Faculdade de Medicina de Lisboa

Curso de Mestrado Integrado em Medicina Ano lectivo de 2012/2013

MDULO I.I: BIOLOGIA MOLECULAR, CELULAR E DO DESENVOLVIMENTO

HUMANO E GENTICA, 1 SEMESTRE
EXAME DE 1 POCA
Nome:________________________________________________________
Docente:_______________________________

Turma Prtica:______

AVALIAO
Exame:
Contnua:
Final:

Este exame tem a durao de 2h, sendo constitudo por 18 perguntas. A cotao de cada pergunta
encontra-se indicada. As perguntas de escolha mltipla s sero cotadas se correctamente justificadas.
1 Considere uma protena humana constituda por 430 aminocidos.
a) (0,5 valor) Qual o tamanho do RNA mensageiro que codifica esta protena? Justifique.
Cada aminocido codificado por 3 nucletidos. A poro codificante do mRNA desta protena ter, por isso,
430 x 3 nt ou seja 1290 nucletidos.
Como o mRNA tambm possui sequncias no codificantes (5UTR e 3UTR), o RNAm ter de ter mais de
1290 nucletidos. (CAV)
b) (0,5 valor) Como explica que o gene que codifica esta protena tenha 27 mil nucletidos?
O gene que codifica a protena tem 27 mil nucletidos. Este nmero facilmente explicvel se considerarmos
que este gene inclui intres e que por norma os intres so de tamanho muito superior aos exes. Como o RNA
mensageiro j foi processado e, atravs do splicing, as sequncias correspondentes aos intres foram
removidas o mRNA vai assim apresentar um tamanho muito inferior ao do gene. (CMC)
2 - (1 valor) Comente a seguinte frase: No genoma humano existem aproximadamente 20 mil pseudogenes.
O genoma humano de facto composto por numerosos pseudogenes que so cpias de genes mas que no esto
activos, ou seja, no so transcritos e no originam RNA nem protenas devido acumulao de mutaes e/ou
no existncia de promotores.
Os pseudogenes no constituem uma desvantagem evolutiva, por serem no codificantes, pelo que se vo
acumulando ao longo das geraes nos genomas.
As origens dos pseudogenes podem ser:
- duplicao de um gene que deixa de ser expresso
- transcrio e processamento de um gene que por aco da transcriptase reversa volta a ser DNA (cDNA). Ao
ser realizada a transcrio reversa, o gene perde as sequncias que possibilitam a transcrio (enhancers e
promotor por exemplo), fazendo com que a maquinaria de transcrio no seja capaz de o transcrever
(pseudogene processado)
- genes que deixam de ser expressos devido a acumulao de mutaes
(Adaptado de MZ; CAV; FMRB; JMRB; DPS)
1

3 - (1 valor) Qual das seguintes frases falsa? Justifique.

a) Num organismo unicelular que se reproduz de forma assexuada, todas as mutaes so transmitidas
descendncia.
b) No organismo humano, apenas as mutaes herdadas dos progenitores so transmitidas
descendncia.
c) No organismo humano, podem co-existir mutaes herdadas dos progenitores e mutaes adquiridas ao
longo da vida de um indivduo.
d) As mutaes adquiridas ao longo da vida de um indivduo podem ocorrer tanto nas clulas somticas
como na linha germinal.
Esta afirmao falsa porque qualquer mutao que ocorra na linhagem germinativa, pode ser transmitida
descendncia. (Adaptado de VRS)
4 - (1 valor)
medicamentos.

Explique o que so SNPs e de que modo podem modificar a resposta individual a

SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) so alteraes ou variaes de 1 s nucletido, que esto

representadas em >1% da populao, o que as distingue de mutaes, normalmente ocorrem em regies de
DNA no codificante.
Se um SNPs ocorrer numa regio codificante, um exo de um gene, por exemplo o gene que codifica uma
subunidade do citocromo p450, pode alterar a sequencia de aminocidos e alterar a actividade desta protena
que normalmente metaboliza frmacos alterando a metabolizao destes e consequentemente o intervalo de
tempo em que o frmaco est em circulao e o seu efeito. (Adaptado de ACVL)
Tambm se aceita que o SNP influencie respostas individuais a frmacos, se alterar a expresso (regies
reguladoras, sequencias consenso splicing), estrutura ou funo de protenas (missense, frameshift, non-sense)
envolvidas na metabolizao/ actividade/ excreo e ou aco do frmaco.
5 - (1 valor) Explique porque motivo nos doentes com Xeroderma pigmentosum o risco de desenvolver cancro
da pele est mil vezes aumentado.
Os indivduos com XP herdam duma mutao num dos genes de reparao de erros de DNA. Como tal, no so
capazes de reparar eficientemente estes erros nem previnem a formao de outras mutaes. Assim, a
probabilidade de se acumularem mutaes est aumentada. Se estas mutaes ocorrerem em genes reguladores
da proliferao e/ou apoptose podem conduzir ao desenvolvimento de cancro com maior probabilidade (cerca
de 1000x mais) que em indivduos que no herdaram mutaes nos genes de XP. A pele o tecido mais exposto
radiao UV, e como tal mais sujeito a danos DNA pela sua aco (principalmente dmeros de timina) nos
indivduos com XP estes danos no so corrigidos dando origem a mutaes que se acumulam mais
rapidamente podendo originar cancro da pele em indivduos ainda jovens. (Adaptado de CSSB).

6 - (1 valor) Sem contar com a recombinao entre homlogos, quantos tipos geneticamente diferentes de
gmetas produz um indivduo do sexo masculino? Justifique.
Segregao aleatria e independente dos homlogos conduz a 2
haplides. (inmeros alunos)

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combinaes possveis de genomas

7 - (1 valor) Explique o mecanismo pelo qual um dos dois cromossomas X inativado nas mulheres. Em que
fase da vida ocorre esta inativao. Qual a importncia mdica deste processo?
Mecanismo: Condensao do cromosoma X a inactivar (aleatoriamente) iniciada pelo RNA no codificante
Xist, a que se segue desacetilao e metilao de histonas e metilao do DNA; o resultado uma estrutura
fortemente heterocromtica (corpusculo de Barr). Ocorre pelo 10 dia do desenvolvimento embrionrio.
Relevncia mdica: na mulher, no caso de doenas associadas ao cromossoma X, o fentipo depende da
proporo de clulas com o alelo mutante inactivo (p.ex., daltonismo). (exs de alunos: M B; FJZ; DRA; RMPR;
CA; AMD; HSAP...)
8 - (1 valor) Para estudar clulas em proliferao utiliza-se um aparelho denominado citometro de fluxo. As
clulas so primeiro coradas com uma substncia fluorescente que se liga ao DNA, de modo que a intensidade
da fluorescncia medida proporcional quantidade de DNA presente na clula. Os resultados podem ser
apresentados num grfico com o nmero de clulas em ordenada e a quantidade relativa de DNA por clula em
abcissa.
Represente graficamente os resultados que espera observar ao analisar uma populao de clulas retiradas da
medula ssea e uma populao de clulas do sangue perifrico. Justifique.

Representao grfica:
Clulas do sangue perifrico: pico nico (2N de DNA); clulas da medula (continuum entre 2N e 4N de DNA,
com previsveis picos de G1 e G2; S corresponde a uma lomba no grfico, ligando os dois picos)
Justificao:
As clulas do sangue perifrico no esto em ciclo (G0), pelo que contm uma quantidade de DNA
correspondente a um genoma diplide (2N); na medula as clulas esto em ciclo, pelo que h representao de
todas as fases: 2N de DNA em G1, em que o pico maior por esta fase ser mais prolongada, havendo maior
probabilidade de as clulas se encontrarem nessa fase; 4N de DNA em G2/M; quantidades intermdias em fase
S (em muitas clulas o DNA no est ainda completamente duplicado, ao contrrio de G2/M).

9 - (1 valor) Em 2012, o Prmio Nobel da Medicina foi atribudo a Sir John Gurdon e Shinya Yamanaka.
Explique as experincias feitas por cada um destes investigadores que levaram s descobertas agora premiadas.
Sir John Gurdon demonstrou a capacidade de gerao de organismos completos atravs da transferncia de
ncleos de clulas somticas para dentro de ovos. Assim o ncleo de uma clula somtica de um sapo
transferido dentro de um ocito anucleado da mesma espcie foi capaz de gerar um indivduo completo. So as
experincias precursoras da clonagem de organismos.
Shinya Yamanaka determinou que as clulas diferenciadas podem ser desdiferenciadas ou reprogramadas
mediante a utilizao de um grupo especfico de 4 factores de transcrio que estimulam a expresso de genes
especficos, e que globalmente so conhecidos como cocktail de Yamanaka.
10 - (1 valor) Descreva o ciclo de vida da protena ciclina D nas clulas humanas. Quando alterado o gene da
ciclina D pode contribuir para o aparecimento de cancro. Como classifica o gene da ciclina D, ser um protooncogene ou um gene supressor de tumor? Justifique.
A ciclina D sintetizada durante a fase G1 do ciclo celular, aquando da activao da transcrio dos
genes myc, fos e jun (por exemplo, pelo ligao do factor de crescimento PDGF ao seu receptor membranar), os
quais promovem a transcrio do gene desta ciclina. Aps ser sintetizada, a ciclina D associa-se a uma protena
cinase (Cdk4/6), formando o complexo activo ciclina D / Cdk4,6, o qual vai fosforilar um conjunto de alvos
celulares, permitindo a passagem do checkpoint G1/S do ciclo celular. No final de G1, a ciclina sinalizada por
ubiquitinao e degradada no proteossoma.
O gene da ciclina D um proto-oncogene, uma vez que quando mutado pode transformar-se num
oncogene, por ganho de funo; assim, a sua sobreexpresso estimula a proliferao celular podendo contribuir
para o aparecimento de cancro. (adaptado de C.S.S.B.)

11 - (1 valor) A apoptose pode ser desencadeada por sinais internos ou externos. Descreva cada uma das vias
envolvidas na ativao de apoptose, mencionando para cada via, um evento desencadeador.
A apoptose o mecanismo de morte celular programada, podendo ser desencadeada por sinais internos ou
externos.
Relativamente aos sinais internos, quando, por exemplo, na fase G1 do ciclo celular, a protena p53
detecta uma leso do DNA, a entrada da clula na fase S pode ser bloqueada na tentativa de se reparar a leso;
caso tal no seja possvel, a estabilizao dos nveis da protena p53 induzem a apoptose por activao da
transcrio de genes pr-apoptticos da famlia Bcl2 (BH3-only). As protenas pr-apoptticas BH3-only ao
ligarem-se a protenas anti-apoptticas tambm da famlia Bcl2, levam activao das protenas pr-apoptticas
multi-domain Bax/Bak (as quais se encontravam inactivas at ento por associao s anti-apoptticas), as quais
induzem a abertura de poros na membrana mitocondrial, com libertao de citocromo c para o citoplasma. J no
citoplasma, o citocromo c liga-se Apaf e procaspase 9 formando o apoptossoma e induzindo a clivagem da
procaspase 9 em caspase 9 activa (caspase iniciadora). Por clivagem proteoltica, a caspase 9 activa as
procaspases efectoras 3/7, sendo que so agora as caspases efectoras activas que clivam um conjunto de
protenas celulares, como por exemplo as lminas nucleares.
Contudo a apoptose pode tambm ser desencadeada por sinais externos. A clula apresenta sua
superfcie receptores aos quais se podem ligar sinais de morte (como por exemplo, TNF), activando assim
uma via de transduo de sinal intracelular que culmina com a activao directa da caspase 8, a qual por
clivagem activa as caspases efectoras 3/7, promovendo-se a apoptose como j referido anteriormente. (adaptado
de C.S.S.B.)

12 - (1 valor) Descreva os mecanismos de importao de protenas para o ncleo e para a mitocndria. Aponte
semelhanas e diferenas.
O mecanismo de importao das protenas quer para o ncleo quer para a mitocndria inicia-se com o
reconhecimento da sequncia sinal que a protena possui. Em ambos os casos a sntese da protena ocorre
totalmente nos ribossomas livres presentes no citosol. As diferenas existem no tipo de sinal que indica se a
protena vai para o ncleo ou para a mitocndria e no modo como as protenas entram nos organelos. No ncleo
existem poros nucleares por onde a protena entra ligada a uma protena transportadora (Nuclear Transport
Receptor) que reconhece o sinal no citosol. Na mitocndria existe um receptor na membrana externa que
reconhece o sinal e a protena entra por um canal sem estar ligada ao receptor. As protenas nucleares so
transportadas atravs do poro mantendo a sua conformao (estrutura terciria), enquanto que as protenas
mitocondriais perdem a estrutura terciria medida que so translocadas e voltam a adquiri-la aps a
translocao com o auxilio de Chaperons. (adaptado de A.S.A.M.)
.
13 - (1 valor) Ser possvel adaptar a atual estratgia teraputica da doena de Gaucher para tratar doenas dos
peroxissomas? Justifique.
A doena de Gaucher tratada atravs da reposio enzimtica com enzima recombinate. Esta doena causada
pela falta de glucocerebrosidase nos lisossomas, sendo estes incapazes de digerir os glucocerebrsidos que se
acumulam, levando a um aumento de volume dos lisossomas, especialmente nos macrfagos. A terapia de
reposio enzimtica resulta nesta doena pois uma vez introduzida na corrente sangunea, a glucocerebrosidase
endocitada pelos macrfagos juntando-se com o endossoma que depois se junta ao lisossoma, que o local
onde a enzima necessria. No entanto, com outras doenas como as dos peroxissomas esta abordagem no
possvel pois as enzimas caso fossem endocitadas teriam como destino os lisossomas, sendo degradadas. S
seria possvel se consegussemos reencaminha-las para o organelo correcto, o que ainda no acontece.
(Adaptado de J.F.C.S.)

14 - (1 valor) Explique de que modo a estrutura da cromatina contribui para regular a transcrio de genes.
Existem vrios modos de regular a transcrio de genes. A cromatina pode sofrer alteraes estruturais que
condicionam a transcrio. Assim, uma cromatina mais compacta (heterocromatina) no permite a transcrio
de genes porque a RNA polimerase no pode ligar-se ao DNA. De forma oposta, uma cromatina menos
condensada facilita o acesso da RNA polimerase e a transcrio.
As protenas responsveis pela condensao do DNA em nucleossomas so as histonas. Estas protenas
apresentam aminocidos carregados positivamente na superfcie (lisina e arginina) que interagem com o DNA.
A modificao destes resduos positivos por acetilao com a ajuda das histona-acetilases promovem a
dissociao do DNA pela neutralizao das cargas positivas, e consequentemente a descondensao da
cromatina e a transcrio.
Existe outro mecanismo de controlo da expresso gnica mediante a regulao da estrutura da cromatina. Este
mecanismo a metilao do DNA, catalisado por DNA-metiltransferases e promove a condensao das
histonas inibindo a transcrio. Este tipo de regulao acontece frequentemente ao nvel dos promotores.

15 - (1 valor) A anemia de Fanconi uma doena gentica em que a terapia gnica se encontra em fase de
ensaios clnicos. Indique as caractersticas desta doena que tornam possvel a utilizao da terapia gnica como
abordagem teraputica.
O que torna possvel a terapia gnica como abordagem teraputica na Anemia de Fanconi o facto de a doena
ser provocada por alteraes num nico gene, conhecido e isolado como o principal responsvel pela doena. A
doena recessiva, o que faz com que baste uma cpia no mutada do gene para que possa ser compensada a
produo de protena mutada e alm disso as principais clulas afectadas - clulas estaminais hematopoiticas so acessveis e manipulveis, contudo no se consegue ainda controlar o local da insero do gene no genoma.
(adaptado de ARBC e ACCM)

16 - (0,5 valor) Indique qual a afirmao verdadeira. Justifique.

a) As leveduras so um sistema de expresso eucariota, e so capazes de efectuar um grande nmero
de modificaes ps-traducionais.
b) A insulina obrigatoriamente produzida em clulas eucariotas.
c) As bactrias so um sistema de expresso que permite a sntese de qualquer protena humana na sua
forma funcional.
d) As protenas glicosiladas devem ser produzidas preferencialmente em clulas humanas.

a. Verdadeira, as leveduras so clulas eucariotas e como tal, possuem um sistema de expresso eucariota,
sendo capazes de efectuar um grande nmero de modificaes ps-traducionais.
b. Falsa, pois a insulina pode ser produzida em clulas procariotas com um vector de expresso adequado.
c. Falsa, porque as protenas humanas que necessitam de modificaes ps-traducionais no podem ser
sintetizadas em seres procariotas.
d. Falsa, porque podem ser produzidas em vrias clulas eucariotas. (CPG)

17 - (1,5 valor: 0,3 por cada campo a preencher) Preencha o quadro relativo s funes de 5 protenas no

desenvolvimento e funo dos linfcitos B e T:

Protena

Funo biolgica

BCR

Receptor membranar que reconhece antignios e ativa a clula B.

Pr-

Receptor

BCR

diferenciao a precursores de linfcitos B na medula ssea.

pTa

Protena que se associa com TCR em precursores de linfcitos T,

membranar

que

fornece

sinais

de

sobrevivncia

em fases que antecedem o rearranjo e expresso de TCR no timo.

IL-7

Citocina que fornece sinais de sobrevivncia e diferenciao a

precursores de linfcitos T no timo.

RAG

Endonuclease que catalisa a recombinao somtica (rearranjos

VDJ).

18 - (1 valor) Refira os trs grupos de protenas motoras que operam no citoesqueleto e descreva sucintamente
a funo de cada um deles.
Dinenas, Cinesinas e Miosinas
Dinenas e as Cinesinas movem-se ao longo dos microtbulos (MT) (dinenas no sentido da extremidade
menos dos MT e as cinesinas no sentido da extremidade mais dos MT), possibilitando deste modo o
transporte direcionado.
Valorizam-se os exemplos de organelos, vesculas e neurotransmissores.
Miosinas movem-se ao longo dos filamentos de actina (tambm designados por microfilamentos) no sentido da
extremidade mais e so responsveis pela actividade contrctil das clulas.
Valorizam-se os exemplos: assim so essenciais na contrao do msculo esqueltico mas so igualmente
importantes na contrao de clulas no-musculares, citocinese e migrao celular.

= FIM =

Nota: As respostas apresentadas foram seleccionados entre as melhores respostas

apresentadas no exame.