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EDICIN N 80
visualizacin, han desempeado un papel preponderante en estos logros cientficos ya que
permitieron conocer lo inalcanzable para el ojo humano.
Un poco de historia
Ya en la antigedad se saba que el tamao de los objetos poda aumentarse empleando
espejos curvos y esferas de cristal llenas de agua. A principios del siglo XVII se inici una
serie de experiencias utilizando lentes con el objetivo de lograr el mayor aumento posible.
Estas experiencias se inspiraron en el uso del telescopio que haba sido empleado por
primera vez en 1609 por Galileo con fines astronmicos.
Con el desarrollo de los microscopios, la biologa experiment una revolucin, ya que hasta
entonces los organismos ms pequeos descriptos eran los insectos diminutos. A partir de
entonces, el desarrollo y complejizacin de los microscopios (palabra que en griego significa
para ver lo pequeo) fue constante.
En 1665, el cientfico Robert Hooke public un libro llamado Micrographia; en el que pueden
encontrarse algunos de los mejores dibujos que se hallan hecho de observaciones
microscpicas. Una de sus observaciones simples pero ms importantes fue la de un delgado
trozo de corcho, un material muy liviano y firme que flotaba en agua, por razones
desconocidas hasta entonces. A travs de su microscopio Hooke observ que estaba
constituido por una fina trama de pequeas celdas a las que l llam clulas, un trmino
habitual para designar pequeas habitaciones en los monasterios.
Microscopio usado por Hooke y el dibujo de las clulas del tejido de corcho
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el equipo
pedaggico del Programa Educativo Por Qu Biotecnologa. Su reproduccin est autorizada bajo la
condicin de que se aclare la autora y propiedad de este recurso pedaggico por parte del Programa
Educativo Por Qu Biotecnologa.
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Ms tarde, el aficionado holands Anton van Leeuwenhoek logr, mediante las lentes
pequeas que l mismo fabricaba, aumentos de hasta 270 veces. As pudo, entre otras
cosas, descubrir y estudiar por primera vez a pequeos organismos invisibles a simple vista,
presentes en aguas estancadas, a los que nombr animlculos. Hoy se sabe que observ
Qu es un microscopio?
El microscopio es una de las herramientas bsicas en el estudio de la biologa. Mediante un
conjunto de lentes, el microscopio aumenta el tamao de objetos que son demasiado
pequeos para ser visualizados a simple vista. Dos principios estn involucrados en el uso del
microscopio: la magnificacin (capacidad de aumentar el tamao de una imagen) y la
resolucin (capacidad de producir una imagen ntida, o la capacidad del instrumento para
dar imgenes bien definidas de puntos situados muy cerca uno del otro). Existen distintos
tipos de microscopios, cada uno con un propsito particular, ya que cada tcnica de
microscopa permite observar estructuras dentro de cierto rango de tamao, dependiendo
del lmite de resolucin del microscopio empleado, es decir, la separacin mnima que
permite que dos objetos puedan ser distinguidos como diferentes.
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radiacin empleada (luz visible o electrones). En el caso de los microscopios pticos, la
radiacin utilizada es la luz visible. En los microscopios electrnicos, la radiacin es un haz
de electrones, posibilitando un poder de resolucin de 0,1nm.
Es el tipo de microscopio ms utilizado, y emplea la luz visible para crear una imagen
aumentada del objeto.
ojo
ojo
ocular
ocular
objetivo
objetivo
especmen
especmen
condensador
luz
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A) Microscopa de campo brillante (B) Microscopa de contraste de fase (C) Microscopa diferencial de
contraste de interferencia (DIC) Nomarski. (D) Microscopa de campo oscuro (tomada de Alberts y col.,
Molecular Biology of the Cell, 2004)
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Para que una muestra de tejido permanezca intacta en el tiempo, y permita as su
observacin al microscopio todas las veces que se desee, hay que fijarla. Esto significa,
tratar a las clulas con un fijador que las inmovilice y las preserve. Luego, dado que la
mayora de los tejidos son muy gruesos como
para poder observar sus clulas individualmente
Movimiento del brazo
del micrtomo
a alta resolucin, se los debe cortar en pequeas
Espcimen embebido en
lminas o secciones con un instrumento
parafina
denominado micrtomo (figura). Debido a que
cuchilla de acero
los tejidos son generalmente blandos y frgiles
Tira de secciones
(an fijados), necesitan ser embebidos en un
medio que acte de soporte para poder
Secciones en un
portaobjetos, teidas
seccionarlo. Generalmente se emplea
y montadas bajo un
cubreobjetos
parafina (tambin algunas resinas), que en su
estado lquido penetra el tejido fijado, para
luego solidificarse y as formar un bloque slido
junto a la muestra.
Esquema de un micrtomo. Una porcin de tejido embebido en parafina es seccionada con una cuchilla de acero
para luego teir y observar al microscopio ptico. (Fuente: Alberts y col., Molecular Biology of the Cell, 2004)
Una vez obtenidas las secciones, usualmente el siguiente paso es teirlas con colorantes
especficos que poseen afinidad por distintos componentes celulares, permitiendo su
identificacin al microscopio. Algunos ejemplos de colorantes muy empleados son la
hematoxilina y la eosina. El primero tiene afinidad por las molculas cargadas
negativamente, por lo que se emplea para teir los ncleos celulares (por su contenido de
ADN) que adquieren un color violceo. El segundo tiene afinidad por las sustancias bsicas,
otorgando un color rosado al citoplasma celular cuya carga neta es positiva.
E) Microscopa de campo brillante con tincin: Los colorantes especficos aumentan el
contraste y revelan detalles que no se aprecian de otra manera.
Seccin de tejido teida observada con
un microscopio ptico de campo brillante.
La seccin observada corresponde a las
clulas de los conductos colectores de
orina del rin, y fue teida con una
combinacin de hematoxilina y eosina.
(Fuente: Alberts y col., Molecular Biology
of the Cell, 2004).
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Desarrollados a partir de 1930, permiten una ampliacin del objeto mucho mayor que el
microscopio ptico, con muy alta capacidad de resolucin. Permiten observar virus y
organelas subcelulares, entre otras estructuras. Bsicamente, dos tipos de microscopios
electrnicos fueron desarrollados para diferentes usos:
A) Microscopio electrnico de transmisin (MET): proyecta electrones (partculas
subatmicas con carga negativa) a travs de una fina capa de tejido o material a observar.
Al hacerlo, produce una imagen en dos dimensiones sobre una pantalla fosforescente,
donde el brillo en un rea particular de la imagen es proporcional al nmero de electrones
que son transmitidos a travs del material.
B) Microscopio electrnico de barrido (MEB): da como resultado una imagen que parece
tridimensional. Emplea dos o tres puntos de la muestra donde llegan los electrones que
escanean la superficie del espcimen a observar y salen del mismo siendo detectados por un
sensor.
1
1. Imagen de la bacteria Escherichia coli a travs de microscopio electrnico de transmisin (aumento 92.750x)
http://www.pbrc.hawaii.edu/~kunkel/gallery. Se nota dentro de la clula, coloreado en rojo, el rea donde se
sita el ADN. En esta imagen la bacteria se halla en proceso de divisin.
2. Imagen de bacterias E. Coli a travs de microscopio electrnico de barrido. Se genera una imagen
tridimensional (aumentos 22.810x) http://www.pbrc.hawaii.edu/~kunkel/gallery.
Los colores de las imgenes no son reales, ni producto de colorantes, sino que se generan artificialmente
mediante programas de diseo para destacar el objeto de inters.
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tomo
Molcula pequea
protena
Virus - ribosoma
bacteria
Clula animal
Clula vegetal
De lo expuesto se concluye que se optar por uno de los tipos de microscopa descriptos
segn el objetivo de estudio, el tamao de las estructuras que permiten visualizar, el detalle
que aportan, las molculas que permite distinguir, entre otros criterios. El siguiente
esquema muestra las posibilidades que ofrecen los diferentes aparatos pticos en relacin
con la resolucin del ojo humano.
Microscopio electrnico
Microscopio ptico
Ojo desnudo
Se compara el poder de resolucin de los diferentes microscopios y del ojo humano. La escala graficada es
logartmica (Adaptado de Alberts y col., Molecular Biology of the Cell, 2004)
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con otra protena de estudio denominada talina. De esta forma, se puede estudiar en un
organismo completo la ubicacin y el comportamiento de una protena particular.
Estudio de protenas por fusin a la protena GFP
A) la superficie de las hojas de Arabidopsis cubiertas
de estructuras glandulares llamadas tricomas. (B) la
microscopia confocal MEB
permite observar la
protena talina debido a su unin con la protena
fluorescente verde GFP. En rojo se observa la
autofluorescencia de la clorofila. (Fuente: Alberts y col.,
Molecular Biology of the Cell, 2004).
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clulas musculares). Por esto que se han desarrollado mtodos para medir en distintos
momentos y en respuesta a varios estmulos, la concentracin y distribucin de esos iones
en el interior celular. Los indicadores sensibles a iones son molculas que pueden emitir
distinta intensidad de luz (fluorescencia o luminiscencia) en respuesta a la presencia y
cantidad de determinados iones. Un ejemplo es la Aequorina, una molcula luminiscente
aislada de una medusa, que emite luz en presencia de concentraciones muy bajas de Ca++.
Derivado inactivo de la
molcula X (molcula
enjaulada)
subproducto
Molcula X
libre y
activa
Molculas
enjauladas.
Un
derivado
fotosensible
e
inactivo de una molcula (X)
puede convertirse, mediante un
pulso de luz UV, en su forma
libre y activa. Por ejemplo, una
molcula pequea como el ATP.
(Fuente: Alberts y col., Molecular
Biology of the Cell, 2004).
CONSIDERACIONES METODOLGICAS
El objetivo de este Cuaderno es profundizar en la informacin que habitualmente se
encuentra en los libros de texto acerca del conocimiento de la clula. Esto implica conocer
algunas de las tcnicas que permiten ver o medir los componentes celulares, los procesos
celulares, y comprender cmo se interpreta esa informacin.
El hecho de que un contenido como la clula ocupe espacio y tiempo en la currcula no se
debe slo a su importancia como contenido de la biologa, sino tambin a la dimensin que
alcanza la clula en el nuevo contexto de desarrollo tecnolgico y social. Por ejemplo, para
comprender los procesos que emplea la biotecnologa moderna y sus aplicaciones actuales y
futuras, es preciso comprender la estructura y el funcionamiento celular.
Comprender un objeto invisible a simple vista como la clula requiere de la construccin de
una imagen (funcional y estructural) o representacin abstracta con relaciones y procesos
complejos.
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una escala diferente de la que son normalmente percibidos, o bien que entidades abstractas
puedan hacerse visibles. Es decir, aquello que se representa como una clula es un modelo
consensuado en la comunidad cientfica (modelo cientfico). Los modelos cientficos son
conjuntos de ideas que describen un proceso natural. Los modelos cientficos pueden ser
caracterizados en base a las siguientes aseveraciones:
a- son construcciones de la mente humana, por lo tanto de naturaleza temporaria;
b- son representaciones de ideas o conceptos que se tienen sobre algn aspecto de la
realidad;
c- son uno de los principales productos de la ciencia;
d- cumplen un importante papel en la construccin del conocimiento y la comprensin de los
fenmenos naturales;
e- proveen representaciones de ideas y conceptos presentados dentro de una teora;
f- ayudan a los cientficos a predecir, describir y explicar fenmenos naturales, objetos y
estructuras;
g- simplifican fenmenos o los hacen ms fciles para trabajar con ellos;
h- coexisten distintos modelos que se pueden utilizar para describir un mismo aspecto de la
realidad.
Estos modelos pueden resultar una herramienta muy til en el momento de proponer a los
alumnos algunas temticas complejas, y pueden resultar de gran utilidad en el momento de
transponer en el aula estas representaciones de los cientficos.
Generalmente, la comprensin de los conceptos ms abstractos requiere complementar con
representaciones grficas, analogas (adecuadamente seleccionadas) o revisiones acerca de
cmo se fueron desarrollando los conceptos histricamente. Para comenzar a ensear la
clula se sugiere emplear dibujos y esquemas e integrar imgenes reales (fotografas de
microscopa electrnica y de microscopa ptica) y esquemticas de la clula, de forma que
el alumno pueda establecer relaciones entre unas y otras, y diferenciar lo real de sus
representaciones. Una estrategia til es comenzar seleccionando imgenes microscpicas
reales, hacer observaciones de preparados al microscopio ptico y, a partir de ellas,
elaborar esquemas. Es importante trabajar a partir de estos dibujos que realizan los
alumnos, para interpretar qu es lo que ven al microscopio, cmo se relaciona con las
microfotografas, y relacionarlo con los modelos cientficos.
Otro aspecto que se recomienda tener en cuenta para favorecer la comprensin de la
naturaleza molecular de la clula, es la integracin adecuada del nivel molecular en el nivel
celular. Suele ocurrir que la delimitacin entre distintos niveles de organizacin
microscpicos es confusa para algunos alumnos. Palabras tales como tomo, molcula,
partcula o sustancia se emplean casi indistintamente, y no es extrao que las enzimas sean
catalogadas como clulas, o los glbulos rojos o las mitocondrias como molculas. En muchas
ocasiones, el problema se ve agravado por la falta de referencias a la escala en los dibujos,
fotografas o esquemas que se presentan a los alumnos. Esto requiere trabajar los
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contenidos de niveles de organizacin, y volver a ellos en cada oportunidad que se trabaje
en clase la estructura celular.
Suele suceder que los alumnos preguntan cmo saben los cientficos acerca de
determinados procesos o componentes si no los pueden ver. Estas preguntas son muy
pertinentes y comprensibles al trabajar con entidades que resultan abstractas e
invisibles. En este sentido, es interesante que los alumnos puedan interpretar, al menos
bsicamente, las tcnicas que se emplean para ver las molculas, sus movimientos y los
procesos en los que intervienen, a travs de reactivos que permiten detectar su presencia
mediante reacciones de color o radioactividad. Para tal fin, se sugieren actividades que
pueden contribuir a la comprensin de estos conceptos que no siempre aparecen en los
libros de texto.
Conceptos relacionados
El tema de este Cuaderno se puede aplicar en diferentes instancias del aprendizaje, ya que
se relaciona con diferentes conceptos y temas. Entre ellos: seres vivos, microorganismos,
niveles de organizacin de la materia, clulas (estructura y funcin), tipos y clasificacin de
clulas, transformaciones qumicas, metabolismo (anabolismo y catabolismo), manejo y usos
del microscopio, modelos cientficos.
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ACTIVIDADES
Actividad 1. Repaso de conceptos
Objetivo: repasar conceptos abordados en el texto y trabajar conceptos vinculados con escalas
microscpicas y macroscpicas.
Nota: A muchos alumnos les resulta difcil valorar escalas microscpicas, por debajo de las que
usualmente se emplean. Un modo de evitar estos problemas en el aprendizaje es entrenar a los
alumnos en el manejo de escalas microscpicas en comparacin con otras usuales. Por ejemplo,
plantear problemas en los que se vean obligados a calcular relaciones entre dimensiones celulares y
dimensiones de objetos cotidianos pueden ser muy eficaces para este propsito.
Desde un tejido hasta los tomos que lo componen, la escala de tamao vara considerablemente. De
ello se desprende que, para estudiar cada uno de dichos niveles estructurales, se requieren diversos
tipos de herramientas. Respecto a la escala, 1 micrmetro (m) son 10 -3 mm, mientras que 1
nanmetro (nm) son 10-6 mm. A partir del esquema determinar:
a) qu representan las ilustraciones. En la figura se observan diferentes estructuras celulares y
subcelulares, junto con los rangos de tamao que pueden ser resueltos por diferentes tipos de
instrumentos pticos (desde el ojo humano hasta el microscopio electrnico). Cada diagrama
muestra una imagen magnificada por un factor de 10 en una progresin. Las ilustraciones
representan: 1) un dedo pulgar, 2) la piel como rgano, 3) el tejido formado por clulas de la piel,
4) varias clulas, 5) una mitocondria, 6) ribosomas, 7) un ribosoma, 8) un conjunto de molculas, y
9) los tomos que forman parte de las molculas.
b) qu instrumento se empleara para observar las diferentes estructuras representadas en el
esquema. La estructura del dedo se ve a simple vista, las clulas y organelas requieren de
microscopio ptico, y los detalles de la estructura molecular que se esquematiza en los dos ltimos
diagramas, estn ms all del poder de resolucin del microscopio ptico, y requieren microscopio
electrnico.
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Rta:
Microscopio ptico
Microscopio confocal
Microscopio electrnico de barrido
Microscopio electrnico de transferencia
Microscopio de fluorescencia
B
Se integran distintos planos de la imagen para
formar una nueva imagen tridimensional
Se utiliza para observar partculas virales
Se colorean las muestras con hematoxilina y
eosina
Emplea un haz de electrones para estudiar la
muestra
Emplea colorantes fluorescentes
B
Se integran distintos planos de la imagen
para formar una nueva imagen
tridimensional
Se utiliza para observar partculas virales
Se colorean las muestras con
hematoxilina y eosina
Emplea un haz de electrones para
estudiar la muestra
Emplea colorantes fluorescentes
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I)
II)
III)
IV)
Indicar si la clula de la foto es animal o vegetal Justificar. Rta. Es clula animal ya que no
se observa pared celular.
Indicar el nombre de las estructuras sealadas. Rta. 1) ncleo, 2) nucleolo, 3) membrana
plasmtica, 4) mitocondria.
Realizar un dibujo en el que se represente lo que se observa en la fotografa, y comparar
con el modelo que representa la clula eucariota animal.
Fuente: http://web.educastur.princast.es/
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Actividad 3. El seguimiento de una protena celular
Objetivo: Repasar a travs de un ejemplo concreto los conceptos desarrollados acerca del estudio de
las molculas en las clulas.
En un laboratorio de biotecnologa, se desarrollaron plantas transgnicas que expresan una protena
de fusin entre la protena verde fluorescente (GFP en ingls) y una protena que se encuentra en los
cloroplastos relacionada a la fotosntesis (protena D1). Adems, confirmaron que dicha protena de
fusin no modifica la actividad normal de D1, y que es fluorescente cuando se la ilumina con luz UV.
a) Cmo se podra determinar que las plantas realmente expresan esa protena de fusin?
Rta.: observndolas al microscopio de fluorescencia, deberan aparecer puntos verdes en las clulas
de las plantas transformadas, y no as en las plantas no transgnicas.
b) Cmo podra confirmar que las protenas de fusin se ubican en los cloroplastos?
Rta.: se observa el preparado en el mismo microscopio con distintos filtros: uno para ver
fluorescencia verde, que corresponde a la protena de fusin, y otro para ver fluorescencia roja, que
corresponde naturalmente a la clorofila. Si la localizacin de ambas fluorescencias coincide, entonces
la protena de fusin se localiz correctamente en el cloroplasto. Lo mismo puede hacerse si se desea
corroborar localizacin nuclear, pero en este caso se debe teir la clula con un colorante
fluorescente que tenga afinidad por el ADN, como el DAPI.
c) Cmo se podra estudiar si la protena D1 vara en funcin de la intensidad de luz (en relacin a
los picos de intensidad de luz durante el da) en el sistema mencionado?
Rta.: se podran obtener muestras de plantas iluminadas con distintas intensidades de luz y realizar
la misma evaluacin que en el item b). Adems, para poder obtener conclusiones reales, se debera
elegir otra protena de la clula vegetal que se sepa que no cambia con la intensidad de luz (por
ejemplo actina, una protena del citoesqueleto). Para detectar actina, se podra usar un anticuerpo
especfico contra esa protena que tenga acoplada una molcula fluorescente azul, por ejemplo.
Entonces, en cada preparado se observan las distintas fluorescencias con el microscopio adecuado: la
verde corresponde a la portena D1::GFP, la roja a la clorofila y la azul a la actina. As, si la cantidad
de azul no cambia entre las muestras y la de fluorescencia verde s lo hace, se podra afirmar que la
intensidad de luz realmente afecta a la protena D1.
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1.
2.
3.
4.
5.
Materiales:
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cubeta
Agujas
Pinzas
Escalpelo
Verde de metilo actico o azul de metileno
Cuentagotas
Cebolla
1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la membrana fina que est adherida
por su cara inferior.
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2. Depositar el fragmento de membrana en un portaobjetos con unas gotas de agua, y colocarlo
sobre la cubeta de tincin.
3. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la
membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por
falta de colorante o por evaporacin del mismo.
4. Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante.
1.
2.
3.
4.
5.
Con la ayuda de la lupa tomar, con una aguja de diseccin, una porcin muy pequea de muestra
Extender el material recogido en el portaobjetos.
Colocar una gota de agua y una de azul de metileno.
Aplicar el cubreobjetos.
Observar al microscopio ptico las estructuras del hongo y sus esporas, y dibujarlas.
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5. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.
4. Comparar los dibujos realizados por los alumnos con imgenes de los libros (modelos cientficos y
microfotografas) y reconocer las estructuras observadas.
5. Analizar el detalle con que pueden observarse las estructuras celulares y proponer tcnicas para
observar ms detalles de las diferentes estructuras celulares.
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Material de consulta
- La modelizacin en la enseanza de la biologa del desarrollo. Antonio E. Felipe, Silvia C. Gallarreta y
Graciela Merino. Departamento Ciencias Biolgicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad
Nacional del Centro de la Prov. de Buenos Aires, Tandil, R. Argentina. Revista Electrnica de
Enseanza de las Ciencias Vol. 4 N 3 (2005).
- Gua de trabajos prcticos de la asignatura Biologa de la Carrera Ingeniera en Alimentos Universidad Nacional de Lujn http://www.unlu.edu.ar/~biologia10903/
- Captulo 29 Los hongos
http://www.educa.aragob.es/iescarin/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccion%205/5%20%20Capitulo%2029.htm
- La clula aprendida. Manuel Jos Andreu Guerrero. Espaa.
http://www.encuentros.uma.es/encuentros70/aprendida.htm
- Historia de la microscopa. Mariana Lanfranconi. FCEyN, Universidad Nacional de Mar del Plata
- Molecular Biology of the Cell. Alberts B., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K., Walter P. 4ta.
Edicin, Editorial Garland (2002). Captulos e imgenes disponibles (idioma ingles):
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?call=bv.View..ShowTOC&rid=mboc4.TOC&depth=2
- Hipertextos del rea de la biologa, sitio de la Universidad Nacional del nordeste.
Clula Eucariota I: generalidades disponible en
http://fai.unne.edu.ar/biologia/cel_euca/celula1.htm
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