20

Fotomorfognesis
La luz es un importante factor ambiental que controla el
crecimiento y el desarrollo de las plantas. Una de las
principales razones de esto es, por supuesto, que la luz
origina fotosntesis. Adems, tambin influye en el desarrollo pues provoca fototropismo (vase Seccin 19.4).
Asimismo, ocurren muchos otros efectos producto de la luz
que son muy independientes la fotosntesis; la mayor parte
de estos efectos controla la apariencia de la planta, esto es,
su desarrollo estructural o morfognesis (origen de la
forma). Al control de la morfognesis por medio de la luz se
le conoce como fotomorfognesis.
Para que la luz controle el desarrollo de la planta, sta
primero debe absorber luz. Se conocen cuatro tipos de
fotorreceptores que influyen en la fotomorfognesis de las
plantas:
1. Fitocromo, el que absorbe principalmente luz del rojo y
del rojo lejano, y es el que mejor se conoce. El
fotocromo tambin absorbe luz azul. Se conocen por lo
menos dos grandes tipos de fotocromo.
2. Criptocromo, grupo de pigmentos similares y no
identificados que absorben longitudes de onda del azul
y ultravioleta de onda larga (regin UV-A, 320 a 400
nm). El criptocromo debe su nombre a su especial
importancia en criptgamas (plantas sin flores).
3. Fotorteceptor UV-V, uno o ms compuestos no identificados (tcnicamente no son pigmentos) que absorben radiacin ultravioleta con longitudes de onda
entre 280 y 320 nm.
4. Fotoclorofilina a, pigmento que absorbe luz roja y azul
y que, una vez reducido, da clorofila a.
En este captulo se describen algunos de los efectos de cada
uno de estos fotorreceptores, en especial el fitocromo, ya
que es el que se conoce mejor y porque parece ser el
fotorreceptor ms importante en las plantas vasculares. El
fitocromo, junto con otros fotorreceptores, controla el
proceso morfognico que empieza con la germinacin de la
semilla y el desarrollo de la plntula y culmina con la
formacin de nuevas flores y semillas.
Como se desprende de la aseveracin anterior, que la
fotomorfognesis est controlada en los diversos estadios
del ciclo de vida de una planta, los procesos individuales
son muy especficos para una parte vegetal determinada en
un estado de desarrollo particular. (En los captulos 17 y 18
se hizo nfasis en el mismo fenmeno concerniente a la
regulacin de procesos del desarrollo mediante hormonas.)
Por s misma, la luz no porta informacin morfognica, y
tambin es improbable que el tipo de fotorreceptor sea un
portador de informacin especfica. Ms bien, el factor

crucial es la capacidad de respuesta o sensibilidad de las

clulas. Hans Mohr, desde hace aos investigador sobresaliente en fotomorfognesis vegetal, ha sealado en repetidas
ocasiones que la fotomorfognesis tiene dos etapas
importantes: la especificacin deIpatrn, en la que clulas y
tejidos se desarrollan y adquieren la capacidad de
reaccionar a la luz, y la realizacin del patrn, lapso en el
cual se llevan a cabo los procesos que dependen de la luz
(Mohr, 1983). Otro aspecto importante de la
fotomorfognesis es la necesidad de un sistema de
amplificacin, como se destaca para la accin hormonal en
la Fig. 17-2. El nmero de molculas que altera la luz en
una planta puede ser de varios miles o millones de veces el
nmero de fotones que causan la respuesta. En muchos
casos (pero no en todos), la activacin gnica forma parte
del proceso de activacin.
Algunos de los efectos fotomorfognicos de la luz pueden
apreciarse con facilidad al comparar plntulas
cultivadas bajo la luz con plntulas cultivadas en la oscuridad (Fig. 20 I). Las semillas grandes con abundantes
reservas alimenticias eliminan la necesidad de fotosntesis
por varios das. Las plntulas que crecen en la oscuridad
estn etioladas (del francs elioler, que crece plido o
dbil). Varias diferencias debidas a la luz son evidentes:
1. La luz promueve la produccin de clorofila.
2. La luz promueve la expansin de la hoja, aunque en
menor medida en monocotiledneas (maz) que en
dicotiledneas (frijol).
3. El alargamiento del tallo se inhibe por la luz en estas
dos especies. (El tallo del maz es corto y poco visible
en la l-'ig. 20-1 debido a que est rodeado por hojas en
vaina que llegan casi hasta el suelo en estas plantas
jvenes.)
4. En ambas especies, la luz promueve el desarrollo de la
raz.
Todas estas diferencias parecen ventajosas para una
plntula cuando tiene que prolongar su tallo a travs del
suelo y si sus hojas deben alcanzar la luz. La mayor parte
de las reservas alimenticias en endospermo (maz)
o cotiledones (frijol) se utilizan para proyectar el tallo
hacia arriba en la oscuridad y no en la luz, y se utiliza
menos alimento para el desarrollo de hojas y races que
para formar clorofila, todo lo cual es de menor importancia
para una planta que crece en la oscuridad. Aparte de estos
efectos de la luz, hay muchos otros que son esenciales para
monocotiledneas, dicotiledneas, gim- nospermas y
numerosas plantas inferiores.

20.1
Descubrimiento del
Fitocromo

El descubrimiento y aislamiento del fitocromo y la demostracin de su importancia como pigmento que controla
respuestas morfognicas es uno de los ms brillantes e
importantes de todos los logros hechos en fisiologa. La
mayor parte de la investigacin que condujo a la deteccin
y el aislamiento del fotocromo se realiz en el U. S.

Department of Agriculture Research Station situado en

Beltsville, Maryland, entre 1945 y 1960. La historia del
descubrimiento del fitocromo la han resumido, uno de sus
iniciadores, Harry A. Bort- hwick (1972), Briggs (1976) y de
un modo ms breve Furuya (1987a). Sterling B. Hendricks,
otro de los pioneros en este campo, describe algunos
aspectos del descubrimiento del fitocromo en el ensayo que
aparece en este captulo.
Por 1920, W. W. Garner y H.A. Allard hicieron una
observacin importante en Beltsville. Descubrieron que las
duraciones relativas de los periodos de luz y oscuridad
controlan la floracin en ciertas plantas (vanse caps. 21 y
23). Despus, en 1938, otros investigadores descubrieron
que el abrojo, el que para florecer requiere de noches ms
largas que cierta longitud crtica m-

Figura 20-1 Efectos de la luz en el desarrollo de la plntula

de una rnonocotilednea (maz) y una dicotilednea (frijol). La
planta de la izquierda de cada grupo germin y se cultiv en
un invernadero, mientras que las otras representantes de
cada grupo se cultivaron en oscuridad continua durante 8
das. (Fotografa de Frank B. Salisbury.)

nima (esto es, es una planta de da corto), no florece a

causa de una interrupcin breve de su periodo de oscuridad
con luz. La luz roja result ser mucho ms efectiva que otras
longitudes de onda, no slo para interrumpir las noches
largas que de otro modo inducen 1a floracin en el abrojo y
en soja de la variedad Biloxi, sino tambin para promover
la expansin de hojas de chcharo. La luz roja que
interrumpe un periodo de oscuridad tambin result ser el
color de luz mis efectivo para promover la floracin de
cebada Wintex y de otras plantas de da largo que requieren
de noches ms breves y das ms largos a cierta longitud
crtica.
Borthwick y Hendricks colaboraron entonces con
expertos familiarizados con la latericia de semillas de
muchas especies. Construyeron un gran espectrgrafo que,
con una fuente de luz brillante, poda separar varios colores
de luz a lo largo de reas tan grandes que incluso se poda
acomodar las plantas en maceta para que quedaran
expuestas a diferentes longitudes de onda. Obtuvieron un
espectro de accin con un pico en las longitudes de onda del

rojo para la promocin de la germinacin de semillas de

lechuga de la variedad Granel Rapids, de las cuales slo 5
al 20% germinan en la oscuridad. Ya en la dcada de 1930
se haba demostrado que la luz roja promueve la
germinacin de tales semillas pero que la luz azul o del rojo
lejano inhibe la germinacin hasta tasas inferiores a las que
se obtienen en la oscuridad. La luz del rojo lejano incluye
las longitudes de onda un poco ms largas que las del rojo,
que cubren aproximadamente el rango de los 700 a 800 nm:
(Las longitudes de onda mayores a 760 nm son invisibles
para los humanos y tcnicamente se encuentran en el
infrarrojo cercano, como se muestra en el Apndice B, Fig.
B-2. Las longitudes de onda del rojo lejano aparecen como
rojo oscuro para nosotros.)

ENSAYO 20-1

El Descubrimiento del Fitocromo

Sterlinx f. Hettdricks
El descubrimiento de un nuevo proceso en el mundo biolgico
siempre es excitante, r cuando resulta ser importante, quiz hasta es trascendeiite. Este fue el caso en el descubrimiento del
fitocromo. En 197p1Ue pedimos a Ster- ling B. Hendricks nos
hablara del descubrimiento. Sterling Hendricks fallecwi el 4 de
enSrnde 1981.
En 1945, Harry A. Borthwick, Marin W. Parker y yo
empezamos a trabajar para averiguar algo acerca de cmo
reconocen las plantas la duracin del da. Nuestro mtodo
consisti en registrar cambios en la floracin inducidos por la
interrupcin de noches largas con periodos de luz de distintas
longitudes de onda e intensidades o, para ser ms exactos,
para medir espectros de accin. Una luz roja de baja
energa, de 660 nm result ser la ms efectiva para impedir la
floracin de la soja y el abrojo, de da corto, as como paia
inducir la floracin de cebada y beleo, ambas de da largo.
Estas plantas de respuesta opuesta tuvieron el mismo
espectro de accin, en todas las particularidades en cuanto al
cambio en la floracin. Al parecer el infrarrojo cercano, de los
700 a los 900 nm, era poco eficaz.
En vez de elaborar el hallazgo en lo que concierne a la
floracin, procedimos (junto con Frits W. Went) a medir
espectros de accin para la inhibicin de la etiolacin (el
alargamiento de tallos y la restriccin de la expansin de la
hoja que tienen lugar en la oscuridad). La suspensin del
alargamiento del tallo de cebada y la intensificacin del tamao de la hoja en el chcharo por accin de la luz dieron el
espectro de accin de la floracin. Fue emocionante dos
cubrir que desplegues tan distintos estaban relacionados en
su causa inicial.
Desde haca casi un siglo se conoca la necesidad de
luz en la germinacin de algunas semillas. Nuestras primeras
mediciones (en 1952, con Eben H. Toole y Vivian K. Toole) la
hicimos en semillas de lechuga, las que Lewis FI. Glint y E.

D. Mc-Allister ya haban estudiado 17 aos antes. De nuevo,

la luz de 600 nm result ser ms eficaz para promover la
germinacin. Sin embargo, las semillas colocadas en la
regin del espectro que va de los 700 a 800 nm germinaron a
menos del 20% del valor de las colocadas en la oscuridad
(controles). Flint y McAllister encontraron que la germinacin
se suprima en esta regin hasta en un 50% cuando las
semillas se potenciaban inicialmente con luz.
Las diferencias concernientes a la experimentacin no tenan
una importancia inmediata para nosotros.
Peto un da de 1952, durante la medicin de un espectro
de ac'cin'/^surgi la idea de que la regin de los 700 a 800
nm no se haba probado correctamente en los controles de
floracin. Si las plantas haban sido expuestas en primera
instancia a luz do 600 nm para potenciar el cambio en la
floracin, en vez de tomarlas directamente de la oscuridad, la
regin de: los 700 a 800 nm quiz poda regresarlas a la
condicin que mantenan en la oscuridad. De hecho la regin
de los 700 a 800 nm, puede provocar una respuesta similar a
la oscuridad antes que no provocar ningn efecto como ya
habamos supuesto. Esta regin, cuando se prueba con
semillas de lechuga, suprime en efecto la germinacin
potenciada de un valor elevado a uno bajo, con una
efectividad mxima cercana a los 730 nm. Lo opuesto a la
respuesta potenciada con plantas de da corto para la
floracin tambin se prob muy bien como para apoyar una
generalizacin.
La fotorreversibilidad fue el criterio de prueba para tener
una comprensin ms profunda de la equivalencia de la accin inicial en divei^is fenmenos. Tambin dio lugar al
'eventual aislamiento del pigmento pitocromo. No obstante,
ese da de 1952 tuvo un matiz adicional que no apreciamos
muy bien ni captamos de inmediato. Flabamos hecho un
experimento muy diferente al de Flint y McAllister. En
nuestros experimentos, las semillas de lechuga fueron expuestas durante breves lapsos a una energa total baja de
intensidad moderada, mientras que ellos utilizaron una
energa total elevada administrada mediante una exposicin
continua de baja intensidad. De esta manera, la fotorreversibilidad fue rpida y convincentemente evidente para nosotros pero no para ellos como lo fue la implicacin de la
determinacin en el nivel molecular mediante un cambio rpido en la forma de un pigmento que absorbe luz.
En un prrafo anterior, la reversibilidad de la floracin se
expres como . . se prob muy bien. . De hecho el efecto
contratio, fue ms bien pobre. Cuanto ms tratbamos de
facilitar la reversibilidad incrementando la energa con
exposiciones largas, ms pobre era. En ralidad, la radiacin
de 730 nm a baja intensidad, administrada durante una hora,
inhibi la floracin del abrojo de un modo tan eficaz como la
exposicin a una baja energa de 660 nm. Con esto se
reconoci, lo que en la actualidad se conoce como la
"reaccin a la irradiacin elevada. Es probable que Flint y
McAllister estuviesen tratando con esta reaccin en semillas
de lechuga y no con la simple reversibilidad del fitocromo.
Tambin se cree que la reaccin de energa elevada, que
tiene muchas facetas en la naturaleza, surge en parte del
fitocromo, pero de un modo ms complejo que slo por
reversibilidad. Por ltimo, nuestro objetivo inicial
deternrnar cmo reconocen las plantas la duracin del da (o
de la noche) an es algo ilusorio. Es seguro que participa
el fitocromo, pero cul es su funcin y cmo se entrelaza con
ritmos biolgicos endgenos an es tema de vigoroso
debate. (Para 1991 esto an es cierto.)

R,Fr

R.Fr.R.Fr
R,Fr,F,Fr,F,Fr

R,Fr,
R.Fr.R.Fr.R.Fr
Figura 20-2 Inversin de la germinacin de semillas de
lechuga con luz roja (R) y del rojo lejano (Fr). Las exposiciones al rojo fueron de 1 min y al rojo lejano de 4 min.
Cuando la ltima exposicin es a la luz roja, la semilla
germina; cuando es.al rojo lejano, permanecen latentes. La
temperatura durante los 30 min necesarios para completar el
tratamiento fue de 7C; en el tiempo restante fue de 19C.
(Cortesa de Fiarry Borthwick.)

El grupo de Beltsville hizo entonces un descubrimiento

notable.
Al exponer las semillas a luz del rojo lejano despus de
un tratamiento promotor con luz roja, esta promocin se
nulificaba; pero si se administraba luz roja despus de luz
del rojo lejano, se estimulaba la germinacin. Al alternar de
manera repetida breves tratamientos con luz roja y del rojo
lejano, descubrieron que el color de la luz aplicada la
ltima vez determinaba si las semillas germinaban o no,
donde la luz roja promova y la del rojo lejano nulificaba la
promocin (Fig. 20-2). Adems, la inhibicin de la floracin
en plantas de da corto por la interrupcin de una noche
larga con luz roja era superada en gran medida si se
aplicaba luz roja seguida de inmediato por luz del rojo
lejano.
En esta etapa los investigadores comprendieron que
haba un pigmento azul que absorba luz roja (denominado
Pr); empero, sus concentraciones eran demasiado bajas
como para dar color a plntulas de maz etioladas, en las
que fue detectado por primera vez con un espectrofotmetro
a causa de los cambios en la absorcin. Tambin decidieron
que mediante la aplicacin de luz roja el pigmento poda
convertirse en una forma diferente (denominada Pfr) que
absorba luz del rojo lejano (forma que eventualmente
result ser de color verde oliva) y que el pigmento azul
poda regenerarse con luz del rojo lejano. Se dedujo que la

forma activa era la forma olivcea producida por la luz

roja, en tanto que la luz azul pareca ser la inactiva. Estas
ideas que se basaron en estudios fisiolgicos y espectrofotomtricos con semillas o plantas etioladas, necesitaban
verificarse extrayendo el pigmento y estudindolo in vitro.
(sta fue la aproximacin cientfica que se sigui para
todos los pigmentos biolgicos, incluyendo la ro- dopsina
para la visin, las clorofilas y los pigmentos en la
fotosntesis y los citocromos en la respiracin.)
A principios de la dcada de 1960, H. W. Siegelman y
otros qumicos de protenas purificaron el fitocromo a partir
de homogcnizados de plntulas de cereal, utilizando
cromatografa en columna y otras tcnicas de rutina en la
purificacin de protenas. Demostraron que el fotocromo
aislado cambia de color de manera reversible al ser
expuesto a la luz roja o a la del rojo lejano. En general,
todas las deducciones anteriores, basadas slo en
experimentos fisiolgicos con plantas enteras, se haban
verificado. Incluso se midi el espectro de absorcin de
cada forma de fitocromo. Las conclusiones de estos
investigadores se ilustran mediante el siguiente esquema
fotorreversible:

20.2
Propiedades Fsicas y
Qumicas del Fitocromo

Figura 20-3 Una comparacin del espectro de absorcin de

ambas formas de fitocromo con espectros de accin para
varios procesos fisiolgicos. (Los espectros de absorcin
provienen de Vierstra y Quail, 1983. El espectro de accin
que aparece en b fue redibujado a partir de datos de Parker
et al., 1949. El espectro de accin para la promocin de la
apertura del gancho hipoctilo que aparece en c se redibuj
de Withrow et al., 1957, y el espectro para la promocin y
subsecuente inhibicin de la lechuga Grand Ra- pids se
redibuj de Borthwick et al., 1954.)

Casi todos los estudios del fitocromo se han hecho con

pigmento purificado de plntulas etioladas, lo cual tiene dos
razones: en primer lugar, las plntulas cultivadas en la
oscuridad total contienen de 10 a 100 veces ms fitocromo
total que las cultivadas bajo la luz. en segundo lugar, no
tienen clorofila que absorba luz roja y azul e interfiera con
los estudios espectrofotomtri- cos del fitocromo. Apenas
hace poco que se ha estudiado bastante el fitocromo
procedente de plantas verdes; ms adelante regresaremos a
sus propiedades.
El espectro de accin de molculas de fitocromo muy
purificadas a partir de angiospermas etioladas tiene un
mximo en la longitud de onda del rojo, hacia los 666 nm
para la forma azul brillante que absorbe el rojo (Pr) y hacia
los 730 nm para la forma olivcea que absorbe el rojo
lejano (Pfr; Vierstra y Quail, 1983, 1986). En la Fig. 20-3a
se ilustra un ejemplo de estos espectros de absorcin. El
espectro de absorcin para Pfr presenta un hombro en la
regin del rojo (hacia los 666 nm) causada por Pr, no por
Pfr; Pr aparece porque es imposible convertir ms de un
85% del Pr en Pfr en una muestra de fitocromo. No puede
haber una conversin ms eficaz debido a que parte del Pfr
se convierte de nuevo en Pr cuando el propio Pfr absorbe luz
roja. En las figs. 20-3b y 20-3c se ilustran espectros de
accin en las regiones del rojo y del rojo lejano para
diversas respuestas fisiolgicas. Las semejanzas del
espectro de accin del fitocromo y el espectro de accin de
las respuestas de la planta es una evidencia importante que
sugiere que el fitocromo es el pigmento causante de dichas
respuestas. Una segunda evidencia es que las respuestas

que causa la luz roja casi siempre son anuladas por una
exposicin subsecuente e inmediata a luz del rojo lejano.
Otra evidencia ms es que slo los bajos niveles de
irradiacin, ya sea de luz roja o del rojo lejano, que son
capaces de interconvertir el fitocromo de una forma a otra,
provocan estas respuestas.
En hojas y tallos, la luz que absorbe la clorofila altera
tanto el espectro de accin para las respuestas del fitocromo
debidas a Pfr como la cantidad de luz (absorbida por Pr) que
se requiere para la respuesta. Los picos del espectro de
accin se desvan hacia las longitudes de onda ms cortas,
cerca de los 630 nm (longitudes en las que la clorofila
absorbe menos), y se necesita de mayor cantidad de energa
para la respuesta (Jos y Schfer, 1978; tambin vanse los
picos del espectro de accin para la inhibicin de la
floracin de la soja y el abrojo, en la Fig. 20-3). Tanto Pr
como Pfr absorben luz violeta y azul, pero los bajos niveles
de irradiacin de estas longitudes de onda resultan mucho
menos eficaces que la luz roja o del rojo lejano para los
procesos fisiolgicos descritos hasta aqu. Ya que ni Pf ni Pfr
absorben luz verde de manera efectiva y como nuestros ojos
son especialmente sensibles al verde, se usan luces de
seguridad con filtros que slo transmiten luz verde de baja
intensidad en experimentos de fisiologa en los que
participa el fitocromo. En general, la luz de seguridad verde
y los filtros verdes son muy tiles en estudios de fitocromo,
pero deben proporcionar irradiaciones bajas y deben
probarse para corroborar tic que no causan
ningunarespuesta. En algunas respuestas especialmente
sensibles, que se mencionarn ms adelante, aun una luz de
seguridad verde es poco segura.
Qumicamente, el fitocromo es un homodmero dedos
polipptidos idnticos, cada uno con un peso molecular de
unos 120 kDa (revisado por Vierstra y Quail, 1986). Cada
polipptido tiene un grupo prosttico denominado
cromforo que est unido, mediante un tomo de azufre, a
un residuo cistena del polipptido. Este cromforo es un
tetrapirrol de cadena abierta similar al pigmento
fotosinttico ficobilina de algas verdes y cianobacterias. Es
el cromforo, no la protena, el que absorbe la luz que hace
que responda el fitocromo. Cuando Pr se convierte en Pfr por
accin de la luz roja, al parecer se presenta una
isomerizacin cis-trans en el cromforo (Fig. 20-4). La
alteracin del cromforo en el fitocromo provoca entonces
varios cambios sutiles, no identificados, en la estructura de
la protena que conforma al fitocromo (Song y Yamasaki,
1987; Hansjrg el al., 1989). Los cambios en la estructura
de la protena son responsables de alguna manera de la actividad fisiolgica de Pfr y de la inactividad de Pr.
A la mitad de la dcada de 1980 empezaron a aparecer
informes acerca de las propiedades qumicas, espectrales e
inmunolgicas del fitocromo de algas verdes (resumido por
Furuya, 1989). En la actualidad est claro que existen dos
grandes clases de fitocromos: el tipo 1 y el tipo 2 (Furuya,
1989; Tokuhisha y Quail, 1989; Cordonnier, 1989). El tipo 1

predomina en plntulas etioladas y el tipo 2 en plantas

verdes y semillas (al menos en semillas de avena). El tipo 2
proveniente de plntulas de avena verdes es un poco ms
pequeo (118 kDa) que el de las etioladas (124 kDa), pero
tambin existe como dmero in vivo y tiene propiedades
espectrales similares, aunque no idnticas, al del tipo 1 etiolado. Una diferencia espectral importante en los tipos

Figura 20-4 Estructura postulada del cromforo de P r

(izquierda) y de Pfr (derecha). (De Rdiger, 1987. Vase
tambin Rdiger, 1986.)

1 y 2 de avena es que la forma Pr del tipo 2 tiene una

absorcin mxima de cerca de 654 nm en todas las especies,
lo que podra ayudar a explicar las diferencias en los
espectros de accin de plantas verdes y cultivadas en la
oscuridad que aparecen graficadas en la Fig. 20-3; sin
embargo, el tipo 2 Pr proveniente de plntulas de chcharo
verdes tiene un pico de absorcin en los 667 nm, el mismo
que el del tipo 1 proveniente de plntulas cultivadas en la
oscuridad. El tipo 2 Pfr que se forma a partir de plntulas de
chcharo y avena verdes tiene una absorcin mxima in
vitro de 724 nm, en contraposicin a los 730 nm para el
fitocromo del tipo 1 procedente de otras plantas.
Con base en las reacciones inmunolgicas, las protenas de los fitocromos tipo 1 y 2 son muy diferentes,
aunque existen ciertas semejanzas importantes (Cordonnier,
1989). Sin embargo, aun dentro de una misma planta verde
se presentan varias formas del tipo 2. Por ejemplo, Sharrock
y Quail (1989) obtuvieron evidencia para cuatro o cinco
genes diferentes en Arabidop- sis thaliana; tres de stos
(uno para el tipo 1 y dos para el tipo 2) estaban activos in
vivo, por lo que podan clonarse (vase Cap.24). lo que
permite aislar suficiente DNA para su anlisis qumico. Se
encontr que estos tres genes tienen secuencias

nuclcotdicas que difieren de manera significativa, 1(5 que

indica que cada gen controla la formacin de una protena
de fitocromo diferente. La diferencia entre los fitocromos del
tipo 2 es igual de grande a la que hay entre cualquiera de
ellos o con el tipo 1 (se predice casi un 50% de homologa
en las secuencias de aminocidos en todas las
comparaciones del cdigo gentico). En la actualidad se
estn estudiando intensamente las estructuras de estos
genes y los fitocromos para los que codifican. Por lo pronto,
est claro que siempre que mencionemos el fitocromo, por
lo general estaremos hablando de un grupo de protenas
afines que se encuentran unidas a un cromforo similar, o
incluso idntico. Es probable que las funciones de miembros
separados de este grupo difieran; de otro modo, quiz las
plantas no produciran ms que un solo tipo.

20.3
Distribucin del Fitocromo
entre Especies, Tejidos y Clulas
Todo lo dicho hasta aqu se aplica a fitocromos de angiospermas. Hay fitocromo en otros tipos de plantas?
Existe en gimnospermas, hepticas, musgus, helechos y
algunas algas verdes, y hace poco se report su existencia
en ciertas algas rojas y cafs (Lpez Figucroa et al., 1989).
Quiz no est presente en bacterias ni hongos.
Poco se sabe acerca de las propiedades qumicas del
fitocromo en especies distintas a las angiospermas. En una
alga verde, varias especies de pino y la gimnosper- ma
primitiva Ginko biloba, los picos de absorcin in vivo para
Pr y Pfr se presentan en longitudes de onda un poco menores
que en angiospermas. Sin embargo, an las angiospermas
despliegan cierta variabilidad en estos picos, en parte
porque la clorofila y otras molculas cercanas influyen en el
espectro de absorcin in vivo del fitocromo. Es posible que
el cromforo de todos los fitocromos sea idntico, pero esto
an no se ha determinado. La asociacin del fitocromo con
otras molculas en una clula puede influir en el espectro de
absorcin in vivo, pero los fitocromos tipo 1 y 2 purificados
difieren, como ya se mencion. Estas diferencias se
presentan debido a que los cromforos son qumicamente
distintos o a que las diferentes protenas asociadas con un
cromforo comn provocan cambios en sus propiedades de
absorcin. En este momento no es posible explicar las
propiedades de absorcin diferentes en gimnospermas y
plantas inferiores en relacin con las angiospermas.
El fitocromo aparece en casi todos los rganos de las
plantas estudiadas, incluyendo races. El fitocromo est
presente en todas las plantas y se sintetiza por completo
como Pr; al parecer ningn P^,. puede sintetizarse en la
oscuridad. Desde hace mucho se ha cuan- tificado in vivo el
contenido de fitocromo de las partes vegetales por la
disminucin en la absorbencia de los tejidos cuando se
produce Pfr a partir de Pr mediante exposicin de los tejidos
a luz roja. A principios de la dcada de 1970, Lee H. Pratt y
Richard A. Coleman desarrollaron una tcnica
inmunolgica para la determinacin de fitocromo que

permite su identificacin en clulas especficas y organelos

subcelulares. La tcnica original de Pratt y Coleman es casi
1,000 veces ms sensible que los mtodos
espectrofotomtricos y tambin es aplicable a tejidos verdes.
Hoy en da este mtodo bsico se ha mejorado y hecho ms
sensible y especfico (Pratt, 1986; Pratt et al., 1986;
McCurdy y Pratt,
1986) . (Vase, en este mismo captulo, el ensayo del Dr.
Pratt concerniente a la importancia de las tcnicas inmunolgicas en las investigaciones sobre el fitocromo y
otros aspectos de la fisiologa vegetal.) En los ensayos
inmunolgicos puede usarse tanto la microscopa ptica
como la microscopa electrnica.
Los resultados de Pratt y Coleman con plantas cultivadas en la oscuridad demuestran que las clulas de la
caliptra de plntulas de pastos contienen elevadas cantidades de fitocromo tipo 1, lo que es consistente con la
absorbencia, por parte de la caliptra, de luz que ampla la
sensibilidad gravitrpica en ciertos pastos y otras plantas
(vase Seccin 19.5). La distribucin del fitocromo en
brotes de pastos es variable, pero las plntulas de avena,
centeno, arroz y cebada poseen concentraciones elevadas en
las regiones apicales del coleptilo, cerc^ del pice del
brote y (excepto en la avena) en la base de las hojas en
crecimiento. A nivel subcelular, hay fitocromo en el ncleo y
en todo el ci- tosol, pero parece que no est presente en
ningn or- ganelo o membrana, o en la vacuola (Warmbrodt
et al., 1989). Desafortudanamente, conocer la localizacin
del fitocromo dentro de las clulas no nos dice nada en
esencia acerca de cmo acta. Adems, ya que principalmente parece que los fitocromos del tipo 2 en plantas
verdes son inmunolgicamente distintos a los del tipo 1, los
mtodos inmunocitoqumicos promovidos por Pratt apenas
han empezado a aplicarse de manera exitosa para la
localizacin de fitocromo en plantas verdes.
Hace poco se estudi la formacin de fitocromos del
tipo 1 y 2 en semillas de avena y chcharo en germinacin.
Siempre que fue posible, se utilizaron tanto mtodos
espectrofotomtricos como inmunolgicos. As, en este
momento se cuenta con algunas observaciones interesantes
(revisado por Colbert, 1988, 1990; Tho- mas et al., 1989;
Furuya; 1989). Las semillas de ambas especies contienen
sobre todo fitocromos del tipo 2. Cuando ocurren la
germinacin y el desarrollo, en presencia de luz o en
oscuridad, la cantidad de fitocromos del tipo 2 se
incrementa de modo gradual en las etapas finales de la
imbibicin, cuando empieza tambin la sntesis de otras
protenas. En plntulas de avena de 3 das de edad, la
cantidad total casi se triplica en comparacin a la que est
presente en la semilla. En el chcharo (estudiado slo
durante 12 h de imbibicin), los fitocromos del tipo 2 se
incrementan casi en la misma cantidad tanto en la luz como
en oscuridad. Ms tarde, la cantidad total de fitocromos del
tipo 2 aumenta ms en ambas especies, a medida que la
planta crece en presencia de la luz.

La cantidad de fitocromo tipo 1 en cada especie

muestra cambios en el desarrollo anlogos a los de los
fitocromos tipo 2 en la luz, por lo que las plntulas ms
antiguas, cultivadas en la oscuridad, contienen apenas la
mitad de fitocromos tipo 1 y la mitad del tipo 2 (Na- gatani
et al., 1989, 1990). Sin embargo, cuando las semillas
germinan y las plntulas se desarrollan en la oscuridad, la
cantidad de fitocromo tipo 1 aumenta unas 100 veces; as,
las plntulas cultivadas en la oscuridad contienen mucho
ms fitocromo total que las plntulas que crecen en
presencia de la luz, como ya se mencion. Esto es cierto
para todas las especies investigadas. Esta abundancia de
fitocromo tipo 1 quiz le permite a estas semillas interceptar
incluso luz muy dbil y desarrollarse como plantas verdes
normales. Cuando las plntulas reciben luz, una de sus
respuestas es perder la mayor parte de su fitocromo tipo 1.
Esto ocurre por tres razones principales: cesan de producir
ms mRNA necesario para sintetizar ese fitoEn a actualidad, el Dr. Prait es profesor de Botnica en la
Uni- versity of Georgia. En 1982 recibi el prestigioso premio
Charles A. Shull de la American Society of Planl Pbysiology
por parte del trabajo que describe en este ensayo, el cual
actualiz para esta edicin de Fisiologa Vegetal.

ENSAYO 20-2

Los Anticuerpos y el Estudio

Los anticuerpos, conocidos tambin como inmunoglobu
linas, son protenas que sintetiza un animal como respuesta a
la exposicin a un agente extrao. Son slo un componente
del sistema inmune de un animal, cuyo estudio se conoce
como inmunologa. Las sustancias a las que se acoplan los
anticuerpos se denominan antgenos. Una funcin natural de
los anticuerpos es destruir antgenos tales como virus y
bacterias. Uno de los objetivos de este ensayo consiste en
mostrar, con referencia al fitocromo, que aunque las plantas
no sintetizan anticuerpos, stos representan una herramienta
invaluable para la investigacin en fisiologa vegetal.
Despus de capacitarme como estudiante graduado en
los laboratorios de Winston Briggs y Norman Bishop, en 1967
acept una plaza de postdoctorado con Warren Bu- tler, quien
haba sido miembro del grupo responsable del aislamiento
del fitocromo. Fue en su laboratorio donde se me revel por
vez primera la nocin de que los anticuerpos podan ser una
poderosa herramienta de investigacin. Wa rren Butler ya
haba preparado anticuerpos contra fitocromo inyectando el
pigmento purificado en conejos y recolectando despus los
anticuerpos a partir de sangre to mada de los mismos.
Debido a que los antgenos pueden ser virtualmente
cualquier cosa, incluyendo protenas, carbohidratos,
hormonas vegetales e incluso cidos nucleicos, y como los
anticuerpos se pueden sealar con facilidad con marcadores
como colorantes fluorescentes, enzimas o metales
electrodensos , y son altamente especficos con respecto al
antgeno al cual se acoplan, los anticuerpos pueden utilizarse
como indicativos especficos del antgeno. Cuando se les usa
de esta forma con muestras de tejidos adecuadamente
preparadas, los anticuerpos permiten la deteccin de
virtualmente cualquier sustancia con la conveniencia de la
microscopa ptica o con la resolucin del microscopio
electrnico. Esta aplicacin nmunoqumica en particular se
conoce como inmunocitoqumica. A Butler le interesaba de
manera especial aplicar esta tcnica para sa ber cmo se

distribuye el fitocromo en una planta y dnde se localiza

dentro de una clula.
En 1969, cuando establec mi propio laboratorio en la
Vanderbilt University, comenc a explorar-de manera independiente posibles aplicaciones de los mtodos inmunoqumicos. Sin embargo, debido a mi preparacin como botnico,
mi falta de antecedentes en inmunologa me impeda ver el
vasto potencial de ios anticuerpos como herramienta de
investigacin. La mejor aplicacin para los anticuerpos que
pude proponer con mi primera solicitud de fondos fue sugerir
que deba producir anticuerpos contra el fitocromo porque "la
reactividad, cruzada entre fitocromos aislados provenientes
de diferentes fuentes vegetales y sus anticuerpos deban dar
una medida relativa del grado de homogeneidad entre los
fitocromos de diferentes grupos taxonmicos..." Aunque
eventualmente nos acercamos a este objetivo, una vez que
comenzamos a producir anticuerpos contra fitocromo
encontramos otras cosas an ms interesantes en que
podamos emplearlos.

del Fitocromo
Lee H. Pratt

Una de esas cosas interesantes fue la visualizacin inmunocitoqumca del fitocromo, tal como lo sugiri originalmente Warren Butler. Con la entrada de Ludwig Sternberger,
pionero en esta rea, la participacin de Richard Coleman,
inicialmente un tcnico y luego un estudiante graduado en mi
laboratorio, y nuestros anticuerpos contra fitocromo recin
producidos, tuvimos un xito casi inmediato. Por primera vez,
pudo observarse la distribucin del fitocromo en plntulas
completas con una resolucin de clula a clula. Aunque la
terminologa an no era de uso comn, de hecho nos
encontrbamos evaluando la manifestacin de los genes del
fitocromo al nivel de las protenas. Una observacin notable
fue que para dos clulas adyacentes, por lo dems
equiparables, slo una poda acumular niveles detectables de
fitocromo, lo que indica que la regulacin espacial de la
expresin gnica es sumamente precisa.
Con la adaptacin subsecuente de sondas electrodensas, tambin se pudo determinar en qu lugar de la clula
estaba el fitocromo, con lo que poda probarse, por ejemplo,
la hiptesis de que el fitocromo poda estar en el ncleo
interactuando de manera directa con el genoma de la clula,
o que poda estar interactuando con membranas. Salvo raras
excepciones, no encontramos fitocromo en el ncleo. Sin
embargo con la participacin de John Macken- zie Jr., en
1975 demostramos que Pfr tena una distribucin diferente en
la clula comparado con la de P,, lo que indica una posible
asociacin de Pfr con la membrana. No obstante, informacin
ms reciente obtenida por David McCurdy en mi laboratorio
con anticuerpos marcados con oro, as como por Volker
Speth, Veit, Otto y Eberhard Schfer en Freiburgo, indica que
esta distribucin diferente de Pfr no implica una asociacin
con membranas. Por lo tanto, los datos obtenidos hasta la
fecha no bastan para apoyar ninguna de las hiptesis.

Trabajo inmunoqumico afn realizado, efectuado en mi

laboratorio por Mary Jane Saunders, investigadora de
postdoctorado, y Michele Cope, estudiante graduada, es
consistente con esta conclusin.
Una vez que empezamos a apreciar el tremendo potencial de la inmunocitoqumica como herramienta de investigacin, en 1974 decid tomar un curso de inmunologa en la
Vanderbilt's School of Medicine. Esta experiencia propici
muchos otros usos de los anticuerpos. Robert Hunt no slo
aprendi a utilizarlos para la purificacin del fitocromo por
afinidad, procedimiento que es muchas veces ms rpido y
poderoso que otras tcnicas para purificacin de protenas,
sino que tambin empez a utilizar anticuerpos para la
deteccin de fitocromo en tejidos vegetales cultivados en la
luz y con capacidad fotosinttica. Aunque la clorofila y la
abundancia sumamente baja de fitocromo en tales tejidos
impide la deteccin espectrofotomtrica directa de fitocromo, los ensayos nmunoqumicos no resultan afectados
por la clorofila y, como aprendi Robert Hunt, son varias
miles de veces ms sensibles. Posteriormente con la ayuda
de Susan Cundiff, Harry Stone y Maury Boeshore, quienes se
graduaron trabajando en mi laboratorio, y de Marie- Michle
Cordonnier, investigadora de postdoctorado, tambin
utilizamos anticuerpos para seguir la presencia del fitocromo en plntulas en desarrollo, caracterizar su destino
durante el curso de la denominada reaccin de destruccin
del fitocromo, investigar posibles cambios en sus propiedades moleculares in vivo en funcin de su forma, e iniciar
estudios comparativos del fitocromo procedente de fuentes
distintas,, como originalmente se haba propuesto como justificacin para la produccin de anticuerpos. Como fue el
caso para el trabajo mencionado arriba, en la mayora de los
casos la informacin resultante no se hubiera podido obtener
sin el uso de anticuerpos.
El trabajo inmunoqumico mencionado hasta aqu
dependi slo del uso de anticuerpos recuperados de suero
de conejos inoculados con fitocromo. Como el fitocromo es
una protena grande, es asimismo un antgeno complejo que
tal vez posee unos 10 eptopes, cada uno de los cuales es
esa pequea porcin del antgeno contra el que se sintetiza
un anticuerpo. Y como un animal sintetiza en general 5 o 10
anticuerpos para cada eptope, podra esperarse que el
conjunto de anticuerpos heterogneos dirigidos contra el fitocromo en el suero de un conejo oscile entre 50 y 100. Este
conjunto de los denominados anticuerpos policlonales no slo
es una mezcla compleja de inmunoglobulinas, sino que existe
la posibilidad inherente de que est contaminado por
inmunoglobulinas indeseables, algunas de las cuales pueden
producir datos falsos. Es claro que la capacidad para
seleccionar un solo anticuerpo de tal conjunto de inmunoglobulinas no slo elimina la posibilidad de que se produzcan
resultados falsos por la presencia de anticuerpos
indeseables, sino que tambin podra proporcionar una inmunoglobulina capaz de identificar a un solo eptope.
Afortunadamente, hace unos 15 aos se desarroll un
procedimiento para obtener dichos anticuerpos qumicamente
puros, conocidos como anticuerpos monoclonales.
En colaboracin con Marie-Michle Cordonnier, quien por ese
entonces ocupaba una plaza en la Universidad de G- nova,
y con la asistencia tcnica de Cecile Smith, nos valimos de
este procedimiento para empezar a producir anticuerpos
monoclonales contra fitocromo. Aunque su produccin es
compleja, su principio es sencillo. A partir del bazo de un
ratn inyectado con un antgeno, como el fitocromo, se aslan
clulas que sintetizan y secretan anticuerpos; Estas clulas
se fusionan con clulas mieloma, las que generan

hibridomas', stos no slo conservan la capacidad de

sintetizar y secretar anticuerpos, sino que tambin poseen la
inmortalidad del mieloma. Un paso clave consiste entonces
en aislar una sola clula de hibridoma que produzca un
anticuerpo de inters y cultivarla en grandes cantidades como
lnea celular monoclonal, la que a su vez secreta un solo tipo
de anticuerpo monoclonal. Como un hibridoma puede
conservarse en nitrgeno lquido, el anticuerpo que produce
puede estar disponible en la cantidad deseada durante un
lapso ilimitado.
De las aplicaciones que hemos producido a partir de los
anticuerpos monoclonales destacan dos. En un caso nos
hemos valido de la especificidad por el eptope para examinar
regiones discretas de la molcula de fitocromo, lo que
nos permite aprender algo acerca de sus relaciones estructura/funcin. Esto es posible porque un anticuerpo monoclonal determinado interacta de manera predominante con
slo 6 de 1,130 aminocidos que hay en el polipptido del
fitocromo. En el otro caso hemos utilizado anticuerpos para
hacer la diferencia entre distintos fitocromos de una misma
planta. Aunque todos estos fitocromos estn claramente
relacionados entre s, es posible discriminar entre ellos porque un anticuerpo monoclonal apropiado es sensible a slo
unos cuantos cambios de aminocidos en la misma molcula.
Junto con Marie-Michle Cordonnier (en un principio en
la Universidad de Gnova y despus en CIBA-GEIGY Biotechnology, en North Carolina), Estados Unidos, Sandy Stewart, de CIBA-GEIGY, y Yukio Shimazaki, investigadora de
postdoctorado de mi laboratorio, utilizamos anticuerpos monoclonales para ayudar a elucidar la relacin entre los diferentes fitocromos que abundan ms en plantas cultivadas en
la luz y en la oscuridad. Este trabajo se ampli con el descubrimiento realizado en 1983 por James Tokuhisha, en el laboratorio de Peter Quail, de que estos dos fitocromos son
diferentes. Posteriormente desarrollamos anticuerpos monoclonales dirigidos especficamente contra el fitocromo de
plantas de avena crecidas en la luz. Con la participacin de
Yu-Chie Wang, estudiante graduada en mi laboratorio, MarieMichle Cordonnier y Sandy Stewart, descubrimos que el
fitocromo de plantas de avena verdes es por s mismo
heterogneo; esto es, el uso de anticuerpos monoclonales
propici el descubrimiento de que en una sola planta hay no
slo dos, sino por lo menos tres cromoprotenas fotorreversibles, cada una de las cuales posee las caractersticas
necesarias para recibir el nombre de fitocromo.
Por lo tanto, la aplicacin de anticuerpos al estudio del
fitocromo ha dado lugar a diversos avances importantes,
muchos de los cuales no se hubieran podido hacer de otra
forma. Quiz lo ms emocionante de estos avances es el
descubrimiento de que una misma planta contiene al menos
tres fitocromos, lo que a su vez condujo a varias preguntas
que an no encuentran respuesta. En particular, cul es el
nmero total de fitocromos en un mismo organismo? Este
nmero es mayor a tres? Adems, cada uno de estos
fitocromos posee una funcin biolgica distinta, o cualquiera
de ellos puede tomar el lugar de los otros? Para los que
hemos trabajado por muchos aos con el fitocromo, nos
resulta inherentemente difcil utilizar el trmino fitocromo
como plural (esto es, como fitocromos), sin embargo esto es
lo que debemos hacer por ahora.
Por supuesto, no todo nuestro trabajo ha requerido del
uso de anticuerpos ni los anticuerpos han sido los responsables de todo o incluso la mayora de los avances en el rea
de la fotomorfognesis. No obstante, como todos los mtodos
inmunoqumicos pueden, al menos en principio, aplicarse al
estudio de cualquier antgeno, y como virtualmente cualquier

sustancia que se encuentra en una planta puede ser un

antgeno, es evidente que los anticuerpos son una
herramienta de investigacin invaluable e irremplazable para
cualquier fisilogo vegetal. El hecho de que ste sea el caso
quiz se aprecia mejor mediante el crecimiento exponencial
en los numerosos artculos que describen la aplicacin de
mtodos inmunoqumicos en, por ejemplo, la revista Plant
Physiology. En 1969, cuando empezamos, dichos artculos
eran raros, mientras que en la actualidad son comunes.

cromo, el mRNA para el fitocromo tipo 1 parece ser

inestable (se hidroliza con rapidez), y la mayor parte- de la
protena en el fitocromo del tipo 1 se degrada con rapidez.
Por lo anterior se desprende que en la oscuridad, un
gen que codifica para fitocromo tipo 1 se activa fuertemente, pero en la luz se desactiva. Un hecho interesante es
que la luz que causa esta desactivacin es roja y el propio
fitocromo la absorbe Prr subregula entonces la formacin de
Pr. No se sabe si un Pfr tipo 1 o uno tipo 2 subregula al tipo
1, pero en plntulas de avena la evidencia indica que el
responsable es uno del tipo 2 (Tilomas et al., 1989). En el
ensayo del Dr. James Colbert, incluido en este captulo, se
presenta parte de su investigacin concerniente a como
regula el fitocromo, su propia sntesis.
La proporcin de Pfr respecto a la cantidad total de
fitocromo de ambas formas se denota por <f>:

La luz roja de 667 nm convierte casi el 86% de fitocromo en

Pfr, por lo que <> es 0.86. La luz del rojo lejano superior a
los 720 nm elimina casi todo el Pfr, por lo que <|> se acerca
a cero. An las bajas irradiaciones con luz roja y del rojo
lejano resultan adecuadas para establecer el fotoequilibrio
entre Pr y Pfr, ya que ambas formas absorben estas
longitudes de onda de manera muy eficaz. Con la luz del sol,
o bajo luz incandescente utilizada en cmaras de
crecimiento, la irradiacin de fotones del rojo lejano es slo
ligeramente inferior a la de fotones rojos (vase fig. B-3 del
Apndice B o Fig 20-8). Para la luz solar, la proporcin de
fotones rojos a fotones del rojo lejano es de 1.1 a 1.2. No
obstante, Pr absorbe luz roja con ms eficacia a como Pfr
absorbe luz del rojo lejano; adems, Pr se convierte de un
modo ms eficaz en Pfr a como Pfr se convierte otra vez en
Pr. Por consiguiente, la luz solar acta bsicamente como
fuente de rojo que forma ms Pfr que Pr. El valor de <)> en
la luz solar es de 0.6.

el Fotorreceptor

En plantas etioladas a las que se administra un breve

tratamiento con luz roja, parte del Pfr que se forma desaparece de modo gradual, aun en la oscuridad. Dos
procesos explican este hecho. El primer proceso es la
destruccin, ya que despus de un lapso en la oscuridad ya
no es posible regenerar tanto Pr en los tejidos mediante una
exposicin a la luz del rojo lejano; por ello, la cantidad
total detectable de fitocromo es menor que antes. (Ms
adelante se describe el mecanismo para esta destruccin.)
El segundo proceso es la reversin oscura a Pr, la cual

requiere en general unas cuantas horas. (Cabe destacar el

hecho de que la destruccin y la reversin tambin ocurren
en la luz, pero que sta no las causa directamente.) La
reversin se presenta en la mayor parte de las
monocotiledneas o en cualquiera de las 10 familias de
dicotiledneas que se clasifican

Figura 20-5 Resumen de algunas transformaciones del fitocromo . Las lneas punteadas que indican reversin oscura y
destruccin parece que no ocurren con molculas del tipo 2
Pfr.

con frecuencia como parte del orden Caryophyllales.

Debido a la destruccin y a la reversin, debemos modificar
nuestra idea de que la luz simplemente determina un estado
fotoestacionario reversible entre P y Pfr. Para el fitocromo
tipo 1 y las plntulas cultivadas en la oscuridad, deben
agregarse la reversin y la destruccin (cuando se aplica
cualquiera de stas), como se ilustra en la Fig. 20-5. Sin
embargo, los fitocromos del tipo
2 de plantas verdes parecen ser mucho ms estables)' no
desaparecen en la oscuridad debido a estos procesos de
reversin o destruccin. Adems, quiz como las semillas
tienen en gran parte fitocromo del tipo 2, no hay evidencia
de destruccin oscura en ellas, aun cuando estn hmedas y
el fitocromo pueda sufrir fo- totransformaciones.
En la actualidad se sabe que la degradacin del Pff tipo
1 se efecta mediante un proceso muy selectivo en el que P fr
se une primero a una pequea protena que se conoce como
ubiquitina (Jabben et al., 1989; Pollmann y Wettern, 1989).
La ubiquitina se ha encontrado en todos los cucariontcs
examinados, pero no en procariontes; es una protena
pequea de slo 76 aminocidos cuya secuencia est muy
bien conservada en varios organismos. La unin de la
ubiquitina a Pfr o a. otras protenas las marca para su
degradacin, y para llevar a efecto la degradacin se
requiere de ATP y tres enzimas. Las proteasas reconocen e
hidrolizan entonces las protenas marcadas y liberan
ubiquitina libre.

20.4Criptocromo, azul/UV-A
En 1864; Julius von Sachs, quien observ que el fo- 9
totropismo (vase Seccin 19.4) es causado slo por m
longitudes de onda del azul y del violeta, descubrilos M
efectos de la luz azul sobre las plantas. Desde enton-1 ces,
se han descubierto numerosos efectos de esta luz > en
muchos tipos de plantas y hongos. En un artculo a de
Senger y Schmidt (1986) se muestran los espectros J de
accin para 16 efectos de las radiaciones azul, vioS leta y
del ultravioleta cercano (vase tambin Senger J y Lipson,
1987). El rango del UV cercano consta de Ion- fl gitudes de
onda ligeramente ms cortas que las quedS ojo humano

puede percibir; en general, se le conoce como radiacin

UV-A y abarca de los 400 nm a los 320 nm. (Hay artculos
en que se revisan los efectos de la radiacin UV sobre las
plantas Caldwell, 1981; Well- mann, 1983 y Coohill, 1989 )
Por consiguiente, las reacciones que nos preocupan aqu se
encuentran bsicamente en la regin de los 32 a los 500 nm.
En la Fig. 19-8 se describe un espectro de accin tpico
para una respuesta del criptocromo (fototropismo). Sin
embargo, el espectro de accin y la fluencia (fotones totales
absorbidos) que se requieren para producir una respuesta
vara con el organismo y con la respuesta. Senger y Schmidt
(1986) concluyeron que estaban implicados varios
fotorreceptores al azul y UV-A un tanto diferentes. A todos
stos los llamaremos criptocro- mo; an no se ha
identificado ninguno, lo que hace que la parte cripto de la
palabra sea especialmente apropiada. Como se describi en
la Seccin 19.4, es probable que el criptocromo sea una
flavoprotena (una protena unida a una riboflavina).
Quizs existe asociado a una protena de un citocromo en
membrana plasmtica o estrechamente unido a sta
(revisado por Galland y Senger, 1988 y en dos volmenes
sobre los efectos de la luz azul editados por Senger, 1987).
En algunas secciones subsiguientes de este mismo
captulo se describen varios efectos de la luz absorbida por
el criptocromo; en ocasiones el pigmento activado acta de
manera independiente y a veces refuerza los efectos de P fr o
del receptor UV-B. Cabe advertir que aunque el
criptocromo absorbe radiacin UV-A, el pico ms grande en
el espectro de accin se localiza por lo general en la regin
azul-violeta, cerca de los 450 nm. Asimismo, como son
muchos ms fotones de luz azul y violeta las que inciden
normalmente en las plantas en comparacin con los fotones
UV, la mayor parte de las fotorrespuestas provocadas por el
fitocromo quiz son resultado de longitudes de onda del azul
y violeta, a las que, de aqu en adelante, llamaremos simplemente azul.

20.5
Relaciones Dosis-respuesta
en la fotomorfognesis
Hacia fines de la dcada de 1950, cuando se estaban
descubriendo paulatinamente las propiedades del fitocromo,
se hizo evidente que el espectro de accin para ciertos
procesos que ocurren en plntulas cultivadas en la
oscuridad eran bastante diferentes, dependiendo de si se
haba aplicado luz durante un lapso breve (por lo general
menos de 5 min) o por varias horas.
En exposiciones breves, por ejemplo, la formacin
promovida por la luz del pigmento prpura antociani- na en
plntulas de mostaza blanca (Sinapis alba) presenta un pico
cerca de los 660 nm, donde Pr absorbe de manera ms
eficaz. Sin embargo, cuando se aplican exposiciones de
varias horas, hay un gran pico cerca de los 725 nm, en la
regin del rojo lejano, y un pico ms pequeo en la regin
azul. Asimismo, cuando a plntulas de lechuga etioladas se
les administra prolongados periodos de luz, el alargamiento
del hipoctilo se inhibe (como es el caso para el frijol en la

Fig. 20-1) y de nuevo el espectro de accin tiene un pico

distintivo en la regin del rojo lejano, hacia los 720 nm. Se
presentan otros picos en la regin azul y UV-A, pero en este
caso (y con frecuencia en otros ejemplos) no hay actividad
en la regin del rojo, donde absorbe Pr (Fig. 20-6). A las
respuestas de las plantas que requieren de niveles de
irradiacin relativamente elevados, y que presentan
espectros de accin atpicos'a las respuestas que se observan comnmente en el fitocromo, se les ha llegado a
conocer como reacciones de irradiacin elevada (o respuestas; HIR). En tanto que la mayora de las respuestas del
fitocromo resultan saturadas por energas de luz roja
iguales a 200J m 2 (menos del 1 % de la energa en todas las
longitudes de onda visibles proporcionada por 1 min de luz
solar plena), las HIR requieren de por lo menos 100 veces
ms de energa. (Nota: Para la luz roja, 200 J nr2
corresponden a una fluencia de cerca de 10'3 moles de
fotones por metro cuadrado.) No obstante, como lo sealan
Smith y Whitelam (1990), el trmino HIR es un tanto
inapropiado, ya que la tasa de fluencia (nivel de
irradiacin) que se requiere para causar estas respuestas es
mucho menor que el que proporciona la luz del sol.
En un artculo sobre las HIR, Mancinelli (1980) concluy que, segn la especie y la respuesta sujeta a estudio,
el HIR tiene a menudo tres clases generales de espectros de
accin, en una de ellas existe un pico en na regin
espectral individual (comnmente azul/UV-

longitud de onda (nm)

Figura 20-6 Espectro de accin para la inhibicin de la
elongacin del gancho hipoctilo en plntulas etioladas de
lechuga. Los datos se expresan en relacin con la inhibicin
por la luz azul de 447 nm, designada como 1.0. La luz se
aplic de manera continua a toda la plntula durante 18 h,
comenzando 54 h despus de haber plantado las semillas. La
elongacin del hipoctilo se midi al final del tratamiento con
luz. (De Hartmann, 1967.)

ENSAYO 20-3

Los Genes del Fitocromo y su Expresin:

Trabajando en la Oscuridad

James T. Colbert
El Dr. Jim Colbert ingres a la escuela de graduados en la
University of Wisconsin con la intencin de estudiar anatoma
vegeta!. Despus de completar el grado de maestra
investigando la anatoma vascular de la caa de azcar, la
emocin por el nuevo campo de la biologa molecular de
plantas le indujo a cambiar su orientacin en la investigacin y
estudiar la biologa molecular del fitocromo. En este ensayo
nos cuenta acerca de su participacin en el aislamiento de tos
primeros clones de fitocromo y en subsecuentes estudios sobre
la regulacin de la expresin del gen del fitocromo. En la
actualidad es asistente de profesor de Botnica en la lotea State
University, donde adems de continuar su investigacin sobre
el fitocromo ha impartido cursos de botnica general, fisiologa
vegetal y biologa molecular de plantas.
La importancia del fitocromo en la regulacin del desarrollo vegetal ha sido bien conocida por muchos aos. Sin
embargo hasta hace poco, no saba mucho acerca de los
genes que codifican para la molcula proteica del fitocromo.
En el verano de 1981 tuve la buena fortuna de iniciarme
como estudiante graduado en el laboratorio del Dr.
Peter Quail, en la University of Wisconsin. Peter buscaba
caracterizar el fitocromo aislando sus genes y determinando
su secuencia de nucletidos como un medio para entender el
mecanismo de accin del fitocromo. Como parte de mi
programa de graduacin trabaj en el aislamiento de clones
de DNA IcDNA) de fitocromo. Esperbamos que tales clones
proporcionaran tanto un punto de inicio para la caracterizacin molecular del fitocromo, as como pistas acerca de
la manera en que el fitocromo regula el desarrollo del vegetal.
Junto con un cientfico de postdoctorado, Howard Hershey, y
otro estudiante graduado, James Lissemore, pas los
siguientes dos aos tratando de producir e identificar clones
cDNA de fitocromo.
Elegimos trabajar con plntulas de avena cultivadas en
la oscuridad (etioladas) porque se saba que estas plntulas
poseen grandes cantidades de proteina del fitocromo. Advertimos que el mRNA del fitocromo tambin abundaba en
plntulas de avena etioladas. Esta observacin dio por resultado que yo pasase una gran cantidad de tiempo trabajando en la oscuridad, y condujo a la preparacin de nuestra
biblioteca de cDNA [vase el Cap. 24] a partir de plntulas de
avena etioladas. Para depurar nuestra biblioteca de cDNA
con clones de fitocromo, primero seleccionamos clones cDNA
que codificaran clases de mRNA que prevaleciesen ms en
plntulas etioladas que en plntulas tratadas con luz. Luego,
nos valimos de traslacin in vitro con aminocidos radiactivos
para averiguar qu cDNAs correspondan los mRNAs que
codificaban para el fitocromo. Mi principal responsabilidad
inclua realizar las traslaciones in vitro, inmunoprecipitar los

polipptidos sintetizados in vitro, correr electroforesis de los

polipptidos in- munoprecipitados en geles de poliacrilamida
y analizar los geles mediante fluorografa. Revelar la pelcula
de rayos X que mostraba los resultados del anlisis
fluorogrfico fue algo emocionante porque cada vez que lo
haca saba que haba una probabilidad de detectar un clon
de fitocromo. El da que revel la primera fluorografa que
mostraba que uno de nuestros clones cDNA codificaba para
fitocromo, corr fuera del cuarto oscuro y baj a la sala para
encontrar a Peter y Howard. Fue un momento emocionante
que qued grabado con claridad en mi memoria; habamos
descubierto el primer clon de fitocromo. Despus result que
este primer clon de cDNA era muy pequeo y por s mismo
poco til para la caracterizacin molecular del fitocromo, pero
nos permiti aislar clones de fitocromo adicionales con ms
facilidad.
Despus de obtener clones del fitocromo, comenzamos
a investigar la regulacin de la expresin gnica del fitocromo. Estbamos interesados en la regulacin de la expresin
gnica del fitocromo porque tal pareca que un gen que regulaba numerosos aspectos del desarrollo de la planta podra
a su vez ser cuidadosamente regulado. Pudimos demostrar
que la cantidad de mRNA para fitocromo en

UV-A). Ejemplos de esta clase incluyen la promocin de la

sntesis de antocianina en plntulas de sorgo cultivadas en
la oscuridad, el desdoblamiento de hojas de plntulas de
arroz, el enrollamiento en tendrilos en plntulas de chcharo
y los fototropismos. En otra clase de espectro de accin hay
picos en dos regiones espectrales (casi siempre azul/UV-A y
rojo). Este tipo de respuesta se observa en plntulas que han
sido cultivadas bajo la luz de manera continua o por algn
tiempo en la oscuridad, y en seguida bajo la luz para
verdeci- miento y desetiolacin. En el tercer tipo general de
espectro de accin, tres regiones espectrales presentan
actividad (azul/UV-A, rojo y rojo lejano); esta respuesta es
caracterstica de muchas plntulas etioladas. El espectro de
accin HIR para la lechuga que aparece en la Fig. 20-6
parece poco usual ya que, aunque presenta picos en slo
dos regiones espectrales, la luz roja no est incluida pero la
del rojo lejano s. No obstante, es ms comn que la luz del
rojo lejano en vez de la roja acte en plntulas crecidas en
la oscuridad. Cuando las
plntulas de avena etioladas se disminua de manera drstica
por la luz roja. La subregulacin de la abundancia de mRNA
para fitocromo inducida por la luz roja era reversible medante
exposicin de las plntulas a luz del rojo lejano, por lo que
concluimos que, por lo menos en plntulas de avena, el
fitocromo regula la abundancia de su propio mRNA. En
seguida, James Lissemore, Alan Christensen (cientfico de
postdoctorado) y yo demostramos que la produccin de P[r
por la luz roja da por resultado una disminucin en la
transcripcin de los genes del fitocromo. La disminucin en la
transcripcin es marcadamente rpida, siendo detectable
dentro de los 5 min posteriores a la exposicin a la luz roja de
plntulas de avena etioladas. Encontr muy intrigante (y an
me lo parece) el hecho de que el fitocromo, un fotorreceptor
que regula numerosos eventos durante el desarrollo del
vegetal, incluyendo la expresin de otros genes, tambin
regula la expresin de sus propios genes.
En la actualidad los genes que codifican para el fitocromo se han clonado a partir de varias especies vegetales, incluyendo calabacn, chcharo, arroz, maz y Arabidopsis.

Desafortunadamente, la determinacin de las secuencias de

hucletidos de estos genes para el fitocromo no ha permitido
elucidar la funcin del fitocromo. No obstante, el hecho de
conocer tanto las secuencias de nucletidos como las
secuencias derivadas de aminocidos ha permitido la determinacin de aqullas regiones de la molcula de fitocromo
que se han conservado muy bien a lo largo de la evolucin y
que por lo tanto, es probable que sean importantes para el
funcionamiento del fitocromo. Para una protena que tiene
una participacin crucial en la regulacin del desarrollo de la
planta, la semejanza de la secuencia general entre fitocromos de dicotiledneas y de monocotiledneas ha resultado ser sorprendentemente pequea. Por supuesto,
algunas regiones (por ejemplo, la regin que se une al cromforo) presentan secuencias muy similares. Otra contribucin de los intentos por caracterizar el fitocromo a nivel
molecular ha sido el descubrimiento, de manera notable
en el trabajo efectuado por Robert Sharrock y Peter Quail con
Arabidopsis , de que se presentan varios genes distintos
para fitocromo en por lo menos algunas especies de plantas.
Sin embargo, an est por determinarse si la mol-

plntulas se exponen a la luz y se ponen verdes (con lo que

contienen fitocromo tipo 1 mucho menos estable), por lo
general pierden la mayor parte o toda su sensibilidad a la
luz del rojo lejano para HIR (aunque no para otros procesos
fotomorfognicos). Adems de su necesidad de niveles de
irradiacin elevados, HIR se caracteriza tambin por
carecer de reversibilidad al rojo/rojo lejano y no tener
reciprocidad entre tiempo y nivel de irradiacin. (La
reciprocidad se explica en (a Seccin 19.4 )
cula de fitocromo producida por estos genes desempea
funciones especiales en la planta.
La subregulacin de la abundancia del mRNA para fitocromo por parte de la luz roja ocurre en la mayor parte de las
especies vegetales examinadas. Nuestro actual inters de
investigacin es comprender la manera en que la abundancia
del mRNA para fitocromo disminuye con rapidez en plntulas
de avena etioladas tratadas con luz roja. Aunque se sabe que
la transcripcin de los genes para fitocromo en avena
disminuye debido a la accin de la luz roja, podra esperarse
que la abundancia de mRNA para fitocromo no disminuya con
rapidez, a menos que el mRNA que codifica para el fitocromo
sea inherentemente inestable o se desestabilice como
resultado de la produccin de Pfr La evidencia proveniente de
un amplio rango de organismos ha demostrado que algunas
especies de mRNA son mucho ms o mucho'menos estables
que el mRNA promedio. Resulta claro que la estabilidad
relativa de una especie de mRNA en particular tiene una
participacin importante en la determinacin de la cantidad
de este mRNA en la clula.
La evidencia de que disponemos en la actualidad apoya
la dea de que el mRNA para fitocromo en avena es inherentemente inestable. Es probable que la maquinaria celular
responsable de la degradacin selectiva de molculas de
mRNA reconozca al mRNA que codifica para fitocromo como
una especie de mRNA que debe ser degradada con rapidez.
Poco se sabe acerca de por qu algunas especies de mRNA
son mucho menos estables que otras, pero es probable que
la informacin que especifica la estabilidad relativa de una
especie de mRNA en particular pueda integrarse en la
secuencia nucleotdica de las molculas de mRNA.
Quisiramos saber qu parte(s) de la molcula de mRNA
para el fitocromo causa la degradacin relativamente rpida
de este mRNA. Esperamos que nuestra investigacin con-

duzca no slo a una mejor comprensin de cmo est regulada la expresin gentica del fitocromo, sino tambin a
"hacer luz" sobre el problema ms general de cmo regulan
la estabilidad del mRNA. las clulas vegetales [Nota del
autor: Varios de los esfuerzos de investigacin realizados por
el Dr. Colbert y descritos aqu estn publicados en sus dos
artculos enlistados en la Seccin de Referencias de este
texto.]

Hans Mohr (1986) concluy que para algunas de las

respuestas presentes en plntulas de angiospermas etioladas
la activacin del criptocromo (casi siempre para provocar
HIR) es necesaria para las plntulas a fin de que adquieran
la capacidad de responder a la luz roja que acta mediante
el fitocromo; esto es, el criptocromo permite que Pfr se
exprese por completo. En una cuidadosa'revisin de varios
pigmentos implicados en la fotomorfognesis, Mancinelli
(1989) lleg a una conclusin parecida. Lo que esto puede
significar para las plantas silvestres es que tanto el
criptocromo como el fitocromo contribuyen con frecuencia a
que la fotomor- fognesis se lleve a cabo. Mohr (1986)
sugiri que el hecho de que una planta reconozca una gran
porcin del espectro solar, utilizando tanto el criptocromo
como el fitocromo, resulta ventajoso. Aunque esto pueda ser
cierto, en muchos casos an no entendemos en qu medida
el propio fitocromo absorbe las longitudes de onda del azul
y UV-A que provocan las HIR. Adems, en plntulas
etioladas la frecuente carencia de efecto por parte de la luz
roja en las HIR pero con accin en la regin del rojo lejano,
cerca de los 720 nm, en principio parece difcil de explicar
en trminos de una respuesta del fitocromo.
Figura 20-7 Efectos de varios flujos de luz roja sobre la
elongacin del coleptilo y el mesoctilo de plntulas de
avena cultivadas en la oscuridad. (De Mandoli y Briggs,
1981.)

Para la produccin de antocianina en la mostaza blanca, Hartmann (1967) demostr que el pico cercano a los
720 nm no resulta de la accin de Pfr. Para que se presenten
las HIR, Pfr debe estar presente por intervalos de tiempo
relativamente largos, en general muchas horas, pero debe
estar presente en cantidades relativamente bajas (un escaso
porcentaje del fitocromo total). Esta cantidad de Pfr no
puede persistir en plntulas etioladas tratadas de manera

continua con luz roja, ya que el Pfr que se forma por la

accin de la luz roja se destruye, adems de que se revierte
poco a poco a Pr. Por otra parte, como ya se describi, la
luz roja interrumpe de un modo eficaz el aporte de Pr tipo 1,
forma que predomina en plntulas etioladas, por lo que bajo
una luz roja continua el Pfr degenera, se destruye y tambin
se forma con menor rapidez. Sin embargo, con luz continua
del rojo lejano, siempre se presenta una cantidad baja de
Pfr, ya que Pr absorbe cierta cantidad de luz del rojo lejano
y se convierte a Pfr. Este Pfr persiste y es funcional, por lo
que se observan respuestas a luz del rojo lejano mediante
HIR en plntulas etioladas. En plntulas cultivadas bajo la
luz, sin embargo, la luz roja es ms eficaz que la del rojo
lejano en las HIR, tal vez porque el Pfr del tipo 2 es ms
estable y a que la luz roja forma mucho ms de ste de lo
que se forma con luz roja (Kronenberg y Kendrik, 1986;
Smith y Whitelam, 1990). La importancia de las HIR en
semillas y plantas cultivadas bajo la luz, que en general no
se ha comprendido bien, se describir en secciones
subsecuentes.
LAS plantas cultivadas en la oscuridad responden no
slo a tasas de fluencia bajas y elevadas, sino tambin a lo
que ha llegado a conocerse como respuestas a fluencias
muy bajas (VLFR). Una de stas (la inhibicin de la
elongacin del mesoctilo o primer internudo en plntulas
de avena, cuya morfologa se describe en la Seccin 20.7),
aunque la descubri Blaauw et al. (1968), la investig Dina
Mnndoli en el laboratorio de Wins- low R. Briggs situado
en la Carnegie Institution of Washington, en California,
quien resalt los aspectos cuantitativos de dos VLFR y lo
comn que pueden ser estos efectos (vase Mandoli y
Briggs, 1981). Observaron que muchos cientficos que
estudiaban las respuestas del fitocromo utilizaban luces de
seguridad verde cuando humedecan o manipulaban las
plantas. Para muchas respuestas esto no representaba
problema alguno, pero tanto el mesoctilo como el
coleptifo de plantas de avena son sensibles incluso a las
luces de seguridad verdes Mandoli germin y cultiv
plantas de avena en la oscuridad durante 4.3 das y despus
las ilumin, de manera automatizada y durante diversos intervalos de tiempo, con luz roja, verde, o del rojo lejano. El
crecimiento se cuantific 1 da despus de iniciar el
tratamiento con luz. Todas las longitudes de onda inhibieron
el alargamiento del mesoctilo y promovieron el del
coleptilo, pero la luz roja fue, en mucho, la ms eficaz para
provocar ambas respuestas. En la Fig 20-7 se grafican las
amplias curvas de fluencia-respuesta para la luz roja.
Las curvas para las dos respuestas casi son imgenes
especulares una de otra, y presentan dos fases distintivas o
regiones de efecto (separadas por una meseta) a medida que
se incrementa la fluencia de manera logartmica a lo largo
de 11 rdenes de magnitud. La regin ms sensible presente
para ambas respuestas tiene un requerimiento de fluencia
total umbral de cerca de 1010 moles de fotones por metro
cuadrado de rea superficial expuesta (equivalente a los

fotones visibles en casi un segundo de reflejo lunar pleno);

esta regin est saturada unas 3,000 veces ms que dicha
fluencia. Esta podra ser la respuesta vegetal ms sensible
que se conoce. Estas VLFR no pueden nulificarse por luz del
rojo lejano porque sta no tiene efecto alguno en fluencias
muy bajas, pero en fluencias mayores provoca la misma
respuesta; esta semejanza en la respuesta quiz se presenta
porque la luz del rojo lejano forma cierta cantidad de Pfr,
como ya se mencion. La segunda fase para la respuesta de
cada rgano requiere de una fluencia casi 10,000 veces
mayor. Estas respuestas a fluencias bajas (LFR) representan
ms bien respuestas tpicas del fitocromo en trminos de
requerimientos fo- tnicos, y se nulifican por la accin de la
luz del rojo lejano.
Cuando Mandoli y Briggs (1981) incrementaron la
fluencia ms all de lo necesario, para saturar la LFR, se
present otra meseta en la que no se llevaba a efecto
ninguna inhibicin posterior; esto es, ninguna HIR fue
evidente. Sin embargo, Schferei/. (1982) observaron una
HIR en experimentos en los que se proporcion luz roja o
del rojo lejano de manera continua, durante un periodo de
24 h, incluso cuando la fluencia total no era mayor que en
la regin de la meseta anterior que aparece en la Fig. 20-7.
(Ya sealamos que muchas HIR requieren de largos
periodos de exposicin.)
Todos estos resultados son importantes porque
muestran tres regiones de sensibilidad cuantitativamente
distintas y porque explican la razn de que algunas otras
VLFR no puedan nulificarse con luz del rojo lejano.
Adems, estos resultados obligan a los investigadores a
buscar ms VLFR, procurando evitar luces de seguridad
verdes que puedan saturar estas respuestas incluso antes de
que se inicie el experimento. Segn un agudo comentario de
Mandoli, se requiere de una oscuridad grado reactivo!
Conociendo estas propiedadesdel fitocromo y del
criptocromo, consideremos ahora otros procesos que
controlan, comenzando con la germinacin de la semilla.

20.6
La Participacin de la Luz
en la Germinacin de la Semilla

Ejemplos de Germinacin que dependen de la luz

Es probable que la importancia de la luz para la germinacin de ciertas semillas se conozca desde hace cientos de
aos, pero el primer estudio completo lo elabor Kinzel en
1907 (Rollin, 1972). Kinzel inform que de entre 964
especies, 672 mostraron estimulacin en la germinacin en
presencia de la luz. En un estudio reciente de plantas
perennes y herbceas anuales de regiones templadas (todas
ellas especies no cultivadas), Baskin y Baskin (1988)
observaron que de entre 142 especies, la germinacin de
107 era promovida por la luz, 32 no mostraron respuesta
alguna y slo tres presentaron inhibicin ante la luz.
Las semillas de la mayor parte de las especies que
responden a la luz no estn domesticadas y son ricas en
grasas, pero son tan pequeas que sus plntulas a veces no
alcanzan la luz en la superficie del suelo antes de que se

agoten sus reservas alimenticias. La mayor parte de

nuestras semillas cultivadas no requieren de luz, sin duda a
causa de la seleccin humana en contra de un
requerimiento de luz. Las semillas de algunas especies
silvestres presentan incluso inhibicin de la germinacin
por la luz, como lo observaron tanto Kinzel como los
Baskin, a veces por la luz azul, pero sobre todo por la
presencia de luz del rojo lejano (Frankland y Taylorson,
1983). Kinzel encontr que a 258 de las 964 especies que
estudi las inhiba la luz del sol relativa a la oscuridad. Las
longitudes de onda del rojo lejano provenientes del sol son
casi siempre las ms inhibitorias, quiz porque hacen
disminuir la cantidad de Pfr en la semilla a un nivel inferior
al actual, que es el necesario para la germinacin. Aunque
en ocasiones la luz azul tambin es inhibitoria, no se sabe
con certeza si la absorbe el fitocromo o el criptocromo. Son
pocas las investigaciones que se han hecho sobre este tema,
por lo que aqu nos concentraremos en lo que parecen ser
los efectos en que participa el fitocromo.
Se dice que las semillas que requieren de luz para
germinar son fotolatentes. Como se trata en la Seccin 22.3,
utilizamos el trmino latencia como una descripcin general
de las semillas o yemas que no crecen cuando se las expone
a una aereacin y humedad adecuadas y a una temperatura
favorable para el crecimiento. A las semillas que germinan
en la oscuridad pero son inhibidas por la luz se las
considera que entran en estado latente despus de
exponerlas a la luz; esta clasificacin se utiliza bsicamente
en los excelentes libros sobre fisiologa de semillas escritos
por Bewlwy y Black (1982, 1985). Sin embargo, otros
autores definen como latente a una semilla de chcharo
seca, pero viva, que slo necesita de agua y aire para
germinar a temperatura ambiente; es evidente la marcada
confusin y desacuerdo que prevalece en la terminologa
concerniente a la latencia en semillas, yemas, tubrculos y
cormos.
Lang et al. (1987) enlistan 54 trminos que se han utilizado
para describir la latencia, de los cuales los ms comunes
son reposo y quiescencia. Otros muchos trminos implican
la palabra latencia seguida de un adjetivo tal como
primaria, secundaria, innata, etctera. Lang et al
propugnaban de manera razonable por una uniformidad en
la terminologa y sugirieron el uso de slo tres trminos
nuevos (endolatencia, ectolatencia y parala leticia). Aunque
esta terminologa puede ser til para algunos casos de
latencia, sus ejemplos para latencia de semillas (Tabla 4 de
Lang et al., 1987) a menudo son poco satisfactorios. Para
utilizar su terminologa, necesitamos comprender mucho
ms acerca de las causas de la latencia y cmo se
interrumpe. Esta necesidad de ms informacin se aplica de
hecho a la fo- tolatencia, tema que estudiamos a
continuacin.

Interacciones de la luz y la Temperatura en

Semillas Fotolatentes
Un aspecto adicional de los efectos de la luz sobre la
germinacin es una interaccin con la temperatura. La
temperatura casi no produce efectos en las interconversiones fotoqumicas de Pr y Pfr, pero las reacciones
qumicas controladas por Pfr y que influyen en su destruccin son muy sensibles a la temperatura. Un ejemplo de
control crucial determinado por la temperatura se presenta
en semillas de lechuga de la variedad Grand Rapids (,tatuca
sativa) y lepidio (Lepidium virgina- tum). En general, la luz
promueve su germinacin (Fig 20-2), pero la exposicin
prolongada a 35C, despus de un solo tratamiento con luz,
mantiene su latencia. De forma anloga, las semillas de
lechuga de la variedad Great Lakes casi no requieren de luz
para germinar; pero si se empapan a 35C, se vuelven
fotolatentes y entonces slo germinan con luz y a esa
temperatura o a una menor. Por otra parte, las
temperaturas fras, de 10 a 15C, permiten a la lechuga
Grand Rapids (por lo menos en algunos lotes de semillas)
germinar incluso sin un tratamiento con luz. Otro ejemplo
ms es el pasto azul Kentucky (Poa pratensis), en el que la
alternancia de temperaturas entre 15C y 2SC sustituye a
la luz como causante de la germinacin.
La evidencia indica que las respuestas a la temperatura como en los ejemplos citados en ocasiones se deben a
efectos de la temperatura sobre las cantidades de Pfr en las
semillas. Las temperaturas elevadas ocasionan la
disminucin del nivel de Pfr en algunas especies al
incrementar su velocidad de reversin a Pr, aunque en
general no se han evaluado otros factores. En general se ha
ignorado la destruccin de Pfr en semillas debido a que
dicha destruccin es poco comn o en general est ausente
(quiz a causa del fitocromo tipo 2 estable, como se
mencion en la Seccin 20.3). Quiz muchos de los efectos
de la temperatura no tengan nada que ver con los cambios
en las cantidades de Pfr en las semillas (por ejemplo, cuando
lechuga de la variedad Grand Rapids germina en la
oscuridad a 10 o 15C). Hay otras dos posibilidades: una es
que ciertas temperaturas incrementan la sensibilidad y
permiten que incluso cantidades muy pequeas de Pfr
(formado y atrapado por desecacin durante la maduracin
de la semilla) acten; otra es que ciertas temperaturas simplemente provocan las mismas reacciones bioqumicas que
las que causa Pfr. An no se comprenden estas reacciones
bioqumicas, pero la evidencia de la participacin de las
giberelinas se describe en una seccin posterior de este
captulo.
Tanto las semillas fotolatentes como las que no lo son,
por lo general se empapan e hinchan, a menos que sus
cubiertas seminales impidan la captacin de agua. Incluso
las semillas muertas pueden dilatarse. Pero slo las
semillas no latentes continan absorbiendo agua y
creciendo despus de que se ha completado la absorcin

(despus de que sus coloides se han hidratado por

completo). La latencia se rompe por medio de la luz slo
cuando ias semillas estn parcial o totalmente saturadas. El
tiempo que se requiere para la saturacin vara de slo una
hora a casi dos semanas, lo que depende de cun
permeables sean las cubiertas de la semilla o el fruto y del
tamao de la semilla. Slo entonces Pr se hidrata por
completo para transformarse a Pfr. En las semillas que
sobreviven muchos aos en el suelo, Pr es estable y slo
aguarda la combinacin adecuada de humedad, luz y
temperatura para volverse Pfr y dar origen a la
germinacin. Cuando las semillas de lechuga de la variedad
Grand Rapids se saturan, se exponen a la luz para formar
Pfr y luego se deshidratan de inmediato, germinarn en la
oscuridad al volverlas a humedecer, lo que llega a ocurrir
en un plazo de hasta un ao. Esto demuestra que Pfr es
estable en semillas secas por largos periodos. El hecho de
que este Pfr sea estable en semillas secas tambin se
demuestra por la necesidad, de las semillas de lechuga, de
un tratamiento de luz-oscuridad despus de que se secan
bajo luz del infrarrojo lejano. Una implicacin de la
estabilidad de Pr y Pfr es que si una semilla requiere de luz
para germinar depender de la cantidad de Pfr que se haya
producido en ella durante la maduracin en la planta
madre.
La cantidad de clorofila que cubre al embrin cuando
madura la semilla es de especial importancia en la
determinacin de si las semillas de una determinada especie
sern o no fotolatentes (Cresswell y Grime, 1981). En
general, los embriones que permanecen cubiertos durante la
maduracin, por tejidos maternos que contienen cantidades
elevadas de clorofila, requieren de luz para germinar,
mientras que los que estn cubiertos por tejidos maternos
con poca o sin clorofila no la necesitan. Al parecer, la razn
de esto es que la clorofila absorbe las longitudes de onda
del rojo e impide la formacin de Pfr en los embriones en
maduracin, por lo Que las semillas maduras (de las que ha
desaparecido la mayor parte de la clorofila) necesitarn
despus de longitudes de onda del rojo para promover la
germinacin.
En algunas especies (por ejemplo, lechuga, Cheno- podium
lbum, Portulacea oleraceae y Carrichtera an- nua); la
duracin relativa del da y la noche durante la maduracin
tambin influye en la fotolatencia; los das largos casi
siempre favorecen la fotolatencia, en tanto que los das
cortos favorecen a las semillas no latentes (Beweley y Black,
1982). En Chenopodium, los das largos previos o
simultneos al desarrollo de la semilla incrementan la
necesidad de luz roja de las semillas, pues aumentan el
grosor de la cubierta seminal; sin embargo en otras
especies se desconoce la razn de los efectos de la duracin
del da.

Aspectos Ecolgicos de la Fotolatencia en las Semillas

Qu posibles beneficios ecolgicos trae la sensibilidad a la
luz a las semillas que descansan en el humus, cerca de la
superficie del suelo? Con frecuencia, las respuestas a este
tipo de preguntas implican cierta especulacin, como es el
caso de las que se presentan aqu. Para las semillas
enterradas cuya germinacin es promovida por la luz, la
germinacin cuando estn parcialmente descubiertas casi
asegura que las plntulas sern capaces de fotosintetizar,
crecer y perpetuar la especie. La necesidad de luz por parte
de las semillas enterradas puede distribuir la germinacin a
lo largo de varios aos, lo que ayuda a perpetuar la especie,
ya que slo una fraccin de las semillas que estn en el
suelo pueden ser perturbadas y quedar expuestas a la luz en
una temporada determinada. De otra forma, un ao desfavorable para el crecimiento podra destruir la mayor
parte de las plantas. Para semillas cuya germinacin es
inhibida por la luz, la germinacin se impide hasta que
estn bien cubiertas por el humus, que quiz es cuando
podrn disponer de suficiente agua para crecer. Ko- 11er
(1969) describi dos especies inhibidas por la luz que
habitan suelos de arena gruesa del desierto Negev, en
Israel, en los que la germinacin de las especies no
prospera a menos que las semillas estn bien enterradas, ya
que la humedad es ms plena bajo el suelo que en la
superficie.
Otra idea es que el fitocromo proporciona a las semillas una seal que indica si estn cubiertas por un dosel
de otras plantas o si hay una rea despejada. Esta
posibilidad la han estudiado ampliamente los especialistas
de la ecologa fisiolgica. La idea surgi a partir de dos
hechos. En primer lugar, la luz del rojo lejano casi siempre
inhibe la germinacin de semillas que requieren de luz (e
incluso de semillas que germinan moderadamente bien en la
oscuridad). En la naturaleza esto es una HIR. En segundo
lugar, las hojas que hay en un dosel transmiten mucho ms
luz del rojo lejano que luz roja. La mayor parte de las
longitudes de onda del azul, rojo y algunas del verde son
eliminadas por las hojas a travs de la fotosntesis y la
reflectancia, pero la mayor parte de la luz del infrarrojo
lejano llega hasta las semillas que estn debajo y convierte
su Pfr activo a Pr inactivo. En la Fig. 20-8 se ilustra la
distribucin espectral de la radiacin encima y debajo del
dosel en un

longitud de onda (nm)

Figura 20-8 Influencia del sombreado en las longitudes de
onda solares que se presentan en varias reas de un campo
de remolacha. Dentro de las hileras (las dos curvas de abajo)
hay mucho menor atenuacin de la luz del rojo lejano que de
otras longitudes de onda, por lo que las plantas sombreadas
contienen una proporcin superior de fitocromo en la forma Pr
que las plantas que no reciben sombra. (De Holmes y Smith,
1975.)

campo de remolacha. La curva inferior, para la radiacin

filtrada por las hojas (nivel del suelo, en hileras) muestra un
pico pequeo de transmisin en la regin del verde (540
nm) y uno mucho mayor en la regin del rojo lejano. Bajo
dicho dosel, no ms del 10% del fitocromo total podra
existir como Pfr (esto es, <|> = 0.10). Si las semillas
maduran en una planta bajo un dosel que transmite una
elevada proporcin de luz del rojo lejano a luz roja, es
posible que requieran de luz directa del sol para formar Pfr
adicional antes de que puedan germinar. En un bosque,
muchas semillas que requieren de cantidades relativamente
elevadas de Pfr quiz nunca broten, a menos que un
incendio, la muerte de rboles viejos o la extraccin de
madera eliminen el dosel. En este sentido, parece que las
semillas que se encuentran en suelos de bosques siempre
resultan especialmente afectadas, pero quiz las semillas de
bosques deciduos tambin resultan afectadas en algunos
climas, lo que depende del momento en que se desarrollan
las hojas en relacin con las necesidades de luz y
temperatura por parte de las semillas estn debajo. El
efecto de filtracin d la luz de Ios-doseles vegetales
tambin es importante para la agricultura debido a que la
germinacin de muchas semillas de hierbas es promovida
por la luz solar directa, pero inhibida por la luz filtrada por

plantas cultivadas que se han desarrollado por encima de

ellas. Al respecto se han examinado cientos de especies
(revisado por Bewley y Black, 1982; Frankland y Taylorson,
1983).
En trminos ecolgicos, la sensibilidad a la luz por
parte de las semillas de especies que viven en condiciones
de sombra es diferente de la de las especies precursoras que
viven en reas ms abiertas (Grime, 1979, 1981; Bewley y
Black, 1982). Como el lector podr suponer, las semillas de
especies que viven en condiciones de sombra las inhibe
menos la luz del rojo lejano transmitida por los doseles
vegetales que las que invaden reas ms abiertas.

Es el Fitocromo el Unico Pigmento Activo en la

Germinacin?
Aunque al fitocromo se le atribuyen con frecuencia efectos
inhibitorios y de promocin por parte de la radiacin del
rojo lejano y de la radiacin azul, algunos resultados son
difciles d interpretar de esta forma. En el tanaceto
(Phacelia tanacetifolia), la germinacin es suprimida no
slo por periodos prolongados de luz roja y luz azul, sino
tambin por luz roja prolongada, todo lo cual acta a travs
del sistema HIR. Si slo Pfr tiene importancia para permitir
la germinacin, por qu tienen las longitudes de onda que
causar valores <)> muy diferentes, todos inhibitorios? En
gran medida, se desconocen las respuestas.
An no se entiende la manera en que las HIR provocadas por la luz azul o la del rojo lejano inhiben la germinacin. La mayora de quienes estudian las semillas ha
pasado por alto los efectos de la luz azul, en parte porque el
criptocromo absorbe de manera preferente la luz azul y a
que se sabe muy poco de este pigmento, en parte porque
cada forma de fitocromo absorbe luz azul en cierta medida
(Fig. 20-3a), y en parte porque las cubiertas seminales y del
fruto absorben mucho ms longitudes de onda del azul que
las rojo o del rojo lejano, con lo que gran parte de la luz
azul nunca llega al embrin. Todos estos factores dificultan
la posibilidad de evaluar en qu medida participan el
criptocromo y el fitocromo en la mediacin de los efectos de
la luz azul sobre la germinacin de semillas de cualquier especie. A pesar de ello, hay evidencia de que el criptocromo
contribuye a la promocin de la germinacin a niveles bajos
de irradiacin de luz azul (Small et al., 1979).
Se han estudiado mucho ms las reacciones a irradiacin elevada provocadas por luz del rojo lejano que los
efectos de la luz azul. Todo resulta de la absorcin por parte
del fitocromo, aun cuando el pico del espectro de accin
casi siempre se encuentra cerca de los 720 nm, y no en los
730 nm, donde P,r presenta absorcin mxima (Frankland y
Taylorson, 1983; Frankland, 1986; Cone y Kendrick, 1986).
Hay tres importantes razones por las que estos efectos no
pueden explicarse simplemente mediante la eliminacin de
Pfr, necesaria para la germinacin. Primero, el pico del
espectro de accin es 10 nm ms corto que el pico de
absorcin de 730 nm para Pfr. En segundo lugar, las

irradiaciones elevadas que dan proporciones muy diferentes

de ^ (y niveles de Pfr) son todas inhibitorias; para el
tanaceto incluso la luz roja es inhibitoria, como ya se
mencion. Por ltimo las, irradiancias elevadas son
inhibitorias incluso despus de que lia finalizado el efecto
de un tratamiento previo con luz roja de baja irradiancia
que promueve la germinacin (al provocar formacin de
Pfr); esto es, la formacin de Ptr por accin de la luz roja
ocurre al inicio del proceso de germinacin y los efectos de
irradiacin elevada no se advierten sino mucho despus,
justo antes d que la radcula emerja de la testa de la
semilla. An no >se entienden estos efectos. Es claro que
hay que aprender mucho ms acerca del fitocromo antes de
que podamos comprender la participacin de los pigmentos
en la germinacin.

La naturaleza de b fotolatencia

Por el momento ignoraremos los efectos inhibitorios de

las T IR y regresaremos a la promocin de la germinacin
debida a los efectos de las bajas irradiaciones (LFR). Dado
que Pfr hace que germinen semillas foto- latentes, como la
lechuga, por qu no germinan en su ausencia? Para
responder esta pregunta es esencial identificar la parte de la
semilla donde debe formarse Pfr.
Este problema se abord en semillas de lechuga cubriendo con papel de aluminio de manera separada los
tejidos de cotiledones y del hipoctilo-radcula antes de
exponerlos a luz roja o del rojo lejano (Ikuma y Thi- mann,
1959). Tanto la luz roja como la del rojo lejano resultaron
ser mucho ms eficaces cuando eran absorbidas por la
regin del hipoctilo-radcula que cuando las absorban los
cotiledones, lo que indica que la formacin de Pfr es
esencial en las clulas que de hecho estimulan y causan la
germinacin. Adems, Pfr, el que por s mismo no puede
moverse de una clula a otra, al parecer no causa
movimiento de algn promotor del crecimiento de los
cotiledones a la radcula. (La absorcin de luz por parte de
los cotiledones estimul un poco la germinacin, pero es
probable que esta absorcin haya dado por resultado la
dispersin de luz hacia la regin del hipoctilo-radcula.)
La luz se esparce con facilidad a lo largo de numerosos
intervalos celulares en partes vegetales, incluyendo semillas
de lechuga, como se muestra en un artculo de Vogelmann
(1988) con sondas de fibras pticas, mismo tema que revisa
Vogelmann (1989). A partir de experimentos si-

Figura 20-9 Estimulacin del crecimiento por la luz roja en

embriones descubiertos de semillas de lechuga. Las semillas
se sumergieron en agua destilada durante 3.5 h; luego, a
algunas se les aplic un tratamiento de 10 min con luz roja.
Se elimin el endospermo, la cubierta seminal y la del fruto
bajo una luz de seguridad verde, y se midi el crecimiento
(cuyo monitoreo cuantfic la asimilacin de agua) en los
intervalos de tiempo que se indican. Cada punto representa
la respuesta de un embrin. (De Nabors y Lang, 1971.)

milares con Citrullus colocynthus y de experimentos con

milihaces lser en Cucurbita pepo (calabaza), tambin se
concluy que la regin del hipoctilo-radcula es la regin
sensible a la luz en las semillas (revisado por Bewley y
Black, 1982).
Si separamos el embrin de la lechuga del endospermo
circundante, la cubierta seminal y la del fruto, la propia
radcula se elonga entonces en la oscuridad o despus de
una breve exposicin a la luz roja o del rojo lejano. Sin
embargo, las radculas de embriones expuestos a luz roja
empiezan a alargarse ms pronto y a mayor velocidad que
las que se mantuvieron en la oscuridad (Fig. 20-9). Aquellas
a las que se proporciona luz del rojo lejano se alargan a una
tasa que, es bsicamente igual que las que se mantienen en
la oscuridad. Este efecto de promocin del crecimiento por
la luz roja se nulifica por un tratamiento breve con luz del
rojo lejano despus de una exposicin a la luz roja, tal como
podra esperarse de los resultados de la germinacin con
semillas enteras. Adems, si los embriones desprotegidos
que provienen de semillas saturadas se extraen bajo una luz
de seguridad verde y se colocan en soluciones con
potenciales hdricos negativos (como polietiln glicol), tales
embriones tratados posteriormente con luz roja absorbern
agua y crecern en una solucin que tenga un potencial
hdrico ms negativo que el de las que se mantiene en la
oscuridad o a las que se administr luz del rojo lejano
(Nabors y Lang, 1971). Nuestra conclusin es que Pfr
incrementa el potencial de crecimiento de las clulas de la
radcula, tal vez el de aqullas que estn situadas en la
regin en elongacin, al disminuir su potencial hdrico para

que absorban agua del suelo con mayor facilidad y

germinen.
listos hechos sugieren que la germinacin de semillas
de lechuga que requieren de luz no se da en la oscuridad
porque la radcula no puede crecer con la fuerza suficiente
para romper las capas que la rodean. De estas capas, la
radcula de la lechuga est restringida casi por completo
por el fuerte endospermo, aunque slo tenga un grosor de
dos o tres capas de clulas. El endospermo tambin es la
capa restrictiva en Phacelia ta- uacetifolia, Datura ferox,
jitomate y varias especies de Syringa (lila). Para lechuga y
Datura ferox, tanto el aumento en el empuje por parte de la
radcula como el debilitamiento de la barrera del
endospermo cercana a la punta de la radcula son
importantes (Carpita et al., 1979; Tao y Khan, 1979;
Psaras, 1984; Snchez et a!., 1986, 1990). Para otras
semillas, podramos esperar de manera razonable, que P,r
aumente la germinacin, incrementando el empuje de la
radcula o debilitando las barreras circundantes que limitan
su crecimiento, o ambas cosas. La fotolatencia y la latericia
de semillas en general no es tan misteriosa cuando consideramos que la germinacin es una lucha entre el crecimiento potencial de la radcula y los efectos mecnicos
que restringen el movimiento de las capas circundantes. En
algunos casos la restriccin externa es enorme; en otros,
tiene escasa influencia y slo un pequeo incremento en el
potencial de crecimiento de la radcula provocado por Pfr u
otro factor es suficiente para dar lugar a la germinacin.
No obstante incluso cuando la restriccin es mnima, la
eliminacin de Pfr mediante luz del rojo lejano por lo comn
reduce la germinacin. Esto se ha demostrado no slo en
semillas nativas bajo un dosel vegetal sino tambin en distintos cultivos, como los de calabaza y maz.

Efectos de las Hormonas Sobre la Fotolatencia

En numerosas semillas que son fotolatentes o latentes por

otras razone la aplicacin de giberelinas sustituye a la luz u
otro requerimiento ambiental, y para unas cuantas especies,
como la lechuga, las citocininas tambin sustituyen a la luz
o la reemplazan de manera parcial. En ejemplares
cultivados_ de cebolla con una latencia elevada, el cido
giberlico o por una citocini- na, no reemplazan de manera
eficaz los requerimientos de luz, pero la aplicacin de
ambas hormonas rompe la latencia en la oscuridad
(Thomas, 1989). Por lo general, las auxinas no promueven
la germinacin de semillas fotolatentes o no latentes y son,
por el contrario, inocuas en bajas concentraciones o
inhibitorias en concentraciones elevadas. El desempeo del
etileno es menos claro: no puede romper la fotolatencia,
pero s superar, de forma parcial, otros tipos de latencia
semi

nal en abrojo, en Amaranthus retroflexus, y en ciertas variedades de cacahuate y clavo. El etileno tambin puede superar de manera
parcial la latencia provocada por temperaturas elevadas en lechuga, y superar ciertos problemas de la fotolatencia en el abrojo (Esashi et
a/., 1983). Como se mencion en el Cap. 18, la aplicacin de cido abscsico casi siempre retrasa la germinacin, a menos que las capas
de proteccin impidan que el embrin lo absorba. Casi no hay duda de que, en muchas especies, el ABA contribuye al desarrollo de semillas latentes e impide la viviparidad, como se describe en la Seccin 18.5.
En conjunto, estos resultados sugieren que Pfr puede romper la fotolatencia al dar lugar a la sntesis de giberelinas o de una
citocinina, o al destruir un inhibidor como el ABA.. La evidencia concerniente a esta suposicin es controvertida (Bewley y Black. 1982;
De Greef y Frdriq, 1983; Carpita y Nabors, 1981), pero nadie ha cuantificado an los cambios hormonales que se presentan
especficamente en clulas de la radcula
o del hipoctilo responsables de la germinacin. Tal parece que esto es esencial para comprender las relaciones entre la luz, los
promotores e inhibidores del crecimiento en la fotolatencia y en otros tipos de latencia de semillas tratadas en el Cap. 22. El anlisis de
semillas completas en busca de niveles hormonales quiz no sea de ayuda para entender los aspectos hormonales porque la semilla
completa es muy grande en relacin con los tejidos que controlan la germinacin. No obstante, la literatura sigue recibiendo informes de
anlisis hormonal de semillas enteras.
Durante la dcada de 1980, la evidencia de la importancia de las giberelinas en la superacin de la fotolatencia qued accesible
gracias al estudio de mutantes. Como se mencion en el Cap. 17, se conocen mutantes enanos de maz, chcharo de jardn, chcharo dulce,
trigo, jitomate y frijol, algunos de los cuales tienen obstaculizada la sntesis de giberelinas y presentan obstculos en respuesta a las
giberelinas (revisado en Reid, 1987, 1990; Hedden y Lenton, 1988 y Scott, 1990). No se han presentado informes sobre la reduccin de la
germinacin de cualquiera de ellos, pero fueron seleccionados para el enanismo, no para la germinacin escasa, y son especies cultivadas
en las que la latencia es poco usual. En los Pases Bajos algunos investigadores encontraron mutantes enanos de jitomate y Arabidopsis
thaliana que tampoco pueden germinar sin que se les administre giberelina; stos son mutantes con deficiencia en giberelina (Groot et al.,
1987, 1988; revisado porKarssenfla/., 1989). En el jitomate, las semillas para el tipo silvestre con un contenido de giberelina normal
germinan bien en la oscuridad sin necesidad de agregar giberelina, y no existe fotolatencia en la variedad que estudiaron estos
investigadores. Con Arabi- dopsis, las semillas del tipo silvestre no germinarn en la oscuridad, pero la luz roja que acta a travs de P fr
supera la latencia. La latencia tambin puede superarse en el tipo silvestre con una giberelina, en especial una mezcla de GA 4 y GA7 que en
ocasiones es tan eficaz como GA3 para romper la latencia de la semilla en concentraciones 1,000 veces menores. En uno de los bien
estudiados mutantes de Arabidopsis con deficiencia de giberelina, no se present germinacin en el agua incluso con luz, pero hubo una
elevada germinacin en presencia de luz con 1 GA4 + 7 o en la oscuridad con 100/jM CTA. + 7. Por lo tanto, la aplicacin de giberelina
supera el obstculo gentico y la necesidad de luz. Las conclusiones de ste y otro trabajo con estos mutantes son que el jitomate del tipo
silvestre y las semillas de Arabidopsis deben tener giberelinas para germinar y que existe una necesidad de luz en Arabidopsis, en gran
parte porque la luz induce la formacin de una
o ms giberelinas.
Otra investigacin por parte del grupo de los Pases Bajos indica que en el jitomate es probable que las giberelinas induzcan el
debilitamiento del resistente en- dospermo cercano a la punta de la radcula. Al igual que con otras semillas con endospermo resistente, el
endos- permo del jitomate es rico en galactomananos (polisa- cridos de la pared celular) y la GA,. f7 induce un incremento en la actividad
de tres enzimas que hidro- lizan tales galactomananos. Se supone que esta hidrlisis debilita el endospermo lo suficiente para que la
radcula pueda crecer a travs de l y dar lugar a la germinacin. Si as es como funcionan las giberelinas en el jitomate, su accin en el
endospermo es similar a su accin combinada con la de la luz roja para romper la latencia de semillas de Datura ferox (Snchez et al.,
1986, 1990). Como se resalt en el Cap. 17, una accin comn de las giberelinas en varias plantas consiste en inducir la actividad de
ciertos tipos de enzimas hidro- lticas.

20.7
El Papel de la Luz en el Establecimiento de la Plntula y en el Crecimiento Vegetativo Posterior
Una vez que se completa la germinacin, el desarrollo posterior de la planta sigue estando sujeto a control por parte de la luz. En la
Seccin 20.1 y en la Fig. 20-1 introdujimos algunos de estos tipos de control. Ahora pasaremos a evaluar los papeles y acciones del
fitocromo, el criptocromo y el receptor IIV-A en el desarrollo de la planta.

Desarrollo de Plntulas de la Familia Poaceae (Pastos)

Despus de que germina una semilla de pasto o de cereal, su coleptilo se alarga hasta que la punta emerge del suelo. Entre el escutelio
(vase Fig. 17-17) y la base del coleptilo hay un internudo al que se conoce como mesoctilo (primer internudo; vase la Fig. 20-10) que,
en la mayor parte de las especies de pasto, se clon- ga mucho despus de la germinacin de semillas plantadas a profundidad. (En trigo,
arroz, cebada y bambes, el mesoctilo es detectable en embriones pero no se elonga en la oscuridad o en la luz; revisado por Hoshikawa,
1969 ) Es necesaria la elongacin del mesoctilo, el coleptilo y las hojas encerradas por el coleptilo para llevar las hojas hacia la luz y
para establecer cerca de la superficie del suelo las races adventicias que se producen en el internudo, justo encima del mesoctilo (Fig.
20-10). La elongacin del mesoctilo ha recibido atencin por ms de 40 aos. Como ya se mencion, todos los resultados muestran que la
elongacin del mesoctilo es muy sensible a la luz.

Cap. 20 Fotomorfognesis 37

Figura 20-11 Efecto del pretratamiento con luz roja y del rojo lejano sobre el desdoblamiento de secciones de hoja procedentes de plntulas
de maz etioladas. La luz roja estimula la apertura, mientras que el tratamiento subsecuente con luz del rojo lejano nulifica el efecto de la luz
roja. (De Klein et al., 1963.)

La elongacin del coleptilo debe ser igual o mayor que la de las hojas que encierra mientras stas crecen juntas hacia arriba; de lo
contrario, las hojas podran crecer fuera del coleptilo y quiz romperse al salir del suelo. Las tasas de crecimiento de estos dos rganos
se dan de manera coordinada hasta que alcanzan la superficie del suelo y quedan expuestos a la luz. Una vez que ocurre esto ltimo, las
hojas se tornan verdes y fo- tosintticas, y emergen de la punta del coleptilo. La

Figura 20-10 Algunas caractersticas morfolgicas de una Iftntula de maz de una semana de edad cultivada bajo la Buz. El coleptilo ha
dejado de alargarse y las dos hojas han Balido de l y se han desenrollado en gran parte. El pice Bfel brote se encuentra en el nudo donde
se originan las raimes adventicias (de sostn). El mesoctilo es el primer n- Bfcfnudo que se forma sobre los tejidos de almacenamiento Hela
semilla y el escutelio (cotiledn) de la semilla.

aparicin de la hoja se presenta porque la luz promueve la elongacin de la hoja y disminuye el grado en que el coleptilo puede alargarse
(aunque acelera la elongacin de esto cuando son unos das ms jvenes; vase Thomson, 1954; Schopfer et al., 1982 y Smith y Jackson,
1987). La promocin del crecimiento de la hoja por parte de la luz, la aceleracin de la elongacin del coleptilo juvenil y la inhibicin de
la longitud final del coleptilo son respuestas del fitocromo a la luz del sol.
En la plntula de maz cultivada en presencia de luz a partir de una semilla plantada cerca de la superficie del suelo (como la de la
Fig. 20-10), el mesoctilo se elonga muy poco, y las dos primeras hojas surgen del coleptilo. Cada una de estas hojas estaba enrollada
dentro del coleptilo, pero al ser expuestas a la luz empezaron a desenrollarse (de manera lateral). El enrollamiento an era evidente slo
en el punto de bifurcacin de las hojas, en el coleptilo roto.
Una respuesta tpica del fi toe romo, eji la que las bajas fluencias de luz roja son promotoras y la luz subsecuente del rojo lejano
nulifica el efecto de la luz roja (Fig. 20-11), controla parte sustancial del desenrollamiento de las hojas de pasto, las fluencias bajas de luz
del rojo lejano carecen de efecto, y las fluencias bajas de luz azul son ligeramente promotoras, excepto en el arroz. No obstante las hojas
de trigo y cebada se desenrollan an ms si se las expone por 9 h a luz roja de baja intensidad, por lo que se presentan tanto una LFR
como una HIR a la luz roja (Virgin, 1989). El desenrollamiento se debe a un crecimiento ms rpido (quiz como resultado del
ablandamiento de la pared) de las clulas localizadas sobre el lado cncavo posteriormente superior), en oposicin al lado convexo. La
aplicacin de giberelinas y, en ciertas especies, de ci- tocininas, reemplaza la necesidad de luz (De Greef y Frdricq, 1983)
Estos resultados sugieren que el Pfr hace que las hojas enrolladas formen giberelinas o citocininas que despus provocan el
desdoblamiento. Tal vez esta hiptesis sea correcta para las giberelinas, ya que P fr promueve la produccin y liberacin de giberelina
provenientes de plastidios jvenes en hojas enrolladas de trigo y cebada antes de qu se desdoblen. No hay estudios que presenten los
efectos de la luz sobre el contenido de citocinina de hojas en desdoblamiento por lo que, por ahora, parece ms seguro concluir que la luz
puede inducir el desdoblamiento de hojas cuando se lleva a efecto la produccin de giberelinas en clulas cncavas. De manera
alternativa, las clulas cncavas se pueden volver ms sensibles a los niveles de las hormonas que ya contienen si se las expone a la luz.

Desarrollo de plntulas de dicotiledneas

En dicotiledneas, los cotiledones subterrneos y ricos en nutrimentos permanecen bajo el suelo por desarrollo hipogeo, como en el
chcharo, o sobresalen del suelo por desarrollo epigeo, como en los frijoles, el rbano y la lechuga. En cualquier caso, un gancho que se
forma cerca del pice del tallo empuja hacia arriba, a travs del suelo, y saca consigo las frgiles hojas jvenes
o los cotiledones (vanse figs. 16-14 y 18-15). (En la Fig. 20-1 este gancho se ha movido en el frijol, como en plntulas que se desarrollan
de manera epigea, al epi- ctilo [la seccin del tallo situada por encima de los cotiledones] y se ha abierto un poco, quiz por una ligera
exposicin a la luz cuando se le aplica agua a la planta.) Como se mencion en la Seccin 18.2, este gancho se forma como resultado del
crecimiento desigual en ambos lados del hipoctilo, o del epictilo en respuesta al etileno, poco despus de la germinacin. A medida que
el gancho surge del suelo, la luz roja que acta mediante Pfr promueve la apertura del gancho. Al parecer esto ocurre como resultado de la
inhibicin de la sntesis del etileno en el gancho por accin de la luz. El crecimiento diferencial que resulta del alargamiento ms
rpido de las clulas situadas sobre el lado inferior (cncavo) que las del lado superior (convexo) es la causa de que se abra el gancho

Cap. 20 Fotomorfognesis 39

(vase Seccin 18.3). Junto con esta apertura, la luz incrementa el ensanchamiento de la lmina de la hoja, el alargamiento del peciolo, la
formacin de clorofila y el desarrollo de cloroplas- tos, como ocurre tambin en hojas de pasto (Fig. 20-1).
La mayor parte de la promocin del crecimiento por parte de la luz, al menos en dicotiledneas, se debe a una HIR (Dale, 1988). Un
buen ejemplo lo constituyen las hojas primarias del frijol. Las plantas cultivadas 10 d bajo luz roja tenue poseen hojas un poco ms grandes y muchas ms clulas que las que se mantienen en la oscuridad. Cuando se las transfiere a la luz blanca, la expansin celular y el
crecimiento foliar se incrementan bastante. En este caso, la luz azul que acta mediante un sistema HIR provoca la expansin celular al
intensificar la acidificacin de las paredes celulares epidrmicas, y, como se ablandan, la hoja entera se expande ms rpido bajo la
presin de la turgencia existente (Van Volkenburgb, 1987). Los efectos de la luz sobre la formacin de clorofila y el desarrollo de
cloroplastos resultan en primera instancia de una accin de disparo de Pfr que origina la produccin de cido delta- aminolevunlico (ALA)
a partir de cido glutmico (revisado por Kasemir, 1983; Hoober, 1987; Beale, 1990).
El ALA es el precursor metablico que se convierte en cada uno de los cuatro anillos pirrlicos de la clorofila. Sin embargo, el ALA
no se convierte del todo en clorofila sin que haya mayores cantidades de irradiaciones de luz roja o azul. En cambio, la ruta metablica se
detiene cuando se forma un compuesto conocido a menudo como fotoclorofila. Con ms precisin, la fo- toclorofila es protoclorifilida a, la
cual difiere de la clorofila a (Fig. 10-4) slo por la ausencia de una cola fitol y dos tomos de hidrgeno. La protoclorofilida a se reduce
con rapidez a clorofilida a en presencia de la luz roja o la luz azul, ya que la protoclorilida a, al igual que las clorofilas, absorbe dichos
fotones de manera eficaz. La adicin de la cola fitol, isoprenoide que se forma a partir de la ruta del cido mevalnico (vase Cap. 15),
completa la formacin de clorofila a, y parte de sta se convierte entonces en clorofila b. El desarrollo de clorolastos depende en gran
medida de la formacin de clorofila y, por lo tanto, de estos dos efectos de la luz. Todas estas respuestas conducen, en cuestin de pocas
horas, a la fotosntesis en las hojas de pasto cuando stas surgen del coleptilo, y en cotiledones u hojas jvenes de dicotiledneas cuando
stas emergen del suelo. Los cotiledones de plntulas de conifera forman de algn modo clorofila y se vuelven fotosintticos incluso en la
oscuridad, pero sus agujas requieren de luz para realizar estos procesos.
A medida que la fotosntesis da inicio en hojas y cotiledones, se producen tallos ms cortos y gruesos. Por supuesto, una plntula cultivada
en la oscuridad no puede alargarse ms, una vez que sus fuentes alimenticias se agotan; pero, mientras haya carbohidratos y grasas en
abundancia, la luz llega a inhibir el alargamiento del tallo. Al parecer, esta inhibicin de la elongacin del tallo la registr por primera vez
en 1852 Julius von Sachs, quien observ que los tallos de muchas especies no crecen tan rpido con la luz del da como lo hacen por la
noche. En la actualidad sabemos que la luz azul, roja y del rojo lejano contribuyen a este fenmeno y que el criptocromo y el fitocromo
tambin participan.
En la Fig. 20-12 se muestran los efectos de la presencia continua de la luz roja y azul en el desarrollo de plntulas de chcharo
(Laskowski y Briggs, 1989). Los estudios de elongacin del hipoctilo en pepino, rbano y otras plntulas cultivadas en la oscuridad
muestran que la inhibicin por accin de la luz roja acta mediante la formacin de Pfr y que la luz azul acta sobre el criptocromo. Se han
observado varias diferencias interesantes en las respuestas a la luz azul y la roja (Cos- grove, 1986, 1989). En primer lugar, la inhibicin
por la luz roja ocurre debido a la formacin de Pfr en los

Figura 20-12 Efectos de la luz blanca continua (la que contiene luz azul) y de la luz roja continua en el crecimiento y desarrollo de plntulas
de chcharo. La planta de la izquierda se cultiv en una cmara de cultivo con luz blanca, la del centro con luz roja de baja intensidad (aprox.
l^mol nr2 s 1), y la de la derecha en la oscuridad total. (Fotografas cortesa de Marta J. Laskowkski, Timothy W. Short y W. F. Briggs.)

cotiledones, no en el propio hipoctilo, en tanto que la luz azul acta directamente sobre elipoctilo. En segundo lugar, el alargamiento
disminuye en los 30s posteriores a la exposicin a la luz azul, en tanto que el efecto de la luz roja requiere de 15 min, por lo menos. En
tercer lugar, los hipoctilos de plantas expuestas a luz azul comienzan a elongarse en la oscuridad con ms rapidez que los expuestos a la
luz roja. En cuarto lugar, las respuestas a la luz azul con frecuencia son HIR, mientras que las respuestas a la luz roja en general son LFR.
Por ltimo, en lechuga y Sinapsis alba, las respuestas a la luz azul, pero no a la roja, se pierden de forma gradual a medida que la plntula
se desetiola.

Efectos fotomorfognicos en el crecimiento vegetativo

En numerosas plantas bien establecidas y en crecimiento se presentan otros efectos fotomorfognicos. Si se exponen dicotiledneas verdes
y fotosintticas a luz roja (que acta mediante el fitocromo) o azul (que acta mediante el criptocromo), se inhibe la elongacin del tallo. Si
las plantas crecen bajo un dosel de hojas, donde la luz que se recibe es bsicamente luz del rojo lejano, Pfr es eliminado de las hojas y los
tallos se alargan de manera considerable (Fig. 20-13). Lo mismo ocurre con las coniferas estudiadas hasta ahora. El rameado de los tallos
se retarda de manera simultnea en muchas especies que se encuentran bajo un dosel, por lo que las plantas utilizan ms energa para
llevar el pice del tallo a la altura del dosel que cuando no estn bajo la sombra.
En cultivos agrcolas plantados en hileras y debido a este efecto, las plantas ubicadas en las hileras externas con frecuencia son ms
bajas y estn ms ramificadas que las que estn hacia el interior. A menudo puede observarse un efecto similar con plantas cultivadas en
invernaderos. Asimismo, en ejemplares gruesos de Pinus contorta, abundantes en el Yellowstone National Park en Wyoming, as como en
muchas reas montaosas del oeste de los Estados Unidos, el resultado del retraso en la ramificacin y la muerte de ramas por la escasa
luz son bosques de rboles con troncos largos y rectos que proporcionan madera relativamente libre de nudos. Hoy da, los silvicultores
usan este principio en el trabajo de reforestacin para seleccionar las distancias entre plntulas trasplantadas. Las plantas que no se
alargan en respuesta al incremento (en relacin con el rojo) en la radiacin del rojo lejano son las que normalmente crecen a la sombra de
otras (por ejemplo, sobre el suelo del bosque). Parece que estas plantas de sombra estn adaptadas a un ambiente en el que no pueden
elevar sus hojas, alargando el tallo, por sobre el dosel que est encima (Morgan, 1981). Smith (1986) y Smith y Whitelam (1987, 1990)
concluyeron, a partir de tales estudios, que una funcin importante del fito-

Figura 20-13 Crecimiento de Chenopodium lbum despus de 21 das bajo dos diferentes proporciones de luz roja/rojo lejano. Ambas plantas
se cultivaron hasta el estado trifoliado en condiciones idnticas a la de la derecha se le administr entonces luz enriquecida con luz del rojo
lejano. Los valores estimados de <j> en las dos plantas fueron de 0.71 (izquierda) y 0.38 (derecha). Cada planta recibi la misma cantidad de
radiacin fotosintticamente activa (400-700 nm). (De Morgan y Smith, 1976.)

cromo en plantas cultivadas bajo la luz es actuar corno un mecanismo propio para evitar la sombra.
Estudios ms recientes muestran que las plantas responden a plantas adyacentes para lo cual reflejan seales del rojo lejano, aun
antes de que una arroje sombra sobre la otra (Bailar et al, 1987, 1990; Casal y Smith, 1989; Smith etal., 1990). Se advirti que los tallos
de varias dicotiledneas aumentaban la velocidad de elongacin aun cuando crecan cerca de otra planta. Las plantas vecinas detectan la
amplia reflexin de luz del rojo lejano proveniente de hojas y tallos, accin que estimula la elongacin de su tallo. Al parecer, esta luz del
rojo lejano elimina el Pfr de las plantas que la absorben y les permite modificar su patrn de crecimiento para anticipar la posibilidad de
quedar bajo la sombra.
El sistema del fitocromo tambin controla, en parte, la ramificacin en la base de tallos de pasto (formacin de renuevos). En los
cultivos de cereales donde los individuos estn muy cercanos entre s o en pastos gruesos, la formacin del renuevo (rama) se retrasa ya
que la luz que se transmite hasta la base de los tallos es rica en longitudes de onda del rojo lejano, lo que da lugar a valores de <)> bajos.
Al aumentar el valor de con luz rica en longitudes de onda del rojo se promueve la formacin de renuevos, de la misma manera en que se
promueve la ramificacin en dicotiledneas (Deregibus et al., 1983; Casal et a!., 1985; Kasperbauer y Karlen, 1986). En la Fig. 20-14 se
ilustran los efectos de la formacin de la corona en la formacin de renuevos del trigo.

20.8

Efectos Fotoperidicos de la Luz

En muchas especies, las respuestas a la luz, en especial la luz que absorbe el fitocromo, estn determinadas por la hora del da en que se
recibe la luz. Los efectos de la luz en la interrupcin del perodo normal de oscuridad o en la prolongacin del perodo normal de luz del
da se conocen como efectos fotoperidicos (Vince-Prue, 1975, 1989). Estas respuestas tienen que ver principalmente con la latencia de
yemas de plantas perennes y la produccin de flores y semillas en especies perennes y, en especial, no perennes (vase Cap. 23). En la

Figura 20-14 Promocin de la formacin de renuevos en plantas de trigo cultivadas a bajas densidades. Las plantas se cultivaron a
densidades de 1,000 (izquierda) o 300 (derecha) por metro cuadrado. La ltima densidad se aproxima a los plantos tpicos. (Cortesa de
Bruce Bugbee.)

lleva a cabo en clulas con clorofila. No es.de sorprender, por consiguiente, que la sntesis de antocianina se incrementa por la luz que
acta fotosintticamente en las hojas o en la cscara de manzanas verdes; pero la luz promueve la sntesis de estos pigmentos en rganos
que fotosintetizan un poco o incluso nada, incluyendo hojas de otoo, ptalos de flores y plntulas etioladas, lo que demuestra que por lo
menos participa otro pigmento.

Figura 20-15 Crecimiento de abetos Douglas (Pseudotsuga menziesii) despus de 12 meses con fotoperiodos de 12 h (izquierda), 12 h ms
una interrupcin de 1 h hacia la mitad del periodo de oscuridad (en medio) y 20 h (derecha). (De Downs, 1962.)

En la Fig. 20-16 se ilustra el espectro de accin para la produccin de antocianina en varias especies. En general, las respuestas
mximas se presentan en las regiones del rojo, rojo lejano y azul, mientras que la luz verde (aproximadamente 550 nm) casi no produce
efecto. En varias especies, los picos en las regiones del amarillo, anaranjado, rojo y rojo lejano varan considerablemente, tanto en
longitud como en amplitud. La luz azul es eficaz en casi todas las especies, pero en el sorgo las luces roja y del rojo lejano no lo son. Un

espectro de accin detallado en la regin azul para la sntesis de los precursores de cidos aromticos del anillo B en hipo- ctilos de
Cucumus sativus (Smith, 1972) es similar al del fototropismo que se ilustra en la Fig. 19-8 y a la inhibicin de la elongacin del hipoctilo
en plntulas de lechuga producto de la luz azul, la que se muestra

Fig. 20-15 se ilustra la importancia de la duracin del da en el control de la latencia de yemas (y, por consiguiente, el crecimiento
general) del abeto de la variedad Douglas, una conifera. En general, los das largos promueven la elongacin de tallos en casi todas las
especies, y los das cortos dan lugar a los cambios asociados con el otoo (por ejemplo, la latencia y endurecimiento de yemas por bajas
temperaturas).

20.9

Sntesis de Antocianinas y Otros [Flavonoides Mejorada por la Luz

I Casi todas las plantas forman pigmentos de antocianiI na y otros flavonoides en clulas especializadas locali- Izadas en uno o ms de sus rganos, proceso que es estimulado a menudo por la
luz. Un ejemplo sencillo les el desarrollo ms rpido del color rojo producto de lia antocianina en manzanas ubicadas en el lado soleaido de un rbol. La produccin de flavonoides requie- |re de azcares como fuente del fosfoenolpiruvato y el l-fosfato de eritrosa (vanse
Secciones 11.2 y 13-10) Ique proporciona los tomos de carbono necesarios para lbrmar el anillo B flavonoide y como fuente de las uniIdades acetato necesarias para el anillo A del flavonoide vase Seccin 15.7). Los azcares, en especial la saca- posa, pueden
originarse de la degradacin del almidn Jolas grasas en los rganos de almacenamiento durante desarrollo de la plntula o en la
fotosntesis que se

longitud de onda (nm)

Figura 20-16 Espectro de accin para la formacin de antocianina en varias especies despus de una irradiacin prolongada. Las manzanas
contenan clorofila, pero las plntulas de nabo, col, sorgo y mosiaza tal vez estaban libres de clorofila cuando comenz el tratamiento con
irradiacin. (Datos redibujados a partir de varias fuentes. Los datos para la cscara de manzana provienen de Siegelman y Hendricks, 1958;
los de la col roja y el nabo, de Siegelman y Hendricks, 1957; los del sorgo, de Downs y Siegelman, 1963; los de la mostaza, de Mohr, 1957.)

en la Fig. 20-6, todo io cual sugiere que longitudes de onda eficaces del azul son absorbidas sobre todo por el criptocromo. Las longitudes
de onda del rojo y del rojo lejano actan a travs del fitocromo y de forma independiente a la fotosntesis en plntulas etioladas, pero en
la cscara de manzanas verdes tambin contribuye la fotosntesis. Para estos efectos del rojo y del rojo lejano se requieren niveles de
irradiacin elevados, caractersticos del sistema HIR, y tanto el fitocromo como el criptocromo son fotorreceptores probables en la mayor
parte de las especies. Mancinelli (1985, 1989) describi numerosas especies y los probables fotorreceptores implicados en la formacin
de anto- cianinas.
Se han efectuado numerosos intentos para determinar el sitio o sitios de accin de la luz en las rutas bioqumicas que originan los
anillos A y B de los flavonoides. La acumulacin de flavonoides en muchas hojas durante la senectud en el otoo sugiere una relacin
entre la hidrlisis de protenas, la aparicin de la fenilalanina y el uso de sta en la formacin del anillo B. Como la fenilalanina puede
utilizarse en varias rutas metablicas, se sospech que la luz controla el primer paso de su conversin a anillo B. Este paso requiere del
enlace fenilalanina-amonaco (Cap. 15, Ec. 15.5), al tiempo que la luz promueve su actividad en diversos rganos de numerosas plantas.
No obstante, muchas otras enzimas para la sntesis de flavonoides, que no se mencionan en este texto, tambin presentan un incremento en
la actividad despus de que se las trata con luz, lo que indica que la produccin de ambos anillos ocurre con ms rapidez en presencia de
sta.
Otro receptor que absorbe luz y promueve la sntesis de flavonoides es el denominado receptor UV-B. Se cree que hay varios
receptores de este tipo, y quiz sean DNA (revisado en Beggs et al., 1986). En clulas epidrmicas de plntulas de perejil y en cultivos de
clulas en suspensin de perejil, el UV-B es muy eficaz; lo mismo es cierto para coleptilos de maz. El pico de accin se localiza hacia
los 300 nm; adems otras especies muestran esta respuesta al UV-LS. En casi todas estas especies parece haber una coaccin entre el
fitocromo y el criptocromo o el receptor UV-B.
En una serie de estudios excelentes, Klaus Hahlbrock y sus colegas en Alemania rastrearon el efecto de la formacin de flavonoides
en cultivos de clulas de perejil de una fuente de luz blanca rica en longitudes de onda del azul y UV. Al principio, la irradiacin provoc
un incremento coordinado en la actividad de enzimas que convierten fenilalanina enp-cumaril coenzima A, precursor del anillo flavonoide

B. Enseguida hubo un incremento en la actividad de la sintasa de calcona, la enzima clave que forma la estructura bsica del flavonoide
al condensar la p-cumaril CoA (para el anillo B) con tres grupos acetato de las molculas de malonil CoA (para el anillo A). Los estudios
indicaron que la luz hace que estas enzimas se sinteticen con mayor rapidez al incrementar las cantidades de las molculas de mRNA que
codifican para ellas. Los estudios diferidos mostraron primero una sntesis mejorada de enzimas que convierten fenilalanina en p-cumaril
CoA, despus un pico en la actividad de a transcripcin de la sinte- tasa de la calcona, y por ltimo un incremento en las cantidades de
flavonoides (Beggs et al., 1986; Hahlbrock y Scheel, 1989). Hoy da, estn sujetos a un estudio exhaustivo los mecanismos por los que la
luz activa los genes que controlan la formacin de estos flavonoides y de anocianinas. La capacidad de la radiacin UV para dar origen a
la formacin de flavonoides que absorben esta radiacin parece ser una forma que poseen las plantas para protegerse contra la radiacin
UV.
Al igual que los flavonoides, las ligninas se forman tambin a partir de la ruta del cido shiqumico, con la participacin del enlace
fenilalanina- amonaco. En plntulas o en partes inmaduras de plantas ms viejas que experimentan diferenciacin del xiicma o formacin de xilema a partir del cambium vascular, la luz promueve la formacin de lignina en las paredes celulares del xilema. Este proceso es
parcialmente responsable de la mayor rigidez que presentan las plntulas cultivadas en la luz en comparacin con las cultivadas en la
oscuridad.

20.10

Efectos de la Luz Sobre la Disposicin de los Cloroplastos

Cuando los niveles de irradiacin son elevados, los clo- roplasos se alinean por lo general a lo largo de las paredes radiales de las
clulas, quedando bajo la sombra que se proporcionan unas a otras, con lo que se protegen de los daos que ocasiona la luz. Bajo una luz
dbil, y muchas veces en la oscuridad, los cloroplastos se separan en dos grupos distribuidos a lo largo de las paredes ms cercanas, y
lejanas, de la fuente de luz, con lo que se aumenta al mximo la absorcin de luz. Este movimiento de plastidios, que depende tanto de la
direccin de la fuente de luz como del nivel de irradiacin de sta, es un ejemplo de fototaxia (movimiento de todo un rgano u organclo
en respuesta a la luz; vase Haupt, 1986 y Seccin 19.1).
En musgos y angiospermas, las respuestas fototxi- cas tanto a irradiaciones elevadas como bajas son mximas en longitudes de
onda del azul; adems el fitocromo no participa (Inoue y Shibata, 1973; Seitz,
1987) . El espectro de accin sugiere de nuevo la participacin del criptocromo. Sin embargo, en algunas algas verdes, incluyendo
Mougeotia y Mesotaenium, y en el helecho Adiantum, tanto el criptocromo como el fitocromo aLisorben luz de bajo nivel de irradiacin
que es responsable del movimiento del cloroplasto o cloroplastos a regiones de las clulas en las que la absorcin de luz se incrementa.
Asimismo, en Mougeo- tia, las molculas de fitocromo eficaces se localizan cerca de la membrana plasmtica. Hn esta especie cada clula
contiene un cloroplasto largo y en forma de cinta que no migra de hecho sino que slo rota de modo que queda apuntando hacia la luz de
baja o moderada irradiacin, mientras que su extremo estrecho es el nico que apunta hacia la luz de irradiacin elevada.
En todas las especies el cloroplasto no absorbe por s mismo la luz que origina su fototaxia; en cambio, la luz absorbida en cualquier
otra parte de la clula provoca movimientos del cloroplasto a travs de efectos ejercidos sobre la corriente citoplsmica, efectos que son
resultado de interacciones entre microfilamentos y microtbulos. En trminos ecologicos, los movimientos de los cloroplastos parecen
tener importancia bsica para aumentar la absorcin de luz con bajas irradianciones y para disminuir la absorcin cuando la irradiacin
es tan elevada que puede provocar solari- zacin (vase Seccin 12.3) u otros efectos fotodes- tructivos.

20.11

Cmo Causan la Fotomorfognesis los Fotorreceptores

An no se entiende la manera en que los fotorreceptores propician la fotomorfognesis. Sin embargo, parece que hay bsicamente dos
tipos de efecto que difieren por su rapidez. Uno puede ser un efecto rpido sobre la permeabilidad de la membrana; el otro, un efecto ms
lento sobre la expresin gentica. En la actualidad la investigacin sobre el control de la expresin de los genes avanza con gran rapidez,
aunque dicho control quiz depende a menudo de los efectos anteriores inducidos por la luz, sobre los cambios en la permeabilidad de la
membrana que influyen en el flujo de iones (en especial Ca2 + ) a travs de la membrana plasmtica, tonoplasto, retculo endoplsmico, o
envoltura nuclear. En esta seccin se resumen algunos ejemplos de cada tipo principal de efecto, con menciones (en especial de
revisiones) que presentan los avances logrados en el pasado y los problemas que han de resolverse en el futuro. No hay que olvidar que
los efectos primarios del fitocromo y del criptocromo quizs actan en alguna parte del sistema de recepcin y de transduccin para dar
lugar a una posible accin hormonal como la que se describe en la Fig. 17-2.
La investigacin inicial, realizada por los descubridores del fitocromo y otros investigadores, sugiri que Pfr acta inicialmente
cambiando la permeabilidad de las membranas, y que las respuestas fotomorfognicas son de algn modo resultado de tales cambios
(revisado por Roux, 1986 y por Kendrick y Bossen, 1987). La investigacin subsecuente confirm que en algunas clulas de algunas
especies hay respuestas rpidas (de segundos a minutos), no slo a Pfr, sino en otros casos, tambin al fitocromo activado por luz azul. Se
descubri que uno de los efectos ms rpidos de Pr, se presenta en puntas cortadas de raz de cebada, y en puntas de raz de alubia; este
fenmeno se conoce como efecto Taada ('Panada, 1968).
Cuando se agitan con suavidad las puntas cortadas de raz de cebada en un vaso de precipitado con 1AA, ATI 5, cido ascrbico y
ciertas sales minerales, un tratamiento breve con luz hace que empiecen, en cuestin de segundos, a pegarse a las paredes del vaso. En
este caso, las paredes del vaso de precipitado tienen una ligera carga negativa debido a que se lavaron con fosfato diluido. Esto significa
que las puntas de raz tratadas con luz roja alcanzaron una ligera carga superficial positiva, quiz por el transporte de H + del citosol a
las paredes celulares mediante una ATPasa situada en la membrana plasmtica (vase Seccin 7.8). Un breve tratamiento con luz del rojo

lejano hace que se decremen- ten rpidamente las cargas positivas de las puntas de raz y provoca su liberacin de las paredes del vaso.
El fitocromo que origina esta respuesta se localiza en la caliptra de la raz.
Otro efecto rpido de P(r descrito en la Seccin 19.2. implica la promocin de movimientos nictinsti- cos, o de sueo, de ciertas
leguminosas. En este caso, P(r acta tambin sobre las membranas; se sabe que esto es cierto porque se altera el potencial elctrico a travs de las mmbranas plasmticas y entonces los iones potasio se transportan con rapidez de las clulas exten- soras a las flexoras de los
pulvinos de las hojas (vase Fig. 19-1 ) La investigacin efectuada por Moysset y Simn (1989) respecto de los movimientos nictinsticos
en Albizzia indica que el Ca-f est vinculado al proceso de transduccin que resulta de la formacin de Pfr. El efecto causado por P,r sobre
la rotacin de cloroplastos de Mougeotia es rpido y se completa en 15 min. De nuevo, parece que estn implicados los cambios en la
permeabilidad de la membrana, en especial un incremento del Ca2 + citoslico inducido por Pfr (Haupt, 1986, 1987; Lew et al., 1990). La
rapidez (en un intervalo menor a 30 s) de la supresin de la elongacin del hipoctilo, inducida por la luz azul, en plntulas de pepino
cultivadas en la oscuridad tambin involucra un efecto sobre la permeabilidad de la membrana (Spalding y Cosgrove, 1988).
Ya se haba mencionado que es probable que el criptocromo sea una flavoprotena presente en la membrana plasmtica, por lo que
no es de sorprender que los cambios inusualmente rpidos en la permeabilidad de la membrana puedan deberse a su activacin por la
luz. Sin embargo, no hay evidencia bioqumica de que el fitocromo sea parte de alguna membrana, ya sea como protena integral o como
protena perifrica. De hecho, la comparacin de su secuencia de aminocidos con la de protenas integrales conocidas indica que no es
una protena integral (Vierstra y Quail, 1986). No obstante, sus efectos sobre la permeabilidad de la membrana podran explicarse con
mayor facilidad si se uniese con rapidez a la membrana plasmtica.
En contraste con el concepto propuesto por los investigadores en Beltsville, Marykmd, de que el efecto primario del fitocromo se da
sobre la permeabilidad de la membrana, la investigacin de Hans Mohr con plntulas de Sinapis alba le llev a sugerir (ya desde 1966)
que el fitocromo controla la activacin y desactivacin de genes especficos, lo que depende del estadio de desarrollo y de los tipos de
clulas implicadas. Muchas de las investigaciones realizadas desde entonces demuestran que el fitocromo, el criptocromo y el UV-B son
de hecho capaces de controlar la actividad gentica en el sentido de que cada uno puede regular la cantidad de la enzima producida, en
contraste con los efectos de post-traduccin sobre la actividad de las enzimas. En este captulo se mencionan algunos de estos ejemplos;
otros ms se describen en revisiones recientes (vase Link, 1988; NagycVrt/., I988; Thompson el al., 1988; Moses y Chua, 1988; Marrs y
Kaufman, 1989; Okamuro y Goldberg, 1989; Watson, 1989; Simpson y Herrera-Estrella, 1990). Estas revisiones tambin resaltan el hecho
de que en algunos casos parece que la luz acta en esencia controlando la estabilidad de ciertas molculas de mRNA y no su sntesis.
Resulta claro que la luz puede controlar la fotomorfognesis mediante varios mecanismos. Es posible que el fitocromo cercano a la
membrana plasmtica provoque cambios que incrementan el influjo (o a veces el flujo) de Ca- + y que esta seal se utilice en un proceso
de transduccin para alterar la actividad gentica.
En la actualidad existe gran cantidad de evidencia de que P|,. altera los flujos de Ca- ' y que con frecuencia el complejo Ca-calmodulina
es parte del proceso de transduccin (revisado en Marme. 1989 y por Morsc el al.. 1990; vase tambin Moyssct y Simn, 1989). Evidencia an ms reciente sugiere que P|r causa la activacin de la enzima dependiente del complejo de calcio y calmodulina NAD 4 quinasa
en yemas apicales tanto de plntulas de chcharo etioladas como de semillas de lechuga sensibles a la luz (Kansara el al.. 1989; Zhang et
al., 1990). Adems, cada vez aparece ms evidencia que sugiere que tanto Pfr como el criptocromo activados dan lugar a un rpido
incremento en la fosforilacin de ciertas protenas (Park y Chae, 1989; Short y Briggs, 1990). Se sabe que el Ca- * libre o el complejo Cacalmodulina pueden activar diferentes cinasas de protenas en plantas (Blovvers y Trewavas, 1989), por lo que quiz sea esencial la
absorcin de Ca-f estimulada por la luz a travs de la membrana, o su liberacin de un compartimiento interno, tal como el retculo endoplsmico o la vacuola. Como se mencion en captulos anteriores, los cambios en la actividad de las enzimas debidos a su fosforilacin
y desfosforilacin es otro mecanismo que controla las actividades celulares. Cada vez es ms obvio que la luz da origen a una
fotomorfognesis mediante diversos procesos bioqumicos, pero tal vez el esclarecimiento del papel que juegan los cambios que induce la
luz en las concentraciones citoslicas de Ca-4 conduzca a un tema comn para alguno de ellos.