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Piracicaba
2010
Estadual
de
Campinas.
Faculdade
de
RESUMO
Alteraes emocionais, como o estresse e a ansiedade, tm sido relacionadas
produo de biomarcadores salivares, porm os dados na literatura so
conflitantes com relao possibilidade da utilizao de tais biomarcadores como
ndices de estresse, complementares ao cortisol salivar.
Diante disso, nossa proposta estudar o efeito das alteraes emocionais,
associadas ao estresse acadmico, sobre parmetros cardiovasculares (presso
arterial e freqncia cardaca), concentrao salivar de cortisol e alfa amilase,
avaliao do fluxo salivar e do nvel de ansiedade, e avaliar se h correlao
significativa entre as concentraes de alfa amilase e os demais parmetros
avaliados.
ABSTRACT
Emotional changes such as stress and anxiety, have been related to the
salivary biomarkers production, but the data in the literature are conflicting regarding
the possibility of using such biomarkers as stress levels, additional salivary cortisol
levels.
Given this, our proposal is to study the effect of emotional changes, associated
with academic stress on cardiovascular parameters (blood pressure and heart rate),
salivary cortisol and alpha amylase concentrations, salivary flow and assessment of
the level of anxiety, and assess whether there is significant correlation between
concentrations of alpha amylase and other parameters.
SUMRIO
1. INTRODUO ............................................................................................ 7
2. REVISO DE LITERATURA ....................................................................... 8
3. PROPOSIO ............................................................................................ 13
4. CONSIDERAES TICAS ....................................................................... 13
5. MATERIAIS E MTODOS .......................................................................... 13
6. RESULTADOS ............................................................................................ 16
7. DISCUSSO ................................................................................................24
8 CONCLUSO .............................................................................................. 30
9 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................ 30
1. INTRODUO
A ansiedade pode ser definida como um estado emocional de um sentimento
de apreenso desagradvel, vago, acompanhado de sensaes fsicas como o
vazio no estmago, opresso no peito, palpitaes, aumento dos batimentos
cardacos, tremores, sintomas decorrentes da ativao do sistema simptico, ou
um sentimento de insegurana, causado pela expectativa de algum perigo, no
qual a fonte incerta, desconhecida (Graeff e Brando, 1999).
Fisiologicamente, a reao do estresse que torna possvel a sobrevivncia e
a adaptao dos seres vivos aos inmeros estmulos ambientais, nocivos ou no,
a que esto constantemente expostos. Porm quando esse estmulo mantido
por muito tempo ou muito intenso, o processo de adaptao pode no ocorrer.
Neste momento, desenvolve-se a fase de exausto da reao de estresse em que
o organismo se torna susceptvel a distrbios e patologias (Selve, 1936).
As alteraes emocionais podem ser de origem aguda ou crnica. Alguns
autores tm estudado alteraes induzidas por atividades acadmicas e outros
fatores associados ao curso de Graduao como uma situao de estresse
crnico. Foi observado que profissionais da sade apresentam altos nveis de
ansiedade (Newbury-Birch et al., 2002; Brzin, 2007), e que este fenmeno
parece ter incio durante a sua formao acadmica.
No campo da Odontologia, a ansiedade e o estresse tm sido associados a
reaes alrgicas e inflamaes bucais, lcera aftosa recorrente (Fbin e Fbin,
2000), doenas periodontais e halitose (Queiroz et al., 2002).
Nesse sentido, tem sido proposta a utilizao das concentraes salivares de
hormnios, citocinas e outras substncias como biomarcadores do estresse (SoQuee e Choon-Huat, 2007). As protenas salivares so importantes para a
homeostasia bucal. Dentre elas, a alfa amilase que tem sido estudada como um
marcador salivar de estresse por representar a atividade do sistema nervoso
autnomo simptico (Nater e Rohleder, 2009).
Diante disso, nossa proposta foi estudar o efeito do estresse acadmico, em
estudantes de Graduao, do gnero masculino, da Faculdade de Odontologia de
Piracicaba, sobre as produes salivares de alfa amilase e cortisol, como
marcadores bioqumicos do estresse.
7
2. REVISO DE LITERATURA
Atualmente, o termo estresse amplamente utilizado na linguagem cotidiana
e nos meios de comunicao. Designa uma agresso, que leva ao desconforto,
ou as conseqncias desta agresso. uma resposta a uma demanda, de modo
certo ou errado (Berkin, 1973).
Os seres humanos so constitudos para conviver constantemente com
situaes de estresse, porm, doses excessivas (intensas ou prolongadas)
podem trazer srios problemas psicolgicos e fsicos (Nahas, 2001). O
fisiologista americano Walter Cannon havia definido a reao de luta-ou-fuga,
como o processo de ativao de fatores endcrinos envolvendo o eixo composto
pelo sistema nervoso simptico e a medula adrenal, quando animais eram
expostos a situaes ou fatores ameaadores de sua homeostase Os hormnios
sintetizados e liberados pelo crtex adrenal (glicocorticides), bem como as
catecolaminas, sintetizadas e liberadas pelos neurnios simpticos e pela
medula adrenal so considerados marcadores da resposta de estresse. Leva-se
em considerao que o principal glicocorticide liberado pelo crtex adrenal, em
situaes de estresse, o hormnio cortisol. Ele possibilita o aumento de acar
no sangue, que ser usado como energia para agir nessas situaes
(Greenberg, 2002). Em indivduos frente a agentes estressores crnicos
constantes, a presena em excesso de cortisol extremamente prejudicial
sade. Este hormnio to txico para o crebro que acaba matando ou
danificando bilhes de clulas cerebrais, podendo ser responsvel pelo Mal de
Alzheimer (Khalsa e Stauth, 1997).
De acordo com o Medical Subject Headings, estresse definido como um
processo patolgico, o qual resulta da reao do corpo s foras externas e
condies anormais que tendem a interferir na homeostase do organismo. O
estresse psicolgico uma condio da existncia humana e um fator na
expresso da doena. Neste sentido, no so apenas os eventos estressantes
dramticos que contribuem para sua manifestao, mas um conjunto de eventos
do dia a dia que elevam as atividades do sistema fisiolgico e que,
8
de
aspectos
que
podem
atuar
como
desencadeadores
ou
potencializadores do estresse.
Assim, tem sido sugerido que a exposio crnica ao estresse psicolgico
possa ser responsabilizada pelo aumento dos nveis pressricos, conduzindo ao
aparecimento de hipertenso arterial sistmica (Borghi, Veronesi et al., 2004);
(Carrol, Smith et al., 2001); (Fauvel,2002); (Matthews, Katholi et al., 2004);
(Steptoe e Marmot, 2005)).
A maneira mais fcil de detectar a doena prestar ateno a todas as
alteraes do organismo. Hans Selye (1956) afirma que o estresse fisiolgico
uma adaptao normal, no entanto, quando a resposta patolgica em indivduo
mal-adaptado, registra-se uma disfuno, que leva a distrbios transitrios ou a
doenas graves.
Um mtodo que tem sido amplamente utilizado para avaliar os nveis de
estresse a saliva, atravs da dosagem de alguns constituintes marcadores do
estresse. A saliva constituda predominantemente por gua (97-99,5%)
originada do plasma presente na clula acinar, alm de conter constituintes
orgnicos e inorgnicos (Chicharro et al., 1998). O controle da secreo salivar
mediado por uma ao combinada de estmulos simpticos e parassimpticos. A
inervao parassimptica provoca vasodilatao, o que aumenta a quantidade e
a fluidez da saliva contendo baixos nveis de compostos orgnicos e inorgnicos.
A inervao simptica provoca vasoconstrio, o que confere um baixo volume
do fluxo salivar, porm contm elevados nveis de protenas, especialmente amilase, e compostos inorgnicos. Este estmulo faz com que a saliva se torne
mais viscosa (Schneyer, 1976; Dennis e Young, 1978).
Apesar dos indcios sobre a participao da hipossalivao e da diminuio
da atividade imunolgica, induzidas pelo estresse ou ansiedade, ainda no esto
esclarecidos os mecanismos pelos quais o estresse e a ansiedade contribuem
para a ocorrncia de alteraes na homeostasia bucal.
9
der Kar et al., 1991). Simultaneamente, ocorre ativao do eixo sistema nervoso
simptico medula adrenal, o que resulta em aumento dos nveis plasmticos de
catecolaminas. Desta forma, o cortisol considerado um biomarcador do
estresse em resposta ativao do eixo HHA, enquanto que a alfa-amilase
parece estar associada a mudanas na atividade do sistema nervoso simptico.
Neste contexto, Chatterton et al.(1996) relataram que houve significativa
associao entre a concentrao de alfa-amilase e nveis sanguneos de
catecolaminas. Porm, apesar destas evidncias, mais estudos sobre os efeitos
de situaes estressoras sobre sua secreo ainda so necessrios para a sua
caracterizao como um biomarcador do estresse.
O mau hlito ou halitose um odor desagradvel que emana da cavidade
bucal e, na maioria dos casos, resultado do metabolismo da microbiota bucal
(Tonzetich, 1976). Os odores desagradveis emanados da cavidade oral
resultam da produo de compostos sulfurados volteis e compostos orgnicos
volteis, de origem putrefativa, por ao das bactrias gram-negativas
anaerbias da microbiota bucal sobre aminocidos que contm enxofre. Um dos
fatores que contribuem para a ocorrncia da halitose a reduo do fluxo salivar
(Shinjiro et al., 2003). A reduo do fluxo salivar enfraquece os mecanismos de
limpeza mecnica da cavidade bucal e predispe a flora bucal ao crescimento e
proliferao de microorganismos gram-negativos responsveis pelo mau odor
(Messadi et al., 1997 ). Alm disso, sintomas psicopatolgicos e o estresse
tambm tm sido relacionados ao aparecimento do mau hlito (Queiroz, 2002 e
Kurihara 2002). Queiroz et al. (2002) observaram, em alunos de graduao, no
dia da aplicao de uma avaliao acadmica, que a concentrao de
compostos sulfurados volteis estava aumentada e o fluxo salivar estava
reduzido, comparado a uma semana antes e uma semana aps a avaliao.
Estes efeitos foram relacionados ansiedade dos alunos frente ao exame
acadmico. Calil et al., (2006) observaram tambm aumento na concentrao
bucal de compostos sulfurados volteis aps uma situao experimental
ansiognica. Nesse trabalho, um grupo de homens saudveis, sistmica e
oralmente, foi submetido a um teste laboratorial de induo de ansiedade. Alm
11
12
3. PROPOSIO
Estudar o efeito de alteraes emocionais, associadas a atividades
acadmicas, sobre o nvel de ansiedade, presso arterial e freqncia cardaca,
fluxo salivar, secreo salivar de cortisol e alfa-amilase e mensurao dos
compostos sulfurados volteis, em alunos dos 4 anos do curso de Graduao em
Odontologia da Faculdade de Odontologia de Piracicaba (UNICAMP), e avaliar se
h correlao significativa entre as concentraes salivares de alfa-amilase e os
outros parmetros avaliados.
4. CONSIDERAES TICAS
Este projeto foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa, CEP - FOP,
UNICAMP, em dezembro de 2007, sob o nmero de protocolo 108/2007.
Aps a seleo, os voluntrios receberam um material informativo contendo a
explicao dos procedimentos que foram utilizados, as recomendaes para o dia
do teste, bem como o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Neste termo,
foram explicados os objetivos e as justificativas para a realizao do estudo, os
riscos e benefcios aos quais estariam expostos, e demais itens descritos nas
Diretrizes do Conselho Nacional de Sade (Resoluo 196/96). Foi tambm
garantido ao voluntrio o direito de se recusar em participar do estudo em qualquer
momento, sem nenhum prejuzo, e lhe foi informado o telefone das pesquisadoras
para a soluo de quaisquer dvidas que pudessem surgir posteriormente. Aps a
leitura do documento, foram esclarecidas todas as dvidas dos voluntrios, que
posteriormente assinaram duas vias do termo. O voluntrio recebeu uma das vias e
a outra foi arquivada pela pesquisadora.
5. MATERIAIS E MTODOS
14
de
trs
questionrios:
BHS
(Escala
Beck
de
Desesperana),
6. RESULTADOS
Todos os voluntrios selecionados foram avaliados quanto aos parmetros
cardiovasculares (presso arterial e freqncia cardaca), compostos sulfurados
volteis, fluxo salivar e em relao s concentraes salivares de cortisol, alfaamilase e protenas totais.
Em relao aos parmetros cardiovasculares, podemos observar que no
houve diferena significativa em nenhum dos parmetros avaliados entre os alunos
dos quatro anos de graduao que foram analisados (p<0,05).
16
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
B
100
75
50
25
0
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
A
125
80
70
60
50
40
30
20
10
0
1 ano
Ano da Graduao
3 ano
4 ano
80
Frequncia cardaca
(bpm)
100
2 ano
Ano da Graduao
75
50
25
0
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
Ano da Graduao
70
60
50
40
30
20
10
0
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
Ano da Graduao
Figura 1. Presso arterial sistlica (A), diastlica (B) e mdia (C) e frequncia cardaca (D) de
voluntrios dos quatro anos da graduao da Faculdade de Odontologia de Piracicaba
(FOP)/UNICAMP. N = 19 voluntrios do primeiro, 14 do segundo, 13 do terceiro e 14 voluntrios
do quarto ano da graduao. Os resultados esto apresentados em mdia erro padro.
17
CSV (ppb)
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
Ano da Graduao
Figura 2. Concentrao bucal de compostos sulfurados volteis de voluntrios dos quatro anos da
graduao da Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)/UNICAMP. N = 19 voluntrios do
primeiro, 14 do segundo, 13 do terceiro e 14 voluntrios do quarto ano da graduao. * Diferena
estatstica em relao aos demais anos da graduao. Os resultados esto apresentados em
mdia erro padro. * Diferena estatstica em relao aos demais anos da Graduao.
18
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
B
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
Ano da Graduao
0.5
AB
B
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
Ano da Graduao
Figura 3. Fluxo salivar (A) e concentrao salivar de protenas totais cortisol (B) de voluntrios
dos quatro anos da graduao da Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)/UNICAMP. N =
19 voluntrios do primeiro, 14 do segundo, 13 do terceiro e 14 voluntrios do quarto ano da
graduao. Letras diferentes representam grupos estatisticamente diferentes. Os resultados esto
apresentados em mdia erro padro. Letras diferentes representam grupos estatisticamente
diferentes.
19
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
B
Alfa-amilase (U/mL)
Cortisol (ug/dL)
0.75
0.50
0.25
0.00
1 ano
2 ano
3 ano
120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
4 ano
1 ano
Ano da Graduao
2 ano
3 ano
4 ano
Ano da Graduao
Figura 4. Concentrao salivar de cortisol (A) e alfa-amilase (B) de voluntrios dos quatro anos da
graduao da Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)/UNICAMP. N = 19 voluntrios do
primeiro, 14 do segundo, 13 do terceiro e 14 voluntrios do quarto ano da graduao. Os
resultados esto apresentados em mdia erro padro.
DIMENSO
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
Fator 1
16,75
19,25
22,14
21,37
Fator 2
Descrena (DE)
6,50
7,62
8,57
7,62
Fator 3
29,37
26,00
29,14
26,62
20
Escore
Nvel
1 ano
2 ano
3 ano
4 ano
0-4
Mnimo
87,5%
87,5%
85,7%
62,5%
5-8
Leve
12,5%
14,3%
37,5%
12,5%
9-13
Moderado
21
14-20
Grave
7. DISCUSSO
A vida consiste de um equilbrio dinmico, constantemente alternando
estados de estresse e homeostase. Desta forma, as foras que alteram a
homeostase so equilibradas por respostas adaptativas geradas pelo organismo.
Os organismos multicelulares se adaptam a essas situaes atravs de complexas
alteraes neurais, humorais e celulares, envolvendo mltiplos rgos e tecidos. O
organismo
humano
desenvolveu
um
sistema
complexo,
constitudo
por
em
relao
protenas
salivares,
conceito
de
anfifuncionalidade (Levine, 1993; Bosch et al., 2003) foi utilizado para descrever
como estas atuam para regular a sade oral. Eles sugerem que as protenas
podem apresentar propriedades tanto danosas, favorecendo o potencial
patognico de outros organismos, quanto protetoras, contribuindo para a defesa
do hospedeiro, dependendo do stio ou local de ao da protena. Por exemplo, a
alfa-amilase, quando em soluo, pode facilitar a eliminao de alguns tipos de
microrganismos da cavidade oral e, por outro lado, quando adsorvida superfcie
dental, facilita a aderncia dessas bactrias (Levine, 1993).
Ainda em relao homeostasia bucal, a halitose o mau odor originado
principalmente na cavidade bucal (Attia e Marshal,1982), e se deve formao
dos CSV partir da metabolizao bacteriana de aminocidos sulfurados
(Tonzetich , 1977).
O mau hlito pode ser originado por numerosos fatores, como gengivite,
periodontite, prteses no higienizadas, inflamao nasal, sinusite crnica, diabetes
mellitus, cirrose heptica, lceras gastrointestinais, dentre outras (Attia e Marshal,
24
1882). Na maioria dos casos, a halitose tem origem na orofaringe (cerca de 90%),
sendo que em 40% dos casos a origem desta condio se deve formao de
saburra lingual, principalmente no tero posterior do dorso da lngua (Springfield et
al., 2001).
Embora a maioria dos casos de halitose seja de origem bucal, o estresse
tambm tem sido sugerido como um agente etiolgico do mau hlito, j que
muitas vezes o paciente no apresenta nenhuma evidncia clnica de patologias
bucais ou desordens sistmicas que justifiquem sua causa. Diante disso, alguns
estudos tm avaliado a influncia das alteraes emocionais (estresse e
ansiedade) sobre a produo de CSV (Kurihara e Marcondes, 2002; Queiroz et al.,
2002; Calil e Marcondes, 2006). Kurihara e Marcondes (2002) observaram
aumento nas concentraes de CSV em ratos de laboratrio submetidos a
estresse por imobilizao ou natao. J um estudo envolvendo humanos avaliou
a produo de CSV no dia de um exame acadmico em comparao a uma
semana antes e uma semana aps o exame, observando um aumento na
concentrao desses compostos no dia da situao estressante (Queiroz et al.,
2002). Um estudo conduzido em nosso laboratrio constatou o aumento da
produo de CSV em homens e mulheres saudveis, quando submetidos a um
vdeo ansioltico, o Video Recorded Stroop Color Word Test (Calil e Marcondes,
2006). Assim, os resultados deste estudo reforam as evidncias sobre a
influncia de fatores emocionais na produo destes compostos.
Hans Selye (1936) definiu o estresse como a resposta no especfica do
organismo frente a agentes ameaadores de sua integridade. O avano de
tcnicas e mtodos tanto de coleta de material biolgico, quanto de anlises
destes tornaram esta definio ultrapassada.
Os glicocorticides participam em todas as etapas da resposta de
estresse, e so, por isso, considerados marcadores biolgicos desta resposta. A
determinao da concentrao salivar de cortisol , atualmente, a tcnica mais
escolhida para essa determinao (Garcia, 2008). Entre os glicocorticides, o
cortisol o mais expressivo em humano. O papel dos glicocorticides relevante
do comeo ao fim da resposta de estresse, e ainda, indiretamente, continua aps
o desaparecimento do agente estressor. Segundo Sapolsky et al. (2000), os
25
uma
supresso
transitria
do
eixo
hipotlamo-pituitria-adrenal
(HPA),
de
ansiedade
depresso.
Alm
disso,
caractersticas
de
8. CONCLUSO
Alunos do terceiro ano da graduao apresentaram maiores valores de CSV em
relao aos demais anos, reforando achados de estudos anteriores em nosso
laboratrio sobre a relao entre estresse e halitose;
No houve diferena entre os anos da graduao nos demais parmetros
avaliados;
Observa-se que o estresse nos anos iniciais do curso tende a ser moderado,
apresentando nveis aumentados nos anos pr-clnicos e clnicos (3 e 4 anos);
Os achados sugerem a necessidade de uma ateno especial nos estgios prclnicos e clnicos, atravs de servios de suporte (apoio psicolgico, cursos),
visando melhoraria do bem-estar dos estudantes.
9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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34
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36
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