Ventajas de la

Espectrometra de Masas
Capacidad de Identificacin
Identificacin inequvoca de casi cualquier tipo de substancia, desde
tomos hasta molculas complejas de peso molecular elevado

Anlisis cualitativo y cuantitativo

Identificacin de una substancia en presencia de otras similares

Alta sensibilidad
Tcnica universal y especfica
Informacin isotpica
Informacin estructural, energas de enlaces, cintica,
fisicoqumica, etc.

Tcnica rpida (anlisis en lnea en tiempos reales, control de

procesos enzimticos, metablicos, etc)

Por qu es importante la
Espectrometra de Masas?
Porque es una tcnica analtica poderosa
utilizada para:
Identificar compuestos qumicos
Cuantificar compuestos qumicos
Proveer informacin vlida en reas como la
qumica, fsica, astronoma, geologa,
biologa, criminalstica, etc.

Algunas aplicaciones especficas

de la Espectrometra de Masas:
Detectar e identificar el uso de frmacos de

abuso en atletas (antidoping)

Monitorear los gases de la respiracin en
pacientes durante ciruga
Determinar la composicin de materiales
provenientes del espacio exterior
Determinar adulteracin en la miel de abeja

Algunas aplicaciones especficas

de la Espectrometra de Masas:
Localizar depsitos petroleros (midiendo

precursores del petrleo en rocas)

Monitorear fermentaciones en lnea (industria
biotecnolgica)
Detectar contaminantes orgnicos en aire,
agua, suelo y alimentos
Determinar algunos tipos de envenenamiento
(criminalstica)

INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Investigador (es)

Ao

Contribucin

J.J. Thompson

1912

Primer espectrmetro de masas

Dempster

1918

Electro-ionizacin y enfoque magntico

Stephens

1946

Analizador de Tiempo de Vuelo (TOF)

Nier-Johnson

1952

Instrumentos de doble enfoque

Paul, Steinwedel,
Raether, Reinhard y
von Zahn

1953
-58
1955

Analizador cuadrupolar

Gohlke y
McLafferty
Beynon

1956

1956

Cromatografa de Gases/Espectrometra de
Masas
Espectrometra de Masas de alta resolucin

Munson y Field

1966

Ionizacin Qumica

Wiley y McLaren

Diseo avanzado del analizador de tiempo

de vuelo (TOF)

INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Investigador (es)
Dole, Mack, Hines, M.
Ferguson y Alice

McLafferty

Barber, Bordoli, Sedgwick,

Tyler, Surman y Vickerman

Blakely y Vestal

Yamashita, Fenn, Aleksandrov,

Gall, Krasnov, Nikolaev,
Pavlenko, Shkurov, Dokl,
Baram y Garacher

Ao

Contribucin

1968

Ionizacin por
Electro-spray (ESI)

1973

Cromatografa de
Lquidos/Espectrometra
de Masas

1981

Bombardeo de
tomos rpidos (FAB)

1983

Ionizacin por
Termo-spray

1984

Aplicacin de la
ionizacin por Electrospray (ESI) en
macromolculas

Joseph John
Thompson, 1912

INTRODUCCIN
EM Diagrama General

Sistema
de entrada

Sistema
de Cmputo

Cmara
de
Ionizacin

Detector

Sistema

Analizador

de Alto Vaco

Componentes principales de
un Espectrmetro de Masas
Sistemas

de bombeo
Sistema de entrada (Lnea de
transferencia e interfase)
Fuente de Iones (Cmara de Ionizacin)
ptica Inica
Analizador Msico
Detector

Sistema de Bombeo
Tipos de Bombas de Vaco

Sistemas de Entrada

Muestras Puras

Entrada directa
Sondas de introduccin o exposicin
Directa (DIP o DEP)

Mezclas

Cromatografa de Gases
Cromatografa de Lquidos
Electrocromatografa
Electroforesis Capilar
Extraccin de Fluidos Supercrticos

Entrada Directa
Sonda de Insercin Directa (DIP)
La muestra en disolucin se coloca en un tubo capilar de vidrio
Temperatura mxima: 300oC
Diferentes velocidades de Calentamiento

Posibilidad de calentamiento directo de la muestra (sin solubilizar)

Sonda de Esposicin Directa (DEP)

La muestra en disolucin se coloca en un filamento
Calentamiento balstico
Rampas de temperatura programables

Alcanza hasta 1000oC

Tipos de Ionizacin
Ionizacin en Fase Gaseosa:
Ionizacin y Desorcin:
Bombardeo de Partculas:

Ionizacin a Presin
Atmosfrica:

Desorcin Lasser

Electroionizacin (EI)
Ionizacin Qumica (CI)
Desorcin de Campo (FD)
Ionizacin de Campo (FI)
Bombardeo de Atomos Rpidos
(FAB)
Espectrometra de In Msico
Secundario (SIMS)
Electroespray (ESI)
Termospray
Ionizacin Qumica a Presin
Atmosfrica (APCI)
Ionizacin por desorcin lasser en
matriz asistida (MALDI)

CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Magneto
Filamento

+- --

+
+++++ + Hacia el Analizador
+ +

Repeledor

Target

Magneto

CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Las molculas de la muestra son ionizadas
por un haz de electrones (70 eV)
Los iones son expulsados de la cmara y
dirigidos al analizador
Se producen iones positivos y negativos:
+
90% M + e
M. + 2 e10% M + e
M.

Espectro Electromagntico

70 eV

Ionizacin Electrnica
Excitacin electrnica (similar a la teora de UV) en
orden decreciente se ionizan preferentemente
los electrones:

..

> p

R-O-R

>

.+

R-O-R

R-CH :: CH-R

R-CH : +. CH-R

R-CH 2 : CH 2-R

R-CH 2 . CH 2 -R
+

Ionizacin Electrnica
70 eV de energa
Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de iones
con diferentes estados de energa
Aquellos iones con gran cantidad de energa interna
(vibracional, rotacional y electrnica) liberan esta
energa por medio de la fragmentacin
Los iones con baja energa permanecen intactos (Ion
Molecular)
Es la tcnica de ionizacin ms comn
Es la tcnica de ionizacin de la que se obtiene ms
informacin
Todas las bibliotecas comerciales disponibles estn
basadas en los espectros obtenidos por esta ionizacin
Es la ionizacin que ms se utiliza con el sistema CG-EM

CMO SE GENERA UN
ESPECTRO DE MASAS POR IE?
Filamento

Analizador

Cmara de Ionizacin

Espectro de Masas

m/z

Detector

Ionizacin Electrnica
Metanol (CH3OH, P.M. 32)
31

12C
16O

29

32

1H

13C

15

30
17

33

Ionizacin Qumica

Es una tcnica de ionizacin significativamente ms

suave que IE.
Se utiliza cuando en el espectro por IE no aparece el ion
molecular, para confirmar el ion molecular o para
aumentar la intensidad de algunos iones fragmento a
masas altas.
Se utiliza un gas reactivo (metano, isobutano,
amonaco, etc.) que es ionizado por IE. Los iones
resultantes reaccionan con las molculas del analito
que se encuentran en la fuente, con transferencia de
carga (protn) las molculas neutras del analito se
transforman en iones.
Algunos iones moleculares son demasiado inestables
para permanecer intactos an utilizando esta tcnica.

Ionizacin Qumica
Reacciones
CH4 + e -

CH4+

+ CH4

+
CH5

+ 2 e-

+
CH4

+
CH5 + CH3

MH

+ CH4

analito

Protonacin

Ionizacin Qumica
Ejemplo
IE

IQ
Malatin
(Pesticida)
P.M. 330

Ionizacin por FAB

La energa para desorcin es

suministrada por un haz de tomos de

Xenn Argn de alta energa (6-10
KeV)
Se utiliza para ionizar molculas polares
y/o lbiles (Ej.organometlicos)

Ionizacin por FAB

ANALIZADORES
El objetivo del analizador de masas es resolver los
iones despus de que fueron formados en la fuente
de ionizacin.
La diferencia entre GC/MS y LC/MS son las tcnicas
de ionizacin utilizadas (no el analizador)
Analizadores ms utilizados:

Sector Magntico
Cuadrupolo
Trampa de Iones
Tiempo de Vuelo

Sector Magntico

Magneto

Cmara
Cmaradedeionizacin
Ionizacin

Detector

Sector Magntico
y Sector Elctrico
Sector magntico: El campo magntico ejerce una
fuerza perpendicular al movimiento del ion para
deflectar los iones de acuerdo a su momento.
Sector elctrico: El campo elctrico ejerce una fuerza
perpendicular al movimiento del ion para deflectar los
iones de acuerdo a su energa cintica.
Al salir los iones de la cmara de ionizacin tienen
diferente velocidad, para obtener una mejor
resolucin es necesario adicionar un sector elctrico
que colime o rena los iones de acuerdo a su energa
cintica.

Doble Sector

m/z=B2r2/2V

Sector Magntico
Doble sector
Geometra
Nier - Johnson

Geometra Inversa:
1.

Sector Magntico

2.

Sector Elctrico

Sector Electrosttico

Sector Magntico
Ventajas:
Excelente resolucin de masa
Excelente exactitud de masa

Desventajas:
Precio: Sistemas de alto costo
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Poco til en acoplamientos

Cuadrupolo

Cuadrupolo
Ventaja:
Precio: el sistema menos caro del mercado

Desventajas:
Rango de masas limitado

Trampa de Iones

Parte superior del electrodo

Filamento
Paso de los electrones

Centro de la trampa
Salida de los iones
Parte inferior del electrodo

Detector

Trampa de Iones
Ventajas:
Capacidad para MS/MS (MSn)
Precio mediano

Desventajas:
Reacciones ion-molcula
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Rango de masas limitado

Tiempo de Vuelo (TOF)

Con Reflectrn
Reflectrn

Detector
El detector es colocado en el punto focal
para asegurar una ptima resolucin msica

Tiempo de Vuelo (TOF)

Ventajas:
Potencial para rangos de masas ms grandes
Buena resolucin y exactitud de masas
Excelente sensibilidad
La mas rpida adquisicin espectral (los tiempos ms
cortos de anlisis)

Desventaja:
Precio: tiende a ser ms caro que los
sistemas cuadrupolares y algunas
trampas de iones pero menos costoso
que los de sectores

Anlisis por
Espectrometra de Masas
En Espectrometra de
Masas la energa
impartida por el haz
de electrones a la
molcula rompe
algunos de los
enlaces. Porciones
grandes de la
estructura de la
molcula
permanecen intactas
permitiendo la
identificacin del
analito.

Resolucin
Clculo de Masa
3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:
Masa Promedio: Se utiliza el peso atmico (es el
promedio de todos los istopos) para cada
elemento. C=12.01115, H=1.00797, O=15.9994,
N=14.00674
Masa Monoisotpica: Se utiliza la masa exacta
del istopo ms abundante de cada elemento.
C=12.000000, H=1.007825, O=15.994915,
N=14.003074
Masa Nominal: Se utiliza la masa ntegra del
istopo ms abundante de cada elemento. C=12,
H=1, O=16, N=14

Resolucin
Es la capacidad de un espectrmetro
para distinguir entre dos iones con
masas cercanas.
Se expresa como R=m/Dm, donde Dm es
la diferencia de masas entre los dos
iones y m la masa nominal del in de
menor masa.

Resolucin
Baja Resolucin

CO .
+
N2 .
+
C2H4 .
+

27 28 29

Alta Resolucin
+
+
CO
+
N2

C2H4

27.9949 28.0061 28.0313

Resolucin
Ejemplo
Masa
Nominal

Masa
Monoisotpica

Masa Promedio

C17H32

236

236.2504

236.44459

C16H28O

236

236.2140

236.40096

C15H28N2

236

236.2252

236.40389

Resolucin
Ejemplo
C17H32 y C16H28O
C17H32 y C15H28N2
C15H28N2 y C16H28O

Diferencia entre Masas

Monoisotpicas
236.2504-236.2140=0.0364
236.2504-236.2252=0.0252
236.2252-236.2140=0.0112

Resolucin = R = m / Dm
C17H32 y C16H28O
C17H32 y C15H28N2
C15H28N2 y C16H28O

Resolucin necesaria
236.2140 / 0.0364= 6,489
236.2252 / 0.0252= 9,374
236.2140 / 0.0112= 21,090

Exactitud de Masa
Exactitud de Masa = m/z Calculada m/z Observada x 106
m/z Calculada

Ejemplo:
400.0020 400.0000 =
400.0020

0.002 x106 = 4.99 ppm

400.0020

Exactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppm

Sensibilidad
Es una medida de la respuesta del
instrumento para iones de un compuesto en
particular
Indica el valor de la corriente inica
detectada en el colector
Siempre debe estar referida a un compuesto
determinado (relacin seal-ruido)
Disminuye al aumentar la resolucin y la
velocidad de barrido
Est determinada por la eficiencia de la
ionizacin, eficiencia de la transmisin y
respuesta del detector

Sensibilidad y
Detectores para CG
DETECTOR
MS-SIM
MS-Scan
1

FPDS

TCD
ECD-CC
3

0.1

NPD

0.1

FID
0

20

40

60

80

100 500 1000 2500 5000 50000

pg