L5.

306

NORMA TCNICA

3 Edio
Fev/2014
14pginas

Determinao de Clorofila a e Feofitina a: mtodo espectrofotomtrico

Title in English:
Determination of chlorophyll-a and pheophytin-a: spectrophotometric method

Resumo:
A clorofila a um pigmento encontrado em todos os grupos de vegetais e outros organismos
auttrofos sendo frequentemente, utilizada como indicadora da biomassa fitoplanctnica em
ambientes aquticos. A determinao da concentrao de clorofila a e feofitina a uma ferramenta til
em estudos de produtividade primria, na interpretao de resultados de anlises fsicas e qumicas,
como indicadora do estado fisiolgico do fitoplncton e na avaliao do grau de eutrofizao de um
ambiente aqutico. Esta Norma descreve os procedimentos para a determinao da concentrao de
clorofila a e feofitina a pelo mtodo espectrofotomtrico monocromtico.

Palavras chave
Clorofila a, feofitina a, mtodo espectrofotomtrico,
eutrofizao.

Companhia Ambiental do Estado de So Paulo

Avenida Professor Frederico Hermann Jr., 345
Alto de Pinheiros CEP 05459-900 So Paulo SP
Tel.: (11) 3133 3000
Fax: (11) 3133 3402
http://www.cetesb.sp.gov.br
CETESB 2014

Key words
Chlorophyll-a, Pheophytin-a,
spectrophotometric method, eutrophication.

CETESB / (L5.306 / fev/2014)

Primeira Edio
Com o ttulo de: Determinao de pigmentos fotossintetizantes - clorofila-A, B e C e feofitina-A: mtodo
de ensaio.
Dezembro/1978, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. 002/77/DDPET, de 02/01/1978.
Segunda Edio
Com o ttulo de: Determinao de pigmentos fotossintetizantes - clorofila-A, B e C e feofitina-A: Mtodo
de ensaio.
Dezembro/1990, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. 067/1991/P/N, de 20/05/1991.
Terceira Edio
Com o ttulo de: Determinao de Clorofila a, e Feofitina a: mtodo espectrofotomtrico:
Fevereiro/2014, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. 093/2014/E, de 08/04/2014. Publicada
no Dirio Oficial do Estado de So Paulo Caderno Executivo I, v.124 (71) de 15/04/14, Poder
Executivo, Seo I, p. 53 a 55.
CETESB 2014
permitida a reproduo total ou parcial deste documento, desde que citada a fonte. Direitos
reservados de distribuio.

Sumrio

pgina

1 Introduo
2 Objetivo
3 Documentos complementares
4 Definies
5 Materiais, equipamentos, reagentes e solues
6 Execuo do ensaio
7 Resultados
8 Registro de dados e apresentao dos resultados
9 Referncias
Anexo A - Modelo de envelope
Anexo B -Exemplo de formulrio de registro dos resultados da anlise
Anexo C - Exemplo de boletim da anlise de clorofila a e feofitina a

2
4
4
4
4
7
9
10
10
12
13
.14

Introduo

A clorofila (a, b, c e d) um dos grupos de pigmentos, alm dos carotenides (carotenos e xantofilas) e
ficobilinas, responsveis pelo processo fotossinttico (pigmentos fotossintetizantes). A clorofila a
encontrada em todos os grupos de algas e cianobactrias, j as clorofilas b, c e d, em alguns grupos
especficos, sendo que a ltima encontrada apenas nas rodofceas marinhas (Tabela 1).
A clorofila a frequentemente utilizada como indicadora da biomassa fitoplanctnica, ou seja, um
indicador do crescimento de algas e cianobactrias devido ao enriquecimento por nutrientes,
principalmente nitrognio e fsforo, fenmeno este denominado eutrofizao.
A clorofila a pode corresponder, dependendo das espcies presentes, de 1 a 2% do peso seco das
algas planctnicas (APHA, 2014). Assim, a clorofila a pode ser considerada uma importante varivel
indicadora do estado trfico de ambientes aquticos e uma ferramenta til na avaliao de impacto de
contaminantes orgnicos e inorgnicos e outros distrbios.
A Resoluo CONAMA 357/2005 estabeleceu padres de qualidade para clorofila a para guas doces,
classes especial, 1, 2 e 3, existindo, assim limites legais para a sua concentrao nesses ambientes
aquticos (BRASIL, 2005).
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GRUPOS

Cianobactrias

Rodofceas

Criptofceas

Dinoflagelados

Crisofceas

Diatomceas

Feofceas

Euglenales

Clorofceas

Tabela 1 Distribuio dos pigmentos que intervm na fotossntese nos diversos grupos de
algas e cianobactrias

Clorofila a
Clorofila b
Clorofila c
Clorofila d

x
-

x
x

x
x
-

x
x
-

x
x
-

x
x
-

x
x
-

x
x
-

x
x
-

X presena

- ausncia

Fonte: APUD CETESB (2014), modificado.

O mtodo espectrofotomtrico de Richards e Thompson (1952), modificado por Creitz e Richards

(1955), para estimar os pigmentos do fitoplncton, ainda utilizado. Esse mtodo envolve a medida da
absorbncia em trs comprimentos de onda, para estimar as clorofilas a, b e c, e conhecido como
mtodo tricromtico. Como a clorofila a o pigmento predominante e est presente em todos os grupos
vegetais, sendo a indicadora ideal da biomassa fitoplanctnica, atualmente o mtodo
espectrofotomtrico monocromtico o mais frequentemente utilizado.
Entretanto, as molculas de clorofila no so estveis; dependendo das condies do meio, tais como
mudanas do pH, temperatura ou luminosidade excessiva, elas podem sofrer degradao, originando
produtos conhecidos como feopigmentos. A feofitina a, produto da degradao da clorofila a, pode
interferir grandemente nas medidas deste pigmento, por absorver luz na mesma regio do espectro que
a clorofila a.
Em 1967, Lorenzen props um mtodo eficiente para estimar as concentraes de clorofila a e feofitina
a, por meio de leituras espectrofotomtricas antes e aps acidificao da amostra; e um estudo
detalhado das metodologias foi apresentado pela UNESCO (1966). Por esse mtodo, o resultado de
clorofila a pode ser corrigido excluindo, portanto a concentrao de feofitina a encontrada na amostra.
A determinao da concentrao de clorofila a e feofitina a pode ser utilizada:
a) em programas de monitoramento para a avaliao da qualidade das guas em relao
eutrofizao e para subsidiar aes de controle;
b) em estudos de produtividade primria;
c) em estudos de poluio orgnica ou industrial;
d) para auxiliar na interpretao de resultados de anlises fsicas e qumicas;
e) como indicador do estado fisiolgico do fitoplncton, por meio da relao clorofila a / feofitina a;
f) para demonstrar o potencial orgnico local em termos de biomassa fitoplanctnica e o grau de
eutrofizao de um ambiente aqutico;
Nesta Norma, apresentado apenas o mtodo espectrofotomtrico monocromtico para a
determinao de clorofila a e feofitina a.
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Objetivo

Esta Norma descreve os procedimentos para a determinao da concentrao de clorofila a e

feofitina a, pelo mtodo espectrofotomtrico monocromtico.

Documentos complementares

Os documentos relacionados a seguir contm disposies que constituem fundamento para este
procedimento. As edies indicadas estavam em vigor no momento desta publicao. Como toda norma
est sujeita a revises e alteraes, aqueles que realizam procedimentos com base nesta, devem
verificar a existncia de legislao superveniente aplicvel ou de edies mais recentes das normas e
publicaes citadas.
APHA; AWWA; WEF. Standard methods for the examination of water and wastewater: online.
Washington, DC, c2006. Disponvel em: <http://www.standardmethods.org/store>. Acesso em: fev. 2014
BRANDO, C. J. et al. (Org.). Guia nacional de coleta e preservao de amostras: gua, sedimento,
comunidades aquticas e efluentes lquidos. So Paulo: CETESB; Braslia: ANA, 2011.
325 p. Disponvel em:
<http://arquivos.ana.gov.br/institucional/sge/CEDOC/Catalogo/2012/GuiaNacionalDeColeta.pdf>.
Acesso em: fev. 2014.

Definies

Para os efeitos desta Norma so adotadas as seguintes definies:

a) Ecossistema: conjunto integrado de fatores fsicos, ecolgicos e biticos que caracterizam uma
determinada rea, estendendo-se por um espao de dimenses variveis. uma totalidade
integrada e sistmica que envolve fatores abiticos (energia e materiais) e biticos em sua
funcionalidade e processos metablicos.
b) Fotossntese: processo em que um organismo transforma energia luminosa em energia de
ligao qumica, utilizando gua e gs carbnico e produzindo carboidrato, em geral glicose e
oxignio. As clorofilas so os principais pigmentos capazes de absorver a energia luminosa.
c) Biomassa: a quantidade de material vivo, existente em um tempo e espao determinados, que
pode ser expresso em peso, mido ou seco, por unidade de rea ou volume.
d) Eutrofizao: Refere-se adio natural ou artificial de elementos nutritivos (geralmente
nitrognio e/ou fsforo) a um corpo dgua, tendo como consequncia o aumento da produtividade
primria do ambiente aqutico.
e) Oligotrfico: Corpos de gua com baixa concentrao de nutrientes, baixa produtividade
primria, nos quais, em geral, no ocorrem interferncias indesejveis sobre os usos da gua.
f) Eutrfico: Corpos de gua com alta produtividade primria em relao s condies naturais, de
baixa transparncia, em geral afetados por atividades antrpicas, em que ocorrem alteraes
indesejveis na qualidade da gua e interferncias nos seus mltiplos usos.

Materiais, equipamentos, reagentes e solues

A determinao da concentrao de clorofila a e feofitina a inclui as etapas de coleta da amostra,

filtragem da amostra, extrao dos pigmentos de interesse, leitura em espectrofotmetro e clculo das
concentraes.
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Para a execuo deste mtodo so listados abaixo os materiais, equipamentos, reagentes e solues
necessrias.
5.1 Materiais para a amostragem
Para o planejamento amostral e detalhamento dos equipamentos e materiais, consultar o Guia Nacional
de Coleta e Preservao de Amostras (BRANDO et al., 2011), considerando sempre os objetivos do
estudo e o tipo de anlise que ser realizada.
5.2 Materiais para a filtragem de amostras
a) porta filtro para filtrao sob presso;
b) sistema de bomba a vcuo;
c) frasco Kitassato com capacidade para 2 L ou mais;
d) tubos de ltex de 1 cm de dimetro e 2 m de comprimento (para a filtrao, ligando a bomba de
vcuo ao frasco Kitassato);
e) membranas filtrantes ou filtro de fibra de vidro de 47 mm de dimetro, com porosidade entre 0,45
e 1,0 m;
f) pina de ponta chata, de ao inoxidvel;
g) gua destilada;
h) pissetes (para gua destilada);
i) provetas graduadas;
j) bequeres de vidro;
k) envelope de papel kraft pardo ( Anexo A);
l) frasco plstico escuro ou envolvido com papel alumnio contendo slica-gel;
m) freezer (-20C a -30C);
n) formulrio para o registro de entrada da amostra.
5.3 Materiais para a extrao
a) tubos de vidro mbar para 15 mL com fundo redondo e tampa rosquevel;
b) suporte para tubos;
c) acetona 90%;
d) dispensadores ou micropipetas (de 5 mL);
e) macerador ou homogeneizador de tecido com alcance de velocidade de aproximadamente
2500rpm;
f) pissete com acetona 70% para lavagem do pistilo do macerador;
g) refrigerador.
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5.4 Materiais e equipamentos para a leitura em espectrofotmetro

a) balana de equilbrio;
b) centrfuga clnica de mesa com suporte para tubos de 15 mL;
c) cubetas espectrofotomtricas de quartzo de 1cm de caminho ptico;
d) micropipetas 0,1 mL;
e) basto de vidro com ponta fina;
f) padro de referncia - Padro de Clorofila a substancialmente livre de clorofila b;
g) formulrio para o registro de resultados analticos;
h) espectrofotmetro com largura de banda espectral de 0,5 a 2 nm;
5.5 Reagentes e solues
a) soluo de carbonato de magnsio (MgCO3) 1%;
Preparo da soluo: dissolver 1 g de carbonato de magnsio finamente pulverizado em 100 mL de
gua destilada.
b) acetona P.A (para soluo acetona 90% - para extrao e acetona 70% - para lavagem);
Preparo da acetona 90%: Elevar a 1 litro, com gua destilada, 900 mL de acetona P.A.
Preparo da acetona 70%: Elevar a 1 litro, com gua destilada, 700 mL de acetona P.A.
c) hidrxido de amnio 25%;
Utilizado para elevar, quando necessrio, o pH da acetona 90% (pH= 8 a 9).
d) cido clordrico (HCl) 0,1M;
Preparo da soluo: Adicionar 8,35 mL de cido clordrico p.a. (37% de pureza) em 1 litro de gua
destilada para obteno de cido clordrico 0,1 M.
e) padro de clorofila a;
Materiais:
1 ampola de 1 mg do padro de clorofila a (espinafre),
1 balo de 100 mL com tampa esmerilhada (calibrado),
1 erlenmeyer 250 mL,
1 pipeta 10 mL,
1 funil pequeno,
acetona 90%,
frascos de vidro mbar com tampa rosquevel (vial),
pelcula de vedao.
Preparo da soluo: quebrar a ampola, com a pipeta lavar com pequena quantidade de acetona
90% para diluir o padro transferindo com o funil para o balo. Continuar o procedimento lavando
bem a ampola at no observar nenhuma colorao (lavar tambm a ponta da ampola). Completar
o volume para 100 mL com acetona 90%. Homogeneizar e verificar o volume, caso seja necessrio
acertar o volume. Distribuir cerca de 3,0 mL da soluo padro em frascos de vidro mbar (vial),
fechar imediatamente com tampa rosquevel, numerar cada frasco. Cobrir a tampa dos frascos
com pelcula de vedao. Manter os frascos em freezer em temperatura igual ou inferior a -20 C e
superior a -30 C.

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Execuo do ensaio

So descritos abaixo os procedimentos relacionados a cada etapa na determinao da clorofila a e

feofitina a.
6.1 Princpio do mtodo
As concentraes de clorofila a e feofitina a so determinadas espectrofotometricamente, por meio das
leituras nas densidades pticas obtidas em trs comprimentos de onda definidos (664, 665 e 750 nm).
O mtodo fornece resultados em termos de peso dos referidos pigmentos por unidade de volume
(g/L).
6.2 Amostragem
Para o planejamento amostral e detalhamento dos procedimentos de coleta, consultar o Guia Nacional
de Coleta e Preservao de Amostras (BRANDO et al., 2011), considerando sempre os objetivos do
estudo e o tipo de anlise que ser realizada.
6.3 Filtragem da amostra
Este procedimento deve ser realizado minimizando-se a luminosidade incidida sobre a amostra.
a) preparar envelope de papel pardo, contendo informaes como: n da amostra, local, pH, data
da coleta e de filtragem,
b) homogeneizar cuidadosamente a amostra, medir o volume a ser filtrado em proveta graduada e
proceder filtrao. Filtrar o mximo de volume possvel (o tempo de filtrao no deve exceder 10
minutos). Lavar a proveta com gua destilada e dispensar no porta-filtro. Anotar o volume filtrado no
envelope de papel pardo. O volume de gua a ser filtrado geralmente varia de 0,5 a 5 litros,
dependendo do ambiente (em ambientes eutrficos, a quantidade menor, enquanto que em
ambientes oligotrficos, deve ser maior);
c) Terminada a filtrao da amostra, lavar o porta-filtro com gua destilada contida em pissete,
deixar secar o filtro por alguns segundos, e retir-lo cuidadosamente com uma pina, evitando o
contato com as mos. Dobrar o filtro ao meio, de modo que o material filtrado fique para o lado
interno da dobra, ainda com a pina, guardar o filtro no envelope de papel pardo previamente
identificado,
Observao: No escrever no envelope com o filtro no seu interior;
d) devido ao fato de que as molculas de clorofila degradarem muito rapidamente, temperatura
ambiente e sob a ao da luz, os envelopes contendo as amostras devem ser colocados
imediatamente em frascos escuros, com slica-gel, e congelados. Quando as amostras forem
filtradas em campo, o frasco contendo as amostras filtradas pode ser guardado em caixa trmica
com gelo at a chegada ao laboratrio;
e) se a amostra no puder ser filtrada em campo, deve ser filtrada o mais rapidamente possvel
aps a sua chegada ao laboratrio. A realizao da filtrao no deve exceder o prazo de 48 horas
aps a coleta;
f) o frasco contendo os envelopes com os filtros utilizados deve ser mantido no freezer em
temperatura igual ou inferior a -20 C e superior a -30 C por no mximo 28 dias;
g) aps a filtragem, devem ser registrados (formulrios em papel ou sistema eletrnico) o volume
filtrado e informaes relevantes da amostra como n da amostra, data e local de coleta, pH e data
da filtragem (mesmas informaes do envelope).
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6.4 Extrao
Este procedimento deve ser realizado minimizando-se a luminosidade. Montar um lote de amostras a
serem analisadas, selecionando pela data de coleta, ou seja, as amostras filtradas mais antigas, bem
como as de pH menor que 7.
a) montar em um suporte os tubos de vidro mbar identificados.
b) retirar o filtro do envelope, com a pina de inox, e coloc-lo dentro do tubo, conforme identificao
correspondente, e acrescentar a cada tubo 5 ml de acetona 90%;
c) macerar o filtro cuidadosamente com o macerador ou homogeneizador de tecidos, adicionar mais
5 ml de acetona 90% e fechar o tubo;
d) lavar cuidadosamente o pistilo do macerador com acetona 70% antes de processar a amostra
seguinte, descartando a acetona utilizada para lavagem;
e) colocar os tubos em suporte apropriado e mant-los refrigerados (em torno de 4 C) durante a
extrao (no mnimo 2 horas e no mximo 24 horas).
6.5 Centrifugao e Leitura espectrofotomtrica
Este procedimento deve ser realizado o mais rpido possvel, evitando exposio prolongada luz,
bem como elevao da temperatura:
a) aps perodo de extrao, retirar os tubos do refrigerador e centrifugar durante 20 minutos a
aproximadamente 3.000 rpm;
b) retirar cuidadosamente os tubos da centrfuga tendo-se o cuidado para no ressuspender o
material slido sedimentado. Colocar aproximadamente 3 mL do sobrenadante em cubeta
espectrofotomtrica de 1 cm de caminho ptico e ler contra um branco de acetona 90% (em
comprimento de onda de 664, 665 e 750 nm). Esta outra cubeta, contendo um branco do reagente,
serve como controle negativo da anlise. A acetona 90% usada no branco deve ser do mesmo lote
da utilizada para a extrao de todas as amostras;
c) realizar a primeira leitura nos comprimentos de 664 e 750 nm, anotando os resultados no
caderno de registro de anlise;
d) a correo para feofitina a feita acidificando-se a soluo contida nas cubetas, aps a 1 leitura
(664 e 750 nm), pela adio de 20 a 100 L de cido clordrico 0,1 M;
e) aps 90 segundos, determinar as densidades pticas aps acidificao em 750 e 665 nm (665
nm - pico mximo de absoro da feofitina a);
f) anotar os resultados em formulrio de registro de anlise (Anexo B).
g) terminadas as leituras, desprezar as solues das cubetas e lav-las com acetona 70% antes de
proceder prxima leitura.
Observaes:
i. Para guas lmpidas, oligotrficas, cubetas de 5 cm de caminho ptico podem ser usadas para
aumentar a sensibilidade de leitura.
ii. importante que a leitura aps a acidificao seja feita em pelo menos um minuto, mas no mais
que dois minutos, aps a adio do cido.
iii. O espectrofotmetro deve ser verificado antes do uso utilizando-se uma soluo padro, cuja
concentrao de clorofila a conhecida. Coloca-se esta soluo na cubeta e realizam-se as leituras
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conforme procedimento para as amostras, ou seja, leitura antes e aps a acidificao. Os

resultados devem ser registrados, evidenciando a verificao do equipamento.

Resultados

As leituras a 750 nm, antes e depois da acidificao, medem apenas a turbidez da amostra. Estas
leituras devem ser subtradas das densidades pticas lidas a 664 nm antes da acidificao, e 665 nm
depois da acidificao, obtendo-se assim as leituras corrigidas.
Clculo para a correo da Turbidez:
D664c= Densidade ptica a 664 nm, corrigida - obtida antes da acidificao.
Correo: D664 corrigida = D664 D750
D665c= Densidade ptica a 665 nm, corrigida - obtida depois da acidificao.
Correo: D665 corrigida = D665 D750
As concentraes de clorofila a e feofitina a podem ser obtidas a partir das seguintes equaes
monocromticas:

Clorofila a (g/L)= 26,73 x (D664c - D665c) x

v
(V x L)

Feofitina a (g/L)= 26,73 x [(1,7 x D665c) D664c] x

v
(V x L)

(1)

(2)

Onde:
V= Volume, em litros, da amostra filtrada
v= Volume, em mL, de acetona 90% usada para extrao
L= Caminho ptico, em cm, da cubeta espectrofotomtrica usada
D664c= Densidade ptica a 664nm, corrigida
D665c= Densidade ptica a 665nm, corrigida
Exemplo
Foram filtrados 700 mL de gua para extrao dos pigmentos.
Foi utilizada uma cubeta espectrofotomtrica de 1 cm de caminho ptico.
Foram utilizados 10 mL de acetona 90% na extrao.
As leituras em absorbncia obtidas antes da acidificao foram:
D750b = 0,002
D664 = 0,106
As leituras obtidas aps a acidificao foram:
D750a = 0,003
D665 = 0,078
Clculo com as leituras antes e depois da acidificao.
Correo da turbidez:
D664 - D750 = D664 corrigido = 0,106 0,002 = 0,104 (antes da acidificao)
D665 - D750 = D665 corrigido: 0,078 0,003 = 0,075 (depois da acidificao)
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Substituio dos referidos valores nas equaes (1):

v
(V x L)

Clorofila a (g/L)= 26,73 x (D664c-D665c) x

Clorofila a (g/L)= 26,73 x (0,104 0,075) x

(1)

10
(0,7 x 1)

(1)

Clorofila a (g/L)= 26,73 x 0,029 x 14,29

(1)

Clorofila a = 11,08 g/L

Substituio dos referidos valores nas equaes (2):

Feofitina a (g/L) = 26,73 x [(1,7 x D665c) D664c] x

Feofitina a (g/L) = 26,73 x [(1,7 x 0,075) 0,104] x

v
(V x L)

10
(0,7 x 1)

(2)

(2)

Feofitina a (g/L) = 26,73 x [0,1275 0,104] x 14,29

(2)

Feofitina a (g/L) = 26,73 x 0,0235 x 14,29

(2)

Feofitina a = 8,98 g/L

Registro de dados e apresentao dos resultados

O laboratrio deve manter um sistema informatizado, protegido de alteraes e rastrevel, com

possibilidade de backup, para fazer o registro e armazenamento dos dados analisados. O sistema
deve permitir que os resultados sejam apresentados na forma de Boletim de Anlise impresso ou
eletrnico (Anexo C).

Referncias

APHA; AWWA; WEF. Standard methods for the examination of water and wastewater: online.
Washington, DC, c2006. Disponvel em: <http://www.standardmethods.org/store>. Acesso em: fev.
2014.
BRASIL. Ministrio do Meio Ambiente. CONAMA. Resoluo n 357, de 17 de maro de 2005.
Dispe sobre a classificao dos corpos de gua e diretrizes ambientais para o seu enquadramento,
bem como estabelece as condies e padres de lanamento de efluentes, e d outras providncias.
Dirio Oficial da Unio: Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, n. 53, 18 mar.
2005. Seo 1, p. 58-63. Com alteraes posteriores. Disponvel em:
<http://www.mma.gov.br/port/conama/legiabre.cfm?codlegi=459>. Acesso em: fev. 2014.
BRANDO, C. J. et al. (Org.). Guia nacional de coleta e preservao de amostras: gua, sedimento,
comunidades aquticas e efluentes lquidos. So Paulo: CETESB; Braslia: ANA, 2011.
325 p. Disponvel em:
<http://arquivos.ana.gov.br/institucional/sge/CEDOC/Catalogo/2012/GuiaNacionalDeColeta.pdf>.
Acesso em: fev. 2014.
Cod.014-verso 01 28/02/2002

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CETESB. Anlise de Clorofila a como Ferramenta no Monitoramento da qualidade das guas.

Cadernos da Gesto do Conhecimento. So Paulo, 2014. 83p.
CREITZ, G. I.; RICHARDS, F. A. The estimation and characterization of plankton populations by
pigment analysis: III a note on the use of Millipore membrane filters in the estimation of plankton
pigments. J. Mar. Res., New Haven, CT, v. 14, n. 3, p. 211-216, 1955.
LORENZEN, C. J. Determination of chlorophyll and pheopigments: spectrophotometric equations.
Limnol. Oceanogr., Texas, US, v. 12, n. 2, p. 343-346, 1967. Disponvel em:
<http://www.aslo.org/lo/toc/vol_12/issue_2/0343.pdf>. Acesso em: fev. 2014.
RICHARDS, F. A.; THOMPSON, T. G. The estimation and characterization of plankton populations by
pigment analysis: II a spectrophotometric method for the estimation of plankton pigments. J. Mar. Res.
New Haven, CT, v. 11, n. 2, p. 156-172, 1952.
UNESCO. Determination of photosynthetic pigments. In: ______. Determination of photosynthetic
pigments in sea-water. Paris, 1966. Part I, p. 9-18. (Monographs on oceanographic methodology, 1).
Disponvel em: <http://unesdoc.unesco.org/images/0007/000716/071612eo.pdf>. Acesso em: fev. 2014.
.../Anexo A

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Anexo A - Envelope de papel kraft pardo (6,5 x 8,5 cm) para o acondicionamento do filtro.

-----------------------------------Amostra..........................................
Ponto..............................................
Volume...........................................
pH...................................................
Data de Coleta...............................
Data de Filtragem..........................
Obs.:...............................................

Fonte: Adaptado de CETESB (2010).

Nota: Exemplo meramente ilustrativo, sujeito a alterao.

.../Anexo B

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Anexo B Exemplo de formulrio para registro dos resultados da anlise de Clorofila a e

Feofitina a

Acetona 90% pH:

Lote:

Transcrio:

Data da Anlise:
N
N
Data
Amostra OS Coleta

AA
Manancial Descrio TUBO

VOL. 664

750

Verificao:
DA
665

750

RESULTADOS
Clorofila a

Feofitina a

Legenda: AA= antes da acidificao; DA= depois da acidificao.

Fonte: Adaptado de formulrio interno da CETESB (2013).
Nota: Exemplo meramente ilustrativo, os formulrios internos esto sujeitos a alteraes.

.../Anexo C

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Anexo C Exemplo de Boletim de anlise de Clorofila a e Feofitina a.

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NOME DA EMPRESA
DEPARTAMENTO/SETOR
BOLETIM DE ANLISES
------------------N. XXXXX/2009

DADOS GERAIS
Amostra:

12222333

Emisso do Boletim: 31/01/2009

DADOS DA COLETA
Ponto:

AAAAAA123

Local:

XXX

Coletor(es):

Jos

Data da coleta: 01/01/2009

Hora da coleta: 10:00

Tipo: gua bruta

DADOS DO RECEBIMENTO DA AMOSTRA NO LABORATRIO
Condies da amostra:

Conforme

Data/hora do recebimento: 01/01/2009 17:22

RESULTADOS ANALTICOS
Volume filtrado: 600 mL
Resultado Unidade

Data do ensaio

Clorofila-a

62,82 g/L

10/01/2009

Feofitina-a

7,66 g/L

10/01/2009

MTODO
Determinao pelo mtodo espectrofotomtrico conforme o procedimento XXX, baseado em:
(MTODO/NORMA BASE edio mais recente disponvel)

Profissional responsvel..................
Registro no Conselho .......................
Endereo da empresa, e-mail e telefone para contato, dados cadastrais,
Este Boletim de Anlise s pode ser reproduzido por inteiro e sem nenhuma alterao.
Os resultados desta anlise referem-se to somente amostra encaminhada.
Fonte: Adaptado do Boletim da CETESB (2014).
Nota: Exemplo meramente ilustrativo, os formulrios internos esto sujeitos a alteraes.
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