FACULTAD DE QUMICA

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA

CURSO DE BIOQUMICA CLNICA

(CLAVE 1807)
Licenciatura de QFB

Prof. Laura Carmona Salazar

Semestre: 13-II
Este material es exclusivamente para uso educativo y no de lucro

ENZIMOLOGA CLNICA

ENZIMOLOGA CLNICA
Los enzimas como catalizadores biolgicos
Determinacin de la actividad enzimtica
Los enzimas como marcadores de lesin
tisular
Enzimas sricas de importancia en el
diagnstico clnico

ESTRUCTURA Y NATURALEZA DE LOS ENZIMAS

EL ARREGLO DE UNA PROTENA PARTICULAR ES EL

RESULTADO DE
SU SECUENCIA NICA Y ESPECFICA DE AMINOCIDOS
Y ES INDISPENSABLE PARA SU FUNCIONALIDAD

Ha y Loh, 2012
Chemistry 18 (26):7984

LA ACTIVIDAD CATALTICA DEPENDE

DE LA INTEGRIDAD DE SU CONFORMACIN
PROTEICA NATIVA
ADEMS PUEDEN REQUERIR DE OTROS COMPONENTES
QUMICOS ADICIONALES

COENZIMAS FUNDAMENTALES PARA LA ACTIVIDAD

CATALTICA DE VARIOS ENZIMAS
VITAMINA

COENZIMA

REACCIN EN LA QUE EST

INVOLUCRADA

Tiamina (vitamina B1)

Tiamina pirofosfato

Activacin y transferencia de aldehdos

Riboflavina (vitamina B2)

Flavin mononucletido o
FMN; flavin adenin
dinucletido o FAD+,

Oxidacin-reduccin

Niacina

Nicotin amida adenin

dinucletido o NAD+; Nicotin
amida adenin dinucletido
fosfato o NADP+

Oxidacin-reduccin

cido pantotnico

Coenzima A

Activacin y transferencia de grupos acilo

Piridoxina

Fosfato de piridoxal

Reacciones que involucran la activacin de

aminocidos

Biotina

Biotina

Activacin y transferencia de CO2

cido lipoico

Lipoamida

Activacin del grupo acilo:oxidacinreduccin

cido flico

Tetrahidrofolato

Activacin y transferencia de grupos

funcionales de un slo carbono

Vitamina B12

Adenosil cobalamina; metil

cobalamina

Isomerizaciones y transferencia de grupos

metilo

CLASIFICACIN DE LOS ENZIMAS ACORDE A LA

REACCIN QUE CATALIZAN
1) Oxidoreductasas.- Reacciones redox que involucran
transferencia de electrones
2) Transferasas.- Reacciones de transferencia de grupos
funcionales
3) Hidrolasas.- Reacciones de hidrlisis
4) Liasas.- Crean dobles enlaces
5) Isomerasas.- Reacciones de isomerizacin
6) Ligasas.- Formacin de puentes con rompimiento de ATP

LOS ENZIMAS CATALIZAN REACCIONES DE MANERA

EFICAZ Y ALTAMENTE ESPECFICA

COMPLEJA ESTRUCTURACIN PROTEICA

INTERACCIN PRECISA DEL ENZIMA-SUSTRATO

ESPECIFICIDAD

QU HACEN LOS ENZIMAS?

LOS ENZIMAS FACILITAN LA FORMACIN DEL ESTADO DE TRANSICIN

Energa libre

(Proporcionando una superficie complementaria a su estereoqumica, polaridad

o carga)
Estado de transicin S

Estado
basal

Energa
libre

Estado
basal
Coordenada de reaccin
(cambios qumicos)

REACCIN QUMICA
EL EQUILIBRIO DEPENDE DEL G

P
Y LA VELOCIDAD DE LA ENERGA LIBRE
DE ACTIVACIN

EN UNA REACCIN CATALIZADA POR UN ENZIMA,

STA MODIFICA LA VELOCIDAD

CINTICA ENZIMTICA.- Disciplina que se encarga de

estudiar el mecanismo de una reaccin catalizada
enzimticamente.

OBJETIVO.- Determinar la velocidad de la reaccin y

evaluar como se ve modificada sta en
respuesta a cambios en los parmetros
experimentales
VELOCIDAD= Cantidad de sustrato desaparecido o
producto formado por la enzima por unidad de tiempo
Por tanto sus unidades son
cantidad de compuesto sobre unidad de tiempo:
moles
moles
nmoles
gramos
miligramos
gramos

hora
minuto
segundo

E+S

ESTADO
PRE-ESTACIONARIO

ES

E+P

VELOCIDAD DE LA REACCIN

Concentracin del sustrato

QU ES ACTIVIDAD Y CANTIDAD DE UN
ENZIMA?

ACTIVIDAD: Cantidad transformada por

unidad de tiempo
(moles/s)
ACTIVIDAD ESPECFICA: Actividad
enzimtica por cantidad de enzima
(moles/s/mg de protena)
CANTIDAD: Se refiere a la concentracin
del enzima (mg, mg/mL, actividad
enzimtica/mL)

CMO SE DETERMINA LA
CANTIDAD DE ENZIMA EN UNA
MUESTRA?

METODOLOGA UTILIZADA PARA LA DETERMINACIN DE

ENZIMAS EN MUESTRAS BIOLGICAS

MTODOS INMUNOLGICOS.- Que

determinan la cantidad de enzima

MTODOS
ESPECTROFOTOMTRICOS.- Que
establecen la actividad cataltica de las
enzimas

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin se puede expresar
como cantidad de sustrato consumido
o como cantidad de producto formado

Lo cual puede monitorearse espectrofotomtricamente a travs de determinar

los cambios en la absorcin ptica de la solucin que contiene los
sustratos y el enzima

1 UNIDAD DE ACTIVIDAD ENZIMTICA

Cantidad de enzima que puede transformar 1 mol de sustrato por minuto

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA EN

UNA MUESTRA BIOLGICA

PROCEDIMIENTOPARA LA DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA DE LA MUESTRA BIOLGICA

1.
2.
3.
4.

CMO CONVIERTO LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
OBTENIDA EN UI?

Para obtener el valor definitivo de actividad

enzimtica aplicamos la siguiente frmula:

Donde:
= coeficiente de extincin molar
b = es el espesor de la cubeta
VF = es el volumen total de reaccin
VI = es el volumen de muestra en el ensayo
Los parmetros:

son constantes por tanto podemos la frmula anterior

queda como:

UI/L=?A/min cte

CONSIDERACIONES IMPORTANTES EN LOS ENSAYOS DE

ACTIVIDAD ENZIMTICA
 No utilizar muestras congeladas y descongeladas
varias veces.

Separar lo antes posible el cogulo del suero

Evitar trabajar con muestras hemolizadas

Evitar estasis venosa durante la extraccin

Evitar el envejecimiento de las muestras

El transporte de las muestras debe realizarse en fro sin

congelar, salvo que se vaya a prolongar mucho tiempo.

CONSIDERACIONES IMPORTANTES EN LOS ENSAYOS DE

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Variables que afectan al anlisis clnico. EDTA y hemlisis
EDTA:
Su efecto anticoagulante se basa en su capacidad para quelar iones
divalentes como calcio o magnesio. No es posible determinar la
actividad de enzimas que requieran estos iones.

MUESTRAS HEMOLTICAS:
La ruptura de los eritrocitos hace que su contenido pase al plasma.
Las muestras presentan una coloracin roja intensa muy caracterstica
debida a la presencia de hemoglobina.
La hemlisis puede ser causada por una patologa o, en la
mayor parte de los casos, un procesamiento
indebido de la muestra.

CARACTERSTICAS DE LOS ENZIMAS UTILIZADOS

COMO MARCADORES EN LA CLNICA

LOS ENZIMAS SE UTILIZAN COMO MARCADORES

DE LESIN TISULAR

SIGNIFICADO CLNICO DEL PATRN

ISOENZIMTICO DE ALGUNOS ENZIMAS

DETERMINACIN DEL PATRN ISOENZIMTICO DE

LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)

DISTRIBUCIN TISULAR DE LAS ISOFORMAS DE LDH

PATRN ISOENZIMTICO DE LDH EN DIFERENTES PATOLOGAS

QU PUEDE PROMOVER CAMBIOS EN

LAS CONCENTRACIONES DE LOS
ENZIMAS?

LOS ENZIMAS PUEDEN SER INDICADORES DE UNA

LESIN CELULAR Y TISULAR

IMPORTANCIA DEL ESTUDIO ENZIMTICO

ENZIMAS UTILIZADOS EN EL DIAGNSTICO CLNICO

- Alanina aminotransferasa (ALT)

- Aspartato aminotransferasa (AST)
- Creatina kinasa (CK)
- Fosfatasa alcalina (AP, ALP, SAP)
- g-glutamil transpeptidasa (GGT)
- Amilasas
-Lipasas

DISTRIBUCIN TISULAR DE LAS TRANSAMINASAS

ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT)

Tambin llamada GPT (Transaminasa glutmico-pirvica)
Funcin: cataliza la transferencia de alanina al cido acetoglutrato, formando piruvato y cido glutmico)
Localizacin: citoplasma
Valores normales: < 50 U/ml
Aumento importante: Shock, hepatitis
Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis,
ictericia,

ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST)

Tambin conocida como GOT (Transaminasa
glutmico-oxalactico)
-Funcin: cataliza la transferencia del grupo a-amino del cido
asprtico al cido a-cetoglutrico, formando oxaloacetato y
glutmico)
Localizacin: citoplasma y mitocondria
Valores normales: < 40U/ml
Aumento importante: Infarto del miocardio, hepatitis, traumatismos
Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis, ictericia, hemlisis

DISTRIBUCIN TISULAR DE LA CREATINA CINASA

CREATINA CINASA (CK CPK)

Funcin: importante para la contraccin muscular. Transfiere el
fosfato de la fosfocreatina al ADP, formando ATP
Localizacin: citoplasma y mitocondria de miocitos
Isoenzimas:
CK-1: isoenzima BB, cerebro
CK-2: isoenzima MB, msculo cardaco y esqueltico
CK-3: isoenzima MM, msculo esqueltico y cardaco
CK-Mt: membranas mitocondriales. Msculo cardaco
Valores normales: < 160U/ml en varones
y <130U/ml en mujeres
Aumento
importante:
Infarto
de
miocardio CK-MB
Aumento moderado: miopatas, distrofia
muscular, accidente cerebro-vascular

DISTRIBUCIN TISULAR DE LA FOSFATASA ALCALINA

FOSFATASA ALCALINA (AP, ALP, SAP)

Funcin: metaloenzima que cataliza la hidrlisis de
diferentes steres de fosfato. Requiere pH alcalino y
cofactores (iones zinc y magnesio)
Localizacin: asociada a membrana
Valores normales: 85-190U/ml en el adulto. Hasta 500U/ml en nios en
desarrollo
Aumento importante: ictericia obstructiva, colelitiasis, neoplasia de
vas biliares, cirrosis, hepatomas
Aumento moderado: neoplasias seas osteognicas, osteomalacia,
enf. Paget, hiperparatiroidismo

G-GLUTAMIL TRANSPEPTIDASA (GGT)

Funcin: Cataliza la transferencia de grupos glutamil

C-terminales de unos pptidos a otros o a
aminocidos. Es importante en el metabolismo del
glutatin, la absorcin de aminocidos y en la antioxidacin
Localizacin: membrana y citoplasma (5%)

Valores normales: < 35U/ml en varones y <25U/ml en mujeres

Aumento importante: Hepatitis vrica, obstruccin biliar, metstasis
hepticas, enf. alcohlica
Aumento moderado: infecciones que afectan al hgado
(citomegalovirus, mononucleosis infecciosa)

AMILASAS (
-AMILASA)
Funcin: hidroliza carbohidratos complejos para formar
maltosa y glucosa
Localizacin: Se produce en pncreas, hgado e intestino
delgado. Se filtra y reabsorbe a travs del rin
Valores normales: <50U/ml
Aumento importante: pancreatitis aguda y crnica,
cncer de pncreas.
Aumento moderado: parotiditis, algunos carcinomas,
procesos parapancreticos (gastritis, lcera duodenal,
peritonitis, obstruccin intestinal.

LIPASAS
Funcin: hidroliza triglicridos
Localizacin: Se sintetiza en el pncreas y en la mucosa
gstrica. Se elimina a travs del rin
Causas del incremento de lipasa:
Pancreatitis
Gastrointestinales
Renales

DISTRIBUCIN TISULAR DE LA FOSFATASA CIDA

DISTRIBUCIN TISULAR DE LA LACTATO

DESHIDROGENASA

Las enzimas son indispensables en

DIAGNSTICO CLNICO porque la alteracin
de la actividad enzimtica puede estar
asociada a un estado patolgico