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Qu es?
El urinocultivo (cultivo de orina), o urocultivo como tambin se denomina, es una prueba (anlisis)
de laboratorio, que tiene como finalidad detectar la presencia de microorganismos infecciosos,
fundamentalmente bacterias y hongos, en la orina de las personas.
Para qu se utiliza?
La orina es un lquido transparente y amarillento cuyas funciones son la eliminacin de residuos
txicos del organismo y la regulacin y control de mecanismos bsicos orgnicos, que, en
condiciones normales es asptico, es decir, que no contiene microorganismos infecciosos. Sin
embargo, en situaciones no normales la orina puede contener bacterias (lo que se conoce como
bacteriuria) que, si estn presentes en un nmero o concentracin suficientemente elevados,
pueden causar una infeccin urinaria, o mejor, una infeccin del tracto urinario. Dependiendo de la
parte de este tracto que est afectada por la infeccin, sta recibir diferentes
denominaciones: cistitis, uretritis, protatitis, orquiepididimitis,pielonefritis o absceso renal.
Las infecciones del tracto urinario se pueden producir tanto en la comunidad como en personas
hospitalizadas, en las que habitualmente revisten una mayor gravedad, y son ms frecuentes en las
mujeres que en los hombres.
Las manifestaciones clnicas de estas infecciones pueden inducir al mdico a sospechar su
existencia e incluso ser suficientes en ciertos casos para establecer el diagnstico de infeccin,
pero en otros el diagnstico de certeza slo se puede establecer mediante la prctica de un
urinocultivo (urocultivo). En l se identifica el microorganismo (bacteria u hongo) que est presente
en la orina y, a partir de ah, mediante estudios adicionales se puede determinar la sensibilidad de
esos microorganismos a los diferentes antibiticos y seleccionar el ms adecuado para
combatirlos.
La orina a recoger ser la de primera hora de la maana, dado que es cuando est ms
concentrada y ofrece las mejores condiciones para su estudio, en este caso, su cultivo.
Antes de iniciar la miccin, la mujer separar con su mano izquierda los labios vaginales
mientras con la derecha sostiene el recipiente estril. El hombre ha de retraer el
prepucio dejando al descubierto la cabeza del pene.
Una vez hecho esto se iniciar la miccin sin recoger la primera parte de ella. Esa
primera orina que no se recoge servir para arrastrar y eliminar los grmenes que haya
en la uretra. S se recoger la orina de la porcin media de la miccin y nuevament
En el caso de las nias o nios pequeos la recogida de la muestra de orina se realizar en una
bolsa o colector estril, especficamente diseado al efecto, que le proporcionar el centro sanitario
o que podr adquirir en la farmacia, procediendo como sigue:
Lavar con agua y jabn la zona genital del nio o nia y aclarar cuidadosamente para
eliminar cualquier resto de jabn. Secar con una toalla limpia. No utilizar desinfectantes.
Dado que los nios de esta edad no tienen todava control de esfnteres, es decir, no
pueden orinar a voluntad, se ha de observar el colector al menos cada media hora para
comprobar si se ha producido la miccin. Si sta no ha tenido lugar durante la primera
hora, se ha de retirar el colector y colocar uno nuevo repitiendo el procedimiento desde
el principio
Una vez recogida orina suficiente (de 5 a 10 cm3 es suficiente) se ha de retirar y cerrar
el colector de acuerdo a las instrucciones que constarn en l.
Otras consideraciones
La obtencin de una muestra de orina para cultivo no requiere ninguna preparacin especial por
parte del paciente. Por lo dems, se trata de una tcnica simple y absolutamente segura que no
requiere ninguna precaucin ni entraa riesgo o complicacin algunos.
UROCULTIVO
1- Objetivo
Realizaremos un urocultivo para la determinacin de los diferentes tipos de microorganismos
presentes en dos muestras de orina. Realizando las diferentes pruebas para el diagnostico de las
2- FUNDAMENTO
El urocultivo se basa en la identificacin del nmero y de los tipos de bacterias presentes en la
orina. Es necesario que el mtodo de recogida sea el adecuado siguiendo unos protocolos de
higiene evitando as posibles contaminaciones de la muestra.
Para la identificacin del nmero de bacterias, realizaremos un recuento bacteriano (Hygicult TPC)
y para la identificacin de los tipos de bacterias presentes en la orina y sus patologias, se realizara
una siembra en medios de cultivo diferentes con la tcnica de siembra comnmente utilizado en el
urocultivo, segn el tipo de microorganismo comnmente encontrado en la muestra.
Los diferentes cultivos que vamos a utilizar sern:
CLED, Agar: Es un medio de cultivo diferencial para aislar y contar las bacterias presentes en la
orina. Tambin se utiliza para la diferenciacin de bacterias fermentadoras de la lactosa o las no
fermentadoras. Es comnmente utilizado para el crecimiento de enterobacterias y bacilos Gram
presentes en las orinas patolgicas.
CPS3: se utiliza para el aislamiento, recuento e identificacin directa de Escherichia coli,
Proteus y Enterococcus.
CNA: es un medio selectivo para el aislamiento y permite el crecimiento de bacterias Gram
positivas, aunque en ocasiones puede haber crecimiento de alguna Gram negativas.
Agar nutritivo: medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus
requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. En nuestro caso
ser utilizado para el cultivo de Cndida albicans y Streptococcus.
Por otro lado utilizaremos el kit Urin system, panel utilizado para el contaje, identificacin
presuntiva y susceptibilidad antibitica de microorganismos presentes en infecciones urinarias.
Este consta de 24 pocillos los cuales se dividen en 2 pocillos para el recuento, 7 pocillos de cultivo
para la identificacin y 15 para las pruebas de sensibilidad (antibiograma).
Tambin se realizar un examen macroscpico y microscpico de la muestra y del cultivo. En el
examen macroscpico de la muestra se deber observar el color, olor, la densidad, turbidez,
volumen, la qumica seca (tiras reactivas) y el diagnostico del pH y el examen microscpico en
fresco de la orina. En el examen macroscpico del cultivo ha de visualizarse la forma, color, forma
de sus bordes y la superficie de las colonias. Y en el examen microscpico del cultivo la
diferenciacin de las bacterias Gram positivas de gram negativas y las diferentes formas que
presenten (coco, bacilo, estafilococos)
3- Materiales
Asas de siembra desechables
Portaobjetos
Placas de Petri
Mechero
Pinzas
Papel platina
Papel de filtro
Vasos de muestra
Pipeta
Microscopio
Tubos de ensayo
Gradilla
Jeringa
Suero fisiolgico
Reactivos
Urin system plus (kit de recuento, identificacin y sensibilidad)
Hygicult tpc (recuento)
Tiras reactivas
Kit de gram
Medios de cultivo
CLED Agar, CNA, Agar nutritivo, CPS3.
Muestra
Muestra 1
Muestra 2
4- PROCEDIMIENTO:
Recogida de muestra:
Se utilizar un recipiente de muestra desechable. La orina que se recoger ser la primera orina de
la maana, por ser una orina ms concentrada.
Para su recogida se lavara cuidadosamente la zona genital, con agua y jabn y se secara con una
gasa estril o una toalla limpia. Hay que recoger la porcin de orina que corresponda a la mitad de
la miccin, desechando la porcin inicial y final de la miccin y recogiendo el resto en el frasco
estril. Por ltimo se tapa bien el frasco y se proceder a su anlisis.
Anlisis de la muestra:
Ante todo realizaremos los siguientes medos de cultivo: Cled agar, CPS3 y CNA, y mientras se van
auto clavando procederemos a la observacin macroscpica de la muestra, para ello
observaremos el volumen, la densidad, la turbidez, mediremos el PH y utilizaremos las tiras
reactivas para conocer si existe presencia de sangre, de nitritos, de cetonas, de acido ascrbico,
tambin para conocer la cantidad de protenas y de leucocitos.
Para realizar esta prueba vamos a introducir la tira reactiva dentro del recipiente con la ayuda de
unas pinzas. Luego la tira la depositaremos sobre un papel de filtro y procederemos rpidamente a
su lectura, comparando los colores con los del bote.
Despus vamos a realizar un examen microscpico. Para ello vamos a utilizar la tcnica de la
tincin de Gram para conocer la presencia de bacterias Gram + y Gram-.
Una vez se hallan autoclavado los medios, los dejaremos solidificar y realizaremos la siembra con
asas desechables en los correspondientes medios de cultivo. Luego los rotulamos con la fecha y el
nmero de la muestra (en este caso 1 2) y los incubamos a 37C durante 24 horas.
Por otra parte utilizaremos la tcnica hygicult tpc para obtener el recuento de bacterias que
aproximadamente hay en la orina, para ello, impregnamos el cultivo especfico, colocado en forma
de gel, dentro de la muestra y lo ponemos a cultivar de 18-24 horas.
La otra prueba que realizaremos ser la URIN SYSTEM PLUS que consiste en realizar dos
suspensiones. Una suspensin A (donde cogeremos 05ml de muestra con una pipeta y 15ml de
suero salino) y otra B (donde tomaremos 02ml de la suspensin A mas suero mdium del kit).
Procedemos a aadir a cada pocillo 02ml con la pipeta de las dos suspensiones hasta los pocillos
9 con la suspensin A y el resto con la suspensin B. Ponemos a cultivar 24 horas y leemos
resultados.
Pasadas las 24 horas observaremos el crecimiento obtenido:
Con respecto a los medios de cultivo de cada muestra, realizaremos un examen macroscpico de
las colonias, observando sus bordes, sus tamaos, su forma y su superficie.
Con lo observado anteriormente iremos buscando posibles microorganismos teniendo siempre en
cuenta las caractersticas de los medios. Luego haremos la tincin de Gram para comparar y
descartar las cuestiones antes analizadas.
Realizaremos un inoculo por cada muestra, luego realizaremos las extensiones necesarias y
teiremos con Gram. Por ltimo observamos al microscopio y copiamos los resultados para luego
compararlos con los posibles resultados de las colonias observadas.
Con respecto a la lectura de la tcnica hygicult TPC utilizaremos unas pinzas para sujetar los geles
de cultivo y colocarlos en un portaobjetos, para as observar mejor el crecimiento y apuntar los
resultados obtenidos de la concentracin bacteriana.
En cuanto a la los resultados de la prueba URIN SYSTEM PLUS observamos los cambios de
colores y anotamos la presencia de microorganismos comparando con la hoja de resultados que
posee el kit.
5- Resultados
Examen macroscpico de la orina
Muestra 1:presenta un olor caracterstico a caf. Con un color amarillento fuerte y con
presencia de sedimentos en el fondo del recipiente. Con una densidad normal y una ligera turbidez.
El pH que obtuvimos ha sido 7.5. El resultado de las tiras reactivas ha sido el siguiente: bilirrubina
negativa, Urobilingeno normal, cetonas normal, cido ascrbico negativo, glucosa normal,
protenas negativo, sangre negativo, pH 7.5, nitritos negativo, leucocitos negativo y una densidad
de 1,015.
Muestra 2:presenta un olor caracterstico, con un color amarillo claro, sin presencia de
sedimentos ni turbidez con una densidad normal. El pH ha sido 5. El resultado de las tiras reactivas
ha sido: bilirrubina negativa, Urobilingeno normal, cetonas normal, cido ascrbico negativo,
glucosa normal, protenas negativo, sangre negativo, pH 5, nitritos positivos, leucocitos negativo y
una densidad de 1,020.
Muestra 2:
- Cled agar: presencia de colonias de color amarillo, con bordes circulares y presentes en poca
cantidad.
- CPS3: presencia de diferentes colonias:
o Colonias de color verde, de grandes tamao, bordes circulares y estn presentes en mayor
proporcin
o Colonias de color blanco, de pequeos tamaos,
- CNA: presencia de dos tipos de colonias:
o Colonias con halo: las colonias son blancas y sus halos amarillos, tienen forma circular, sus
bordes son regulares y tienen una superficie elevada.
o Colonias sin halo: son de color blanco, su forma es circular.
- CPS3:
Colonias marrones: E.coli, bacilos cortos gram negativos, se observan de color rosados.
Colonias verdes: Enterococci, con forma cocobacilar de color rosa.
Colonias blancas: Candida albicans, son levaduras, se observan con presencia de algunas
esporas, hifas.
- CNA:
Colonias blancas: E.coli, se observan bacilos cortos de color rosa.
Colonias blancas con halos: P.vulgaris, bacilos de color rosa y con pilis.
- Agar nutritivo:
Streptococcus: de color azul.
Muestra 2:
Bacteriuria: CFU/ml > 105
E.coli: positivo
Proteus: positivo
Pseudomonas spp: negativo
Klebsiella: negativo
Enterococcus spp: positivo
Staphylococcus spp: negativo
Candida albicans: positivo
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD (ANTIBIOGRAMA)
No es susceptible a TZP, FOS, AMS, AUG y C.
Resistente frente a CAZ y SXT.
No han sido concluyentes: AK, CN, TOB, CFP, CTX, NA, CIP, LEV.
6- Conclusin
Cada una de las anteriores pruebas han sido realizadas con un propsito y para corroborar que
nuestras sospechas tras la observacin del cultivo es cierta. Para ello tras la observacin de la
siembra y el cultivo, al observar las colonias, decidimos realizas las observaciones microscpicas
con la elaboracin de la tincin de gram, para verificar que, cada una de esas colonias se
corresponde con la forma que debe de presentar cada bacteria de estas.
Tras la realizacin de cada una de las pruebas nombradas con anterioridad durante todo el
desarrollo hemos podido llegar a la conclusin que, ambas muestra presentan E.coli y Proteus
vulgaris, Enterococcus, Streptococcus y Candida albicans. Ambas muestras poseen un alto
nmero de bacterias, presentan una alta bacteriuria. En la qumica seca poseen unos valores
normales.
una cepa bacteriana especficamente, aunque haya revisado el tema en clases recientes.
Por ello es prctico conocer sobre qu tipo de medios las bacterias se diferencian de otras
cepas aunque sean metablicamente muy similares. En este apartado revisar las pruebas
ms relevantes para identificar a la muy estudiadaEscherichia coli.
Cuando recibimos una muestra es importante definir el algoritmo de pruebas que debe
manejarse para lograr identificar el microorganismo de inters. La tincin de Gram nos
permite definir si el microorganismo es Gram positivo o Gram negativo en este caso en el
frotis debemos observar bacilos Gram negativos para seguir a las siguientes pruebas de
caracterizacin.
E. coli MacConkey
D-Adonitol 5% de positividad.