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Rita Margarete Donato MACHADO1, Silvia Amelia Verdiani TFOUNI2*, Silvia Helena Pereira VITORINO1,
Eduardo VICENTE2, Maria Ceclia de Figueiredo TOLEDO1
Resumo
O objetivo do presente trabalho foi a determinao dos nveis de cido benzico e cido srbico em uma variedade de vinhos e sidras
brasileiros, de modo a comparar os valores com os mximos permitidos pela legislao. Um total de 49 amostras (sendo 35 vinhos tintos,
11 vinhos brancos e 3 sidras), disponveis comercialmente, foram analisadas por CLAE com detector de arranjo de diodos. Apesar do
uso de cido benzico em vinhos e sidras no ser permitido, esse conservador foi detectado em 3 amostras: 1 vinho e 2 sidras em nveis
de 295,6, 424,7e608,4 mg.L1, respectivamente. O cido srbico foi detectado em 49% das amostras analisadas com nveis variando de
91,0a309,5mg.L1. Considerando apenas as amostras nas quais o cido srbico foi detectado, o valor mdio encontrado foi de 171,2 mg.L1.
Em seis amostras de vinho tinto os nveis de cido srbico estavam acima do permitido pela legislao brasileira. Os resultados encontrados
no presente trabalho mostram que em algumas amostras, os nveis dos cidos benzico e srbico nos vinhos e sidras analisados, assim
como a rotulagem desses produtos no esto de acordo com a legislao vigente no Brasil.
Palavras-chave: cido benzico; cido srbico; vinho; CLAE.
Abstract
This study determined benzoic and sorbic acid contents in Brazilian wines and ciders in order to verify whether these preservatives are used
in accordance with Brazilian regulations. Forty-nine samples of commercially available wines (35 red wines, 11 white wines and 3 ciders)
were analyzed by HPLC coupled to a photodiode array detector. Although the use of benzoic acid in wines and ciders is not permitted, this
preservative was detected in three samples, one wine and two ciders, which contained benzoic acid levels of 295.6, 424.7 and 608.4 mg.L1,
respectively. Sorbic acid was detected in 49% of the analyzed samples, with levels ranging from 91.0 to 309.5 mg.L1. Considering only the
samples containing sorbic acid, the mean content detected was 171.2 mg.L1. Six red wine samples presented sorbic acid content above the
maximum level allowed by Brazilian regulations. The results showed that, in some cases, the content of benzoic and sorbic acids in wines
and ciders, as well as their labels, do not meet current national regulations.
Keywords: benzoic acid; sorbic acid; wine; HPLC.
1 Introduo
A preservao de alimentos sempre foi de grande importncia na vida do homem. Atualmente os conservadores qumicos so amplamente utilizados na conservao de alimentos,
estando entre os mais utilizados os cidos benzico e srbico
e seus sais de sdio, clcio e potssio. Eles so normalmente
utilizados para inibir o crescimento de fungos e leveduras,
sendo tambm eficientes contra uma ampla gama de bactrias.
Esses compostos so mais eficazes em alimentos de baixo
pH e praticamente no apresentam ao em alimentos de pH
neutro9,10,11,15.
No Brasil, a legislao vigente permite o uso de cido
srbico como conservador em vinhos e sidras em um limite
mximo de 200 mg.L1 e 500 mg.L1, respectivamente. A adio
de cido benzico no permitida nesses produtos1.
Em diferentes pases o uso de aditivos alimentares
limitado atravs de regulamentos especficos que so estabelecidos com base na sua segurana de uso e na sua necessi-
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Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi determinar, por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) com
detector de arranjo de diodos, os nveis dos cidos benzico
e srbico em uma variedade de vinhos e sidras brasileiros de
modo a comparar os nveis encontrados com aqueles estabelecidos pela legislao nacional em vigor.
2 Material e mtodos
2.1 Padres e reagentes
Na realizao das anlises foram utilizados acetonitrila
grau cromatogrfico da J. T Baker, outros reagentes da Merck
(grau P. A.) e padres analticos de cido benzico e cido
srbico da Sigma Chemical Co. Os padres foram diludos
em gua. A gua utilizada foi obtida atravs de um sistema de
purificao Milli-Q (Millipore).
2.2 Amostras
Diferentes marcas de vinhos e sidras produzidas no Brasil
foram adquiridas em supermercados da cidade de Campinas,
SP, nos anos de 2004 e 2005. As 49 amostras coletadas e
analisadas em duplicata foram divididas da seguinte maneira:
35 amostras de vinho tinto, 11 amostras de vinho branco e
3amostras de sidra.
2.4 CLAE
Na determinao analtica dos cidos benzico e srbico
por cromatografia lquida de alta eficincia foi utilizado um
sistema cromatogrfico Waters composto de bomba quaternria 600, degaseificador em linha, injetor automtico 717 e
detector de arranjo de diodos 996. Os dados foram adquiridos
e processados atravs do software Milenium 32. Para a separao dos compostos foi utilizada uma coluna C18 (Nova-Pak,
30cmx3,9mm di, partculas de 4m) e fase mvel a uma
vazo de 1mL/min composta por 81% de gua, 17% de acetonitrila e 2% de acetato de amnio 0,005M com pH 4,2 ajustado
com cido actico glacial. O volume de injeo foi de 20 L. A
deteco dos cidos benzico e srbico foi feita nos comprimentos de onda de mxima absoro dos compostos, 228 e 260 nm,
respectivamente. Os picos dos compostos nas amostras foram
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2.5 Quantificao
2.6 Recuperao
Os testes de recuperao foram feitos adicionando-se quantidades conhecidas dos cidos benzico e srbico em amostras
de vinho tinto, em trs diferentes concentraes variando de
0,2 a 0,8 mg.mL1 (cido benzico) e 0,05 a 0,2 mg.mL1 (cido
srbico). As anlises das amostras fortificadas, assim como dos
controles foram feitas em duplicata. As recuperaes foram
calculadas pela diferena entre a concentrao dos compostos
nas amostras fortificadas e no-fortificadas.
A repetibilidade do mtodo foi avaliada atravs do coeficiente de variao associado s medidas de cada conservador
durante os testes de recuperao.
3 Resultados e discusso
Os limites de deteco para os cidos benzico e srbico
esto apresentados na Tabela 1. Amostras fortificadas, em
3diferentes concentraes, apresentaram recuperaes mdias
para cada conservador maiores que 99%. Os resultados obtidos
atravs dos testes de recuperao e seus respectivos coeficientes
de variao esto listados na Tabela 1. Os resultados obtidos
esto condizentes com a literatura, que sugere para estudos
de recuperao CV inferior a 15% para anlise de compostos
em nveis de mg.L1 7.
Tabela 1. Limite de deteco, recuperao mdia (R) e coeficiente de
variao (CV) dos cidos benzico e srbico em amostras fortificadas
de vinho tinto.
Conservador
cido benzico
cido srbico
R (%)a
101,2
99,3
CV (%)
2,6
5,0
Machado et al.
0,10
0,08
AB
AU 0,06
0,04
0,02
0,00
2,00
4,00
6,00
Minutos
8,00
10,00
AS
0,10
350
300
250
200
150
100
50
0
10
20
30
Amostras
40
50
60
AB
0,14
0,12
AS
0,08
AU
0,06
0,04
0,02
0,00
2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 14,00 16,00
Minutos
Figura 2. Cromatograma por CLAE referente a uma amostra de sidra.
Coluna C18; fase mvel gua-acetonitrila-acetato de amnio 0,005M
com pH 4,2 ajustado com cido actico glacial (81:17:2, v/v/v); vazo:
1 mL/min; volume injetado: 20 L. Deteco a 260 nm. AB: cido
benzico, AS: cido srbico.
*Desvio padro.
n1
n2
cido srbico
Faixa (mg.L )* Mdia (mg.L1)*
Vinho tinto
35 15 122,1-309,5
188,1
Vinho branco 11 7
91,0-192,7
141,7
Sidras
3
2
159,9-173,8
166,9
1
CV (%)
30,0
27,0
5,9
n1 nmero de amostras analisadas; n2 nmero de amostras onde o cido srbico foi detectado;
e *Valores de mdia e faixa se referem a amostras onde o cido srbico foi detectado.
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4 Concluses
Os resultados encontrados no presente trabalho indicam
que, em algumas amostras, os nveis dos cidos benzico e
srbico nos vinhos e sidras analisados, assim como a rotulagem desses produtos, no esto de acordo com a legislao
vigente no Brasil.
Uma certa preocupao relacionada ao uso indiscriminado de benzoatos e sorbatos em vinhos e sidras foi levantada.
Apesar de ser estabelecido que ingestes acima da IDA no
apresentam, necessariamente, um risco sade humana16 e
que as ingestes potenciais dirias desses conservadores esto
significativamente abaixo das IDAs18, o consumo dessas bebidas, no caso de grandes consumidores, pode representar uma
importante fonte na ingesto desses conservadores.
Dessa forma, os produtores devem reavaliar o uso de benzoatos e sorbatos em vinhos e sidras de forma a evitar excessos
e garantir a segurana dos consumidores e o cumprimento da
legislao nacional em vigor.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer ao CNPq pelo apoio
ao projeto.
Referncias bibliogrficas
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