Prctica No.

4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

Universidad Autnoma
Metropolitana

Prctica No. 4
Fundamentos de la cromatografa en
columna y en capa delgada
Laboratorio de Qumica
Orgnica
Profesor: Negrn Silva Guillermo
Enrique
Rojas Sandoval Maria Sarai
Ayudante: Rodrguez Romn Viridiana
Rojas Sandoval Maria Sarai
Martes 10:00 13:00 hrs.

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

Prctica No.4 Fundamento de la

cromatografa en columna y en capa fina.
OBJETIVO
Emplear la cromatografa para separar y purificar los componentes
orgnicos de una mezcla binaria de composicin desconocida.

MARCO TERICO
La cromatografa es un mtodo que permite la separacin,
identificacin y determinacin de los componentes qumicos en
mezclas complejas.
Los mtodos cromatgraficos hacen uso de una fase estacionaria y
una fase mvil. En todas las separaciones cromatografcas, la
muestra se desplaza con una fase mvil, que puede ser un gas, un
lquido o un fluido. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase
estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a
una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma, que los
componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la
fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente
con el flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se
unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como
consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra
se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse
cualitativa y/o cuantitativamente.
En esta prctica de laboratorio se realizara 2 tipos de cromatografa,
en placa fina y en columna.
Placa fina
La cromatografa en capa fina (TLC) es una tcnica analtica rpida
y sencilla, muy utilizada en un laboratorio. Esta permite determinar el
grado de pureza deun compuesto, determinar as la efectividad de un
a etapa de purificacin,
comparar muestras (si dos muestras corren igual en placa podran se
r idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la mis
ma sustancia), realizar el seguimiento de una reaccin, estudiar cmo
desaparecen los reactivos y cmo
aparecen los productos finales o saber cundo la reaccin ha acabado
.

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

La muestra a analizar se deposita en un extremo de una lmina de pl

stico o aluminio que
previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lmina se coloca
en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes mezclad
os (eluyente o fase mvil).
A medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a tra
vs del adsorbente.

Revelado de las placas

La mayor parte de las placas de cromatografa llevan un indicador
fluorescente que permite la visualizacin de los compuestos activos a
la luz ultravioleta (254 nm). El indicador absorbe la luz UV y emite luz
visible. La presencia de un compuesto activo en el UV evita que el
indicador absorba la luz en la zona en la que se encuentra el
producto, y el resultado es la visualizacin de una mancha en la placa
que indica la presencia de un compuesto.

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

Determinacin del Rf
La retencin y la selectividad en la separacin dependen de los
valores respectivos de las constantes de los diferentes equilibrios
qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de:

La polaridad del compuesto. Los solutos ms polares quedarn

ms retenidos puesto que se adsorben ms firmemente a los
centros activos de la fase estacionaria, mientras que los no
polares se eluirn con mayor facilidad.
La naturaleza del disolvente. As, para un mismo compuesto, un
aumento en la polaridad del disolvente facilita su
desplazamiento en la placa.

La relacin entre las distancias recorridas por el soluto y por el

eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf.
Para calcular el Rf
Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida
por el eluyente (Y)

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la

mancha.

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

Se recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la me

zcla presenten un Rf medio en
torno a 0.3/0.5. Para compuestos poco polares, se debe utilizar un dis
olvente apolar como el hexano. En el caso de compuestos con polarid
ad media, se aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en dist
intas proporciones.
Los productos ms polares, requieren disolventes ms polares como
mezclas de diclorometano/metanol en distintas proporciones.
Cromatografa en columna
En este tipo de cromatografa, la fase estacionaria se coloca en el
interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para
controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase
estacionaria se impregna con la fase mvil y en Seguida la mezcla
orgnica que nos interesa separar la depositamos por la parte
superior de la fase estacionaria.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase mvil, poco a
poco saldrn de la columna cromatogrfica, y se recogen en
fracciones. Las fracciones menos polares, que son por lo general las
que se retienen poco o nada en el absorbente, sern las primeras en
salir de la columna. En cambio, las sustancias ms polares, quedan
retenidas por ms tiempo en el absorbente, y a menudo es necesario
el uso de diferentes disolventes con la finalidad de incrementar su
polaridad para que sean arrastradas por estos.

Adsobentes y eluyentes
Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados s
on la gel de slice (SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter pola
r.. El
adsorbente debe ser inerte con las sustancias a analizar y no actuar c
omo catalizador en reacciones de descomposicin. El orden de eluci
n de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

mvil o eluyente.
Este puede ser un disolventenico o dos miscibles de distinta polarida
d. En el siguiente recuadro se recoge
por orden creciente de fuerza eluyente los disolventes ms comnme
nte empleados.
Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato
de etilo < acetona < 2propanol < metanol < agua
En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos d
e ebullicin y viscosidad, lo que les permite moverse con rpidamente
. Usualmente se emplea una mezcla de dos disolventes en
proporcin variable.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Cromatogr
afia en
placa fina

Para el reactivo A, B,
C, D, E y F, Buscar la
fase ideal

mezclar una
combinacion en
proporcion diferente
o igual de acetato de
etilo y eter de
petroleo como fase

En cada placa de
silica poner una 4
gota s de A,B, C, D, E,
y F respectivamente
mediante un capilar

revelar cada placa

bajo una luz UV.

si no aparece una
mancha cerca del
cento seguir
probando con una
diferente propotcion
de fase.

cortas placas de silica

de aprox de 2x4 cm,
marcar los bordes de
0.4 cm

poner cada una en

contanto con nuestra
fase seleccionada en
una cubeta
cromatoggrafica

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

Cromatogra
fia en
columna

montar una buereta

en solporte universal
y bloquear el
extremo con un
algodon

mojar con un exceso de fase

movil

hasta 10 cm

drenar parcialmnte
la fase movil

verter nuestra
solucin a separar

abrir valvula

agregar de 1 a 3 ml
de fase movil

ir llenando tubos de
ensayo con lo que
salga de la bureta

para cada tubo hacer

una placa fina
cromatografica para
identificar que esta
saliendo de la bureta

juntar los tubos con

los compuestos que
salieron al principio y
al ultimo
respectivamnete

colocralos en
matraces esfericos y
llevralos a
concentrar al
rotavapor.

verter suavemente la
mezcla de silica gel

MATERIAL Y REACTIVOS
Material

Bureta con vlvula de

tefln
1 gradilla con 15 tubos de
ensayo (15 ml)
1 matraz esfrico de 100
ml, junta 24/40
2 vasos de precipitado de
100 y 150 ml

1 pinza de tres dedos

1 soporte universal
Pinzas de diseccin
4 cromatoplacas de silica
gel (2x5 cm)
Frasco limpio de Gerber
2 tubos capilares de
vidrio
Rotavapor

Diclorometano
ter de petrleo

Reactivos

Hexano
Acetato de etilo
Acetona

Prctica No.4 Fundamentos de la cromatografa en columna y en capa delgada

 OBSERVACIONES
Cromatografa en placa fina

Buscar la fase ideal para cada reactivo. (RFi 0.5).

Reactivos ocupados: A, B, C, D, E y F

Para reactivo A, B y C

Prueba 1: 1:1 acetato de etilo/ter de petrleo

Para esta placa el nico reactivo que se

encuentra a la
mitad es el A, por lo
tanto la fase ideal para este es 1:1 acetato
de etilo/ter de petrleo.

Prueba 2: 2:1 ter de petrleo/acetato de etilo

Para esta placa el nico reactivo que se

encuentra a la mitad es el C, por lo tanto la
fase ideal para este es 2:1 ter de
petrleo/acetato de etilo.

Prueba 3: 1 ter de petrleo

Para esta placa el reactivo B se encuentra

a la mitad, por lo tanto la fase ideal es solo
ter de petrleo.

Para reactivo D, E y F

Prueba 1: 2:1 acetato de etilo/ter de petrleo

Para esta placa el nico reactivo que se

encuentra a la
mitad es el F, por lo tanto
la fase ideal para este es 2:1 acetato de
etilo/ter de petrleo.

Prueba 1: 1:1 acetato de etilo/ter de

petrleo

Para esta
encuentran
ideal para
etilo/ter de

placa ambos reactivos que se

a la mitad, por lo tanto la fase
estos es 1:1 acetato de
petrleo.

Tabla 1. Fase ideal para cada reactivo.

Co
mp
ues
to
A

Com
D
pon
ente
E
A

FB
C

D
E
F

Fase

Acetato de
petrleo
Acetato de
petrleo
Acetato de
petrleo
DT

Acetato
de
(m
petrleo
m)
Acetato
de
34

petrleo
38

Acetato
de
37.

petrleo

5
35
35
38

etilo/ ter de

Pro
por
cin

1:1

etilo/ ter de

0:2

etilo/ ter de

1:2

Di ter de
etilo/
(m
m) ter de
etilo/

1:1

1:1

2:1

13
25 ter de
etilo/
16
20
15
14

Tabla 2.

Distancias DT y Di para cada

reactivo.

Cromatografa en columna

Se utiliz una bureta y se introdujo un pequeo algodn.

Se disolvi silica gel en clorometano y se verti hasta llegar a
una altura de 8 cm, dejando 0.5 cm de disolvente en la parte
superior.
Se introdujo algodn sobre la solucin de silica.
Se agreg la solucin XY seguida de 10 ml de solucin 1:1
acetato de etilo/ter de petrleo. En total se agregaron 30 ml.
Se abri la llave y la solucin se recogi en tubos de ensayo, se
tom 13 muestras.
Para cada muestra se realiz una prueba de cromatografa en
placa fina para determinar cul era su contenido.
Previamente se realiz una placa para determinar la fase ideal
para la mezcla XY
Prueba 1: 1:1 ter de petrleo/acetato de etilo

Para esta mezcla XY la fase ideal es 1:1

ter de petrleo/acetato de etilo, ya que X y
Y se tiene diferente polaridad en esta fase
haciendo posible su separacin.

X: siendo el compuesto menos polar

ser el primero en salir.

Y: siendo el compuesto ms polar ser el

ltimo en salir.

X
Y

Pruebas para muestras 1-13

Tubo 1

En esta placa se puede observar que no

existe componente X en la solucin que
empieza a salir de la bureta.

Tubo 2, 3, 4 Y 5

Tubo 6, 7, 8 y 9

En esta placa se puede observar que en las

4 muestras contienen componente X.

En esta placa se puede observar que en la

muestra 6 y 7 no contiene ningn
componente. Sin embargo en la muestra 8
y 9 ya existe componente Y.

Muestra directo de la bureta despus del tubo 9

Esta placa se realiz con el propsito de

determinar aun la existencia de componente,
de la solucin que sale de la bureta. Y nos
indic que an la solucin que sala de la
bureta contena componente Y.

Tubo 10, 11, 12 y 13

En esta placa se puede observar que en las 4

muestras contienen componente Y.

Muestra directa de la bureta para determinar si an

contena compuesto Y.

Esta ltima placa se tom con el propsito

de determinar el contenido de la solucin
que sala de la bureta despus del tubo 13.

Se puede observar que esta solucin ya no

contena ningn componente, por lo tanto
aqu se concluy la separacin de la
solucin XY.

Tabla 3. Contenido de los tubos.

No
.
tu
bo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13

Cont
enid
o

nada
X
X
X
X
nada
nada
Y
Y
Y
Y
Y
Y

Imagen 1. Placa
cromatografica revelada

En un matraz se junt los tubos 8-13 que contenan la solucin

ms polar, en otro matraz los tubos 2-5 que contenan la
solucin menos polar.

Peso matraz (1) = 68.889 g

Peso matraz (2) = 62.0556 g

Las soluciones de los matraces se concentraron en el rotavapor.

Peso matraz (1) sol. Mas polar = 79.7542 g

Peso matraz (2) sol. Menos polar = 75.8381 g

En el matraz con el compuesto menos soluble se logr que este

se cristalizara, mientras que el compuesto ms polar no se
logr cristalizar por esta razn se recristalizo agregando una
solucin de 2 ml de ter de petrleo y 1 ml de acetato de etilo.
Al agregar la solucin Inmediatamente se cristalizo nuestro
compuesto ms polar.

Imagen 2. Matraz
compuesto menos polar

Imagen 3. Matraz
compuesto ms polar.

CALCULOS

Tabla 4. Distancias de las placas.

Com
pon
ente
A

B
C

D
E
F

DT
(m
m)

34
38
37.
5
35
35
38

Di
(m
m)

13
25
16
20
15
14

Rfi =

Di
DT

Tabla 5. RFi

Rfi

Di
DT

RfA

RfB

RfC

RfD

RfE

RfF

RfA =

13 mm
=0.382
34 mm

RfB =

25 mm
=0.658
38 mm

0.382

0.658

RfC =

16 mm
=0.427
37.5 mm

0.427

RfD =

20 mm
=0.571
35 mm

RfE =

15 mm
=0.429
35 mm

RfF =

14 mm
=0.368
38 mm

0.571

0.429

0.368

Peso de los compuestos separados

Peso compuesto ms polar = 10.8552 g

Peso compuesto menos polar = 13.1825 g

ANALISIS DE RESULTADOS

Para la solucin XY que se separ la fase ideal fue 1:1 ter de

petrleo/acetato de etilo. Se pudo separar los compuestos X y Y
gracias a su diferencia de polaridad que presentan en la fase
elegida. El primer compuesto en salir de la columna
cromatogrfica fue el compuesto X siendo el menos polar
seguido del compuesto Y que tiene una mayor polaridad.

 CONCLUSION

En esta prctica de laboratorio se busc separar una mezcla de

dos compuestos orgnicos mediante cromatografa en columna.
Como fase mvil se ocupo 1:1 ter de petrleo/acetato de etilo,
dicha mezcla se logr determinar gracias a la utilizacin de
cromatografa en placa delgada. Por la diferencia de polaridad
de los compuestos orgnicos en la mezcla fue posible
separarlos, nuevamente haciendo uso de la cromatografa en
placa delgada se conoci la composicin de la solucin en cada
muestra tomada y as se supo en que momento sali cada
componente.

BIBLIOGRAFIA
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa (25-febrero2016)
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm (25-FEBRERO-2016
Alicia Lamarque. (2000). Fundamentos terico-prcticos

de qumica orgnica. Argentina: Editorial Encuentro.

Rogelio Villegas Arce.(2014). Principios de Cromatografia (PDF file)

http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromato
grafia/principios_de_cromatografia.pdf