57

Sntesis y Anlisis de Hidroxiapatita

Sntesis y Anlisis de Hidroxiapatita

Martha DoreUy Rodrguez B.l

REsUMEN

Grupo de Control:
HA, no reabsorbible en grnulos malla 20-40 , norteamericana'

Se realiza un estudio sobre hidroxiapatita ceramizada,

sintetizada en Colombia, para valorar sus propiedades
fisicoqumicas,
comparndola
con dos productos
norteamericanos, segn normas de la USP en relacin con
la proporcin cuantitativa de CaIP, estructura mediante
espectroscopa infrarroja, textura mediante microscopa
electrnica de barrido, estabilidad y determinacin de
impurezas, encontrndose que el producto en estudio posee
propiedades equivalentes con los productos de control.

A.

DETERMINACIN QuMICA CUANTITATIVA DE CALCIO y

FSFORO

La determinacin de Calcio, Ca, se realiza por el mtodo de

titulacin con EDTA [2].
La determinacin
de Fsforo,
P, se realiza por
espectrofotometra UV, con la tcnica de reduccin con cido
ascrbico segn Murphy y Riley [9].

INTRODUCCIN

n los ltimos decenios se han empleado diferentes

biomateriales como vidrio alumina, polietileno y cermicas
de fosfato de calcio para la reconstruccin de defectos seos.
Entre stos la hidroxiapatita, HA, ha presentado resultados
satisfactorios como material de implante seo; sus principales
ventajas son las excelentes biocompatibilidad y bioactividad.
Las propiedades fisicoqurnicas de la hidroxiapatita, como

su composicin,
biorresorcin.

estructura

y textura,

determinan

su

En el mtodo de sntesis presentado a continuacin se obtiene

una HA pura, estequiomtrica, estructural y superficialmente
similar a la parte mineralizada del tejido seo. La HA se ha
diseado para permitir fibrovascularizacin cuando se implanta.
El uso clnico de la HA consiste en la aplicacin sola o en
combinacin con hueso para reconstruccin de defectos seos
craneomaxilofaciales;
como implante intraorbitario
en
oftalmologa y para el recubrimiento de prtesis o implantes
de oseointegracin.

Se toman cinco muestras al azar de cada sntesis, y se

adecuan segn se estipula en la USP
[11], se valoran
contenidos de Ca y P y se calculan las relaciones molares Cal
P respectivas.

xxm

B.

EsPECTROSCOPA

INFRARROJA.

Los espectros IR de las muestras dispersadas en KBr(1mgl

300 tableta), se obtuvieron en la regin del espectro entre 4.000
y 250 cm", usando un espectrofotmetro PeIkin Elmer 1750
IR-FT Y 467 IR-FT.

C.

DIFRACCIN RAYOS

X.

Los difracto gramas se tomaron en difractmetro Philips,

utilizando cobre, y con un barrido entre cero y 70 grados.

D. MICROScopfA

ELECTRNICA DE BARRIDO(SEM)

El anlisis de estructura superficial se realiza mediante

ampliacin con microscopa electrnica de barrido.

1. MATERIALES

y MTODOS

ANATICOS.

Se estudia HA sintetizada, material ceramizado, en grnulos de

tamao de partcula aproximado malla 20-402

I
2

Quimica Fannaceutica, Universidad Nacional de Colombia

Colombia IMPLASTIC - HA, Madrob Farmacutica

, HA 1: Orthomatrix, USA; HA 2: CaIcitite, CaIcitek, USA

58
Revista Ingeniera e Investigacin No. 41 Diciembre de 1998

Para observacin al microscopio electrnico se recubren

con una pelcula de oro por el mtodo de pulverizacin
catdica al vaco. Se colocan las muestras en una cmara
de vaco que se lleva a 0,3 Torr y se establece una diferencia
de potencial de 1.600V entre el nodo de oro y la muestra
durante un tiempo de un minuto, a 15 mA. Se toman
microfotografas con aumento 260x 1360x y 341x a 30 KV
de energa del haz de electrones.

E. PRUEBAS
LMITES
OFICIALES
USP XXIll PARA
LA
DETERMINACIN
DEIMPUREZAS.
Segn la metodologa oficial descrita en la USP xxm
[11,12] se cuantifica la presencia de As, metales pesados ,
prdida por ignicin, substancias insolubles en cido,
substancias solubles en agua, carbonato, cloruro, sulfato,
nitrato, Bario, sal dibsica y xido de calcio.

F.

ENSAYO DE ESTABILIDAD ACELERADA.

Se aplic el test de disolucin USP xxm [11] para

tabletas, dentro de las siguientes condiciones:
Medio: Buffer pH 6,5
Volumen del medio: 100m1
rpm: 50
Equipo: Sistema para test de disolucin oficial USP XXllI
con paletas.
Cantidad de granulado por vaso: 1 gramo exactamente
pesado.
Temperatura: 37 -c
Nmero de muestras: seis para cada material.
Tiempo: 10 meses. Al cabo de ste tiempo se analiz el
contenido de Ca disuelto por precipitacin de oxalato de
calcio, mtodo USP XXIII.

y 12 con amoniaco.
Todos los reactivos son reactivos analticos Merck y el
agua destilada libre de CO2.
El reactivo limitante es el nitrato de calcio.
El procedimiento sigue las etapas planteadas por Hayek
y Jarcho [1,6]: precipitacin con agitacin fuerte y a
temperatura ambiente, centrifugacin, filtracin, secado
y sinterizacin.
Con el objetivo de obtener una HA estequiomtrica con
las mejores propiedades fisicoqumicas en cuanto a
composicin, estructura
y textura para su ptimo
desempeo como material de implante seo, se han
introducido dos modificaciones a los mtodos descritos que
son: 1) Forma y velocidad de adicin de las soluciones de
calcio y de fsforo y 2)La atmsfera presente.
Fijando las condiciones del proceso de sntesis se realizan
cinco experimentos de obtencin de HA de acuerdo con el
siguiente procedimiento [10]:
La precipitacin se efecta en un reactor de vidrio de
dos bocas adaptadas para cargar las soluciones previamente
estandarizadas de calcio y de fsforo. El reactor contiene
agua ajustada a pH a 11-12 con amoniaco, en agitacin
magntica. En stas condiciones se inicia la adicin
simultanea de las soluciones reactantes. Todo el sistema de
sntesis debe estar aislado dentro de una cmara de atmsfera
controlada saturada con gas nitrgeno. Las dems etapas
del proceso de sntesis siguen lo descrito en el mtodo
referenciado.

111.

RESULTADOS.

A.COMPOSICIN.

11.

SNTESIS QUMICA.

El procedimiento se basa en la reaccin de precipitacin

en agua de sales de calcio y de fsforo en medio alcalino
segn la ecuacin:

La forma y la velocidad de adicin de las soluciones de

calcio y de fsforo, influyen en la relacin molar Ca/P de la
HA, vase en el cuadro 1.
CUADRO

1.

CONDICIONES

PUADAS
OBTBNBR

CcnccIItnci6n de (NII.IIPQo
V_de_deloo
__

que es el mtodo ms respaldado para producir HA hasta el

momento [1].
Se emplean soluciones 0,5M de Ca(N03)2 4H20 y 0,3M
de (NH4)2HP04ajustadas respectivamente a pH entre 11

SoIad6ndeCa.mI_'
SoIad6ndeFoof_Cml_)

S_"CI11ooora

_CoIP

EXPERIMENTO

DH SINTBsIS

PARA

3
0.643
__o.m
4.0
3,5

0'100
028?
12.0
12.0

o.soo

2.2

2
0.386
02.llt
3,0
3,0

800
N.c.)

1.100
Nonnal

1100
Normal

1.100
N.c.)

1.100
N,.)

1.!I8+0.02

1.66+0.02

1,67+0.01

1,67+0.01

ISfntem
CcnccIItnci6n deCl(NO,.411O

EN CADA

IIIDROXIAPATlTA

0.'100
0282
2.2

~.18

O'1I?
12,0
12.0

59
Sntesis y Anlisis de Hidroxiapatita

Figura I.Espectro IR de hidroxiapatita

Figura 2. Espectro IR de hidroxiapatita

B.EsPECIRO

no reabsorbible

obtenida en las sntesis 3,4 y5.

calcinada a 800 y 1.100C.Slntesis

5,[pelkin Elmer 467 I.R.-FT.]

IR. ESlRUCIURA.

c. DIFRACCIN
Aparecen las bandas caractersticas de los grupos componentes
de la molcula (vense figuras 1 Y2)

DE RAYOS

X.

Los picos principales encontrados en el difractograma

(Vese Figura 3) son: 2,87 N, 2,60 N Y 2,07 AO.

l. Vibracin a 3570 crrr', tpica del grupo OH', para diferenciarla

de otros fosfatos de calcio y considerarla como apatita.
2. Estiramiento intenso y ancho entre 1.000 y 1.150 cm", tpico del
fosfato de apatita. A diferencia de otros fosfatos (banda ms
aguda que se explica por la presencia del grupo OH)

!~~lL~~It_~,,!- Fl~_.~~~~~_~~~~~
0.81 ~
0.64

3. Banda caracterstica del grupo O-P-O, entre 550 y 600 cm" del
grupo fosfato.
0.25

4. Ausencia de bandas en la regin 1.420-6 cm" perteneciente a

carbonato.
5. El IR del producto sometido a S00-900 OC,presenta banda ms
aguda en la regin 1.000-1.150 cnr' y similar a la de los fosfatos
normales y puede incluir bandas en la zona 1.420-6 cm'l de CO
3.

0.16

_. _

_ -

---

60
Revista Ingenieria

Figura 3 Difractograma
sntesis 5 Difractmetro

de Rayos X de hidroxiapatita

MICROSCOPA

ELECTRNICA:

Diciembre

de 1998

no reabsosrbible,

de rayos x Philips. Picos principales:2,87

Ny

D.

e Investigacin No. 41

A ,2,60

2,07 N.

TEXTURA.

En las microfotografias SEM de las figuras 4 y 5 se observa

la unidad cristalina de la apatita, y su correspondencia con la
del producto sinterizado a l. 100C, cuya superficie se ve
formada por agregados cristalinos grandes (l.oooA en
promedio), densos y homogneos, tpicos de un material
cermico.

Figura 5. Microfotografla

de barrido electrnico
hidroxiapatita

SEM, 5000X, 30KV de

sntesis 5

Comparando la SEM se ve la similitud de la microestructura

del hueso (Vese figura 7) y el producto cermico ( Vese
figura 8).
El producto a 900C, muestra estructura
superficial
microporosa, con grnulos de menor tamao (200 A en
promedio) (Vese figura 6).

Figura 6. Microfotografla SEM, 560x de hidroxiapatita a 800C, sntesis l.

Figura 4 .. Microfotografla

de barrido electrnico

SEM I.OOOX donde se

identifica el cristal de la apatita [14]

Figura.7. Microfotografla

de barrido electrnico

SEM, 5450X,30KV,

hueso condilar humano. (Cortresia del Dr. Luis Alberto Campos)

...

de

61
Sntesis y Anlisis de Hidroxiapatita
F. DETERMINACIN
USPXXIll.

DE IMPUREZAS

o ENSAYOS

LfMrrEs

OFICIALES

Las especies determinadas segn la USP, reportan resultados

inferiores a los lmites establecidos(cuadro 2), indicando que
no hay impurezas.
CUADRO

2.

PRUEBAS

LIMl11!S FlaALES uSP XXIII PARA HlDROXlAPArnA,

EFECIUADAS

Figura 8. Microfotografia

Sntesis 5 SEM, 680X,30KV,

AL PRODucro

DE

HA

OBTENIDO.

de Hidroxiapatita

no reabsorbible

G.

EsTABIUDAD

ACELERADA.

En todas las muestras analizadas la prueba de calcio es

negativa.(Vese cuadro 3)
CUADRO
ACELERADA

3.

REsULTADOS

DEL ESTUDIO

DE LA HIDROXlAPArnA
SlNTEslS

NO

5,VERSUS

COMPARATIVO

DE ESTABnIDAD

REABSORBmLE OBTENIDA

HAly

SEGN

LA

HA2.

Pruebas Cualitativas de Calcio, 10 meses, 37"C, pH 6,5

Figura 9. Microfotografa

de barrido electrnico

de hidroxiapatita

no reabsorbible;

SEM, 1360X, 30KV,de

sntesis 5.

IV. DISCUSIN
A.COMPOSICIN.

l. ADICIN

DE LOS REAcnvOS.

Cuando las especies se adicionan a tasas aproximadamente

iguales y a un mismo tiempo(12ml/min), la composicin de
HA obtenida se favorece, lo que permite aceptar que se optimiza
la composicin de la relacin molar CaIP=I,67.

2. A1MSFERA INERTE.

Figura.IO.

Microfotografia
hidroxiapatita

E.

DENSIDAD

de barrido electr6nico,SEM
no reabsorbible,

341X,30KV,

de

sntesis 5

VERDADERA.

Se determin una densidad de 3,1 g/cm' de acuerdo con las

normas ASTM para HA.

La ausencia de bandas caractersticas de COl-, en los

. productos obtenidos en las sntesis 4 y 5( figuras 1 y 2),
demuestra la importancia de evitar la presencia de aire
ambiental durante el proceso de sntesis, constituyendo una
condicin sine qua non para obtener HA estequiomtrica libre
de carbonato.

62
Revista Ingenieria e Investigacin No. 41 Diciembre de 1998
Considerando los resultados obtenidos en los anlisis
fisicoqumicos de stos tres productos se puede afmnar:
El efecto de la temperatura
en las propiedades
fisicoqumicas del producto se logra al someterlo entre 1.000
y 1.1 OO"C, pues se pierde agua y carbonato y se produce un
material cermico denso,equivalente a una oxihidroxiapatita
con un Kps de lx1Q-1I7M.(HA estequiomtrlca) [1]. (vase
figura 8).

1.La relaci6n CalP=1,67 es igual en los tres casos, lo que

significa composici6n qumica similar o equivalente.(vase
cuadro 4)
CuADRO

4. EsruoJO

roMPARATIVO

HA OBTENIDA

RaAaN

DI! CXlMPOSKlN.
VERSUS

HAI

MOUR

CaIP:

HAl.

I
El proceso de sinterizaci6n permite la producci6n de una
HA que por ser una porcelana es de consistencia dura, con
una constante de solubilidad de lxlQ-lI'M (=O) y se puede
definir como no reabsorbible cuando se implanta en los tejidos
del cuerpo. Esta es la molcula de HA pura, estequiomtrlca
cuya relaci6n CaIP=1,67, su espectro IR da las bandas OH' a

2. En los espectros IR de las Figuras 11 Y 1 se aprecian los

grupos presentes en la molcula Cas (OH) (PO..>3:OH',O.P.O,
P=O, destacndose en los tres productos el estiramiento
agudo a 3.570 cm" correspondiente al OH'y la banda ancha
a 1.000 cm" correspondiente al fosfato apatitico, indicando
que la estructura qumica es igual en los tres productos.

3.570 cm" muy aguda y del fosfato apatitico a 1.000-1.100

cm", ancha y su microestructura

es cristalina y organizada en

grnulos
grandes
como corresponde
cermico.(vanse figuras 8 Y 9)

a un material

Al someter el s6lido precipitado a una temperatura de 8000c,

no se logran propiedades cermicas, el producto es menos
resistente y puede acomodar agua y/o carbonato en su molcula
segn lo aclaran los espectros de las figuras 2 Y6. En ste caso
el producto es ms soluble (Kps lxlQ-6'M), comparable a una
hidroxiapatita calciodeficiente
relaci6n CaIP es 1,50.

C~(HPO..>(P04)S OH, cuya

4. Ptnu!zA

Figura 11.Espectro IR de los productos control de USA:(HAI

y HA2)

3. La SEM permite observar en todos los casos una unidad

cristalina caracterstica de la hidroxiapatita, indicando que son
productos puros y equivalentes. (vanse figuras 12, 13, 14).

De acuerdo al difractograma de la Figura lO, se puede

establecer la pureza del material obtenido en la sntesis 5. Los
picos principales observados son caractersticos del cristal de
la hidroxiapatita, por lo que se identifica el producto como tal.
Con las sntesis 1 y 2, se observan picos de beta whithlockita
en una proporci6n aproximada del 30%.

B.PATRONES

Se tomaron como patrones dos productos norteamericanos

empleados exitosamente en la clnica para la reconstrucci6n
de defectos 6seos, a los cuales se les analizaron las propiedades
fisicoqumicas de composici6n, estructura y textura por los
mtodos descritos en ste estudio.

Figura 12. Microfotografia

de barrido electrnico
Producto

control

HA l

SEM 680X.30KV.del

63
Sntesis y Anlisis de Hidroxiapatita
hidroxiapatita pura , estequiomtrica y con propiedades de
superficie y estructura idneas como material de implante
seo en forma reabsorbilble o no reabsorbible.

4.De acuerdo a los resultados de estudio de estabilidad

acelerada pueden caracterizarse los tres productos como no
reabsorbibles.

BmUOGRAFA
1.

BONEL. G. el al: Apatitic caJcium ortbopbospbaIa lUIdrelaled COIIIpOUDds fIX

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2.

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3.

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4.

Figura 13. Microfotografia

de barrido electrnico

producto control

SEM,680X,30KV,

S.

HENCH, L.H: "Bioactive cermica",

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S23;S4-71; 1988.

6.

JARCHO,M., BOLEN,C.H Hydroxyapatite.ynIbeaia lUIdcbaracteriaatioo indcnae

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11. UNITED STA TES PHARMACOPEIA USP XXIII. pp 224y 2S9
Figura 14.Microfotografa

de barrido electrnico

hidroxiapatita

no reabsorbible,

12. ---

SEM, 680X. 30KV,de

sntesis

13.

---o pp. 1724- 1728.

14. WELTON, J.E. SEM Pelrology Alias. 1be American Association

Geo1ogy.Oldahoma.1984.pp.176-177.

AGRADECIMIENTOS

El autor expresa sus agradecimientos

al Dr. Fabio
Crdoba por su valioso aporte en la investigacin qumica
y al Dr. Luis Alberto Campos por su generosa
contribucin en la investigacin clnica del producto.

CONCLUSIONES

De acuerdo con los anlisis fisicoqumicos realizados,

producto en estudio IMPLASTIC-HA:

pp 1791-1792 Y 2223-2224.

el

1. Es HA pura.
2. Posee propiedades fisicoqumicas que le permiten ser
utilizado como material de implante seo.
3. Es equivalente a los productos de fabricacin norteamericana
usados como controles.
4. Con base en stos anlisis se puede inferir que el mtodo de
sntesis empleado da lugar a un producto identificado como

of Petroleum