HPLC - Eduardo - AI Colorido PDF

SENAI - Curso de Tecnologia em
Processos Quimicos
Faculdade de Tecnologia SENAI Roberto Mange

Curso de Tecnologia em Processos Quimicos
Mtodos Cromatogrficos
FUNDAMENTOS DE
CROMATOGRAFIA
LQUIDA
Cromatografia
Planar
F.M. Lquida
C.Papel
EDUARDO SANTOS LOUZADA
C.Camada
Delgada
Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa
F.M. Lquida
CCC
CLAE
CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE
1
CROMATOGRAFIA LQUIDA
Princpios de CLAE - HPLC
Princpios de CLAE HPLC
Inicialmente feita em coluna de vidro com

dimetros de 1 a 5 cm e comprimentos de 50 a
500cm.
Assegurar vazes razoveis, o dimetro das
partculas de fase estacionaria slida = 150 a 200um
Vazes muito baixas de

alguns dcimos de milmetro
por minutos e os tempos de
separao eram longos de
varias horas
Cientistas perceberam que a eficincia da coluna

podia ser aumentada atravs da diminuio da
partcula da fase estacionaria
Acelerar o procedimento =
aplicao de bomba de vcuo
ou por bombeamento
1960 foi desenvolvida a tecnologia para produo

e uso de partculas de dimetro de 3 a 10um
5
Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Processos Quimicos
Essa Tecnologia exigiu equipamentos sofisticados

operando a altas presses
ltimos 12 anos = desenvolvimento de vrios detectores

espectrofotomtricos que operam em comprimentos de
onda de at 190nm;
Surgiu o nome HPLC High Performance Liquid

Chromatography empregado para distinguir dos mtodos
bsicos
Houve um aumento na utilizao dos detectores por

fluorescncia, eletroqumico a o acoplamento com o
espectrmetro de massa;
Conhecer suas vantagens, limitaes,

componentes e os critrios de escolha entre as
opes de equipamentos uma obrigao dos
profissionais de laboratrios qumicos,
farmacuticos, bioqumicos e outros
Vrios nomes tm sido utilizados para denominar

esta tcnica de cromatografia liquida: alta
velocidade, alta presso, alto desempenho, alta
resoluo e alta eficincia o nome mais utilizado
CLAE
10
Instrumentos muito sofisticados = totalmente

automatizados
Tendo a capacidade de realizar separaes e anlises
quantitativas de uma grande quantidade de compostos
presentes em vrios tipos de amostras, em escala de tempo
de poucos minutos, com alta resoluo, eficincia e
sensibilidade
11
Atualmente CLAE ainda objeto de novos avanos que

em um futuro seu emprego ser ainda mais amplo.
12

Processos Quimicos
Cromatografia
CROMATOGRAFIA LQUIDA CLSSICA

Planar
F.M. Lquida
C.Papel
C.Camada
Delgada
Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa
F.M. Lquida
CCC
CLAE
CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA

EFICINCIA
CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE
13
14
CROMATOGRAFIA
LQUIDA
CROMATOGRAFIA LQUIDA CLSSICA
CROMATOGRAFIA EM COLUNA
CROMATOGRAFIA EM
COLUNA
CROMATOGRAFIA DE ADSORO:
CROMATOGRAFIA LQUIDA-SLIDA
O slido empacotado dentro

da coluna de vidro e a fase
mvel, que um solvente
composto de um ou mais lquidos
orgnicos, vai eluir os
componentes da mistura atravs
da coluna.
A fase estacionria um slido de superfcie ativa,

que pode ser: slica-gel, alumina ou celulose.
15
16
CLSSICA
ETAPA 1 : Enchimento da coluna, deve ser repetido para cada
separao, representando um disperdcio de material e mo de obra
ETAPA 2 : Aplicao da amostra
ETAPA 3 : Vazo do eluente na coluna promovida pela ao da
gravidade e as fraes individuais de amostra so coletadas
manualmente ou atravs de um coletor de fraes, gastando varias
horas
17
ETAPA 4 : Deteco e Quantificao so realizadas por anlise

manual das fraes individualmente por espectrofotometria ou
anlise qumica
18

Processos Quimicos
Cromatografia
Planar
F.M. Lquida
C.Papel
C.Camada
Delgada
Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa
F.M. Lquida
CCC
CLAE
CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE
19
20
Tcnicas da CLAE HPLC
CLAE - HPLC
Coluna fechada reaproveitvel
Sistemas de bombas para que a
fase mvel consiga migrar a uma
velocidade razovel atravs da
coluna
Injeo precisa da amostra usando
microseringa ou vlvula de injeo
Vrios tipos de detectores
proporcionando um registro continuo
da composio do eluente
21
22
Vantagens da CLAE HPLC
Limitaes da CLAE HPLC
Menor tempo de anlise
Alto Custo da instrumentao
Alta resoluo ( misturas complexas)
Alto custo de Operao
Resultados Quantitativos
Falta de detector universal sensvel
Boa Sensibilidade
Necessidade de Experincia no seu manuseio
Versatilidade ( Diferentes Amostra)

Automatizao
23
24

Processos Quimicos
TERMINOLOGIA E
INTERPRETAO DOS
CROMATOGRAMAS
O VOLUME DA COLUNA = Vo
Injetor
Coluna
Detector
Vo = Volume de solvente (mL) contido entre o injetor e o detector

Vo = Volume mnimo que a bomba tem que bombear para que
qualquer componente injetado chegue at o detector
25
Onde :
26
Vp
Equao do Vo
0,65 . . R2 . Comprimento
Fluxo
Reteno K
Grau de interao da
amostra com a coluna e
fase mvel
K = (Vp Vo)
= 3,14 ; R = Raio da coluna ( cm )
Vo
Vo
Comprimento da coluna (cm)

Fluxo da fase Mvel ( mL/Min)
27
28
Reteno K
Seletividade
Reteno afetada/controlada por:
A capacidade do sistema qumico (Coluna e fase mvel )

de diferenciar entre os componentes de interesse
Polaridade da fase mvel; isto pela % dos

componentes da fase
Controlada por:
Caractersticas qumicas da fase mvel
Caractersticas qumicas da fase Estacionria
Polaridade da fase estacionria
pH da fase mvel, quando se trata de compostos ionizados

29
30

Processos Quimicos
Seletividade
V1
Eficincia N
V2
= K2/K1 =
(V2-Vo)/(V1/Vo)
Vo
Diluio da banda de um
composto sofrida ao
passar pelo sistema
(alargamento do pico)
K e bons, falta o N
31
Fatores que influenciam N
32
Diferena no comprimento de percurso
Eficincia
Pico Injetado
Fluxo da
fase Mvel
N = Numero de
pratos tericos
uma medida de
quanto o sistema
est diluindo a
banda do
componente
durante a corrida
RECHEIO
Alargamento
do pico (banda)
33
34
Eficincia N
Assimetria do Pico
A eficincia afetada /controlada por fatores fsicos como:

Temperatura
Forma e tamanho da partcula de recheio
Comprimento e dimetro da coluna
Fluxo
Volume e massa de amostra injetada
35
36

Processos Quimicos
R= V2 V1
(W1 + W2)/2
V1
V2
Resoluo
Equao Geral da Resoluo
Indica o grau de
separao entre
duas substncias
em uma mistura
R = ( K ) . ( 1 ) . ( N )
K + 1
4
Capacidade
37
Seletividade
Eficincia
38
Parmetros experimentais que
influenciam:
Resoluo, Eficincia e Seletividade
39
40
Equipamento HPLC
41
42

Processos Quimicos
43
44
Equipamento HPLC
Equipamento HPLC
45
shimadzu
Equipamento HPLC
47
46
48

Processos Quimicos
CROMATOGRAFIA
VARIAN
LQUIDA
A FASE MVEL
Agilent
IMPORTNCIA E PREPARAO
49
Merck
50
Waters
51
52
A Importncia da Fase Mvel
Varian
COLUNA
FASE
MVEL
53
AMOSTRA
54

Processos Quimicos
Caractersticas das FM CLAE:
A FASE MVEL
Ser de alto grau de pureza e fcil purificao
CARACTERSTICAS
Dissolver a amostra sem decompor os seus componentes

No decompor ou dissolver a fase estacionria
IMPORTNCIA
Ter baixa viscosidade
PREPARAO
Ser compatvel com o tipo de detector

Ter polaridade adequada para permitir a separao
55
56
A FASE MVEL:
A FASE MVEL:
Fonte de Problemas
Pureza 1
Cerca de 50%de todos os problemas

de anlise e com o equipamento tm
origem na fase mvel
Reagentes Inadequados = a coluna e
o equipamento so sempre culpados
Parte Orgnica:
Solventes devem ser grau de pureza HPLC
ou HPLC/UV
Grau tcnico, para sntese, resduos de
pesticidas, para anlise ou UV = no servem
57
58
A FASE MVEL:
A FASE MVEL:
Pureza 2
Tratamento 1
Parte Aquosa:
gua mono-destilada inadequada
gua usada deve ser grau HPLC = tipo Milli-Q
Aditivos:
Usar cidos, tampes e reagentes = purificados para
HPLC ou melhor grau p.a.
59
O correto preparar DIARIAMENTE a fase mvel!!

Quando medir a fase mvel medir os componentes
separadamente e depois misturar antes de filtrar. No
juntar um componente com outro, avolumando para o
volume final.
Exemplo: Metanol: gua 20:80 quer dizer 200mL de
metanol
misturados
com
800mL
de
gua
60
independentemente do volume final que resultar
10

Processos Quimicos
A FASE MVEL:
A FASE MVEL:
Tratamento 2
Tratamento 3
Ajuste de pH
Desgaseificao indispensvel
funcionamento do sistema:
Acertar o pH do tampo aquoso

antes de misturar com a parte orgnica
bom
Reprodutibilidade do fluxo ( bolhas na bomba; ar ocupa

volume da fase)
Filtrao da fase mvel:

Para evitar entupimento dos filtros
(2um) da coluna filtrar por membrana
de 0,45um ou 0,22um
para
Estabilidade da linha de base ( bolhas no detector)

Transparncia na faixa de baixa UV, o O2 absorve prximo de
215nm
61
62
A FASE MVEL:
A FASE MVEL:
Tratamento 4
Tratamento 5
Mtodos de Desgaseificao
Mtodos de Desgaseificao
1 - Ultra som: muito lento, pouco eficiente, requer agitao; em

geral o pior mtodo quando usado sozinho
3 Vcuo + Ultra som + agitao simultaneamente: muito

rapido (5 min totais), eficiente, refazer de 12 em 12 horas.
2 - Vcuo: Lento (mnimo de 20minutos o que pode alterar a

composio da fase mvel ) requer agitao.
4- Purga com He: continuo, Hlio caro, vazamentos aumentar o

custo operacional
63
A FASE MVEL:
Tratamento 6
A FASE ESTACIONRIA
O Reservatrio da Fase mvel

Vidro pirex para anlise de orgnicos
CARACTERSTICAS
Filtro em ao inox ou teflon com

porosidade de 10 ou 40 um
Limpeza: sonicar em cido ntrico :
gua (50:50)
Bomba
65
5 Degasser: Continuo, remove o ar logo antes de entrar na

bomba; investimento inicial, melhor opo a longo prazo. 64
COLUNAS DE FASE NORMAL E

FASE REVERSA
66
11

Processos Quimicos
Caractersticas das FE Colunas:
Caractersticas das FE Colunas:
Pedao de tubo de algum material inerte, de dimetro

interno uniforme e capaz de resistir as presses = ao inoxidvel
Dimetro interno das colunas ao redor de 3 a 5 mm
Capacidade da coluna determinada pelo seu comprimento,
dimetro e material de recheio.
Nos extremos da
coluna coloca-se um
disco de teflon ou
metal poroso para
evitar a perda do
recheio ou mudanas
na sua compactao.
Eficincia da ordem de 50.000 pratos tericos por metro de coluna

67
68
Caractersticas das
FE Colunas:
Cuidados com as Colunas:

Amostras muito sujas convm utilizar uma pr-coluna.
A pr-coluna uma coluna pequena com o mesmo recheio
ou similar da camada porosa usada na coluna.
Coloca-se entre o injetor e a coluna.
69
As pr-colunas com esta finalidade geralmente so de 2 - 5

cm de comprimento com o mesmo dimetro interno da
prpria coluna, para que apresentem as mesmas
70
caractersticas de separao.
Cuidados com as Colunas:
Cromatografia em fase normal:

A FE mais polar que a FM
Os solventes devem ter um alto grau de pureza para

evitar a contaminao da coluna.
A FE so adsorventes orgnicos (slica)
Um outro cuidado importante e que os solventes devem

ser filtrados, em filtros de 0.2 m, para retirar partculas
slidas, que podem riscar o pisto ou a vlvula injetora ou
mesmo entupir os tubos do sistema.
Quimicamente Ligada
71
Slica = slica OH
Amina = slica O- Si (CH2)3 NH2.
Ciano = slica O Si (CH2)3 CN
Diol = slica O Si (CH2)3 (CH2OH)2
72
12

Processos Quimicos
Solventes usados = mistura de solventes orgnicos

(HEXANO) sem a adio de gua ( Variao na reteno)
As molculas menos polares so eludas primeiro,
enquanto as molculas mais polares so retidas
(A FE mais polar que a FM)
Atualmente pouca utilizada
73
74
Cromatografia em Fase Reversa:

A FM mais polar que a FE
Mais utilizada = FM aquosas
FM mistura de gua ou tampo com solvente
orgnico
75
76

Slica gel de Fase Reversa
Mais Utilizada o Octadecilsiloxano ODS - C18
Reteno dependente da quantidade de carbono
+ apolar (C18 > C8 > Ciano) apolar
A FM mais polar que a FE
77
78
13

Processos Quimicos

Slica gel de Fase Reversa
Formao da ligao silcio-carbono pelo tratamento
com o grupo silanol com cloreto de tionila, para
produzir o cloreto que em seguida reage com um
composto organometlico para produzir um grupo
orgnico ligado a superfcie da slica
Si-OH + SOCl2
Si-Cl + RLi
Si-Cl + HCl + SO2

Si-R + LiCl
79
80
Trimetilsilano
Problema dos Silanois Livres (Si OH)

Desativao do Recheio com Trimetilsilano
Recheio No desativado = distoro do pico (cauda) devido
a formao de ligao de hidrognio com os compostos
Colunas com Capeamento (end capping) = reteno normal
e picos mais simetricos para os compostos
81
82
83
84
14

Processos Quimicos
Resumo Fase Normal e Reversa:
Aspecto
Fase normal
Fase Reversa
Apolar
Polaridade da FE
Polar
Polaridade da FM
Apolar
Polar
Ordem de Eluio
Menos polar 1
(apolar)
Mais polar 1
(polar)
85
Instrumentao HPLC
86
Instrumentao HPLC
Reservatrio da Fase Mvel :
Garrafa de solvente bem limpa, vidro ou plsticos inertes
Volume varia de 1 a 3 litros de capacidade
Captao = filtro, para remover partculas que possam
obstruir e estragar o sistema de bombeamento e a coluna
Este filtro deve ter a capacidade de reter partculas sem
produzir queda excessiva de presso
Remover os gases dissolvidos na fase mvel = Ultra-som
87
88
Reservatrio da
Fase Mvel :
Instrumentao HPLC
Reservatrio da Fase Mvel :
89
90
15

Processos Quimicos
Instrumentao HPLC
Instrumentao HPLC
Sistema de Bombeamento:
Sistema de Bombeamento:
Desenvolvimento do sistema de bombeamento adequado

foi o fator mais importante para o desenvolvimento da
CLAE.
A bomba tem que proporcionar uma vazo razovel
atravs da coluna, para que a anlise no seja lenta, e uma
vazo constante, para no atrapalhar o sistema de
deteco.
91
Os aspectos mais importantes so:

a) Presso mxima de operao na faixa de 5000 psi.
b) Vazo contnua, sem pulsos
c) Intervalo de vazes entre 0.01 e 10 mL/min
d) Reprodutibilidade e constncia da vazo de 1 %.
e) Volume interno pequeno, para uso em eluio com
gradiente e reciclagem.
92
Instrumentao HPLC
Uma vlvula tpica (check-valve) consiste em uma esfera de

rubi aparada em base de safira, formando um selo.
Bombas Recprocas :
A presso dentro do reservatrio da bomba a responsvel

pela abertura e o fechamento do selo.
Escoam volumes constantes de forma no contnua, isto ,

pulsante.
Estes
movimentos
dependem da
localizao da
esfera
(na entrada ou
na sada da
vlvula).
Essas bombas operam mediante o movimento de um

pisto e atravs de um sistema de vlvulas que
alternadamente se abrem e fecham, onde se enche e
esvazia, de modo alternativo, uma pequena cmara.
Estas bombas apresentam um volume interno de
100-200L
93
Bombas Recprocas :
94
Instrumentao HPLC
Bombas Recprocas :
As principais vantagens deste tipo de bomba so:
Capacidade de alimentao contnua do sistema,
Facilidade na mudana da fase mvel
Trabalho com pequenos volumes.
Desvantagens deste tipo de bomba:
Vazo pulsante e no uniforme, isto pode causar perda
de eficincia na coluna e instabilidade no detector.
95
96
16

Processos Quimicos
Instrumentao HPLC
Instrumentao HPLC
Bombas Recprocas de Duplo Pisto :
Dois pistes so acionados por um mesmo eixo

excntrico, de forma que, quando um pisto succiona a fase
mvel, o outro expulsa o lquido para fora da bomba.
A vazo de ambos os pistes, j quase livre de pulsao,
encaminhada coluna por uma via comum.
Assim o sistema de duplo pisto tem todas as vantagens
da recproca de pisto simples, alm da vantagem adicional
da grande diminuio do problema de pulsao.
97
98
Instrumentao HPLC
Programadores de Fase mvel :
Dispositivo complexo que consiste em trocar a composio
da fase mvel conforme transcorre a anlise = Gradiente
A ) Programadores que efetuam a mistura em uma
cmara, depois o lquido passa para a bomba e coluna
B) Programadores de mistura em corrente que requerem
duas ou mais bombas = caros
99
100
Instrumentao HPLC
Instrumentao HPLC
Medidores e controlador de presso :
Vlvulas para Amostragem:
Permeabilidade da coluna
A presso dependente:
Viscosidade da fase mvel

Dimetro das partculas da FE
Comprimento da coluna
Importncia:
Indicar problemas com o sistema (entupimento ou vazamento)
Sistemas podem ser equipados com alarmes de desligamento
automtico da bomba para presses mximas e mnimas101
Amostra, introduzida na vlvula mediante seringa, deve

encher o espao interno da poro do tubo capilar de ao, a
ala de amostragem (carga).
Normalmente o volume contido na ala de 1 a 100 L.
Amostra injetada na coluna, ao girar a vlvula para que a
posio de entrada e sada mude (injeo na coluna).
102
17

Processos Quimicos
Instrumentao HPLC
Instrumentao HPLC

Desta forma pode-se injetar-se na
coluna pressurizada um intervalo amplo

de volumes de amostra, dependendo da
ala de amostragem utilizado, com um
alto grau de reprodutibilidade.
103
As vlvulas para amostragem so

fabricadas somente de material inerte,
como teflon e ao inoxidvel, e seu
desenho tal que resistem a presses
muito elevadas.
104
Detectores usados em CLAE:
Instrumentao HPLC
Um detector ideal para a CLAE seria aquele com as

seguintes caractersticas:
a)Alta sensibilidade e baixo limite de deteco
Funo destes
equipamentos a
deteco dos
componentes
vindos do eluente
da coluna
b) Resposta rpida a todos os solutos

c) Insensibilidade a mudanas nas temperatura e na vazo da fase
mvel.
d) Resposta independente da fase mvel
e) Resposta que aumente linearmente com a quantidade do soluto
f) No destruio do soluto.
g) Segurana e convenincia de uso.
105
h) Informao qualitativa do pico desejado.
106
Instrumentao HPLC - Detectores
Absorbncia no ultravioleta e no Visvel :
Absorbncia no ultravioleta e no Visvel :
Funcionamento baseia-se na
absorbncia de luz por parte da
amostra ao passar atravs dela
radiao eletromagntica;
Em timas condies, pode-se
atingir sensibilidades de at 0,001
unidades de absorbncia e, se o
composto absorve intensamente
na faixa de UV, possvel detectar
quantidades de amostras da
ordem de nanogramas (10-9 g).
107
108
18

Processos Quimicos
109
110
DETECTOR DE ARRANJO DE FOTODIODO
111
112

ndice de Refrao :
Acompanha continuamente a diferena de ndice de refrao entre
a fase mvel pura e o efluente que sai da coluna contendo os
componentes da amostra.
A resposta deste detector universal e sua sensibilidade
moderada,geralmente da ordem de micrograma (10-6 g).
Para observar esta diferena necessrio um controle de
temperatura de aproximadamente 0,001 oC, o que normalmente
conseguido por circulao de gua, de uma boa fonte termostatizada,
ou um bom controle da temperatura ambiente.
113
114
19

Processos Quimicos

Fluorescncia :
Mtodo de deteco dos
115

Eletroqumico :
mais sensveis da atualidade,

especfico para compostos que
fluorescem;
Em boas condies possvel
detectar quantidades da ordem
de picogramas (10-12 g);
Monocromador primrio deixa
passar somente o excitante, o
secundrio deixa passar o
emitido pela amostra.
116
Instrumentao HPLC
Vantagens de alta
seletividade, alta sensibilidade
e serem muito bons para as
anlises de traos.
importante destacar que,
neste tipo de deteco, a
amostra tem que ser constituda
de ons ou compostos que
sofram ou oxidao ou reduo
117
118
119
120
20

Processos Quimicos
121
122
Volume Morto
123
Cromatografia Lquida
COLUNA
200mm x 4,6 mm . 3m
300mm x 4,0 mm . 5m
250mm x 4,0 mm . 5m
150mm x 3,9 mm . 3m
100mm x 4,6 mm . 5m
50mm x 4,0 mm . 3,5m
250mm x 4,6 mm . 3m
300mm x 4,0 mm . 5m
100mm x 3,9 mm . 4m
125mm x 4,0 mm . 10m
FLUXO
1,5mL/Min
1,0mL/Min
0,5mL/Min
1,2mL/Min
1,5mL/Min
2,0mL/Min
1,5mL/Min
0,8mL/Min
1,0mL/Min
2,0mL/Min
124
Calcule as resolues do cromatograma, onde estamos

utilizando uma coluna de 250mm x 4,6mm com 5500 de
pratos tericos e um fluxo de 1,0 mL/Min ?
Calcule a resoluo
do pico 2 do
cromatograma
abaixo, onde
estamos utilizando
uma coluna de
200mm x 4,6 mm
com 7500 de pratos
tericos e um fluxo
de 1,5 mL/Min ?
21

HPLC - Eduardo - AI Colorido PDF

Încărcat de

Informații document

Descriere originală:

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

HPLC - Eduardo - AI Colorido PDF

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

SENAI - Curso de Tecnologia em

Faculdade de Tecnologia SENAI Roberto Mange

EDUARDO SANTOS LOUZADA

Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE HPLC

Inicialmente feita em coluna de vidro com

Vazes muito baixas de

Princpios de CLAE HPLC

Cientistas perceberam que a eficincia da coluna

1960 foi desenvolvida a tecnologia para produo

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

SENAI - Curso de Tecnologia em

Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE - HPLC

Essa Tecnologia exigiu equipamentos sofisticados

ltimos 12 anos = desenvolvimento de vrios detectores

Surgiu o nome HPLC High Performance Liquid

Houve um aumento na utilizao dos detectores por

Princpios de CLAE HPLC

Princpios de CLAE HPLC

Conhecer suas vantagens, limitaes,

Vrios nomes tm sido utilizados para denominar

Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE - HPLC

Instrumentos muito sofisticados = totalmente

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Atualmente CLAE ainda objeto de novos avanos que

SENAI - Curso de Tecnologia em

CROMATOGRAFIA LQUIDA CLSSICA

CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA

O slido empacotado dentro

A fase estacionria um slido de superfcie ativa,

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

ETAPA 4 : Deteco e Quantificao so realizadas por anlise

SENAI - Curso de Tecnologia em

Tcnicas da CLAE HPLC

Vantagens da CLAE HPLC

Limitaes da CLAE HPLC

Menor tempo de anlise

Alto Custo da instrumentao

Alta resoluo ( misturas complexas)

Alto custo de Operao

Falta de detector universal sensvel

Necessidade de Experincia no seu manuseio

Versatilidade ( Diferentes Amostra)

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

SENAI - Curso de Tecnologia em

Vo = Volume de solvente (mL) contido entre o injetor e o detector

= 3,14 ; R = Raio da coluna ( cm )

Comprimento da coluna (cm)

Reteno afetada/controlada por:

A capacidade do sistema qumico (Coluna e fase mvel )

Polaridade da fase mvel; isto pela % dos

Polaridade da fase estacionria

pH da fase mvel, quando se trata de compostos ionizados

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

SENAI - Curso de Tecnologia em

Fatores que influenciam N

Diferena no comprimento de percurso

A eficincia afetada /controlada por fatores fsicos como:

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

SENAI - Curso de Tecnologia em