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TECNICAS BIOTECNOLGICAS
Introduccin
La ingeniera gentica y la biotecnologa proporcionan diferentes tcnicas para lograr el
cultivo in vitro ; un heterogneo grupo de tnicas mediante las cuales un explante ( parte
separada de un vegetal

como los protoplastos , clula , tejido , rgano ) se cultivan

aspticamente en un medio de composicin qumica definida y se incuba en condiciones

ambientales

controladas , con el objetivo de darle diferentes utilidades , como ;

bioconversin, incremento en la variabilidad gentica , obtencin de plantas libres de

patgenos, propagacin de plantas, conservacin e intercambio de germoplasma . Debemos
considerar que las tcnicas difieren para cada caso .Cualquier sistema de cultivo in vitro
debe lograr como producto final la regeneracin de plantas enteras.
Para lograr los cultivos in vitro se requiere de mantener un medio nutritivo de acuerdo a cada
caso, Las hormonas vegetales ejercen funciones especficas sobre el crecimiento de las
plantas entre ellas tenemos que:
Auxinas: entre ellas el naftaleno actico provoca efectos fisiolgicos tales como; crecimiento
longitudinal, tropismo, dominancia apical, disminucin de senescencia, entre otros.
Giberelinas: ejercen control de desarrollo y crecimiento, permiten el crecimiento del embrin
para su germinacin, estimula la etapa de la floracin, disminuyen el tiempo para la
maduracin.
Citoquininas: Dentro de sus funciones importantes es el crecimiento y la mitosis de la clula,
interrumpen la latencia, antiscenescentes, contribuyen el metabolismo de estructuras como
las hojas,
Acido abscsico: aprovechable en la floricultura y la fruticultura.

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PROPAGACIN IN VITRO DE ORQUIDEAS MEXICANAS.

Dada la importancia hortcola y comercial

de las orqudeas; en el laboratorio

de

Biotecnologa vegetal, del Instituto de Investigaciones Qumico Biolgicas de la Universidad

Michoacana de San Nicols de Hidalgo, en el Estado de Michoacn , con el objetivo de
implementar la propagacin masiva y conservacin in vitro de orqudeas Mexicanas .
Presentaron el proyecto del establecimiento y conservacin de 9 especies de orqudeas
Mexicanas desarrollando diversos mtodos de propagacin para conseguir la reproduccin
masiva a partir de semillas o tejidos vegetales y desarrollarlas en invernaderos.

Tipos de orqudeas:
(Cattleya aurantiaca

Encyclia adenocaula

Epidendrum radicans

Citrina

Laelia albida

Laelia autumnalis

Laelia speciosa

Oncidium cavendishianum

Oncidium tigrinum

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PROPAGACIN Y MANTENIMIENTO IN VITRO DE ORQUIDEAS MEXICANAS

Algunas especies de orqudeas mexicanas a travs de generar conocimientos sobre su

propagacin y conservacin in vitro.
Para la realizacin de este proyecto explantes fueron utilizados para su multiplicacin tales
como: segmentos de hojas, estructuras

tipo protocormos y pseudobulbos de plantas

cultivadas in vitro provenientes de semillas.

Algunos medios utilizados en el proyecto son:
Murashige y skoog (MS) adicionado con concentraciones propias de auxina (ANA), citocina
(BA) y cido giberlico (GA3) Utilizado para la induccin de callo, proliferacin de estructuras
tipo protocormos, desarrollo y mantenimiento a mediano plazo de plntulas.

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Establecimiento de los cultivos in vitro; se realiz por la siembra de semillas, las cuales se
obtuvieron de cpsulas con madurez fisiolgica, que consisti en colocarlas en solucin de
detergente neutro (Hyclin 15%,15 min). Se enjuagaron en agua corriente, se ponen en etanol
al 70% por 2 min, posteriormente en agua oxigenada 3%.
En rea estril se enjuagaron tres veces con agua destilada estril y fueron seccionadas
con un corte transversal y otro longitudinal, separando las semillas con una esptula y
cultivndolas sobre el medio nutritivo,
Micro propagacin :Para determinar el sistema de propagacin in vitro , se utilizaron
segmentos de hojas, protocormos y pseudolobulos ( explantes 0.5cm2) de las plntulas
producidas por semilla mantenidas por 6 meses en cultivos in vitro. Estos explantes fueron
cultivados en Ms con diferentes combinaciones de reguladores de crecimiento (ANA/BA;
ANA/GA3, ANA//BA/GA3) en dosis de a

10mg.Medios para la produccin de callos,

protocorm y de mantenimiento.
Mantenimiento de cultivos in vitro.
El mantenimiento de los cultivos in vitro de las 9 orqudeas en estudio se realiza de dos
maneras: a corto plazo, con subcultivos continuos de plntulas cada 4 meses, en medios
de desarrollo
RESULTADOS
Se consigui el cultivo in vitro por semillas de todas las semillas en estudio, dando como
resultado 1l 100 de germinacin utilizando el medio completo MS, con o sin reguladores de
crecimiento, al cultivar en condiciones luz..
Se observ que al adicionar BA en una dosis relativamente baja de 0.05mg litro, el proceso
de germinacin se acelera y es homogneo, no importando si se incuban en luz

obscuridad.

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El medio de cultivo ptimo de germinacin MS en donde las dosis y combinaciones de estos

reguladores de crecimiento como auxina, citocininas, giberlinas, en medios de cultivo para
optimizar el crecimiento y desarrollo de plntulas, frecuentemente resulta en la estimulacin
del desarrollo de las plntulas, aunque no siempre se favorece

ya que puede haber

respuesta de callogenesis, retardo en el crecimiento y excesiva elongacin de los tallos.

Conservacin in vitro de las 9 orqudeas ,se mantiene bajo subcultivos continuos de cada 4
meses en medio MS de desarrollo apropiado para cada especie , estas varan de
concentracin de sus componentes (100%, 75%, 50%, 25% y 12.5%), de sacarosa (60, 40,
30, 20 y 10 g litro-1), adicionando substancias retardadoras del crecimiento como manitol,
sorbitol

cido

abscsico y probando tres diferentes temperaturas (25, 10 y 5C),

cultivndolas en condiciones de luz difusa (500 lux). Con los resultados obtenidos (datos
no mostrados), actualmente se conservan a una temperatura de 10C en tres diferentes
medios para mnimo crecimiento, dependiendo de la especie de orqudea: L. albida, L.
autumnalis y L. speciosa en MS 12.5% con 60 g litro-1 de sacarosa y 0.5 mg litro-1 ABA;
E. radicans, O. cavendishianum y O. tigrinum en MS 12.5% con 40 g litro-1 de sacarosa,
sin ABA; C. aurantiaca, E. adenocaula y E.citrina en MS 75% con 60 g litro-1 de sacarosa
sin ABA Estas plntulas se su cultivan a medio fresco cada 12 meses

con

el

fin

de

probar su viabilidad y capacidad de propagacin,

CONCLUSIN.
La aplicacin biotecnolgica en la obtencin de plantas cultivadas in vitro es aprovechable
en los invernaderos en la horticultura as como en el cultivo de vegetales, determinando una
produccin a mayor escala y segura.

https://www.uam.es/docencia/LAvanFis/CI/CharlaCultinvitro0607.pdf

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