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Identificacin de parsitos
en Naturales y
Divisin de Ciencias
Noria Alta
aves de corral
Laboratorio de Parasitologa M
UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO
CICLO ESCOLAR
ENERO JUNIO 2015
CLASE
Coccidias
Flagelados
HELMINTOS
Cestodos
Nematodos
ARTROPODOS
Insectos
Arcnidos
GENERO y ESPECIE
Eimeria sp.
Cryptosporidium sp.
Leucocytozoon caullergi
Plasmodium gallinaceum
Trichomonas sp.
Tritrichomonas
eberthi
Histomonas
meleagridis
Raillietina sp.
Choanotaenia infundibulum
Amaebotaenia sphenoides
Davainea proglottina
Hymenolepis sp
Ascaridia galli
Heterakis gallinarum
Capillaria sp.
Acuaria sp.
Syngamus trachea
Subulura brumpti
Tetrameres americana
MALOFAGOS
Menancanthus
(PIOJOS)
stramineus
Geoniocotes gallinae
Menopon gallinae
Lipeurus caponis
Goniodes gigas
Chelopistes meleadridis
Oxylipeurus politrapezius
Cuclotogaster
heterograpus
Cimex culumbarius
MOSCAS
M. domestica
Fannia canniculauris
PULGAS
Ceratophyllus
gallinae
Echidnophaga gallinacea
GARRAPATAS
MITES
(pequeos
caros rojos)
Argas persicus
Dermanyssus gallinae
Ornithonyssus sp.
Cnemidocoptes sp.
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Cytodites nudus
Epidermoptes bilobatus
Eimeria mitis
Eimeria necatrix
Eimeria praecox
Eimeria tenella
Morfologa
Especie
Eimeria
acervulina
Eimeria
brunetti
Eimeria
hagani
Eimeria
mxima
Eimeria mivati
Eimeria mitis
Eimeria
necatrix
Ooquiste
Forma ovoide.
Pared lisa.
Tamao: 12 a 23 por 9 a 17 micras.
Tienen un grnulo polar.
Forma ovoide.
Pared lisa.
Tamao: 23 25 por 19 20 micras.
Tienen un grnulo polar.
Forma: anchos, ovoides de pared lisa y
con grnulo polar.
Tamao: 16-21 por 14-19 micras.
Tienen forma ovoide, pared lisa o
algunas veces rugosa de color amarilo.
Tamao: 21-42 por 16-80 micras.
Anchos de forma elipsoide u ovoide
tienen pared lisa, con micrpilo y
grnulo polar.
Tamao: 11-20 por 12-17 micras.
Forma subesfrica, con pared lisa
descolorida, tienen grnulo polar.
Forma oblonga u ovoide, pared lisa y
descolorida, tienen grnulo polar.
Esporoquistes
Forma ovoide con cuerpo
de Stiedae.
Cuerpo de Stiedae
Cuerpo de Stiedae
Cuerpo de Stiedae
Eimeria tenella
Ooquiste NO esporulado
Ooquiste esporulado
Ciclo de vida
1.- La fase infectante es el ooquiste esporulado, el cual contiene cuatro
esporoblastos, con 2 esporozoitos cada uno.
2.- El ooquiste al ser ingerido por el ave sufre la accin de los jugos gstricos y
la accin mecnica de la molleja, provocando la liberacin de los 8
esporozoitos, que penetran a las clulas epiteliales del intestino, formando
trofozoitos.
3.- Estos al seguir desarrollndose, reciben el nombre de esquizontes, que
posteriormente dan lugar a merozotos de 1 generacin.
4.- Procediendo a una 2 y 3 generacin, liberan merozotos que
posteriormente se transforman en microgametocitos (clulas masculinas) y
macrogametocitos (clulas femeninas) para formar la fase sexual del ciclo en la
cual el microgametocito penetra al macrogametocito dando origen a un
ooquiste no esporulado, que sale con las heces y cae al suelo en donde
esporular si existen condiciones favorables de temperatura, humedad y
oxigenacin.
5.- Ya esporulado puede permanecer viable por un ao o ms si se mantienen
las condiciones ambientales favorables.
Duodeno
+
Yeyuno
-
leon
+
+
+
+
+
+
+
-
Ciego
-
+ Localizacin principal
- Localizacin secundaria
Blastocystis hominis
Blastocystis hominis es un protozoo que causa cuadros diarreicos. Para
su diagnstico en materia fecal se reconocen las formas vacuolar, avacuolar,
granular y qustica. En muestras procedentes de medios de cultivo se han
reconocido adems las formas de esquizonte y trofozoto. Existen diversos
tipos de Blastocystis que, adems de infectar a los humanos, pueden infestar
animales de granja, aves, roedores, anfibios, reptiles, peces e incluso
cucarachas.
Morfologa
Blastocystis presenta una gran diversidad morfolgica. Por lo general, son
organismos de forma esfrico-ovalados, incoloros, hialinos y refringentes. El
tamao vara entre 5-40 m de dimetro, con una masa central granular,
rodeada por refringencia con uno o dos ncleos. En ciertos preparados puede
notarse un cariosoma que es central, grande y negro.
Se describen comnmente cuatro formas: vacuolar (tambin denominada de
cuerpo central), granular, ameboide y qustica. La forma de aparicin de este
organismo es dependiente en gran medida de las condiciones ambientales, ya
que es extremadamente sensible al oxgeno.
Forma
Vacuolar
Caractersticas
Tiene un tamao muy variable, entre 2-200 m de
dimetro con una media de 4-15 m y se
caracteriza por la presencia de una gran vacuola
central. En la periferia se encuentran el
citoplasma con mitocndras, aparato de Golgi y
retculo endoplasmtico y varios ncleos. Esta
forma predomina en las heces frescas y puede
observarse en los cultivos.
Granular
Imagen
Amoeboide
Qustica
Ciclo de vida
Los quistes se ingieren y luego en el intestino grueso se produce el
desenquistamiento, con el desarrollo de la forma vacuolar. A medida que
avanza el bolo fecal se da el proceso de enquistamiento formndose quistes
que tienen una cubierta fibrilar la cual se pierde en el proceso de maduracin
del quiste. Hay un estadio granular transitorio entre la forma qustica y la
vacuolar y es sta ultima la que sufre la divisin celular. La forma vacuolar
tambin puede transformarse a forma ameboide y se propone que estas no
pueden dividirse, por lo cual deben revertir a la forma vacuolar.
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Iodamoeba butschlii
Es
una
ameba
relacionada
con
el
gnero
Entamoeba.
Es
un parsito comensal exclusivo del intestinohumano, es decir, vive a expensas
del hombre; mas no le ocasiona dao. Aunque no causa enfermedades en el
hombre, es un buen marcador de contaminacin oral-fecal por los alimentos o
agua en las poblaciones en donde sus habitantes se les detecten el parsito.
Es un poco mayor que la pequea E. nana, mide unos de 10 m. Tiene dos
estadios de desarrollo, uno trofozoto y otro quiste.
Su localizacin en el husped: Luz del colon y ciego.
Forma
Trofozoitos
Quistes:
Tamao
(Miden de 8-20 m,
promedio 12 a 15
m)
Caractersticas
Su movimiento es lento y no progresivo. Ncleo
nico, que no se ve en preparaciones sin teir.
Cuando se tie el cariosoma es grande y casi
siempre de localizacin central. A menudo hay
grnulos acromticos refringentes, difciles de
visualizar, alrededor del cariosoma o entre
cariosoma y la membrana nuclear. Carece de
cromatina perifrica sobre la membrana nuclear.
El citoplasma es granular grueso, vacuolado y
puede contener bacterias, levaduras y otros
detritos.
Miden alrededor de Su forma es muy variable, desde esfrica hasta
5
a
20
m elptica.
(promedio
10-12 Los quistes maduros tienen un solo ncleo, no
m)
visible en preparaciones sin teir o teidas con
yodo. Con tinciones permanentes, el ncleo
contiene un cariosoma grande, por lo general
excntrico, y pueden ser visibles o no grnulos
acromticos alrededor del cariosoma o a un lado
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Ciclo de vida
La infeccin ocurre por ingestin de quistes maduros en alimentos, agua o
manos contaminados con heces. El desenquistamiento ocurre in el intestino
delgado y los trofozotos son liberados y migran al colon. Los trofozotos se
reproducen por fisin binaria y producen quistes que se eliminan con las
heces.. Los trofozotos en el medio externo mueren rpidamente. En muchos
casos los trofozotos permanecen confinados en la luz intestinal de los
infectados, quienes son entonces portadores asintomticos o eliminadores de
quistes.
12
Metodologa
La
metodologa que se
para
aislar
los
parsitos de inters
este proyecto fue
una tcnica de
diagnstico
coprolgico en
las aves de
corral,
as
como tambin
necropsia del
para
el
aislamiento de los
parsitos al analizar
el intestino, el coln y
el contenido de estos, ya
principales rganos en los
cuales se puede encontrar
parsitos. A continuacin se
dicha metodologa.
sigui
en
la
ave
que
son
los
describe
Recoleccin
de
materias fecales: Las
materias fecales que
se utilizan para diagnsticos parasitarios se deben tomar directamente del recto
por encontrarse libres de elementos extraos que puedan impedir su
interpretacin. De no lograr extraerlas directamente del recto, pueden tomarse
para el estudio, las materias fecales logradas al momento de la deposicin o en
caso extremo las materias frescas encontradas en el piso, libres de cuerpos
extraos.
Obtencin: Las muestras se pueden obtener mediante el uso de guantes
quirrgicos o bolsas de polipropileno, estas ltimas tienen la ventaja de ser
desechables y permiten ser utilizadas como medio de envase, conservacin y
transporte.
Cantidad de materia fecal para diagnsticos: La cantidad de materia fecal a
enviar est relacionada con el nmero de exmenes o tcnicas a practicar, o
la posibilidad de contar con material si se desea repetir algunos exmenes. En
aves se recomienda enviar el intestino completo o un ave con signos
representativos del problema parasitario que se sospecha o que se desea
confirmar.
Cuando exista dificultad para realizar el examen pocas horas despus de la
toma, se deben conservar en refrigeracin (climas fros) o agregar a las
muestras soluciones de formaldehdo o formalina al 10 o 20 % en agua o
solucin salina fisiolgica.
13
14
5. Llenar uno o dos tubos de ensayo hasta una tercera parte, agregar agua
destilada hasta dos terceras partes del tubo, homogenizar la muestra.
6. Centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos. Descartar el sobrenadante;
realizar paso 5 y 6 hasta obtener un sobrenadante claro
(aproximadamente tres lavados).
7. Una vez eliminado el sobrenadante, agregar 3 ml de formol y 1 ml de
ter, agitar y dejar reposar 5 min.
8. Centrifugar a 1500 rpm por 5 min.
9. Despegar el cogulo y decantar.
10. Al sedimento obtenido colocar una gota de colorante Anthony evitando
tocas las paredes del tubo para no contaminar el sedimento.
11. Tomar muestra con una pipeta Pasteur, colocar en un portaobjetos y
cubrir con un cubreobjetos.
12. Observar al microscopio con objetivo de 10X y 40X.
Tcnica de aislamiento de parsitos
1. Tomar el tracto digestivo obtenido de la necropsia.
2. Cortar entre las dobles ligaduras separando esfago, estmago, intestino
delgado, ciego e intestino grueso.
3. Trabajar independientemente cada uno de los segmentos digestivos en
diferentes cajas de petri.
4. Lavar a chorro de agua logrando que la mucosa quede en el lavado, incubar
a 37C por 10 min.
5. Se revisa todo el contenido mirando al esteromicroscopio.
Si no se observan larvas o indicios de parsitos, concentrar los lavados.
Filtrar el contenido con una malla, llenar uno o dos tubos de ensayo,
centrifugar a 1500 rpm por 10 min (3x). Emplear sedimentacin o flotacin
(a partir del paso 7).
Anlisis y discusin de resultados
Se recolectaron muestras de heces de pollos de un establecimiento dedicado a
la venta de piezas de dicha ave para consumo humano, en la ciudad de
Guanajuato, as como tambin se estudiaron los rganos donde se consider
ms probable encontrar endoparsitos, siendo estos los intestinos, el coln y
su contenido.
Se realiz un anlisis microscpico de las muestras obtenidas mediante las
tcnicas de concentracin de flotacin de Faust y sedimentacin de Charles,
encontrando tres estructuras de microorganismos con caractersticas
morfolgicas que nos permitieron lograr diagnosticar los gneros a los que
pertenecen los parsitos encontrados, las mediciones con micromtrico ocular
contribuy tambin a realizar dicha la identificacin.
La informacin recabada de la literatura y nuestras muestras se presenta en las
siguientes tablas comparativas:
Eimeria spp.
Literatura
Caractersticas
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Ooquiste no
esporulado de
Eimeria spp.
(40x).
Tamao: 22.5 m de
largo por 17.5 m de
ancho.
Ooquiste no
esporulado de
Eimeria spp.
(40X). En
muestras de
concentracin
de heces.
Tamao: 22 m de
largo por 17.5 m de
ancho.
Ooquiste no
esporulado de
Eimeria spp.
(40X).
Encontrado en
intestino
delgado de
pollo.
Tamao: 17.5 m.
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Blastocystis hominis
Literatura
Caractersticas
17
Quiste de
Blastocystis
hominis
Tienen un
pequeo tamao
3-5 m.
Los quistes
fecales son
esfricos u
ovoides y estn
protegidos por
para pared
multilaminar.
Quiste de
Blastocystis
hominis (40x).
Poseen de 1 a 4
ncleos,
mltiples
vacuolas y
depsitos
lipdicos y de
glucgeno.
Tamao:
5 m.
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Iodamoeba btschlii
Literatura
Caractersticas
Quiste de
Iodamoeba
Btschlii*
Mide de 6 17 m a lo largo
de su eje mayor.
Tamao: 7.5 m.
Forma: circular.
* Todos los quistes muestran la vacuola de glucgeno tpica sin teir y un ncleo nico. El
rasgo ms caracterstico es la presencia de una gran vacuola de glucgeno claramente visible
en cada uno de ellos. Los quistes son uninucleados, tienen un cariosoma grande y carecen de
cromatina perifrica sobre la membrana nuclear.
Conclusiones
Mediante la realizacin de esta prctica logramos llevar a cabo la obtencin de
parsitos en muestras provenientes de aves de corral, en especfico de pollos,
as como la identificacin de dichos parsitos , determinando por su morfologa
y medicin, comparando con la literatura, que se trata de Eimeria spp.,
Blastocystis hominis y Iodamoeba btschlii.
Los resultados obtenidos nos indican que en el establecimiento en donde se
obtuvieron las muestras debera de existir un cuidado e higiene ms
exhaustivos con el cuidado de las aves, ya que estas se emplean para
consumo humano y podran representar un riesgo para la salud causando
infecciones.
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Bibliografa
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