SYNTHSE

mdecine/sciences 1997; 13 : 927-33

Dissmination
de la rsistance
aux antibiotiques :
le gnie gntique
l'uvre chez les bactries
Paul H. Roy

ADRESSE
P.H. Roy: professeur titulaire au dpartement de

biochimie, Facult des sciences et de gnie, Uni

versit Laval et chercheur senior, Cent1e de
recherche en infectiologie, CHUL (centre hospita
lier de l'u niversit Laval). Centre de

recherche du centre hospitalier de l'univer

sit Laval et dpartement de biochimie,
Universit Laval, 2705, boulevard Laurier,
Sainte-Foy, Qubec, GlV 4G2 Canada.
m/s n' 8-9, vol. 13, aot-seplem!n-e 97

L'mergence de la rsistance bactrienne de multiples

antibiotiques nous conduit parler de la tm du miracle.
Plusieurs mcanismes de rsistance ont t dcrits parmi
lesquels on trouve la dgradation enzymatique des antibio
tiques, l'altration des cibles auxquelles se lient les antibio
tiques et l'expulsion de l'antibiotique par la bactrie.
L'accumulation de mutations ponctuelles peut altrer de
faon significative l'enzyme ou sa cible : des lactamases
(enzymes dgradant les pnicillines) , mutes, peuvent
dsormais hydrolyser des cphalosporines de troisime
gnration. Les gnes de rsistance, s'ils provenaient vrai
semblablement autrefois des bactries productrices d'anti
biotiques, ont pu tre acquis, plus rcemment, par transfert
horizontal par les bactries pathognes. Les transposons
peuvent comporter des squences de gnes de rsistance,
voire coder pour toute une voie mtabolique entranant la
rsistance. Rcemment, on a dcrit des lments d'ADN,
les intgrons, dans lesquels les gnes de rsistance existent
sous la forme de cassettes mobiles qui sont rarranges par
une sorte de gnie gntique naturel et forment des op
rons de rsistance fortement exprims.

n a considr la dcou
verte et l 'utilisation cli
nique des sulfamides puis
de la pnicilline comme
le << miracle , qui allait
sonner le glas des maladies infec
tieuses d'origine bactrienne. Cepen
dant, la riposte des bactries a t
sans quivoque : auj o u rd ' hu i , o n
parle de la fi n du m iracle ,, o u

encore de << l'apocalypse , car les anti

biotiques deviennent souven t ineffi
caces en raison de la rsistance bact
rienne [ 1-3] . L'utilisation croissante
des antibiotiques, non seulement en
mdecine humaine et vtrinaire
mais aussi comme supplment ali
mentaire pour stimuler la croissance
des animaux (application controverse ) , a contribu l a slection d e

---

927

bactries res1stan tes aux an ti bio

tiques. Les gnes de rsistance que
l'on retrouve aujourd'hui, s'ils n'ont
pas toujours t prsents chez les
bactries pathognes, ne sont pas
non plus ncessairement apparus de
nova depuis l 're des antibiotiques.
Ces gnes proviennent plutt des
m i c robes produc teurs d ' an tibio
tiques ou de ceux qui cohabitent
avec eux dans l'environnement. Ces
gnes, qui ont volu depuis -des mil
lions d'annes, taient prts tre
recruts par des lments gntiques
mobiles et tre transfrs chez des
organismes ayant maintenant besoin
des gnes de rsistance pour survivre.
Comme nous le verrons, les moyens
naturels de dissmination de la rsis
tance ressemblent parfois trange
ment aux mthodes de gnie gn
tique dveloppes au laboratoire.

Les mcanismes
de la rsistance

Rsistance mdiation enzymatique

Les bactries produisent des enzymes

qui altrent chimiquement les antibio
tiques et les rendent ainsi inactifs : c'est
le cas des -lactamases hydrolysan t
l'anneau !3-lactame des pnicillines et
des cphalosporines, mcanisme le
plus rpandu de rsistance la pnicil
Line [ 4] . D'autres enzymes inactivent
des molcules d'antibiotiques en y
ajoutant des groupements chimiques :
par exemple, les aminosides peuvent
tre inactivs par phosphorylation,
adnylylation ou actylation [ 5]. Les
chloramphnicol-actyltransfrases
modifient le chloramphnicol pour le
rendre inactif. La dcouverte rcente
d'une nouvelle classe de chloramph
nicol-actyltransfrases [6, 7] , sans
aucune identit de squence avec les
prcdentes est une dmonstration
probante d'volution convergente.
L'analyse de leurs squences a conduit
la dcouverte d 'actyltransfrases
similaires, chez les bactries Gram posi
tif, modifiant une autre classe d'anti
biotiques, les macrolides [8] .
Altration de la cible

928

Des bactries peuvent produire des

protines structurales ou des enzymes
se substituant aux protines qui sont
les cibles normales des antibiotiques
(figure 1). Citons comme exemple

Rplication de l'ADN:
acide nalidixique
quinolones (ADN gyrase)

Assemblage de la
membrane cytoplasmique :
gramicidines

Transcription de
l'ADN : rifamycines
(ARN polymrase)

Biosynthse de la
thymidine:
trimthoprime (DHFR)

Biosynthse des
purines: sulfamides
(DHPS)

Synthse du peptidoglycane et assemblage de

la membrane externe :
P-lactamines, y-lactamines
(PLP : transpeptidases et carboxypeptidases)

Traduction de I'ARN messager:

aminosides-aminocyclitols
ttracyclines
(sous-unit ribosomale 30S)

glycopeptides
lipoglycopeptides
bacitracines

macrolides-lincosamides
chloramphnicol
acide fusidique

fosfomycine
cyclosrine

(sous-unit ribosomale SOS)

Fig u re 1 . Divers agents antimicrobiens et leur action sur le mtabolisme bac

trien. Les cibles des molcules sont indiques entre parenthses. ADHF:
acide dihydrofolique; ADHP: acide dihydroptroque; A THF : acide ttrahy
drofolique; APA B : acide para-aminobenzoque; DHFR : dihydrofolate rduc
tase ; DHPS : dihydroptroate synthase; PLP: protines liant la pnicilline.
(Adapt de Neu [3 1].)

l'altration de la PLP (protine liant la

pnicilline) produite par des staphylo
coques rsistants la mthicilline. Ces
protines PLP mutes permettent aux
bactries de synthtiser normalement
leurs parois cellulaires, mme en pr
sence d'antibiotiques de la classe des
!3-lactamines. Chez les staphylocoques,
le gne de cette protine PLP a proba
blement t acquis par transfert hori
zontal mais, chez les pneumocoques,
la rsistance la pnicilline serait plu
tt due l'accumulation de mutations
ponctuelles des gnes codant pour
leurs PLP [9, 10] . D'autres rsistances,
plutt des contournements de la cible
que des altrations de celle-ci, sont
dues la synthse d'une dihydrofolate
rductase rsistante au trimthoprime
et d'une dihydroptroate-synthase
rsistante aux sulfamides [ I l ] .
Expulsion des antibiotiques

Les bactries produisent souvent des

protines membranaires agissa n t
comme pompes molculaires per-

mettant d'expulser un antibiotique

l ' extrieur de la cellule. C 'est le
mcanisme principal de la rsistance
la ttracycline, chez les bactries
Gram positives et Gram ngatives. Il
existe aussi de telles pompes spci
fiques de la rsistance au chloram
phnicol chez les bactries Gram
ngatives et de la rsistance aux qui
n olones c hez les staphylocoques.
D'autres pompes, comme le produit
du gne emrE de E. coli, ont moins de
s p c ifi c i t de substrat e t s o n t
capables d e transporter des antibio
tiques varis. Ces pompes appartien
nent une grande famille de pro
tines transmembranaires incluant les
transporteurs de sucres [ 1 2 ] ; il est
possible que les transporteurs d'anti
biotiques aient volu partir des
transporteurs de sucres.

Mutations des gnes

de rsistance

En raison de la pression de slection

continuelle impose par l'utilisation
m/s n" 8-9, vol. 13, aotrseptembre 97

des antibiotiques, plusieurs mutations

Tableau 1
nouvelles peuvent s'tablir dans une
population bactrienne. Les -lacta
EXEMPLES DE M UTATIO N S PONCTU E LLES
mases spec tre largi [ 4 ] s o n t
AFFECTANT LA SPCIFI CIT DES E NZVMES DE RS ISTANCE
capables d'hydrolyser les cphalospo
rines de troisime gnration, telles
Gne
Acide amin Commentaire
Rfrences
que la ceftazidime, la cfotaxime et le
ceftriaxone (Tableau !). Ces enzymes
E 1 04K
b/a(TEM-3)
Rsistance la ceftazid ime
[32]
rsultent de mutations ponctuelles
+ G238S
et la cfotaxime
b/a(TE M- 1 2 )
R 1 64S
des gnes de -lactamases de type
Rsistance la ceftazidi me
[33]
b/a(TE M-33)
M69L
Rsistance aux i n h i biteurs
[34]
TEM-1 ou SHV- 1 , mutations qui alt
de la 13-lactamase
rent la structure du site actif de
b/a(SHV-2)
Affecte la structure
G238S
[35]
l'enzyme permettant ainsi l'hydrolyse
de la fente du site actif
de nouveaux substrats. Con traire
b/a(SHV-8)
D 1 79 N
Affecte la structure
[36]
ment l'volution des gnes com
de la boucle omga
plets, ces mutations ponctuelles sont
b/a(OXY- 1 ) * GATAGT -> Rsistance a u x cpha lospori nes due [37]
rcentes. Avec l'acquisition de leur
TATAGT
la su rprod uction de la 13-lactamase
capacit d'hydrolyser les cphalospo
aacA4
L 1 1 9S
Devient sensible l ' a m i kacine mais
[51
rines de troisime gnration, les j)
en mme tem ps rsistante
lactamases spectre largi perdent
la genta m icine
un peu de leur efficacit vis--vis des
gyrB
S464T
Rsistance a u x q u i nolones
[38]
pnicillines : c'est pourquoi ces muta
tions n ' ont pu s'tablir de faon
Mutation dans le promoteur affectant la bote - 10.
stable avant l're des antibiotiques.
Un autre cas d'volution rcente par
mutation ponctuelle est celui des sible l'action des quinolones, affec d'importance clinique sont conjuga
lactamases IRT (inhibitor resistant ten t tout de m m e l ' activit de tifs*. Ils possdent des gnes pour les
TEM) [ 1 3] rsistantes aux inhibiteurs l'enzyme et les bactries mutantes pili** et pour un mcanisme spcia
de -lactamases. Ces composs sont sont limines de la population bac lis de rplication de l 'ADN. Les
utiliss depuis quelques annes en trienne lorsque le traitement par gnes de rsistance peuvent s'asso
combinaison avec des pnicillines l'antibiotique est termin. Le gne cier aux plasmides, soit par le sys
pour prserver l'efficacit des pnicil reste au niveau du chromosome et ne tme de recombinaison homologue
lines mme vis--vis des bactries pro se retrouve pas sur les p lasmides de la cellule, soit encore par des
ductrices de j)-lactamases. Leur effica puisque la surproduction de l'ADN mcanismes spcialiss tels que les
cit est maintenant compromise.
gyrase serait nuisible la cellule. La transposons et les intgrons. Une fois
Une multiplicit de protines sont dissmination de la rsistance aux le gne de rsistance prsent sur le
impliques dans la rsistance aux quinolones se fait donc par dissmi plasmide, il peut tre transmis
aminosides, chacune ayant sa propre nation clonale des mutants ponc toutes les espces faisant partie de la
spcificit vis--vis des divers antibio tuels, ce qui p e u t en tra n e r des gamme des cellules htes du plas
tiques de cette famille. Des mutations petites pidmies d'infections noso mide.
ponctuelles peuvent con tribuer comiales et communautaires.
l'volution de ces enzymes. Les ami
Transposons
nosides-6'-actyltransfrases AAC (6')
La dissmination
Ib et AAC (6')-II diffrent par plu
Les transposons sont des lments
de la rsistance
sieurs acides amins ; cependant, le
mobiles d'ADN ( << gnes sauteurs , )
changement d'un seul acide amin Plasmides
capables d e se transfrer entre un
dtermine la prfrence de AAC (6')
c h ro mosome et u n plasmide ou
Ib pour l'amikacine comme substrat, Les gnes de resistance aux antibio encore entre deux plasmides. Le
et de AAC (6' )-II pour la gentamicine tiques peuvent tre transmis d'une transposon simple, TnJ ifigure 2)
[5] .
espce l'autre par des plasmides, code pour un seul gne de rsis
On croyait, tort, qu'avec l'utilisa l m e n ts d 'ADN extrach romoso tance, celui de la -lactamase TEM-1 ,
tion des quinolones ayant pour cible miques capables de rplication ind ainsi que pour deux autres gnes
l'ADN-gyrase, enzyme-cl de la rpli pendante du chromosome. Le mca
cation de l'ADN, le dveloppement nisme de rplication d'un plasmide
de la rsistance serait pratiquement donn dtermine sa gamme de cel * La conjugaison bactrien ne est te tmnsje1t gPn
tique entre une bactrie mte donatrice et une bact
impossible. Cependant, des mutants lules-htes : quelques plasmides sont rie Jemelle 1"ceptrice, par un pont cytoplasmique
d'ADN-gyrases toujours fonctionnels capables de se rpliquer uniquement inteTbaclrien ou par l'intermdiaire de pili sexuels.
mais rsistants aux quinolones sont chez des bacilles entriques, d'au tres Les lments gntiqurs ainsi transfrs peuvent tre
dcrits avec une frquence inqui uniquement chez les Pseudomonas chromosomiques ou extrachmmosomiques, en pani
culier plasmidiques.
tante dans de nombreuses espces alors que certains se retrouvent dans **
Les pili sexuels sont des af>pendices filamenteux
bactriennes. Ces mutations ponc plusieurs espces ou dans plusieurs qui intemiendraienl dans la conjugaison bact
tuelles, rendant l'ADN-gyrase insen- genres. La plupart des plasmides nenne.
*

m/s n B-9, vol. 13, aol-seplem/Jre 97

929

tnsR

Tn3

temt

tnsA
kan

Tn5

dhfrt

Tn7

ble

sai

str

aadA

int

tnsE

tnsD

tnsC

tnsB

tnsA

F i g u re 2. Quelques transposons communs. Le transposon Tn3 code pour la

f3-lactamase TEM- 1. Le transposon Tn5 code pour la rsistance quelques
vieux aminosides, tandis que la rsistance aux aminosides plus rcents
(comme la gentamicine et l'amikacine) se trouve principalement dans les
intgrons. kan, ble, str : gnes de rsistance aux vieux aminosides, kanamy
cine, blomycine, streptomycine. Le transposon Tn l a t le donateur de la
cassette d hfr1 (rsistance au trimthoprime) qui se trouve maintenant dans
un intgron en compagnie du gne s u l 1 codant pour la rsistance aux sulfa
mides. i nt : gne de l'intgrase ; sat : gne de la streptotricine actyltransf
rase; a a dA : gne de l'aminoside N-adnylyltransfrase, confrant, respecti
vement, la rsistance la streptomycine et la spectinomycine. Les gnes
tns sont ncessaires la transposition.

---

930

ncessaires la transposition . Le
gne terni tant prsent sur TnJ , la
protine TEM-1 est la (3-lactamase la
plus rpandue c h ez les bactries
Gram ngatifs. Les mdecins ont d
apprendre soigner malgr la rsis
tance la pnicilline ( relaye par
TEM- 1 ) , mais il ne faut pas perdre de
vue que les gnes des -lactamases
spectre largi rsident galement sur
ce transposon et risquent donc de se
rpandre aussi efficacement.
U n des m e i l l e u r s e x e m p l e s de
l'importance de la transposition dans
la dissmination de la rsistance est
l ' apparition, au dbut des annes
1 970, de la rsistance des Haemophi
lus et Neisseria aux pnicillines [ 1 4] .
Ces bactries taient auparavant uni
formment sensibles aux pnicillines.
Les souches de H. ducreyi rsistantes
la pnicilline contiennent un plas
mide portant le transposon TnJ en
entier. Ce plasmide serait d l'arri
ve, probablement par transforma
tion, d'un plasmide portant TnJ en
proven a n c e d ' un e bactrie e n t
rique. Le plasmide tant incapable
de se rpliquer c h ez Haemophilus,
avan t q u ' i l ne soit dgrad , TnJ
aurait transpos sur u n plasmide
cryptique endogne. H. ducreyi est
donc l ' in termdiaire probable dans
la dissmination de TEM-1 puisqu'on
y retrouve le plasmide portant le TnJ
complet, alors que chez H. parainfluenzae et N. gonorrhoeae, on retrouve

un plasmide ne contenant que 40 %

de TnJ, c'est--dire un transposon
dlest de son gne de transposase.
On retrouve le mme plasmide chez
H. ducreyi. Ce << dlestage , aurait
donc eu lieu chez H. d:ucreyi avant le
tran sfert de ce plasmide vers H.
parainjluenzae et N. gonorrhoeae. Ces
plasmides n'tant pas conjugatifs, les
transferts ont probablement eu lieu
par transformation. Par consquent,
le gne perdu de la transposase n 'est
pas indispensable. On peut facile
ment imaginer l'environnement des
sites de ces transferts.
Si TnJ ne porte qu'un seul gne de
r s i s tan c e , d ' au tres, tel Tn 1 5 4 6
trouv chez les entrocoques, codent
pour une voie mtabqlique complte
confrant la rsistance la vancomy
cine. Le gne vanA code pour une
enzyme qui, aux extrmits des pen
tapeptides de la paroi, interpose un
D-Ala-D-lactate (rsistant la vanco
mycine) au lieu d ' u n D-Ala-D-Ala
(sensible la vancomycine ) . Le gne
vanA est flanqu par le gne vanH
qui code pour une dshydrognase
produisant le substrat de vanA, et par
le gne vanX dont le produit hydro
lyse le D-Ala-D-Ala. Ces trois gnes
sont suivis de deux gnes auxiliaires,
van Y (codant pour une DD-carboxy
peptidase) et vanZ (impliqu dans la
rsistance la ticoplanine ) . Si cet
opron tait exprim de faon consti
tutive, la paroi alternative serait syn-

thtise en tout temps, ce qui n 'est

pas le cas ; de fait, l'opron est sous le
contrle d'un << systme deux com
posantes , cod par les gnes vanR et
vanS i n duisan t l ' expressio n des
autres gnes van en prsence d'un
stimulus extrieur, probablement la
vancomycine elle-mme. Tn 1546 est
donc un systme trs complexe qui
permet l'entrocoque de btir une
paroi alternative rsistante la vanco
mycine, en rponse la prsence de
l'antibiotique [ 1 5, 1 6] .
Intgrons

Au cours des annes 1 980, nous

avons trouv que plusieurs gnes de
rsistance diffrents taient regrou
ps sur des plasmides faisant souvent
partie des transposons apparents
Tn21. Des tudes par cartographie
avec des enzymes de restriction et par
microscopie lectronique des htro
duplex entre deux transposons appa
rents, ont permis de voir que ces
lments ne diffraient souvent que
par une rgion d'ADN de la taille
d'un gne. Des tudes ultrieures de
squenage ont mon tr que plu
sieurs gnes codant, par exemple,
pour des -lactamases, des gnes de
rsistance aux aminosides, des dihy
drofolate-rductases rsistantes au tri
mthoprime et des rsistances au
chloramphnicol, possdent en effet
tous des cassettes ayant leur extr
mit 3' une courte squence palin
dromique [ 1 7-20] . Ces cassettes sont
toutes intgres, seules ou en tandem
avec d'autres cassettes, un site sp
cifique situ e n tre deux rgions
conserves. L'une de ces rgions
code pour une intgrase similaire
aux intgrases des bactriophages
lysogn e s comme [ 2 1 ] , l ' au tre
contien t deux gnes de rsistance,
l'un pour les antiseptiques et l'autre
pour les sulfamides.
Maintenant, on appelle ces lments
des intgrons [22, 23] (figure 3), qui
sont en quelque sorte le gnie gn
tique effectu par la bactrie. L'exci
sion et l ' in tgration des cassettes, par
un mcanisme de recombinaison
spcifique de site relay par l'int
grase, ont t dmontres et la carto
graphie par PCR a permis de trouver
de nouveaux arrangements de cas
settes [24] . Les cassettes sont expri
mes ensemble comme opron par
tir de deux promoteurs localiss juste
m/s no 8-9, vol. 13, aot-septem!Jre 97

largi. On peut se demander pour

quoi Haemophilus et Neisseria produi
sen t. toujours la mme P.Iactamase,
TEM- 1 , acquise dans les annes 1 970.
Les ADN-polymrases de ces orga
nismes sont-elles plus fidles que
celles d'E. coli, ou leurs systmes de
rparation d'ADN sont-ils plus effi
P GTTRRRY
GTTRRRY
caces ? Il n'y a aucune raison, a priori,
pour que les mutations ponctuelles
Segment 5'-conserv
Cassette insre
Segment 3'-conserv
entranant la production de P.lacta
mases TEM spectre largi ne se
Fig u re 3. Structure gnrale des intgrons. Les flches indiquent la direction retrouvent pas chez Haemophilus et
de la transcription. L 'emplacement et l'orientation des promoteurs sont indi Neisseria. Il est mme tonnant que
qus. Les squences G TTRRRY indiquent les points de crossi ng-over pour cela n 'ait pas encore t observ.
l'intgration spcifique de site des cassettes. Les courtes flches 5'-CS et 3' Avec l'augmentation de la propor
CS indiquent les oligonuclotides utiliss pour la cartographie des intgrons tion de gonocoques rsistants la
par PCR. On indique ici une cassette insre avec sa squence palindromique pnicilline, le traitement de premier
en aval; il peut y avoir plusieurs cassettes intgres en tandem. qacEb. 1 : choix des gonorrhes est maintenant
la ceftriaxone, une cphalosporine
rsistance aux composs amins quaternaires (faible, gne tronqu).
de troisime gnration. La pression
de slection est donc prsente, et il
en amont du site d'intgration des Tn 7, qui possde un intgron diff faut trouver une alternative au cas o
cassettes. L'analyse de ces promo rent de celui trouv dans Tn21. La des bacilles Haemophilus ou Neisseria
teurs a rvl que l'intgron est en cassette de dhfrl a maintenant t producteurs de P-lactamase spectre
effet un vecteur d'expression natu retrouve dans des intgrons en asso largi apparatraient. Il est peu pro
rel ; certaines versions des promo ciation avec le gne responsable de la bable que les anciens antibiotiques,
teurs de l'intgron sont plus fortes rsistance alix sulfamides [27] . Cette comme la ttracycline, soient d'une
que le promoteur tac souven t utilis association dhfrl-sul trouve chez des grande utilit. En effet, son utilisa
dans les vecteurs d'expression du shigelles isoles au Sri Lanka, rend tion dans le tiers-monde est associe
laboratoire [ 25] . Quant aux gnes inutile la combinaison trimthoprime une augmentation de la proportion
inclus dans les cassettes, l'analyse de sulfamide, thrapie efficace et peu de gonocoques rsistants la ttracy
leur utilisation de codons permet de coteuse [ 1 1 ] . D'autres gnes dhfr, cline.
dterminer leurs origines diverses. comme dhfrXII rsistant des concen
Aucun de ces gnes n'a encore t trations leves de trimthoprime, .ont Staphylocoques rsistants
trouv dans son contexte originel rcemment t dcrits. D'autres gnes la vancomycine
chromosomique. La faon dont un associs pour la premire fois aux
gne s'associe pour la premire fois intgrons incluent ceux d'une P.lacta Le transposon Tn 1546 porte tous les
sa squence palindromique pour for mase spectre largi (OXA-1 1 ) et gnes ncessaires la synthse d'une
mer une cassette reste inconnue.
d'une mtallo-P-lactamase (bla-IMP) paroi alternative , o les liens D
Les plasmides portant les intgrons se codant pour la rsistance aux carba Aia-D-Aia sont remplacs par les D
retrouvent chez les entrobactries et pnmes [28] .
Aia-D-lactates insensibles l 'action
les pseudomonades. Non seulement
de la vancomycine. L'acquisition de
les intgrons accumulent les cassettes
Que nous rserve l'avenir 7 ce mode de rsistance est-il spci
de rsistance, mais ce sont aussi des
fique des en trocoques ? Probable
lments mobiles [26] . Ils fon t parfois Il est, bien sr, impossible de prvoir ment pas, car il a t montr que le
partie d'autres transposons, comme exactement la faon dont le pro plasmide portant ce transposon peut
Tn21, mais ils se retrouvent aussi dans blme de la rsistance aux antibio tre introduit in vitro chez S. aureus et
des plasmides de plusieurs groupes tiques voluera dans les prochaines confrer la rsistance la vancomy
d'incompatibilit (correspondant aux annes. Nous pouvons nanmoins cine. Si ce transfert peut se produire
gammes de cellules htes) . Parmi les t i r e r des l e o n s d e l ' vol u t i o n in vitro, alors pourquoi pas in vivo?
gnes de rsistance cliniquement rcente et considrer quelques scna Les conditions dans l'environnement
importants ports par les intgrons, rios plausibles partir des mca son t loin d ' tre aussi idales que
notons la prsence de gnes conf nismes de dissmination connus.
dans le laboratoire, mais le passage
rant la rsistance aux aminosides tels
du plasmide portant Tn 1 546 d'un
que la gentamicine, la ntilmicine, la Haemophilus et Neisseria
en trocoque un staphylocoque
tobramycine et l'amikacine ainsi que rsistantes aux cphalosporines
demeure possible. Mme si le plas
les gnes de P-lactamases de type de troisime gnration
mide entier est incapable de se rpli
OXA- et CARB- et plusieurs gnes res
quer, le transposon pourrait se dpla
ponsables de la rsistance au trim Nous savons comment les entrobac cer dans l'ADN chromosomique, par
thoprime. Parmi ces derniers, le gne tries ont dvelopp, par mutation exemple au niveau de la rgion du
dhfrl a t initialement trouv dans ponctuelle, des P-Iactamases spectre gne mec, lieu de prdilection pour
P1

P2

m/s

n 8-9,

vol. 13, aot-septcm/Jre 97

93 1

l'insertion des squences d'insertion

et des transposons, comme Tn 4001
codant pour la rsistance aux amino
sides [29] . Le dveloppement de la
rsistance la vancomycine chez les
staphylocoques rsistants la mthi
cilline, pour lesquels la vancomycine
est le seul antibiotique utile, pourrait
alors nous ramener l're pranti
biotique.
D'autres scnarios sont plus difficiles
prvoir. On ne peut pas exclure
l 'arrive d 'une nouvelle rsistance
chez une espce auparavant unifor
mment sensible. La leon des Hae
mophilus e t des Neisseria n o u s
apprend que rien n 'est impossible. I l
e s t galement difficile de prvoir
quand et comment d'autres gnes
chromosomiques (pas seulement des
gnes de rsistance - peut-tre aussi
les facteurs de viru l e n c e ) seront
recruts par les intgrons. Les com
pagnies p harmaceutiques rech e r
chent activement de nouvelles cibles,
mais il y a trs peu de dveloppement
de nouveaux antibiotiques et il n'y a
pas de solution miracle l ' horizon. Il
reste donc utiliser prudemment
un arsenal thrapeutique en diminu
tion [30]

8. Alli gnetJ, Londe V, Simenel C, Delpierre

2 1 . Ouellette M, Roy PH. Homology of

ORFs from Tn2603 and from R46 to site
specifie recombinases. Nucleic A cids Res
1 987 ; 1 5 : 1 0055.

9 1 -8.

22. Stokes HW, Hall RM. A novel family of

potentially mobile D 1A elements encoding
site-specifie gene-integration fun etions :
integrons. Mol Micmbio/ 1989 ; 3 : 1 669-83.

M, El Solh . Sequence of a staphylococcal

gene, vat, encoding an acetyftransferase
mactivating the A-type comp ounds of virgi
niamycin-like antibiotics. Gene 1993 ; 1 3D :
9. S p ratt BG. Resistance to antibiotics
med1ated by target alterations. Science 1 994 ;
264 : 388-93.

1 0 . Dowson CG, Coffey TJ, Spratt BG. Ori

gin and molecular epidemiology of penicil

fin-binding-protein-mediated resistance to
[3-lactam antibiotics. Trends Microbiol 1 994 ;
2 : 361-6.

1 1 . Huovinen P, Sundstrm L, Swedberg G,

Skld O. Trimethoprim and sulfonamide

resistance. A n limicrob Agents Chemother 1995 ;
39 : 279-89.

1 2. Nikaido H. Prevention of drug access to

bac te rial targets : permeability barri ers and
active efflux. Science 1994 ; 264 : 382-8.
1 3. Blazquez J, Baquero MR, Canton R, Alos
1, Baquero F' . Characterization of a new

TEM-type -lactamase resistant to clavula

nate, sulbactam, and tazobactam in a clini
cal isolate of EscheTichia coli. A ntimicrob
Agents Chemother 1 993 ; 37 : 2059-63.

1 4. Bmnton J, Meier M, Ehrman N, Clare

D, Almawy ]{. Origin of small [3-lactamase
plasmids in Haemophilus sp ecies and Neisse
ria gonorrhoeae. J Baclerio/ 1 986 ; 1 68 : 3 74-9.
1 5 . Arthur M, Molinas C, Depardieu F,
Courvalin P. Characterization of Tn 1 546, a
Tn3-related transposon conferring glyco
peptide resistance ny synthesis of depsipep
tide p e p tidoglycan precursors in Enterococ
_
BM4 1 47. j Bacleriol 1993 ; 1 75 :
cus jaeaum
1 1 7-27.

RFRENCES

------

l. Davies J. Inactivation of antibiotics and

the dissemination of resistance genes.
Science 1994 ; 264 : 375-82.

2. Cohen ML. Epidemiology of dmg resis

tance : implications for a post-antimicrobial

era. Science 1992 ; 257 : 1 050-5.

3. Neu HG. The cns1s m antibiotic resis

tance. Science 1 992 ; 257 : 1 064-73.
4. Jacoby GA. Exuachromosomal resistance

in Gram-negative organisms : the evolution

of -lactamase. T'rends Microbiol 1 994 ; 2 :

357-60.

5. Shaw KJ, Rather PN, Hare RS, Miller GH.

Molecular genetics of aminoglycoside resis

tance genes and familial relauonships of the
aminoglycoside-modifying enzymes. Micro
biol Rev 1993 ; 57 : 1 38-63.

6. Tennigkeit J, Matzura H. Nucleotide

sequence analysis of a chloramphenicol

reslstance determinant from Agrobacter tume
faciens and identification of 1ts gene pro
duel. Gene 1991 ; 98 : 1 1 3-6.

932

7. Parent R, Roy PH. The chloramp henicol

acetyltransferase gene of Tn 2424: a new
breed of cal. J Bacterio/ 1992 ; 1 74 : 2891-7.

1 6. Shlaes DM, Rice LB. Bacterial resistance

to the cclic glycopeptides. T'rends Microbiol
1 994 ' 2 . 385-8.

1 7. Cameron FF, Groot Obbink DJ, Acker

man VP, Hall RM . Nucleotide sequence of
the AAD (2") aminoglycoside adenylyltrans
ferase determinant aadB. Evolutionary rela
tionship of this region with those surroun
ding aadA in R538-1 and dh{11! in R388.
Nuc1eic Acids Res 1 986 ; 1 4 : 862!i-35.
1 8. Hall

RM , Vockler C. The region of the

IncN plasmid R46 coding for resistance to

[3-lactam antibiotics, streptomycin/spectino
mycin and sulphonamides is closely related
to antibiotic resistance segments found in
lncW plasmids and in Tn2J-Iike transp o
sons. Nucleic Acids Res 1987 ; 1 5 : 749 1-501.

19. Ouellette M, Bissonnette L, Roy PH. Pre

cise insertion of antibiotic resistance detenni
. nants into Tn2J-like transJ:>osons : nucleotide
sequence of the OXA-1 [3-lactamase gene.
Proc Nat/ Acad Sei USA 1987 ; 84 : 7378-82.

20. Sundstrm L, Radstrm P, Swedberg G,

Skld O. Site-specifie recombination pro

mates linkage between trimethop rim and

sulfonamide resistance genes. Seguence
characterization of dhfrV and sul! and a
recombination active focus in Tn21 . Mol
Gen Genet 1988 ; 2 1 3 : 1 91-201 .

23. Bissonnette L, Roy PH. Characterization

of InO of Pseudomonas aeruginosa plasmid
pYS!, an ancestor of integrons of multire
sistance plasmids and transposons. j Bacte
rio/ 1992 ; 1 74 : 1 248-57.

24. Lvesque C, Pich L, Larose C, Roy PH.

PCR mapping of integrons reveals severa!
novel combinations of resistance genes.

A ntimicrob Agents Chemother 1995 ; 39 : 18591.

25. Lvesque C , Brassard S , LapointeJ , Roy

PH. Diversi ty and relative streng1 of tan

dem promoters for the antibiotic-resistance
genes of severa! integrons. Gene 1994 ; 1 42 :
49-54.

26. Radstrm P, Skld 0, Swedberg G,

Flensburg J, Roy PH, Sundstrm L. Trans
poson Tn 5090 of plasmid R75 1 , which car
ries an integron, is related to Tn 7, Mu, and
the retroelements. ] Bacteriol 1 994 ; 1 76 :
3257-68.

27. Sundstrm L, Skld O. The dhfrl trime

thoprim resistance gene can be found at
specifie sites in other genetic surroundings.
A n tirnicrob Agents Chernother 1 990 ; 34 : 64250.

28. Osano E, Arakawa Y, Wacharotayankun

R, Ohta M, Horii T, lto H, Yoshimura F,

Kato . Molecular characterization of an
enterobacterial metallo -lactamase found
in a clinical isolate of Serratia marcescens that
shows imi penem resistance. A ntimicrob
Agents Chernother 1994 ; 38 : 71-8.

29. Archer GL, Niemeyer DM. Origin and

evolution of DNA associated with resistance
to methicillin in staphylococci. Trends Micro
bio/ 1 994 ; 2 : 343-7.

30. Cohen ML. Antimicrobial resistance :

p rog os_is for public health. T'rends Microbiol
1 994 ' 2 . 422-5.
3 1 . Neu HG. The biochemical basis of anti
microbial and bacterial resistance. Bull New
York Acad Med 1987 ; 63 : 295-3 1 7.

32. Sougakoff W, Goussard S, Courvalin P.

The TEM-3 -lactamase, which hydrolyzes
broad-spectrum cephalosporins, is denved
from the TEM-2 penicillinase by two amino
acid substitutions. FEMS Microbiol Leu 1 988 ;
56 : 343-8.

33. Chanal C, Sirot D, Malaure H, Poupart

MC, Sirotj. Sequences of CAZ-3 and CTX-2
extended-spectrum [3-iactamase genes. A nti
microb Agents Chemother 1994 ; 38 : 2452-3.

34. Zhou XY, Bordon F, Sirot D, Kitzis MD,

Gutrnann L. Emergence of clinical isolates
of Escherichia coli producing TEM-1 deriva
tives or an OXA-1 [3-lactamase conferring
resistance to [3-iactamase inhibitors. A ntimz
crob Agents Chemother 1994 ; 38 : 1 085-9.

m/s n" 8-9, vol. 1 3, aot.-SefJ/embre 97

RFRENCES ------35. Huletsky A, Couture F, Levesque RC.

Nucleotide sequence and phylogeny of

SHV-2 1}-lactamase. Antimicrob Agents Chemo

ther 1 990 ; 34 : 1 725-32.

36. Rasheed

K, Jay C,

Metchock B, Berko
witz F, Weige L, Crellin J, Steward C, Hill B,
Medeiros AA, Tenover FC. Evolution of
extended-spectrum -lactam resistance
(SHV-8) in a strain of Escherichia coli durin g
multiple episodes of bacteremia. Antimicrob

Agents Chemother 1 997 ; 4 1 : 647-53.

37. Fournier B, Lagrange PH, Philippon A.

1)-lactamase gene promoters of 71 clinical
strains of Klebsiella oxytoca. Antimicrob Agents
Chemother 1 996 ; 40 : 460-3.
38. Gensberg K, Jin YF, Piddock LJ. A novel
gyrB mutation in a fluoroquinolone-resistant
clinical isolate of Salmonella typhimurium.
.FEMS Micmbiol Lett 1 995 ; 1 32 : 57-60.

TIRS PART ------P.H. Roy .

Summary
Dissemination of antibiotic resistance

While antibiotics have, for the past fifty years, been << miracle drugs , we are
presently facing the << end of the miracle . The increasing use of antibiotics
has led to the selection of bacteria resistant to multiple antibiotics. Diverse
mechanisms of resistance are found in resistant bacteria. Among these are
enzymatic degradation or alteration of antibiotic molecules ( e.g. -lacta
mases and aminoglycoside modifying enzymes) , altered targets ( e.g. peni
cillin-binding proteins and dihydrofolate reductase) , and drug efflux
( e.g. of tetracycline) . Often point mutations can drastically alter the enzyme
or the target : -lactamases be come able to digest third-generation cephalo
sporins, dihydrofolate reductase becomes resistant to trimethoprim, and
DNA gyrase becomes resistant to quinolones. Resistance genes have not
always been presen t in common pathogenic bacteria, but have been evol
ving in antibiotic producing bacteria or in those cohabiting with them in
the environment, and have recently been acquired by horizontal transfer.
Many resistance genes are on conjugative plasmids of wide host range,
often as part of transposons. Examples are the TEM 1}-lactamase, whose
gene can mutare to yield resistance to third-generation cephalosporins, and
vancomycin resistance in enterococci, where a complete metabolic pathway
for an altered cell wall is encoded by a transposon. In addition, a novel
DNA element called an integron bas been described, in which individual
resistance genes exist as mobile cassettes and are rearranged by site-specifie
recombination, in a sort of natural genetic engineering, to form strongly
expressed multiresistance operons. Knowledge of the mechanisms of resis
tance gene evolution and dissemination and of antibiotic usage patterns
leads to the prediction, in a more or less immediate future, of the emer
gence of vancomycin-resistant staphylococci, of multiresistant pneumo
cocci, and of third-generation-cephalosporin-resistant Haemophilus and
Neisseria, for which the medical community must be prepared.

.------ GENATLAS en LIGNE --------

La base de donnes GENATLAS est m a i ntenant accessible s u r le Web, par l ' i ntermd i a i re du serve u r I N FOBIOGEN, l'adresse
suiva nte :
http://www.infobiogen.fr
GENATLAS collige les informations se rapportant la cartog raphie des gnes, ma lad ies et m a rq ue u rs. Des i nformati ons com
plmentaires sont fournies s u r la catgorie l a q u e l l e les gnes appartiennent, par exemple celle des facteurs de croissance, leur
structure, leur polymorphisme et leur fonction, leur expression diffrenti elle dans le temps et l'espace o u selon le pa rent trans
mette u r a i nsi que s u r les ma ladies q u i leur sont associes.
Ces caractristiques confrent sa spcifit G E N ATLAS avec, notamment, le fort accent qui est mis sur les maladies gntiques.
Cel les-ci sont classes selon l'organe, le tissu o u le systme atteint. Outre les ma l a dies mendlien nes, i l s'agit des gnes de pr
disposition des caractres m u ltifacto riels, des rem a n iements chromosom i q u es ou des poi nts de cassure observs d a n s des
anomalies congnitales constituti o n n el l es ou dans des affections m a l i g nes.
Les i nformations relatives aux gnes, ma ladies et m a rq u e u rs sont assorties de rf rences, a i n s i que d'i nformations sur les l i a i
s o n s gntiques, de cartes e t de donnes de cartogra p h i e compare, c e s dern ires coll iges par J o h n H . Edwards. Enfin,
G E NATLAS est en interaction avec d'autres bases de donnes, comme la Location Data Base de Newton E . Morton, OMIM de
V.A. Mckusick, M E D L I N E et les bases de sq uences nuclotidiques.
Les personnes i ntresses sont i nvites consulter, en l i g ne, l ' i ntrodl!ction qui leur permettra de mieux connatre GENATLAS,
et faire con natre l e u rs avis et commentaires au Professeur Jean FREZAL, diteur, l'adresse su ivante :
Pr Jean FR ZAL, Service de Gntique Mdicale, Hpita l des Enfants M a lades, 1 49, rue de Svres, 757 43 Paris Cedex 1 5, France.
Tl . : 0 1 44 49 5 1 54 - Tlcopie : 01 40 56 34 97 - E mail : frezalj@necker.fr
N . B . G E N ATLAS est a ussi disponible, en versions PC et Macintosh, sur le CD-ROM :
GID, Genome Interactive Databases
G I D regroupe GENATLAS et les bases de d o n n es du CEPH ( i n d ex, lod, YACs), la base de donnes du G E NETHON sur les micro
satell ites et la Location Data Base (LDB) d e Newton E . Morton. Prochaine ditio n : septem bre 1 997.

diteur

: John Libbey E u rotext, 1 27, avenue de la Rpubliq ue, 921 20 M o ntrouge, France. T l . : 00 (0) 1 46 73 06 60 Fax : 00 (0)1 40 84 09 99

mis n 8-9, vol. J3, aot-septembre 97

933