INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA
DR. MAURICIO RUSSEK BERMAN

MANUAL DE LABORATORIO DE
FISIOLOGA GENERAL (QFI)

8 EDICIN

AGOSTO DE 2013

AUTORES
Dra. Alva Snchez Claudia
Bil. Avila Velarde Gerardo
Dra. Barrera Segovia Julia
Dr. Chuc Meza Elizer
Dr. De la Cruz Lpez Fidel
M. en C. Escalona Cardoso Gerardo Norberto
Dra. Franco Coln Margarita
Dra. Garcs Ramrez Linda
Dra. Garca Ramrez Martha
Bil. Guarneros Bauelos Elizabeth
M. en C. Gutirrez Lozano Ana Lilia
Dra. Ortiz Butrn Mara del Roco Elizabeth
Dr. Pacheco Rosado Jorge
Dra. Paniagua Castro Norma
Dr. Ramrez San Juan Eduardo
Dr. Villanueva Becerril Ivn
Dr. Zamudio Hernndez Sergio Roberto

NDICE
Pgina
NDICE .. 3
PROGRAMA DE FISIOLOGA GENERAL, QFI .... 4
NORMAS DE LABORATORIO ..... 9
Prctica 1. Aspectos generales del manejo de animales de laboratorio y vas
de administracin .. 10
Prctica 2. Conceptos bsicos en homeostasis 14
Prctica 3. Estudio de la penetracin de sustancias a las clulas normales 19
Prctica 4. Potencial de difusin y potencial de lesin .. 23
Prctica 5. Potencial de accin, simulacin por computadora . 31
Prctica 6. Potencial de accin compuesto 37
Prcticas 7. Transmisin sinptica y 8. Msculo esqueltico .. 45
Prctica 9. Modulacin de una funcin celular por funciones qumicas 52
Prctica 10. Propiedades del msculo cardiaco 58
Prctica 11. Propiedades del msculo liso . 64
APNDICE ... 70
a) Manejo de animales de laboratorio . 70
b) Distribucin de animales de laboratorio . 72
c) Marcaje de animales de laboratorio .... 73
d) Vas de administracin usadas en el curso ... 74
e) Soluciones fisiolgicas .. 75
f) Soluciones empleadas en las prcticas .. 76
g) Calibracin del BIOPAC ... 79

PROGRAMA DE FISIOLOGA GENERAL, QFI

I. REGULACIN Y CONTROL (9 horas)
1. Sistemas, equilibrio y estado estable
1.1 Concepto de sistemas
1.2 Sistemas en equilibrio
1.3 Sistemas en estado estable o estacionario
2. Variables biolgicas
2.1 Variables en estado estable
2.2 Variables reguladas
3. Sistemas con asas de informacin
3.1 Elementos constitutivos del asa de informacin
3.2 Retroalimentacin y anteroalimentacin
4. Variables reguladas y controladas
4.1 Diferencia entre regulacin y control
4.2 Relacin entre homeostasis y regulacin
4.3 Homeorresis

II. LA CLULA COMO UN SISTEMA ABIERTO (7 horas)

1. Estructura de la membrana plasmtica
1.1 Componentes qumicos de la membrana
1.1.1 Funciones de las protenas
1.1.2 Lpidos de membrana y fluidez de la membrana
1.1.3 Naturaleza dinmica de la membrana plasmtica
2. Movimiento de sustancias a travs de la membrana
2.1 Difusin simple
2.1.1 Difusin de agua
2.1.2 Difusin de iones
2.2 Difusin facilitada
3. Transporte activo
4

3.1 Primario
3.2 Secundario

III. EXCITABILIDAD (10 horas)

1. Potencial de reposo de la membrana
1.1 Potencial de equilibrio electroqumico (ecuacin de Nernst)
1.2 Equilibrio de Donnan
1.3 Bombas electrognicas
1.4 Permeabilidad diferencial de las membranas
1.5 Ecuacin de Goldman
2. Potencial de accin
2.1 Concepto de electrotono
2.2 Fases del potencial de accin y movimientos inicos
2.2.1 Estructura y estados del canal dependientes de voltaje para sodio y
potasio
2.3 Periodos refractarios absoluto y relativo
2.4 Propagacin del potencial de accin
2.4.1 Conduccin en fibras amielnicas
2.4.2 Conduccin en fibras mielnicas

IV. TRANSMISIN SINPTICA (8 horas)

1. Tipos de sinapsis
1.1 Sinapsis elctrica
1.2 Sinapsis qumica
1.3 Mediadores ionotrpicos y metabotrpicos
2. Sinapsis excitadora (PPSE)
3. Sinapsis inhibidora (PPSI)
4. Modulacin presinptica
5. Suma espacial, temporal e integracin
6. La unin neuromuscular
5

V. SEALIZACIN CELULAR Y TRANSDUCCIN DE SEALES (10

horas)
1. Naturaleza qumica de las seales
1.1 Seales hidroflicas
1.2 Seales hidrofbicas
2. Receptores acoplados a protenas G y sus segundos mensajeros
2.1 Protenas G heterotrimricas, inicio y terminacin de la respuesta
2.2 Segundos mensajeros
2.2.1 AMPc
2.2.2 IP3 y DAG
2.2.3 GMPc
3. Calcio como mensajero intracelular
4. xido ntrico como mensajero intracelular
5. Receptores asociados a protenas-tirosincinasa
5.1 Dimerizacin
5.2 Activacin de la cinasa
5.3 Interaccin de protena-protena dependiente de la fosfotirosina
5.4 La va Ras-MAPK
6. Receptores intracelulares (respuesta a seales lipoflicas)
7. Regulacin de la respuesta a las seales
7.1 Regulacin ascendente
7.2 Regulacin descendente
8. Convergencia, divergencia y comunicacin cruzada entre diferentes vas de
sealizacin

VI. CONTRACTILIDAD (12 horas)

1. Msculo esqueltico
1.1 Unidad motora
1.2 Caractersticas morfolgicas
1.2.1 Estructura del sarcmero
1.2.2 Caractersticas de las protenas del msculo
6

1.3 Actividad mecnica

1.3.1 Disposicin de las protenas contrctiles
1.3.2 Mecanismo de deslizamiento de los filamentos
1.3.3 Acople excitacin contraccin
1.3.4 La sacudida muscular
1.3.5 Suma de contracciones
1.4 Energtica muscular
1.4.1 Tipos de fibras
1.4.2 Fatiga
1.5 Tipos de contraccin
1.5.1 Isomtrica
1.5.2 Isotnica
2. Msculo cardiaco
2.1 Caractersticas morfolgicas
2.2 Propiedades elctricas de las clulas musculares
2.2.1 Clulas marcapaso
2.2.2 Clulas del sistema conductor del corazn
2.2.3 Clulas contrctiles
2.3 Efectos de la inervacin autonmica
3. Msculo liso
3.1 Caractersticas morfolgicas
3.2 Propiedades elctricas de las clulas musculares
3.2.1 Clulas contrctiles
3.2.2 Clulas marcapaso
3.3 Propiedades mecnicas
3.4 Efectos de la inervacin autonmica

BIBLIOGRAFA
Alberts, B.; Johnson, A.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K. y P. Walter. (2010). Biologa
molecular de la clula. 5 edicin. Editorial Omega. Espaa.
7

Cereijido, Marcelino. (2009). Elogio del desequilibrio. En busca del orden y el

desorden en la vida. Coleccin Ciencia que ladra Siglo XXI editores. Argentina.

Eckert, R. y D. Randall (1994). Fisiologa Animal. Mecanismos y Adaptaciones. 3

edicin. McGraw Hill- Interamericana. Espaa.

Giese, A. (1983). Fisiologa Celular y General. 5 edicin. Nueva Editorial

Interamericana. Mxico.

Hernndez, O. (2011). Elementos bsicos de neurofisiologa. Trillas. Mxico.

Karp, G. (2011). Biologa celular y molecular. Conceptos y experimentos. 6

edicin. McGraw Hill. Mxico.

Levy, M.; Koeppen, B. y B. Stanton (2006). Fisiologa. 4 edicin. Elsevier-Mosby.

Espaa.

Lodish, H.; Berk, A.; Matsudaira, P.; Kaiser, C.; Krieger, M.; Scott, M.; Zipursky, S. y

J. Darnell. (2005). Biologa celular y molecular. 5a edicin. Editorial Mdica

Panamericana. Argentina.

Russek, M. y M. Cabanac. (1990). Regulacin y Control en Biologa. 1 reedicin.

IPN. Mxico.

Sperelakis, N. (Ed.). (2012). Cell Physiology. Source Book. Essentials of

Membrane Biophysics. Fourth edition. Academic Press. U.S.A.

NORMAS DE LABORATORIO
1. En la medida de lo posible, los equipos NO debern exceder un mximo de 6
personas.
2. Cada equipo ocupar una mesa que ser la misma durante todo el curso.
3. Los alumnos debern usar bata, de preferencia blanca, en las sesiones prcticas.
4. Cada equipo deber tener: a) dos franelas de 50 x 50 centmetros, b) equipo de

diseccin: pinzas de diseccin y presin, bistur con hoja, tijeras de punta fina, aguja de
diseccin e hilo de algodn, c) marcador indeleble, d) cinta adhesiva (masking tape).
5. Cuando se utilice el equipo BIOPAC, los alumnos debern guardar los archivos de sus
prcticas en un CD, no se permite el uso de memorias USB.
6. No se permite la ingesta de alimentos durante la estancia en el laboratorio.
7. El laboratorio deber quedar limpio al terminar la sesin prctica: mesa limpia, bancos
sobre las mesas, cadveres de animales en una bolsa de plstico y sin papeles sucios
en el piso.
8. El material roto, extraviado o descompuesto deber reponerse a la mayor brevedad,
de lo contrario no tendr derecho a presentar exmenes y prcticas.
9. Los resultados de las prcticas sern reportados por escrito. El reporte deber
contener: a) Portada, b) Introduccin (no ms de 2 cuartillas), c) Objetivos, d)
Metodologa (diagrama de flujo), e) Resultados (cuadros, grficas y su descripcin
correspondiente), f) Anlisis de resultados (o discusin), g) Conclusiones, h) Bibliografa.
Los reportes debern estar preparados, por lo menos en calidad de borrador, para el da
de la presentacin del seminario.
10. Los alumnos que no cumplan con un mnimo de 80% de asistencias al curso, no
podrn acreditar la materia. Se tomar como retardo, la llegada dentro de los 15 minutos
despus de la hora de entrada establecida. Tres retardos constituyen una falta.
9

PRCTICA 1
ASPECTOS GENERALES DEL MANEJO DE ANIMALES DE
LABORATORIO Y VAS DE ADMINISTRACIN
INTRODUCCIN
Actualmente, muchos de los experimentos de las ciencias biomdicas se realizan
en animales de fcil manejo, los cuales se han denominado animales de laboratorio y la
rata es uno de los ms usados.
La legislacin en Mxico y en muchos pases exige tratos bioticos a los animales
destinados a la experimentacin, de tal forma que se reduzca su utilizacin a lo
absolutamente necesario y se minimice su sufrimiento.
Cuando la experimentacin se realiza con los mtodos apropiados, el investigador
obtiene buenos resultados con el uso de animales y mejoran la calidad y reproducibilidad
de los datos.
Las vas de administracin de sustancias deben seleccionarse con base en la naturaleza
fisicoqumica de la sustancia a aplicar y el animal de laboratorio que se emplear.
En esta prctica se practicarn los principales mtodos para el manejo, marcado y
distribucin aleatoria de animales de laboratorio, as como las vas ms usuales para la
administracin de sustancias o frmacos.

OBJETIVOS
- Manipular correctamente ratas de laboratorio.
- Distribuir aleatoriamente a las ratas utilizando un mtodo adecuado.
- Determinar la importancia de la distribucin aleatoria de los animales.
- Aprender el marcado adecuado de animales para la realizacin de cualquier tipo de
experimento.
- Aprender a administrar, a los animales ms usados en el laboratorio, sustancias o
frmacos por distintas vas.
- Calcular las dosis de las sustancias que se van a administrar.
10

- Organizar los datos obtenidos para su reporte y anlisis.

MATERIAL
- 3 ratas macho de 250 a 300 gramos.
- 1 caja de plstico para rata con tapa.
- 1 balanza granataria y canasta con tapa.
- 3 termmetros digitales o industriales.
- 3 jeringas de 1 ml con aguja.
- 1 cnula para administracin intragstrica en rata.
- 1 vaso de precipitados de 50 ml.
- 1 cronmetro.
- vaselina.
- cinta adhesiva (masking tape).
- pentobarbital sdico (nembutal).
- cido pcrico (o marcador indeleble).

DESARROLLO
1. Practicar, durante toda la sesin, las tcnicas bsicas para el manejo de la rata (ver
apndice).
2. Distribuir aleatoriamente las 18 ratas en los 6 equipos (ver apndice)
3. Marcar y pesar a las ratas (ver apndice).
4. Calcular, para cada rata, el volumen de anestsico (pentobarbital sdico) que se
requiere administrar, si la concentracin de la solucin de pentobarbital es 63 mg/ml y la
dosis para estos animales es de 35 mg/kg.
5. Medir la temperatura colonal y determinar la presencia o ausencia de los reflejos flexor
y de enderezamiento en las ratas. Estos se considerarn los valores basales.
a) Para medir la temperatura colonal de las ratas: introducir por el recto el bulbo del
termmetro untado con vaselina (si el termmetro es industrial, debe introducirse
aproximadamente 5 centmetros y mantenerse as durante 1 minuto y medio para realizar
la lectura).
b) Observar y registrar la presencia o ausencia de los reflejos flexor y de
enderezamiento. Para el reflejo flexor, aplicar un estmulo doloroso en alguna de las
patas de la rata, se registra como presente si la rata retira la pata. Para el reflejo de
11

enderezamiento, colocar la rata boca arriba (posicin supina dorsal) sobre la mesa de
trabajo, si la rata se endereza y se posa sobre sus 4 pata, se considera que el reflejo
est presente.
6. Determinar qu va de administracin se utilizar con cada una de las 3 ratas
(intragstrica, intraperitoneal o subcutnea) y administrarles adecuadamente el volumen
de pentobarbital calculado (ver apndice).
7. Medir la temperatura colonal y determinar la presencia o ausencia de los reflejos flexor
y de enderezamiento en las ratas despus de haber realizado la administracin de
pentobarbital por las diferentes vas, esto se har cada 5 minutos durante 25 minutos.

DATOS
a) Temperatura colonal (C)
TIEMPO
(minutos)
0 (basal)

VA
INTRAGSTRICA

VA
INTRAPERITONEAL

VA
SUBCUTNEA

5
10
15
20
25
b) Reflejos flexor (F) y de enderezamiento (E). Marcar presencia (+) o ausencia (-).
TIEMPO
(minutos)

VA
INTRAGSTRICA
F
E

VA
INTRAPERITONEAL
F
E

0 (basal)
5
10
15
20
25

12

VA
SUBCUTNEA
F
E

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Agrupar los resultados de todos los equipos y utilizar los programas SigmaStat 3.5 y
GraphPad Prism 5 (o cualquier otro programa de grficos), para:
* Obtener la media y el error estndar de los datos de temperatura colonal de las ratas
administradas con cada va en cada uno de los tiempos considerados.
* Realizar el anlisis estadstico (ANOVA bifactorial de medidas repetidas), y
* Elaborar la grfica de temperatura colonal contra tiempo.
* Elaborar las grficas de porcentaje de ausencia de los reflejos, tanto flexor como de
enderezamiento, contra tiempo.

BIBLIOGRAFA
Archiga, H. (1999). El uso de animales en el laboratorio de experimentacin. Elementos,
BUAP. (36):13-17.
Baker, J. H.; Lindsey, J. R. and S. H. Weisbroth, Eds. (1980). The laboratory rat. Vol II.
Academic Press. London and N.Y. Pp: 3.28.
Barastegui, A. C. (1976). Esquemas de prcticas de farmacologa. Espaxs. Pp. 26-27.
Daniel, W. W. (2010). Bioestadstica. Base para el anlisis de las ciencias de la salud. 4
edicin. Limusa-Wiley. Mxico.
Fox, G. J.; Anderson; C. L.; Loew, M. F. and F. W. Quimby, Eds. (2002). Laboratory animal
medicine. 2nd edition. American College of Laboratory Animal Medicine Series. Academic
Press. U.S.A.
Norma Oficial Mexicana sobre especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y
uso de los animales de laboratorio (NOM-062-ZOO-1999). Diario Oficial de la
Federacin, 22 de agosto de 2001.
Academia Nacional de Medicina, Academia Mexicana de Ciencias y Universidad
Nacional Autnoma de Mxico. (1999). Gua para el cuidado y uso de los animales de
laboratorio. Mxico.

13

PRCTICA 2
CONCEPTOS BSICOS EN HOMEOSTASIS
INTRODUCCIN
Todos los organismos vivos estn continuamente sujetos a cambios ambientales,
afectndolos a todos sus niveles: rganos, tejidos, clulas y vas metablicas (sistemas).
Los organismos responden a los cambios energticos del medio (estmulos),
manteniendo constante su medio interno (variables reguladas) mediante el control de su
entrada y salida de energa. Es esta, la ciberntica aplicada a la fisiologa, la base
esencial para una mejor comprensin del funcionamiento de los seres vivos.

OBJETIVOS
- Identificar y analizar los distintos estados de un sistema.
- Manejar e integrar los conceptos de regulacin y control.
- Demostrar algunos aspectos de la homeostasis.

MATERIAL
- 1 balanza para pesar ratas y canasta con tapa.
- 2 cajas de plstico para rata con tapa
- 2 termmetros con escala de 0-50 C.
- 2 termmetros clnicos digitales.
- 2 termmetros clnicos para humano.
- 3 cronmetros
- vaselina, cubos de hielo.
- 1 bao Mara.
- 1 resistencia con termostato.
- 1 termmetro de cartula.
- 1 vaso de precipitado de 50 ml
- 4 jeringas de 1 ml.
- 5 ratas adultas.
- pentobarbital sdico (nembutal)
14

DESARROLLO
A. Coloque en un bao Mara 2 litros de agua a temperatura ambiente. Por medio del

botn del termostato, caliente el agua 10 C arriba de la temperatura ambiente. Mida la

temperatura cada 5 minutos hasta que sta se mantenga constante durante 15 minutos.
Adicione 6 cubos de hielo (o el suficiente para bajar la temperatura) y registre la
temperatura en este momento y cada 10 segundos durante 3 minutos, despus, cada
minuto, hasta que la temperatura vuelva a tener el valor basal.
1.- Qu funcin tienen los cubos de hielo?
2.- Cmo clasificara al sistema?
3.- Cmo responde el sistema a cada una de las perturbaciones?
Identifique cada uno de los componentes del sistema.
B. Tome la temperatura colonal basal a 4 ratas adultas (introducir el termmetro 5

centmetros). Posteriormente administre intraperitonealmente a dos de ellas con

pentobarbital sdico (35 mg/kg de peso) y a las otras dos con solucin salina (el volumen
correspondiente). stas ltimas servirn como control. La anestesia y el manejo se
realizarn como lo marca el apndice C de la NOM-062-ZOO-1999.
- Una rata control y una rata bajo anestesia se colocarn en un cuarto caliente (40 C).
- Las dos ratas restantes (anestesiada y control) se mantendrn en un cuarto fro (8 C).
- Tome la temperatura colonal cada 10 minutos durante el tiempo en el que permanecen
sometidas a los cambios de temperatura (media hora).
- Despus de salir de los cuartos (fro y caliente), contine tomando la temperatura
colonal de las ratas en las condiciones basales (temperatura ambiente) hasta que la
temperatura corporal sea similar al valor antes de la perturbacin.
- Anote todas las respuestas conductuales que presentan las ratas para compensar la
perturbacin por cambios en la temperatura ambiental.
1.- Cmo responde el sistema a cada una de las perturbaciones? Identifique cada uno
de los componentes del sistema.
C. Con la finalidad de comparar los mecanismos termorreguladores en sistemas con
diferente masa corporal (rata y humano), por equipo, someter a un alumno a
perturbaciones de temperatura: cuarto caliente y otro al cuarto fro. Medir la temperatura
15

oral a temperatura ambiente (basal). Durante el tiempo que permanecen sometidos a la

perturbacin, medir cada 10 minutos (media hora).
- Despus de salir de los cuartos (fro y caliente), contine tomando la temperatura oral
en las condiciones basales (temperatura ambiente) hasta que la temperatura corporal
sea similar al valor antes de la perturbacin.
- Anote todas las respuestas que presentan los sujetos de experimentacin para
compensar la perturbacin.
1.- Cmo responde el sistema a cada una de las perturbaciones? Identifique cada uno
de los componentes del sistema.
Para realizar el experimento C, y con base en el Cdigo de Nremberg y en la
Declaracin de Helsinki de la Asociacin Mdica Mundial, los alumnos sometidos a los
cuartos caliente y fro debern firmar la autorizacin correspondiente.

DATOS
* Experimento A
Tiempo
(minutos)
Temperatura
del agua
(C)
* Experimentos B y C
* Cuarto a 40 C

Tiempo
(minutos)
Temperatura
colonal, rata
control (C)
Temperatura
colonal, rata
anestesiada
(C)
Temperatura
oral, humano
(C)

Basal
(0)

(10)

(20)

16

(30)

Fuera del
cuarto (40)

* Cuarto a 8 C
Tiempo
(minutos)
Temperatura
colonal, rata
control (C)
Temperatura
colonal, rata
anestesiada
(C)
Temperatura
oral, humano
(C)

Basal
(0)

(10)

(20)

(30)

Fuera del
cuarto (40)

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Agrupar los resultados (de todos los equipos) obtenidos en cada una de las condiciones
experimentales para realizar el anlisis estadstico y las grficas correspondientes,
sealando en las mismas el error estndar de cada media.
Con los datos del experimento B, determinar si existe diferencia estadstica en los
registros de temperatura de las ratas control y de las anestesiadas para cada una de las
temperaturas ambientales (fro y calor). Explique.
Qu tipo de sistema se considera a las ratas control y que tipo de sistema a las ratas
anestesiadas? En este sistema (rata) indique:
- La variable regulada.
- El estmulo y el receptor.
- Las vas aferentes y las eferentes.
- El centro integrador.
- Los efectores.
Con los datos de los experimentos B y C, determinar si existe diferencia estadstica en
los registros de temperatura de las ratas control y de los humanos para cada una de las
temperaturas ambientales (fro y calor). Explique.

17

BIBLIOGRAFA
Russek M. y M. Cabanac, 1983. Regulacin y Control en Biologa Instituto Politcnico
Nacional. Mxico, D.F.
Daniel, W.W. Bioestadstica. Base para el anlisis de las ciencias de la salud. 1995.
Noriega Eds. 5a Edicin.
Steel, R.G.D. y Torrie, J.H. Bioestadstica. Principios y Procedimientos. 1988. McGrawHill.
Mainetti, J. A., Cdigo de Nremberg, Tribunal Internacional de Nremberg, 1947.
Traduccin adaptada de Mainetti J. A. (1989), tica Mdica, Quirn, La Plata, Argentina.
Declaracin de Helsinki de la Asociacin Mdica Mundial. Pautas ticas Internacionales
para la Investigacin y Experimentacin Biomdica en Seres Humanos. ISBN 92 9036
0569. Consejo de Organizaciones Internacionales de las Ciencias Mdicas (CIOMS),
1993, Ginebra, pp. 53-56.
NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones Tcnicas para la
produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

18

PRCTICA 3
ESTUDIO DE LA PENETRACIN DE SUSTANCIAS A
CLULAS NORMALES
INTRODUCCIN
Continuamente se realiza entre los seres vivos y su medio un intercambio de iones
y sustancias. A nivel celular, ste depende de varias propiedades fisiolgicas conocidas
colectivamente como permeabilidad celular. En este fenmeno participan dos grupos de
factores: a) las propiedades de las membranas celulares y b) las fuerzas impulsoras. Las
membranas celulares no slo son diferencialmente permeables a varias sustancias, sino
que tambin, presentan alteraciones en su permeabilidad bajo diferentes situaciones
fisiolgicas y ambientales. Las fuerzas impulsoras son de dos tipos: a) fuerzas fsicas,
que dependen de gradientes de concentracin o difusin en soluciones acuosas y b)
propiedades celulares especiales de difusin, facilitada (transportadora) y de transporte
activo.

OBJETIVO
- Determinar los distintos factores que intervienen en la penetracin de algunas
sustancias a travs de la membrana celular por difusin simple.

MATERIAL Y SOLUCIONES
Por equipo:

Lanceta

5 pipetas Pasteur con bulbo

4 pipetas graduadas de 1 ml

4 pipetas graduadas de 5 ml

Gradilla

20 tubos grandes

4 vasos de precipitados de 50 ml

Algodn

19

Soluciones:

NaCl 0.9% (0.2 M)

Alcohol etlico 96%

Alcohol etlico 0.3 M

Alcohol metlico 0.3 M

Alcohol proplico 0.3 M

Alcohol butlico 0.3 M

Sacarosa 1 M

KCl 1 M

BaCl2 1 M

Para realizar el siguiente experimento y con base en el Cdigo de Nremberg y a la

Declaracin de Helsinki de la Asociacin Mdica Mundial, los alumnos a los que se les
extraer sangre debern firmar la autorizacin correspondiente.

DESARROLLO
I.- Preparacin de la suspensin de glbulos rojos.
a) Obtngase sangre de la yema de un dedo con una lanceta estril (previamente limpie
con alcohol etlico 96%).
b) En un tubo de ensayo que contenga 5 ml de solucin salina isotnica (NaCl 0.2 M),
agregue 5 gotas de sangre.
NOTA: Si la muestra de sangre, se toma por puncin venosa:
a)

Colocar la sangre obtenida por puncin venosa, en un tubo de ensayo

heparinizado, homogeneizar la sangre con la heparina.

b)

En un tubo de ensayo que contenga 5 ml de solucin salina isotnica (NaCl 0.2

M), agregue 5 gotas de sangre obtenida por puncin venosa.

1.- Preparacin de los patrones de comparacin.
Aada 5 gotas de la suspensin anterior de glbulos rojos a 2 tubos de ensayo que
contengan: el primero 5 ml de agua destilada y el segundo 5 ml de NaCl 0.2 M.
Observe a travs del lquido y determine si ocurre hemlisis, colocando detrs del tubo
una hoja blanca con letras. SI HAY hemlisis, las letras se podrn leer claramente, si NO
HAY hemlisis, el tubo estar turbio y las letras no se leern con facilidad.
20

2.- Determinacin de la concentracin hemolizante para diferentes soluciones de NaCl

(en cada caso use 5 gotas de la suspensin de eritrocitos y 5 ml de la solucin).

Determine si una solucin de NaCl 0.1 M es hemolizante.

Diluya a la mitad y observe.

Realice el nmero de diluciones necesarias hasta encontrar la solucin

hemolizante.

Realice lecturas cada 30 segundos.

3.-Determinacin de la concentracin hemolizante para diferentes sustancias (electrolitos

y no electrolitos).

Determine la concentracin a la que son capaces de producir hemlisis las

siguientes sustancias: sacarosa, KCl y BaCl 2.

En cada caso proceda como lo realiz en el inciso 2.

4.- Determinacin de los tiempos de hemlisis para diferentes sustancias lipoflicas:

Establezca el tiempo de hemlisis para los siguientes alcoholes: metlico (coeficiente de
particin=0.0097); etlico (coeficiente de particin=0.0357); proplico (coeficiente de
particin=0.156); butlico (coeficiente de particin=0.588).

DATOS
SOLUCIN

DILUCIN
HEMOLIZANTE

NaCl
Sacarosa
KCl
BaCl2
SOLUCIN

TIEMPO DE HEMLISIS

Alcohol metlico
Alcohol etlico
Alcohol proplico
Alcohol butlico

21

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Realice para las experiencias 2 y 3, una grfica que relacione la concentracin
hemolizante con el factor estudiado.
Para la experiencia 4 realice la grfica correspondiente que relacione el tiempo de
hemlisis con el factor estudiado.

BIBLIOGRAFA
1. Eckert R., D. Randall y G. Augustine. Fisiologa Animal. Mecanismos y Adaptaciones.
4a edicin.1998. Editorial Interamericana-McGraw-Hill. Espaa. p: 101 -135.
2. Ganong F.W. Fisiologa Mdica. 17 Edicin. 2000. Editorial Manual Moderno. Mxico,
D.F. p. 6 - 9; 32 - 40.
3. Berne R. y M. Levy. Fisiologa. 3. Edicin. 2002. Editorial. Harcourt. Mosby. Espaa.
p: 4 -17.

22

PRCTICA 4
POTENCIAL DE DIFUSIN Y POTENCIAL DE LESIN
INTRODUCCIN
La diferencia en la concentracin de iones a ambos lados de una membrana con
permeabilidad selectiva, a travs de la cual slo puede moverse una especie inica (el
catin o el anin), genera un flujo de iones desde el lado en que la concentracin es
mayor hacia el lado en que la concentracin es menor. Este movimiento de partculas
con carga elctrica, al no acompaarse de partculas con carga de signo opuesto, genera
una diferencia de potencial elctrico a travs de la membrana (potencial de difusin), el
cual se opone al paso de nuevos iones hacia el lado de menor concentracin.
Al cabo de cierto tiempo, el flujo dado por la diferencia de concentraciones (gradiente
qumico) llega a ser compensado por el flujo de repulsin, dado por la diferencia de
potencial elctrico (gradiente elctrico).
En estas condiciones, se dice que el ion est en equilibrio electroqumico a travs de la
membrana. La diferencia de potencial de la membrana tiene un valor que se denomina
potencial de equilibrio (Eion). Este potencial est definido por la ecuacin de Nernst:

Eion= Potencial de equilibrio (Voltios)

R= Constante de los gases
T= Temperatura absoluta
F= Constante de Faraday
z= Valencia del ion
C= Concentracin del ion difusible
Julius Berstein fue el primero en proponer, en 1902, una hiptesis satisfactoria para
explicar el origen del potencial de reposo en el nervio y en las fibras musculares. Por
medio de mtodos qumicos averigu que el interior de ambas clulas era rico en
potasio, con poca cantidad de sodio y cloro. Adems, averigu que en el interior de la
23

clula haba aniones a los cuales la clula no era permeable, por lo que postul que el
potencial de reposo era consecuencia de una distribucin desigual de iones de potasio,
como predeca la ecuacin de Nernst. Como en aquella poca no poda medirse con
precisin el potencial de reposo de una clula, Berstein cort varias fibras musculares e
insert un electrodo en el rea cortada, haciendo contacto eficaz con el lquido interno de
las fibras musculares, a este registro se le llam potencial de lesin. Los datos que
encontr mostraron que el potencial de membrana segua de manera muy cercana el
potencial de equilibrio predicho por la ecuacin de Nernst para el ion potasio.
La diferencia de potencial que existe a travs de las membranas biolgicas depende de
los gradientes de concentracin y de la permeabilidad relativa para cada especie inica.
La ecuacin de Goldman, Hodgkin y Katz define el potencial de membrana en funcin de
estos dos importantes factores:

Em= Potencial de membrana

P= Permeabilidad relativa de cada ion
i= Compartimiento intracelular
e = Compartimiento extracelular
Otro factor importante para el mantenimiento del potencial de membrana es el transporte
activo, ya que la membrana celular es permeable a diversos iones y stos no estn en un
equilibrio electroqumico, es decir, el potencial de membrana no es igual a su potencial
de equilibrio, por lo que los iones difunden a favor del gradiente predominante
(electroqumico) y las clulas deben compensar estos flujos de difusin para que no se
alteren las concentraciones inicas. Esto se hace mediante el transporte activo de los
iones, con un gasto continuo de energa metablica por parte de la clula.
El resultado de la interaccin de los factores mencionados es un estado estable, en el
cual se mantienen constantes las concentraciones intracelulares y extracelulares de
iones, as como el potencial de membrana.

24

OBJETIVOS
- Demostrar que la difusin de un electrolito a travs de una membrana artificial con
permeabilidad selectiva genera una diferencia de potencial (potencial de difusin).
- Determinar el potencial de lesin de un msculo esqueltico de rana y establecer si
existe una relacin entre la diferencia de potencial obtenida con diferentes
concentraciones de potasio y el predicho por la ecuacin de Nernst.

MATERIAL
Por equipo:
1 multmetro digital.
1 par de electrodos de plata clorurados
2 celdas de calomel con puente salino.
2 alambres de plata.
2 soportes de media luna.

Si no hay electrodo de plata

3 pinzas de tres dedos

3 pinzas dobles.
6 vasos de precipitados de 50 ml.
6 jeringas de 10 ml con aguja.
1 Rana.
3 vasos de precipitados de 500 ml.
1 caja de Petri.

1 membrana para dilisis.

2 tubos de vidrio.

1 cmara de Ussing.

1 huevo de gallina
Soluciones:
Solucin de Ringer.

Vaselina slida.

Solucin de LIC.
Soluciones de K2SO4: 0.005, 0.01, 0.025, 0.05 y 0.1 M (para el potencial de lesin)
Soluciones de Na2HPO4: 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 y 2.0 M (Cmara de Ussing)
Soluciones de KCl: 400, 100, 50, 20 10, 5, 2.5, 1 mM (para el potencial de difusin en
el huevo)

25

DESARROLLO
Potencial de difusin con la cmara de Ussing y membrana artificial
1.- Recortar la membrana de dilisis al dimetro de la cmara de Ussing.
2.- Aplicar vaselina a los bordes de cada compartimiento de la cmara de Ussing, colocar
sobre uno de ellos la membrana exactamente centrada y unir ambos compartimientos.
3.- Sujetar la cmara a su soporte.
4.- Llenar los dos compartimientos de la cmara con la solucin de Na 2HPO4 0.05 M y
medir la diferencia de potencial, introduciendo un puente salino del electrodo de calomel
en cada compartimiento y conectando los dos electrodos al multmetro (figura 1). En caso
de contar con electrodos de plata, introducir stos en cada compartimento.
5.- Vaciar uno de los compartimientos, enjuagarlo con la solucin de Na 2HPO4 0.1 M y
llenarlo con esta solucin. El otro compartimiento servir como referencia fija.
6.- Medir los cambios en la diferencia de potencial
7.- Repetir los puntos 5 y 6 usando soluciones sucesivamente ms concentradas. A partir
de esta experiencia tambin se debe enjuagar y reponer la solucin 0.05 M del
compartimiento de referencia, ya que la difusin de los iones modifica su concentracin.

Figura 1. Diagrama para determinar potencial de difusin usando cmaras de Ussing y

electrodos de calomel.
26

Potencial de difusin usando el cascarn de huevo.

1.- Localice la cmara de aire del huevo y en ese sitio rompa el cascarn para obtener
una abertura de 3 cm de dimetro, deseche el contenido del huevo y enjuague con agua
destilada el cascarn.
2.- Con las pinzas de diseccin golpe levemente el cascarn de huevo en el extremo
opuesto a la cmara de aire y desprenda cuidadosamente el cascarn fracturado
evitando romper la membrana que est adherida al cascarn para formar una ventana de
aproximadamente 0.5 cm de dimetro. Es muy importante que no rompa esta membrana
pues a travs de ella se establecer la difusin del ion potasio, si existe fuga no se podr
establecer ste.
3. Coloque en el interior del huevo una solucin 400 mM de KCl y uno de los electrodos
de medicin.
4. En un vaso de precipitados de 50 ml coloque solucin de KCl 1 mM hasta que quede
al borde del vaso. Coloque el cascarn de huevo en la boca del vaso de tal forma que la
ventana de 0.5 cm quede en contacto con el lquido del vaso e introduzca por un extremo
del vaso el otro electro y mida en el multmetro el potencial desarrollado (figura 2).

Figura 2. Potencial de difusin medido en el cascarn de huevo.

27

5. Sin vaciar el contenido del huevo cmbielo ahora a un vaso que contenga una
solucin 2.5 mM de KCl y mida el potencial desarrollado.
6. Continu como en el inciso 5 pero probando las siguientes concentraciones: 5, 10, 20,
50 y 100 mM (observe que ir midiendo de una menor a una mayor concentracin de
KCl).
7. Al terminar de probar todas concentraciones y sin mover los electrodos de su sitio
pruebe que pasa con la lectura del multmetro si levanta el cascarn de huevo a fin de
que no tenga contacto con la solucin de KCl.
Potencial de lesin
1.- Descerebrar y desmedular una rana; cortar la piel de una pata, exponer el msculo
gastrocnemio y separarlo cortando los tendones que lo unen al hueso
2.- Pasar el msculo por el anillo de goma hasta la mitad, cortar la mitad restante y jalarlo
un poco para que la parte seccionada quede dentro del anillo de goma.
3.- Introducir el tubo de vidrio en el anillo de goma, llenarlo con solucin LIC y sujetarlo a
un soporte con la pinza de tres dedos. Introducir el msculo en un vaso de precipitados
conteniendo solucin de Ringer. As, la solucin LIC est en continuidad con la parte
lesionada, y la solucin de Ringer est en continuidad con la parte sana del msculo
(figura 3).

Figura 3.
28

4.- Medir el potencial de lesin del msculo tratado, colocando un puente salino del
electrodo de calomel (rojo) en la solucin LIC y el otro electrodo (negro) en la solucin de
Ringer; o bien, los electrodos de plata en vez de los puentes salinos. Conectar los dos
electrodos al multmetro y anotar la lectura.
5.- Sustituir la solucin de Ringer por solucin de K 2SO4 0.025 M y leer la diferencia de
potencial en el multmetro.
7.- Repetir el punto anterior con cada una de las soluciones de K 2SO4, en orden
creciente de concentracin.

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Potencial de difusin usando cmara de Ussing.
Elabore un cuadro con los siguientes datos:
+

a) Concentracin de Na del compartimiento 1 (de referencia).

+

b) Concentracin de Na del compartimiento 2.

c) La relacin de ambas concentraciones (C2/C1).
d) La diferencia de potencial segn la ecuacin de Nernst (mV).
e) La diferencia de potencial medida experimentalmente (mV).
f) Construya una grfica con la diferencia de potencial (mV) en las ordenadas y el
logaritmo decimal (log) de la relacin de concentraciones en las abscisas.
Potencial de difusin con el cascarn de huevo
a) Elabore una tabla con los valores de potencial obtenido con cada concentracin de
KCl probada, y con los valores tericos obtenidos calculando con la ecuacin de Nernst
la diferencia de potencial.
b) Elabore una grfica (diferencia de potencial (mV) en las ordenadas y el log de la
relacin de las concentraciones (log Cext/Cint) en las abscisas) de los valores obtenidos
con el cascarn y de los valores obtenidos con la ecuacin de Nernst. Discuta si las
curvas son semejantes entre s y a que se debe.
Potencial de lesin
Elabore un cuadro con los siguientes datos:
+

a) Concentracin de K de la solucin LIC.

+

b) Concentracin de K de la solucin del recipiente.

29

c) La relacin de ambas concentraciones (C2/C1).

d) El logaritmo natural de esta relacin (log C2/C1).
d) La diferencia de potencial segn la ecuacin de Nernst (mV).
e) La medida obtenida en el experimento.
Este experimento es semejante al realizado por Berstein en 1902 para demostrar que el
potencial de membrana muscular en reposo est dado por una diferencia de
concentraciones del ion potasio entre el interior y el exterior de la membrana muscular.
Con los datos obtenidos en este experimento cmo demostrara lo propuesto por
Berstein?

BIBLIOGRAFA
Aidley D. J., 1989. The Physiology of Excitable Cells. Ed. Cambridge University Press,
Cambridge, Inglaterra.
Eckert R., Randall D. y Augustine G., 1990. Fisiologa Animal. Mecanismos y
Adaptaciones. 3a ed. Ed. Interamericana-McGraw-Hill, Madrid, Espaa.
Kuffler S. y Nicholls J., 1982. De la Neurona al cerebro. 1 Edicin, Ed. Revert,
Barcelona, Espaa, pp. 89-131.

30

PRCTICA 5
POTENCIAL DE ACCIN, SIMULACIN POR COMPUTADORA
INTRODUCCIN
Una de las vas de la transmisin de la informacin en los organismos, utiliza seales
elctricas generadas en el sistema nervioso. Estos impulsos nerviosos en general, estn
asociados con respuestas rpidas de las clulas excitables a los estmulos del medio. Al
aplicarles el estmulo adecuado muestran un cambio de potencial: el potencial de accin
(llamado tambin espiga o impulso nervioso), el cual es conducido a lo largo de la regin
axnica de una neurona o a lo largo de la membrana plasmtica de una clula muscular.
De manera inicial el estmulo produce una despolarizacin de la membrana del axn, la
+

cual a su vez hace que aumente la conductancia de Na al interior. A cierto nivel de

despolarizacin de la membrana (cerca del 15% del potencial de reposo), la membrana
+

se vuelve muy permeable al Na (por la apertura de canales de Na dependientes de

+

voltaje). El influjo de Na hace que el potencial transmembrana caiga rpidamente hacia

cero y el potencial de membrana tiende a llegar al potencial de equilibrio de este ion. En
el pico de la espiga se inicia otro cambio en la permeabilidad, lo que da como resultado
+

una mayor conductancia del K . El eflujo de este ion en sentido de su gradiente de

electroqumico, tiende a llevar al potencial transmembrana de vuelta al valor del potencial
+

de equilibrio del K . A medida que aumenta la conductancia del K , se inactiva la

+

conductancia del Na .

OBJETIVO GENERAL
+

Establecer el papel que tienen los canales inicos de Na y K en la generacin del

potencial de accin

OBJETIVOS PARTICULARES
Determinar el efecto que tienen los estmulos elctricos de diferentes intensidades y
duraciones sobre el potencial de accin y la excitabilidad de una neurona.
Determinar el efecto que tiene la aplicacin de estmulos repetidos a diferentes intervalos
sobre el potencial de accin y la excitabilidad de una neurona.
31

Observar el efecto que provocan el cambio de la concentracin de los iones involucrados

en el potencial de accin sobre el potencial de membrana.
Observar el efecto que provocan algunas sustancias bloqueadoras de los canales
dependientes de voltaje sobre la naturaleza y caractersticas del potencial de accin.

MATERIAL
Programa de simulacin por computadora, basado en el modelo propuesto por Hodgkin y
Huxley, para la generacin del potencial de accin creado por Dave Touretzky HHsim,
Computadora PC.

DESARROLLO
El dispositivo empleado para desarrollar este simulador es similar al que muestra la
figura 4. Identificar sus partes.

Figura 4. Esquema de la disposicin de los electrodos de estimulacin y registro en un

fragmento sellado de axn gigante de calamar.
Iniciar el programa HHsim y localizar en la pantalla principal los controles que se
muestran en la figura 5, a los que se hace referencia en las actividades posteriores.
Establecer los parmetros iniciales de la forma siguiente:
- Asegrese que el control 1 marca Voltage Recording.
- En el control 2, seleccionar g Na (pS), g K (pS) y blank, respectivamente.

32

- Activar Membrane en el control 3. Esto despliega una ventana donde debe establecer
la temperatura en 20C. Ocultar la ventana con el botn Hide que aparece en la misma.

Figura 5. Pantalla principal del programa HHsim. Los nmeros 1 al 4 indican los controles
que se emplean durante esta prctica.
Potencial umbral
- Activar Stimuli en el control 3. Esto despliega una ventana donde se pueden cambiar
los parmetros de dos estimuladores capaces de aplicar dos estmulos cada uno. Para
este caso solo se usar el primer estmulo del estimulador 1.
- Cada estmulo tiene tres parmetros: (Ti) Tiempo de inicio (ms), (Int) Intensidad (nA) y
(Dur) Duracin (ms). Establecer Ti= 0.0 ms, Int= 10 nA y Dur=0.1 ms. El segundo
estmulo debe marcar cero en todos los parmetros.
- Activar el estimulador usando el botn Stim1 del control 4 y observar la respuesta en
el potencial de membrana.
33

- Aplicar estmulos similares, incrementando gradualmente la duracin hasta provocar un

potencial de accin.
- Encontrar la duracin mnima para que estmulos con intensidades de 5, 10, 15, 20, 35,
40, y 66 nA que pueda provocar un potencial de accin.
Nota: Antes de aplicar cada estmulo debe borrar la respuesta anterior usando el botn
Clear del control 4.
Suma temporal de estmulos subumbrales
- Establecer el primer estmulo con Int= 15 nA, Dur= 0.4 ms y Ti= 0 ms. El segundo
estmulo debe ser similar pero con Ti= 15 ms.
- Activar el estimulador y observar la respuesta.
- Repetir la experiencia disminuyendo gradualmente el tiempo de inicio del segundo
estmulo (Ti= 8, 4, 2, 1 ms).
Periodo refractario
- Establecer el primer estmulo con Int= 50 nA, Dur= 0.11 ms y Ti= 0 ms. El segundo
estmulo con Int= 50 nA, Dur= 0.11ms y Ti= 20 ms. Activar el estimulador y observar la
respuesta.
- Repetir la experiencia reduciendo el tiempo de inicio del segundo estmulo a 10 ms.
Observar la respuesta.
- Repetir la experiencia con Ti= 5 ms para el segundo estmulo. Observe la respuesta.
- Encontrar el tiempo de inicio para el segundo estmulo al cual desaparece el segundo
potencial de accin.
- Repita la experiencia con Ti= 2 ms para el segundo estmulo. Observe la respuesta.
- Incremente la intensidad del segundo estmulo a Int= 60 nA. Observe
- Incremente la intensidad del segundo estmulo a Int= 70 nA. Observe
- Reduzca el tiempo de inicio del segundo estmulo hasta Ti= 1.8 ms.
- Incremente la intensidad del segundo estmulo hasta Int= 80 nA. Repita incrementando
a Int= 100 nA.
Concentraciones inicas
- Establezca los parmetros del segundo estmulo en cero, para el primer estmulo Int=
20nA, Dur= 0.5ms y Ti= 0ms.
- Aplique el estmulo
34

- Sin borrar la respuesta anterior active Membrane con el control 3. Cambie la

+

concentracin extracelular de Na = 400 mM. Aplique el estmulo.

+

- Sin borrar las respuestas anteriores, reduzca la concentracin extracelular de Na , de

50 en 50 mM aplicando un estmulo cada vez. Observe la respuesta.
Nota: Puede utilizar el botn Zoom out del control 4 y la barra de desplazamiento de
tiempo para visualizar toda la serie y comparar las respuestas.
- Borre las respuestas anteriores.
- Restablezca la concentracin original.
- Repita el experimento aumentando de 50 en 50mM la concentracin extracelular de
+

Na . Si es necesario detener el experimento use el botn Stop del control 4.

- Restablezca la concentracin original, borre las respuestas anteriores y aplique un
estmulo.
+

- Reduzca ahora la concentracin extracelular de K de 1 en 1 nM aplicando estmulos

cada vez. Contine reduciendo an si no se provoca un potencial de accin.
- Restablezca la concentracin, borre las respuestas anteriores y estimule.
+

- Incremente de 1 en 1 mM la concentracin extracelular de K estimulando cada vez. Si

es necesario detener la prueba use el botn Stop.
Canales dependientes de voltaje
- Restablezca las concentraciones originales, borre las respuestas anteriores y aplique
un estmulo.
- Sin borrar la respuesta anterior active Drugs del control 3. Y cambie el porcentaje de
inhibicin por Tetrodotoxina (TTX) incrementando de 5 en 5% estimulando cada vez sin
borrar.
- Restablezca, borre las respuestas anteriores y repita la experiencia ahora
incrementando la inhibicin por tetraetilamonio.
- Restablezca, borre las respuestas anteriores, aplique pronasa. Aplique un estmulo.

BIBLIOGRAFA
Aidley, D. J. The Physiology of Excitable Cells. 1989. Edit. Cambridge University Press,
Cambridge, Inglaterra.
35

Berne R. y M. Levy, Fisiologa. 2 Ed. 1992. Edit. Mosby Year Book. Espaa, Madrid. p.
34-39.
Carpenter S.H.R., Neurofisiologa. 1986. Edit. Manuel Moderno, Mxico, D.F.
Darnell J., H. Lodish y D. Baltimore, Biologa Celular y Molecular. 2 Ed. 1993. Edit.
Omega S.A. Espaa, Barcelona p. 844-858.
Eckert, Randall D., Burgreen W., y K. French, Fisiologa Animal, Mecanismos y
Adaptaciones. 4 Ed. 1998. Edit. Interamericana-McGraw-Hill. Madrid, Espaa.
Ganong F.W., Fisiologa Mdica. 17a Ed. 2000. Edit. Manual Moderno Mxico.
Schmidt F.R. y G. Thews, Fisiologa Humana. 1993. Edit. Mc Graw Hill-Interamericana.
Espaa Madrid p. 23-34.

36

PRCTICA 6
POTENCIAL DE ACCIN COMPUESTO
INTRODUCCIN
La funcin primaria del sistema nervioso es la transmisin de informacin entre los
rganos sensoriales y los tejidos de respuesta (msculos y glndulas), pasando por un
centro de integracin. Para ello, el tejido nervioso est dispuesto en forma de un
cableado que corre de los rganos sensoriales a alguna estructura del sistema nervioso
central y de ah a las clulas musculares. Este cableado est formado esencialmente por
los axones de las neuronas perifricas, que pueden ser muy largos. Los axones que se
proyectan hacia regiones contiguas del cuerpo (por ejemplo, los que van a diferentes
clulas musculares en la pierna) viajan en forma de grupos compactos junto con los que
vienen en sentido aferente desde estructuras receptoras (por ejemplo, de la piel) de la
misma regin. Este conjunto de axones forma un nervio perifrico. Una fibra individual
(un axn) tiene un dimetro de alrededor de 20 m (0.002 cm) y no se distingue a simple
vista; un nervio es mucho ms grueso y se le observa con facilidad.
Medir la respuesta elctrica de una fibra individual requiere de equipo muy sofisticado y
adiestramiento especial. En comparacin, medir la respuesta elctrica de un nervio
completo (potencial de accin compuesto) es sencillo, pero requiere hacer algunas
consideraciones: los cambios de voltaje que se registran son extracelulares (tanto el
electrodo de registro como el de referencia estn fuera de la clula), por lo que el trazo
del potencial de accin tiene una forma diferente al del potencial clsico, y recibe el
nombre de potencial bifsico. En segundo lugar, puesto que las neuronas pueden tener
umbrales distintos, el potencial de accin compuesto no cumple estrictamente la ley de
todo o nada del potencial de accin. Por lo dems, la preparacin de nervio completo
reproduce las principales caractersticas de la actividad elctrica de las clulas nerviosas.

37

OBJETIVO
Las actividades que se describen tienen como propsito medir la respuesta elctrica de
un nervio completo, y determinar las propiedades de conduccin de estas fibras.

MATERIAL
- Estuche de diseccin
- Disectores de vidrio
- Cmara para nervio aislado
- Unidad de adquisicin Biopac MP36.
- Electrodo SS2L
- Cable DB9H
- Gotero
- Hilo
- Rana grande

DESARROLLO
I. Montaje de la preparacin
En esta preparacin se utiliza el nervio citico de rana, que por su grosor es el ms fcil
de obtener y manejar. El nervio se coloca en una cmara provista de bandas metlicas
que funcionan como electrodos de estimulacin o de registro. Al mismo tiempo, la
cmara asla al nervio de los lquidos conductores.
1. Con ayuda de unas tijeras grandes y un estilete, descerebre y desmedule la rana
(figura 6).
2. Corte la piel de una de las patas posteriores y remuvala hasta descubrir
completamente la extremidad.
3. Separe cuidadosamente los msculos en la cara posterior del muslo y localice el
nervio citico.
4. Sin tocar el nervio, descbralo en ambos sentidos hasta la mdula espinal por un lado
y hasta la rodilla por el otro. Corte los msculos que sea necesario (figura 6).
5. Amarre un trozo de hilo alrededor del nervio tan cerca de la mdula espinal como sea
posible.
38

6. Con unas tijeras finas separe el nervio de la mdula, de manera que la fibra quede
sujeta con el hilo.
7. Con ayuda de los manipuladores de vidrio, separe cuidadosamente el nervio, hasta
liberar una porcin de 8 a 10 cm.
8. Coloque el nervio extendido sobre los electrodos de la cmara para nervio aislado.

Figura 6. Obtencin del nervio citico de rana.

II. Montaje del equipo de estimulacin y de registro
Para medir la respuesta del nervio, se aplicarn estmulos elctricos en un extremo del
nervio y se medirn en el extremo opuesto los cambios de voltaje generados en la
membrana. El estimulador se conecta a los electrodos en un extremo de la cmara. La
respuesta del nervio se registra en el CH2 de la pantalla de la computadora, que va
conectado a los electrodos en el otro extremo por medio del MP36 y el SS2L. Adems, el
MP36 enva la seal del estimulador hacia la computadora por el CH1 sin necesidad de
conexiones externas.

39

1. Guindose con la figura 7, verifique que las conexiones del equipo estn en las
posiciones siguientes:
- ESTMULO: Conectar el cable DB9H a Analog out del MP36.
- REGISTRO DEL PAC: Conecte el electrodo de registro SS2L al CH2.
Nota el CH1 no debe estar conectado.
2. Conecte el cable rojo St(+) del DB9H en el pin del extremo de la cmara de nervio
aislado.
3. Una el cable negro St(-) del DB9H al cable negro (GND) del SS2L y conctelo al pin
siguiente de la cmara del nervio.
4. El cable blanco Vin(-) y el cable rojo Vin(+) del SS2L se conectan a los pines del otro
extremo, estos cables pueden moverse de acuerdo con la longitud del nervio. Nota el
cable rojo Vin(+) siempre debe ser el ms alejado del estmulo.

Figura 7. Montaje del equipo de estimulacin y de registro para potencial de accin

compuesto en nervio citico de rana.
40

III. Determinaciones prcticas

Una vez que el equipo ha sido conectado, abra el archivo PAC-Ciatico-01, el cual ya
tiene los parmetros de calibracin. Antes de realizar las determinaciones en el nervio
realice una prueba colocando en su lugar un hilo humedecido en solucin Ringer. La
intensidad del estmulo debe ser de 0.050 V. Si no observa la respuesta, incremente la
intensidad del estmulo en intervalos de 0.050 V.
Retire el hilo y coloque el nervio (no olvide guardar el archivo cambiando el nombre en
cada determinacin).
a) Estmulos umbral y mximo
El potencial de accin compuesto requiere una cierta cantidad mnima de carga para ser
generado pero, a diferencia del potencial de accin simple, su intensidad aumenta al
aumentar la intensidad de la estimulacin. Esta tendencia tiene un lmite, y se conoce
como estmulo mximo al valor de estimulacin que induce la mxima intensidad de
respuesta de un nervio.
1. Usando un estmulo inicial con una intensidad de 0.050 V, aumente lentamente la
intensidad del estmulo (intervalos de 0.050 V) hasta que se aprecie la ms leve
respuesta del nervio.
2. Determine la intensidad del estmulo. ste es el estmulo umbral.
3. Siga aumentando lentamente la intensidad del estmulo, observando cmo crece la
respuesta del nervio.
4. Encuentre el punto en el que la respuesta deja de crecer al aumentar la intensidad del
estmulo. Anote la intensidad de este estmulo. ste es el estmulo mximo
b) Velocidad de conduccin
Puesto que los electrodos de registro estn situados a cierta distancia de los de
estimulacin, la seal elctrica tomar cierto tiempo en llegar desde su punto de origen
hasta donde es registrada, y la duracin de este periodo (llamado periodo de latencia)
depende de la velocidad con la que el nervio conduce los impulsos. La pantalla de la
computadora registra los eventos de estimulacin (canal B) y de respuesta (canal A), de
modo que la duracin del periodo de latencia y la velocidad de conduccin del nervio se
pueden determinar fcilmente.

41

1. Aplicando un estmulo de intensidad intermedia entre el umbral y el mximo. Mida

sobre la pantalla el intervalo que separa el inicio del estmulo del inicio de la respuesta
(periodo de latencia).
2. Mida la separacin entre el electrodo de estimulacin y el electrodo de registro que
estn ms prximos entre s en la cmara para nervio. Con estos valores calcule la
velocidad de conduccin del nervio (expresada en m/s)
3.- Repita la operacin despus de poner unas gotas de Ringer frio sobre el nervio.
c) Suma de estmulos subumbrales
1. Para esta experiencia se debe modificar las condiciones de adquisicin del registro,
para eso, cierre el archivo actual y abra el archivo PAC-Ciatico-02. En este caso se
aplican dos estmulos. La intensidad de los estmulos debe ser ligeramente menor al
valor umbral. EL retraso entre los dos estmulos se debe reducir paulatinamente
comenzando con 25 ms.
2. Aplique los estmulos y repita la experiencia reduciendo el tiempo de retraso entre los
estmulos hasta observar un PAC.
3. Mida el intervalo de tiempo que hay entre el inicio del primer estmulo y el inicio del
segundo. Este tiempo es el necesario para que se sumen los potenciales locales
producidos por los estmulos subumbrales.
d) Perodos refractarios
1. Cierre el archivo anterior y abra nuevamente PAC-Ciatico-02. Separe los dos
estmulos con un retraso de 30 ms.
2. Aumente la intensidad de ambos estmulos hasta un valor ligeramente superior al
umbral ambas respuestas deben ser similares en amplitud y forma.
3. Reduzca lentamente el retardo del segundo estmulo, observando atentamente la
respuesta al segundo estmulo, hasta que se aprecie una leve reduccin en esta
respuesta.
4. Mida el intervalo de tiempo que hay entre los 2 estmulos. Este valor corresponde a la
duracin del periodo refractario relativo.
5. Siga aproximando lentamente el segundo estmulo, hasta que la respuesta al
segundo estmulo desaparezca por completo. El tiempo transcurrido entre los dos
estmulos es la duracin del periodo refractario absoluto.
42

e) Curva de intensidad-duracin
1. Cierre el archivo anterior y abra PAC-Ciatico-03.
2. Ajuste la intensidad del estmulo ligeramente arriba del valor umbral, de modo que el
potencial de accin tenga una amplitud bien definida.
3. En estas condiciones, mida sobre la pantalla la duracin de la respuesta.
4. Reduzca la intensidad del estmulo en una dcima parte. Con el control de duracin,
aumente su duracin hasta que la respuesta del nervio regrese al tamao exacto al que
se ajust en el inciso 2.
5. Mida y registre nuevamente la duracin y la intensidad del estmulo.
6. Reduzca nuevamente la intensidad del estmulo y ajuste la duracin para tener
siempre el mismo tamao de respuesta. Registre el nuevo par de valores.
7. Repita el proceso hasta que el estmulo se haya reducido a un punto en el que no
logre generar un PAC aun aumentando la duracin (o hasta valor mximo permitido por
el equipo).
8.- Repita el proceso ahora aumentando la intensidad del estmulo y reduciendo la
duracin.

PRESENTACIN DE RESULTADOS
En su reporte incluya los valores calculados en cada experiencia: estmulos umbral y
mximo (V), velocidad de conduccin del nervio (m/s), tiempo necesario para la
sumacin de los estmulos subumbrales (ms) y duracin de los periodos refractarios
absoluto y relativo (ms). Para la ltima experiencia trace una grfica (abscisas: duracin;
ordenadas: intensidad) con los pares de valores obtenidos.
Incluya para cada experiencia un diagrama del trazo observado en la pantalla del
BIOPAC. Recuerde incluir los pies de figura para cada una.

BIBLIOGRAFA
Carpenter S.H. Neurofisiologa. 1986. El Manual Moderno, Mxico, D.F.
Eckert, R.D., Burgreen W., y French K. Fisiologa Animal, Mecanismos y Adaptaciones. 4
ed., 1998. Interamericana-McGraw-Hill, Madrid.
43

Guyton C.A. Tratado de Fisiologa Mdica, 8a. ed., 1991. Interamericana-McGraw-Hill,

Madrid.
Kandel E.R., Schwartz J.H., Jessell T.M. Neurociencia y Conducta. 1997. Prentice Hall,
Madrid.

44

PRCTICAS
7. TRASMISIN SINPTICA Y 8. MSCULO ESQUELTICO
INTRODUCCIN (Transmisin sinptica)
La comunicacin neuronal se realiza principalmente a travs de sustancias
liberadas por una neurona, denominadas neurotransmisores, aunque existen otros
medios de comunicacin, como es la elctrica. La comunicacin entre las clulas
nerviosas se lleva a cabo en regiones especializadas denominadas sinapsis. Las
sinapsis pueden clasificarse con base en sus diferencias funcionales o morfolgicas.
Las sinapsis elctricas prcticamente carecen de un espacio entre las regiones pre- y
postsinpticas y por lo tanto no existe un retardo sinptico en ellas. En cambio en las
sinapsis qumicas la separacin es de unos 20 a 50 nm (hendidura sinptica), por lo que
en stas s existe un retardo sinptico. En las sinapsis qumicas, los mensajeros que se
liberan de las terminales presinpticas se unen a los receptores especficos ubicados en
las membranas de las neuronas que reciben el mensaje.
En los mamferos, las fibras musculares son inervadas por el axn de una sola
motoneurona. El axn se une con la fibra muscular en la llamada placa neuromuscular,
una regin especializada cuya funcin es similar a las sinapsis neuronales: cuando un
potencial de accin es generado en las neuronas motoras, provoca la liberacin de
acetilcolina en las terminales presinpticas, que se une con receptores colinrgicos
localizados en la fibra muscular (membrana postsinptica). La interaccin de la
acetilcolina (ACh) con su receptor provoca la despolarizacin de la fibra muscular en la
regin de la placa motora. Esta despolarizacin es suficientemente grande para provocar
la activacin de canales dependientes de voltaje y provocar un potencial de accin que
viaja a lo largo de la fibra muscular. El efecto de la ACh termina cuando sta es
degradada por la enzima acetilcolinesterasa (AChE), presente en la hendidura sinptica.
Normalmente, la cantidad liberada de acetilcolina es suficiente para asegurar que cada
potencial de accin de la neurona motora provoque un potencial de accin en la fibra
muscular.
45

INTRODUCCIN (Msculo esqueltico)

En los vertebrados y otros organismos, el movimiento de las extremidades y el
desplazamiento del cuerpo dependen de un tipo particular de tejido contrctil, el msculo
esqueltico. Al igual que el tejido nervioso, el tejido muscular es excitable (es decir, que
su membrana es capaz de invertir momentneamente su potencial para luego recuperar
su estado inicial), y este cambio de potencial de la membrana (potencial de accin) es la
seal que desencadena la contraccin del msculo. Como es lgico suponer, la actividad
del msculo esqueltico es voluntaria, es decir que se origina en el sistema nervioso
central y es transmitida al msculo a travs de fibras nerviosas. Es por esto que la
actividad del msculo esqueltico es considerada neurognica, en contraste con la
actividad espontnea (miognica) presente en otros tipos de msculo.
Para realizar cualquier clase de trabajo mecnico los msculos del organismo tienen que
contraerse para generar fuerza. En la mayor parte de los casos, la longitud del msculo
se acorta considerablemente, cuando esta fuerza se aplica a travs de las articulaciones
los miembros se mueven. Este tipo de trabajo muscular se denomina contraccin
isotnica. En otros casos el acortamiento muscular no es visible, contraccin isomtrica.
En ambas situaciones las clulas musculares generan fuerza y para este proceso se
necesita de la energa obtenida del metabolismo. Los cambios metablicos provocados
por una actividad muscular intensa, como un aumento en la concentracin de lactato en
sangre y el descenso de pH, pueden contribuir al fenmeno denominado fatiga muscular.
Los msculos esquelticos deben generar fuerzas diferentes, a veces durante tiempos
prolongados. Dos mecanismos controlan la fuerza generada por un msculo. En primer
lugar debido a que el msculo contiene un gran nmero de unidades motoras (conjunto
de fibras musculares inervadas por la misma motoneurona), la fuerza puede variar a lo
largo de un amplio espectro mediante el reclutamiento de ms y ms unidades motoras.
La segunda forma de aumentar la fuerza y prolongar una contraccin es elevar la
frecuencia de disparo de los nervios motores. La descarga de los nervios motores a
frecuencias altas desencadena corrientes adicionales momentneas de calcio que
46

logran sumar las respuestas mecnicas y producir una contraccin sostenida. La

presencia de un gran nmero de unidades motoras en un msculo y la sumacin de la
respuesta contrctil permiten una graduacin continua de la generacin de fuerza.

OBJETIVOS
Transmisin sinptica:
- Demostrar la funcin de la acetilcolina en la transmisin sinptica.
Msculo esqueltico:
- Describir la respuesta contrctil del msculo esqueltico ante estmulos elctricos de
diferentes caractersticas.
- Determinar la importancia del aporte sanguneo en la contraccin muscular.

MATERIAL
1 estuche de diseccin (personal)

Soluciones:

4 jeringas de 1 ml con aguja

Acetilcolina 1:10 000

1 vaso de precipitados de 50 ml

d-tubocurarina (curare): 2, 10, 20 y 50 g/ml

1 soporte con base de media luna

Fisostigmina o neostigmina 1.5 mg/ml

2 pinzas dobles

Solucin fisiolgica de Ringer

1 ligadura de hule

(ver apndice, soluciones fisiolgicas).

1 perilla de hule
1 tabla para diseccin
1 polea
2 disectores de vidrio
1 cable DB9H para estimulador
1 Unidad de adquisicin Biopac MP36
1 juego de electrodos con funda
1 cronmetro
1 Transductor de fuerza
Algodn
Hilo delgado
Material biolgico:
1 Rana previamente descerebrada y desmedulada
47

DESARROLLO
Sujete la rana fuertemente en posicin de decbito dorsal a una tabla de diseccin y
proceda a realizar una preparacin citico-gastrocnemio (figura 8). Fije la pata de la rana
de modo que slo se registre el movimiento del gastrocnemio.

Figura 8. Preparacin citico-gastrocnemio para su estimulacin y registro.

Coloque los electrodos en el nervio (figura 9). Evite tocar el nervio con objetos metlicos
o las manos, utilice los disectores de vidrio.

Figura 9. Colocacin de los electrodos de estimulacin.

Conecte el transductor de fuerza al mdulo MP36 y calibre. Posteriormente, con un hilo
delgado, una al msculo con el transductor y conecte los electrodos de estimulacin con
el cable DB9H, finalmente conecte ste a la salida Analog out del mdulo MP36,
cuidando que todos los parmetros estn al mnimo (ver apndice).
Los puntos marcados a continuacin con a corresponden a la prctica de
Transmisin Sinptica y los b a la de Msculo Esqueltico:
1b.- Umbral. Busque el voltaje umbral con estmulos nicos de intensidad creciente y
con una duracin de 0.2 ms, de tal forma que se logre una contraccin mnima cuyo
registro sea observable.
48

2b.- Relacin intensidad del estmulo-fuerza de contraccin. Aplique estmulos

supraumbrales cada vez ms intensos, y observe el aumento gradual en la fuerza de
contraccin. Encuentre y registre la intensidad del estmulo que produce la mxima
respuesta del msculo.
3b.- Suma de estmulos subumbrales. Aplique estmulos cuyo valor de intensidad se
encuentre por debajo del valor del estmulo umbral (estmulos subumbrales); aplique
estos estmulos a baja frecuencia. Con la misma intensidad de estimulacin, incremente
gradualmente la frecuencia. Registre la respuesta contrctil bajo estas condiciones de
estimulacin.
4b.- Suma de contracciones y ttanos. Seleccione una intensidad de estimulacin para
producir una respuesta submxima (por encima del umbral, pero sin llegar a la mxima).
Con esta intensidad, aplique estimulacin continua con frecuencia baja (1 Hz) y registre.
Sin detener el registro, aumente gradualmente la frecuencia de estimulacin hasta llegar
a 100 Hz y, observe la respuesta.
5a.- Registro basal. Busque nuevamente el voltaje umbral con estmulos nicos de
intensidad creciente y con una duracin de 0.2 ms. Realice un registro de 30 s de las
contracciones obtenidas con estmulos umbrales con una frecuencia de 2 Hz.
6a.- Detenga la estimulacin.
7a.- Efectos de la acetilcolina y fisostigmina. Inyecte en el msculo gastrocnemio 0.1
ml de fisostigmina (o neostigmina), de una solucin de 1.5 mg/ml. Realice un registro de
30 s sin estimulacin elctrica.
8a.- Inyecte en el mismo sitio, 0.1 ml de acetilcolina y registre nuevamente sin
estimulacin elctrica durante 1 minuto.
9a.- Estimule elctricamente con los valores del punto 5a y registra durante 30 s (observe
si la amplitud de la contraccin es la misma que la contraccin basal).
10b.- Fatiga muscular en la rana. Aplique estimulacin supraumbral continua DE 1 Hz y
registre los cambios en amplitud de la contraccin durante los siguientes 10 minutos o
49

hasta que la respuesta disminuya de manera considerable. Dejar recuperar la

preparacin por 10 min.
11a.- Efecto de la d-tubocurarina. Registre nuevamente 30 s de respuesta basal (punto
5a). Detenga la estimulacin e inyecte en la misma regin del msculo 0.1 ml de la
solucin de d-tubocurarina de la ms baja concentracin, inmediatamente aplique
estmulos elctricos en las mismas condiciones anteriores y registre durante 30 s.
12a.- Repita el punto 11a con las dems soluciones de d-tubocurarina, aplicadas en
orden de menor a mayor concentracin.
13a.- Despus de la ltima concentracin empleada de curare, detenga la estimulacin,
administre 0.1 ml de acetilcolina y estimule elctricamente el nervio. Observe el efecto.
14b.- Fatiga muscular en el humano. Un miembro del equipo deber presionar una
perilla de hule con una de las manos (ya sea derecha o izquierda) lo ms rpido posible.
Registre el nmero de veces que la presiona en un minuto.
15b.- Deje descansar el brazo del sujeto durante 15 min.
16b.- Ligue el brazo utilizado con una ligadura de hule. Repita el punto 14b con la misma
presin y rapidez posible. Registre el nmero de veces que presiona la perilla en un
minuto.
17b. Otro miembro del equipo realizar tambin la experiencia de la fatiga muscular en el
humano, slo que se invertir el orden; es decir, primero realizar la experiencia con el
brazo ligado y despus sin ligar.

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Todas las respuestas musculares obtenidas de la preparacin citico-gastrocnemio
debern reportarse en valores de fuerza expresada en gramos.
Para la experiencia 2b, construya una grfica de la relacin entre intensidad del estmulo
y la respuesta contrctil. As mismo, para las experiencias 10b y 11a haga grficas de la
respuesta contrctil vs el tiempo o la concentracin de la d-tubocurarina respectivamente.
50

Para la fatiga en humano, colecte los resultados del grupo y haga promedios de los
valores con los brazos ligados o sin ligar, separe tomando en cuenta tambin el orden de
la experiencia.

Equipo
1
2
3
4
5
6
Media
EEM

Orden inicial
(presiones/minuto)
Brazo sin ligar Brazo ligado

Orden inverso
(presiones/minuto)
Brazo ligado
Brazo sin ligar

Nota: En estricto apego a las Normas Oficiales Mexicanas vigentes y a las recomendaciones del
Comit de Biotica de la ENCB, se ha decidido realizar en conjunto las prcticas Transmisin
sinptica y Msculo esqueltico con la finalidad de reducir en la medida de lo posible el uso de
animales de experimentacin. As mismo, se substituye el uso de ratas por ranas, lo que permite
un protocolo de experimentacin en que se evita al mximo el sufrimiento innecesario de los
animales. Los datos correspondientes a msculo esqueltico, sern analizados una vez que se
haya cubierto los aspectos tericos correspondientes en el programa del curso.

BIBLIOGRAFA
Aidley, D.J. The Physiology of Excitable Cells. 4 ed., 1998. Ed. Cambridge University
Press, Cambridge.
Brunton L.L., Lazo J.S. y Parker K.L. Goodman y Gilman: Las Bases Farmacolgicas de
la Teraputica. 11 ed., 2006. Ed. Mc Graw Hill Interamericana Editores, Mxico D.F.
Carpenter R.H.S. Neurofisiologa. 2a ed., 1998. Ed. El Manual Moderno. Mxico, D.F.
Kandel E.R., Schwartz J.H. y Jessell T.M. Principios de Neurociencia. 4 ed., 2001. Ed.
Mc Graw Hill Interamericana Editores, Mxico D.F.
Karp G. Biologa Celular y Molecular. 6a ed., 2011. Ed. Mc Graw Hill Interamericana
Editores, Mxico D.F.
Randall, D., Burgreen, W. y French, K. Eckert. Fisiologa Animal: Mecanismos y
Adaptaciones. 4 ed., 1998. Ed. Interamericana-McGraw-Hill, Madrid.

51

PRCTICA 8
MODULACIN DE UNA FUNCIN CELULAR POR SEALES
QUMICAS
INTRODUCCIN
Una de las caractersticas ms importantes de los seres vivos es su capacidad
para reconocer variaciones en las condiciones del entorno que los induzcan a realizar los
cambios funcionales o estructurales necesarios para adaptarse a la nueva situacin. A
nivel celular, se trate de organismos unicelulares o pluricelulares, es muy frecuente que
tal caracterstica recaiga en la existencia de sistemas de reconocimiento de seales
qumicas. Tales sistemas requieren de receptores, esto es, molculas especializadas en
reconocer la seal qumica y que adems sean capaces de inducir mediante un proceso
de complejidad variable, la respuesta especfica a la seal. La cantidad de complejos
moleculares formados entre el receptor y la seal determinan la intensidad de la
respuesta producida. Un primer nivel de control de sta puede establecerse a travs de
variaciones en la concentracin de la seal en el entorno celular. Habitualmente este
nivel de control es suficiente para cubrir las necesidades de las clulas individuales. Sin
embargo, se puede establecer un segundo nivel de control modulando el nmero de
receptores que las clulas estn expresando para responder a la seal. La existencia de
estos dos niveles de control en las clulas que constituyen un organismo pluricelular
proporcionan un mayor grado de flexibilidad en la modulacin de la respuesta celular y
una mayor capacidad de adaptacin al organismo en su conjunto.

OBJETIVO
Observar los niveles de control que pueden estar modulando una funcin celular, en este
caso la contractilidad uterina en la rata. De modo especfico se evaluaran las variaciones
de contractilidad en funcin de cambios en la concentracin de una seal especfica,
oxitocina, y en la densidad de receptores a la misma.

52

MATERIAL
Por equipo.
1 Parte:
- Benzoato de estradiol 0.5 mg/ml (diluyente aceite vegetal).
- Aceite vegetal.
- 1 jeringa de 1 ml con aguja No 27
- Balanza para pesar animales
- 1 rata hembra adulta (aprox. 150 g de peso).
2 Parte:
- Sistema de adquisicin MP36
- Transductor de fuerza.
- Gancho en S.
- 1 Soporte universal o de media luna
- 2 Pinzas dobles.
- 1 Bao con recirculador.
- 1 Termmetro.
- 1 Cmara para rgano aislado con tubo largo de desage y pinza Mohr.
- Tubera para el aireamiento de la preparacin.
- 4 Jeringas de 1 ml con aguja.
- 1 Aguja con hilo.
- Estuche de diseccin (cada equipo deber traer el suyo).
- 1 Caja de Petri.
- 1 Pizeta de 500 ml (aproximadamente).
Por grupo:
1 Parte (Tratamiento).- 2 Cajas para 3 ratas c/u.
2 Parte: (Obtencin de datos).
- Soluciones de oxitocina a 0.5, 1.5, 7.5 y 25 nM.
- 4 Litros de Solucin fisiolgica De Jalon.

53

DESARROLLO
1 Parte.
1.- Cada equipo recibir una rata hembra. Esta se pesar y marcar de acuerdo al plan
siguiente; equipos nones, condicin testigo, equipos pares, tratamiento con estrgenos.
Cada lote de ratas se coloca en una jaula debidamente rotulada con los siguientes datos:
Nmero de los equipos, grupo, tratamiento, fecha y profesor responsable.
2.- Durante cuatro das las ratas se inyectarn por va subcutnea con el volumen
correspondiente a la milsima parte de su peso ya sea con la solucin de estrgeno
(equipos pares) o con el aceite de maz (equipos nones). Los equipos se
responsabilizarn del lote de ratas que le corresponda en cuanto a su tratamiento y
cuidado, manteniendo las condiciones adecuadas de alimento, agua y limpieza.
2 Parte. Obtencin de los Datos con el equipo del Biopac.
1.- Conectar el transductor de fuerza a la entrada del canal 1 del MP-36 y calibrar el
equipo.
2.- Calibrar el bao con recirculador a 31 1 C procurando mantener constante esta
temperatura durante todo el experimento. La cmara para rgano aislado se llena con
solucin De Jalon y se coloca en el interior del bao. Esta solucin debe mantenerse con
aireacin continua (1 burbuja/segundo) y contar con un sifn para poder realizar los
lavados necesarios de la preparacin.
3.- Los alumnos recibirn sus respectivas ratas, previamente sacrificadas por
dislocamiento cervical; le abrirn el abdomen, desplazando los intestinos a un lado para
localizar los cuernos uterinos (figura 10). Una vez localizados se disecan y se transfieren
a una caja de Petri con solucin De Jalon aireada con una burbuja/segundo. Los cuernos
se limpian del tejido graso y se separan para utilizar uno de ellos en la preparacin.

54

Figura 10. A la izquierda se muestra el sitio de la incisin y a la derecha la ubicacin de

los cuernos uterinos: 1) intestino, 2) vejiga urinaria, 3) cuernos uterinos.
4.- El cuerno aislado se ata en cada extremo con hilo evitando ocluir la luz, trasladndolo
posteriormente a la cmara para rgano aislado. Ah se amarra uno de los hilos en el
ganchillo del fondo de la cmara y el otro al ganchillo en S, unido al orificio del
transductor para 50 gramos (figura 11).

Figura 11. Se muestra la disposicin final de la cmara de rgano aislado (C), el

recirculador (R) y la pizeta (P). El hilo del extremo libre del tero puede fijarse al
transductor de fuerza (Tr*).
55

5.- Se deja estabilizar la preparacin durante 25 minutos, durante los cuales se podran
observar contracciones espontneas.
6.- Se inicia el registro siguiendo las instrucciones del profesor. Las concentraciones de
oxitocina se probaran en orden ascendente siguiendo la secuencia siguiente en la toma
de datos:
a) Registro de la actividad basal.
b) Sin parar el registro adicionar 0.2 ml de la concentracin a probar y observar el efecto
durante 1 minuto.
c) Lavar la preparacin para recuperar el registro basal. Repetir el ciclo.
6.- Para hacer los lavados de la preparacin, se abre el desage de la cmara de rgano
aislado y simultneamente se llena con solucin De Jalon a 32 C de la pizeta, evitando
as perder el sifn.
7.- En los registros obtenidos se medir la amplitud en gramos de la contraccin inducida
con cada concentracin de oxitocina y con esta informacin se llenaran las tablas
siguientes.

DATOS
* Grupo testigo (aceite vegetal)
Rata
1
3
5
Media
EEM

0.5

[Oxitocina] nM
1.5
7.5

25

[Oxitocina] nM
1.5
7.5

25

* Grupo tratado con estrgenos

Rata
1
3
5
Media
EEM

0.5

56

PRESENTACIN DE RESULTADOS
Con los datos de promedio y error estndar de las amplitudes de la contraccin realizar
una curva del efecto en funcin de las dosis de oxitocina, tanto para el grupo testigo,
como para el grupo tratado con estrgenos. Para cada grupo de ratas discutir si la
modulacin de la respuesta depende de la concentracin de la seal. Adems comparar
ambas curvas para determinar si la variacin en la densidad de recetores a oxitocina
afecta la respuesta evaluada.

BIBLIOGRAFA
Chambert, G., Lanzagorta, A., Ortiz, R., Paniagua, N., Quevedo, L. y Zamudio, S.,
Manual de fisiologa humana (QFI), 2 ed., 2003, Departamento de Fisiologa de la
E.N.C.B-I.P.N., pp. 27-33.
Departamento de Farmacologa de la Universidad de Edimburgo, Pharmacological
experiments on isolated preparations, 1 Ed., 1968, E. & S. Livingstone LTD., Edinburgh
and London, pp.92-95.
Ganong, W., Fisiologa mdica, 17a Ed., 2000, Edit. Manual Moderno, Mxico, pp 271272, 488 y 499.
Katzung, B., Farmacologa bsica y clnica, 7 Ed., 1999, Edit. Manual Moderno, Mxico,
pp 14-18.
Larcher, A., Neculcea, J., Breton, C., Aslan, A., Rozen, F., Russo, C. y Zingg, H.,
Oxytocin receptor gene expression in the rat uterus during pregnacy and the estrous
cycle and in response to gonadal steroid treatment, 1998, Endocrinology, Vol. 136 (12),
pp 5350-5356.

57

PRCTICA 10
PROPIEDADES DEL MSCULO CARDIACO
INTRODUCCIN
El corazn contina latiendo despus de ser despojado de su inervacin extrnseca, esto
se debe a la presencia de un tejido marcapaso especializado. Este tejido especializado
se caracteriza por poseer un potencial de membrana inestable (prepotencial), el cual
disminuye continuamente hasta alcanzar el valor de descarga desencadenando el
disparo de su potencial de accin.
Algunos agentes humorales que modifican la frecuencia de descarga del marcapaso, lo
hacen cambiando la pendiente del prepotencial (p.e. noradrenalina), aunque otras actan
tambin alterando el potencial de membrana cambiando as el tiempo requerido para
alcanzar el nivel de descarga (p.e. acetilcolina).
Como en otros tejidos excitables, los cambios en la concentracin externa de los iones
K+ afectan el potencial de membrana en reposo del msculo cardiaco, en tanto, que los
cambios en la concentracin externa de Ca

2+

afectan la magnitud de las contracciones

musculares.
La contractilidad del miocardio ejerce una importante influencia sobre el volumen
sistlico. Los impulsos de los nervios noradrenrgicos simpticos en el corazn,
aumentan la frecuencia (efecto cronotrpico) y la fuerza de contraccin (efecto
inotrpico). Las catecolaminas ejercen su efecto inotrpico por medio de una accin
sobre los receptores 1-adrenrgicos.
Los impulsos de las fibras cardiacas vagales colinrgicas disminuyen la frecuencia
cardiaca (efecto cronotrpico negativo).

OBJETIVOS
+

- Determinar la influencia de los iones K y Ca

2+

sobre la actividad del corazn.

- Determinar la influencia de la estimulacin del nervio vago y de sustancias qumicas

simptico y parasimpaticomimticas sobre la actividad del corazn.
58

- Obtener un registro del periodo refractario y la pausa compensadora en corazn de

rana.

MATERIAL
Material biolgico
- Rana de 100 a 150 g de peso
Por equipo:
- Soporte de media luna
- Pinzas dobles
- Sistema de adquisicin MP36
- Ajustador de tensin
- Transductor de tensin
- Cable DB9
- Electrodos de estimulacin
- Estuche de diseccin
- Tabla de diseccin para rana
- Franela
- Hilo grueso y delgado
- Caja de Petri
- 3 vasos de p.p. de 50 ml.
- 6 jeringas de 1 ml
Soluciones:
- Acetilcolina 1:10 000

- Ringer para corazn de rana

- Adrenalina 1:10 000

- Ringer con alto contenido de K

- Atropina 1:10 000

- Ringer con alto contenido de Ca

+
2+

DESARROLLO
I. Desmedular, descerebrar y montaje de la rana.
1. El profesor se encargar de anestesiar a la rana (pentobarbital sdico 80 mg/kg, ip.)
descerebrarla y desmedularla (figura 12), [NOM-033-ZOO-1995 (sacrificio humanitario de
los animales domsticos y silvestres)]. Con ello se persigue eliminar los reflejos y
59

tener solamente un animal vegetativo, el cual ser entregado a los alumnos para la
realizacin de la prctica.

Figura 12. Desmedulacin y descerebracin de la rana

2. Se fija a la rana sobre la tabla de diseccin y se abre su cavidad torcica, tras separar
previamente la piel del abdomen. Se corta a nivel de la cintura escapular y se descubre
la regin torcica. Con extremo cuidado se incide el pericardio y se libera as el corazn
(figura 13). Durante este procedimiento debe cuidarse de no lesionar ningn vaso,
principalmente los grandes troncos que ocupan la porcin precordial.

Figura 13. Localizacin del corazn. 1) Aurcula, 2) ventrculo y 3) pice.

3. Se fija el pice del corazn (la punta) a un hilo conectado mediante un ganchito de
alambre a modo de anzuelo. Debe cuidarse de no perforar el miocardio (figura 14).
II. Efecto de sustancias simptico y parasimpaticomimticas.
1. Realice un registro basal a una velocidad media.
Marcar el tiempo en el registro cada minuto durante 3 minutos una vez que observe
algn cambio; en todas las experiencias.
60

2. Sin detener el registro agregue unas gotas de solucin de adrenalina, contine

registrando durante 3 minutos.
3. Lavar con Ringer.
4. Realice un registro basal y sin detener el registro agregue unas gotas de solucin de
acetilcolina, contine registrando durante 3 minutos.
5. Lavar con Ringer.
6. Realice un registro basal y sin detener ste agregue unas gotas de atropina, contine
registrando durante 1 minuto y sin lavar adicione la misma cantidad de acetilcolina que
administr en el punto 4. Contine registrando durante 3 minutos.
7. Realizar dos lavados con Ringer.

Figura 14. Dispositivo para registro de actividad cardiaca

61

III. Periodo refractario y pausa compensadora.

1. Colocar los electrodos sobre el corazn. Ajustar el registro a una velocidad media.
2. Realice un registro basal. Aplique un estmulo umbral teniendo cuidado que el
estmulo caiga en el punto ms elevado de la contraccin. Siga estimulando a perodos
cada vez ms alejados hasta lograr el registro de una contraccin superpuesta a la
sstole normal (extrasstole). Observe.
IV. Efecto de los iones sobre la actividad del corazn.
1. Realizar un registro basal. Sin dejar de registrar agregar 0.5 ml de Ringer con alto
contenido de potasio. Una vez que se observe algn cambio marcar cada minuto durante
3 minutos.
2. Realizar 2 lavados con Ringer.
3. Realizar un registro basal. Sin dejar de registrar agregar 0.5 ml de Ringer con alto
contenido de calcio. Una vez que se observe algn cambio marcar cada minuto durante
3 minutos.
4. Realizar 2 lavados con Ringer.

DATOS
II. Sustancias simptico y parasimpaticomimticas
* Adrenalina
Tiempo (minutos)
Basal

Frecuencia
Amplitud
* Acetilcolina
Tiempo (minutos)
Basal

Frecuencia
Amplitud
62

* Atropina + acetilcolina

Basal

Atropina

Tiempo (minutos)
Atropina + acetilcolina
2

Frecuencia
Amplitud
IV. Efecto de los iones sobre la actividad del corazn
* Ringer alto en potasio
Basal

Tiempo (minutos)
2

Tiempo (minutos)
2

Frecuencia
Amplitud
* Ringer alto en calcio
Basal
Frecuencia
Amplitud

PRESENTACIN DE RESULTADOS
- Determine para cada experiencia la frecuencia (latidos/minuto) y amplitud (mm) de las
contracciones.
- Realice las grficas correspondientes para cada experiencia.
- Adicione a su reporte los resultados obtenidos para cada experiencia.

BIBLIOGRAFA
Aidley, D. J., 1998. The Physiology of Excitable Cells. 4- ed. Edit. Cambridge. University
Press. P. 381 393.
Conti, F. E., 2010. Fisiologa Mdica. McGraw-Hill-Interamericana, Mxico.
Eckert, R., D. Randall y G. Augustine, 1998. Fisiologa Animal. Mecanismos y
adaptaciones. 4. ed. Edit. McGraw Hill Interamericana. Madrid, Espaa. p 507 522.
Ganong, F. W. 2000. Fisiologa Mdica. 17. ed. Edit. El Manual Moderno, D. F., Mxico.
p. 84 89, 605 622.
63

PRCTICA 11
PROPIEDADES DEL MSCULO LISO
INTRODUCCIN
Aunque el msculo liso se ha estudiado menos que el esqueltico, se sabe que
contiene los elementos que pueden hacer su proceso contrctil semejante. La
distribucin de msculo liso en los organismos es abundante y bsica para muchos de
los procesos vitales y de conservacin del individuo y de la especie.
La excitacin en el msculo liso, en general, obedece a factores humorales y nerviosos.
El intestino es el tipo de rgano en el que mejor se puede ilustrar el comportamiento del
msculo liso: el automatismo, la influencia de la inervacin neurovegetativa, etc.

OBJETIVO
- Estudiar las propiedades contrctiles del msculo liso.
- Observar el efecto de las sustancias simptico y parasimpaticomimticas sobre la
actividad del msculo liso intestinal.
- Observar la influencia que ejercen algunos factores externos, como hipoxia,
temperatura y tensin sobre la actividad del msculo liso intestinal.

MATERIAL
Por equipo:

Soluciones:

- Hilo

- Acetilcolina 1:10 000

- aguja

- Adrenalina 1:10 000

- matraz Erlenmeyer de 500 ml

- Atropina 1: 1000

- termmetro industrial

- Tyrode pH 7.2 7.4, 10 L.

- pinzas dobles

Material biolgico:

- cmara de vidrio

- 1 conejo con ayuno de 24 horas

- caja de Petri.
- vaso de p.p. de 50 ml.
- resistencia
64

- pinza Mohr.
- 2 vasos de precipitados de 250 ml.
- soporte de media luna.
- 3 pipetas de 1 ml graduadas.

DESARROLLO
Preparacin del sistema de registro:
Con ayuda de la resistencia se lleva el bao a 37 1 C. Dentro del bao se coloca la
cmara para rgano aislado, la cual deber contener solucin de Tyrode con aireacin
continua (dos a tres burbujas /segundo) y un eficiente sifn que debe manejarse con
cuidado en el tubo de desage para realizar los lavados. Se sacrifica al conejo con un
golpe en la nuca y se le abre el abdomen para localizar el estmago, y aproximadamente
10 cm por debajo de ste se corta una porcin de intestino de 20 cm, el cual se transfiere
a una caja de Petri que contiene Tyrode aireado a 37 C. Se eliminan las membranas
mesentricas para que el msculo quede libre y se cortan porciones (asas) de 1.5 a 2 cm
(figura 15).

Figura 15.
65

Con movimientos suaves se vaciar el contenido de las asas y cada equipo tomar una.
Las restantes se mantendrn en el seno de la solucin aireada de Tyrode a 37 1 C. A
una porcin se le ata un hilo de unos 25 cm en cada uno de sus extremos teniendo
cuidado de que la luz intestinal no quede ocluido, como se observa en la figura 16.

Figura 16.
Esta preparacin se traslada a la cmara de rgano aislado, amarrando una de los
extremos en el gancho del fondo de la cmara y el otro al transductor del BIOPAC (figura
17). El equipo BIOPAC deber estar calibrado (pedir ayuda al profesor) de tal manera
que se registren claramente los movimientos del duodeno.

Figura 17.
66

IMPORTANTE: Cuidar que la temperatura del lquido de la cmara est entre los 35 y 37
C, y pasen 2-3 burbujas de aire/segundo.
PRECAUCIONES ADICIONALES:
a)

Mantener la aireacin.

b)

Mantener la temperatura a 37 C.

c)

No sacar la resistencia mientras est conectada.

EXPERIENCIAS:
1. Realice un registro basal (1 min) de las contracciones del intestino en el que pueda
apreciar claramente la ritmicidad y el tono del mismo.
2.- Hipoxia. Sin dejar de registrar, suspenda el burbujeo de aire de la preparacin; en
cuanto se noten los efectos volver a establecer la aireacin. Dejar transcurrir un tiempo
adecuado para observar el restablecimiento de la actividad contrctil.
3. Temperatura. Sin detener el registro agregue a la cmara solucin de Tyrode fro.
Anote la temperatura del interior de la cmara. Aumente la temperatura gradualmente por
calentamiento del recipiente exterior. Observe los cambios de la ritmicidad hasta tener
una temperatura de 38C; y regresar la temperatura a 37C.
4.- Tensin. Realizar un registro basal y sin dejar de registrar, aumente la carga del
msculo aumentando la altura del transductor. Observe la respuesta y determine si sta
se mantiene durante 3 min.
5.- Adrenalina. Realice un registro basal y sin detener el registro agregue una gota de
adrenalina de una solucin 1:10 000. Contine registrando durante 3 min; o hasta
observar los efectos sobre la amplitud y la frecuencia de las contracciones.
6.- Realice los lavados con solucin de Tyrode que sean necesarios hasta que la
preparacin presente la frecuencia y amplitud que tena en el registro basal anterior.
7. Acetilcolina. Realice un registro basal y sin detener registre los efectos que se
producen al regresar una gota de la solucin de acetilcolina de una solucin 1:10 000.
Contine registrando durante 3 minutos o hasta observar los efectos sobre la amplitud y
la frecuencia de las contracciones.
8.- Realice los lavados con solucin de Tyrode que sean necesarios hasta que la
preparacin presente la frecuencia y amplitud que tena en el registro basal anterior.

67

9.- Atropina. Realice un registro basal y, sin detener el registro, agregue 0.2 ml de una
solucin de atropina 1:1000. Registre durante 1 minuto y despus agregue una gota de
acetilcolina. Contine registrando durante 3 minutos o hasta observar los efectos sobre la
amplitud y la frecuencia de las contracciones.

DATOS
* Adrenalina
Tiempo (s)
Basal

10

15

20

25

30

45

90

25

30

45

90

25

30

45

90

Frecuencia
Amplitud
* Acetilcolina
Tiempo (s)
Basal

10

15

20

Frecuencia
Amplitud
* Atropina + Acetilcolina
Tiempo (s)
Basal

10

15

20

Frecuencia
Amplitud
PRESENTACIN DE RESULTADOS
- Determine para cada experiencia la frecuencia y amplitud de las contracciones.
- Realice las grficas correspondientes para cada experiencia.
- Adicione a su reporte los resultados obtenidos de cada experiencia.

68

BIBLIOGRAFA
Berne, R. y Levy, M.; 1992. Fisiologa. Ed. Mosby Year Book. Madrid, Espaa, pp. 352
373.
Ganong, F.W.; 2000. Fisiologa Mdica.17a. ed. Ed. El Manual Moderno, Mxico, pp. 89
92; 533570.
Stuart, I.F.; 2003. Fisiologa Humana. 7 ed. Ed. McGraw-HillInteramericana. Madrid,
Espaa, pp. 364368.
Eckert, R., Randall, D. y Augustine, G.; 1998. Fisiologa Animal. Mecanismos y
adaptaciones. 4a ed. Ed. McGraw-HillInteramericana. Madrid, Espaa, pp. 435 438.

69

APNDICE
a) MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO
Las tcnicas bsicas para el manejo de animales incluyen:
i). Evitar sufrimiento innecesario al animal, que adems de contravenir normas ticas,
puede condicionar respuestas anmalas.
ii). Evitar el manejo inadecuado y brusco del animal, para prevenir reacciones agresivas
hacia el experimentador.
a1) Ratas
Evtese el manejar a la rata con violencia, pues rpidamente aprende a defenderse y se
torna difcil y peligrosa.
El manejo de la rata es similar al que se usa con el ratn, sin embargo, para levantarla y
manipularla es ms conveniente tomarla suavemente y con seguridad por el dorso,
rodeando el trax con la mano (figura 18), pero teniendo cuidado de no presionar con
demasiada fuerza porque se puede asfixiar.

Figura 18
a2) Ranas
La rana debe de tomarse con una franela hmeda para evitar prdida de agua por la piel
(respiracin cutnea) y facilitar su manipulacin.
* Descerebracin y desmedulacin:
Remueva la porcin anterior del cerebro haciendo un corte a nivel de las comisuras
bucales, que pase por el borde anterior de las membranas timpnicas (figura 19).
70

Destruya el cordn espinal introduciendo un estilete y haciendo movimientos circulares

(figura 19).

Figura 19.
* Preparacin citico-gastrocnemio: Corte la piel alrededor de la parte superior de la
pierna, como se muestra en la figura 20. Para desprender la piel, jale hacia abajo de la
pierna hasta que quede expuesta toda la musculatura.

Figura 20.
Cuide de mantener hmedos con solucin salina los tejidos expuestos.
Coloque una aguja de diseccin o una pinza entre el tendn de Aquiles y el hueso, pase
un hilo por debajo del tendn y amrrelo fuertemente. Finalmente corte el tendn de
Aquiles lo ms lejos posible del msculo (figura 21).
Con ayuda de sus pinzas y disectores de vidrio, separe cuidadosamente los msculos y
exponga el nervio citico, el cual se identifica por su color amarillento, corriendo cercano
y paralelo a los vasos femorales (figura 21).

Figura 21.
71

a3) Conejos
No se debe tomar por las orejas, sino por la piel del cuello con la mano izquierda; la
mano derecha servir para sujetar las extremidades posteriores (restirando sin lastimar)
e inmovilizar al animal para poderlo trabajar (figura 22).
Cuando se tiene la caja adecuada para la manipulacin del conejo, basta con acomodar
la cabeza del animal en el cepo de la misma. Esta caja permite el uso de las orejas para
realizar inyecciones por la vena va Intravenosa (figura 22).

Figura 22.

b) DISTRIBUCIN DE ANIMALES DE LABORATORIO

Es de gran importancia que se realice una distribucin aleatoria de los animales para un
experimento de laboratorio, ya que esto contribuir en gran parte a obtener resultados
verdicos. La distribucin aleatoria permite tener grupos homogneos y resultados
representativos de toda una poblacin, adems hay que mencionar que los caracteres
que guardan entre ellos se encuentran totalmente distribuidos al azar (p.ej. peso
corporal, agresividad, etc.), de tal manera que si no se consideran estos puntos tan
importantes, los grupos formados no sern equivalentes
Supngase que hay 40 animales para colocarlos en 4 grupos iguales. Para integrar los
grupos se generan nmeros aleatorios. Los nmeros mayores de 4 se ignoran (por
ejemplo, los primeros nmeros 9, 5, 5 se ignoran), el nmero que sigue (por ejemplo,
231) nos indica que el animal que vamos a retirar de la jaula va a formar parte del grupo
72

nmero 2. El siguiente animal que se retira va al grupo 3, el siguiente al grupo 1 y as

sucesivamente hasta completar los 4 grupos de 10 animales cada uno.

c) MARCAJE DE ANIMALES DE LABORATORIO

El marcar los animales facilita su identificacin para los diferentes ensayos de
laboratorio:
- Experimentos AGUDOS que duran de tres a ocho horas.
- Experimentos CRONICOS que duran semanas y/o meses.
c1) Ratas y ratones
Para experimentos agudos se utiliza el mtodo de manchado que consiste en aplicar un
colorante por medio de un hisopo, en diferentes regiones del cuerpo, lo que permite
hacer diferentes combinaciones: CA-cabeza; CO-cola; MI-pata delantera izquierda; MDpata delantera derecha; PI-pata trasera izquierda; PD-pata trasera derecha; LO-lomo;
CACO-cabeza y cola, etc.
Para experimentos crnicos se emplea el mtodo de perforaciones en las orejas. Con
una pinza sacabocado se hacen perforaciones en las orejas izquierda y derecha del
animal (figura 23). El nmero total est dado por la suma de los valores de cada una de
las perforaciones. Con este procedimiento se eliminan los nmeros 8, 9, 80, 90.

Figura 23
73

c2) Ranas
Se les colocan cintillos de tela adhesiva en una de las extremidades, donde se anota el
peso corporal o un nmero que permita identificarlas.
c3) Conejos y cuyos
Cuando no se pueden identificar por alguna caracterstica natural (color, tamao, etc.) se
les colocan grapas en las orejas.

d) VAS DE ADMINISTRACIN
Un frmaco puede introducirse en un organismo en forma de gas, de solucin, de
suspensin, o en estado slido. La forma es un factor importante en la velocidad de
absorcin.
La vascularizacin del sitio de administracin, y el rea de la superficie absorbente
tambin influyen en la velocidad de absorcin. Los frmacos son absorbidos con mayor
rapidez en reas con riego abundante, por ejemplo los pulmones, que en sitios con
menor riego sanguneo, como los subcutneos.
Las vas de administracin de frmacos utilizadas para lograr sus efectos sistmicos
pueden dividirse en dos grupos principales:
- ENTERICAS- Que usan el tubo gastrointestinal. Ejemplos: oral, rectal, intragstrica,
sublingual.
- PARENTERALES- Cuando NO se utiliza el tubo gastrointestinal. Ejemplos:
Intravenosa, subcutnea, intramuscular, tpica, intradrmica, respiratoria (inhalacin),
etc.
d1) Va Intraperitoneal
Con toda la mano izquierda sujete la piel del cuello de la rata en una amplia zona
mantenindola inmvil, as con la mano derecha se puede estirar la cola o las patas
posteriores (sin lastimarla) y se presenta otra persona, la que har la puncin (figura 24).
Las punciones deben practicarse en la mitad inferior del abdomen, por fuera de la lnea
media. Con una mano se levanta la piel de la regin, para separar la pared del contenido
abdominal y evitar as su puncin. Primero se introduce la aguja subcutneamente hasta
la mitad de su longitud y luego se acaba de introducir verticalmente a travs de la pared
74

abdominal. Utilizar agujas de bisel corto y calibre regular (figura 24).

Figura 24.
d2) Va subcutnea
Es precisamente debajo de la piel del dorso del cuello. Se puede aprovechar el pliegue
que se toma entre el pulgar y el ndice. Los dedos medio, anular y meique sirven para
abrazar abdomen y tren posterior del animal. La mano derecha queda libre para hacer la
inyeccin clavando la aguja en la piel que queda sobre el pulgar e ndice y en sentido
cfalo-caudal. Para asegurarse de que la inyeccin ser subcutnea, una vez atravesada
la piel, se seguir el trayecto de la aguja con los dedos.

e) SOLUCIONES FISIOLGICAS
Las soluciones utilizadas en los experimentos de fisiologa son llamadas SOLUCIONES
FISIOLGICAS (salina, Tyrode, Krebs, Ringer, etc.) y su composicin depende del tejido
u rgano aislado (in vitro) que requiera mantenerse en un estado razonablemente
satisfactorio durante algn tiempo, en los 2 cuadros siguientes se muestran ejemplos.
Componentes
g/L
NaCl
KCl
CaCl2
MgCl2 6H2O
MgSO4 7H2O
NaH2PO4 H2O
Na2HPO4 2H2O
KH2PO4
NaHCO3
Glucosa

Ringer

Krebs

6.5
0.14
0.12

6.9
0.35
0.28

0.01

0.29
0.16

0.2
2

2.1
2
75

Tyrode

Hank

8
0.2
0.2
0.1

8
0.4
0.14
0.2

0.05

1
1

0.06
0.06
0.35
1

Componentes
g/L
NaCl
KCl
CaCl2
NaH2PO4 H2 O
NaHCO3
K2HPO4 3H2O
KH2PO4
KHCO3
Glucosa
Citrato de sodio

LIC

Ringer
+
bajo K
6.5

Ringer
2+
bajo Ca
6.5
0.14

0.12
0.01
0.2

Ringer
+
alto K
6.5
0.28
0.12
0.01
0.2

0.01
0.2

Ringer
2+
alto Ca
6.5
0.14
0.24
0.01
0.2

0.11

10
3
1.24
1

f) SOLUCIONES EMPLEADAS EN LAS PRCTICAS

PRCTICA 1. ASPECTOS GENERALES DEL MANEJO DE ANIMALES Y VAS DE
ADMINISTRACIN.
- Solucin Salina 0.9%:
NaCl ...................... 9 g
Agua destilada ........ 1 L
PRCTICA 3. ESTUDIO DE LA PENETRACIN DE SUSTANCIAS A LAS CLULAS
NORMALES.
- Solucin de NaCl 0.2 M:
Determine el peso molecular del NaCl y multiplique por 0.2, lleve a 1 litro con agua
destilada.
- Solucin de sacarosa 1 M:
Pese una cantidad de sacarosa igual a su peso molecular (342.30) y lleve a 1 litro con
agua destilada.
- Proceda de la misma manera para las soluciones de KCl, LiCl, BaCl 2 y CaCl2.
-Glucosa 0.2%:
Pesar 200 mg y llevarlos a 100 ml de H2O destilada:
- Solucin de alcohol metlico 0.3 M:

76

Si la cantidad necesaria es de 100 ml, divida el peso molecular de este alcohol (32.04)
entre 10 y despus multiplique el valor obtenido por 0.3 (para obtener la molaridad de
0.3). Despus divida este valor entre la densidad (0.79) para determinar el volumen
necesario.
- Proceda de la misma forma para preparar las soluciones de:
Alcohol Etlico (PM=46.07; densidad=0.79).
Alcohol Proplico (PM=60.097; densidad=0.80).
Alcohol Butlico (PM=74.124; densidad=0.81).
PRCTICA 4. POTENCIAL DE DIFUSIN Y POTENCIAL DE LESIN.
-Solucin de Ringer.
-Solucin de LIC (lquido intracelular).
-Soluciones de K2SO4: 0.005, 0.01, 0.025, 0.05 y 0.1 M.
-Solucin de KCl: 400, 100, 50, 20, 10, 5, 2.5, 1 mM.
-Soluciones de Na2HPO4: 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 y 2.0 M.
PRCTICA 7. TRANSMISIN SINPTICA.
- Acetilcolina 1: 10 000:
Acetilcolina ........................ 1 mg
Solucin salina 0.9 % .. 10 ml
- Curare 50 g/ml:
Tubocurarina...................... 1 mg
Solucin salina 0.9 % .. 20 ml
- Fisostigmina 1.5 mg/ml:
Fisostigmina .................... 1.5 mg
Solucin salina ................... 1 ml
PRCTICA 8. MODULACIN

DE

UN FUNCIN

QUMICAS.
- Soluciones de oxitocina a 0.06, 0.2, 0.63 y 5 Ul/ml.
- 4 litros de solucin fisiolgica de Jalon
77

CELULAR

POR SEALES

PRCTICA 10. PROPIEDADES DEL MSCULO CARDIACO.

- Acetilcolina 1:10 000:
Acetilcolina.......................... 1 mg
Solucin salina 0.9 % .... 10 ml
- Adrenalina 1:10 000:
Adrenalina ............ 1 mg
Solucin salina 0.9 % . 10 ml
- Atropina 1:1000:
Sulfato de atropina ... 1 mg
Solucin salina 0.9 % ... 1 ml
- Solucin Ringer normal (ver soluciones fisiolgicas).
+

- Solucin Ringer con alto contenido de K .

2+

- Solucin Ringer con alto contenido de Ca .

+

- Solucin Ringer con bajo contenido de K .

2+

- Solucin Ringer con bajo contenido de Ca .

PRCTICA 11. PROPIEDADES DEL MSCULO LISO.
- Acetilcolina 1:10 000:

- Tyrode:

Acetilcolina ................... 1 mg

NaCl ...........................

Solucin salina 0.9 % .. 10 ml

KCl .......................... 0.2 g

- Adrenalina 1:10 000:

CaCl2 anhidro ......... 0.24 g

Adrenalina ............. 1 mg

MgCl2 ...................... 0.01-0.05 g

Solucin salina 0.9 % .. 10 ml

NaH2PO4 ................ 0.05 g

- Atropina 1:1000:

NaHCO3 ......................

1g

Sulfato de atropina .... 1 mg

Glucosa ......................

1g

Solucin salina 0.9 % 1 ml

Agua destilada ............

1L
* El CaCl2 debe disolverse por separado.

78

8g

g) CALIBRACIN DEL BIOPAC

1. Abrir el programa BSL PRO 3.7.
2. En el men MP36, seleccionar: Ajuste adquisicin.

3. En la ventana que se abre, debe decir adquirir y aadir usando memoria PC. 100
muestras/segundo en frecuencia de muestreo y 120 minutos en tiempo de adquisicin.
Seleccionar reajustar.

79

4. En el men MP36, seleccionar ajuste canales. Si el transductor de fuerza se conect

al canal 1 (CH1), ste aparecer seleccionado.

5. Dar clic en el botn que tiene un tringulo negro invertido, seleccionar fuerza de 0 a
50 gramos o de 0 a 100 gramos (dependiendo de la prctica que se vaya a realizar).

80

6. Dar clic en el botn de la llave de tuercas, aparecer una ventana que tiene un botn
calibrar, dar clic en l.

7. Se abre la ventana: Cambiar parmetros. Con el ganchillo con forma de S en el

orificio de 50 o 100 g del transductor de fuerza (dependiendo de la prctica), se pone 0
en la casilla de valor de escala que est frente al botn Cal1. Se da clic en Cal 1.

81

8. Si el paso anterior se realiz de forma adecuada, habr un cambio en el valor de la

casilla de valor de entrada que est frente al botn Cal 1:

9. Ahora se coloca la pesa de 10 gramos en el ganchillo en forma de S y se pone 10 en

la casilla de valor de escala que est frente a Cal 2. Se da clic en Cal 2.

82

10. De igual forma, si el paso anterior se realiz de forma adecuada, habr un cambio
en el valor de la casilla de valor de entrada que est frente al botn Cal 2:

11. Se da clic en OK de todas las ventanas que se han abierto. En el men Ver, se
selecciona Mostrar, y luego Cuadrcula. Se da clic en Inicio.

83

12. Si la calibracin se realiz de forma adecuada, aparecer una lnea roja (o de otro
color) que se va desplazando sobre el valor de 10 gramos. Luego dar clic en stop.

13. Para comprobar que la calibracin es adecuada, se retira la pesa de 10 gramos del
gancho en S que est en el transductor de fuerza. Se da clic en Inicio, ahora la lnea
roja aparece en el valor de 0. La calibracin es adecuada.

84

14. Lo ms recomendable ahora es guardar el archivo, si ocurre cualquier imprevisto no

se tendr que volver a calibrar. Para ello en el men Archivo, seleccionar Guardar como:

15. Guardar el archivo de la siguiente forma: Grupo-equipo-nmero de prctica- mes y

ao (Ejemplo: 4FM1Eq2P6Ago2013). Dar clic en guardar. En la parte superior izquierda
de la ventana aparecer el nombre que se le ha dado al archivo con la extensin .acq.

16. El equipo est calibrado y listo para llevar a cabo sus registros.

85