Frotis vaginales e inseminacin

artificial en la perra

C. Dumon

Palabras Clave: Frotis vaginales;

Inseminacin
artificial, Perra.
Correspondencia:
Clnica Veterinaria Saint-Roch,
10, Rue Saint-Roch,
78200 Mantes-la-jolie,
Francia

Resumen. En el presente trabajo se describe la tcnica de realizacin

de frots vaginales en la perra, sus indicaciones y su interpretacin. As
mismo, se discuten el mtodo y la utilidad de la inseminacin artificial
en la perra.

Abstracts

In this paper, the method and applications ofvaginal

smears in the bitch are described. In the second part of
the article the different techn iques for artificial insemination and tbeir advantages and disadvantages
are
discussed.
Key Words: Vaginal smears; Artificial insernination,

Introduccin

Bitch.

Todava se solicitan ms los servicios del veterinario

especialista en animales de compaa para evitar que
para favorecer la reproduccin de las perras y de las
gatas. Sin embargo, la infertilidad canina toma cada da
mayor importancia en nuestras consultas, con el valor
creciente de los perros de pura raza, el desarrollo de la
cinofilia y de los criadores aficionados o profesionales.
Una hembra valiosa que rehsa la monta o que es
estril tras el acoplamiento es una decepcin para el
criador, un motivo de consulta cada vez ms frecuente,
e incumbe al veterinario adquirir los conocimientos
necesarios para determinar las causas y si es posible
remediarlas.
Adems, junto a estas demandas formuladas directamente, en muchas ocasiones un interrogatorio profundo
y adecuado con ocasin de una visita rutinaria de una
perra, nos revelar que no ha estado en celo desde hace
tiempo, tal vez que sus celos son muy irregulares o bien
que se la haba intentado hacer criar y haba rechazado
la monta.

Nota del director de la revista: Agradecemos al Or. Antoni Prats, de

la clnica veterinaria Rocaberti (Barcelona)
la traduccin
de este
artculo del francs al espaol.

119

Hay, por tanto, en lo que respecta a la infertilidad

canina, consultas formuladas directamente y consultas
"provocables" en propietarios que no sospechaban que
una intervencin de su veterinario era capaz de solucionar su problema.
La infertilidad canina puede derivar de mltiples
etiologas, pero estadsticamente el rechazo de la monta
o la mala sincronizacin ovulacin-monta, representan
la mayora -eI80% aproximadamente- de los fallos de la
reproduccin en esta especie.
Si bien la inseminacin artificial resuelve los rechazos de la monta, no se ver coronada por el xito ms
que si se efecta en el buen momento y la realizacin de
frotis vaginales es, actualmente, la mejor manera de determinar ese "buen momento".
As pues, frotis vaginales e inseminacin artificial
canina, que son dos temas interdependientes incluso si
el inters de la citologa vaginal no se limita a la inseminacin y si, otros medios -algunos de ellos muy prometedores-, estn actualmente a la disposicin del clnico
para determinar el momento de la ovulacin en la perra.
Para un desarrollo ms didctico estudiaremos sucesivamente:
Frotis vaginales: realizacin, interpretacin, aplicaciones.
Inseminacin
artificial: la cual, en la perra, puede
ser realizada con semen fresco C'ayuda a la monta") o
con semen congelado.

A. Frotis vaginales

El celo de la perra es el testimonio de una fisiologa

sexual con manifestaciones cclicas y las clulas observadas en el frotis vaginal son el reflejo de todas estas
variaciones, del funcionamiento y del estado de su
aparato genital.
Examinaremos sucesivamente la realizacin, la interpretacin y las aplicaciones de esta prueba.

35

Revista de AVEPA. Vol. 9, N 3

Fig. 1. Preparacin

1989

del frotis.

Fig. 2. Clulas epiteliales

metileno.

vaginales

descamadas

teidas

con azul de

Fig. 3. Clulas epiteliales

Grnwold-Gernsa.

y hemates

teidos

con el mtodo

de May

Realizacin

Fig. 4. Batera de colorantes

para la tincin de Harris-Schorr.

tras las toma de muestra para evitar la desecacin.

1. Toma de la muestra

1. Fijacin

Se utiliza un escobilln estril, largo, como mnimo

de 15 cm, humedecido con una gota de suero fisiolgico
(el agua destilada o el agua del grifo, alteran las clulas).
Esta pieza debe introducirse a lo largo del borde
superior de los labios vulvares, a fin de evitar la fosa del
cltoris (movimiento que se realiza con el escobilln
vertical).
Inmediatamente, se la hace bascular hacia la horizontal y penetrar delicadamente lo ms profundamente
posible.
Tras algunos movimientos de rotacin, se retira lentamente hacia atrs.

El portaobjetos se sumerge inmediatamente, durante

cinco minutos, en una mezcla alcohol-ter (AA), que
realiza la fijacin de la muestra.
El frotis as fijado se puede conservar 15 das antes de
ser teido.

2. Extensin (Fig. 1)

Es conveniente entonces hacer rotar el algodn sobre

el portaobjetos y sobre todo, nunca frotar, para no alterar
las clulas. No volver a pasar dos veces por el mismo
sitio. Esta extensin debe realizarse inmediatamente,

36

4. Tincin

Pueden efectuarse tres tinciones:

a) Tincin monocrmica

al azul de metileno (Fig. 2).

No permite poner en evidencia las afinidades de coloracin de las clulas vaginales y, por tanto, la interpretacin del frotis se basa en su forma y en la visualizacin
de su ncleo.
b) Tincin de May Grunwald

Giemsa (Fig. 3).

Tiene la ventaja de su rapidez (menos de un minuto),

y de poner muy bien en evidencia leucocitos y hemates,
pero la diferenciacin de las clulas vaginales se basa
120

C. Oumon.

Tabla l. Tincin

Frotis vaginales

e inseminacin

artificial en la perra.

de Harris-Schorr

Sacar la extensin del fijador y teirla inmediatamente.

Alcohol de 70: sumergir 10 veces.
Alcohol de 50: sumergir 10 veces.
Agua destilada: sumergir 10 veces.
Hematoxilina de Harris: 2 minutos.
Agua destilada: un pase.
Agua destilada: un pase.
Alcohol amoniacal: 1 minuto.
Agua destilada: un pase.
Alcohol de 70: pase.
Alcohol de 95: pase.
Colorante de Schorr: 2 minutos.
Alcohol de 95: pase.
Alcohol de 100: pase.

..'.

Fig. 5. Frotis vaginal

Schorr

de una perra en anoestro.

Tincin

de Harris-

Secar y observar al microscopio .

,.

v ,

'

'

e
Fig. 6. Frotis vaginal de una perra en el inicio del proestro.
Harris-Schorr

Tincin de

exclusivamente
en los mismos criterios, de forma y de
visualizacin de los ncleos, que la tincin precedente.
e) Tinein de Harris Seborr (Fig. 4. Tabla I).
Es la tincin preferible. Claro que son necesarios 15
minutos para su realizacin, pero las clulas vaginales se
diferencian perfectamente por afinidades de coloracin
que facilitan la lectura de manera considerable.

Interpretacin
Deben tenerse en cuenta tres elementos principales
en la lectura de un frotis vaginal:
-Presencia de hemates o de leucocitos.
-Porrna de las clulas, presencia o ausencia de ncleo
y forma del ncleo, caso de existir.
-Afinidad de coloracin del citoplasma de estas clu= acidfilo).
las (azul basfilo, amarillo-anaranjado

Fig. 7. Frotis vaginal de una perra en mitad del proestro.

Harris-Schorr.

Tincin

de

a) Clulas parabasales
-Dimetro pequeo.
-De forma redonda y oval.
-Ncleo grande.
-Coloracin basfila.
b) Clulas intermedias
-Contornos irregulares.
-Ncleos bien visibles.
-Coloracin basfila y/o acidfila (segn el momento de obtencin de la muestra).
e) Clulas superficiales

-Contornos irregulares.
-Ncleo picntico o ausente.
-Coloracin acidfila (en ocasiones
cipio).

basfila al prin-

2. Ciclo sexual y frotis vaginal

l. Las clulas vaginales.

Pueden
121

observarse

tres tipos de clulas vaginales:

Segn la fase del ciclo sexual en la que se obtenga la

muestra, el examen microscpico del frotis ser muy

37

Revista de AVErA. Vol. 9, ND 3

1989

,~

Fig. 8. Frotis vaginal

de una perra en el final clel proestro.

Tincin de

Fig. 9. Frotis vaginal de una perra en el estro. Tincin

de Harris-Schorr.

Harris-Schorr.

diferente. La interpretacin confirmar o desmentir

sntomas clnicos y la anarnnesis.

los

a) Ancestro (Fig. 5)
-Frotis pobre en clulas.
-Ningn hemate, algunos leucocitos.
-Las clulas vaginales son clulas parabasales basfilas, pequeas, de ncleo grande, a menudo agrupadas
"en columnas".
Esta fase, de duracin variable (2 a 8 meses, segn las
razas o los individuos), no se acompaa de sntomas
exteriores: es la fase de reposo sexual.
La presencia de numerosos leucocitos en un frotis de
anoestro indica una infeccin vaginal o uterina.
b) Proestro
Desde el principio del proestro (Fig. 6), clnicamente caracterizado por la aparicin de un edema vulvary de
prdidas de sangre, pueden observarse:
-Mayor nmero de clulas.
-Esencialrnente clulas intermedias y algunas clulas
superficiales, con ncleo picntico. Coloracin basfla.
-Hemates muy numerosos, sin leucocitos.
A mitad del proestro (Fig. 7)
-El nmero de clulas vaginales aumenta an ms.
-Disminuye el nmero de clulas intermedias, aumenta el nmero de clulas superficiales. El ncleo es
picntico, la coloracin basfila y/o acidfila.
-Abundantes hemates, sin leucocitos.
Al final del proestro (Fig. 8)
-Casi exclusivamente,
clulas superficiales, de ncleo picntico o anucleadas, coloracin esencialmente
acidfila.
-Disminucin del nmero

de hemates, sin leucoci-

tos.
Est cercano el momento de la ovulacin. Conviene
realizar inmediatamente
una primera monta/inseminacin. Segn las perras, el proestro evoluciona en 5-10
das.

38

e) Estro (Fig. 9)
Sobreviene entonces el estro:
-Las clulas vaginales son extremadamente
numerosas.
-Se trata de clulas superficiales queratinizadas,
de
coloracin acidfila y anucleadas, presentndose
en racimos.
-No quedan prcticamente hemates. Sin leucocitos.
Es el momento de la ovulacin, tericamente de la
aceptacin y de la bsqueda del macho y tras dos das de
observacin de un frotis de estas caractersticas -que se
podr observar durante 5-10 das-, hay que practicar una
'nueva monta o inseminacin.
d) Metaestro (Figs. 10-11)
El frotis se modifica de manera brusca:
-Aparicin brutal de clulas parabasales, basfilas,
ovales o redondeadas,
y con mi gran ncleo, junto a
clulas intermedias.
-Estas clulas poco numerosas, a menudo unidas a
glbulos blancos, ocuparn progresivamente
todo el
campo microscpico.
-No hay glbulos rojos.
Es el perodo de nidacin o de pseudogestacin,
que
durar de 60 a 120 das, segn las perras.

Comentarios
1. Momento preciso de la ovulacin
La ovulacin se localiza en el momento del estro,
pero los frotis permanecen idnticos varios das y si el
clnico no ha seguido la evolucin del frotis desde el
inicio del proestro, no puede determinar con precisin
que el acomplarniento o la monta inmediatamente
preconizadas hayan ocurrido en el momento adecuado, no
siendo fecundable el vulo ms que durante 48 horas.
Por el contrario, en cuanto se ve aparecer la primera
clula parabasal de metaestro, se puede afirmar -desgraciadarnente a posteriori-que la ovulacin ha tenido lugar
122

C. Dumon.

.-c.-"...
Figs. 10-11. Frotis vaginal de una perra en el metaestro.

Frotis vaginales

e inseminacin

artificial en la perra .

,-

"?-

Tincin de Harris-Schorr.

Figs. 13 Y 14. Frotis vaginal de una perra en el final clel estro y en el

metaestro, respectivamente.
Tincin de Harris-Schorr.

1. Infeccin ute1''na (Fig. 12)

Fig. 12. Frotis vaginal de una perra con una infeccin uterina. Tincin
de May Grnwald Giemsa.

seis das antes.

Esta idea fundamental demuestra la necesidad de
seguir la evolucin de los frotis desde el inicio del celo
para optimizar las posibilidades de xito de la reproduccin.
Ello permite, a la vez, a posteriori, informar al propietario que se ha actuado a tiempo o demasiado tarde.
Adems, estas informaciones son muy importantes
para los celos prximos.
En efecto, s hay variaciones de una perra a otra,pero
una perra ovula siempre el mismo da de sus celos.
2. Indice acidfilo
Este ndice

(lA

nmero

cie clulas acidfilas

nmero

cie clulas basfilas

4. Una posible confusin:

metaestro (Figs. 1)-14)

{in de proestro/inicio

de

Al final del proestro, las pequeas clulas intermedias todava basfilas y nucleadas, pueden confundirse
con clulas parabasales de mestaestro en lo que hace referencia a meclicla y coloracin. La diferenciacin debe
establecerse por los contornos angulaclos y los ncleos
pequeos de las clulas intermeclias, a diferencia de los
contornos redondeados y de los grandes ncleos de las
clulas parabasales. Finalmente, y sobre todo, las clulas
sanguneas confirman el diagnstico (hemates = proestro, leucocitos = metaestro).

es mximo, es clecir, superior a 0,5, en el momento de la

ovulacin. Desciende por debajo de 0,1 a los 4 o 5 das,
tras un coito (o una inseminacin) fecundante.
Si no ha habido fecundacin, habr que esperar tres
semanas para que alcance estos valores.
Este concepto puede ser puesto en prctica de manera
provechosa como elemento de diagnstico precoz de
gestacin.

123

Una imagen de metaestro que se acompae de un

gran nmero de leucocitos, indica una afeccin vaginal
o un proceso uterino (metritis, piometra).

Aplicaciones
1. Eleccin del momento ptimo para la monta o la
inseminacin
Esta es sin duda la principal aplicacin de los frotis
vaginales:
-Monta prcticamente

segura.

39

Revista de AVEPA. Vol. 9, N 3

1989

-Economa del macho.

-Economa de desplazamientos intiles, si los reproductores son de zonas alejadas.
-Economa de pajuelas (inseminacin con esperma
congelado).
Efectivamente, si bien estadsticamente la ovulacin
ocurre entre el10 y e114 da del celo (80% de casos),
ello no es siempre as. Una de cada cinco perras se sale
de esta regla general y debe sumarse tambin a ello el
error siempre posible del propietario respecto al verdadero inicio del celo.
Son precisamente estas reproductoras
"fuera de lo
normal", las que dan problemas y justifican una consulta
con el veterinario.
Hay que saber que determinadas perras aceptan al
macho en el inicio de su perodo de fecundidad, limitado
a los dos das de vida de.los vulos maduros, y que otras
rechazan al macho que se les presenta, aunque tericamente deberan aceptarlo.
Frotis vaginales e inseminacin, son los mtodos utilizados ms corrientemente para ajustar la adaptacin de
los cinco das de vida en tero de los espermatozoides
a
los dos das durante los cuales los vulos son fecundables.

observarse

en el frotis la presencia de espermatozoides.

d) Presuncin de gestacin
Si el ndice acidfilo es muy bajo al inicio del metaestro es posible confirmar, con mucha probabilidad, un
diagnstico precoz de gestacin.
4. Patologa del tracto genital (Fig. 12)
Los leucocitos abundantes, o la presencia de clulas
anormales orientan hacia una infeccin o una lesin
tumoral de la vagina o del tero.
Los frotis vaginales estn indicados, de hecho, en
toda investigacin semiolgica del aparato reproductor
femenino.

Conclusin
Si bien el principal inters de los frotis vaginales
radica en la determinacin del momento de la ovulacin,
indispensable
para la realizacin de la inseminacin
artificial, sus aplicaciones no se limitan a esta indicacin,
sino que deben significar un examen de rutina perfectamente dominado por el veterinario especializado
en
patologa de los animales de compaa.

2. Ciclos anovulatorios
-Determinados frotis, a pesar de ser seguidos regularmente desde el inicio del proestro, no evolucionan de la
manera clsica.
-Es claramente posible observar un paso sin transicin desde una mitad de proestro a un metaestro.
-Puede afirmarse entonces que no ha habido ovulacin, y con 'ello se aporta la prueba concluyente -que
podr confirmarse con una tasa de progesteronemiade
una infecundidad por maduracin folicular incompleta.

3. Control de la reproduccin
a) Interrupcin de la gestacin
La terapia abortiva no est exenta de posibles riesgos
en hembras reproductoras de gran valor; es ms sensato
en tales casos realizar un frotis vaginal, tras una monta
indeseada. Si el da de la monta se observa una imagen
de metaestro o de inicio de pro-estro, podemos desaconsejar una medicacin intil.
b) Prevencin del celo (progestgenos) o a la inversa,
desencadenamiento
o provocacin del celo (protocolos
de estimulacin)
Ninguna de las dos actuaciones debe aconsejarse
fuera de la fase de anoestro. Asimismo es esta fase de
anoestro la elegida para la ovariectoma para castracin.
c) Confirmacin de la monta (Fig. 9)
Algunas horas despus dei supuesto
40

coito, pueden

B. Inseminacin

artificial.

La inseminacin artificial, ampliamente utilizada en

la cra de animales de abasto, se utiliza en estas especies
normalmente a partir de semen congelado obtenido de
progenitores
selectos en una bsqueda de mejoras
genticas, de seleccin y de rentabilidad econmica.
Dentro de la inseminacin artificial canina, hemos de
distinguir la inseminacin artificial con semen fresco,
muy utilizada y fcil de realizar, de la inseminacin
artificial a partir de semen congelado, mucho ms difcil
de llevar a la prctica que en las otras especies animales.
Consideraremos sucesivamente la inseminacin artificial con semen fresco -que sera ms adecuado calificar
de "asistencia a la monta"- en sus indicaciones, su realizacin prctica y sus resultados, y luego trataremos de la
inseminacin artificial con esperma congelado
para
mostrar sus particularidades, sus dificultades y SllS perspectivas.

Inseminacin artificial con semen fresco

1. Indicaciones
El problema planteado es muy simple: uno o dos criadores han decidido hacer criar una hembra con un semental, han esperado al 10 da del celo de la perra y es
imposible el acoplamiento. Por qu? Es esto, precisa124

C. Dumon.

Fig. 15. Neoplasia

de vulva.

Fig. 16. Prolapso

Frotis vaginales

e inseminacin

artificial en la perra.

vaginal.

o doloroso el acoplamiento: tumores (Fig. 15), prolapso

vaginal (Fig. 16), vaginitis o vulvitis, eczema vulvar o perivulvar, estenosis vaginal (Fig. 17).
-Artrosis vertebral, que hace muy doloroso el cabalgamiento del macho (teckels, pequineses, etc.),
-Introduccin
de pelos que se intercalan entre el
pene del macho y la vulva de la hembra, haciendo
imposible la penetracin (terriers, bobtails ...). En ocasiones, es suficiente esquilar la regin vulvar para solucionar el problema.

Fig. 17. Estenosis

vaginal.

mente, lo que el veterinario tendr que determinar,

de aconsejar una "asistencia a la monta".
Existen dos razones esenciales:
-Incapacidad del macho.
-Rechazo de la hembra.

antes

Problemas psquicos
-Las perras agresivas entrenadas para guarda se lanzan sobre todo congnere que se les presenta, incluido
el semental que se les ha escogido.
Por el contrario, las perras de apartamento, que han
vivido siempre solas, se aterrorizan al ver a otro perro y
se echan en cuanto el macho intenta la monta.
Las reproductoras que recuerdan un coito doloroso,
pueden rechazar un nuevo acoplamiento.
Por ltimo, conviene saber que las hembras de Saluki
aceptan nicamente machos de su raza.

a) Incapacidad del macho

Con tres etiologas posibles a plantear:
-Inexperiencia del macho demasiado joven.
-Ausencia de libido en un macho demasiado viejo o
bien inhibido por un modo de vida que lo ha mantenido
siempre aislado de sus congneres (razas enanas de
apartamento).
-Afeccin genital o prosttica.

Momento inoportuno
El origen ms frecuente del rechazo a la cpula se
encuentra sobre todo en la incorrecta sincronizacin
monta/ ovulacin.
Por ello, el veterinario, ante todo, deber dedicarse a
determinar la correcta sincronizacin, el "buen momento".

b) Rechazo del acoplamiento por parte de la hembra

2. Realizacin prctica

Generalmente, la hembra rehsa el coito por tres motivos:

-Problemas fsicos.
-Problemas psicolgicos.
-Finalmente y sobre todo: momento inoportuno.
Problemas fsicos
El rechazo de la monta est motivado por:
-Les iones vulvares o vaginales, que hacen imposible
125

-La inseminacin artificial con semen fresco debe realizarse en tres etapas:
-Asegurarse de que la perra est en el perodo ptimo
de fecundidad.
-Obtener y controlar el esperma del semental.
-Inseminacin
propiamente
dicha; es decir, introduccin del esperma recogido en el t.racto genital de la
hembra.
41

Revista de AVEPA. Vol. 9, N 3

1989

a) Laperra est "apunto"?

Tras la ovulacin, los vulos sufren una maduracin
de dos das en las trompas del tero y luego son fecundables durante 48 horas.
Por su parte, los espermatozoides nicamente son fecundados durante 4 5 das. Por ello es importante la
precisin del momento de la ovulacin.
En estos momentos hay tres mtodos a disposicin
del veterinario:
-Larealizacin de frotis vaginales, estudiada anteriormente.
-La medicin de la resistividad del rnucus vaginal
-La dosificacin de la progesterona en sangre.
Medicin de la resistividad del mucus vaginal.
Fundarn nto: Se conecta una sonda, introducida en
la vagina de una perra en celo, a un ohmetro para
obtener valores de la resistividad del mucus vaginal, que
se superponen a la curva en que figura el porcentaje de
clulas vaginales queratinizadas (trabajo de Gnzel, ver
cuadro).
A imismo,]. P. Mialot, ha demostrado que la curva de
la resistividad del mucus vaginal sigue la maduracin
folicular y que su inflexin, que tiene lugar dos das
despus del pico de LH, indica la ovulacin.
De hecho, los resultados obtenidos por esta medicin no son en todas las perras tan precisos como haran
suponer estas curvas-tipo. Sin embargo, se puede afirmar que no hay nunca ovulacin mientras que la resistividad del mucus vaginal no sobrepasa los 800 ohm.
El principal inters de esta medicin, tan simple
como una toma de temperatura es, sobre todo, limitar el
nmero de frotis vaginales, mucho ms largos de hacer.
Conviene destacar que en el caso de la zorra, esta
medicin es muy precisa, y por ello se utiliza habitualm nte en los criaderos de zorros para peletera de los
pases escandinavos.
Dosificacin de la progesterona en sangre
La dosificacin de la progesteronemia permite precisar el momento de la ovulacin.
Tabla

n. Diferentes

Preesperma

Fraccin Epididirnaria

Fraccin Prosttica

Eyaculado

42

b) Obtencin y examen del esperma del semental

Una vez considerada la hembra como "a punto", la
segunda fase de la intervencin consiste en obtener el
esperma del semental y en asegurarse de su calidad.
Recogida del esperma
La electro-eyaculacin es inaplicable en el perro
(dolor y destruccin de los espermatozoides); la vagina
artificial empleada habitualmente en las dems especies, es intil.
Un simple manguito de caucho o goma, terminado
en un tubo plstico, puede constituir todo el material
para la obtencin.
Siempre es conveniente proteger el tubo de la luz y
mantenerlo entre 37 y 40 "C (bao-mara). Por otra parte,
el manguito no debe lavarse nunca con detergentes
(efecto espermicida). La ereccin y la eyaculacin se
consiguen por masaje del pene encerrado en el manguito. La presencia de una perra en celo C'Teaser") facilita
considerablemente
las manipulaciones,
aumenta el
volumen del esperma recogido y su concentracin en

fracciones del semen canino

Aspecto
Fraccin Uretral

Los valores normales de 1 ng/ml durante el anoestro

se elevan entre 2 y 4 n/ml durante el proestro y el pico
de LH, luego entre 4 y 10 ng/ml en el momento de la
ovulacin, y finalmente 15 a 80 ng/ml quince das, tras la
ovulacin.
El inters de esta determinacin es triple:
-Confirma los otros mtodos de investigacin.
-Cualquier laboratorio puede realizarla en el mismo
da, y muy probablemente, en un futuro prximo estarn
a disposicin de los clnicos kits de lectura rpida.
-Finalmente, y sobre todo, la elevacin de la tasa sangunea de progesterona es el testimonio ms fiable de
ovulacin.
Una progesteronemia que no se ha "disparado" de su
nivel base, permite afirmar que el ciclo ha sido anovulatorio.
Una progesteronemia superiora 15 ng/ml demuestra
que, ciertamente, ha habido ovulacin, pero que ya es
demasiado tarde para inseminar.

completo

Flemoso blanquinoso

Concentracin en
espermatozoides

Obtencin

Volumen

30 a 50 segundos

0,2 a 2ml

<3,106
espermatozoides/rnl

Esperma

Espeso acuoso

2 a 3 minutos

0,5 a 6 mi

400,106
espermatozodes/rnl

Postesperma

Claro viscoso

5 a 7 minutos

3 a 30 mi

espermatozoides
muy escasos

7 a 10 minutos

4 a 35 mi

aproximadamente
400,106/ml

Viscoso blanquinoso

126

C. Oumon.

Fig. 18. Introduccin

del semen

con jeringa de vidrio ..

espermatozoides.
En el perro, la eyaculacin es trifsica (Tabla II).
En el caso de asistencia a la monta, se utiliza todo el
eyaculado. Cuando hablemos de semen congelado,
veremos que nicamente se congelar la fraccin epididimaria, rica en espermatozoides.
-Examen del .esperrna
Una gota de esperma colocada entre porta y cubreobjetos y observada al microscopio sin preparacin,
permite apreciar:
-La concentracin en espermatozoides.
-Su movilidad, yendo desde la inmovilidad hasta verdaderas ondulaciones, simulando olas.
La adicin de una gota de colorante Eosina-Nigrosina
(Tabla III) permite precisar la proporcin de espermatozoides muertos (teidos de rosa) y vivos (que no se
tien):

Pueden observarse tambin formas anormales y la

presencia de leucocitos indicativos de la existencia de
una afeccin del aparato uro-genital del macho.
Este indispensable examen puede inducir al veterinario a rechazar el esperma y solicitar otro semental.
En el caso hipottico -que se da con frecuencia- de
que el propietario insista en mantener al animal que
haba escogido, se impone clarificar las dudas en cuanto
al xito de la intervencin.
c)

Inseminacin propiamente dicha

Hay numerosos autores (Harrop, 1960; Andersen,

1969; Knauss, 1982; Farstad, 1984) que han descrito tasas
bajas de fecundacin por inseminacin intra-vaginal y
preconizado por el contrario la inseminacin intra-uterina.
Por una parte el caterterismo del cuello del tero es
difcil, incluso en perodo de celo, especialmente en las
perras de razas enanas (orificio extremadamente pequei10) o gigantes (imposibilidad de inmovilizar el cuello
del tero por palpacion transabdorninal). Si la perra es
nerviosa, y no digamos si es agresiva, hay pocas posibilidades de xito.
127

Fig. 19. Posicin

Frots vaginales

e inseminacin

del animal despus

artificial en la perra.

de la inseminacin

artificial.

Tabla Ifl. Solucin de Eosina-Nigrosina

Realizar en el siguiente orden:
1. Solucin tampn de citrato
-Diluir 3 g de citrato sdico en 100 mI de agua destilada
-Aadir cido ctrico hasta obtener un pH = 6,8
2. Nigrosina al 50%
-Vertir 5 g de Nigrosina en 100 g de agua destilada
3. Eosina Nigrosina
-Disolver 0,4 g de Eosina polvo en 50 ce del tampn
aadir 4 ce de Nigrosina al 5%

Por otra parte, en el coito en la perra, la inseminacin

es de tipo vaginal y la turgencia de los bulbos erctiles y
del glande del macho, impide el reflejo posterior del esperma y estimula las contracciones vaginales, favoreciendo el desplazamiento de los espermatozoides en el
tero.
Por todo ello, nos ha parecido que los malos resultados obtenidos con una simple jeringa de vidrio, incluso
manteniendo levantado el tercio posterior de la hembra
durante 10 minutos (Figs. 18-19), podan estar relacionados con una excesiva distorsin entre el montaje utilizado y las condiciones naturales del acoplamiento.
Esta es la razn por la que el profesor]. P. Mialotyyo
mismo, hemos ideado un dispositivo, no traumatizante
para la perra, fcil de manejar para el veterinario y que
simula las condiciones fisiolgicas del coito. Se trata de
la pistola denominada Osiris por el fabricante (ref. brevet n. 84-06-963).
- La pistola Os iris (Fig. 20)

Descripcin. Sus principales caractersticas son las siguientes:

-El cuerpo blando de la pistola evita todo riesgo de
traumatismo: su empleo no requiere la utilizacin del
espculo.
-El pequeo baln inflable situado en el extremo
anterior de la sonda, debe evitar el reflujo del esperma y

43

Revista de AVEPA. Vol. 9, N 3 - 1989

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Fig. 20. Representacin esquemtica de la pistola de Osiris: 1. jerng conteniendo el esperma; 2. Adaptador blando; 3. Sonda balonada blanda (largo
variable, pudiendo ser adaptada).; 4. Cuerpo de la pistola blanda; 5. Pequeo baln nflable; 6. Bolita que evita el reflujo del semen hacia el cuerpo
de la pistola; 7. Aguja; 8. Clamp; 9. Jeringa para inflar el baln.

simula la ereccin del perro (hinchamiento de los cuerpos cavernosos).

-La sonda telescpica terminada en una pequea
bolita, permite depositar el esperma contra el cuello del
tero sin riesgo de traumatismo.
-Se trata de un dispositivo estril de un solo uso, lo
cual limita el riesgo de infeccin, tras diversas manipulaciones.
Colocacin. El esperma controlado como de buena calidad, se aspira en una jeringa que, a su vez, se conecta
a la sonda telescpica flexible. Se llena la sonda.
La pistola se introduce, sin espculo, en la vagina
hasta el cuello del tero. Se infla el baln y se cierra el
conducto para evitar que se desinfle. Se empuja entonces la sonda hacia delante y se inyecta el esperma.
Deben insuflarse 1 2 mi de aire, tras la manipulacin, para evitar que quede esperma en la sonda. Finalmente, se retira la sonda hacia atrs y la bolita ocluye el
orificio anterior, evitando as todo reflujo. La pistola se
deja en su lugar 10 minutos, con el animal tranquilo y
quieto, y no siendo necesario elevar el tercio posterior.
Si se precisa, la pistola puede fijarse con una goma
elstica a la base de la cola.
Retirada. Para retirar la pistola, basta con desinflar el
baln y retirar lentamente el conjunto hacia la vulva.
Discusin. La pistola Osiris, empleada para la inseminacin artificial con esperma fresco, presenta varias ventajas:
-Su flexibilidad evita los traumatismos, es bien tolerada por las perras, especialmente tras haberse inflado el
baln, lo cual parece desencadenar contracciones vaginales.

44

-El baln limita el reflujo de esperma y parece facilitar

el paso de los espermatozoides hacia el tero. Hemos
comprobado que un volumen de 0,25 ml de producto de
contraste inyectado durante el celo, aparece rpidamente (5 min.) en el interior del tero. Puede pensarse
entonces que el baln evita el reflujo del esperma y
adems que las contracciones que provoca y la distensin de la regin cervical seran, quiz, factores favorecedores del trnsito de los espermatozoides hacia el
tero. Adems, puede conseguir limitar el volumen de
esperma a utilizar en la inseminacin, lo que sera de
especial inters en la utilizacin del semen congelado.
Con todo ello, no parece necesario intentar pasar el
cuello del tero para obtener buenos resultados, contrariamente a lo que se indica generalmente (Andersen,
1969; Farstad, 1984).
d) Resultados
Los resultados son excelentes cuando se respeta perfectamente el protocolo descrito y cuando el nico
motivo que ha aconsejado la inseminacin ha sido el
rechazo de la monta; se consiguen del 80 al 85% de
gestaciones, lo cual est muy cerca de las condiciones
naturales de acoplamiento en las que estadsticamente
se considera un 92% de gestaciones obtenidas.
Por el contrario, los resultados son mucho menos brillantes si la intervencin se realiza a continuacin de
tratamientos hormonales contra la infertilidad (38-45%
de xitos) o si el propietario ha exigido la utilizacin de
un semental cuyo esperma era de calidad mediocre.

Conclusin
La ayuda a la monta debe convertirse en un acto

128

C. Dumon.

Tabla IV. Protocolo

Frotis vaginales

e inseminacin

artificial en la perra.

para asistencia a la monta (Segn Fontbonne)

Examen clnico de la perra

Frotis vaginal

Dosificacin progesteronemia
Medida de la resistividad vaginal

-La perra no est "a punto"

(demasiado pronto o demasiado tarde)
-Ciclo anovulatorio

No inseminar

-Cantidad recogida insuficiente

-Escaso nmero de espermatozoides
mviles

No inseminar

rutinario para un veterinario especializado en medicina

de animales de compaa. Esta intervencin es valorizante para el clnico y sobre todo, responde a la demanda de numerosos criadores y propietarios de perros de
pura raza.
El protocolo puede resumirse en la Tabla IV.

Esperma de buena calidad

2 inseminaciones
con 2 das de intervalo

Posibilidad de exportacin
ciones legislativas).

(bajo reserva de limita-

c) Indicaciones sanitarias
Eliminacin de enfermedades de transmisin
(brucelosis, sarcoma de Sticker principalmente).

sexual

2. Tcnica
Inseminacin

artificial

con semen congelado

a) Recogida del esperma

1. Indicaciones
A todas las indicaciones de la asistencia a la monta,
que permanecen vlidas, se aaden indicaciones zootcnicas, econmicas y sanitarias.

a) Indicaciones zootcnicas
Conservacin del patrimonio hereditario en razas en
vas de desaparicin.
Sobre todo: eliminacin de taras hereditarias por
testaje.
Posibilidad de crear nuevas razas (material de investigacin para los genetistas),
Conservacin del semen de sementales excepcionales.

b) Indicaciones econmicas
Se les puede evitar a hembras reproductoras de gran
valor desplazamientos largos, costosos y fuente de stress.
Para un criador de varias razas, no le es necesario
mantener varios sementales.

129

La obtencin del esperma se efecta de la misma

manera que en el semen fesco, con la dificultad consecuente a la ausencia de la hembra en celo, lo que, en
ocasiones, hace problemtica la ereccin y la eyaculacin del macho.
Es til disponer de una perra en celo, haciendo las
funciones de "incitadora".

b) Examen del esperma

Se conservar nicamente la fraccin epididimaria
del eyaculado, rica en espermatozoides,
y el examen del
semen ser mucho ms estricto y riguroso.
Es indispensable una evaluacin cuantitativa o espermiograma (realizado sobre cmara de Malassez o
sobre cmara de Thomas).
Un esperma de buena calidad debe contener 400 x
106 espermatozoides
por mililitro.
Por otra parte es totalmente intil congelar un semen
que presenta ms del l 0% de formas anormales o menos
del 60% de movilidad.
Las anomalas de los espermatozoides
se clasifican
45

Revista de AVEPA. Vol. 9,

3 - 1989

en 5 categoras:
-Cabeza, pieza intermedia,
acrosoma (cuadro).

cola, gotita proximal,

e) Colocacin en pajuelas en diluyente/conseruante y

congelacin
El esperma se conserva en un diluyente, a la vez
nutritivo y crioprotector, para el que existen diferentes
frmulas mantenidas ms o menos en secreto por fabricantes y/o usuarios.
En la composicin de estos diluyentes entran a formar parte la yema de huevo, el cido ctrico, la fructosa,
el gricerol y antibiticos.
Generalmente, se emplean 1,5 mI de diluyente por
segn el siguiente protoco100 x 106 espermatozoides,
lo:
1.0,5 mi de diluyente + esperma a 37 "C durante 15
minutos, luego a 4 "C durante 30 minutos.
2. Aadir 0,5 mI de diluyente conservado a 4 "C y
dejar en reposo 30 minutos.
3. Aadir finalmente el ltimo tercio de diluyente,
conservado tambin a 4 "C y dejar reposar 30 minutos.
4. El esperma as diluido se reparte con una jeringa en
las pajuelas de 0,5 mi, que contendr cada una alrededor
de 30 x 106 espermatozoides.
5. Estas pajuelas se dejan durante una hora a 4 "C y
luego son congeladas en los vapores de nitrgeno (-70)
durante 10 minutos.
6. Inmediatamente, se colocan en nitrgeno lquido
(-196), donde pueden conservarse varios aos.
En las pajuelas deben constar cuatro indicaciones:
-Fecha de la obtencin.
-Raza del semental (nmero de cdigo).
-Nrnero del tatuaje.
-Nombre del semental (o sus cinco primeras letras).
Ejemplo:

no

15-05-88

300

t'

l'

Fecha de
la obtencin

Cdigo
de raza

Nmero
de tatuaje

Nombre
del sementa I

ENV

PFam~

Si las pajuelas no se utilizan en el banco de esperma

en que se conservan, el transporte debe realizarse en
contenedores de nitrgeno lquido.
Evidentemente, las pajuelas congeladas slo pueden
manipularse mediare pinzas, bajo riesgo de quemaduras.
d) Descongelacin
Si bien la congelacin debe ser progresiva y lenta, la
descongelacin,
por el contrario, debe ser extremadamente rpida; para ello se preconizan dos protocolos:
-6 segundos a 75.
-30 segundos a 40.
46

Una descongelacin
demasiado lenta ocasiona la
aparicin de mcrocristales intracelulares que destruyen
la clula.
En cualquier caso, la congelacin y, sobre todo, la
descongelacin, alteran de manera notable los espermatozoides y su poder fecundante es inferior al esperma
fresco.
e) Inseminacin propiamente dicha
Puede realizarse por va quirrgica, por va transcervical y por va vaginal, como en la inseminacin con
esperma fresco.
A nivel de los resultados, las cosas son bastante diferentes.
). Resultados
Son claramente peores que con semen fresco. Puede
en efecto apreciarse que la congelacin y descongelacin destruyen el 40% de los espermatozoides,
y por lo
tanto, quedan de 15 a 20 x 106 espermatozoides
"tiles",
por pajuela. Ahora bien, los especialistas coinciden en la
cifra de 100 x 106 espermatozoides
como indispensable
para realizar una sola inseminacin. Corno son aconsejables dos inseminaciones con 48 horas de intervalo, es
necesario utilizar dos veces cinco pajuelas.
Esto implica que la inseminacin doble de una perra,
emplea la mitad del esperma obtenido del semental y
que estarnos muy lejos de las prestaciones obtenidas en
el caso de animales de produccin, en los que una sola
obtencin, permite fecundar decenas de hembras.
Por otra parte, las estadsticas evidencian los siguientes resultados:
-80% de gestaciones mediante colocacin quirrgica
del esperma.
-65% por inseminacin transcervical.
-25-30% por va vaginal, mediante catter de vidrio.
En un trabajo experimental que hemos realizado personalmente con el profesor Thuret, hemos podido conseguir dos gestaciones con prolificidad normal en tres
perras inseminadas con la pistola Osiris con inseminacin doble de cuatro pajuelas. Desgraciadamente,
es un
estudio demasiado limitado para permitir extrapolaciones estadsticas.
Paralelamente a los problemas tcnicos, debe ponerse a punto un protocolo riguroso en el aspecto administrativo. El Banco de Esperma de la Facultad de Veterinaria de Alfort ha estipulado un pliego de condiciones
estricto:
Aparte de los responsables del banco, nicamente se
permitir recibir semen congelado y efectuar las inseminaciones a los veterinarios que hayan seguido una
especializacin y obtenido el diploma que atestigua esta
especializacin.
Deben disponer del siguiente material:
-Microscopo equipado de platina calentante.
-Bao-mara regulable a 37 oc.

130

C. Oumon.

-Contenedor de nitrgeno lquido para el transporte

y conservacin de la pajuelas.
Para obtener el semen congelado, el veterinario debe
remitir al banco de semen una autorizacin escrita del
propietario del semental, indicando la identidad de la
hembra a la que van destinadas las pajuelas.
El veterinario recibe entonces el material necesario
para una doble inseminacin.
Efecta la inseminacin y realiza con precisin la redaccin del certificado de monta, testifica la realizacin
de la inseminacin sobre dicho certificado y lo remite al
propietario de la hembra. Este ltimo debe inmediatamente hacerlo firmar al propietario del semental.

4. Perspectivas
Si bien los resultados que se obtienen en estos momentos no son proporcionales a las esperanzas de los cinfilos, hay que admitir sin embargo, que estos ltimos
siguen con inters la puesta a punto del servicio que les
significa el banco de esperma y veterinarios que se
especialicen en estas tcnicas.
Es necesario desarrollar las investigaciones en diferentes niveles:
-Mejorar las tcnicas de conservacin del semen para
limitar la destruccin celular.
-Mejorar las tcnicas de inseminacin de cara a disminuir el nmero de pajuelas necesarias en cada inseminacin.

131

Frotis vaginales

e inseminacin

artificial

en la perra.

-Organizar redes de veternarios-nseminadores

disposicin de sus colegas y de los criadores.

Estos son los objetivos que se ha propuesto el Banco

de Semen Canino de la Facultad de Veterinaria de
Masons-Alfort, en colaboracin con el ministro de Agricultura y la Sociedad Central Canina. Ha sido dotado de
los medios en la medida de sus objetivos y nada se opone
a que se alcancen.

Conclusin
La inseminacin artificial con semen congelado es un
trabajo de especialistas, supone una infraestructura
compleja, investigaciones a efectuar, y por todo ello, se
opone a la inseminacin con semen fresco, que debe
convertirse en un acto banal de prctica cotidiana.
Sin embargo, es indispensable que los veterinarios se
interesen de manera activa por el desarrollo de estas
tcnicas, si quieren ser interlocutores vlidos, expertos y
apreciados por criadores y cinfilos.
Frotis vaginales, e inseminacin artificial significan
campos relativamente novedosos de actividad para el
veterinario. Amplan su abanico de actividades a la cra
y la reproduccin canina.
Se trata de problemas apasionantes en los que todava hay mucho por hacer. Nuestros interlocutores, los
criadores y los cinfilos, estn impacientes y cuentan
con nosotros: convendra no decepcionarles.

47