UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUMICO-BIOLGICAS
PROGRAMA DE BIOLOGA

MANUAL DE PRCTICAS
BIOLOGA CELULAR

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOLOGIA CELULAR

COMPILADORES:
Principal: M en C Francisco Javier Vsquez Gonzlez
Colaboradores: M en C Paula Velasco Tarelo
Biol. Jonatan Campaa L.

Ciudad Jurez, Chihuahua

Universidad Autnoma de Ciudad Jurez
2009
p. 59

M. en C. Emilio Clarke Crespo

Coordinador de la Academia de Biologa

D. Ph. Antonio de la Mora Covarrubias

Coordinador del Programa de Biologa

Dr. Alejandro Martnez Martnez

Jefe del Departamento de Ciencias Qumico-Biolgicas

M.C. Hugo Staines Orozco

Director del Instituto de Ciencias Biomdicas

Aprobados por la Academia de Biologa, 2011

INDICE

INSTRUCCIONES GENERALES

PRCTICAS
1. MICROSCPIO

2. PREPARACIN DE FROTIS BACTERIANO

3. OBSERVACIN DE BACTERIAS

12

4. TINCIN GRAM

16

5. OBSERVACIN DE PROTISTAS DE VIDA LIBRE

18

6. REPRODUCCIN ASEXUAL POR GEMACIN EN LEVADURAS 20

7. OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS

22

8. OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO

EPIDRMICO DE CEBOLLA

25

9. OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO

EPIDRMICO DEL PUERRO

27

10. OBSERVACIN DE CLULAS VEGETALES: CLULAS DE LA PULPA

DE TOMATE

29

11. OBSERVACIN DE CLULAS DE TEJIDO ADIPOSO

31

12. EPIDERMIS EN HOJAS DE ZEBRINA

33

13. OBSERVACIN

DEL

CITOESQUELETO

FAGOCITOSIS

EN

PROTISTAS ACELULARES: TETRAHYMENA

36

14. OBSERVACIN DE CLULAS SANGUNEAS

39

15. CLULAS EPITELIALES DE NUESTRA BOCA

42

16. OBSERVACIN DE LOS CLOROPLASTOS Y PARED CELULAR EN

HOJAS DE LA PLANTA ACUTICA ELODEA SP.

45

17. FOTOSNTESIS EN LA PLANTA ELODEA SP.

48

18. MITOSIS EN CLULAS DE LA RAZ DE CEBOLLA

54

19. BIBLIOGRAFA

57

20. ANEXO

58

INSTRUCCIONES GENERALES
Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta algunas
normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad.
1. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para adquirir una
idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados deben ser
siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan.
2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En
consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente
el material que se ha utilizado.
3. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su
material.
4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse
de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin.
5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos
utilizados sin consultar con el profesor.
6. No sacar con las manos y menos con la boca los productos qumicos.
7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y
microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos.
8. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse
alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo
con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si
se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves
de paso al apagar la llama.
9. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber
hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca

se vertern bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarn resbalar

suavemente por su pared.
10. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre ellos;
siempre al contrario: cido sobre agua.
11. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar
de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre
lquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del
frasco.
12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una
jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro.
13. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que tape su
extremo superior para regular la cada de lquido.
14. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada
debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura
de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal.
15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos
debe evitarse la ebullicin violenta por el peligro que existe de producir
salpicaduras. El tubo de ensayo se acercar a la llama inclinado y procurando
que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que
se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo nuevamente a los pocos
segundos y retirndolo otra vez al producirse una nueva ebullicin, realizando
as un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitar dirigir la boca
del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus
de haberlos calentado con el fin de evitar roturas.
17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar
que se engrasen (1).

PRACTICA 1
MICROSCOPIO

OBJETIVO. Que el alumno se familiarice con las partes del microscopio, su uso
y su cuidado.

Partes de un microscopio ptico

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema ptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del
objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico
SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular,
REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y
micromtrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la
platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso
anterior, ya debera estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o
colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el
tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a
travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el
objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe
algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque
fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y
suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el
enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es
preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin

desde el paso b. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la

preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y
mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se
enfoc con el objetivo de inmersin.
6. Empleo del objetivo de inmersin:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz
que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el
aceite.
c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino
entre ste y el de x40.
d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo
de inmersin.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo
entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que
con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no
se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que
bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y
se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este
momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe
retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin.

j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel

especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est
perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de
la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo
cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se
va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un
armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian,
limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de
ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est
utilizando el microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el
aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con
papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por
la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y
pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona
(7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican
estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
6. No

forzar

nunca

los

tornillos

giratorios

del

microscopio

(macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo
siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la

muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni

hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama
sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla
con un pao humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al
finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste
y revisin general de los mismos.(1)

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

PRACTICA 2
PREPARACIN DE FROTIS BACTERIANO
OBJETIVO. Que el alumno se familiarice con la tcnica de tincin directa de
bacterias y aprenda a fijar por mtodos qumicos y fsicos.
Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una
muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya
que si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen
clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos
para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la
observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada
en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin bacteriana hace que las
bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la
morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera
haber.

REALIZACIN DEL FROTIS

1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.

Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa
de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una
mnima gota de agua, que resulta suficiente.
2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea
cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de
agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una
suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su
secado.
Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario
realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una
gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra,
directamente sobre el portaobjetos.

3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin

acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener
mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas
pueden deformarse o romperse.

FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS

4. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos
segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases.
5. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas
gotas de metanol sobre la extensin completamente seca. Golpear el
portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar
de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore
completamente.
Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser
observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es
continuar con el proceso de tincin.

TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO

6. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo

que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5
minutos. En ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo
que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas
sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero teniendo
mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se producira la destruccin
de las clulas.
7. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se
realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte
superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido

directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar
la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto
con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo.
8. Secar el portaobjeto presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn
caso se debe frotar el porta.
9. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento.
Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de
inmersin.

MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN

La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica

que se desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del
portaobjetos el contenido de la preparacin, la fecha y, en su caso, el nombre
del alumno.
10. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones
mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de
alcoholes puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos,
pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada.
Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao.
a

Alcohol de 70

Alcohol de 95

Acetona pura

Acetona-xilol (1:1)

Xilol

11. Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio

de montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm.(1)
RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

10

11

PRACTICA 3
OBSERVACIN DE BACTERIAS
OBJETIVOS
1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras
naturales
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se
recomienda una u otra.
3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos
de agrupaciones que existen.
4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del
aceite de inmersin.
MATERIAL
- Mechero Bunsen o de alcohol
- Asa de siembra o aguja enmangada
- Pinzas
- Portaobjetos
- Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.
- Colorantes para tincin:
a) Solucin de cristal violeta al 1%
b) Solucin de safranina al 0,5%
c) Azul de metileno al 1%
- Microscopio y aceite de inmersin

BACTERIAS DEL YOGUR

El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la
leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis
del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus

12

bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar

dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin
(estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el tamao del
lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga
mucha prctica con el enfoque del microscopio.
1. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una
pequea gota de agua.
2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
3. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante
1-2 minutos.
4. Observar al mximo aumento del microscopio.
Bacterias del vinagre
El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de
la fermentacin espontnea del vino o de bebidas alcohlicas de baja
graduacin. La acetificacin del vino es producida por bacterias aerbicas del
cido

actico,

principalmente

Acetobacter

aceti,

aunque

tambin

Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.

1. Tomar con una aguja enmangada una pequea porcin de madre
de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos
agriado.
2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y
hacer el frotis.
3. Dejar secar y fijar con calor.
4. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
Bacterias del sarro dental
El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado
sobre el esmalte de los dientes. Est constituido principalmente por restos
proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metablicos. La
flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las

13

condiciones que se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen

abundar

bacterias

saprfitas,

pudindose

observar

gran

variedad

de

morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro
dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
2. Dejar secar y fijar con calor.
3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
Bacterias del suelo
La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de
suelo es prcticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los
laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbilogos. Para
recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en
vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardn. Despus de
varios das, las bacterias se habrn adherido al vidrio y slo habr que fijarlas
por calor y teirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los
bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir.(1)

PREGUNTAS
1.- Qu tipos de morfologa y agrupacin aparecen en los frotis de
los cultivos?
2.- Qu fin tiene la fijacin de muestras al realizar un frotis
bacteriano?
3.- Seale las ventajas y desventajas de la tincin simple respecto
del examen en fresco.

DIBUJOS

14

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

15

PRACTICA 4
TINCION GRAM

OBJETIVO. Que el alumno aprenda a clasificar las bacterias aplicando una

tcnica diferencial como es la tincin de Gram.
MATERIAL

Microscopio

Frasco lavador

Portaobjetos

Mechero de alcohol

Cubreobjetos

Papel de filtro

Asa de siembra

Cristal violeta

Cubeta de tincin

Lugol

Cultivo bacteriano

Alcohol-acetona

Pinzas

Safranina

TCNICA
1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Teir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la
preparacin deje de perder color (30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparacin.
11. Examinar al microscopio fijndose sobre todo en el color de cada
preparacin.

16

Los tiempos de exposicin a los colorantes son orientativos. Cada vez que se
prepara la batera de colorantes para realizar la tincin Gram presentan algunas
diferencias respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser
necesario ajustar los tiempos.
En un laboratorio de Microbiologa, cada vez que se preparan los colorantes, se
suelen hacer pruebas con cultivos patrn de los dos tipos (Gram+ y Gram-)
para ajustar as los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las
tinciones que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables.
Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados,
pero es mucho ms caro.(1)
Dibujos

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

17

PRACTICA 5
OBSERVACIN DE PROTISTAS DE VIDA LIBRE
OBJETIVO. El alumno reconozca diferentes protistas de vida libre que se
desarrollan en nuestro medio ambiente los cuales varan de acuerdo a las
estaciones del ao.
Los estanques en tu escuela o colonia contienen muchos
protistas e invertebrados. La composicin de estas comunidades varia a travs
de los estanques y conforme avanza el ao.
MATERIAL
-

Gota de agua estancada

Porta y cubreobjetos

Pipeta Pasteur

Microscopio

TCNICA
1. Toma una gota de agua estancada y colcala en un portaobjetos.
Cbrela con un cubreobjetos. Observa al microscopio. Componentes
celulares: flagelos, cilios y diferentes medios de locomocin.

OBSERVACIONES

18

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

PREGUNTAS.
1. Describe con palabras y dibujos los organismos de tu gota de agua.

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

19

PRACTICA 6
REPRODUCCIN ASEXUAL POR GEMACIN EN LEVADURAS
OBJETIVO. El alumno reconozca la reproduccin asexual en clulas
eucariontes.
MATERIAL
-

Microscopio

Portaobjetos

Cubreobjetos

Levadura

Agua azucarada

Aguja enmangada

Lactofenol-safranina

TCNICA
1. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura
sobre un porta que contenga 2 o 3 gotas de agua ligeramente
azucarada.
2. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio.
3. Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la
suspensin acuosa de la levadura con una gota de lactofenolsafranina. Con este procedimiento se consigue una doble finalidad:
a) Ver mejor las clulas de las levaduras, teidas por la safranina.
b) Retrasar un poco el desprendimiento de las clulas hijas
gracias a la accin desfavorable del fenol para la vida normal
de las levaduras.(1)

20

REPRODUCCIN CELULAR: REPRODUCCIN ASEXUAL POR GEMACIN

EN LEVADURA.
OBSERVACIONES

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

PREGUNTAS.

1. Por qu se realiza la tincin?

2. Qu hace la safranina?
3. Cul es la funcin del lactofenol?
RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

21

PRACTICA 7
OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS

OBJETIVO. Que el alumno identifique los hongos microscpicos que se

encuentran en el ambiente.

Los principales mtodos aplicados para la observacin microscpica

de los cultivos son: la observacin en fresco, con una solucin adecuada, y las
preparaciones en cinta adhesiva.
1.

Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas

especies de mohos.

2. Observar la morfologa de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no

septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las
originan.

MATERIAL
- Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con
alcohol
- Cubetas de Tinciones
- Aguja enmangada o lanceta
- Cinta adhesiva transparente
- Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos
- Solucin de lactofenol al azul algodn
- Microscopio
PREPARACIONES EN FRESCO DE MOHOS
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol
no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin

22

quede demasiado gruesa. Realizar la misma operacin en otro portaobjetos que

se usar para lavar la muestra.
2. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas
finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado
sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se
consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas
preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidiforos.
3. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo
portaobjetos que ser ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios
(estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidiforos), se
aplastarn stos ligeramente sobre la gota o se seccionarn con un bistur.
4. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de
manera que no quede amontonado.
5. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado
para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios.
PREPARACIONES EN CINTA ADHESIVA
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol
no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin
quede demasiado gruesa.
2. Cortar

un

trozo

de

cinta

adhesiva

transparente

de

aproximadamente 2cm.
3. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el
pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona
central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas.
4. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
5. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.(1)

23

OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS

OBSERVACIONES

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

PREGUNTAS.
1. Determina si las hifas son septadas o no.
2. Forma, tamao y disposicin de las esporas.
3. Tipo de estructuras formadoras de esporas que se observan.

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

24

PRACTICA 8
OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO
EPIDRMICO DE CEBOLLA
OBJETIVO. Que el alumno reconozca diferentes estructuras del tejido vegetal.
MATERIAL
-

Microscopio

Portaobjetos

Cubreobjetos

Cubeta

Agujas enmangadas

Pinzas

Escalpelo

Verde de metilo actico o azul de metileno

Cuentagotas

Cebolla

TCNICA
1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue
membrana que est adherida por su cara inferior cncava.
2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de
agua. Pon el porta sobre la cubeta
de tincin para que caiga en ella el

Citoplasma

agua y los colorantes. Si es preciso,

estirar el trozo de epidermis con
ayuda de dos agujas enmangadas.
3. Escurrir el agua, aadir una gotas
de verde de metilo actico (o azul
de metileno) sobre la membrana y
dejar actuar durante 5 minutos

25

Membrana
Ncleo

aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante

o por evaporacin del mismo!
4. Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que
no suelte colorante.
5. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen
burbujas y llevarlas al microscopio.
6. Observa la preparacin a distintos aumentos empezando por el ms
bajo
7. Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms
bajo. Identifica las distintas clulas del tejido epidrmico y las de las
hojas del bulbo de cebolla.(1)

OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO

EPIDRMICO DE CEBOLLA
OBSERVACIONES

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

26

PRACTICA 9
OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO
EPIDRMICO DEL PUERRO
OBJETIVO. Que el alumno reconozca estructuras del tejido vegetal.
MATERIAL
-

Microscopio

Portaobjetos

Cubreobjetos

Cuentagotas con agua

Agujas enmangadas

Pinzas

Escalpelo

Un puerro

TCNICA
1. Retira una parte pequea de la epidermis de la hoja de puerro y
llvala sobre un porta en el que habrs colocado dos o tres gotas de
agua. Ten la precaucin de que sea una capa incolora y de que est
perfectamente extendida.
2. Pon el cubre y examina la preparacin al microscopio.
3. Identifica en tu preparacin la estructura de las clulas que aparecen
en el esquema.(1)

27

OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO

EPIDRMICO DEL PUERRO

OBSERVACIONES

Aumento Total
____________

Aumento Total
____________

PREGUNTAS.
1. Qu son los estomas?
2. Cul es su funcin?
3. Poseen cloroplastos alguna de las clulas epidrmicas?

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

28

PRACTICA 10
OBSERVACIN DE CLULAS VEGETALES: CLULAS DE LA PULPA
DE TOMATE
OBJETIVO. Que el alumno reconozca los organelos membranosos en tejido
vegetal.
MATERIAL
-

Microscopio

Portaobjetos

Cubreobjetos

Escalpelo

Pinzas

Tomate

TCNICA
1. Utilizando un escalpelo, corta en
dos mitades el tomate.
2. Obtn, ayudndote de unas pinzas,
un trozo de pulpa de tomate de la zona indicada
en la figura de unos 2mm de grosor.
3. Depostalo en el centro de un
portaobjetos sin poner agua.
4. Coloca encima un cubreobjetos y
comprime

suavemente

con

los

dedos hasta obtener un completo

aplastamiento del fragmento de
pulpa de tomate.
5. Lleva la preparacin a la platina del microscopio y realiza una
observacin con pequeos aumentos.
Selecciona el mejor grupo de clulas
y pasa a mayores aumentos.
6. Identifica

los

distintos

Vacuola

orgnulos

celulares visibles y dibuja lo que.(1)

Nucleo

29

Cromoplasto

OBSERVACIN DE CLULAS VEGETALES: CLULAS DE LA PULPA DE

TOMATE
OBSERVACIONES

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

30

PRACTICA 11
OBSERVACIN DE CLULAS DEL TEJIDO ADIPOSO
OBJETIVO. Que el alumno reconozca las estructuras en tejido animal graso.
MATERIAL
-

Tocino u otra grasa animal

Bistur o escalpelo

Porta y cubreobjetos

Formol

Sudn III

Frasco lavador

Cubeta de tincin

Microscopio

TCNICA
1. Con ayuda de un bistur, cortar una finsima capa de grasa,
colocarla en un porta y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4
minutos.
2. Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudn III.
Dejar actuar unos 5 minutos.
3. Volver a lavar la preparacin con agua, cubrirla con un
cubreobjetos y observar al microscopio.(1)
OBSERVACIN DE CLULAS DEL TEJIDO ADIPOSO.

OBSERVACIONES

Aumento Total
____________

31

Aumento Total
____________

PREGUNTAS.
1. Por qu hay que teir con Sudn III?
2. Para qu sirve el formol?

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

32

PRACTICA 12
OBSERVACIN DE LA EPIDERMIS EN HOJAS DE ZEBRINA
OBJETIVO. El alumno reconozca la epidermis en las plantas.
Ahora se observar la superficie de la epidermis: la capa ms externa de una
clula vegetal. En ella podrs ver clulas guarda que controlan el intercambio
de gas y vapor en la planta a travs de un poro, o estoma. Sers capaz de ver
el estoma abierto o cerrado en un periodo de varios minutos.
MATERIAL
-

hojas de Zebrina (o especies alternativas).

pinzas

Porta y cubreobjetos

Agua

Solucin salina

Microscopio

TCNICA
1. Utilizars un portaobjetos, cubreobjetos, pinzas y hojas de Zebrina (o
especies alternativas).
2. Coloca una gota de agua en el centro del portaobjetos.
3. Rompe un pedazo de la hoja de Zebrina de manera que un borde
irregular de la epidermis aparezca en el lado de debajo de la hoja.
4. Utilizando pinzas cuidadosamente toma el borde de la hoja de la
epidermis expuesta y desprende una pieza muy pequea; coloca esta
pequea pieza de epidermis en la gota de agua de tu porta objetos.
Algunas veces el tejido se enrosca y se pega a las pinzas si esto sucede,
algunas veces se desenrollan cuando colocas el tejido en el agua. Si no
pasa esto, aydate de las pinzas. .
5. Coloca un cubre objetos sobre la muestra y observa al microscopio.

33

6. Busca clulas en pares con forma de labios. Estas son las clulas
guarda. En la Zebrina no existen pigmentos rojos presentes en el resto
de los tejidos epidrmicos.
7. Localiza pares de clulas guarda con el estoma abierto las clulas en
forma de labio

estarn arqueadas ligeramente, dejando un espacio

blanco entre ellas.

8. Dibuja el tejido epidrmico incluyendo las clulas guarda y los
cloroplastos. Seala las clulas epidrmicas, clulas guarda, estomas, y
cloroplastos.
9. coloca una gota de solucin salina en el portaobjetos adyacente al borde
de cubre objetos.
10. coloca un pequea pieza de papel secante en el lado opuesto del cubre
objetos. Esto baara de solucin salina la muestra de epidermis y las
clulas guarda. La solucin salina sacara agua de las clulas.
11. despus de 30 minutos observa los efectos de la solucin salina en las
clulas guarda y escribe una descripcin de los cambios en la
epidermis.(2)

34

COMPONENTES CELULARES: LA EPIDERMIS VEGETAL.

OBSERVACIONES

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

____________

PREGUNTAS.
1. Cmo puede una clula regular el movimiento de dixido de
carbono, oxigeno, y vapor de agua hacia fuera y dentro de la hoja?
2. Cmo

beneficiara

influenciar

en

molculas?

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

35

el

movimiento

de

estas

PRACTICA 13
OBSERVACIN DEL CITOESQUELETO Y FAGOCITOSIS EN PROTISTAS
ACELULARES: TETRAHYMENA

OBJETIVO. El alumno reconozca las estructuras externas en clulas

eucariotas: los cilios, citoesqueleto y fagocitosis

En esta seccin, trabajars con organismos vivos del reino protista. Protistas
contienen organismos eucariotas acelulares y otras grupos cercanos. El
organismo con que trabajaras es un protozoario ciliado del genero
Tetrahymena. Los cilios son proyecciones de la clula que contienen filamentos
del citoesqueleto que se mueven en forma de ola para mantener al organismo
en su ambiente lquido.
En esta actividad colocars a Tetrahymena en una solucin con partculas de
tinta. Esto te ayudar a observar la locomocin y hbitos alimenticios de este
protozoario. A travs del microscopio, observaras la accin de los cilios.
rganos en forma de pelo en la superficie de Tetrahymena. Los cilios tambin
se encuentra en las superficie de las clulas epiteliales en tus vas respiratorias,
desde la traquea en tu garganta hasta los bronquiolos de tus pulmones.
Mientras investigas la funcin de los cilios en Tetrahymena trata de imaginar
como estos mismos organelos pueden funcionar en tus vas respiratorias.
Tambin

podrs observar la fagocitosis, tipo de alimentacin utilizado por

Tetrahymena, las clulas especializadas en nuestro sistema inmune utilizan

este mismo proceso de fagocitosis para eliminar material infeccioso, adems de
observar a Tetrahymena capturando las partculas de tinta ,observaras a estas
partculas moverse a travs de las fibras del citoesqueleto. Aunque no podrs
ver el citoesqueleto, podrs ver el camino por el que se mueven las vesculas
que contiene la tinta hacia las reas de digestin.

36

MATERIAL
-

Suspensiones de clulas de Tetrahymena

Pipeta pasteur

Porta y cubreobjetos

Tinta al 1%

Microscopio

TCNICA
1. Habr suspensiones de clulas de Tetrahymena en soluciones de
proteoseptona al 2% en un matraz de 125ml. Sin mezclar el fluido,
inserta la punta de una pipeta

al fondo de la suspensin de

clulas y toma 2mm en un tubo.

2. Pipetea 2mm de tinta al 1% en el mismo tubo y mezcla subvente
las dos soluciones. Toma el tiempo.
3. Coloca dos gotas de la mezcla de Tetrahymena y la tinta en un
portaobjetos, coloca un cubreobjetos y observa al menos 5
clulas.
4. Despus de 10min, repite el paso 3 y observa las clulas en
microscopio. Repite el paso 3 de nuevo despus de 20 min. y
despus de 30 min.(2)

COMPONENTES CELULARES: CILIOS Y CITOESQUELETO.

OBSERVACIONES

37

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

Aumento Total
____________
Sin/Con tincin
____________

PREGUNTAS.
1. Describir como influencia el citoesqueleto en el movimiento de
Tetrahymena en su ambiente, adems de la captura y procesamiento del
alimento.
RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

38

PRACTICA 14
OBSERVACIN DE CLULAS SANGUNEAS

OBJETIVO. Que el alumno conozca las diferencias estructurales entre clulas

animales y vegetales.
MATERIALES
-

Microscopio

Portaobjetos

Mechero de alcohol

Lanceta estril

Cubeta de tincin

Frasco lavador
Alcohol absoluto

Hematoxilina

Eosina

TCNICA
1. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar.
2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un
portaobjetos.
3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre
toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina pelcula
de sangre. El porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca por
encima de ella para no daar los hemates.
4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir
unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la
preparacin.
5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15
minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido.
6. Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola
actuar 1 minuto.

39

7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.

gota de
sangre

8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama

del mechero.
9. Observar al microscopio.

OBSERVACIN MICROSCPICA
Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos,
hemates o eritrocitos teidos de color rojo por la eosina. No tienen ncleo y
son ms delgados por el centro que por los bordes.
Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia
de ncleo, teido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de
leucocitos:
1. Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen
un solo ncleo que ocupa casi todo el glbulo.
2. Monolitos:

son

los

leucocitos

mayores,

poco

frecuentes

normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su

funcin principal es la fagocitosis.
3. Polimorfonucleares: ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden
ser eosinfilos, con abundantes granulaciones teidas de rojo por
la eosina, neutrfilos y basfilos.

40

Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial

de tincin.(1)

OBSERVACIN DE CLULAS SANGUNEAS

OBSERVACIONES

Aumento Total
____________

Aumento Total
____________

PREGUNTAS.
1. Identifica en los dibujos los distintos tipos de clulas sanguneas.
2. De qu color aparece teido el ncleo de los leucocitos?
3. Qu forma tienen los glbulos rojos? Tienen ncleo?

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

41

PRACTICA 15
OBSERVACIN DE LAS CLULAS EPITELIALES DE NUESTRA BOCA

OBJETIVO. El alumno reconozca diferentes componentes de las clulas

eucariotas humanas.

En esta seccin, preparars una muestra de tus clulas

epiteliales. Adicionars azul de metileno a tu muestra de clulas, esto volver
visible el material nuclear a travs del microscopio.
Nota-Estars observando clulas epiteliales de tu propia boca. Debido a
cuestiones de salud, es importante que sigas las instrucciones de acuerdo a las
normas de seguridad de los picadientes que usars para colectar tus clulas
epiteliales.
MATERIAL
-

Picadiente

Porta y cubreobjetos

Azul de metileno

Papel secante

Pipetas pasteur

Cubeta de tincin

Microscopio

TCNICA
1. Utilizars un microscopio, un cubreobjetos, portaobjetos, y papel
secante.
2. Cuidadosamente coloca una pequea gota de azul de metileno en el
centro del portaobjetos. Si usas demasiado se escurrir del cubreobjetos
ocasionndote problemas. Recuerda que es un colorante que penetrar
todo lo que toca, as que evita el contacto con tu ropa. Adiciona una gota
de agua a la laminilla.

42

3. Cuidadosamente usa la punta de un picadiente para frotar el tejido

epitelial de la mejilla dentro de tu boca, debajo de tu labio superior.
4. Gira esa parte del picadiente en el centro de tu laminilla.
Antes de continuar coloca ese picadiente en un bote de desechos con cloro al
10%.
5. Utiliza pinzas para colocar un cubreobjetos sobre tu muestra y obsrvala
al microscopio.
Antes de continuar coloca tu portaobjetos, sin lavarlo, en el bote de residuos
punzo cortantes.
Componentes

celulares:

membrana

plasmtica,

envoltura

nuclear

cromatina.(2)

OBSERVACIONES

Aumento Total ____________

Sin/Con tincin ____________

Aumento Total ____________

Sin/Con tincin ____________

PREGUNTAS.
2. Dibuja tu clula y seala la membrana plasmtica, la envoltura nuclear, y
la cromatina. La cromatina est compuesta, en parte, de ADN, la
molcula que contiene toda la informacin hereditaria en cada una de tus
clulas.

43

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

44

PRACTICA 16
OBSERVACIN DE LOS CLOROPLASTOS Y PARED CELULAR EN HOJAS
DE LA PLANTA ACUTICA ELODEA

OBJETIVO. El alumno reconozca la pared celular y los cloroplastos en las

plantas.
Las hojas de la planta acutica Elodea sp. Son muy delgadas que pueden
observarse sus clulas con un microscopio sin necesidad de cortarlas en
secciones delgadas. La mayora de las estructuras en las clulas de las plantas
no son visibles a travs de la luz del microscopio. Sin embargo, cuando ajustas
propiamente el microscopio podrs ver la pared celular y los cloroplastos. El
centro de la clula aparecer vaco ya que est ocupado por una gran vacuola
que no es visible a travs de la luz del microscopio. Los organelos que son de
inters particular en este ejercicio son los cloroplastos; son de color verde,
estructura membranosa en el citoplasma entre la membrana plasmtica y la
vacuola.
Como estars observando clulas vivas, los cloroplastos se mostrarn en su
color y comportamiento natural bajo el microscopio.
MATERIAL
-

Hoja de Elodea

Bistur o escalpelo

Porta y cubreobjetos

agua

Microscopio

TCNICA
1. Utiliza pinzas para tomar una hoja joven de Elodea. Las hojas
jvenes estn al extremo distal de la punta del tallo.
2. Coloca la hoja extendida en una laminilla. Adhiere una gota o dos
de agua y coloca un cubreobjetos.

45

3. Observa al objetivo 10x y despus al de 40x.

4. Usa el micrmetro para moverte a travs de los planos de la
clula.
b) El centro de la clula est ocupado por una gran vacuola que no es
visible. La vacuola empuja el citoplasma y los cloroplastos hacia abajo,
arriba y a la pared de la clula.
c) Si ests enfocando arriba de la clula vers cloroplastos esparcidos a
travs de la clula.
d) Mientras vayas enfocando hacia debajo de la clula, los cloroplastos
ocuparn el permetro de la clula, hacia la pared. Hacia abajo de la
clula, los cloroplastos estarn otra vez esparcidos en la clula.
5. Haz un bosquejo de una clula de Elodea. Anota la pared celular,
y los cloroplastos. Aunque parezca que las clulas ests vacas,
realmente estn llenas de estructuras no visibles con el
microscopio de luz.
6. Si hay movimientos citoplasmticos, vers los cloroplastos
circulando alrededor de la clula. Los movimientos del citoplasma
son controlados por microfilamentos en el citoesqueleto de la
clula. Estos filamentos de actina y miosina mueven el contenido
celular a un proceso activo que usa la energa liberada por el
rompimiento de ATP hacia ADP.(2)
COMPONENTES CELULARES: CLOROPLASTOS Y PARED CELULAR

OBSERVACIONES

46

Aumento Total ____________

Sin/Con tincin ____________

Aumento Total ____________

Sin/Con tincin ____________

PREGUNTAS.

1. Cmo puede beneficiarse una clula al gastar energa en circular

su citoplasma?

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

47

PRACTICA 17
FOTOSNTESIS EN LA PLANTA ELODEA SP.

OBJETIVO. El alumno reconozca el proceso de la fotosntesis determinando la

produccin de oxigeno.
La vida por si misma no puede ser mantenida sin energa. Tal vez la diferencia
fundamental entre organismos vivos y substancias no vivas es el nivel tan
impresionante de complejidad y la organizacin entre organismos vivos, una
cantidad de energa tremenda es requerida para llevar a cabo las complejas
funciones de los organismos. Las funciones ms bsicas de los organismossentir y responder condiciones externas, crecer, desarrollarse, y reproducirseclaramente requieren de energa. Si los organismos vivos son privados de un
recurso externo de energa, no son capaces de continuar elaborando estos
procesos esenciales y se vuelven inactivos o mueren. Como toda vida requiere
una fuente de energa, la vida por s misma necesita una fuente externa de
energa, esta fuente externa viene del sol.
La fotosntesis es el proceso que convierte la energa del sol en energa
qumica, en los enlaces que mantienen juntas las molculas orgnicas de los
organismos vivos. La energa que se requiere para construir protenas, lpidos,
cidos nucleicos, y carbohidratos proviene del sol. Aunque todas las formas de
vida estn compuestas de molculas orgnicas, solamente unas cuantasplantas, algas, y algunas bacterias- son capaces de fotosintetizar. El resto
debemos robar la energa de estos organismos fotosintetizadores (cuando
comemos plantas), o de otros ladrones (cuando comemos animales).
La fotosntesis es un proceso que incluye muchas reacciones, las cuales se
agrupan en dos reacciones mayores. Tal vez las ms impresionantes de estas
reacciones en un organismo vivo son las reacciones de transduccin de la
fotosntesis. Las reacciones de transduccin capturan las longitudes de onda de
la luz roja y azul. La luz verde no se utiliza en la fotosntesis, por lo cual la
mayora de los organismos fotosintticos reflejan la luz verde. La luz verde y

48

roja es utilizada pata excitar los electrones de las molculas de agua

ocasionando que el agua se rompa formando oxgeno. La energa de estos
electrones excitados es usada en las reacciones de transduccin para adicionar
un tercer fosfato al ADP para formar ATP y es usado para adherir electrones al
hidrgeno del NADP+ para formar NADPH.
Las reacciones de fijacin de carbono oxidan el ATP y el NADPH que fueron
reducidos en la anterior reaccin de luz. Esto libera energa la cual es utilizada
para elaborar molculas de glucosa (C6H12O6) del hidrgeno y el dixido de
carbono (CO2).
Tomando todo en cuenta, estas dos reacciones convierten la energa solar en
energa qumica, utilizan el agua y el dixido de carbono para producir
azcares, y ellos producen oxgeno. Las carreras de electrones (ADP, ATP,
NADP+, NADPH) son recicladas de las reacciones de transduccin hacia las
reacciones de fijacin de carbono y de vuelta a las reacciones de transduccin.
Como simplemente circulan entre las reacciones, no son incluidas en toda la
red de reacciones que describen los reactivos que entran a la fotosntesis y los
productos que salen de la fotosntesis.
En esta actividad trabajars en grupo para disear y conducir un experimento
que pruebe el efecto de un factor, una variable independiente que hayas
diseado, en la velocidad de la fotosntesis, la variable dependiente.
Usaras un respirometro para medir la produccin de oxigeno de una planta
acutica, Elodea. Como el oxigeno molecular es producido solamente en la
fotosntesis, puedes usar la produccin de oxigeno como un indicador de la
velocidad de la fotosntesis. Como Elodea produce oxigeno a travs de la
fotosntesis, el oxigeno subir del agua hacia el espacio areo al inicio del tubo.
La adicin de oxigeno al espacio areo empujara el fluido marcador hacia la
punta de la pipeta. Midiendo el movimiento del fluido marcador a travs de la
pipeta, estars midiendo tu variable dependiente, la velocidad de la fotosntesis.
Mientras conduces este experimento cuida de evitar y controlar otros factores

49

que puedan cambiar la presin del aire en tu respirometro e interferir con la

medicin de la fotosntesis. Figura 4-2.

TCNICA
1. Llena el frasco del respirmetro con agua a temperatura del cuarto (Si
cambias la temperatura del agua cuida de no quebrar el frasco
cambiando repentinamente la temperatura).
2. Coloca la lmpara a 70cm del bao de agua.
3. Atornilla la tapa al respirometro. Rota el respirometro para que los dos
agujeros queden equidistantes a la luz.

50

4. Llena los tubos con agua o con una solucin tratadora aproximadamente
3 cm debajo de la tapadera.
5. Los tubos de vidrio salientes de la tapadera necesitan estar en un
espacio con aire, no debajo del agua. Usa un termmetro para
asegurarte que la temperatura del agua en los tubos este alrededor de 2
grados de temperatura del agua del frasco del respirometro. Baja los
tubos hacia los agujeros en la tapa frente a la luz.
6. Recorta dos ramas de Elodea de 12cm cada una y coloca una en cada
tubo.
7. Adhiere dos tapones a los tubos. Si los tapones estn secos, coloca un
poco de grasa en la tapadera y luego scala con papel.
8. Adhiere fluido marcador a cada pipeta e inclina la pipeta boca abajo para
colocarla entre 0.0 y 0.15mm. Coloca las pipetas en una superficie
nivelada como en un estante de tubos.
Tips para fluidos marcadores #1
Si el fluido marcador no se mueve, probablemente la pipeta este sucia con
otro fluido marcador. Lvalo con agua jabonosa y despus con agua.
Si el fluido marcador se quiebra dentro de la pipeta, probablemente el interior
de la pipeta este muy jabonoso, lvalo con agua.
1. Anota la posicin del fluido marcador de cada pipeta. Anota la posicin
de los marcadores de cada pipeta cada cuatro minutos durante los
siguientes 20 minutos.

Tips para fluidos marcadores #2

Si el fluido marcador se mueve ms all de la parte graduada de la pipeta
antes de tu ltima lectura, anota esta locacin y vuelve a comenzar o pide
ayuda.
Si el fluido marcador no se mueve en 10 minutos pide ayuda. Tal vez haya un
agujero. Estn los tornillos cerrados? Estn las mangueras ajustadas? La
tapadera tal vez necesita estar cerrada con un poco de grasa.

51

2. Remueve las ramas de la Elodea; pesa cada rama y anota el peso.

3. Si tus plantas han fotosintetizado a diferentes velocidades con solo un
intento, no puedes decir si esto fue por tu variable independiente o por
otro factor. Por ejemplo una rama de Elodea no es mas sana que la otra.
Para

obtener

una

conclusin

convincente

necesitas

repetir

tu

experimento si hay tiempo.

4. Tus fluidos marcadores tal vez no empezaron exactamente en cero sino
en diferentes locaciones. Ajusta esto y anota el resultado acumulativo de
la produccin de oxigeno.
5. Tus dos plantas tal vez no eran del mismo tamao exactamente. Ajusta
esto dividiendo cada valor por el peso y anota el resultado acumulativo
de la produccin de oxgeno por gramo de tejido. Tabla 4-1. Tabla 4-2.
Tabla 4-3.(2)

PREGUNTAS.
1. Antes de refinar los detalles de tus mtodos y preparar t experimento,
debes hacer una lluvia de ideas con tu grupo para designar e identificar
tu variable independiente, la variable que podrs manipular para ver si la
velocidad de la fotosntesis cambia. Mientras desarrollas una lista de
posibles variables independientes considera y discute las siguientes
preguntas.
2. Cules son los requerimientos de la fotosntesis?
3. Qu condiciones podrn influir en la disponibilidad de estos
requerimientos en un sistema acutico?
4. La fotosntesis utiliza enzimas, si lo hace, que factores pueden influir en
las reacciones enzimticas dentro de una planta acutica?
5. Mientras discutes estas preguntas, escribe una lista de posibles variables
independientes de tu experimento. Una vez que hayas identificado estas
variables discute tus favoritas con tu instructor.

52

6. Ahora que has escrito t variable independiente estas listo para escribir
una hiptesis formal sugiriendo de manera general como este factor
influye en la fotosntesis.
7. El siguiente paso en disear tu experimento es determinar como
planearas manipular tu variable independiente. En otras palabras, ahora
podrs disear los detalles de tus mtodos experimentales. Lee los
siguientes mtodos y discute con tu grupo como podras modificarlos
para adaptarlos a las necesidades de tu experimento.
RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

53

PRACTICA 18
ESTUDIO DE LA MITOSIS EN CLULAS DE LA RAZ DE CEBOLLA

OBJETIVO. Que el alumno se familiarice con las diferentes fases de la mitosis.

MATERIALES
- Microscopio
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Lanceta estril
- Cubeta de tincin
- Aguja enmangada
- Pinzas
- Palillos
Frasco lavador
Mechero de alcohol

Tijeras

Papel de filtro
Vaso de precipitados
-

Vidrio de reloj

Orcena A

Orcena B

TCNICA

Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un

bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de
manera que la parte inferior quede inmersa en el agua.
Al cabo de 3-4 das aparecern numerosas raicillas en
crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud.

Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremo de las

raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se

54

han vertido 2-3 ml de orcena A.

Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8

minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues.

Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y
colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar
durante 1 minuto.

Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de

una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de
modo que la raz quede extendida.

Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el

dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una
suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien
asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice.

Observar al microscopio.
OBSERVACIN MICROSCPICA
Se realizar a fuertes aumentos. La orcena A reblandece las membranas
celulares y la B completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta
de la preparacin se logra una extensin y difusin de las clulas del
meristemo de la cebolla.
La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el
campo que abarca el microscopio. Se observan clulas en diversas fases o
estados de divisin celular. Se ven los cromosomas teidos de morado por la
orcena. El aspecto reticulado as como el mayor tamao de algunos ncleos
corresponde a las clulas que se encontraban en los procesos iniciales de la
divisin mittica.(1)

ESTUDIO DE LA MITOSIS EN CLULAS DE LA RAZ DE

CEBOLLA

55

OBSERVACIONES

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

PREGUNTAS.

1. Describe las fases de la mitosis que has observado y su significado.

2. Por qu los cromosomas se tien de morado?
3. Has observado el proceso de citocinesis? En caso afirmativo,
descrbelo.

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

56

BIBLIOGRAFA
1. Manual de Biologa General; Jos A. Cortes. 2005
http://www.joseacortes.com/practicas/index.htm
2. Manual CELLULAR AND ORGANISMAL Biology. Ralph W.
Preeszler, Laura Lowell Haas, Amy L. Marion. 2003. Outernet
Publishing, LLC.

Bibliografa de consulta para el alumno.

1. Biologa. Solomon, Berg, Martin. 8. ED. Mc. Graw Hill. 2008
2. Introduccin a la Biologa Celular. Alberts, Bray, Hopkin, 2.
Panamericana. 2006.
3. Biologa Molecular de LA CELULA, Bruce Alberts, Bray, Lewis 3.
Omega.
4. Microbiologa. Cuarta Edicin.; Lansing Prescott; John P. Harley;
Donald A. Klein.; Ed. Mcgraw-Hill-Interamericana.; 2003
5.

Introduccin a la Microbiologa. , 9 Edicin. Tortora, Funke, Case.

Ed. Panmericana. 2007

6. Biologa De Los Microorganismos. Octava Edicin.; Michael T.

Madigan; John M. Martinko; Jack Parker Printice Hall.; 2000.

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ANEXO
Preparacin de colorantes

1. Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen)

o cido clorhdrico concentrado ..........................................................3 ml
o Etanol 95% ....................................................................................97 ml
2. Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos.
o Azul de metileno................................................................................1 g
o Agua destilada...............................................................................100 ml
3. Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.
o Solucin de hidrxido potsico al 1%.................................................1 ml
o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 ml
o Agua destilada...............................................................................100 ml
4. Colorante para esporas:
o Solucin acuosa saturada de verde malaquita
5. Colorante para flagelos de Leifson:
o Solucin A
Fucsina bsica .........................................................................1,2 g
Etanol 95%.............................................................................100 ml
o Solucin B
cido tnico................................................................................3 g
Agua destilada.........................................................................100 ml
o Solucin C
Cloruro sdico..........................................................................1,5 g
Agua destilada.........................................................................100 ml
Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de las
soluciones A, B y C y se guarda en frasco cerrado hermticamente en la nev
donde es estable durante varias semanas.
6. Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple.
o Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g
o Agua destilada.................................................................................100 ml
7. Eosina: Para observacin de clulas sanguneas.
o Eosina...............................................................................................0,3 g
o cido actico glacial......................................................................0,025 ml
o Agua destilada...................................................................................100 ml
8. Fucsina diluida: Para tincin Gram y tincin simple.

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Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen......................................................10 ml

Agua destilada.................................................................................100 ml
9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente.
o Fucsina bsica......................................................................................1 g
o Etanol 95%........................................................................................10 ml
o Fenol 5% en solucin acuosa............................................................100 ml
10. Hematoxilina: Para observacin de clulas sanguneas.
o Hematoxilina.........................................................................................2 g
o Agua destilada......................................................................................1 l
11. Lactofenol: Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos.
o cido lctico.....................................................................................100 ml
o Fenol................................................................................................100 g
o Glicerol.............................................................................................200 ml
o Agua.................................................................................................100 ml
12. Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos.
o Solucin de azul algodn
Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)......................10 ml
Glicerol.....................................................................................10 ml
Agua.........................................................................................80 ml
Mezclar esta solucin con lactofenol a partes iguales
13. Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram.
o Yodo...................................................................................................1 g
o Yoduro potsico..................................................................................2 g
o Agua destilada.................................................................................300 ml
14. Orcena A: Tincin de cromosomas.
o Orcena................................................................................................2 g
o cido actico.....................................................................................45,8 ml
o cido clorhdrico 1 mol/l......................................................................8,3 ml
o Agua..................................................................................................45,8 ml
15. Orcena B: Tincin de cromosomas.
o Orcena................................................................................................2 g
o cido actico.....................................................................................55 ml
o Agua..................................................................................................55 ml
16. Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y esporas.
o Safranina.........................................................................................0,25 g
o Agua destilada..................................................................................100 m
17. Sudn III: Tincin especfica de grasas.
o Alcohol etlico...................................................................................100 ml
o Sudn III...................................................................................hasta saturacin
18. Verde de metilo actico: Igual composicin que la eosina (num. 7)
o
o

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