UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA

CALIFORNIA
Facultad de Ciencias Qumicas e Ingenieras
Qumico Farmacobiologo
Laboratorio de Biofarmacia
Zavala Vlez Jessica
29 de Febrero del 2016

Matricula: 01216541/Grupo: 461

Practica 6: Mtodo analtico para la cuantificacin de

acetaminofn en muestras de orina.
Fecha de realizacin: 5 de Abril del 2016
Competencia:
Validar un mtodo analtico para cuantificar acetaminofn en muestras de orina a partir de
la preparacin de curvas de calibracin y la medicin analtica de sus concentraciones,
para la determinacin de la linealidad correspondiente en el marco de la NOM-177-SSA12013 y su posterior utilizacin en el anlisis cuantitativo de muestras procedentes de un
estudio de bioequivalencia, trabajando con responsabilidad.
Introduccin:

Con el fin de asegurarse de que se producen unos resultados vlidos y coherentes con el objetivo previsto, los
mtodos utilizados en un laboratorio de anlisis qumicos han de ser evaluados y sometidos a prueba, es decir, han
de ser validados.
La validacin o la verificacin de un mtodo se realizan mediante una serie de pruebas normalizadas y
experimentales de las que se obtienen datos sobre su exactitud, precisin, etc. El proceso que ha de seguirse para
ello debe constar por escrito como procedimiento normalizado de trabajo. Los mtodos cualitativos de anlisis de
drogas exigen la definicin de una serie de parmetros cuyo cumplimiento es necesario para la validacin:

Especificidad/selectividad.
Lmite de deteccin.
Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio).
Estabilidad.

Cuando se trate de mtodos cualitativos en los que sea necesario establecer un nivel de concentracin definido (un
umbral) para reflejar resultados, deben determinarse los tres parmetros adicionales siguientes:

Linealidad.
Exactitud (sesgo) (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio) en el umbral de
concentracin.
Precisin (en condiciones de repetibilidad y/o reproducibilidad en laboratorio) en el umbral de
concentracin.

La finalidad de la validacin de mtodos analticos es identificar las posibles fuentes de error y su posterior
cuantificacin, con el fin de que estos errores no excedan a los lmites permitidos por la NOM-177-SSA1-2013.
Cuestionario:
1. Determine las alcuotas requeridas para la preparacin de las soluciones de la curva de calibracin y
regstrelas en la Tabla 1
Tabla 1.- Preparacin de las soluciones de concentracin conocida de acetaminofn.

Soluci
n
1
2
3
4
5
6
7

Alcuota de solucin Aforo (ml de Concentracin

stock
orina)
(ug/ml)
100
200
400
600
800
1000
1200

10
10
10
10
10
10
10

5
10
20
30
40
50
60

2. Esquematice el diseo cruzado para un estudio de bioequivalencia de acuerdo a un cuadro latino 2x2
Diseo cruzado de acuerdo a un cuadro latino 2x2
Periodo
1
2
Secuencia 1 X (P)
W(B)
2 Z(B)
Y(P)
P=Medicamento de prueba
B=Medicamento de referencia
3. Esquematice el diseo cruzado para un estudio de bioequivalencia de acuerdo a un cuadro latino 3x3

Diseo cruzado de acuerdo a un cuadro latino 3X3

Periodo
1
2
3
Secuencia 1
(A)
(B)
(C )
2 (C )
(A)
(B )
3 (B )
(C )
(A)
A= Medicamento de referencia
B=Medicamento de prueba 1
C=Medicamento de prueba 2
4. Mencione 5 casos en los que se establece la bioequivalencia como prueba de intercambiabilidad de
medicamentos.

Cuando el medicamento de prueba contenga ms de un frmaco de efecto sistmico

Prueba de bioequivalencia para otras concentraciones
Para frmacos de alta potencia, en donde la cantidad de stos dentro de la forma de dosificacin es muy
baja.
En el caso de formulaciones de liberacin inmediata.
Medicamentos biotecnolgicos

Resultados:
Concentracion
5
10
20
30
40
50
60

Curva A
Absorbancia
0.030
0.159
0.334
0.618
0.800
1.126
1.347
Promedio
D.E.
C.V. (%)

F.R.
0.006
0.016
0.017
0.021
0.020
0.023
0.022
0.01774
0.00578
32.598

Curva B
Absorbancia
0.029
0.157
0.329
0.651
0.875
1.157
1.403

F.R.
0.006
0.016
0.016
0.022
0.022
0.023
0.023
0.01829
0.00633
34.577

Curva A
1.600
1.400
1.200 f(x) = 0.02x - 0.11
R = 1
1.000
Absorbancia 0.800
0.600
0.400
0.200
0.000

0 10203040506070
concentrcion

Curva B
1.600
1.400
1.200

f(x) = 0.03x - 0.12

R = 1

1.000
Absorbancia 0.800
0.600
0.400
0.200
0.000

0 10 20 30 40 50 60 70

Concentracion

C. de R.
Curva A
Curva B

0.9955
0.9969

Pendie
nte
0.024
0.025

Intercep
to
-0.1065
-0.1167

Curvas A y B modificadas
Curva A

Linear (Curva A)

Curva B

Linear (Curva B)

1.600
1.400

f(x) = 0.03x - 0.13

f(x) = 0.02x - 0.12
R = 1
R = 0.99

1.200
1.000
Absorbancia

0.800
0.600
0.400
0.200
0.000

10

20

30

40

50

60

70

Concentracion

Resultados con los datos del tiempo 5 eliminados:

C. de R.
Curva A
Curva B

0.9941
0.9963

Pendie
nte
0.0243
0.0255

Intercep
to
-0.1191
-0.1318

Comparacin:
Datos
normales
C. de R.
Curva A
Curva B
Datos
modificados

0.9955
0.9969

C. de R.
Curva A
Curva B

0.9941
0.9963

Pendient
e
0.024
0.0252

Intercepto

Pendient
e
0.0243
0.0255

Intercepto

-0.1065
-0.1167

-0.1191
-0.1318

Observaciones:
1. Durante esta prctica no ocurrieron observaciones que impidieran su realizacin.
Discusin de resultados:
Tomando como base lo indicado en la NOM-177-SSA1-2013, se analizaron los parmetros que pide esta para la
realizacin de las pruebas de bioequivalencia. Como lo muestran nuestros resultados, la mayora de los
parmetros estuvieron dentro de lo permitido por la normatividad por ejemplo en el caso del: coeficiente de
relacin, la norma pide que este sea mayor o igual al 0.99; en nuestro caso, en ambas curvas el coeficiente de
relacin fue mayor a 0.99.

Por otro lado, con lo que respecta al %CV, la normatividad nos exige que este factor de respuesta sea menor o
igual al 2%, sin embargo, en ambas curvas, este factor fue mucho mayor al 2%, lo que indica que existe un error
de precisin en nuestro mtodo.
Este ltimo caso, pudo haber tenido muchas causas diversas para poder sucedes, pero como en la mayora de las
ocasiones que esta clase de problemas ocurres, pudo suceder debido a un error de tipo aleatorio.
Conclusiones:
Con base a los resultados obtenidos podemos concluir que la prctica, dentro de lo que cabe, fue llevada a cabo
con xito, pues, a pesar del valor obtenido en el %CV, en la mayora de los casos se logr obtener resultados
dentro del rango permitido por la NOM-177-SSA1-2013. Sin embargo, debido a que la validacin de los mtodos
analticos que se utilizan en las empresas es de suma importancia para ofrecer un servicio de calidad, no podemos
dejar pasar por alto el error obtenido en uno de los parmetros, por ello, es importante realizar una revisin al
mtodo, para encontrar y reparar la fuente del error.
Referencias:

Directrices para la validacin de mtodos analticos y de calibracin del equipo utilizado para el anlisis de
drogas ilcitas en materiales incautados y especmenes biolgicos; UNODC, Naciones unidas, Nueva York
(2010). (En lnea): https://www.unodc.org/documents/scientific/Validation_Manual_STNAR41_Ebook_S.pdf
NOM-177-SSA1-2013
Validacin de mtodos analticos: Buenas Prcticas para Laboratorios Nacionales de Control Farmacutico
Anexo
3
informe
36,
2002
(En
lnea):
http://www1.paho.org/hq/dmdocuments/2008/13_Modulo_VALIDACIoN_de_Metodos_Fisicoqcos.pdf
Diseos
cruzados
(en
lnea):
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/cide01/cap4/4-3-2.html