Colegio Merryland

Coordinacin Acadmica
Profesora Andrea Gaete Gutirrez
Gua de Biologa
Nivel: 4 Medio electivo
Objetivos: Conocer y entender los mecanismos generales de interaccin de la clula con el medio y sus adaptaciones para su
funcionamiento integrado en el organismo
Unidad: Integracin clula-organismo / Aplicacin de biologa celular
Objetivo especfico: Investigar sobre el uso de cultivo de clulas en investigacin, medicina y otras aplicaciones
biotecnolgicas.
Estudiar el procedimiento para producir anticuerpos monoclonales e indagar sobre sus aplicaciones en salud e
investigacin.
Objetivo Trasversal: Razona frente a hechos, situaciones, opiniones. Induce conceptos o constantes de variadas
informaciones
CULTIVO CELULAR Y SUS APLICACIONES.
Los cultivos celulares corresponden a tcnicas a travs de las cuales clulas procariontes o eucariontes crecen en
condiciones de laboratorio controladas.
Para obtener un cultivo celular se realizan los siguientes pasos:
1. Obtener y aislar las clulas desde algn tejido.
2. Traspasar estas clulas a un medio de cultivo que es la fuente de nutrientes y el sustrato donde las clulas van a crecer.
3. Mantener el cultivo bajo condiciones fisico-qumicas (temperatura, concentracin de COr, pH, etc.) adecuadas para el tipo
celular que se est cultivando. Adems, el medio de cultivo debe ser peridicamente remplazado por un medio fresco, para
asegurar la eliminacin de los desechos celulares y el suministro adecuado de nutrientes.
Generalmente las clulas presentan un tiempo de vida limitado, incluso en condiciones de cultivo donde la disponibilidad de
nutrientes y otras condiciones ambientales son estrictamente controladas. Al cabo de unas pocas generaciones de divisin
celular, las clulas en cultivo envejecen terminando prontamente su capacidad proliferativa. No obstante, existen algunos
tipos celulares que se caracterizan por su larga vida en medios de cultivo. Ms an. los cientficos han detectado varias lneas
celulares tumorales que presentan una capacidad indefinida de crecimiento en medios de cultivo, por lo que tambin son
llamadas inmortales. Estas lneas celulares pueden crecer incluso cuando han sido objeto de manipulacin de su expresin
gnica o de mutaciones diriqidas De esta manera, las lneas celulares inmortales constituyen un excelente material para
estudiar diferentes aspectos de la biologa celular. Hoy en da se cuenta con numerosas lneas celulares inmortalizadas que
representan muchos tipos celulares.
Los cultivos celulares animales son fundamentales para el desarrollo de vacunas virales y muchos otros productos
biotecnolgicos. En conjunto con tcnicas de ingeniera gentica pueden ser usados para producir enzimas, anticuerpos,
factores de crecimiento, agentes anticancergenos, etc. Muchas protenas pueden ser sintetizadas incorporando el gen
respectivo en un cultivo de clulas bacterianas. No obstante, en eucariontes, las protenas no estn constituidas solamente
por una larga secuencia de aminocidos, sino que adems contienen complejos moleculares unidos a ellas, frecuentemente
carbohidratos. En consecuencia, dichas protenas que son modificadas despus del proceso de traduccin no pueden ser
producidas por bacterias y solamente los cultivos de clulas animales son tiles en esos casos.
Tambin es posible incorporar ADN dentro de las clulas de un cultivo, con el objeto de que estas sinteticen una protena en
particular, lo que se conoce como transfeccin. La transfeccin se realiza facilitando la entrada de los fragmentos de ADN
forneo en las clulas en cultivo, usando para eso diferentes tcnicas como la electroporacin, que consiste en la formacin
de poros en la superficie celular por estimulacin elctrica o la biobalstica que es el disparo de microproyectiles recubiertos
con ADN dentro de la clula. Otra forma de incorporar el ADN forneo a las clulas del cultivo es a travs de virus. lo oue se
conoce como transfeccin viral.
Las clulas cultivadas en laboratorio tambin pueden utilizarse para generar hibridomas, es decir, clulas hbridas resultantes
de la fusin de dos tipos celulares diferentes. La fusin se estimula experimentalmente a travs de compuestos que
aumentan la permeabilidad de las membranas plasmticas. Por ejemplo, puede realizarse la fusin de una clula normal, que
posee una baja capacidad de crecimiento en cultivo, con clulas de una lnea inmortal. Esto permite obtener clulas en cultivo
que expresan uno o varios genes que normalmente no hace la lnea celular inmortal. Los hibridomas son tambin muy tiles
en la generacin de anticuerpos monoclonales.

ANTICUERPOS MONOCLONALES
Mientras ciertas protenas se distribuyen de manera bastante generalizada en todos los tejidos y en varias
estructuras celulares, otras son altamente especficas en su ubicacin, hacindolo solamente en un tipo de tejido o
en un tipo celular e incluso algunas protenas se localizan solo en un organelo dentro de Ia clula.
Identificar la ubicacin de las protenas permite muchas veces realizar inferencias respecto de su funcin y de sus
caractersticas biolgicas. De ah que los bilogos frecuentemente se preguntan acerca de la localizacin de una
protena dentro de los tejidos y dentro de las clulas.
Una tcnica usada ampliamente para localizar una protena corresponde a la inmunolocalizacin. Esta se basa en
la propiedad natural de los anticuerpos (innmunoglobulinas) de reconocer y de unirse de forma bastante especfica
a molculas exgenas (antgenos). As, frente a cada antgeno, el organismo produce un anticuerpo especfico que
reconoce y se acopla a dicha molcula facilitando su eliminacin por parte del sistema inmune. Los cientficos han
aprovechado esta caracterstica natural de los anticuerpos para desarrollar tcnicas de inmunolocalizacin; entre
ellas, la ms usada corresponde a la tcnica de localizacin por anticuerpos monoclonales.
La produccin de anticuerpos monoclonales consta de los siguientes pasos:
1. Inmunizacin. Se inyecta la protena de estudio a un animal de laboratorio (usualmente ratones o conejos). De
esta manera los linfocitos B del animal se activan y comienzan a dividirse y a generar clulas plasmticas capaces
de producir anticuerpos especficos contra la protena inyectada.
2. Produccin de hibridomas. Las clulas plasmticas son fusionadas con clulas tumorales de mieloma -un tipo de
cncer-, Ias que se caracterizan por su capacidad de multiplicarse rpidamente en ciertos medios de cultivo.
Entonces, las clulas hbridas o hibridomas resultantes de la fusin de ambos tipos celulares (clulas plasmticas
con clulas de mieloma) tienen la capacidad de producir los anticuerpos requeridos y de multiplicarse rpidamente.
3. Seleccin de clulas hbridas. Los hibridomas son cultivados en un medio especial denominado HAT. En este
medio, solo las clulas hbridas pueden sobrevivir, por lo tanto. se eliminan las clulas tumorales y las clulas
plasmticas no fusionadas.
4. identificacin de clulas productoras de anticuerpos.
Todas las clulas sobrevivientes en el medio de cultivo HAT son hbridas, pero solo una pequea porcin de ellas
produce el anticuerpo contra la protena en estudio. Para detectar las clulas productoras del anticuerpo de inters
se utilizan pruebas bioqumicas. Una vez identificadas, estas clulas se aslan y se mantienen en condiciones de
cultivo que les permitan dividirse y generar clones de hibridomas que producen todos el mismo anticuerpo
(anticuerpos monoclonales).
Solo despus del procedimiento anterior es posible usar los hibridomas como "fbricas" de anticuerpos contra la
protena en estudio. As, los anticuerpos pueden ser aislados y marcados con una sustancia fluorescente. Al aplicar
estos anticuerpos marcados a muestras de clulas o tejidos, es posible detectar la presencia de la protena a
travs del color con el que el anticuerpo fue marcado. Los anticuerpos se marcan generalmente con molculas
fluorescentes, las que pueden visualizarse en microscopios de fluorescencia.
La especificidad de los anticuerpos es una herramienta muy til en la investigacin de la funcin de protenas
particulares. La marcacin de anticuerpos con molculas fluorescentes o con oro coloidal permite la localizacin de
protenas en la clula mediante microscopa de fluorescencia o electrnica, respectivamente. Tambin son
utilizados para detectar protenas en experimentos bioqumicos mediante inmunoprecipitacin o inmunoblot.
Acoplados a una matriz, pueden ser utilizados para aislar protenas desde un extracto celular. Si el antgeno se
encuentra en la superficie celular se pueden utilizar anticuerpos para aislar clulas que poseen un determinado
antgeno mediante la captura de las clulas que tienen unido un anticuerpo.
Los anticuerpos contra protenas en estudio se producen generalmente inyectando conejos varias veces con la
protena purificada. El anti-suero que se obtiene contiene una mezcla heterognea de anticuerpos,
cada uno producido por un clon de clulas secretoras de anticuerpos (linfocitos B). Estos anticuerpos reconocen
varios sitios antignicos (eptopos) en la molcula de inters, pero tambin pueden reconocer las impurezas
presentes en la preparacin de la protena que se inyect. Este problema muchas veces entorpece los ensayos por
un efecto de trasfondo que no es deseado en los experimentos.
En 1976 se solucion el problema de la heterogeneidad al desarrollarse una tcnica que ha revolucionado el uso
de anticuerpos como herramientas en biologa celular y abri nuevas posibilidades de uso en el diagnstico y
tratamiento de enfermedades.
El principio del procedimiento es propagar un clon de clulas productoras de anticuerpos de manera que se pueda
obtener un anticuerpo homogneo en grandes cantidades. El problema prctico es que los linfocitos B slo viven

un tiempo limitado en cultivo. Para solucionar el problema se logr fusionar linfocitos B productores de anticuerpos
con clulas inmortales derivadas de un tumor de clulas B y luego seleccionar las clulas hbridas que tienen la
doble capacidad de producir un anticuerpo especfico contra una molcula de inters y crecer indefinidamente en
cultivo. Estos llamados hibridomas se propagan como clones individuales, cada uno de los cuales provee una
fuente

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