de emitir energa radiante de
escasos nmeros de longitud de onda al haber sido excitados previamente dando un
espectro .......... ......... .............. mientras que los espectros ........ ............. ............. resultan de
al excitacin de tomos slidos o lquidos.

16- Tipos de fluorescencia y definirlas

17- En la fosforescencia se produce un ........... .............. ............... ................ de los
electrones tras la irradiacin de las materia.
18- Cul es ms energtica la radiacin X o al infrarroja?
19- Definicin de espectro electromagntico
20- Definicin de transmitancia y qu indica?
21- Frmula de la absorbancia y definicin
22- Definicin de la ley de Lambert-Beer y frmula
23- La absorbancia es una magnitud adimensional?
24- Definicin de energa
25- Es una limitacin de la ley de Lambert-Beer que la concentracin del analito sea elevada
(mayor de 001 M) aunque sea menor a 001 M el tamao de las molculas crea interacciones
electrostticas?
26- Las limitaciones de al ley de Lambert-Beer son de 3 tipos, nmbralas.
27- Qu es la longitud de onda ptima de medida de un analito?
28- Esquema general de un espectroscopio y dibuja el de doble haz.
29- Qu condiciones debe reunir la fuente de radiacin?
30- Tipos de fuentes continuas
31- El lser se caracteriza por su .......... ............ ............. y su ........... ............. ...............
32- Qu tipo de cubetas se usara con radiacin ultravioleta?
33- En espectroscopia atmica usamos los sistemas de atomizacin que pueden ser de 2 tipos.
Nmbralos y di como se denomina entonces el espectroscopio o espectrofotmetro.
34- Los sistemas de seleccin de longitud de onda permite: .................................... Cmo se
denominan los varios tipos? ........................

TEMA 16
ESTUDIO: LQUIDO PLEURAL, PERICRDICO Y PERITONEAL
FORMACIN Y LOCALIZACIN
Las membranas serosas del organismo forman sacos cerrados tapizando las cavidad
esplcnicas (rodeando las vsceras). Estn formados por 2 hojas: la parietal y la visceral, entre
las cuales se encuentra una pequea cantidad de lquido derivado del suero (lquido serosos)
que es secretado por la membrana y cuya funcin es proteger a los rganos de la friccin. Las
membranas serosas ms importantes son: la pleura, el pericardio y el peritoneo.
La pleura: es una membrana serosa transparente que rodea a cada pulmn. Consta de 2
capa, la pleura visceral que s adhiere a la superficie del pulmn, y la pleura parietal que reviste
la superficie interna de la pared torcica. En el espacio situado entre ambas cavidad pleural se
encuentran el lquido pleural.
El pericardio: es una membrana fibro-serosa que envuelve al corazn junto con las
races de los grandes vasos sanguneos. Consta de una capa externa pericardio fibroso
formado por la capa parietal que reviste la superficie interna del pericardio fibroso y la capa
visceral adherida al exterior del corazn. Entre las 2 horas se encuentra el lquido pericrdico.
El peritoneo: es la membrana serosas ms extensa del organismo. El peritoneo parietal
reviste las paredes de la cavidad parietal y el peritoneo visceral recubre las vsceras
abdominales. El espacio situado entre estas 2 capas cavidad peritoneal contiene el lquido
peritoneal. La cavidad peritoneal es un espacio potencial completamente cerrado en el varn;
en la mujer comunica con el exterior a travs de las trompas de Falopio, el tero y la vagina.
Con una secrecin normal de lquido peritoneal permite los movimientos de las vsceras
abdominales con la respiracin, el peristaltismo o los cambios de posicin.
Los fluidos serosos se producen por la hoja parietal de la membrana y se absorbe por
los capilares y los vasos linfticos de la capa visceral en un proceso continuo. El aumento
anormal de la cantidad de lquido da lugar a un derrame efusin serosa que se forma al
daarse los mecanismos fisiolgicos responsables de la formacin y/o absorcin del lquido
fluido.
Las efusiones serosas pueden ser de diferentes tipos:
Trasudados: fluidos no inflamatorios mecnicos que se producen por procesos que
alteran la presin osmtica del plasma sanguneo o la presin hidrosttica capilar, sin alterar de
forma directa a la membrana serosa. Se da en los siguientes procesos:
~ insuficiencia cardiaca congestiva (fallo de la zona derecha del corazn)
~ Cirrosis heptica
~ Hipoproteinemia
~ Obstruccin de la cava inferior y la subhepticas (por ejemplo: ateroesclerosis)
Exudado: son fluidos inflamatorios producidos como consecuencia de un procesos
patolgico como inflamacin irritacin de la membrana serosa y el consiguiente aumentos de
la permeabilidad capilar. Se trata de enfermedad que lesionan directamente la capa serosa
como:
~ Infeccin bacteriana mictica
~ Neoplasia
~ Traumatismo
~ Enfermedad reumatoide
~ Lupus eritomatoso sistemtico
~ Otros: pancreatitis, infarto pulmonar y de miocardio, enfermedades metablicas,...
Derrame quiloso: es un fluido debido al escape de quilo (es una sustancias alcalina,
lechosa, constituida por grasas neutras y opacas debido a la presencia de quilomicrones, que

son lipoprotenas que transportan los triglicridos exgenos a los tejidos. El quilo es formado
en el sistema linftico de ah va por el conducto torcico hasta la vena subclavia izquierda
donde se mezcla con la sangre) desde el conducto como consecuencia de:
~ Lesin u obstruccin linftica debida a un trauma, tumor tuberculosis.
~ Sndrome nefrtico
INTERS CLNICO
El anlisis de los lquidos serosos contribuye en muchos casos a la formulacin del
diagnstico etiolgico de la enfermedad que lo produce. Lo ms importante en el estudio de
laboratorio es la distincin entre trasudado y exudado, pues ello ya orienta hacia 3 grandes
grupos de procesos: mecnicos, inflamatorios purulentos (empiema: es una concentracin
purulenta en una cavidad preexistente como puede ser la pleura, pericardio,...) esta
diferenciacin se hace en base a una serie de datos proporcionados por el anlisis del lquido
seroso en cuestin siendo el dato fundamental la cuantificacin de protenas.
EXUDADO
Ms protenas
Ms clulas
Glucosa ms baja que en suero
pH < 73

TRASUDADO
Protenas normales
Clulas normales
Glucosa igual que en suero
pH > 73

En el caso del derrame quiloso las caractersticas diferenciales son:

Aspecto lechoso
pH alcalino
Aumento considerable de triglicridos respecto a los niveles sricos
Aumento de los quilomicrones en la electroforesis
El anlisis habitual del derrame pleural, pericardio y peritoneal de causa desconocida
incluye examen bioqumico, citolgico y bacteriolgico. Es de gran inters el estudio
citolgico diferencial (citologa: estudio morfolgico y funcional de la clula) mediante el cual
se detectan y diagnostican carcinomas malignos con una sensibilidad y especificidad elevadas.
Anlisis de los derrames serosos
Fsico:
~ Observacin del aspecto
Citolgico:
~ Recuento de hemates
~ Recuento de leucocitos
~ Recuento diferencial
Bioqumico:
~ Protenas totales
~ Presencia de ADA (adenosn-desaminasa)
Microbiologa:
~ Tinciones
~ Cultivo
~ Demostracin de bacilo tuberculoso
~ Entero-bacterias y anaerobios del tubo digestivo
La toma de muestras paracentesis consiste en la aspiracin de lquido de la cavidad
abdominal, torcica pericardio. En la paracentesis peritoneal el lugar de funcin es la lnea
media del abdomen, entre la snfisis del pubis y el ombligo. En la toracocentesis se aspira
lquido de la cavidad pleural a travs del espacio intercostal (justo por encima de la costilla), en
la cual previamente se ha constatado matidez franca (la matidez es un sonido obtenido por la

percusin de una parte del cuerpo caracterizado por la elevacin del tono, la disminucin de la
intensidad y la ausencia de timbre especial). La interposicin de lquido entre la pared torcica
y el pulmn transforma el sonido claro pulmonar en mate.
Los lquidos serosos se artefactan con rapidez, se lisan fcilmente y con frecuencia
coagulan. Para la recogida de las muestras se usan tubos heparinizados ya preparados
comercialmente, o bien se preparan poniendo 2 3 gotas de heparina sdica al 1% en un tubo
de 10 ml antes de llenarlo con el lquido. Se mezcla rpidamente y se enva con urgencia al
laboratorio.
EXAMEN FSICO
Inmediatamente despus de haber extrado el lquido se lleva a cabo el examen del
aspecto. El simple color ya puede ser de ayuda en el planteamiento del diagnstico. Cuadro.
EXAMEN CITOLGICO
Recuento de hemates y leucocitos: no es muy conveniente el recuento en contadores
electrnicos porque los restos celulares pueden dar valores falsamente elevados. La tcnica de
recuento manual es la que se utiliza.
Recuento diferencial. Estudio morfolgico: las clulas pueden concentrarse por
centrifugacin, citocentrifugacin, filtracin con membranas Millipore o similares. En el
primer caso se realiza una centrifugacin inicial suaves, 10 minutos a 250 G para separar el
compuesto celular y el lquido sobrenadante. En este proceso se produce una discreta prdida
celular que no afectar al resultado del estudio citolgico. El lquido sobrenadante se distribuye
en alcuotas y puede refrigerarse congelarse para posteriores anlisis qumicos. El sedimento
celular se resuspende en 1-5 ml de tampn de fosfato isotnico de pH 74 para el estudio
citolgico y puede conservarse en la nevera.
Las tinciones empleadas son: Wright, May-Grumwald, giemsa, giemsa rpida, El
recuento diferencial convencional se realiza distinguiendo el porcentaje de linfocitos,
neutrfilos, macrfagos y eosinfilos. Para la observacin detallada de la morfologa se tie la
muestra con la tincin de papaonicolao.
Tincin de papaonicolao:
A- Extensin de la muestra: los frotis se realizan sobre portaobjetos cubiertos con una
delgada capa de albmina. La extensin se realiza con otro portaobjetos lo ms rpidamente
posible, y no debe de ser muy gruesa ya que despus ser difcil eliminar el exceso de
colorante de las partes gruesa.
B- Fijacin: cuando la preparacin empieza a secarse por los bordes, pero conservando
hmedo el centro se fija con alcohol-ter como mnimo 1 hora.
C- Tincin de papaonicolao es la tincin de rutina para citologa. Los colorantes
utilizados son: hematoxilina, orange G, eosina y verde luz.
La metdica de trabajo consiste en:
~ Inmersin del frotis 10 veces en cada alcohol del 50%, 70%, 80%.
~ Lavar con agua destilada
~ Agregar 2 partes de hematoxilina de Harrys, una parte de solucin de alumbre
amoniacal y filtrar. Teir durante 2-3 minutos.
~ Lavar con agua destilada.
~ Inmersin en una mezcla de 97 ml de alcohol al 70% y 3 ml de amoniaco durante 3
~ Inmersin 10 veces en cada alcohol de 50%, 70%, 80% y 95%
~ Teir durante 1-3 minutos con el orange G
~ Lavar con alcohol del 95% y pasar despus por alcohol absoluto
~ Inmersin en alcohol absoluto y xilol aparte iguales durante 5-15 minutos
~ Aclarar con xilol

~ Montar embalsamo de Canad (con cubreobjetos)

D- Observacin: se realiza preferentemente en las partes finas de la extensin. Los
ncleos celulares se tien de color azul con los nucleolos azules oscuros o rojo. El citoplasma
rosa azul segn el tipo de clula. La queratina se tie de rojo-anaranjado y los hemates de
rojo.
EXAMEN QUMICO
A- Lquido pleural: debe realizarse siempre la determinacin de protenas en el lquido
pleural para la diferenciacin de trasudado y exudado. La determinacin de ADA es de ayuda
para el diagnstico de pleuritis tuberculosa. Cuando la concentracin de la enzima es superior a
45 U/L es bastante sugestiva de tuberculosis pleural, aunque se observan cifras similares en la
pleuritis reumatoide y en el empiema. Valores por debajo de 45 U/L descartan prcticamente el
origen tuberculoso del problema.
La concentracin de glucosa en el lquido pleural tiene relacin con la srica.
Disminuye en los exudados y es normal en los trasudados se consideran cifras anormales por
debajo de 60 mg/dl o bien si es 40 mg/dl menor que la glucosa srica.
Cuando el lquido pleural tiene aspecto lechoso es importante la determinacin de
triglicridos. Si estn elevados y hay presencia de quilomicrones podra tratarse de un
quilotorax (por traumatismo u obstruccin linfomatosa del conducto torcico).
En las pancreatitis agudas puede estar aumentadas las amilasas en le lquido pleural. Se
consideran valores elevadas cuando rebasan los valores sricos. Los valores de pH inferiores a
72 indican una posible evolucin del derrame hacia el empiema.
B- Lquido asctico: los parmetros que se han de examinar siempre son su
concentracin de protenas y de otras sustancias ms especficas segn el diagnstico que se
sospecha. Los niveles de glucosas similares a los sricos disminuyen en la peritonitis
tuberculosa y en la carcinomatosis (Carcinoma diseminado por el cuerpo) peritoneales.
Adems en la carcinomatosis peritoneal el exudado suele ser de tipo hemorrgico.
Cuando se produce perforacin del intestino delgado o grueso aumenta la actividad de
diversas enzimas en el lquido peritoneal, siendo la ms especfica de este proceso la fosfatasa
alcalina cuyos valores aumentan el doble.
El amoniaco aumenta considerablemente en la lcera pptica perforada, apndice
perforado y en el estrangulacin del intestino delgado o grueso.
C- Lquido pericrdico: va a disminuir la glucosa en la pericarditis bacteriana y en la
inflamacin no sptica debida a enfermedades reumatoides tumor.

TEMA 17
LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR
ULTRAVIOLETA-VISIBLE-INFRARROJO
PROCESO DE ABSORCIN ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Enlace inico: un tomo roba un electrn a otro tomo porque tiene la suficiente fuerza
Enlace covalente: se comparte un electrn debido a que ninguno de los 2 tomos tiene
fuerza suficiente como para robar ese electrn y por lo tanto lo comparten.
Longitud de onda: se define como la distancia entre 2 mximos de un ciclo completo de
un movimiento ondulatorio. Se expresa en nanmetros (1 nm = 10-9 m)
Frecuencia: es el nmero de ciclos/ segundo y es inversa a la longitud de onda. Cuanto
mayor sea la longitud de onda menor es al energa de un haz de luz.
Espectro electromagntico: es un amplio intervalo de energa radiante que incluye
desde los rayos gamma (que son los de longitud de onda corta) y hasta los de ondas de radio
(que son los de longitud de onda larga). Se divide en regiones: rayos gamma- rayos X- UV- V
IR- Microondas.
Proceso de absorcin: cuando una partcula se encuentra en estado de reposo o estado
fundamental, interacciona con un haz de luz absorbe energa y pasa a lo que se denomina
estados excitados. En la partcula se produce cambios que dependen de las caractersticas a la
propia partculas (tipos de enlaces,...) y de la energa (longitud de onda) de la luz que
interacciona.
Espectro de absorcin: cada especie absorbente )Cromgeno) tiene lo que se llama un
espectro de absorcin caracterstico. Este espectro representa la relacin entre la longitud de
onda incidente y la absorbancia que presenta una solucin de la especie en condiciones
definidas de trabajo. La medida de al cantidad de luz absorbida por una solucin de una especie
absorbente, es el fundamento en que se basa las tcnicas de espectroscopia de absorcin. Se
rige por la ley de Lambert-Beer.
La absorcin molecular de radiacin ultravioleta-visible por una especie atmica
molecular se produce a consecuencia de la excitacin de los electrones de enlace. Debido a
esto la longitud de onda de los picos de absorcin se puede correlacionar con los tipos de
enlaces existentes en al especie que se estudie. Por lo tanto la espectroscopia de absorcin
molecular resulta valiosa para la identificacin de los grupos funcionales de una molculas.
Nos proporciona un mtodo bastante selectivo para el anlisis cuantitativo de compuesto cuyos
enlaces producen absorcin.
En las molculas los electrones responsables de los enlaces covalentes (Se producen
una comparticin de un electrn entre 2 tomos) se localizan alrededor de los 2 centros
atmicos en los denominados orbtales atmicos (orbitales por el cual discurre un electrn).
Cuando se combina o se superpone 2 orbitales atmicos, se constituyen un orbital molecular,
localizado en el espacio existente entre los 2 tomos. Este orbital puede ser de tipo enlazante de
baja energa y mayor estabilidad un orbital molecular anti-enlazante, altamente energtico e
instable (Se marca con un asterisco para diferenciarlo). Los electrones en el estado
fundamental ocupan los orbitales de mayor estabilidad o enlazantes. Entonces al incidir sobre
la muestra con una radiacin de longitud de onda correspondiente al rango del espectro del
ultravioleta-visible (la longitud de onda en nanmetros del ultravioleta-visible abarca de 180750 nm). Se producen una serie de transiciones electrnicas entre niveles. Segn la cantidad de
energa que empleemos se producir un tipo u otro de transicin.

Los electrones que absorben las radiaciones ultravioleta-visible en una molcula

orgnica son los electrones enlazantes (de baja energa y bastante estabilidad), que estn
asociados a ms de un tomos y los electrones externos o no enlazantes localizados alrededor
de tomos como el oxgeno, nitrgeno, azufre y los halgenos.
Las longitudes de onda y los picos de absorcin ultravioleta-visible depender del tipo
de enlace presente en cada especie absorbente. Este echo da lugar a la posibilidad de
identificacin del tipo de enlace y de la especie absorbente por las caractersticas de la
radiacin de la absorcin. Algunas aplicaciones de al espectroscopia de absorcin molecular
ultravioleta-visible son:
a) Identificacin de grupos funcionales en las molculas.
b) Cuantificacin de compuestos que poseen grupos funcionales absorbentes
Estas tcnicas deben tener selectividades aceptables, buena precisin en general, fcil
preparacin de las muestras y fcil obtencin de resultados.
Aproximadamente un 95% de las determinaciones analticas clnicas de rutina se
realizan por estas tcnicas.
INSTRUMENTACIN EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR UV-V
Componentes: consta de 5 componentes principales:
A- Fuentes de radiacin
B- Sistema de depsito de la muestra
C- Selectores de longitud de onda
D- Detector de radiacin
E- Sistema de registro y lectura
Las caractersticas a destacar en al espectroscopia de absorcin molecular ultravioletavisible son:
a) Fuente de radiacin: es necesario una fuente de radiacin continua, que abarque un
amplio sector de longitud de onda y cuya potencia sea estables. Las ms usadas son:
a. Lmparas de descarga de deuterio e hidrgeno: la excitacin elctrica a
presin reducida de estos elementos general una radiacin continua en la
banda espectral correspondiente al ultravioleta. Ambas lmparas originan un
espectro continuo en al zona del espectro de 160-375 nm. Si al longitud de
onda es superior, provoca la formacin de lneas de emisin que ese
superpone sobre este espectro e interfieren en la medida. Las ventanas de
estas lmparas son de cuarzo debido a que el vidrio absorbe radiacin de
longitud inferior a 350 nm.
b. Lmparas de filamento de tungsteno: origina radiacin de al regin visible e
infrarroja cercana del espectro, entre 350-2500 nm. La emisin de radiacin
depende de al temperatura, que en al mayora de las lmparas es de 2870K.
Para controlar la requerida estabilidad del voltaje se emplean
transformadores y/o reguladores electrnicos.
c. Lmparas de arco de xenn: la excitacin elctrica de una atmsfera de
xenn genera una radiacin continua en la banda espectral de 250-600 nm.
b) Sistema de depsito de la muestra: el equipo de instrumentacin para la absorcin
molecular ultravioleta-visible emplea cubetas o celdas para contener la muestra
conveniente preparada con los reactivos del anlisis.
El material del que estn fabricadas no absorbe la radiacin procedente de al fuente. As
para longitudes de ondas inferiores a 350 nm se emplea cuarzo slice fundido y cuando la
longitud de onda es superior se emplea vidrio de silicato o plstico. Su anchura est
estandarizado en 1 cm para que esta sea la longitud de onda de al trayectoria ptica de la
radiacin. Si se requiere atemperar el contenido de la cubeta (a 37C generalmente) la mayora

de los equipos e instrumentos de medida ya poseen dispositivos propios que calientan las
muestras.
Equipos de espectroscopia de absorcin molecular ultravioleta-visible:
TIPOS
RADIACIN
DE 1 SOLO HAZ
VISIBLE (V)
DE DOBLE HAZ
ULTRAVIOLETA (UV)
SONDA
VISIBLE-ULTRAVIOLETA (UV-V)
DE UN SOLO HAZ
ULTRAVIOLETA-VISIBLE (UV-V)
DE DOBLE HAZ
UV-V
CONTROLADO POR ORDENADOR
UV-V
DE DOBLE DISPERSIN
UV-V
MULTICANAL
UV-V
ESPECTROSCOPIA INFRARROJA
La regin espectral electromagntica correspondiente al infrarrojo se localiza en el
intervalo de longitud de onda entre 780-106 nm. Esta zona se subdivide en 3:
Infrarrojo cercano: 780-2500 nm
Infrarrojo medio: 2500-5104 nm
Infrarrojo lejano: 5104-106 nm
Las aplicaciones en analtica cualitativa y cuantitativa de compuestos orgnicos son
mltiples. En clnica se emplean en anlisis a clculos renales.
Los datos de absorbancia, transmitancia, composicin y/o concentracin del analito se
obtiene por comparacin de la magnitud de la muestra con los estndares.
a) Fuentes de radiacin (IR): estn constituidas por slidos inertes a los que se les
aplica una energa trmica entre 1500-2200K y se consigue la emisin de una
radiacin continua y estable. Las ms usadas son:
a. Emisor de Nernst: es de forma cilndrica y se le aplica una corriente elctrica
que se consigue elevar su temperatura hasta los 2200K.
b. La fuente globar: es un cilindro de carburo de silicio al que se le aplica una
corriente elctrica y alcanza temperaturas de hasta 1500K.
c. La fuente de LSER de dixido de carbono; la lmpara de filamento
incandescente; la lmpara de filamento de tungsteno (sirve para el IR
cercano).
En casi todos es necesario un sistema de refrigeracin de la fuente para evitar su
destruccin trmica.
b) Sistema de depsito de la muestra: son celdas o cubetas desmontables que suelen
presentar trayectoria pticas menor que otras tcnicas espectroscpicas. Estas
cubetas van a ser de 01-1 mm con posibilidad de variar las dimensiones.
c) Detectores:
a. Detectores trmicos: cubren toda la regin infrarrojo excepto parte del
cercano y mide la variacin de temperatura que experimenta la fuente a su
paso por la muestra. Las ms utilizados son los termopares, constituidos por
la unin y calentamiento elctrico de 2 metales (bismuto y antimonio) y los
volmetros termmetros de resistencia.
b. Detectores piroelctricos (piroelectricidad: conjunto de cargas elctricas que
se presentan en la superficie de diversos cristales por los cambios de
temperatura): estn formados por lminas de material piroelctrico.

c. Detectores fotoconductores: estn constituidos por una lmina

semiconductora que vara su resistencia elctrica en funcin de la
temperatura.
d) Sistemas de registro y lectura: en muchos equipos instrumentales se dispone de una
base de datos donde se registran los espectros infrarrojos de molculas de frecuente
anlisis, de tal manera que el espectrofotmetro infrarrojo es capaz de identificar el
espectro de la muestra problema con alguno que tenga en la memoria.
TIPOS
1- Espectroscopia infrarroja de reflexin interna: se aplica a muestras que por sus
caractersticas presentan dificultades analticas que se fundamentan en el fenmeno de
reflexin que experimenta la radiacin infrarroja al atravesar la muestra.
2- Espectroscopia infrarroja fotoacstica: se basa en el fenmeno de dispersin de la
radiacin que experimentan ciertas muestras slidas y/o lquidas.
3- Espectroscopia infrarroja de reflectancia en el infrarrojo cercano: se aplica para el
anlisis de muestras slidas debidamente preparadas (disminucin del tamao de la
partcula,...) dependiendo de la preparacin de la muestra esta va a dispersar de unas manera
caracterstica del haz de radiacin infrarrojo cercano con el que incide.
4- Espectro infrarroja en el infrarrojo lejano: se emplea en el estudio de analitos
inorgnicos. Se emplea para el anlisis de identificacin de algunos compuestos txicos que
pueden encontrarse en muestras biolgicas.
5- Espectro de emisin infrarroja: estudia la emisin infrarroja de la muestra tras haber
sido incidida con radiacin de esa mima regin espectral. Se usa en la identificacin de
sustancias txicas y/o contaminantes en muestras clnicas y medio ambientales.
FUNCIONAMIENTO GENERAL DEL EQUIPO DE INSTRUMENTACIN EN
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR UV-V E IR
El procedimiento general por el cual se realiza las determinaciones analticas se puede
resumir en la siguiente secuencia:
a) Conexin a la red
b) Encendido del equipo
c) Seleccin del tipo de medida
a. Absorbancia (A, DO, E)
b. Transmitancia (t)
c. Concentracin (c)
d. Cintica (A, DO)
d) Ajuste de longitud de onda de medida
e) Ajuste del blanco (elimina la radiacin absorbida que no es debida al analito) puede
ser: blanco reactivo, blanco muestra, blanco agua, blanco aire.
f) Colocacin de la muestra problema: si es un sistema de autoanlisis (mide varias
muestras a la vez), se colocan las cubetas debidamente identificadas en el sistema
autoanalizador. Las cubetas o celdas han de estar libres de huellas de suciedad para
evitar errores, y colocadas de forma que el haz las atraviese en direccin
perpendicular de las paredes de la cubeta.
g) Medida de la magnitud seleccionada y obtencin del dato correspondiente a la
muestra. En algunos casos de anlisis cualitativo, el dato resultante consiste en la
identificacin del analito a comparacin con espectros almacenados en la memoria
o en la bibliografa.

NEFELOMETRA Y TURBIDIMETRA: PRINCIPIOS BSICOS

Son 2 tcnicas relacionadas con la espectroscopia de absorcin molecular en al zona del
visible, tanto en los aspectos tericos como en la prctica. Se basan en el comportamiento de la
materia al incidir sobre ellas una radiacin electromagntica: ocurre fenmenos de dispersin,
reflexin, bloqueo y transmitancia des resto de la radiacin hasta alcanzar el detector. La
muestra presenta una serie de caractersticas: son partculas no transparentes en el seno de un
lquido, es decir, precipitados, suspensin coloidales,...
La nefelometra estudia la radiacin dispersada de la muestra en ngulos diferentes al
de incidencia de radiacin; y la turbidimetra estudia la radiacin no dispersada.
Nefelometra: la dispersin de al radiacin es un fenmeno fsico resultante de la
interaccin entre esta y las partculas en suspensin en un medio adecuado. Los ngulos de
medidas de radiacin dispersada oscila entre los 15-90. Esta dispersin est influida por:
~ La concentracin del analito
~ Volumen, tamao, peso y nmero de partculas.
~ Longitud de onda de al radiacin incidente
~ Distancia del detector a la cubeta.
El grado de influencia de estos factores est reflejado en la teora de Ray-Leigh. Entre
otras cosas expone que:
a) La intensidad de luz dispersa es:
a. Directamente proporcional a la concentracin de las partculas de la muestra
b. Directamente proporcional al peso molecular de las partculas de la muestra.
c. Inversamente proporcional al cuadrado de la distancia entre el detector y la
cubeta.
d. Inversamente proporcional a la cuarta potencia de la longitud de onda
b) La distancia entre el detector y la cubeta se relaciona de forma directa con la
sensibilidad de los mtodos aplicados.
c) El modelo de dispersin depende de la relacin del tamao de la partcula y la
longitud de onda de la radiacin incidente.
El equipo de medida es especfico para estas determinaciones y est diseado de tal
manera que el detector pueda variar de posicin con respecto a la direccin de la radiacin
incidente en unos ngulos preestablecidos.
Si en un principio la muestra es transparente y tras la aplicacin de los reactivos
aparecen las partculas en suspensin, para ajustar el espectrofotmetro se emplean
generalmente un blanco muestra, que elimina el bloqueo de la radiacin incidente por causas
ajenas al analito y debidas a la muestra.
Turbidimetra: mide la radiacin bloqueada por parte de la muestra relacionando la
intensidad del haz incidente y del resultante de traspasar la cubeta. La deteccin de la radiacin
trasmitida se realiza en la misma direccin que el haz incidente y al seal puede expresarse
como absorbancia o transmitancia.
Este fenmeno se rige por la ley de Lambert-Beer: la intensidad de la radiacin
bloqueadas por la muestra es directamente proporcional a la concentracin del analito. El
equipo de medida suele ser el mismo que en espectroscopia de absorcin molecular en el rango
del visible.

PREGUNTAS DEL TEMA 17

1) Define longitud de onda
2) Define frecuencia
3) Define espectro electromagntico
4) Qu representa el espectro de absorcin caracterstico de cada especie absorbente?
5) La absorcin molecular de radiacin ultravioleta-visible por una especie atmica o
molecular se produce a consecuencia de ...............
6) Define orbital molecular
7) Di 2 aplicaciones analticas de la espectroscopia de absorcin molecular UV-V
8) Menciona los 5 componentes de una espectroscopia de absorcin molecular UV-V
9) De qu material esta fabricada la cubeta o celda para el depsito de la muestra para
longitudes de ondas inferiores a 350 nm?
10) En que 3 intervalos se divide el infrarrojo?
11) Menciona 2 fuentes de radiacin de infrarrojos
12) Qu dimensiones tiene las cubetas o celdas utilizadas en espectroscopia IR?
13) Menciona 2 tipos de espectroscopia infrarroja
14) En qu consiste la nefelometra?
15) En qu consiste la turbidimetra?

TEMA 18

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA CON ATOMIZACIN DE

LLAMA (F-AAS) Y ELECTROTRMICA (GF-AAS)
PROCESO DE ABSORCIN ATMICA
Es el fenmeno que se produce tras someter a irradiacin a la materia con una longitud de
onda capaz de ser absorbida por sus tomos. Por ello es necesario la transformacin de la
muestra a vapor atmico mediante el proceso de atomizacin. Existen varios sistemas de
atomizacin que son los que dan nombre a las tcnicas analticas:
Espectroscopia de absorcin atmica con atomizacin de llama (F-AAS)
Espectroscopia de absorcin atmica con atomizacin electrotrmica (GF-AAS)
Los electrones ocupan alrededor del ncleo determinados niveles energticos que
definen orbitales caractersticos para cada tipo de tomo. Un tomo en estas concisiones se
encuentran en estado fundamental de menor energa (Eo) y su configuracin electrnica es
estable. Cuando los tomos, iones o sus agrupaciones se someten a la accin de radiacin
electromagntica. La energa absorbida producen el desplazamiento de los electrones ms
energticos y por lo tanto menos estables. Los tomos tienden a recuperar el estado menos
energtico, por lo que toda o parte de la energa que fue previamente absorbida es reemitida en
forma de radiacin electromagntica cuya longitud de onda es similar o superior a la absorbida.
La relajacin provoca radiacin ultravioleta-visible o X. Cada desplazamiento electrnico es
una lnea espectral. Los tomos tienen espectros de lneas relativamente simples.
PROCESO DE ATOMIZACIN
Son aquellos procesos que aportan la suficiente energa al analito como para alcanzar su
forma atmica.
Tiene lugar en los denominados sistemas de atomizacin que en el caso de la llama lo
constituyen el nebulizador, la cmara de premezcla y el mechero y en el caso del horno o
cmara de grafito lo constituye el tubo de grafito.
Los sistemas de atomizacin pueden ser:
Continuos: en los que la muestra accede al sistema de forma continua, dando una
seal, tambin continua en el tiempo.
Discretos: en los que una alcuota (parte proporcional) se deposita en el sistema de
atomizacin obtenindose un mximo de seal que disminuye hasta 0 cuando la muestra
desaparece.
La energa aplicada a la muestra para atomizarla puede ser:
~ Energa trmica: espectrosc. de absorcin atmica de llama es un sistema continuo
~ Energa elctrica: sera la cmara de grafito y sera un sistema discreto.
Se emplean muestras lquidas o preparadas en disolucin
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA CON ATOMIZACIN DE LLAMA (F-AAS)

Es una tcnica con buena precisin (tiene un coeficiente de variacin cercano al 1%)
pero es menos sensible que otras espectroscopias de absorcin atmica (cmaras de grafito).
Las etapas de la atomizacin son:
1) Aspiracin: la muestra es aspirada por un capilar hasta el nebulizador con unas
concisiones de flujo o caudal (litros / minutos) previamente optimizadas.
2) Nebulizacin: transformacin de la muestra liquidada en un aerosol por
disminucin del tamao de las partculas.

3) Mezcla de la muestra nebulizada con los gases: la finalidad es la de facilitar despus

su calentamiento a la llama. Este fenmeno se realiza en la cmara de premezcla.
Despus el aerosol se enfrenta a un dispositivo denominado Spoiler (De plstico)
bien a la bola de impacto (vidrio) que reducen an ms el tamao de partcula que
accede ala llama.
4) Desolvatacin: tambin conocida como secado o evaporacin rpida del lquido que
contiene el analito (suero, plasma, reactivo,...) una vez a accedido a la llama del
quemador o mechero
5) Volatilizacin, mineralizacin disociacin de las molculas del analito del estado
slido al estado gaseosos.
6) Atomizacin: ruptura de los enlaces del analito con otros tomos transformndolos
en tomos elementales que es la especie absorbente. Es la etapa ms crtica de estas
tcnicas, limitante de su precisin y exactitud. Hay que intentar que al energa
aplicada en la muestra sea tal que produzca la atomizacin del analito y evitan que
arranque algn electrn apareciendo su forma catinica que no absorbe de la misma
manera que al elemental.
A las temperaturas optimizadas establecidas par el anlisis slo el porcentaje reducido
del 1% est ionizado por lo que su absorcin es prcticamente despreciable.
TIPOS DE LLAMAS
En general las llamas estn compuestos por varias zonas:
1) Zona de combustin primera: donde es difcil alcanzar un equilibrio trmico por lo
que no se emplea en la atomizacin de la muestra.
2) Zona interconal: donde la temperatura es mxima y homognea. Es la ms utilizada
para la atomizacin.
3) Cono exterior: donde se producen una serie de reacciones secundarias y que
tampoco se utiliza.
Las caractersticas de cada llama (Forma, temperatura, velocidad de combustin)
depende de la mezcla de gases que la componen.
COMBURENTE
(medio en que arde)
AIRE
OXGENO
AIRE
OXGENO
AIRE
OXGENO
XIDO-NITROSO

COMBUSTIBLE
(lo que arde)
GAS NATURAL
GAS NATURAL
HIDRGENO
HIDRGENO
ACETILENO
ACETILENO
ACETILENO

TEMPERATURA
1700 1900C
2700 2800C
2000 2100C
2550 2700C
2100 2400C
2050 3150C
2600 2800C

La temperatura de la llama es fundamental en el proceso de atomizacin, dependiendo

de esta se distinguen:
~ Llamas fras: aire-propano que alcanza 1800C. tiles para medir elementos de fcil
atomizacin como metales alcalinos y alcalino-trreos
~ Llamas calientes: aire-acetileno que alcanza 2400C. Es la ms empleada en analtica
clnica, capaz de atomizar ms de 30 elementos.
~ Llamas ms calientes: xido-nitroso-acetileno cercano a 3000C. tiles para la
determinacin de elementos de difcil atomizacin. Como el aluminio silicio y titnico. No es
muy empleado en bioqumica clnica.

La proporcin de la mezcla de gases se establece para cada determinacin

(combustible-comburente) aunque por lo general la proporcin es 1:1 y esa llama se conoce
como llama estequiomtrica. Una llama reductora presenta mayor proporcin de comburente.
La mezcla combustible-comburente influye de forma directa en el nmero de tomos logrados
y por tanto en la sensibilidad y el lmite de deteccin del mtodo. As mismo hay una serie de
factores que va a influir en la reaccin combustible-comburente, como son la naturaleza de al
muestra y el flujo de gases hacia la llama.
ATOMIZACIN ELECTROTRMICA
El proceso de atomizacin es similar al del caso de la llama desde la etapa de
desolvatacin ya que la muestra se deposita directamente en el interior del tubo de grafito y se
establece una diferencia de potencia entre los extremos que provoca una subida de temperatura
en el tubo suficiente como obtener los tomos del elemento analizado.
Con este tipo de atomizacin se consigue una elevada sensibilidad de los mtodos. Pero
con respecto a la llama la precisin es menor (C.V. 05%). Otras ventajas frente a la
atomizacin con llama son el elevado tiempo de anlisis y la mayor destreza requerida por
parte del operador.
Los volmenes de muestra que se emplean oscilan entre 05-100 l por lo que es
necesario utilizar esta tcnica cuando se dispone de volmenes pequeos, los limites de
deteccin que se alcanzan son cercanos a los 10-10-10-3 gr de analito.
La temperatura se va elevando de forma controlada por un programa de atomizacin de
temperatura y tiempo que consta de varias etapas:
Secado
Mineralizacin
Atomizacin
Limpieza del tubo (para que quede libre de restos de la muestra analizada y
preparado para recibir otra nueva).
Cada una de estas etapas, excepto la atomizacin puede a su vez tener subetapas con el
fin evitar una subida tan brusca de temperatura que volatilice al analito antes de su atomizacin
En cada etapa se distinguen 2 tiempos:
~ Tiempo de rampa o tiempo necesario para alcanzar la temperatura fijada
~ Tiempo de permanencia en esa temperatura.
Dado que se alcanzan temperaturas cercanas a los 3.000C para refrigerar el sistema se
establece un circuito de gas argn que rodea el tubo por dentro y por fuera. Tambin se emplea
para eliminar del interior los vapores procedente de la matriz de la muestras producidas en las
primeras etapas del programa de atomizacin. Si se representa de forma grfica el perfil de
atomizacin de un elemento obtenemos por ejemplo el selenio. (Dibujo de la grfica)
EQUIPO DE INSTRUMENTACIN EN LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA

Los componentes no difieren del esquema general pero con caractersticas propias.
Fuente de radiacin: emiten una radiacin monocromtica (De una sola o de un
estrecho rango de longitud de onda) especfica por lo que se denomina fuentes de lneas
lmparas, y las usadas son:
~ Lmparas de ctodo hueco HCL: es una lmpara de vidrio que contiene en su
interior un gas inerte como argn o nen y electrodo de trabajo (el nodo positivo y el ctodo
hueco negativo). El ctodo est constituido del material del mismo elemento que se pretende
analizar en la muestra (analito). Cuando se aplica potencia en la lmpara los tomos del gas se
ionizan (argn) e impactan con el ctodo, esta colisin de los ctodos de argn produce una
excitacin de los tomos del ctodo al absorber su energa (M*) y esto lleva consigo a su paso
un estado menos estable. Al volver a su estado emite una radiacin caracterstico del elemento

a analizar. Son lmparas de emisin de lneas, por ejemplo si se animaliza la porcin srica de
cobre se utiliza una lmpara de cobre de tal forma que si en la muestra hay cobre obtenemos un
valor de absorbancia directamente proporcional a la concentracin de analito en al muestra
(cumple la ley de Lambert-Beer con sus limitaciones). El inconveniente de estas lmparas es su
envejecimiento progresivo debida al desgaste del ctodo y su elevado coste ya que en general
es necesario disponer de un lmpara para cada elemento.

~ Lmparas de descarga sin electrodo EDL: est n constituidas por una pequea
cantidad o una sal del analito situado en un tubo sellado de cuarzo que contiene un gas inerte a
baja presin. El tubo est rodeado por un a bobina de RF (radio frecuencia) que produce un
campo del orden de 30 megaHz y protegido por una armadura (carcasa cermica) y con una
ventana transparente. Cuando se aplica un potencial a la lmpara el gas se excita y vaporiza el
metal o su sal. Los tomos del analito se excitan al chocar con los tomos del gas emitiendo la
radiacin caracterstica del elemento a analizar. Esta radiacin es absorbida por el analito.
Las lmparas EDL tienen mayor intensidad y duracin por lo que permiten analizar
elementos voltiles y/o cuya concentracin en la muestra es inferior.

Modulador: es un dispositivo situado entre la fuente de radiacin y el sistema selector

de longitud de onda que regula la salida de al fuente (de radiacin), para que su intensidad
oscile a una frecuencia constante, as la energa radiante incide sobre la muestra a pulsos, es
decir, de una manera intermitente. Al detector llegan 2 tipos de seales, una alternante desde la
fuente y otra continua que procede de la llama. Su finalidad es la de discriminar la absorbancia
del analito de la absorbancia de fondo independientemente de este. El modulador interrumpe el
haz y en es e momento el detecto slo registra la radiacin que absorbe la muestra.
Se puede utilizar filtros discos metlicos cortantes.
Sistema selector de longitud de ondas: entre la lmpara y la muestra se encuentra el
monocromador cuya funcin es la de aislar de la fuente de radiacin la longitud de onda a la
que absorbe el analito (lnea de resonancia R) en el rango menor de nanmetros que le sea
posible. Es necesario ajustar la rendija espectrales al mximo para permitir un aislamiento
satisfactorio de la lnea de resonancia. Las lmparas solo trasmite una estrecha banda de
radiacin centrada en la longitud de onda de resonancia.
Se suele utilizar la red de difraccin: consiste en una lmina de vidrio con estras capaz
de dispersar o separar los componentes de la radiacin incidente procedente de al fuente. El

haz accede al monocromador por la rendija de entrada se refleja por una lente o espejo y se
dirige a la red. En la red se dispersa en varios ngulos dependiendo de al longitud de onda. Si
la red se coloca en un ngulo determinado la lnea de resonancia, R, puede dirigirse hacia un
segundo espejo a travs de la rendija de salida.

Sistema de depsito de la muestra: la muestra est atomizada cuando se irradio con el

haz incidente.
Los sistemas de depsito utilizados son:
~ Para la llama: la llama misma procedente de un quemador, es decir, un mechero es la
que contiene la muestra nebulizada en el seno del gas. Las dimensiones del mechero han de ser
tales que el rea de la rendija logre que la velocidad de flujo de la salida de los gases supera la
velocidad de entrada, para evitar retroceso y explosin de gases en la cmara de premezcla y
que el trayecto ptico consiga una buena sensibilidad.
El material del mechero ha de ser resistente par evitar una modificacin de sus
dimensiones. Se utilizan mecheros de 2 tamao: 100 15 50 15 (longitud anchura en
mm).
~ Para la cmara de grafito: es el tubo de grafito con 3 posibilidades: piroltico, no
piroltico y con plataforma de LVov en su interior para conseguir una temperatura en toda la
extensin de la muestra.
Sistema de atomizacin de la llama: nebulizador, cmara de premezcla y mechero.
El nebulizador est compuesto por un dispositivo de conduccin cilndrico que vara el
dimetro para que ese produzca el efecto ventury. El gas fluye a travs del sistema y provoca
una presin reducido en el efecto ventury por lo que la muestra lquida o en disolucin va a ser
aspirada por un capilar. Cuando la solucin sale del capilar el gas la dispersa en forma de fina
niebla.
La muestra accede nebulizada a la lmpara de premezcla donde va a chocar con
dispositivos tales como Spoiler plstico y al bola de impacto de vidrio que reducen ms el
tamao de partculas. Las gotas de gran tamao que se quedan en la cmara se condensa y son
eliminadas a travs de un sistema de drenaje que va a parar a unas garrafas.
Microprocesador electrnico: va integrado en el equipo y se maneja con u teclado. Se
usa para:
~ Seleccin de longitud de medida: absorbancia, transmitancia,...
~ Seleccin de las condiciones de medida: longitud de onda, rendija,...
~ Registrar los valores de seal obtenidos por los patrones en la recta de calibrado,
ajustar dicha recta e interpolar los valores a la seal de las muestras problemas.
~ Controlar en el caso de disponer de ello el sistema de autoanlisis se adopta al
espectrofotmetro un inyecto automtico de las muestras con lo que se consigue mayor precisin
y se invierte menos tiempo en el anlisis.

FUNCIONAMIENTO GENERAL DE LAS ESPECTROFOTMETROS DE AL ABSORCIN

ATMICA
Pueden ser de un solo haz o de doble haz. Para su puesta en marcha requieren una
cuidadosa manipulacin debido al empleo de gases como el acetileno, en la llama altamente
inflamable y a la multitud de factores que hay que tener en cuenta.
INTERFERENCIAS EN ABSORCIN ATMICA
Son las causas de errores ms frecuente en esta tcnica. Podemos distinguir:
Interferencias espectrales: ocasionadas por lneas espectrales que el monocromador no
es capaz de discriminar (por ejemplo la existencia de elementos con lneas de resonancia
prximas a al de absorcin del analito)
Interferencias qumicas: ocasionadas por la combinacin del elemento a analizar con
otras sustancias presentes en la muestra dando lugar a la formacin de compuestos voltiles
equilibrios de disociacin en el sistema de atomizacin. Tambin se producen si al atomizacin
del elemento en las disoluciones patrn difiere de la muestra debido a la existencia de sustancias
que interfieran.
Interferencias de ionizacin: la causa puede ser entre otras la elevada temperatura de
atomizacin que hace aparecer otra especie en la muestra que se comporta de manera diferente
ante la irradiacin. Entonces se disminuye la seal del elemento al reducirse la cantidad de
tomos elementales absorbentes.
Interferencias fsicas: van a influir en la cantidad de tomos del analito en el sistema de
atomizacin. Se refiere a las caractersticas fsicas de al muestra, as en el caso de la llama a
menor viscosidad mayor velocidad de flujo hacia el sistema da atomizacin y cuanto mayor sea
la tensin superficial menor ser el tamao de las gotitas del aerosol. Ambos efectos producen
elevadas absorbancias y viceversa.
Interferencias de absorcin no especficas (NSA): tambin se denomina absorcin de
fondo, se debe a la resistencia de absorcin moleculares o a la dispersin de partculas en el
atomizador que se producen como consecuencia de la matriz de la muestra. Esta interferencia
puede minimizarse empleando un corrector de fondo que sea una fuente continua de radiacin
ultravioleta como por ejemplo la lmpara de deuterio.
MTODO PARA LA CORRECCIN DE LA ABSORBANCIA DE INTERFERENCIA
Mtodo de la correccin de las 2 lneas
Mtodo de correccin de fuente continua: puede ser una lmpara de deuterio que emite
en el ultravioleta de forma continua y que est alojada en el interior del espectrofotmetro de
absorbancia atmica. Esta lmpara mide la absorcin molecular de las interferencias de
absorcin no especficas para corregir esta absorcin debida a la matriz de esta muestra se hace
pasa el detector (en fases alternativas) la radiacin de la fuente HCL EDL (que mide la
absorbancia especfica y al no especfica) y al de al lmpara de deuterio (que solo permite la
absorbancia de la no especfica).
Mtodo de correccin basada en el efecto Ziman
Mtodo de correccin basado en el efecto Smith-Hieftje
Mtodo del tampn de radiacin
Mtodo de formacin de un compuesto para la sustancia interferente
Mtodo de formacin de un complejo
Otros mtodos

OTRAS ESPECTROSCOPIAS DE LA ABSORCIN ATMICA DE ATOMIZACIN DE LLAMA

1- Tcnica de anlisis por inyeccin en flujo (FIAS): consiste en la introduccin de la

muestra en el seno de una corriente de un lquido portador. Se pueden realizar sobre la corriente
procesos fsicos y qumicos a la muestra. Las posibilidades de la manipulacin de al muestra
permite :
Determinacin de la masa absoluta adems de al concentracin del analito
Anlisis especializados, etc
Elevada capacidad de muestreo
El anlisis final puede realizarse por:
Es absorbancias atmica de llama.
Sistema de atomizacin de plasma inducido
2- Tcnicas de generacin de vapor: se divide 2:
Tcnica de vapor fro: consiste en aadir a la muestra un agente reductor normalmente
estao que mantiene al analito en su forma elemental. Normalmente se extrae de la muestra con
una corriente de nitrgeno. Esta corrientes atraviesa a una clula de cuarzo sorbe la que se incide
radiacin electromagntica y se aplica la ley de Lambert-Beer. Como el analito ya est
atomizacin es necesario utilizar calor. Tiene como ventaja que da una seal estable.
Tcnica de generacin de hidruros: consiste en al formacin de hidruros del elemento
que se pretende analiza al aadir a la muestra, borohidruro de sodio al 1%. Se prepara la muestra
en solucin acuosa y medio cido y se mezcla con el borohidruro en una cubeta de vidrio. Como
productos de esta reaccin se obtiene hidrgeno libre que es capaz de reducir al analito (metales)
y constituir el hidruro voltil correspondiente. Los hidruros del analito son arrastrados por una
corriente de gas, se conducen a la zona del haz incidente sobre la llama y se registra su
absorbancia (por tanto la concentracin). Con esta tcnica se puede analizar: arsnico, bismuto,
estao, selenio y plomo en tejidos y fluidos biolgicos. La sensibilidad es mayor que la de llama
y similar a la atomizacin electrotrmica.
PREGUNTAS TEMA 18
1- Definicin de atomizacin
2- Tipos de sistemas de atomizacin. Un ejemplo de cada
3- Nombra las etapas del proceso de atomizacin en general
4- Dnde ocurre la mezcla nebulizada con los gases?
5- Zonas de la llama
6- Tipos de llamas segn la temperatura
7- Segn la proporcin de mezcla de gases Qu tiempo de llama tenemos?
8- En la atomizacin electrotrmica los volmenes de muestras Son mayores o menores que en
la llama?
9- En cada etapa del proceso de atomizacin electrotrmico existen 2 tiempos denominados:
10- Nombra los 2 tipos de lmparas ms importantes en espectroscopia de absorcin atmica

11- Definicin de modulador

12- El sistema selector de longitud de onda en EAA ms usado se denomina:
13- El sistema de depsito de la muestra es: en la atomizacin de llama: ......... y en al
atomizacin electrotrmica: ...........
14- En el nebulizador obtenemos la muestra en forma de un ..... por el efecto ........
15- En la cmara de premezcla la muestra nebulizada va a chocar con ......... o bien con .......,..
para disminuir ...........
16- Las interferencias espectrales estn ocasionadas por la ......... de lneas espectrales que el
monocromador es incapaz de discriminar.
17- las interferencias de ionizacin son debidas a la ........ ........... ........... que hace aparecer otra
especie en la muestra
18- Las interferencias de absorcin no especfica tambin se denominan .............. y se eliminan
con ...............
19- Qu nos permite determinar la tcnica de anlisis por inyeccin de flujo?
20- Di los 2 tipos de tcnicas de generacin de vapor.

TEMA 19
ESPECTROSCOPIA DE EMISIN ATMICA (EEA)
Las tcnicas de espectroscopia de emisin atmica estudian la emisin de radiacin que
produce una muestra que previamente ha sido atomizada por diversos sistemas:
EEA de llama
EE fluorescente atmica con atomizacin de llama electrotrmica.
EEA con atomizacin de plasma
EEA con atomizacin de chispa
Proceso de emisin: algunos compuestos tienen la propiedad tras haber sido excitados
de retornar a su estado fundamental produciendo una emisin de energa radiante. La luz emitida
se puede medir y ello constituye el principio de algunas tcnicas como la fotometra de llama o la
fluorescencia. La fotometra de llama es ampliamente utilizada en el laboratorio de anlisis
clnico para la determinacin de sodio, potasio y en lquidos biolgicos.
FOTOMETRA DE LLAMA
Esta tcnica est basada en el fenmeno de emisin de luz.
Cuando un tomo en estado fundamenta es sometido a la energa calorfica de una llama
sus electrones se excitan pasando a niveles superiores de energa. Los electrones son inestables
en ese estado excitado y el volver a su estado inicial desprende la energa en forma de luz.
La luz desprendida puede poseer distintas longitudes (distintos niveles de energa lneas
del espectro) que son caractersticas de cada elemento de modo que se selecciona en cada
elemento aquella longitud de onda que emite con mayor intensidad y tiene menos probabilidad
de que se presenten otras longitudes de onda, y cercanas que puedan interferir.
Los metales alcalinos (litio, sodio, potasio) son los ms frgiles de excitar en la llama de
un mechero ordinario de laboratorio. En la prctica este fenmeno se traduce en que cuando se
pone una solucin de estos metales en contacto con una llama cada uno da un color caracterstica
y distinto a esa llama (litio = rojo; sodio = amarillo; potasio = violeta) las longitudes de onda
corresponden a esos colores son las empleadas para la determinacin de los iones
correspondientes.
En condiciones constantes y controladas, al intensidad luminosa de la longitud de onda
tpicamente producidas por cada uno de los tomos resultada directamente proporcional al
nmero de tomos y emiten energa, lo cual es a su vez directamente proporcional a la
concentracin del in en la muestra.
Conviene saber que una solucin de unin, tan slo se encuentra excitado en llama del 15%, siendo esta proporcin la que emitir energa. A pesar de que este porcentaje de tomos
excitados sea tan pequeos, la tcnica tiene suficiente sensibilidad para la determinacin de los
metales alcalinos en la mayor de las concentracin bioanalticas.
Otros metales como calcio, magnesio, son excitados tan fcilmente en la llama
convencional, por lo que no resulta tan sencillo utilizar esta tcnica par su medida de ello deriva
su escasa utilizacin.
A- Instrumental: en esta tcnica se utiliza el fenmeno de emisin; y si la comparamos con la
fotometra de absorcin nos encontramos ante un espectrofotmetro en el cual la fuente de luz
sea sustituido por la llama, donde los elementos excitados generan su radiacin caracterstica. El
fotmetro consta de:
Gases: suelen emplearse gas natural, acetileno propano con aire u oxgeno. Todos
ellos funcionan bien y difieren en la temperatura de la llama de cada uno de ellos, que incide en
la sensibilidad que cada combinacin proporciona.

La eleccin de la llama (gases) depende de la temperatura que se desee. Para

determinaciones de sodio y potasio es suficiente el propano-aire.
Es esencial que la temperatura de la llama se mantenga constante para lo cual se precisan
reguladoras que mantengan flujo constantes de gas.
Atomizador y llama: tiene como funcin disgregar la solucin problema en pequeas
gotas, para que los tomos absorban la energa trmica de la llama y se exciten. La solucin suele
entrar a gran velocidad y choca contra las paredes de una cmara, disgregndose en finas gotas.
La variable ms importante de la llama es su temperatura. En los fotmetros de llama se
requiere una constante de estandarizacin, ya que los cambios trmicos afectan a la respuesta del
instrumento. Adems se introducen comprobaciones con estndares de valor conocida entre las
determinaciones.
B- Fotometra de llama directa con estndar interno: los fotmetros de llama pueden ser de 2
tipos:
Directos: se emplean la intensidad de luz emitida como la medida de la concentracin.
Con estndar interno: la intensidad de la emisin del elemento a determinar se compara
con la de un elemento agregado como estndar interno.
Todos los fotmetros de llama utilizados en clnica son de tipo estndar interno.
Se puede emplear como estndar interno litio cesio.
El litio se emplea para determinaciones de sodio, potasio y el cesio para determinacin de
litio, sodio, potasio.
El estndar interno funciona produciendo una seal de referencia frente a la cual se puede
medir la emisin de otros elementos, de modo que el fotmetros hace una comparacin de
emisin de los elementos deseados y del elemento de referencia. De esta manera, las pequeas
variaciones que pueden darse en la velocidad de aspiracin, atomizacin, viscosidad de la
solucin, temperatura y estabilidad de la llama, afectan por igual al estndar interno y al
elemento a medir.
Aunque la intensidad de la emisin del elemento medido y del patrn interno pueden
variar, no sucede lo mismo con la relacin entre ambos. De esta forma el uso de estndar interno
permite determinaciones ms precisas y exactas.
Caractersticas del estndar interno han de ser:
Que est ausente de los lquidos biolgicos a medir.
Que emita a longitud de onda lo suficientemente alejados de los elementos a medir de
modo que no interfiera con la deteccin de estos.
C- Aspectos prcticos: a parte de las consideraciones ya echas y basndonos en ellas conviene
hacer hincapi en que la fotometra de llama est enormemente sujeta a todos aquellos factores
que dependen de la correcta entrada de la muestra en la llama (aspiracin y atomizacin), y del
mantenimiento de una llama de caractersticas constantes.
Por ello se impone una vigilancia estrecha de todos los componentes del instrumento que
participan en esta primera fase:
~ Mantener limpio y libre de obstruccin el mecanismo de aspiracin (por donde entra la
muestra).
~ Mantener limpio la cmara de atomizacin.
~ Vigilar los gases y su presin constante de salida.
~ Mantener el quemador limpio para conseguir una llama homognea.
Los fallos iniciales en la precisin y exactitud en las medidas estn causadas muy
probablemente por un deficiente mantenimiento de estos componentes.

ESPECTROSCOPIA DE EMISIN FLUORESCENTE ATMICA

Se estudia la emisin de fluorescencia realizado por la muestra previamente atomizada,
con llama o mediante atomizacin electrotrmica. No se emplea mucho debido a que no presenta
ventajas sobre otras tcnicas de espectroscopia de emisin atmica y sin embargo, presenta
algunos inconvenientes como el elevado coste de adquisicin y mantenimiento de los equipos y
el estrecho intervalo de concentracin del analito en la muestra en los que se puede trabajar.
Se emplean como fuentes de radiacin lmparas de ctodos huecos, lmparas de
descargas sin electrodos y/o lser.
ESPECTROSCOPIA DE EMISIN ATMICA CON ATOMIZACIN DE PLASMA
Las tcnicas ms usuales son:
Las tcnicas espectroscpicas de emisin atmica que emplean como sistema de
atomizacin el plasma. El plasma es una mezcla conductora de la electricidad, que en estado
gaseoso est constituido por cationes y electrones. El plasma ms utilizado es el de argn, que
una vez ionizado es capaz de absorber suficiente potencia externa como para alcanzar
temperaturas alrededor de 10.000K.
A- Fuentes de alimentacin: las fuentes de alimentacin externas pueden ser:
De radiofrecuencia (se denomina ICP antorcha plasma acoplado inductivamente). El
inicio de la produccin de energa es una chispa de una bobina de tesla, que provoca la
ionizacin del gas en el interior de los cilindros (son 3 cilindros donde se lleva a cabo el
proceso). Con lo que se transforma en cationes y electrones, los cuales interaccionando en un
campo magntico (Es un campo magntico oscilante originado por la bobina de induccin) van a
dar lugar a la produccin de energa trmica suficiente como arpa atomizar la muestra.
~ Sistema de muestreo: la muestra se coloca nebulizada en el seno del plasma a travs del
extremo superior de los cilindros mediante un flujo de argn. Como nebulizador se emplean el
flujo de argn o nebulizadores ultrasnicos que colocan la muestra en el plasma de forma
continua. Tambin se emplea como sistema de depsito de la muestra la vaporizacin
electrotrmica. Este sistema permite el anlisis de un volumen inferior de muestra al contar con
al posibilidad de micromuestreo (volumen en microlitros).
De corriente continua DCP: en este caso el sistema de muestreo y al temperatura
alcanzada por el plasma es similar al sistema anterior (al de induccin). La muestra se deposita
nebulizada y alcanza una temperatura de atomizacin de hasta 10.000K. precisin es parecida al
de induccin aunque la sensibilidad es menor.
De microondas (este plasma no se emplea en bioqumica clnica)
B- Instrumentacin en espectroscopia de plasma: son bsicamente 2 tipos:
Equipos de secuencias: miden las intensidades de radiacin absorbida lnea a lnea y
suelen estar programados para registrar la radiacin absorbida por uno o varios elementos de la
muestra.
Equipo multicanal: estn preparado par medir al mismo tiempo las intensidades de
radiacin absorbida por varios elementos. Las ventajas de los equipos e emisin de plasma son:
~ Proporciona datos de gran calidad
~ Son equipos estables, con bajo ruido y poca radiacin de fondo
~ No presentan apenas interferencias qumicas, de ionizacin y/o de matriz.
~ Los lmites de deteccin son bajos
~ Pueden aplicarse a la determinacin de gran cantidad de elementos.
Los inconvenientes derivan de su elevado coste de funcionamiento, siendo ms
econmica el de corriente con respecto a la de induccin.

ESPECTROSCOPIA DE EMISIN ATMICA CON ATOMIZACIN DE ARCO Y CHISPA

Equipo de instrumentacin: como sistema de atomizacin se emplea la fuente de arco y

chispa. La atomizacin se emplea en un pequeo espacio entre electrodos de grafito y metal
donde al pasar la corriente elctrica se genera la energa suficiente como para atomizar la
muestra y excitan los tomos que posteriormente emitirn radiacin al volver a su estado
fundamntela.
Estas 2 fuentes son muy inestables y proporcionan datos poco reproducibles. Para intentar
corregir esta echo se realiza la medida al menos durante 20 segundos en instrumentos multicanal
como el llamado espectrgrafo, en el que la medida de al radiacin dispersada se realiza
mediante una placa fotogrfica.
Tambin puede utilizarse como fuente de atomizacin un lser pulsado que poseen la
energa suficiente para producir la atomizacin y al excitacin de la muestra., este sistema
presenta algunos inconvenientes. Como la autoabsorcin de radiacin, la absorcin de fondo y la
baja intensidad de las lneas de emisin. Estos inconvenientes se solucionan cuando se emplean
como fuentes la microsonda lser.

TEMA 20
OTRAS ESPECTROSCOPIAS ANALTICAS
FLUORESCENCIA, FOSFORESCENCIA Y QUIMIOLUMINISCENCIA MOLECULAR
Proceso de absorcin-relajacin:
~ Fluorescencia: la fluorescencia es un fenmeno de absorcin atmica y/o molecular que
ese produce tras la relajacin de la materia previamente irradiada (es la capacidad de ciertas
sustancias de emitir fulgor transitorio cuando son expuestas a los rayos violetas y ultravioleta de
una luz que los contengan; una sustancia que lo produce es el espato-flor). Se da en sistemas
qumicos, lquidos, gaseosos y slidos, simples o complejos. Su duracin es de 10 -5 a 10-8
segundos desde el inicio de la excitacin. La fluorescencia de las molculas puede ocasionar
radiacin de resonancia o radiacin no resonante.
~ Fosforescencia: la fosforescencia es la emisin continua de luz apreciable en la
oscuridad, sin calor sensible. Tambin se define como luminosidad indicada que persiste tras
cesar la radiacin causal. Este fenmeno se produce tras la irradiacin de la materia y se
mantiene durante una tiempo que oscila desde unos pocos segundos hasta minutos o incluso
horas. Este fenmeno luminiscente tiene lugar cuando una molcula excitada vuelve a niveles
menos energticos meta-estables que se denominan tripletes, emitiendo una radiacin de mayor
longitud de onda que la de excitacin.
~ Quimioluminiscencia: la quimioluminiscencia es un fenmeno luminiscente cuya
caracterstica es el origen de la energa de excitacin de la materia. Esta energa se produce en el
transcurso de una reaccin qumica. En algunas ocasiones no es el analito el que experimenta el
proceso de excitacin-relajacin, sino una especie formada por la reaccin del analito y los
reactivos qumicos empleados en la prueba; generalmente una especie oxidada.
Factores que influyen en la fluorescencia y fosforescencia:
~ Rendimiento cuntico eficacia cuntica: es la relacin que existe entre el nmero de
molculas que emiten fluorescencia y fosforescencia y nmero total de molculas excitadas.
~ Tipo de transicin entre niveles
~ Combinacin de los 2 factores anteriores: la eficacia cuntica varia segn la transicin
entre niveles.
~ Estructura molecular: los compuestos cromticos que contiene grupos funcionales con
transiciones de relajacin de baja energa son los que presentan mejor fluorescencia. La rigidez
estructural favorece tambin la fluorescencia.
~ Condiciones de medida: la temperatura de medida y la presencia de compuestos
pesados en el disolvente se relacionan de forma inversa con la fluorescencia, al contrario que la
viscosidad del disolvente cuya relacin con la fluorescencia es directa. Con respecto al pH la
fluorescencia de un compuesto es diferente, dependiendo de la ionizacin que presenten sus
radicales cidos o bsicos.
La presencia de lo disuelto suele reducir la intensidad de la fluorescencia, la potencia de
fluorescentes, perdindose esta linealidad al aumentar la concentracin.
INSTRUMENTACIN EN FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA
Se denomina fluormetros o espectros fluormetros. Casi todos tienen ptica de doble haz
para compensar la variaciones de la fuente. Las seales llegan al sistema de registro donde se
mide la relacin existente entre la intensidad de radiacin emitida por la muestra y la de
referencia convirtindose en un dato numrico.
Equipos de instrumentacin en fluorescencia y fosforescencia: debido a las fluctuaciones de
intensidad de radiacin, es necesario calibrar a diario de los fluormetros o de los espectros
fluormetros en al regin de longitud de ondas del anlisis y el ajuste de las mismas a un nivel de

sensibilidad reproducible. Para ellos se utiliza una solucin patrn estndar de fluorescencia
conocida como fosfata de quinina, que absorbe a 350 nm y emite radiacin a 450 nm.
Los componentes del equipo son:
~ Fuente de radiacin: puede ser una lmpara de arco de mercurio a bajo presin con
ventana de slice, tambin puede ser una lmpara de xenn a elevada presin bien lser de N2
~ Sistema selectores: van a ser: monocromadores de radiacin: dispositivo capaz de aislar
una banda muy estrecha de longitud de onda.
~ Detectores: va a ser fotomultiaplicadores: dispositivo electrnico consistente en un tubo
vaco capaz de detectar radiacin que contiene uno pocos fotones y convertirlos en un
potencial elctrico proporcional al nmero y energa de eso fotones.
~ Sistema de depsito de la muestra: cubetas tanto de vidrio como de slice. Para atenuar
la radiacin dispersada se emplean deflectores.
Determinaciones fluorimtricas y fosforimtricas: los mtodos analticos fluorimtricos
pueden ser:
~ Directas: cuando se mide la fluorescencia de un compuesto formado pro el reactivo y el
analito.
~ Indirectos: que miden la disminucin aumento de la fluorescencia que produce el
analito al reaccionar con los reactivos empleados.
En bioqumica se emplea este mtodo para el anlisis de alimentos y frmacos. En
bioqumica clnica se aplican para determinaciones de muestras biolgicas de iones, enzimas,
coenzimas, vitaminas, algunos medicamentos, etc.
Los mtodos analticos fosforimtricos se emplean en al determinacin de cidos
nucleicos, aminocidos, enzimas, ... no se emplea tanto como la fluorimetra, por que a pesar de
su alta selectividad, presenta mayor imprecisin y ms inconvenientes en la medida, como el
mantenimiento de la temperatura,...
Ambas tcnicas se emplean como complemento a las tcnicas de cromatografa lquida de
elevada solucin al detectar los elementos luminiscentes que son eluidos a travs de la columna
cromatogrfica.
QUIMIOLUMINISCENCIA
Esta tcnica se aplica ms en anlisis medio ambiental que en clnico, denominndose
bioluminiscencia.
El equipo de instrumentacin es ms sencillo ya que no es necesario emplear selector de
longitud de onda; la nica radiacin producida es la que procede de la reaccin qumica entre el
reactivo y el analito. Para calcular la concentracin del analito se compara la luminiscencia
producida por este con la de un estndar de concentracin conocida. Es un mtodo de elevada
sensibilidad.
ESPECTROSCOPIA RAMAN
Los espectros Raman se obtienen haciendo incidir una radiacin monocromtica visible o
infrarroja sobre una muestra con una fuente de elevada potencia. Para obtener el espectro se
registra la radiacin dispersada por la muestra en un ngulo de 90 con respecto a la direccin del
haz incidente par una condiciones previamente establecidas.
Las variantes son:
~ Espectroscopia Raman de resonancia
~ Espectroscopia Raman activada por superficie aumentada (SERS)
~ Espectroscopia Raman no lineal.
Las fuentes de radiacin que suelen utilizarse son: lser, bien de argn, kriptn, de helionen,... microsondas lser.
La ptica del equipo suele ser de doble haz.

ESPECTROSCOPIA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

La espectroscopia de resonancia magntica nuclear estudia el comportamiento de los
ncleos atmicos en el seno de un campo magntico, al exponerse a una radiacin de la regin de
radiofrecuencia.
Al incidir con esta radiacin se van a producir transiciones en los niveles energticos.
Tras recuperar estados ms estables una forma de relajacin puede ser la emisin de radiacin
que se denomina relajacin radiante.
Los espectroscopios de resonancia magntica pueden ser:
~ de lneas anchas
~ de alta resolucin
Esta tcnica se emplea para la identificacin de estructuras orgnicas e inorgnicas, as
como para la identificacin de especies absorbentes en al muestra.
Equipos de instrumentacin en espectroscopia de resonancia magntica: tiene un agente
caracterstico: un imn de gran estabilidad donde se coloca la muestra. La sensibilidad y
resolucin del equipo est influidos por las caractersticas del imn y se relacionan directamente
con su potencia. Se clasifican en espectrmetros de lneas anchas o de elevada resolucin
dependiendo del tipo de imn que se emplee.
Aplicacin de la espectroscopia de resonancia magntica nuclear de protn: su principal
aplicacin es la de identificacin de molculas orgnicas, rgano-metlicas y bioqumicas e
incluso puede utilizar se para su cuantificacin en anlisis de mezclas multicomponentes, por
ejemplo frmacos.
Otras aplicaciones son: anlisis de grupos funcionales orgnicos y anlisis fundamental.
Otros tipos de espectroscopia de resonancia magntica nuclear:
~ RMN de carbono 13: informa sobre la estructura espacial de las molculas
~ RMN de fsforo 31
~ RMN de flor 19
ESPECTROSCOPIA DE RAYOS X
La radiacin X es una radiacin electromagntica, energtica y de longitud de onda corta.
La energa de rayos X estudia el comportamiento de la materia frente a esta radiacin: emisin,
absorcin, dispersin, fluorescencia y/o difraccin con estas tcnicas se pueda obtener
informacin sobre la estructura y la composicin de la materia objeto de estudio.
La emisin de radiacin X proviene de tubos de radiacin X, formados y sustancias
radiactivas depositadas en cpsulas recubiertas para que la radiacin solo salga por la zona
controlada. La emisin puede ser constante o intermitente por lo que los espectros de emisin de
rayos X puede ser continuo o de lneas.
Los sistemas selectores: se usan monocromadores que no son dispositivos compuestos
por 2 colimadores estructuras de metal poco espaciados, montados sobre placas metlicas que
actan absorbiendo todos los haces de radiacin X, excepto los que se irradian en posicin
paralelo.
Por ltimo existen detectores (que pueden ser de gas semiconductor contadores de
centelleo) y sistemas procesador de la seal, donde se registra la seal la radiacin para poder
despus ser interpretada.

TEMA 21
EQUILIBRIO CIDO-BASE
CONCEPTO GENERAL DE CIDO-BASE
El concepto de cido-base de Arrhenius en el siglo XIX, revolucionario en su tiempo
presenta la gran limitacin de que slo se poda fijar en disoluciones acuosas. As: cido es toda
sustancias capaz de ceder protones (H+) al agua y base toda sustancias capaz de ceder
hidroxilos (OH-) al agua.
Otro fallo de esta teora es que Arrhenius habla de portn H+ pero en el agua no existen
protones como tales, sino que existe como in hidratado o in hidronio (H 3O+) (realmente sera
H9O4+) o lo que es lo mismo H+ (H2O)4.
La hidrlisis del agua es
Posteriormente Bronsted y Lowry propusieron un concepto ms amplio diciendo que
cido es cualquier sustancia capaz de ceder protones y base cualquier sustancia capaz de captar
protones. As para que una sustancia acte como base debe tener un par electrnico solitario para
aceptar los protones:

Segn Bronsted y Lowry un cido y una base que pueda transformarse entre s por la
prdida o ganancia de un protn se denomina par conjugado par cido-base. Cuando un cido
cede protones se convierte en un compuesto capaz de aceptarlos, es decir, en una base conjugada:
Cuando una base acepta protones se convierte en una sustancia capaz de cederlos, es
decir, en un cido conjugado.
En 1.923 Lewis propuso otra definicin: cido es toda sustancia capaz de aceptar un par
electrnico y base toda sustancia capaz de dar o ceder un par electrnico

Una reaccin cido-base es para Lewis aquella en que la base compartir un par de
electrones con el cido (la transferencia de un protn sera un caso particular) con esta teora se
amplia el grupo de los cidos ya que entraran en esta categora los iones positivos.

FUERZA INICA DE CIDO Y BASE

En la fisiologa humana el agua desempea un papel fundamental de las reacciones
cidas-bsicas. En estas reacciones se produce un proceso de cesin y aceptacin de protones
(ley de Bronsted y Lowry) por lo cual si pretendemos definir la fuerza de un cido una base
podemos decir que dicha fuerza sera la tendencia a cede o a captar protones y que va a depender
de la especie que se combine, va a ser un cido o una base par aceptarlos o cederlos.
Si tenemos un cido en disolucin acuosa tendramos este equilibrio

Cuanto ms desplazado est ste equilibrio hacia la derecha ms fuere ser considerado el
cido (esto significa que est totalmente disociado). Esta medicin de la fuerza de un cido
base se puede realizar por la constante de equilibrio de la reaccin que puede ser constante de
acidez o constante de basicidad.

Por otro lado podemos definir; pka = - log Ka; pkb = - log Kb; por lo que:
~ Cuanto mayor es el valor de Ka y menor el de pka ms fuerte es el cido
~ Cuanto mayor es el valor de Kb y menor el de pkb ms fuerte es el cido.
En general un cido dbil es aquel que en disolucin acuosa est principalmente
disociado.
CONCEPTO DE pH
Para definir el pH estudiaremos el pH de disociacin del agua bien ms sencillamente:
Definimos la constante de equilibrio para esta ecuacin
En solucin acuosa la concentracin de agua es muy grande, pudiendo considerarla
constante para soluciones diluidas y por tanto englobarla junto a la constante de equilibrio.

Kw es el producto nico del agua que tiene un valor a 25C de 10-14 M.

Cuando se trata de agua pura calcular la concentracin de protones e hidroxilos es fcil ya
que forman en cantidades iguales (es una solucin neutra)

Si en la solucin acuosa agregamos un cido, aumenta la concentracin de protones y

tanto para mantener constante el producto inico va a disminuir la concentracin de hidroxilos.

Si a la solucin acuosa aadimos una base, aumenta la concentracin de hidroxilos por

tanto para que la concentracin se mantenga constante, si disminuir la concentracin de
hidroxilos:

Por tanto podremos saber la acidez basicidad de una disolucin midiendo la

concentracin de hidrogeniones y hidroxilos respectivamente.
Sovensen en 1909 introdujo el concepto de pH (pH = - log [H +] pH = log 1/[H+]) que
sera pH igual a menos el logaritmo decimal de la concentracin de hidrogeniones. De igual
manera definimos el pOH que es menos logaritmo decimal de la concentracin de hidroxilos

En realidad la concentracin de protones no puede medirse ya que los nmeros de pH de

1 hasta 14 que aparecen en la escala de los peachmetros, se definen a partir de una escala
emprica basada los disoluciones tampn estandarizados. Estas disoluciones sufren variaciones
segn las condiciones de trabajo, temperatura,...
A la temperatura corporal de 37C el producto inico Kw es superior (a 10-14) y el pH al
cual se cumple la neutralidad elctrico ya no es 7, sino aproximadamente 68. as el pH
sanguneo normal de 74 se encuentra en el lado alcalino de la neutralidad y un pH sanguneo por
ejemplo de 66 representara un procedo de acidificacin muy grave.
SISTEMAS AMORTIGUADORES
Un sistema amortiguador tampn es la mezcla de un cido y su base conjugada cuya
funcin fundamental es la de resistir los cambios de pH de otra forma se produciran por adicin
de incluso pequeas cantidades de cido y bases fuertes.
Debido a su presencia en una disolucin hacen un aumentar la cantidad de cido o base
que es necesario aadir para provocar un cambio significativo del pH.
Los tampones presentes en los diferentes lquidos biolgicos son normalmente de cidos
dbiles (cido carbnico, cido fosfrico, algunos cidos de peso molecular bajo, como el cido
lctico y el ctrico, grupo de protenas que ceden protones, etc y sus bases conjugadas)., adems
hay muchos ms electrolitos (aniones y cationes) tales como el calcio, magnesio, cloro y sodio
que aunque no sean tampones desempean una importante funcin relativa a los cambios del
equilibrio cido-base.
En el organismo los sistemas tampn que tiene una verdadera importancia clnica son:
~ Los presentes den el plasma: sistema amortiguador de la hemoglobina, el sistema
formado por las protenas plasmticas
~ Los presentes en los hemates
~ Los presentes en el lquido intracelular
Estos cidos y sus bases conjugadas actan como tampones porque el exceso de
hidrogeniones generados en el organismo pueden reaccionar con las bases tampn para dar
cidos no disociados

INDICADORES CIDO-BSICO
Los indicadores cido-bases son sustancias orgnicas (colorantes) cuyo color es lo
suficiente intenso como para ser visible en soluciones muy diluidas. Tienen un carcter cido y
presentan adems una conjugacin distinta a la de sus bases conjugadas (HIn/In -). La relacin
entre sus 2 formas HIn/In- est determinada por el pH del medio donde actuar de manera que a
un pH bajo predomina la forma HIn y se ve el color de la forma cida. Mientras que a un pH
elevado predomina la forma In- y se ve el color de la forma bsica.
El cambio del color del indicador es visible en un pequeo margen de pH y por tanto si se
elige una serie de indicadores diferente cuyos intervalos de pH se superpongan ligeramente se
podr determinar el pH de una solucin acuosa.

EQUILIBRIO CIDO-BASE
Debido a los constantes procesos fisiolgicos del organismos (metablicos o no) se
generan diariamente una gran cantidad de sustancias (tanto de carcter bsico como cido)
susceptibles de alterar el equilibrio cido-base. Dicha alteracin se produce en cambios de pH en
el organismo, de una gravedad proporcional al desequilibrio que haya tenido lugar.
Evitar las variaciones en el pH, es tarea fundamental llevada a cabo por los tampones o
sistemas amortiguadores presentes en el organismo capaces de captar o liberar protones como
respuesta de los cambios de acidez de los diferentes lquidos orgnicos. As, las caractersticas de
los sistemas tampn ms importantes del organismos son:
En el lquido intracelular tenemos como sistemas tampn:
~ La protena hstica (HPr/Pr-)
~ Fosfatos orgnicos (Hporg/Porg-)
En el plasma tenemos como sistema tampn:
~ Tampn bicarbonato/cido carbnico (HCO-3/H2CO3): es el tampn ms importante del
plasma. El EQ establecido es H2O + CO2 H2CO2 HCO-3 + H+.
Con cidos:
Con bases:
Es el tampn ms importante del plasma ya que se encuentra en una elevada
concentracin. Puede ser eliminado o retenido fcilmente ya sea por un mecanismo amortiguador
respiratoria (elimina retiene el bicarbonato en forma de dixido de carbono). El porcentaje de
efecto amortiguador de sangre entera en del 35%.
~ Tampn fosfato : se divide en:
- Tampn fosfato inorgnico
- Tampn fosfato orgnico
Representa un efecto amortiguador de sangre entera al 5%. Tiene escasa importancia
como efecto amortiguador. Acta bsicamente manteniendo la base durante el proceso de
excrecin urinaria de sustancia cida. Los equilibrios establecidos son:
Con cidos:
Con bases:
~ Tampn plasmticas (
): tienen mucha menor importancia como tampn que la de
la hemoglobina y el bicarbonato. El porcentaje de efecto amortiguador en sangre entera es del

7%. Su actividad amortiguadora deriva de la presencia de grupos aminos y carboxilos libres para
unirse a los protones.
La cantidad de aminos y carboxilos libres e a su funcin del pH del medio. El equilibrio
establecido es:
En los eritrocitos hay 2 sistemas tampn:
~ Tampn hemoglobina (
):; representa el 35% del efecto amortiguador en sangre
entera es el segundo tampn sanguneo en importancia debido a que se encuentra a una elevada
concentracin ya que cada molcula de hemoglobina puede captar una gran cantidad de protones.
Este tampn acta fundamentalmente sobre el cido carbnico producido durante procesos
metablicos. El equilibrio establecido es:

~ Tampn bicarbonato/cido carbnico (

): representa el 18% del efecto tampn en
sangre entera.
La labor llevada a cabo por estos tampones se ve complementada de manera inestable por
el efecto regulador que sobre el pH desarrollan los riones y los pulmones.
En condiciones normales el cido-respiratorio (dixido de carbono) suele excretarse a
travs de los pulmones. Por su parte los riones eliminan mediante la excrecin tubular los
hidrogeniones originados como consecuencia de los principales fuentes metablicas no
respiratorias del organismos y que son fundamentalmente:
La oxidacin incompleta de grasas y carbohidratos
La oxidacin del azufre y de los metabolitos que contienen fsforo.
ALTERACIONES DEL EQUILIBRIO CIDO-BASE
El equilibrio cido-base se define como aquella situacin de equilibrio establecido en el
balance entre sustancias de carcter cido y carcter bsico de la sangre como consecuencia de la
interrelacin entre los sistemas respiratorio y metablicos.
Valores normales de pH en sangre arterial: 735-745 y en sangre venosa: 731-741.
Las alteraciones encontradas en el equilibrio cido-base pueden ser de 2 tipos:
~ Metablicas: son aquellas en la que la alteracin fundamental tiene lugar en la
concentracin de bicarbonato (
~ Respiratorias: aquellas en las que la concentracin de dixido carbnico (CO 2 cido
carbnico) constituye el cambio primario.
La mayor parte de los mtodos que se utilizan actualmente par detectar un desequilibrio
cido-base en el organismo estn basados en la aplicacin de la ecuacin de HendersonHasselbach. Para un cido dbil consideramos este cido como HA.

Pasando a logaritmos y recprocos tendramos:

Esta expresin es considerada la ecuacin estndar de Henderson-Hasselbach y puede ser

aplicada en cada caso para determinar las variaciones sufridas por el equilibrio cido-base del
organismo. Concretamente en el caso del cido carbnico de la sangre la reaccin que tienen
lugar en le plasma relaciona en la siguiente reaccin 3 magnitudes:
~ pH
~ La concentracin molar de cido carbnico
~ Concentracin molar de bicarbonato

Aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbach obtenemos:

Los hidrogeniones que como consecuencia de un proceso orgnico puedan se liberados

son temporalmente tamponados por los diferentes sistemas amortiguadores existentes en el
organismo. Cuando la cantidad de protones a analizar es excesiva pueden generarse alteraciones
del equilibrio cido-base de distinta gravedad que en ocasiones llegan a ser incompatibles e
incluso con la vida. Estos desequilibrios pueden ser por exceso o por defecto y generan en el
organismo 2 estados denominados:
Acidosis: es un exceso de hidrogeniones en la sangre (acidemia) por encima de 44
nmoles/L. (pH = 736). Est referida a todo el organismo.
Alcalosis: se refiere al dficit de protones en la sangre, debajo de 35 nmoles/L un pH
de 745. es un proceso referido a todo el organismo.
Segn el tipo de desequilibrio cido-base general las situaciones de acidosis o alcalosis
pueden ser de tipo respiratorio o metablico. Autoclnicamente aparecen frecuentemente
alteraciones mixtas.
Acidosis metablicas: es la carencia primaria de bicarbonato. Se origina en el organismo
como consecuencia de una retencin o produccin excesiva de un cido ms fuerte que el cido
carbnico. Los cambios secundarios que se originan son:
~ El bicarbonato en el plasma est disminuido
~ El cido carbnico disminuido
~ La excrecin renal de protones aumenta
~ En la orina disminuye el pH.
Las causas.
~ Aporte elevado de cidos (por ejemplo acidosis lctica)
~ Prdida de bases (diarrea intensa)
~ Insuficiencia renal (disminuye la excrecin de H+ entonces en el organismo)
~ Disfuncin de los tbulos renales.
El tratamiento:
~ Mediante la actuacin del sistema amortiguador bicarbonato/cido carbnico

~ Hiperventilacin pulmonar
~ Un aumento en la eliminacin de cidos y retencin de bases.
Acidosis respiratoria: consiste en una retencin primaria de dixido de carbono a nivel
pulmonar (los pulmones eliminar menos dixido de carbono). Los cambios secundarios son:
~ La presin parcial de dixido de carbono aumenta

~ La cantidad de cido carbnico aumenta a nivel plasmtico

~ El pH sanguneo disminuye
~ En la orina aparecen niveles aumentados de pH y concentracin de amoniaco.
Las causas son:
~ Obstruccin de las vas respiratorias
~ Estimulacin negativa del centro respiratorio (Depresin por ejemplo por barbitricos
~ Dficit de la circulacin de dixido de carbono
~ Distribucin irregular del aire respirado por enfermedad pulmonar.
El tratamiento es:
~ Un correcto funcionamiento de los sistemas amortiguadores fisiolgicos sobretodo de
las protenas plasmticas y la hemoglobina.

~ Por hiperventilacin
~ Una adecuada compensacin a nivel renal, por ejemplo aumenta la formacin de
amoniaco, la reabsorcin de bicarbonato y la excrecin de protones. Este mecanismo renal
aparece a las 24-48 horas y es mximo a los 3-4 das.
Alcalosis metablica: es consecuencia de un exceso primario de bicarbonato. Los
cambios secundarios son:
~ Los niveles de bicarbonato en plasma, cido carbnico, pH sanguneo y dixido de
carbono est aumentados
~ La eliminacin renal de bicarbonato est disminuida y el pH de la orina est
aumentado.
Las causas son:
~ Hiperaldosteronismo primario
~ Sndrome de Cushing
~ Prdida por vmitos intensos
~ Drenaje gstrico
~ Ingestin excesiva de bases (por ejemplo toma mucho bicarbonato)
El tratamiento es:
~ adecuada compensacin a nivel renal (disminuye el amoniaco y disminuye la
reabsorcin de bicarbonato.
Alcalosis respiratoria: es una deficiencia primaria de dixido de carbono. Los cambios
secundarios son:
~ Prdida de bicarbonato en el plasma por que pasa a los hemates.
~ Prdida de bicarbonato en orina
~ Disminucin de la presin parcial de dixido de carbono
~ El valor de pH en sangre aumenta (bsico)
~ en casos graves y prolongados aumenta los cuerpos cetnicos y disminuyen los
fosfatos.
Las causas son:
~ hipoxia (disminucin del nivel de oxgeno- asma)
~ estimulacin del centro respiratorio (fiebre, ansiedad,...)
~ embarazo
~ ejercicio intenso
~ ventilacin mecnica asistida
~ infeccin por microorganismo gram positivos

El tratamiento: adecuada compensacin a nivel renal, es decir, disminuye la reabsorcin

del bicarbonato y disminuye el amonio.
VALORACIN CLNICA DE LAS ALTERACIONES DEL EQUILIBRIO CIDO-BASE
Para poner en evidencia la existencia en el organismo de una situacin de acidosis o
alcalosis no es suficiente con determinar el bicarbonato presente en el plasma ya que:
~ Un valor disminuido de bicarbonato plasmtico puede se debido a una acidosis primaria
como a una alcalosis respiratoria primaria.
~ Un aumento de bicarbonato en el plasma puede tener su origen en una alcalosis
metablica primaria como en una acidosis respiratoria primaria.
nicamente cuando se base en que el trastorno primario es de origen respiratorio puede
conocerse la existencia de un acidosis o una alcalosis determinando nicamente el bicarbonato
plasmtico.
Normalmente la simple exploracin clnica permite determinar casi siempre si al
alteracin del equilibrio es del tipo metablico o respiratorio. En tal caso ser suficiente con:
determinar la presin parcial de dixido de carbono en caso de trastornos respiratorios bien
determinar la concentracin de bicarbonato en el caso de trastornos metablicos.
No obstante par una investigacin precisa del equilibrio cido-base ser necesario
determinar al menos los parmetros siguientes:
~ La concentracin de hidrogeniones
~ La concentracin de bicarbonato
~ La presin parcial de dixido de carbono
Determinacin de la concentracin de hidrogeniones: los medidores de pH ms
actuales requieren cantidades muy pequeas de sangre (menos de 100 ml) por lo que la sangre
capilar es adecuada para personas normales. Cuando la circulacin perifrica es escasa debe
recurrirse a la sangre arterial teniendo en cuenta que la sangre capilar es ms cida siempre que
la arterial.
Determinacin de la concentracin de bicarbonato: en general los cambios en la
concentracin de bicarbonato en el plasma estn relacionados con los diferentes trastornos del
equilibrio cido-base. As:
La concentracin de bicarbonato est disminuida en:
~ Acidosis metablica
~ Alcalosis respiratoria
~ Trastornos mixtos
La concentracin de bicarbonato es normal cuando:
~ El equilibrio es normal
~ Cuando existe un trastorno cido-base agudo temprano
~ Trastorno mixto compensado: acidosis metablica y respiratoria o bien alcalosis
respiratoria o metablica).
La concentracin de bicarbonato est aumentada en:
~ alcalosis metablica
~ acidosis respiratoria compensada
~ trastornos mixtos
Los valores de referencia son:
Acidosis pH < 736
Alcalosis pH > 744
Acidosis respiratoria: presin arterial de dixido de carbono > 44 mmHg
Acidosis metablica: concentracin de bicarbonato < 21 mmoles/L.
Alcalosis respiratoria: presin arterial de dixido de carbono < 34 mmHg
Alcalosis metablica: concentracin de bicarbonato > 29 mmoles/L.

TEMA 22
ESTUDIO DEL EQUILIBRIO GASEOSO
INTRODUCCIN
Durante el proceso de la respiracin los pulmones y la caja torcica actan
conjuntamente, con el objetivo de proporcionar aire fresco a los alvolos, para que pueda
producirse un intercambio gaseoso adecuado.
Debido a la gran elasticidad del tejido pulmonar cuando los msculos de la respiracin se
contraen, los pulmones y el trax se expande; y cuando se relajan pulmones y caja torcica
vuelven a su posicin normal. Durante la etapa de expansin la presin existente en los alvolos
disminuye por debajo de la presin atmosfrica. Eso permite que el aire atmosfrico fluya desde
el exterior hasta llega finalmente a ellos. La salida del aire a los pulmones (espiracin) es un
proceso pasivo. Como la presin alveolar a aumentado por enzima de la presin atmosfrica, el
aire sale al exterior desde los alvolos.
Durante el desarrollo de todo este proceso fisiolgico la sangre fluye por los pulmones
con el principal propsito de llevar a cabo un intercambio gaseoso que elimine de la sangre
venosa el dixido de carbono presente, sustituyndolo por el oxgeno. Este intercambio es
imprescindible para la vida:
El organismo no presenta reservas de oxgeno, por lo que una privacin de este gas
durante unos minutos puede causar la muerte.
Un desajuste de los niveles de dixido de carbono (gas de carcter cido) puede generar
una alteracin del equilibrio cido-base incompatible con la vida.
Caractersticas fundamentales de los gases sanguneos:
~ Presin parcial de un gas (PO2 Y PCO2): es la presin que ejerce o si solo, como parte
del conjunto por parte de todo los gases con los que se encuentran mezclados.
~ Presin total: es la suma de todas las presiones parciales correspondientes a cada uno de
los gases presentes en la mezcla.
A- Oxgeno: es un gas necesario para la vida que se encuentra formando parte del aire
atmosfrico. Cuando llega a los alvolos, gracias al mecanismo fisiolgico de la respiracin
penetra en la sangre por difusin pasiva ya en la sangre puede encontrase:
Disuelto en el plasma (muy poca cantidad)
Unido a la hemoglobina (la mayor parte)
El oxigeno disuelto en plasma puede medirse determinando la PO2
Oxgeno unido a la hemoglobina: la mayor parte del oxgeno es transportado en la
sangre unido al grupo hem de la hemoglobina: hemoglobina saturada de oxgeno. La capacidad
de unin de la hemoglobina por el oxgeno se conoce con el nombre de afinidad. Es un proceso
que bsicamente depende de:
~ La PO2 presente
~ La PCO2
~ La temperatura
~ El pH
As, el aumento de la PCO2 va a hacer que disminuya la afinidad de la hemoglobina por
el oxgeno, con lo cual la hemoglobina ceder el oxgeno ms fcilmente a los tejidos. Sin
embargo la disminucin de la PCO2 hace que aumente la afinidad de la hemoglobina por el
oxgeno y esta no ceder el oxgeno fcilmente a los tejidos.
Los valores normales de PO2 en sangre son ms o menos de 97 mmHg. Se considera
tolerable clnicamente una PO2 mayor de 80 mmHg. Si es menor estamos ante una situacin de
hipoxemia.

 Excepciones:
~ Los neonatos (valores entre 40-70 mmHg)
~ Personas > de 60 aos (disminuye con la edad alrededor de 1 mmHg al ao)
Alteraciones:
~ PO2 aumentado (hiperoxia): se produce por respirar aire con una concentracin de
oxgeno superior al 21%. Es algo muy frecuente en tratamiento con oxigenoterapia.
~ PO2 disminuido (hipoxemia): las causas pueden ser la disminucin del oxgeno
respirado (altura, agotamiento, consumo de oxgeno presente,...); una hipoventilacin grave
(asma, depresin neurolgica,...); enfermedad pulmonar (neumona, enfermedades pleurales con
derrames,...); alteracin cardiovascular (edema agudo del pulmn, trombo-embolismo
pulmonar,...).
B- Dixido de carbono: es un producto del metabolismo celular tambin conocido como
anhdrido carbnico. La mayor parte difunde de los tejidos a la sangre penetrando en los
hemates quedando una pequea cantidad disuelta en el plasma. Alrededor de un 65% se
transporta en la sangre en forma de bicarbonato. El dixido de carbono puede unirse a protenas,
en concreto a la hemoglobina (HbCO2). La cantidad de dixido de carbono total en el organismo
es un indicador de la capacidad de ventilacin pulmonar.
Los valores normales de PCO2 son entre 38-42 mmHg (no varan con al edad).
Alteraciones:
~ La PCO2 aumentada: sus posibles causas son: insuficiencia respiratoria crnica
(enfisema, bronquitis,..); embolia pulmonar (en este caso existe un espacio pulmonar
afuncional); hipoventilacin (neumona, depresin respiratoria neurolgica,...)
~ La PCO2 disminuida: su posibles causas son: hiperventilacin (espontnea por lesin
neurolgica); tratamiento con ciertos frmacos como las tetraciclinas.
FUNCIONALIDAD RESPIRATORIA. PRUEBAS DE VALORACIN.
La funcin pulmonar global, para ser efectiva, debe asegurar, una correcta respiracin
externa. Para conseguirlo 3 son los aspectos que debe desarrollar de forma ptima:
Ventilacin: intercambio de aire entre la atmsfera y los alvolos.
Difusin: intercambio de gases a travs d al membrana de los alvolos pulmonares.
Perfusin: paso de la sangre a travs de los vaso pulmonares.
Cuando alguna o varios de estas funciones se encuentran alteradas puede presentarse una
deficiencia de oxgeno (hipoxia) a nivel arterial. En este caso puede hablarse de al existencia de
una insuficiencia respiratoria: se define como el fracaso de al funcin respiratoria, es decir, la
oxigenacin y liberacin del dixido de carbono a la sangre. Se manifiesta con una disminucin
de la PO2 y un aumento de la PCO2 (hipercapnia). La insuficiencia respiratoria puede ser de 2
tipos:
~ Total: cursa con hipoxemia e hipercapnia.
~ Parcial: solo se presenta hipoxemia.
Este fracaso de al funcin respiratorio puede ser debido a:
1- Alteraciones en la perfusin: son alteraciones a nivel de la circulacin sangunea.
2- Alteraciones en la difusin: son alteraciones en la membrana alveolo-capilar.
3- Alteraciones en la ventilacin. Estas pueden ser:
A- Obstructivas: son debidas a un defecto en la ventilacin lo que hace que la persona
afectada deba hacer un gran esfuerzo par producir un flujo de aire, tanto al inspirar como al
espirar. Puede ser debida a alteraciones de las vas perifricas (bronquitis,, asma,...); alteraciones
del parnquima pulmonar (enfisema); de las vas superiores (cuerpos extraos, edema,
tumores,...)

B- Restrictivas: debidas a una limitacin en la capacidad de expansin torcica y

reduccin del campo respiratorio. Estos pacientes presentan una reduccin real del volumen de
aire inspirado por sus pulmones. Pueden ser debidas : problemas del pulmn (edema); de la
pleura (neuro hemotrax); neoplasias. Extratorcicos (obesidad, ascitis, embarazo).
C- Mixtas: la persona sufre obstruccin ms restriccin combinados.
A- Pruebas de valoracin: las pruebas que evalan la funcionalidad respiratoria tiene como
objetivos fundamentales:
Valorar la presencia de cualquier alteracin en el aparato respiratorio que impide un
adecuado intercambio gaseoso.
Determinar la causa que ha provocado dicha alteracin
Concretar el grado de la misma.
Cuando otro tipo de pruebas (fsicas, radiogrficas,...) todava dan resultados normales,
las pruebas de valoracin pulmonar pueden poner en evidencias alteraciones diversas:
A nivel de las vas areas
En los alvolos pulmonares
En la circulacin pulmonar
Una primera clasificacin de estas pruebas sera aquellas que las agrupa en 3 grandes
bloques:
En funcin de que valores la ventilacin de las vas areas.
La difusin de los alvolos
La perfusin a nivel de la circulacin pulmonar.
Pruebas funcionales respiratorias: son pruebas especficas que permiten estudiar con
precisin la funcionalidad respiratoria. Permiten explorar los aspecto ms importantes de la
respiracin: ventilacin, perfusin y difusin.
Pruebas que valoren la ventilacin: en general estas pruebas estudian volmenes y
capacidades respiratorias, valoracin de las resistencias y de las determinacin bronco-dinmicas
Pruebas que valoran la perfusin: cateterizacin de la arteria pulmonar o
angioneumografa.
Pruebas que valoran la difusin: son muy complejas y se usan poco.
GASOMETRA ARTERIAL: se usa mucho en la actualidad. Permite valorar en sangre
arterial:
~ La consecuencias orgnicas de un a insuficiencia respiratoria (hipoxia)
~ Tipo de trastorno que acompaa a la hipoxia (hiper o hipocapnia)
~ El grado de dicho trastorno
~ La repercusin del trastorno en el equilibrio cido-bsico.
Nos permite averiguar la PO2 (80-110 mmHg) y el porcentaje de saturacin de la
hemoglobina por el oxgeno (lo normal es de un 94-98%). Tambin podemos saber la PCO2 (3842 mmHg) y la cantidad (total de CO2 en plasma. As los datos obtenidos en una gasometra
arterial permiten establecer el diagnstico diferencial entre:
~ Insuficiencia respiratoria por hipoventilacin (hipoxia + hipercapnia)
~ Insuficiencia respiratoria no ventilatoria (hipoxia + hipocapnia)
En concreto todas estas pruebas pueden ser utilizadas para:
~ Deteccin precoz de ciertas enfermedades
~ Diagnstico diferencial de pacientes con disnea.
~ Valoracin de la capacidad de tolerancia a los anestsicos (antes de una intervencin
quirrgica)
~ Evolucin de una enfermedad en pacientes que ya padecen aguan alteracin broncopulmonar.

~ Control peridico de personas que trabajan en ambientes laborales con riesgos

laborales.
~ Estudio epidemiolgico: para determinar la aparicin de algunas enfermedades
pulmonares.
Para una correcta interpretacin del resultado obtenido es importante conocer algunos
datos de la personas investigada ya que dichas pruebas varan en funcin de aspectos como: la
edad, sexo, peso corporal y altura.
B- Espirmetro: es un dispositivo de medida diseado par poder valorar la eficacia de los
diversos factores que participan en el movimiento de los pulmones y de las paredes torcicas.
Dispone de un sistema de lectura que mide las cantidades de gas respiradas ofreciendo el
resultado mediante un registro grfico: espirograma. Un programa informtico permite contrastar
los datos obtenidos en cada paciente en cuanto a capacidad pulmonar, volumen pulmonar y
velocidad de flujo pulmonar con sus propias caractersticas de edad, sexo, peso y altura. El
resultado proporciona informacin cuantitativa acerca de:
El grado de obstruccin del paso de flujo del aire.
La restriccin en la cantidad de aire que puede ser inspirado.
Los espirmetros utilizados pueden ser mecnicos o electrnicos.
DIFUSIN DE LOS GASES RESPIRATORIOS
Los gases presentes en el aire (fundamentalmente oxgeno y dixido de carbono) que, con
la inspiracin llegan al espacio alveolar, difunden a travs de al membrana alveolo-capilar (son 2
sencillas capas celulares separadas por una fina capa de lquidos intersticiales) hacia la sangre de
los capilares pulmonares.
Dicha difusin es un proceso pasivo que se realiza a favor de un gradiente de
concentracin o de presin parcial de cada uno de los gases que difunden de forma que:
El oxgeno difunde del alveolo-capilar donde la PO2 es muy alta hacia el interior del
capilar donde el oxgeno es muy baja.
El dixido de carbono difunde desde el capilar donde el PCO2 es muy elevada en
direccin al alveolo donde la PCO2 es baja.
El proceso de difusin pasiva finaliza cuando la PCO2 y la PO2 a ambos lados de al
membrana alveolo-capilar se iguala. El intercambio gaseoso entre la sangre y alvolos es tan
rpido que en condiciones es de reposo la sangre solo est en los pulmones alrededor de 075
segundos y unos 03 segundos si se est realizando algn ejercicio fsico.
La cantidad que difunde de cada uno de los gases respiratorios depende de:
~ La superficie disponible para el intercambio
~ El espesor de la membrana alveolo-capilar
~ La diferencia de presin parcial a ambos lados de la membrana para cada uno de los
gases.
Aunque debido a la estructura pulmonar, la superficie disponible para el intercambio es
muy grande (entre 50-100 m2) algunas enfermedades pueden reducir dicha superficie
considerablemente. Por su parte la diferencia de presin parcial vara en funcin de:
La propia ventilacin alveolar
La cantidad de oxgeno presente en el aire inspirado
Si el gradiente de presin a ambos lados de al membrana alveolo-capilar disminuye, la
velocidad de difusin d los gases ser menor.

TRANSPORTE GASEOSO EN EL ORGANISMO

4 son los aspectos bsicos que determinar el transporte gaseoso o en el organismo:
~ El flujo sanguneo a nivel pulmonar y tisular
~ La concentracin de hemoglobina en la sangre y la afinidad de estas por el CO2
~ La ventilacin pulmonar
~ La demanda tisular de oxgeno
en una persona en reposo, cada minuto 250 ml de oxgeno. Son transportado desde los
pulmones a los tejidos y aproximadamente la misma cantidad de dixido de carbono se dirige
desde los tejidos a los pulmones par ser eliminados.
De todo el oxgeno presente en la sangre la mayor parte (ms o menos 96%) se transporta
unido a la hemoglobina. El resto circula disuelto en el plasma.
La mayor parte del dixido de carbono presente es transportada en forma de bicarbonato,
una segunda parte lo hace convirtindose con las protenas y una pequea parte va disuelto en el
plasma.
Una sola molcula de hemoglobina puede unirse de forma reversible a un mximo de 4
molculas de oxgeno, en funcin de la reaccin.

La unin de la hemoglobina con el oxgeno es de tipo cooperativo, es decir, la unin de la

primera molcula de este gas provoca un cambio estructural de la molcula de hemoglobina
(aumenta la afinidad), que favorece la posterior unin de una segunda y as hasta la saturacin
total (100% de afinidad). La afinidad de la hemoglobina para unirse al oxgeno es un proceso que
depende entre otros factores de al PO2 de la sangre.
Para la PO2 bajas (por ejemplo 20 mmHg) la afinidad de la hemoglobina es pequea
(25%) y por tanto, nicamente est unida a una molcula de oxgeno. Cuando la presin parcial
de oxgeno sube hasta 40 mmHg, 3 molculas de oxgeno estn unidas a la de hemoglobina
(Afinidad de un 75%). En le alveolo pulmonar la PO2 ya alcanza los 100 mmHg y la afinidad de
la hemoglobina por el oxgeno es del 100%.
A- Transporte de oxgeno: cuando el oxgeno presente en el alveolo difunde hacia la sangre del
capilar-alveolar:
La PO2 en ella es de 100 mmHg
La afinidad de al hemoglobina es mxima
La hemoglobina se encuentra unida a 4 molculas de oxgeno.
Esta sangre procedente de los pulmones llega a los capilares tisulares. En las clulas de
los tejidos, debido sobretodo al continuo consumos de este gas para llevar a cabo los distintos
procesos metablicos, la presin de oxgeno es muy baja (40 mmHg).
Este gradiente de presiones permite la difusin pasiva del oxgeno que desde los capilares
tisulares, atraviesa primero el espacio intersticial llegando finalmente a las clulas. Como
consecuencia de esta difusin la PO2 de los capilares tisulares va disminuyendo paulatinamente,
hasta alcanzar los 40 mmHg.
A esta PO2 la hemoglobina (cuya afinidad por el oxgeno disminuye hasta el 75%) cede
el oxgeno que sale del eritrocito al plasma. Del plasma pasa a los tejidos donde se consume en
las distintas reacciones metablicas.
Cuando la sangre llega a los pulmones una vez cedido el oxgeno a los tejidos, la presin
parcial es de 40 mmHg. En los capilares pulmonares tiene lugar un proceso inverso al descrito
para los tejidos. En ello la PO2 es de 100 mmHg y por tanto, el oxgeno difunde desde los
alvolos hacia los capilares, hasta que al presin de oxgeno en el capilar alcance los 100 mmHg.

B- Transporte de dixido de carbono: a nivel tisular el dixido de carbono se origina de forma

continua como consecuencia del metabolismo celular. All su PCO2 es de alrededor de 45
mmHg, por tanto, se favorece la difusin de CO2 desde los tejidos hacia los capilares
distribuidos por la economa, llegando hasta el interior de los glbulos rojos.
En ellos, por accin de la anhidrasa carbnica, el dixido de carbono se transforma en
cido carbnico el cual se ioniza rpidamente originando bicarbonato ms hidrgeno segn la
reaccin siguientes:
Como consecuencia del aumento de hidrogeniones el pH sanguneo disminuye. Esta
disminucin no es excesiva ya que la hemoglobina (en su funcin de tampn fisiolgico) se une
a los hidrgenos, neutralizndolos. La hemoglobina posee una menor afinidad por el oxgeno tras
unirse a los protones y este es cedido ms fcilmente a los tejidos, segn la reaccin reversible:
Cuando la sangre llega a los pulmones, el dixido de carbono abandona por difusin los
capilares pulmonares, llega a los alvolos y all las reacciones anteriores se llevan a cabo en
sentido contrario.

La eliminacin de dixido de carbono de al sangre y su oxigenacin convierten la sangre

venosa en arterial, fin ltimo del proceso respiratorio.
DETERMINACIN DE GASES SANGUNEOS
La medida de los gases presentes en la sangre se lleva a cabo mediante una tcnica
llamada gasometra. Normalmente se mira la determinacin de oxgeno y dixido de carbono en
sangre arterial. Se puede hacer:
Basal (en reposo)
De esfuerzo (tras realizar un esfuerzo)
Respirando mezclas de ases ricas en oxgeno.
Observaciones:
~ La extraccin se har en la arteria radial, cubital humeral y previamente a la
extraccin el paciente no debe fumar, utilizar broncodilatadores ni recibir oxigenoterapia.
~ No se puede formar burbujas durante la extraccin (no agitar ni poner la jeringa
vertical)
~ Mantener la muestra hermtica y procesarla inmediatamente (Sino se puede hay que
conservarla sumergida en hielo).
~ Las medidas de presin de los distintos gases se pueden expresar:
mmHg (unidades Torr)
Kilopascales (Kpa sistema internacional de unidades)
La eleccin de la muestra a la hora de realizar una gasometra es muy importante, ya que,
el contenido en gases, vara significativamente en funcin del tipo de muestra elegida (venosa,
arterial capilar). Sobretodo la PO2 va a ser muy distinta en una muestra venosa y en una
arterial:
En la venosa = 40 mmHg
En la arterial = 80-100 mmHg

Tambin la PCO2 es bastante menor en la sangre arterial:

En la venosa = 46 mmHg
En la arterial = 35-45 mmHg
Generalmente la eleccin es sangre arterial debido a que su composicin es ms uniforme
y no est sujeta a variaciones en funcin de al actividad metablica del lugar que es extrado.
A la hora de valorar una gasometra sangunea, normalmente arterial hay que tener en
cuenta aspectos como estos:
La determinacin de PO2 proporciona informacin sobre el estado de oxigenacin
La PCO2 sobre el estado de ventilacin
El valor de pH indica el grado de compensacin para contrarrestar un aumento de la
PCO2.
La cantidad de bicarbonato informa sorbe el grado de compensacin renal, para
contrarrestar un aumento de la retencin de carbnico.
La medida de la PCO2 es una determinacin de gran utilidad a la hora de valorar el
funcionamiento y la efectividad del sistema de control respiratorio (Es el que la mantiene entre
32-45 mmHg). La presencia de una disminucin o aumento de la PCO2 indica que este sistema
est fallando. El aumento de la PCO2 (hipercapnia) es consecuencia de cualquier alteracin
respiratoria que impida que halla una ventilacin suficiente para eliminar el dixido de carbono
producido en los tejidos. Entre sus causas ms frecuentes estn:
~ Defecto en el sistema de control respiratorio.
~ Deficiencia de el aparato neuromuscular de la respiracin
~ Aumenta en el esfuerzo de la respiracin debido a una distancia de las vas areas.
La disminucin de la PCO2 (hipercapnia) suele ser consecuencia de procesos asociados a
un aumento de la ventilacin en reposo, por encima de los valores normales.

TEMA 23
ESTUDIO DEL LQUIDO SINOVIAL
FORMACIN Y LOCALIZACIN
Prcticamente todas las articulaciones de las extremidades son de tipo sinovial
diartrodial. Este tipo de articulaciones posee una cavidad articular y por tanto es libremente
mvil. En las hidartrosis el cartlago articular que recubre el extremo de los huesos y la propia
articulacin estn rodeados por una cpsula articular y se mantienen en contacto gracias a los
ligamentos. La capa externa de la cpsula articular o extracto fibrosos est formada por tejidos
fibrosos densos. La capa interna, sinovial, es una condensacin de tejido conectivo y forma un
saco que encierra el espacio sinovial. Tambin encierra los tendones que pasan a travs de la
articulaciones y los bordes libres de las estructuras intra-articulares como ligamentos y meniscos.
En condiciones normales el espacio sinovial tiene una pequea cantidad de fluido sumamente
viscoso llamado lquido sinovial porque desempean las siguientes funciones.
~ Lubricar las superficies de rozamiento
~ Aportar nutrientes al cartlago articular.
El lquido sinovial deriva del plasma sanguneo que se filtra a travs de los capilares
sinoviales difundiendo hasta la cavidad articular a la que se aade algunas sustancias sintetizadas
en la membrana sinovial como protenas y cido hialurnicos, macromolculas complejas que le
da viscosidad.
INTERS CLNICO
La inflamacin y otros procesos patolgicos que afectan a la membrana sinovial altera la
composicin, contenido celular y caractersticas fsicas de lquido sinovial. El estudio de este
lquido tiene un lugar importante en el diagnstico de las enfermedades articulares (artritis y
artrosis), junto con los sntomas y signos articulares, las exploraciones radiolgicos y otras
pruebas de laboratorio (qumicos, histolgicas y serolgicas)
Las enfermedades articulares cursan generalmente con dolor articular, tumefaccin
(inflamacin, rojo, caliente), aumento del tamao de al articulacin, hipertermia (enrojecimiento
y limitacin de los movimientos articulares). El aumento de tamao de la articulacin es debido
al aumento de lquido sinovial el engrosamiento de la membrana sinovial. Las artritis
(inflamacin de las articulaciones) tienen diversos rganos y se clasifican en infecciosas,
metablicas (gota y pseudogota), mecnicas (traumatismos, tumores) y relacionadas con otras
enfermedades (alergias), idiopatas (reumatoide) y del lupus eritematoso sistmico (LES).
El LES es una enfermedad general del colgeno, aguda o subaguda, ms frecuente entre
mujeres entre 15-40 aos. Se caracteriza por:
Placas eritematosas violceas y escamosas (nariz y manos)
Ataque profundo del estado general
Fiebre regular y prolongado
Esplenoadenomegalia (aumento del bazo y ganglios)
Abstemia
Lesiones de las sinoviales
Signos de glomrulo-nefritis aguda
Anemias, ...
La artrosis es una enfermedad degenerativa articular.
El anlisis de lquido sinovial permite realizar un diagnstico preciso en la mayora de las
artritis infecciosas agudas y en las artropatas inducidas por cristales.
La toma de muestras se realiza por puncin articular artrocentesis con jeringa
heparinizada y estando el paciente en ayunas, si se va a determinar la glucosa. Se extraen entre

2-5 ml de lquido sinovial de la articulacin. La articulacin de la rodilla es la ms comnmente

utilizada para la puncin sinovial.
El anlisis de lquidos sinoviales comprende:
Caractersticas fsicas
Bioqumica
Citologa
Cristales
Bacteriologa
Inmunologa
EXAMEN FSICO
A- Aspecto: el lquido sinovial normalmente es transparente, de color amarillo plidos,
casi incoloro. La existencia de turbidez indica por lo general existencia de leucocitos, aunque
tambin puede deberse a un proceso de tipo inflamatorio u otros componentes como cristales
fibrina que deben confirmarse con el examen microscpico posterior. La turbidez puede
clasificarse de acuerdo a una escala que va de 1-4 cruces. Tambin el color puede verse altero por
una serie de circunstancia patolgicas. CUADRO
Ditesis: tendencia de tipo innato de una persona de sangrar con facilidad.
B- Viscosidad y filancia: el lquido sinovial normal se define como muy viscoso,
pegajoso al tacto. En los estados inflamatorios debido a la destruccin del cido hialurnico por
la enzima hialuronidasa de los leucocitos, se origina un descenso de al viscosidad.
La apreciacin de la viscosidad se hace, generalmente, dejando gotear el lquido desde la
jeringa utiliza en la extraccin, desprovista de al aguja a un tubo de ensayo y observando si cae
gota a gota, en cuyo caso se trata de una muestra de viscosidad normal. Si el lquido sinovial
gotea como el agua la viscosidad est disminuida.
La filancia es un estudio complementario a la viscosidad para su observacin se introduce
un asa de platino en al muestra y se extrae estirando suavemente con lo que debe de formarse un
filamento de 4-6 cm. Se considera que el grado de filancia est disminuida cuando el filamento
formado apenas llega a 3 cm CUADRO
C- Prueba del cogulo de mucina: al echar una gota de lquido sinovial en un tubo con
cido actico diluido que se observa un cogulo precipitado de mucina, firme en condiciones
normales debido a l precipitacin del cido hialurnico. Este fenmeno est disminuido en las
artrosis, gota, e infecciones articulares (si forma una solucin turbia y filamentosa).
EXAMEN CITOLGICO
El examen de la celularidad de lquido sinovial se ha mostrado significativamente til en
el diagnstico diferencial. Consiste en la observacin microscpica de la muestra con
microscopio ptico ordinario con microscopa de contraste de fases. Se realizan 2 tipo de
exmenes: recuento celular total y estudio de la morfologa celular o recuento diferencial.
A- Recuento celular total: consiste en el clculo del nmero de leucocitos por
microlitro de lquido sinovial. Un lquido normal contiene de 10-200 celular/ l que son
leucocitos casi en su totalidad, siendo patolgica una cifra muy superior a 200 leucocitos/ l.
Tcnica: el recuento manual se realiza en una cmara cuenta glbulos, contando el
nmero de leucocitos en al zona de recuento normal de los mismos. Comprende los siguientes
pasos:
~ Homogeneizacin de la muestra
~ Dilucin de la muestra, si es necesario. El lquido sinovial se diluir dependiendo de su
aspecto. Si es muy viscoso o purulento se realizar necesariamente una dilucin 1/20, 1/50
1/100 antes del recuento. Como lquido diluyente puede utilizarse suero fisiolgico con 01% de

azul de metileno que dar una tincin azulada a los leucocitos, permitiendo su diferenciacin de
los hemates.
La homogeneizacin de la muestra diluida debe realizarse concienzudamente y en el caso
de lquido muy viscoso se deja reposar durante al menos 20 minutos antes del llenado de las
cmaras.
~ Llenado de la cmara de recuento
~ Observacin microscpico: con el objetivo de 10X se comprueba que la distribucin
celular sea homognea, despus con el mismo objetivo o con el 40X se cuenta las clulas en los
4 cuadrados grandes de las esquinas de 1 mm X 1 mm.
~ Clculo del nmero de leucocitos por mm 3. El resultado del recuento microscpico
habr que hacerle correcciones:
Nmero de clulas (leucocitos) contados = N.C.
Volumen de cada cuadrado contado = 1 mm X 1 mm X 01 mm = 01 mm3
Volumen total contado = 01 mm3 X 4 = 04 mm3
Nmero de leucocitos / mm3 = N.C. X 25 X inverso de al dilucin realizada (X 20, X
50, X 100) en el caso de que se halla realizado.
Si el lquido es hemorrgico ser necesario ligar los hemates antes del recuento
leucocitario, utilizando una solucin salina hipotnica (al 03%) como diluyente. Hay que tener
en cuenta por los hemates hay que valorarse siempre salvo que se trata de una puncin
traumtica. La cuantificacin de hemates se hace de forma aproximadamente, indicando
ausencia presencia como: escasos, abundantes muy abundantes. CUADRO.
B- Recuento diferencial: la frmula de lquido sinovial es diferente de la sangunea:
Polinucleares: de un 7-10% aceptndose un valor hasta un 25% con ausencia de
eosinfilos y basfilos
Mononucleares: un 70% del cual de un 15-35% son linfocitos y de un 35-55%
monocitos
Clulas sinoviales: de un 3-5%
Clulas plasmticas: 10%
Otras clulas: hasta un 7%
Tcnica:
~ Preparacin de la muestra: puede realizarse una tincin directamente del lquido
sinovial o bien del sedimento obtenido por centrifugacin suave de la muestra durante 10
minutos.
~ Elaboracin del frotis: se prepara varias extensiones finas obtenidas recientemente y se
deja secar el tiempo necesario protegidas por papel de filtro. Si va a reservarse alguna
preparacin puede hacerse envolvindola en papel de aluminio y congelarla a menos 20C.
~ Tincin: puede emplearse la de Wright, may-grunwald-giemsa y la panptica rpida. La
panptica rpida es un mtodo de tincin por inmersin que emplea fijador y 2 colorantes:
solucin n 1 (es una solucin alcohlica de triarilmetano y este es el fijador), solucin n 2 (es
una solucin de santeo), solucin n 3 (solucin de tiacina). Dibujo.
~ Estudio de la morfologa celular: se realiza la observacin microscpica detallada del
frotis empleando grandes aumentos (objetivo de inmersin), contando las clulas hemticas y
tisulares observadas y obteniendo los porcentajes correspondientes:
Interpretacin clnica:
~ Normalmente se encuentran menos de un 25% de polinucleares en el lquido sinovial,
aumenta su nmero en la infeccin o inflamaciones articulares. Pueden aparecer algunos tipos
especiales de clulas:
* Clulas AR: es frecuente observar inclusiones citoplasmticas abundantes y
oscuras que contienen Ig G e Ig M (factor reumatoide) en los leucocitos polinucleares de

pacientes con artritis reumatoides, aunque no son especficos de esta patologa. Aparecen
tambin en la gota y artritis spticas.
* Clulas LE: en la artritis del lupus eritematoso sistmico pueden encontrarse
clulas LE (son neutrfilos cuyas vacuolas contienen material nuclear) en el lquido
sinovial, aun cuando la prueba sangunea da resultados negativos.
* Clulas de Reiter: en el sndrome de reiter (comienza con una uretritis abactrica
aguda o subaguda, seguida de una conjuntivitis purulenta bilateral, seguida de poliartritis
que puede persistir durante varios meses, ataca a varones jvenes y parece ser de origen
venreo, atribuyndose a una espiroqueta (concretamente la spirochaeta forans)), entre
otras patologas particulares, pueden encontrarse monocitos con polinucleares
fagocitados.
INVESTIGACIN DE CRISTALES
Se han descrito diversos procesos producidos por la presencia de microcristales en la
cavidad articular, como la gota, relacionada con la presencia de los cristales de urato y la
pseudogota condrocalcinosis, caracterizado por el hallazgo de microcristales de pirofosfato
clcico dihidratado. En menor proporcin se encuentran cristales de hidroxiapatita en algunas
artritis y excepcionalmente cristales de colesterol en casos de artritis reumatoide. La observacin
de estos cristales tienen un gran valor diagnstico. Para la observacin de cristales, el lquido
sinovial debe de haberse recogido sin anticoagulantes con heparina ya que el EDTA y el
oxalato clcico cristalizan y pueden confundirse con los cristales a investigar.
Tcnica: el examen se realiza con microscopa ptica convencional y de luz polarizada.
En este segundo caso las formas cristalinas adquieren facetas diferentes y aspecto ms brillante,
observndose adems, la presencia de bidifrigencia. CUADRO.
Se prepara la muestra depositando la gota en un portaobjeto perfectamente limpio. Se
tapa con el cubreobjeto, haciendo ligera presin. Se absorbe el lquido sobrante con papel de
filtro. Se sella con barniz el borde del cubreobjeto. Este sellado debe hacerse para evitar la
desecacin ya que se va a realizar una observacin minuciosas de la muestra en bsqueda de
microcristales.
EXAMEN QUMICO
La cantidad total de protena en el lquido sinovial oscila entre los 15-30 gr/l, siendo la
albmina la ms abundante (de un 55-70%). Las protenas aumenta en los procesos articulares en
los que se encuentran alterado la membrana sinovial, como la artritis reumatoide, la gota, la
artritis sptica y la artritis tuberculosa.
La glucosa tiene un nivel igual al del plasma sanguneo y ligeramente inferior. El
descenso de la concentracin de glucosa en el lquido sinovial se debe en el cambio del
metabolismo de sus clulas de aerobios a anaerobios. Las artritis inflamatorias la diferencia entre
la glucosa sricas y al del lquido sinovial puede exceder los 25-50 mg/dl.
Una concentracin de glucosa en lquido sinovial inferior a la mitad de las
simultneamente en suero, es muy sugestiva de infeccin bacteriana. Esto es cierto siempre que
no se demore el anlisis.
La determinacin de lactato se realiza como indicador de la inflamacin. Un nivel
superior a 30 mg/dl constituye un dato indicativo de inflamacin.
En la artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistmico, los niveles de complemento
(sustancias o complejo de sustancias inespecficos que se encuentra en el suero de casi todos los
animales; es capaz de lisiar bacterias o clulas que previamente han sido hechas sensibles a sus
accin por ciertos anticuerpos; tienen la funcin de potenciar la accin defensiva y desplegada
por los anticuerpos en el sistema inmunolgico; est constituido por fracciones de naturaleza

proteica) en el lquido sinovial estn reducidos en comparacin con los de muestra de suero
simultneas (normalmente por debajo del 30%).
INFORME DE UN ANLISIS DE UN LQUIDO SINOVIAL
Ver fotocopia
DIAGNSTICO DIFERENCIAL DEL LQUIDO SINOVIAL
Los lquido sinoviales pueden clasificarse en 4 categoras de fisiopatologas
diferenciados, en ocasiones bastan con el examen macroscpico global inmediato par realizar
diagnstico diferencial. CUADRO.
Los lquidos sinoviales no inflamatorios o mecnicos suelen estar producidos por artrosis
o artropatas post-traumticas. En estas situaciones el engrosamiento sinovial suele ser mnimo a
la exploracin fsico, pero pueden producirse derrames de entre pocos mililitros y ms de 100
ml. El lquido es transparente.
Los lquidos inflamatorios son macroscpicamente opacos a causa de los detritus
celulares que contiene; aunque se puede recibir luz a travs de una muestra, casi nunca se puede
leer con claridad la letra impresa. El recuento leucocitario vara entre 5.000 y 75.000 en mm 3 y la
mayora de las clulas son leucocitos polimorfonucleares. La viscosidad est reducida a causa de
la degradacin de mucopolisacridos por enzimas liposmicas de los leucocitos
polimorfonucleares.
Los lquidos inflamatorios no inducidos por cristales suelen aparecer en 1 de 2 grandes
categora de enfermedades:
Artritis reumatoides
Espondilitis anquilopoytica: (es una inflamacin de los discos, ligamentos
articulaciones vertebrales en general; la anquilopoytica es una afeccin de la columna vertebral
que conduce fatalmente a la anquilosis ms o menos extensa de las vrtebras, convirtiendo la
columna en un tallo rgido. El examen de lquido sinovial por si solo raras veces sirve par
distinguir estos 2 tipos de alteraciones.
Los derrames sinoviales spticos se producen frecuentemente por el estafilococo y el
gonococo que llegan a las articulaciones por vas hematgena. Tienen un aspecto macroscpicos
purulento y espeso. El recuento leucocitario est considerablemente elevado con claro
predominio de leucocitos polimorfonucleares, a excepcin de la artritis tuberculosa en la que el
recuento total puede ser ms baja y la proporcin de clulas mononucleares mayor el nivel de
glucosa est muy reducido (10 mg/ dl menos) ya que es utilizado por las bacterias y los
leucocitos polimorfonucleares.
En un porcentaje demasiado alto de los lquidos sinoviales infecciosos no es posible
identificar en un cultivo al agente causal porque los escasos microorganismo de la muestra son
muy exigentes en cuanto a sus requerimientos de cultivo; en especial el gonococo.
Las acumulaciones de lquido sinovial de lquido hemorrgico pueden deberse a
trastornos sistmicos o a problemas articulares localizados. La hemofilia, otras ditesis
hemorrgicas o un exceso de anticoagulacin, son causas de hemoartrosis, mientras que los
traumatismos, la sinovitis y la artropata neuropata (es una osteoartritis asociada con hinchazn,
destruccin sea y trastornos trficos) son situaciones ms localizadas responsables de lquidos
sinoviales sanguinolentos.
Es importante destacar que en la clasificacin de los lquidos sinoviales hay
superposiciones; por tanto es necesario que las decisiones diagnsticas se apoya en todos los
datos disponibles, entre ellos el contexto, la historia, la exploracin y los restantes datos
pertinentes radiogrficos o de laboratorio. An as, ciertos hallazgos del examen del lquido
sinovial, como la identificacin positiva de microorganismos o los cristales son esenciales para
llegar a un diagnstico, exacto y para desarrollar un plan teraputico adecuado.

TEMA 24
ENZIMOLOGA DIAGNSTICA
FISIOLOGA Y CINTICA ENZIMTICA
Las enzimas y biocatalizadores son protenas biolgicas especializadas en la catlisis de
reacciones orgnicas (catlisis: accin fsico qumica por la cual ciertos cuerpos, llamados
catalizadores determinan modificaciones en el medio en el que se encuentran, sin ser ellos
mismos qumicamente modificados; catalizador: sustancias que producen catlisis, es decir,
que acelera o retraso un proceso qumico sin ser consumidos durante la reaccin). En la
determinacin de su actividad es sumamente importante el procesado adecuado de las muestras
que garantice la conservacin de la estructura proteica, fcilmente alterable, por variaciones de
temperatura, pH muy cidos o muy alcalinos, detergentes, microorganismos de los
recipientes,... que degradan la protena. La conservacin de los sueros durante varios das a
temperatura ambiente provoca la Inactivacin de la mayora de las enzimas. En algunos casos,
la reduccin de esta actividad es reversible (Inactivacin reversible) pero la mayor parte de los
casos de las veces el tratamiento adecuado de al muestra supone la prdida irreversible de su
actividad.
1- Composicin: las enzimas pueden contener otras fracciones que no tengan carcter
proteico. Estos componentes tienen un paso molecular menor ( menos 1.000) que las enzimas
(peso molecular oscila entre 10.000-2.000.000) y se denomina cofactores. Se diferencias los
siguientes grupos:
A- Iones metlicos: han de encontrarse en un determinado estado de oxidacin y no se
modifican durante la catlisis. Su funcin puede ser la de ayudar a captar el sustrato en su
centro activo, mantener la estructura espacial de la enzima tener un papel activo al realizar la
funcin cataltica. Se les conocen como activadores enzimticos
B- Molculas orgnicas: si despus de la reaccin permanecen enrgicamente unidas a
la enzima se denominan grupo protticos (ejemplo: piridoxal fosfato, que participa en al
reaccin de transaminacin de la GOT y GPT, estando sobre todo unida a la GPT). Si se unen
al enzima slo durante la reaccin cataltica se denominan coenzimas (ejemplo: ADP y ATP
que participan en las reacciones de quinasas).
A las enzimas que precisa del cofactor se denominan holoenzimas y estn formadas por el
apoenzima (es la estructura proteica) y el cofactor (que es la estructura no proteica).
2- Mecanismo de accin enzimtica: una reaccin tiene lugar porque los reactivos llegados
un momento pueden llegar a acumular la energa suficiente como para poder llegar a un estado
denominado estado de transicin, estado activado y altamente energtico e inestable.
En este estado de elevado energa es muy probable que se rompan algunos enlaces entre
ambos y otros se formen, para dar lugar a los productos de la reaccin. La energa que alcanzan
se denomina energa de activacin. Las enzimas se unen con los reactivos de manera de
activacin. Las enzimas se unen con los reactivos de manera transitoria y alcanzar un estado de
transicin de menor energa y por tanto de menor estabilidad que le corresponde a al reaccin
no catalizada.
La funcin de los biocatalizadores orgnicos, las enzimas, es la de acelerar la velocidad
de las reacciones, al disminuir la energa de activacin y la obtencin por rpida de los
productos.

3- Formas en las que pueden aparecer las enzimas:

A- Isoenzimas isozimas: son formas mltiples de una determinacin enzimas y
catalizan la misma reaccin. Estas protenas solo tienen pequeas diferencias en cuanto a sus
propiedades fsico-qumicas, tamao, estructura, peso molecular, solubilidad,...
Ejemplo: LDH: (lactato deshidrogenasa) aparece en 5 formas isoenzimticas que
catalizan la reaccin reversible, lactato piruvato. Est formado por cadenas de 2 tipos: cadenas
H (Herat) y cadenas M (muscle). Las formas isoenzimticas son:
LD-5: M4
LD-4: M3H
LD-3: M2H2
LD-2: MH3
LD-1: H4
Otra isoenzimas bastantes comn en analtica es la CK (crestn quinasa) est formada
por: B (brain) y M (muscle).
Las 3 formas isoenzimticas son:
~ CK-BB: localizada fundamentalmente en el cerebro
~ CK-MB: miocardio
~ CK-MM: msculo esqueltico y cardiaco.
B- Complejos multienzimticos: son asociaciones de enzimas que catalizan reacciones
consecutivas y el producto de una reaccin es el sustrato de la siguiente. Si las enzimas no
formarn el complejo se perdera ms sustrato, pero, al sustituirlo, se establece un
microentorno de las enzimas con los reactivos y se optimiza la reaccin, ya que el producto se
libera en las inmediaciones del centro activo del enzima siguiente. Por ejemplo: piruvato
desoxigenada que catalizan el paso de piruvato a acetil coenzima A.
C- Pro-enzima: son formas precursoras inactivas de las enzimas. A este grupo
pertenece las enzimas proteolticas, que catalizan la hidrlisis de los enlaces peptdicos. Solo
alcanzan su capacidad de enzimas funcional en un momento determinado, y en el lugar que
realizan su accin cataltica. El peso de pro-enzima a enzimas supone lo ruptura de un enlace
peptdico.
4- Fenmeno cataltico:
A- Interaccin enzima-sustrato (E-S): las enzimas en su estructura tienen un lugar
concreto a travs del cual realizan su funcin. Esta localizacin recibe el nombre de centro
activo. El resto de la estructura tiene la funcin de proporcionar un entorno y condiciones
propicias para que la enzima acte.
El enzima se une al sustrato el centro activo y el enlace puede ser de diferentes formas:
puentes de hidrgeno, interacciones electrostticas. A veces el enlace enzima-sustrato es
covalente pero no es lo ms frecuente; ocurre por ejemplo en los hidrolasas.
B- Conformacin del centro activo (CA):
Hiptesis de llave-cerradura: se considera cierta rigidez en la estructura del centro
activo del enzima. El sustrato se une al centro activo porque su estructura es complementaria.
Hiptesis del acoplamiento inducido: la estructura espacial del centro activo no es
rgido y al unirse al sustrato, este induce un cambio en la estructura de la enzima para que
puedan acoplarse.
5- Especificidad enzimtica: es la capacidad que tienen las enzimas para actuar con un
determinacin tipo de sustrato. La especificidad puede ser:
Absoluta: slo acta con un sustrato
De reaccin: catalizan el mismo tipo de reaccin con diferentes sustratos que
presentan alguna caracterstica comn (por ejemplo que son grasas)
Estreo-especfica: slo actan sobre sustratos con determinada configuracin
espacial. Por ejemplo: con la M-amido-hidrolasa.

6- Factores que influyen en la actividad enzimtica:

A- Concentracin del sustrato: la velocidad de la reaccin que da lugar a la
desaparicin de los reactivos y a la aparicin de los productos, es mayor cuanto mayor sea la
concentracin del sustrato, pero slo hasta cierto punto en el que se alcanza la velocidad
mxima (Vmax). Aqu, aunque la concentracin de sustrato sea mayor no se supera esta
velocidad.

Si la cintica de la velocidad enzimtica sigue este desarrollo se dice que es una cintica
de Michaelis-Menten.
Si se representa grficamente la velocidad de reaccin durante el transcurso de la
misma frente ala concentracin de sustrato, se observa como al principio, la velocidad es
directamente proporcional a la concentracin de sustrato, siguiendo una cintica de primer
orden (punto 1). Cuando se alcanza la velocidad mxima ya no depende de la concentracin
del sustrato del sustrato puesto que no aumenta, siguiendo una cintica de orden cero que
equivale al punto nmero 2.
En las determinaciones analticas de actividad enzimticas se trabajo en la zona en la
que la actividad es independiente de la concentracin de sustrato, es decir, en la zona cintica
de orden cero (punto 2) y velocidad mximo, por lo que los reactivos comerciales se preparan
con excesos de sustrato.
B- pH: se trabaja en unas condiciones ptimas de pH para que la enzima presente su
mxima actividad; dado que las variaciones de pH pueden alterar la estructura proteico al
modificar la ionizacin de sus aminocidos. Por ello los reactivos suelen preparar para emplear
menos, con una solucin tampn que mantengan estas condiciones de pH en el momento de la
determinacin.
C- Temperatura: al aumentar la temperatura suele aumentar la actividad enzimtica
debido a que se favorece el contacto del enzima y sustrato, siempre y cuando no se supere una
temperatura en lo cual la estructura proteica se desnaturalice y disminuye desaparezcan esta
actividad. Las temperaturas seleccionadas suelen ser: temperatura ambiente (25-30C) y
temperatura corporal. Si se realiza a temperatura ambiente, se proporciona factores de
transformacin de la actividad a 37C que son las condiciones trmicas del organismo.
D- Presencia de inhibidores-activadores: la inhibicin de las enzimas ms determinadas
metabolitos o por la variacin de las condiciones ptimas de actuacin constituyen una
importante medida de la regulacin metablica para el organismo. Si un enzima est inhibido,
la reaccin transcurre como sino estuviese. Los reactivos tienen que alcanzan los estados de
transicin de elevado energa de la reaccin espontnea no catalizada.
Los activadores son sustancias que aumentan la velocidad de la reaccin al disminuir
an ms la energa de activacin. Suelen ser iones metablicos molculas de pequeo tamao

7- Nomenclatura: la international union biochemistral recomend en 1.964 una nomenclatura

para las enzimas basadas en la reaccin que catalizan. En 1.973 apareci una nueva edicin
ampliando esta nomenclatura done el nombre cientfico describe el tipo de reaccin
(deshidrogenasas, oxidasa, transferasa,...), el sustrato, el coenzima y el producto
(LLactato: piruvato NAD-deshidrogenasa). Adems de cada enzima se le da un nmero que
deriva de la nomenclatura, encabezado por las siglas EC (enzyme cominision), as la LDH se
designara como la EC 1.1.1.3. Para una descripcin ms exacta es necesario indicar la
procedencia del enzima, especie, tejido, localizacin en el interior exterior de la clula
(debido a que existen isoenzimas con el mismo nombre y nmero EC pero se diferencian por
su localizacin y propiedades fsicas y qumicas). Cuadro.
ENZIMAS ANALIZADAS EN DIAGNSTICO CLNICO (Ver cuadro)
DETERMINACIN ANALTICA DE AL ACTIVIDAD ENZIMTICA
En general no se determina la concentracin de las enzimas, en tejidos o en fluidos
orgnicos, sino su actividad. El motivo es que la concentracin de las enzimas del suero,
muestra biolgica ms frecuente, es rara; sin embargo dada su elevada capacidad catalptica es
posible determinar su actividad con fiabilidad y, se presupone que, por lo general la actividad
es proporcional a la concentracin.
Para determinar la actividad de las enzimas es necesario importante conocer:
La estequiometra de la reaccin que cataliza (la estequiometra es la parte de la
qumica que estudia las proporciones en que se combinan los cuerpos y la determinacin de sus
frmulas y exacta presin de sus reacciones qumica).
Si necesita o no cofactor y cual es.
La concentracin mnima de sustrato, cofactor par alcanza la mxima velocidad de
reaccin
Las condiciones ptimas de medida: pH, tiempo de incubacin, procesado de la
muestra biolgica, temperatura, posibles activadores e inhibidores endgenos o exgenos de la
muestras.
Las caracterstica de la tcnica analtica par esa muestra biolgica.
Se puede determinar la actividad enzimtica analizando:
La aparicin de algn producto
La desaparicin de sustrato
La variacin del cofactor o de algn componente de al reaccin en el transcurso de al
misma.
Todos estos hechos son debido a la presencia de la enzima en la muestra y a sus
actividad especfica
En la fase de retardo, inmediatamente despus de mezclar los reactivos con al muestra
biolgica, no se debe medir la absorbancia ya que es una fase de encuentro y acoplamiento de
sustrato y enzimas. Puede durar de unos segundos o varios minutos. En los protocolos
comerciales nos indica el tiempo que tarda este periodo de retardo.
Al finalizar esta fase comienza la fase lineal, donde la velocidad de formacin del
producto permanece constante y es en esta fase donde se debe determinar la actividad
enzimtica.
A medida que va transcurriendo la reaccin llega un momento en que la velocidad
comienza a disminuir, debido a factores como el agotamiento de sustrato, el equilibrio entre el
sustrato y provoca, variaciones del pH que no han podido ser amortiguados por el tampn, etc.
La actividad enzimtica se mide en unidades internacionales por unidad de volumen por
ejemplo UI/L.

Se define la unidad internacional como la cantidad de enzimas que transporta un microlitro de

sustrato en 1 minuto, en condiciones estndar previamente establecidas. En cada tcnica
analtica se define la unidad de actividad y su unidades.
1- Mtodos analticos de determinacin enzimtica: en estos mtodos no es importante un
dato puntual de absorbancia, sino la variacin de absorbancia por unidad de tiempo ocasionada
por la actividad de al enzima del que se pretende analizar su actualidad:
A- Mtodos a punto final: se pone en contacto los reactivos (que aportan el sustrato) y
la muestra biolgica (que aporta el enzima) y tras un periodo de incubacin que supere el
periodo de retardo se mide la absorbancia. Al cabo de un tiempo establecido se detiene la
reaccin y se vuelve a medir la absorbancia. No es frecuente este tipo de tcnica al presentar
los inconvenientes de suponer que la reaccin es lineal y la cintica de orden cero, para que la
velocidad no depende de la velocidad de sustrato, lo que no ocurre siempre.
B- Mtodos cinticos: consiste en medir la absorbancia varias veces con intervalo de
minutos. Permite comprobar que realmente ests en la zona lineal de la curva, zona ideal
APRA la determinacin. Se detectan desvo de la linealidad se puede despreciar alguna de las
medidas finales de al absorbancia. En los protocolos comerciales se indican los pasos a seguir
para que el resultado sea fiable en cada determinacin.
CLCULO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Una vez obtenida la variacin de la absorcin por minutos, par calcular la actividad
enzimtica se pueden emplear distintos mtodos:
~ Mediante la aplicacin de una variante de la ley de Lambert-Beer:
AE (UI/L) = DO / Minutos X F
~ Mediante la construccin de una recta de calibrado
~ Medidas indirectas de la concentracin de sustrato

TEMA 25
REFRACTOMETRA Y OSMOMETRA
PRINCIPIOS BSICOS DE REFRACTOMETRA
La refraccin de la luz es un fenmeno de desvo que experimenta el haz incidente al
atravesar una solucin, ocasionado por la diferente naturaleza del aire y de la solucin en la
que incide. El ngulo de desvo se denomina ngulo de refraccin.
Se conoce como ndice de refraccin (n) de una solucin a la relacin entre la velocidad
de la luz en el aire y la velocidad de la luz a su paso por esta solucin. Su valor es directamente
proporcional a la cantidad de sustancia disuelta en la misma. Esta relacin vara dependiendo
de caractersticas como la concentracin de sustancias disueltas, el tipo de disolvente,.... Se
puede controlar la cantidad de soluto en una solucin midiendo su ndice de refraccin depende
fundamentalmente de la protena mayoritaria, la albmina.
REFRACTMETRO CLNICO
Son instrumentos basados en el fenmeno de difraccin de la luz para medir la
concentracin de sustancias disueltas en una solucin acuosa. Las determinaciones se realizan
gracias a la refraccin entre el prisma de ndice de refraccin elevado y la muestra.
En el laboratorio de anlisis clnicos se emplea el refractmetro para la medicin de la
concentracin de solutos como la albmina en muestras sricas y/o plasmticas y la medida del
peso especfico de la orina
1- Componentes de un refractmetro clnico: estn dotados de un elevado contraste de la
lnea de separacin de al seal, lo que permite una lectura ms fcil, rpida y fiable.
Generalmente se emplean lneas de separacin de colores por ejemplo: blanco y azul.
La anteojera de goma evita posibles interferencias originadas por la luz exterior, a la hora
de realizar la lectura entre el ojo y el ocular. Facilita adems una mejor observacin al resultar la
escala y la lnea separacin.
El cuerpo est recubierto de goma para evitar que la temperatura de la mano se trasmita
a la muestra, ya que las variaciones de al temperatura influyen en la validez de los resultados.
La escala de lectura est graduada y calibrada en trmicos de peso especfico para slidos
totales en orina humana y para niveles proteicos en suero.
Si se comparan las lecturas de peso especfico obtenidos en varias soluciones estndar
(soluciones acuosas de peso especfico conocido) al medirlas por distintos sistemas se observan
que varan milsimas (Fotocopia).
UTILIZACIN DEL REFRACTMETRO
Sacarlo del embalaje y abrir la placa que cubre el prisma
Limpiar la placa y el prisma con un pao suave y procurar no rayar la superficie del
prisma
Dirigir la parte del prima hacia la luz.
Ajustar el anillo de dioptras hasta que se pueda ver claramente la escala.
1- Calibrado: puede realizarse con agua desionizada o empleando solucin estndar de la
misma sustancias que luego se va a analizar, de baja y elevada concentracin respectivamente.
Moviendo el tornillo de ajuste se hace coincidir la lnea de separacin con el valor exacto.
Despus se limpia con un pao hmedo y luego con un pao seco.
2- Medida:
Colocar sorbe el prisma una o varias gotas de la solucin a analizar y se cierra la placa
Dejar un tiempo par que la solucin problema fluya sobre la superficie del prisma.
Colocar el refractmetro hacia la luz para tener un buen contraste luz-sombra

 Rotar el ocular hasta ajustar la escala.

Mirar por el ocular leyendo directamente en la escala de concentracin
Corregir la medida si la temperatura es diferente a la de calibracin del refractmetro.
3- Utilizacin: es un instrumento que se utiliza poco ya que sus medidas estn incluidas en
otros sistemas analticos ms sencillos, rpidos (como la tira reactiva) y automatizados
(autoanalizadores que incluyen tanto el peso especfico como al concentracin de albmina).
OSMOMETRA
1- Concepto de osmolalidad y osmolaridad: la osmometra se define como la medida del
efecto osmtico de una solucin, es decir, del nmero de partculas de soluto disueltas en la
solucin y es independiente del tamao o la carga del in o molcula.
Un osmol de una sustancia equivale al peso molecular gramo dividido por el nmero de
partculas (molculas iones) en los que la sustancias se disocia en una solucin.
Existen 2 formas de expresar la concentracin de soluto en una solucin:
Osmolalidad: es el nmero de partculas de soluto por unidad de masa de solvente
(mOsm/KG). Una solucin que contiene un osmol de soluto por kilogramo de disolvente tiene
una concentracin de 1 osmolal.
Osmolaridad: es el nmero de partculas de soluto por unidad de volumen de al
solucin (mOsm/L). Una solucin que contiene un osmol de soluto por una disolucin tiene
una concentracin de 1 osmolar.
La osmolaridad es una unidad de medida ms adecuado por si es una relacin constante
peso/ peso. Por el contrario una osmolaridad vara debido a la variacin del volumen del
lquido con la temperatura y por el propio efecto de expansin debido al soluto disuelto.
Para las soluciones acuosas de bajas concentraciones, como son los lquidos biolgicos,
la diferencia entre la osmolalidad y la osmolaridad es muy pequea.
La utilidad de estas medidas es que proporciona un clculo del nmero efectivo de
partculas en solucin; incluso sin conocer la naturaleza ni la concentracin de las partculas
disueltas.
2- Medida de la osmolaridad: es una propiedad de la solucin que depende del nmero de
partculas presentes en ellas, cuanto mayor sea su nmero mayor ser su osmolalidad. Los
productos disueltos modifican 4 propiedades fsicas de las soluciones llamadas propiedades
coligativas, que son:
Presin osmtica
Presin de vapor
Punto de ebullicin
Punto de congelacin
La amplitud de estas variaciones a temperatura constante, nicamente est determinada
por el nmero de partculas en solucin y no pro su naturaleza. As, cuanto aumenta la
osmolalidad, se produce una disminucin del punto de congelacin y un aumento de al presin
de vapor. Basndose en estos efectos, puede determinarse la osmolalidad de una solucin con
un aparato llamado osmmetro. Hay 2 tipos:
Osmmetro de punto de congelacin o crioscopia
Osmmetro de presin de vapor o de punto de condensacin
3- Inters clnico: la medida de al osmolalidad se utiliza como una indicacin del equilibrio
de lquido y electrolitos. Sirve de ayuda en la valoracin del estado de hidratacin,
hepatopatas, estados de coma y trabajos toxicolgicos.
A- Osmolalidad plasmtica: la determinacin de esta se utiliza habitualmente par
destacar estados hiperosmolares. Se considera como tales los que cursan con osmolalidades
superiores a los 325 mOsm/Kg. Cuando esta cifra alcanza los 350 mOsm/Kg la situacin
reviste extrema gravedad y el paciente entre normalmente en coma hiperosmolar.

Los valores normales son de 280-300 mOsm/L de plasma, de los cuales el soluto, no
electrolitos, representan solo 10 mOsm.
Normalmente aunque lo correcto sera, expresarse en mOsm/Kg se usa mOsm/L de
solucin. Careciendo de importancias clnica el pequeo error introducido.
La mayor contribucin a al presin osmtica del plasma se debe al sodio, siendo el
efecto de las protenas despreciables. Debido a estos los cambios rpidos en la concentracin
de sodio afectan a la hidratacin celular. Los niveles normales de glucosa y urea contribuyen
poco a la osmolaridad plasmtica, sin embargo, concentraciones muy elevadas de ambas
contribuyen significativamente a aumentar la osmolalidad. La concentracin de otros solutos,
como el calcio, el magnesio, el potasio, ... raramente varan de forma significativa la
osmolaridad, incluso en estados patolgicos.
B- Osmolaridad urinaria: se mide para controlar la capacidad de concentracin del
rin. Esta es una medida ms exacta que la determinacin de la densidad para conocer la
concentracin de la orina. Depende del nmero de partculas de soluto en una unidad de
solucin, mientras que la densidad depende tanto de al cantidad como de la naturaleza precisa
del la partcula. La protenas, la glucosa y los medios de contrastes intravenosos elevan de
forma desproporcionada la densidad de al orina, ms que la osmolaridad.
Los valores normales de osmolalidad urinaria son de 100-900 mOsm/Kg. Despus de
una retencin de lquido de ms de 12 horas la osmolalidad urinaria debern ascender como
mnimo a 800 mOsm/L. Sin embargo, en el caso de la insuficiencia renal no se superan los 400
mOsm/Kg. De la misma manera que se pierde la capacidad de concentracin en la diabetes
inspida.
4- Interpretacin clnica: la osmolalidad en el plasma aumenta con la deshidratacin y
disminuye con la sobre hidratacin. En general, las mismas condiciones que reducen o
aumentan el sodio srico afectan a la osmolalidad. (Ver cuadro 175)

TEMA 26
ESTUDIO DE LAS HECES
INTRODUCCIN
La digestin comprende el conjunto de fenmenos mecnicos y bioqumicos que
transforman los constituyentes orgnicos ms o menos complejos de los alimentos en
sustancias simples directamente asimilables que son absorbidos y asimiladas a la circulacin
sangunea. Los residuos no asimilables a la digestin se eliminan en las heces.
Las heces normales estn constituidas fundamentalmente por: agua, restos
alimenticios no digeridos, productos de al digestin en gran cantidad y bacterias. Esta
composicin se modifica en diferentes situaciones patolgicas:
Los restos alimenticios estn aumentados en alteraciones de la digestin y en las
proceso diarreicos, ya que si produce la eliminacin antes que la digestin y la absorcin se
complete.
En las patologas con invasin del tracto digestivo por grmenes o parsitos, esto
salen al exterior en las muestras de heces junto a otros productos, debido a la degradacin de
la mucosa intestinal como la sangre y el moco. En las infecciones pueden presentarse
leucocitos.
El anlisis de la muestras de heces de un paciente puede conducirnos a valiosas
orientaciones diagnsticas que van desde el diagnstico precoz de un carcinoma (aparicin
de sangre oculta en heces), hasta el diagnstico de una esteatorrea (trastorno digestivo que
cursa con una mala absorcin o digestin de las grasas), sin olvidar los exmenes
bacteriolgicos y parasitolgicos realizados con muestras fecales. Cuadro.
En una muestra d heces, por tanto, pueden realizarse diversos tipos de anlisis, entre
ellos el estudio fsico qumico que es el comienzo de cualquier examen de heces e ir
orientado en funcin del que el examen posterior sea microbiolgico, parasitolgico o sea el
estudio de la digestin. As, par realizar un anlisis parasitolgico no ser necesario la
determinacin de pH, mientras, que ser interesante par el estudio de la digestin. Cuadro.

TEMA 27
ESTUDIO DEL LQUIDO SEMINAL
EYACULACIN
Durante la eyaculacin la prstata, el conducto deferente y las vesculas
seminales inyectan uno tras otro su contenido en la uretra. Desde aqu la lanza al
exterior por las contracciones rtmicas del msculo del perin, especialmente el bulboesponjoso
ESPERMA (semen)
El lquido espeso expulsado durante la eyaculacin. Tiene un color blanco
lechoso, se licua de 5 a 30 minutos. El esperma est formado por espermatozoides,
secreciones de las glndulas sexuales accesorias, entre los componentes bioqumicos
hay que destacar la fructosa, fuente de energa de los espermatozoides (fructosa 1-4gr/l).
El pH es de 72-78.
Componentes accidentales: clulas descamadas, elementos formas, detritos cel
Volumen:
~ Margen normal: 2-4 ml, el volumen depende sobre todo de las secreciones de
las glndulas sexuales accesorias.
~ Parvisema: volumen inferior a 15 ml
~ Multisemia: ms de 8 ml de eyaculaciones (se produce en irritaciones de las
glndulas)
Nmero de espermatozoides: determinado previa dilucin en una cmara de
contaje de los elementos formes de la sangre.
~ Margen normal: 6-120 millones/ ml
~ Hipospermia: 20-40 millones/ ml
~ Oligospermia: 1-20 millones/ ml
~ Crisptostermia: menos de 1 milln/ ml
~ Polispermia: ms de 300 millones/ ml
Espermatozoides anmalos: en el producto normal de la eyaculacin se
encuentra de un 10-30% de un espermatozoide anmalo. El aumento de ms del 40% se
denomina teratospermia. De 2-3% de las clulas son precursoras de los
espermatozoides maduros.
Espermatozoides muertos: su presencia se determina por la tincin de la eosina.
Las clulas muertas se tien y las vivas no. Tcnica mezclar un gota de esperma con una
gota de solucin de eosina al 1% sobre el porta, extender, secar al aire y observar al
microscopio con aceite de inmersin. De un 8-10% de clulas muertas es normal.
Movilidad: un espermatozoide puede recorrer de 1-4 mm/minuto. El recorrido
se mide en capilares de vidrio calibrados. El porcentaje de los espermatozoides va
disminuyendo constantemente despus de 1 hora. Se dice que despus de 24 horas sigue
siendo mvil an un 10% de los espermatozoides.
EYACULACIN RETRGRADA
Despus de intervenciones d prstata o en casos de trastornos de inervacin el
semen toma, a veces, el camino equivocado. En la uretra se moviliza hacia arriba en vez
de hacia abajo. En la siguiente miccin el semen se expulsa por la orina. El paciente
suele ser estril porque los espermatozoides ya no llegan a la vagina de la mujer.

TEMA 28
ESTUDIO DEL LQUIDO CEFALORRAQUDEO

1- Formacin del lquido cefalorraqudeo (LCR)

2- Inters clnico
3- Toma de muestras
4- Examen fsico
5- Examen citolgico
5.1- Recuento clulas total
5.2- Recuento diferencial
6- Examen qumico
6.1- Protenas
6.2- Glucosa
6.3- Otros parmetros
7- Informe de un anlisis de LCR
8- Anlisis del LCR en diversas patologas del S.N.C.

TEMA 29
MONITORIZACIN DE FRMACOS (MF)

1- Introduccin
1.1- Criterios que justifican la monitorizacin de frmacos
1.2- Estudios de monitorizacin de frmacos
2- Farmacologa: generalidades
2.1- Conceptos bsicos en Farmacologa
2.2- Mecanismos generales de accin de los frmacos
2.3- Bases farmacocinticas para la utilizacin de frmacos
3- Programa de monitorizacin de frmacos
4- Etapas de la monitorizacin de frmacos
5- Tcnicas analticas en la monitorizacin de frmacos
5.1- Inmunoensayos
5.2- Tcnicas cromatogrficos
5.3- Tcnicas inmunonefelomtricas
5.4- Otras tcnicas analticas de monitorizacin de frmacos
6- Frmacos a monitorizar
6.1- Grupos teraputicos
6.2- Indicacin para la monitorizacin de los frmacos
6.3- Frmacos a monitorizar: razones y casos recomendables
6.4- Ejemplo de monitorizacin de frmacos
7- Influencia del estado fisiolgico en la monitorizacin de frmacos.

TEMA 30
DROGAS DE ABUSO
1- Introduccin
2- Farmacologa
3- Analtica de drogas de abuso
3.1- Niveles de anlisis
3.1.1- Screening
3.1.2- Confirmacin
4- Mtodos de deteccin de las principales drogas de abuso
4.1- Cannabinoides
4.2- Drogas depresoras
4.3- Drogas alucingenas
4.4- Opiceos
4.5- Estimulantes
4.6- Otras drogas de abuso

TEMA 31
MARCADORES TUMORALES

1- Introduccin
2- Marcadores tumorales
2.1- Clasificacin
3- Indicaciones para la analtica de marcadores tumorales
4- Pruebas analticas. Generalidades
4.1- Valor predictivo
4.1.1- Valor predictivo positivo
4.1.2- Valor predictivo negativo
4.2- Especificidad
4.3- Sensibilidad
5- Pruebas analticas. Ejemplos
5.1- Modo operatorio de los ensayos MEIA
5.2- Parmetros analticos de algunos inmunoensayos.

TEMA 32
TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR: HIBRIDACIN
DE CIDOS NUCLEICOS
1- Introduccin
2- Hibridacin de los cidos nucleicos
2.1- Tcnicas de hibridacin
2.1.1- Extraccin del cido nucleico
2.1.2- Tcnica de Southern blot
2.1.3- Lectura de resultados
2.1.4- Aplicaciones de la tcnica de Southern blot
2.2- Tcnica de Northern blot
3- Ampliacin de cidos nucleicos mediante PCR

TEMA 33
TCNICAS ELECTROQUMICAS
BASES DE ELECTROQUMICA
La qumica electroanaltica abarca un grupo de mtodos analticos cuantitativos
basados en las propiedades elctricas de la disolucin de un analito cuando forma parte
de clulas elctricas.
La clula electroqumica est constituida por 2 conductores llamados electrodos
cada uno sumergido en una solucin adecuada de electrolito, un puente salino inerte
entre ambos para que circule la corriente elctrica y un potencimetro para medir la
diferencia de potencial generada.
FUNDAMENTO
Cuando un metal se sumerge en una disolucin de sus propios iones se crea una
diferencia de potencial entre el metal y la solucin producida por la tendencia de los
tomos del metal a pasar a la disolucin como iones liberando neutrones en el proceso.
La lmina del metal introducida en la disolucin se llama electrodo, el sistema completo
se denomina semiclula y la reaccin que se produce es:

Es una reaccin de oxidacin ya que el tomo pasa del estado neutro al positivo
y el electrodo por definicin se llama nodo.
Con algunos metales ocurre el proceso contrario los iones metlicos de la
disolucin toman electrones y pasan a tomos neutros que se depositan en el electrodo.
Esta es una reaccin de reduccin del in metlico, y el electrodo recibe el nombre de
ctodo.

En ambos casos la magnitud del potencial generado se encuentra en relacin con

la concentracin o ms bien la actividad de los iones metlicos de la solucin. Algunos
ejemplos de estos sistemas capaces de generar un potencial son:
Plata / iones plata
Cobre / iones cobre
Sin embargo existen otros sistemas generadores de este tipo de potencial como
son elementos no metlicos (halgenos y oxgeno), sistema de xido-reduccin y ciertos
sistemas de membrana.

ECUACIN DE NERST
En los sistemas vistos anteriormente la relacin entre el potencial generado en la
semiclula y la concentracin de la disolucin implicada viene dada por la ecuacin de
Nerst:

E = potencial de la semiclula
Eo = potencial de la semiclula en condiciones estndar (T)
R = constante = 8.314 julios / gramos
t = temperatura absoluta
n = nmero de electrones puestos en juego en la reaccin (coincide con el
cambio de valencia del metal)
F = constante de Faraday
ln = logaritmo neperiano (igual a logaritmo en base e)
Segn esta ecuacin el potencial de una semiclula es funcin de ciertas
variantes:
~ Temperatura
~ Concentracin de la disolucin
~ Nmero de electrones intercambiados
Si se sustituye la temperatura por su valor a 25C (298K), las constantes R y F
las sustituimos por su valor y se multiplica por 2203 para pasar de logaritmo neperiano
a decimales, la ecuacin anterior se transforma en:
Y si el proceso se considera como una reaccin REDOX, la expresin de la
ecuacin ser:

Siendo (ox) la concentracin de la forma oxidada del in metlico y (red) la

concentracin de la forma reducida del in metlico.
En la ecuacin de Nerst Eo es el potencial de la semiclula en condiciones
estndar y se define como el potencial del electrodo cuando todos los reactivos y
productos tienen una actividad igual a la unidad. Los potenciales estndar de las
distintas semiclulas estn calculados experimentalmente.
LA CLULA ELECTROQUMICA
No es posible medir directamente la diferencia de potencial generado entre el
metal y la disolucin de la semiclula. Para ellos es necesario unir 2 semiclulas de
forma que los potenciales generados en cada una de ellas se convienen formando una
clula electroqumica con una diferencia de potencial que se manifiesta por un flujo de

corriente elctrica mesurable con un voltmetro. El ejemplo ms tpico es el de la clula

de Zinc-cobre.

El nodo de zinc est sumergido en una disolucin de sulfato de zinc (SO4Zn)

tiene un exceso de electrones por el proceso de disolucin. Simultneamente el ctodo
de cobre se empobrecen electrones que son captados por los iones de la disolucin.
El exceso de electrones va desde el nodo hasta el ctodo (por el conductor) y
este flujo constituye la corriente elctrica; el exceso de electrones de una parte y el
defecto de al otra son responsables de la diferencia de potencial que persiste hasta que al
reaccin cesa.
El circuito se completa con un potencimetro y un puente salino que establece la
conexin elctrica y es habitual un gel en el que se disuelve un electrolito inerte (KCl)
Para medir el potencial (E) de una solucin y relacionarlo con su actividad y
concentracin se necesita por tanto componer una clula electroqumica con 2
semiclulas distintas llamadas electrodos indicador y electrodo de referencia. El
potencial del electrodo indicador y electrodo de referencia. El potencial del electrodo
indicador responde proporcionalmente a la concentracin de la sustancia de inters,
mientras que el electrodo de referencia mantiene un voltaje constante y conocido.
Lo que se mide realmente es la variacin de potencial con respecto a esa
semiclula invariable que se considera de referencia: E clula = E ctodo E nodo.
Donde el montaje del ctodo y del nodo, el montaje del electrodo para las selecciones
catdicas y andicas.
TCNICAS ELECTROQUMICAS
Los mtodos electroanalticos se dividen en 2 grupos:
Mtodos que tienen lugar en la interfase del electrodo con la fina capa de
disolucin adyacente.
Mtodos basados en fenmenos que tienen lugar en la disolucin y en las que
se intentan evitar los fenmenos de la interfase.

Aunque el fundamento de cada mtodo vare, todo se basa en el empleo de la clula

electroqumica, ya sea esta :
~ Galvnica, es decir, con produccin de energa elctrica
~ Electroltica, es decir, consume energa elctrica.
Tienen en comn las siguientes caractersticas:
Las medidas son generalmente especficas para el estado de oxidacin
para un elemento.
La instrumentacin es relativamente barata
Proporciona informacin sobre las actividades en lugar de las
concentraciones, lo que es interesante en estudios fisiolgicos.
Las tcnicas electroqumicas ms utilizadas en el laboratorio son:
~ Los mtodos potenciomtricos: se basan en la medida del potencial de
las clulas electroqumicas en ausencia de corriente.
~ Los mtodos amperomtricos: se basa en la medida de la cantidad de
corriente que fluye cuando se aplica un voltaje cte al electrodo de medida
La utilidad en el laboratorio de estas tcnicas es:
La medida del pH (ms importante)
Determinacin de la concentracin de iones
Medida de la presin parcial de gases (dixido de carbono, oxgeno)
Medida del punto final de mtodos volumtricos
Medida del poder de oxidacin o reduccin de una disolucin
El equipo requerido para estos mtodos es smil:
~ Electrodo de referencia
~ Electrodo indicador
~ Dispositivo para medir el potencial generado por la clula.
A- Electrodos de referencia: son semiclulas de potencial conocido y constante que se
utilizan para componer una clula con otra semiclula y obtener una diferencia de
potencial proporcional a la actividad de la sustancia a medir. Los ms usados son:
Electrodo de hidrgeno / in hidrgeno: consiste en un electrodo de platino en
una solucin de cido clorhdrico con hidrgeno a presin atmosfrico que borbotea
sobre la superficie de platino. La reaccin de la semiclula es: H H+ + e-.
Este electrodo se considera el electrodo estndar. Tiene un Eo (potencial de semiclula en
condiciones estndar) asignado a 25C a cero voltios por lo que conectando cualquier semiclula
a sta y midiendo el potencial desarrollado se obtiene el potencial, directamente, relativo de la
segunda semiclula. As se obtiene el potencial estndar de la mayora de las semiclulas.
Aunque el electrodo de hidrgeno es el electrodo estndar no se usa
habitualmente por la dificultad de su mantenimiento y por ello se han desarrollado otras
clulas ms estables.
Electrodo de calomelanos: los electrodos de referencia de calomelanos constan
de mercurio metlico en contacto con una disolucin saturada de cloruro mercuriosos
(HgCl2) y una concentracin conocida de cloruro potsico, se representa del siguiente
modo: Hg / HgCl2 (sat), KCl (XM)//. El potencial de electrodo para esta semiclula est
determinado por la reaccin: Hg2Cl2 (sat) + 2 e- 2HgCl2 (sat) + 2Cl- y depende de la
concentracin de cloruro (X) por lo que este valor debe especificarse en al descripcin
del electrodo. Los electrodos de calomelanos ms comunes son:
~ Los calomelanos 01, 35 M.
~ Los calomelanos saturados
En todos ellos la disolucin est saturada de HgCl2 y difieren slo en la
disolucin de KCl.

 Electrodo de plata/ cloruro de plata (AgCl): consiste en un electrodo de plata

sumergido en una disolucin de KCl que ha sido saturada de AgCl y se representa:
Ag / AgCl (sat), KCl (XM)//. El potencial del electrodo se determina por la reaccin:
AgCl + e- Ag (sat) + Cl-. Los ms usados son los que llevan disolucin de KCl 3M y
saturados.
La ventaja sobre el anterior es que los ltimos pueden usarse a temperaturas
superiores a 60C.
B- Electrodos indicadores: un electrodo indicador debe responder rpida y
reproduciblemente a los cambios de actividad del analito cuando se pone en contacto
con el mismo. Existen 2 tipos de electrodos indicadores:
Electrodos indicadores metlicos: existen 4 tipos:
~ Los de primer especie: se usan para determinar la actividad del catin derivado
del ADSAF del electrodo. En este caso interviene una nica reaccin.
~ Los de segunda especie: determina la actividad de un anin con el que su in
(derivado del electrodo) puede formar un precipitado o in complejo estable.
~ Los de tercera especie: pueden determinar la actividad de un catin distinto al
del electrodo.
~ Electrodos REDOX: los electrodos constituidos con platino, paladio, oro u
otros metales inertes sirven como electrodos indicadores para sistemas de xidoreduccin.
Electrodos indicadores de membrana: existe una amplia variedad de estos
electrodos que permiten mediante medidas potenciomtricas directas determinaciones
rpidas y selectivas de:
~ pH
~ Numerosos cationes y aniones: estos electrodos se denominan
electrodos selectivos de iones (ISE), debido a la larga actividad de estos
electrodos.
En general constan de una membrana que separa el interior del electrodo e la solucin
que hay que medir y tiene la funcin de permitir la difusin selectiva de los iones cuya actividad
debe determinarse, en consecuencia ser necesario un electrodo distinto par cada sustancia. Los
tipos de electrodo de membrana son:
~ Electrodos de vidrio
~ Electrodos de membrana cristalina
~ Electrodos de membrana lquida
~ Electrodos selectivos a las molculas
~ Electrodos de vidrio: consiste en una DSAFSD membrana delgada de vidrio
sensible al pH dispuesta al final de un tubo de vidrio o plstico de paredes gruesas.
(Dibujo 1)
El tubo contiene un pequeo volumen de cido clorhdrico diluido saturado de
cloruro de plata. En un hilo de plata inmerso en una disolucin de AgCl se conecta a una
de las terminales de un voltmetro y un electrodo de referencia se conecta a la otra
terminal. El pH se determina midiendo la diferencia de potencial a travs de la
membrana de vidrio que separa la disolucin del analito de la disolucin de referencia
de concentracin de hidrogeniones conocida (solucin de HCl generalmente 01 M).
(Dibujo 2)

Como se ve en la figura existe un transporte de carga elctrica desde la

superficie del vidrio expuesta a la solucin de la muestra hacia la superficie del
electrodo por lo que se produce una diferencia de potencial entre ambos lados de la
membrana proporcional de los iones H+.
El electrodo de vidrio tiene estas limitaciones:
* Error alcalino: estos electrodo son algo sensibles a los iones de metales
alcalinos a pH superiores a 12.
* Error cido: a pH menor a 05 suelen obtenerse valores algo superiores
a los reales.
Potenciales de asimetra: debido al envejecimiento del vidrio.
~ Electrodos in selectivos: se clasifican segn las caractersticas selectivas:
Electrodos de vidrio para cationes: son electrodos selectivos para cationes ya que la
corriente elctrica es transportada por los cationes de menor carga del vidrio. Cambiando la
composicin del vidrio obtenemos electrodos para determinar iones monovalentes, como sodio,
potasio, in amonio, litio, plata, etc.
Electrodos de membrana cristalinas: estn formados por materiales que
contiene huecos catinicos para acomodar aniones tamao y cargas adecuadas.
Ejemplo: electrodo con membrana de fluoruro de lantano que se usa para determinar el
in fluoruro.
Electrodos de membrana lquida: las membranas lquidas se forman a partir de
lquidos inmiscibles que se enlazan de forma selectiva con algunos iones (aniones y
cationes). La membrana consta de un soporte slido inerte y sobre el soporte se sita un
intercambiador inicos, lquido de naturaleza orgnica que penetra en los poros de este.
Los lquidos activos en las membranas son de 3 tipos:
- Intercambiadores aninicos
- Intercambiadores catinicos
- Compuestos neutros que complejan selectivamente determinados cationes
Existe uno muy usado en bioqumica para determinar calcio inico.
~ Electrodos sensibles a gases: aunque se trata tambin de electrodo selectivos
de iones se clasifican a parte por sus caractersticas especiales. Se usan para determinar
gases disueltos o bien iones que pueden convertirse en gases disueltos por un cambio de
pH. Son en realidad clulas electroqumicas construidas con electrodos especficos de
iones y uno de referencia introducidos en una disolucin interna que est retenida por
una membrana permeable a los gases. En el laboratorio los electrodos gaseoso ms
importantes son:
- Electrodo de dixido de carbono: consiste en una modificacin del
electrodo de vidrio y mide el pH de una disolucin de bicarbonato. Cuando
una disolucin con dixido de carbono se pone en contacto con la
membrana se produce la difusin del gas por tanto el medio acuoso se
disocia y hace variar el pH de la solucin ClNa DASFASD cambio que
detecta el electrodo de vidrio.
- Electrodo de oxgeno: tambin se llama electrodo de Clark. Consiste en un
ctodo de platino que est conectado a un nodo de Ag / AgCl (electrodo de
referencia), ambos sumergidos en solucin electroltica de NaCl. La
superficie del electrodo est recubierta por una membrana que deja pasar las
molculas gaseosas como las del oxgeno. Este electrodo acta en presencia
de corriente elctrica (mtodos amperomtrico). Cuando se aplica el
potencial se lleva a cabo una reduccin del oxgeno en el electrodo:
O2
+
+ 2H + 4e H2O2 + e 2OH . Este movimiento electrnico del ctodo

al nodo constituye la corriente elctrica cuya intensidad es proporcional al

oxgeno difundido y se mide con un ampermetro.
DETERMINACIN DEL pH
El pH se define como el logaritmo negativo de la actividad de los iones de
hidrgeno.
La actividad de los iones H+ se puede determinar potenciomtricamente para ello
se construye una clula electroqumica con un electrodo indicador y otro de referencia
sumergidos en la solucin cuyo pH se quiere determinar. El electrodo indicador es el
electrodo de vidrio cuyo potencial varia con al concentracin de H+ debido a la
permeabilidad del vidrio a los iones H2. como electrodo de referencia usamos el de
calomelanos saturado o el de Ag / AgCl de potencial conocido e independiente del pH.
Peachmetros: los equipos potenciomtricos que se emplean para la determinar
del pH se denominan peachmetros y miden el potencial presentndolo en unidad de pH.
Constan bsicamente de 2 elementos:
~ Electrodo indicador
~ Electrodo de referencia
~ Panel o escala en unidades de pH o milivoltios
~ Mandos para la calibracin del pH y al temperatura
Debido a que los cambios de temperatura modifican el potencial algunos
peachmetros van equipados con una sonda de temperatura que realiza directamente la
compensacin de la temperatura en las medidas del pH.
Los electrodos indicador y de referencia pueden presentarse separados o bien
combinados en una misma unidad llamndose entonces electrodo de pH combinado.

RESUMEN DE BIOQUMICA
NATREMIA
Normal: 135 148 mEq / L
Patolgico:
~ Hipernatremia: > 150 mEq / L
~ Hiponatermia: < 130 mEq / L
Orina: 4-6 gr / 24 horas
Determinacin: absorcin atmica o fotometra de llama

POTASEMIA
Normal: 35 5 mEq /L.
Patolgico:
~ Hiperpotasemia: > 55 mEq / L
~ Hipopotasemia: < 35 mEq / L
Orina: 25 100 mEq / L/ 24 horas 25 35 gr / 24 horas
Determinacin: fotometra de llama, absorcin atmica y mtodos turbidimtricos

CALCEMIA
Normal: 25 10 mEq / L
Patolgico:
~ Hipercalcemia: > 105 mg /dl
~ Hipocalcemia: < 85 mg /dl
Orina: calciuria de 50 - 200 mg /dl. Hiper e hipocalciuria
Determinacin: fotometra de llama, espectroscopia de masas.

FOSFATEMIA
Normal:
~ en nios: de 4-6 mg /dl
~ en adultos: de 3-5 mg dl
Patolgico:
~ Hiperfosfatemia: tiene especial gravedad si sube por encima de 9 mg/dl
~ Hipofosfatemia: tiene especial gravedad si baja por debajo de 1 mg/dl
Orina: de 06-12 gr / 24 horas
Determinacin: espectrofotometra, mt. del fosfomolibdeno y mt. enzimtico

MAGNESIO
Normal: 18 - 29 mg/dl
Patolgico:
~ Hipermagnesemia: > 29 mg/dl
~ Hipomagnesemia: < 18 mg/dl
Determinacin: absorcin atmica, mtodos enzimticos, activacin neutrnica
con disolucin isotpica.

GLUCEMIA
Normal:
~ En ayunas: 70 105 mg/dl
~ En ancianos: 80 115 mg/dl
Determinacin: pruebas de tolerancia oral a la glucosa.
* Aparece glucosuria por encima de 160 mg/dl

GASOMETRA ARTERIAL
PO2 normal: 80 - 100 mmHg
PCO2 normal: 35 45 mmHg
pH: 735 745

LPIDOS
Anlisis de colesterol y triglicridos totales mediante mtodos enzimticos.
Anlisis de colesterol enzimticos
Anlisis de colesterol LDL frmula Friedwald
Anlisis de los micromicrones se detectan gracias a su aspecto lechoso y
opalescente del suero (se puede dejar por la noche a 4C formndose una capa cremosa
flotante)
Colesterol total: 150 220 mg/ dl
Colesterol HDL: > 55 mg/dl
Colesterol LDL: < 150 mg/dl

PROTENAS
Prealbmina: 10 40 mg/dl
Albmina: 35 5 gr/dl
-globulina: 03 07 gr/dl
-globulina: 04 08 gr/dl
-globulina: 06 11 gr /dl
Fibringeno: 03 gr/dl 200 400 mg/dl
Sangre:
~ Protenas totales: Biuret (formacin de compuestos colorimtricos);
refractmetros; absorcin en el ultravioleta y mtodos de fijacin de colorantes
(verde de bromocresol).
Orina:
~ Protenas totales: turbidimtricos y mtodos que fijan colorantes (azul
brillante de Coomasie).

UREA
Normal: 18 40 mg/dl
Orina: 15 24 gr/dl
Determinacin: mtodos enzimticos colorimtricos.

CIDO RICO
Normal:35 mg/dl
Orina: 05 1 gr/ 24 horas
Determinacin: mtodo enzimtico colorimtrico

CREATINA creatinina: aclaracin de creatinina

Normal (suero): 05 13 mg/dl
Orina: 1 16 gr/ 24 horas
Determinacin: mtodo cintico colorimtrico por aclaracin de creatinina.

DETERMINACIONES HEPTICAS
Enzimas
Triglicrido
Protenas
Glucosa
Colesterol
Transaminasa
Albmina

DETERMINACIN DE HORMONAS
Tcnicas espectrofotomtricas, cromatogrficas, pero las ms utilizadas son las
inmunoqumicas (RIA, EIA, FIA).

DETERMINACIN DE ENZIMAS
Se mide su actividad (cuadro)

HECES
Se determina:
~ pH
~ sangre oculta en heces
~ examen macroscpico
~ examen microscpico (X 40) primero sin teir y luego con sudn III
(grasas) lugol (hidratos de carbono)

HIERRO
Anemia:
~ Varn: < de 130 gr/l
~ Mujer no embarazada: < de 120 gr/l
~ Mujer embarazada: < de 110 gr/l
Se mide la concentracin de hemoglobina

CORAZN
Aumento precoz y poco duradera de la CK total (CK-MB)
Aumento ms tarda y ms duradera de la GOT
Aumento an ms tarda y duradera de la LDH total.

MONITORIZACIN DE FRMACOS
Se determina por RIA, EIA, FIA, EMIT, ELISA, cromatografa y
espectroscopia de masas.

DROGAS DE ABUSO
Se determina por: FIA, EMIT, RIA, cromatografa y espectroscopia de masas
cuando es una prueba de confirmacin.

Estudio de la hormona del crecimiento y factores de crecimientos:

Hormona del crecimiento
El crecimiento es un fenmeno biolgico fundamental en el desarrollo de todos
los nios.
El crecimiento se produce por una doble accin:
Un aumento del tamao de las clulas del cuerpo.
Un aumento en su nmero
Tanto el crecimiento como estos dos procesos anteriores dependen de la
capacidad de las clulas para asimilar nutrientes, de este modo los alimentos son
utilizados para construir nuevas estructuras celulares.
El crecimiento de un individuo sufre varios cambios a lo largo de la vida. Un
modelo de crecimiento podra ser el siguiente:
fetal: 9 meses en la matriz.
infante: desde el nacimiento al primer ao.
niez temprana: desde el primero al tercer ao.
niez tarda: desde el tercero al dcimo ao.
pubertad: entre los 10 y 14 aos (depende del sexo).
adolescencia: entre los 14 y los 18 aos.
De estas seis etapas una de las ms importantes en cuanto al crecimiento es la
puberal, ya que produce un crecimiento brusco llamado estirn puberal. Este es mayor
en los varones que en las mujeres y en stas ltimas aparece en una edad ms temprana,
estos dos factores influyen en la diferencia de talla final existente entre ambos sexos.
Para poder establecer si un nio crece normalmente se usan unos grficos, los
cuales utilizan cifras estndar de talla obtenidos a partir de un alto nmero de individuos
de una determinada edad, por lo que partimos de datos experimentales, el resultado de
esta investigacin es que la gran mayora de los individuos tienen una altura media o
cercana a ella y que solo unos pocos estn muy por debajo de sta o muy por encima.
En el crecimiento influyen diversos factores, algunos externos a la persona y
otros de carcter interno.
Los factores externos son aquellos determinados por el ambiente que rodea al
nio, por ejemplo: la alimentacin que recibe o factores emocionales, ya que el
crecimiento puede ser suprimido por el estrs que sufre el nio. La situacin socioeconmica de la familia influye de forma importante en su desarrollo.
Los factores internos dependen de las caractersticas genticas del individuo,
dentro de stas se incluyen la talla de los padres, la raza y el sexo del nio. Tambin

dependen de las hormonas hipofisarias, sobretodo de la somatotropina que estimula

tanto el crecimiento como la maduracin sea.
El retraso del crecimiento debido a la deficiencia o insuficiencia de la hormona
del crecimiento puede ser de origen congnita, adquirida o transitoria. La adquirida
puede ser causada por tumores, tratamientos para leucemias, infecciones, etc. La
transitoria es normalmente de origen idioptico pero puede tener una base pricosocial
debido a malos tratos o origen en un hipotiroidismo primario.
Cuando los nios van a consulta para la evaluacin de su retraso de crecimiento
presentan una estatura ms baja de lo normal, una velocidad de crecimiento disminuida
y una edad sea retrasada. Tambin tiene un aspecto facial infantil, voz aguda, obesidad
abdominal, etc.
Para el diagnstico de esta deficiencia juegan un papel importante las pruebas de
laboratorio. Tambin se debe confirmar el retraso en el crecimiento mediante el estudio
de la talla, peso y velocidad de crecimiento. Para medir la talla se utiliza los
estadimetros.
El diagnstico temprano de la deficiencia de esta hormona es fundamental para
un tratamiento efectivo.
La hormona del crecimiento o somatotropina es un polipptido producido por el
lbulo anterior de la hipfisis.
El encargado de liberar el factor que permite la secrecin de la hormona del
crecimiento (GH) es el hipotlamo el cual acta sobre la hipfisis sintetizando dicha
hormona. sta estimula el crecimiento corporal ejerciendo su accin sobre los
cartlagos de crecimiento de los huesos. Se libera mayoritariamente durante el sueo.
Su modo de actuar en el organismo es de dos tipos:
Indirectos:
1- Estimula el crecimiento, la sntesis proteica y la captacin de aminocidos
por la clula. Este efecto del crecimiento tiene un pptido mediador somatomedina que
se produce en el hgado en presencia de GH.
2- Efectos metablicos.
3- Estimula la sntesis proteica.
Directos: estos tiene accin anti-insulnica.
1- Estimula la liplisis (hiperlipemia: incremento de la concentracin
plasmtica de las diferentes fracciones lipdicas).
2- Posee una accin hiperglucemiante (aumenta la glucosa).
Factores de crecimiento
Los factores que estimulan la produccin de la hormona del crecimiento son:
1- Hipoglucemia: son factores de crecimiento de tipo insulnico tambin
denominados somatomedinas (que son sustancias intermedias).
2- Ejercicio.
3- Ingesta de protenas.

La GH al igual que otras hormonas sufre alteraciones que estn producidas por
un dficit (absoluto o relativo) o por un aumento de la misma.
En los nios con dficit de esta hormona provoca una talla final baja. En los
adultos este est relacionado con la disminucin de masa muscular y sea, aumento de
grasa corporal e incluso con una menor calidad de vida.
Estudio de la hormona de crecimiento en el laboratorio
Se determina por radioinmunoensayo y radioinmunoanlisis (RIA). Los niveles
en ayunas y en reposos en plasma tienen que ser menor a 10 mg/l.
Otras pruebas a realizar son:
Estudio del metabolismo de los glcidos.
Valoracin basal de la GH. Cuando esta determinacin se realiza por la maana
y en ayunas da valores menores a 5 ng/ml.
Niveles sricos de la IGFs (tipo de somatomidina). Estos informan sobre la
secrecin de GH y el estado de nutricin. De modo que si los niveles son elevados
indican un exceso de GH y si son bajos indican que hay un defecto.
Pruebas de estimulacin de la GH. Las ms aceptadas son aquellas que
contiene GHRH y las de hipoglucemia insulnica. En esta ltima se aade insulina que
provoca una disminucin de la glucosa y un aumento de la GH. Es un tcnica similar a
la PTOG, nicamente cambia la glucosa por la insulina. Esta tcnica se realiza
extrayendo sangre cada 30 minutos hasta llegar a las 2 horas. Se introduce insulina por
va intravenosa, esta prueba hay que realizarlas por la maana. Cuando al menos dos
test de esta prueba den valores insuficientes se considera que existe un dficit de GH. Se
utiliza para el diagnstico de enanismo en nios y cuando se sospecha dficit hormonal
en adultos.
Pruebas de supresin o frenados: se realiza ante la sospecha de gigantismo o
acromegalia. Las ms utilizadas son la PTOG y pruebas con somatostatina y
bromocriptina (son hormonas generada por la hipfisis que estimulan el crecimiento).
Pruebas de secrecin espontnea integrada. En ests se valora la secrecin de
hormona durante 24 horas con una cierta frecuencia (cada 30 minutos) o su excrecin en
la orina. Esta pruebas se realizan ya que hay nios de baja talla que no presentan
problemas de secrecin sino una alteracin de la misma.
La utilidad de la determinacin de la hormona del crecimiento nos sirve para
diagnosticar gigantismo en nios o acromegalia en adultos cuando la GH est
aumentada; en cambio cuando sta est disminuida existe enanismo hipofisario.
Cuando hay una disminucin de la GH tambin hay una disminucin de otras
hormonas, lo que nos indica la presencia de un tumor.

Estudio del eje hipotlamo-hipofisario-tiroideo

La hipfisis es un rgano impar, situada bajo el cerebro, en una cavidad bajo el
cerebro, que se llama silla turca. La hipfisis es de un color rojizo y del tamao de un
guisante. Las hormonas producidas por la hipfisis son bastante numerosas, y se dividen
en dos lbulos: lbulos anterior y lbulo posterior.
Hormona del lbulo anterior
Hormona del crecimiento: tiene su origen en las clulas eosinfilas del lbulos
anterior de la hipfisis. Favorece el desarrollo de todo el organismo (en particular de la
talla ya que interviene en los hueso). Es la hormona que determina la estatura.
Hormonas gonadotropas: son las que regulan las funciones de los rganos
sexuales. Favorecen el desarrollo de estos rganos.
Hormonas que regulan la actividad de otra glndulas: regulacin de la
actividad del tiroides, de la corteza de las glndulas suprarrenales y de la paratiroides.
Hormonas metablicas: su accin es reguladora sobre el metabolismo general,
sobre el metabolismo de los azcares (diabetes), sobre el metabolismo de las grasas
(obesidad), sobre el metabolismo del agua (secrecin de orina). Sobre los azcares
tienen una accin contraria a la de la insulina.
Hormona del lbulo posterior
Hormona adiuretina: acta sobre la diuresis, es decir, sobre la eliminacin de la
orina frenndola.
Hormona vasopresina: contrae los vasos sanguneos, aumentando as la presin
arterial.
Hormona oxitocina: estimula las contracciones del urter que en la mujer
interviene en el parto.
La hipfisis secreta varias hormonas, entre muchas encontramos: la
adrenocorticotropina (tiene la funcin de estimular las glndulas suprarrenales y secretar
cortisol, esteroides andrognicos,...); hormona estimulante de los melanocitos (tienen
la funcin de regular la pigmentacin de la piel); la hormona luteinizante y la
foliculoestimulantes (actan sobre las gnadas); hormona del crecimiento (favorece el
crecimiento de msculos y huesos y regula el metabolismo) y por ltimo la hormona
estimulante del tiroides que es la que produce las hormonas tiroideas.
El tiroides es un rgano con forma de mariposa situado en la parte anterior del
cuello, abrazando la trquea, inmediatamente por debajo de la manzana de Adn (o
cartlago circoides de la laringe) y por encima del esternn. Las hormonas producidas
por el tiroides se llaman tryyodotironina (T 3) y tiroxina (T4). Su principal caracterstica
es que contienen yodo. Este yodo, proviene principalmente de fuentes externas a partir

del agua y los alimentos ingeridos y es trasportado por la sangre. El tiroides tiene la
capacidad de atraparlo e incorporarlo a un protena llamada tiroglobulina, en la cual se
almacenan las hormonas tiroideas.

Cmo se controla la produccin de hormonas tiroideas?

La sntesis de estas hormonas y su secrecin estn controladas por la hipfisis
mediante un mecanismo muy sensible a las variaciones en las concentraciones de T3 y
T4 en la sangre. Cuando la hipfisis detecta una disminucin producen tirotropina (TSH:
hormona estimulante del tiroides); la cual es liberada a la sangre. El hipotlamo sintetiza
la hormona liberadora de tirotropina o TRH (estimula a la hipfisis para que sintetice
TSH). Al llegar a las glndulas tiroideas, TSH activa diversos pasos en la fabricacin y
en la liberacin de hormonas tiroideas almacenadas para que sean vertidos a la sangre.
De esta forma, T3 y T4 llegan a los rganos donde ejercen su accin.
Un vez las concentraciones de T3 y T4 en la sangre se elevan, se frena la
produccin de TSH y el tiroides tambin detiene la fabricacin de sus productos. Esto es
lo que se llama un sistema de control por retroalimentacin negativa.

Efectos que producen las hormonas tiroideas

Las hormonas tiroideas estimulan procesos vitales en todo el organismo.
Adems, influyen en la maduracin y el desarrollo de los tejidos, en la produccin de
energa y de calor, en el metabolismo de nutrientes, en las funciones metablicos,
cardacas, respiratorias, sexuales y reproductivas.
Cuando se rompe el equilibrio de produccin y secrecin de hormonas se
producen las alteraciones funcionales de la glndula.
Cuando disminuye la cantidad y actividad de T3 y T4 en los rganos blanco se
produce hipotiroidismo. Por el contrario cuando hay exceso se produce hipertiroidismo.
Las funciones del tiroides son las siguientes:
Acelera la combustin de los alimentos (protenas, hidratos de carbono),
elevando el nivel del metabolismo basal.
Favorece la eliminacin del agua, de los tejidos.
Determina el crecimiento en estatura y en peso de los nios.
Favorece el desarrollo de los rganos sexuales e interviene en los cambios de la
adolescencia.
Exalta la funcin del corazn, de los pulmones, y favorece el desarrollo de la
inteligencia, de las cualidades intelectuales.
Hipotlamo
Estructura dienceflica situada en la base del cerebro, debajo del hipotlamo y
repartida por la pared inferior y lateral del tercer ventrculo. El hipotlamo est formado
por numerosos ncleos de sustancia gris. Est unido a la hipfisis mediante un
importante haz de fibras, formando el denominado eje hipotalmico-hipofisario que
regula la homeostasis del medio interno y el control de las funciones neuroendocrinas.
Ciertas zonas del hipotlamo forman parte tambin del sistema lmbico, cerebro
visceral o cerebro emocional de Papez, constituyendo su centro de mando o parte
efectora que regula la vida emocional o afectiva. Al hipotlamo llegan aferencias del
sistema motor, olfativo, gustativo, visual,... as como de otras reas del sistema lmbico.
A su vez, enva informacin a la mayor parte de las estructuras cerebrales. Adems, el
hipotlamo est ntimamente relacionado con los reacciones y enfermedades
psicosomticas.
Mtodos diagnsticos
La mayora de las enfermedades tiroideas se manifiestan por alteraciones
cualitativas o cuantitativas en las secrecin de hormonas, en el aumento del tamao de
la glndula o en ambas.
As cuando disminuye la cantidad y actividad de T3 (L-Tironina) y T4 (LTiroxina) en los rganos blanco, se produce hipotiroidismo. Por lo contrario cuando hay
exceso de hormonas se produce hipertiroidismo o tirotoxicosis.

En qu consiste el hipotiroidismo?
El hipotiroidismo se refiere a cantidad o actividad insuficiente de hormonas
tiroideas (T3 y T4) para ejercer sus acciones en los diferentes rganos. La causa ms
frecuente es la disminucin de la produccin de hormona en la glndula tiroides, esto
ocurre como consecuencia de perdida de tejido glandular secundario a inflamacin,
ciruga o irradiacin o por alteracin en la sntesis hormonal debido a defectos
congnitos en la maquinaria de las clulas o deficiencia de yodo o la administracin de
sustancias externas que bloquean la sntesis normal.
En otros casos el hipotiroidismo puede deberse a lesiones tumorales, vasculares,
inflamatorias, quirrgicas o traumticas de la hipfisis que reducen la produccin de
TSH del hipotlamo que afectan a la produccin de TRH.
Manifestaciones del hipotiroidismo
Las manifestaciones son variables segn la edad de aparicin y la severidad del
dficit de hormonas tiroideas. El hipotiroidismo congnito aparece cuando el tiroides
fetal no funciona bien. El recin nacido tiene poca actividad, duerme mucho, como
poco, tiene estreimiento y sufre ictericia prolongada.
Si el dficit no se repone, ocurre retardo del desarrollo fsico y mental
irreversibles y puede conducir al cuadro llamado cretinismo.
En los adultos, los sntomas suelen ser inespecficos y pueden progresar poco a
poco. Pueden ser los siguientes:
Cabello escaso y seco
Sordera
Frecuencia cardiaca disminuida
Presin arterial alta
Piel seca y fra
Inflamacin
Estreimiento
Dolor y sensibilidad muscular
Ronquera
Depresin, lentitud de pensamiento, etc.
Como vemos, es un cuadro caracterizado por disminucin y lentificacin de gran
cantidad de actividades vitales. En casos extremos este cuadro se llama mixidema que
puede progresar, sin tratamiento a coma y muerte.
Las causas ms frecuentes de hipotiroidismo
El hipotiroidismo primario es el ms frecuente; es decir el causado por defecto
en la glndula misma. Muchas veces no se logra saber cual es la razn del defecto en la
sntesis de hormonas tiroideas y se habla de hipotiroidismo primario ideoptico. Otras
veces es secundario al tratamiento con ciruga o yodo radiactivo de enfermedades de la
glndula tiroides o la irradiacin del cuello. El dficit de yodo impide la sntesis normal
de hormonas tiroideas. Otra causa frecuente es la tiroiditis crnica autoinmune.

El hipotiroidismo de causa central (por lesiones de hipfisis o hipotlamo) es

poco frecuente.
Diagnstico de hipotiroidismo
De acuerdo con los hallazgos clnicos, se mide la concentracin de hormonas en
la sangre (T3, T4, TSH).
En el hipotiroidismo primario, T3 y T4 suelen estar por debajo de los niveles
normales y TSH se encuentra elevada.
Dada la alta sensibilidad de la hipfisis para detectar descensos mnimos de T 3 y
T4, en ocasiones la concentracin de estas hormonas son normales pero TSH est
elevada indicando que existe deficiencia tiroidea. En el hipotiroidismo central tanto las
hormonas tiroideas como la TSH estn bajas.
Qu es el hipertiroidismo?
Hipertiroidismo o tirotoxicosis se refiere a la presencia de cantidades excesivas
de hormonas tiroideas en los rganos blanco. Las causas pueden ser:
Produccin excesiva de hormonas por la glndula tiroides como ocurre en la
enfermedad de Grave.
Liberacin de gran cantidad de hormona almacenada como ocurre en casos de
tiroiditis (inflamacin del tiroides autoinmune o viral).
Estimulacin exagerada de la sntesis de hormonas tiroideas por secrecin
excesiva de TSH a partir de ciertos tumores de la hipfisis.
Manifestaciones clnicas
Los sntomas suelen ser ms llamativos que los de hipotiroidismo. Son los
siguientes:
Calor desproporcionado con la temperatura ambiental
Sudoracin intensa
Prdida de peso a pesar de apetito normal o aumentado
Nerviosismo, irritabilidad, temblor de manos e insomnio
Debilidad muscular poca tolerancia al ejercicio
Taquicardia y palpitaciones
Diarrea y alteraciones menstruales
En casos de larga duracin se pueden presentar complicaciones cardiovasculares
y osteoporosis.
Causas ms frecuentes de hipertiroidismo
En ocasiones una porcin de la glndula se independiza y se produce grandes
cantidades de hormonas sin responder a ningn control. Se puede tratar de un adenoma
(tumor benigno de la glndula tiroides) txico o de un bocio simple de larga evolucin
txico.

En etapas iniciales de tiroiditis autoinmune se puede producir tirotoxicosis

transitoria por liberacin de las hormonas al destruirse la glndula, antes de que ocurra
hipotiroidismo.
La tiroides subaguda suele aparecer despus de un episodio viral.
Para el diagnstico de las enfermedades tiroideas se dispone de diversos
mtodos que permiten establecer con exactitud el tipo de patologa presente:
La determinacin de T3 y T4 libres y de la hormona estimulante del tiroides,
TSH, parece ser la mejor forma de detectar alteraciones en la funcin tiroidea. La
prueba del TSH informa acerca del nivel de secrecin hipofisario, y en consecuencia del
estado de la glndula. Si los niveles son normales, el diagnstico es de eutiroidismo. Si
los niveles son altos se sospecha de hipotiroidismo. En este caso la prueba de la T 4 libre
dar la confirmacin en caso de ser baja, mientras que si es normal, habr que investigar
los anticuerpos antimicrosomiales en busca de patologa autoinmune. Cuando los
niveles de TSH son bajos se plantea el estudio de hipertiroidismo y al realizar la prueba
de la T4 los valores son elevados se confirmar el hipertiroidismo. Sin embargo, si los
niveles de T4 son normales, se realiza una medida de T3 que si es elevada confirmar el
hipertiroidismo y si es normal orientar hacia eutiroidismo.
La deteccin de anticuerpos antitiroideo circulantes frente al receptor tiroideo o
frente a estructuras tiroideas (antitiroglobulina, antiperoxidasa tiroidea) es interesante ya
que en algunas patologas se desarrollan estos anticuerpos como la enfermedad de
Graves-Basedow o en la tiroiditis de Hashimoto.
La prueba de la estimulacin con TRH evala el estado funcional de los
mecanismos secretores de la TSH. La tcnica consiste en la inyeccin IV de TRH. En
los individuos normales, la TSH comienza a aumentar en plasma a los pocos minutos de
la inyeccin, alcanzando el pico mximo entre los 20 y los 45 minutos posteriores y
cayendo a continuacin rpidamente. En la tirotoxicosis se observa ausencia de
respuesta o respuesta disminuida de la TSH.