Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
REGIONAL LA
LIBERTAD
GERENCIA
REGIONAL DE
SALUD
MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS
DEL AREA DE
HEMATOLOGA DE
LABORATORIO CLNICO
OTUZCO PER
2016
INDICE
I.
Introduccin
II.
Objetivo
III.
Base Legal
IV.
Alcance
V.
Responsabilidad
VI.
Criterios Generales
VII.
Procedimientos
VIII.
7.1
Hemograma
7.2
Hematocrito
7.3
Hemoglobina
7.4
Velocidad de sedimentacin
7.5
Recuento de plaquetas
7.6
7.7
Control de Calidad
INTRODUCCION:
2
el Manual de
OBJETIVO:
Servir como herramienta de consulta en la Red de Laboratorio de OTUZCO,
adems de una gua para el Personal de Laboratorio en general.
III.
BASE LEGAL:
IV.
ALCANCE:
El presente manual es de aplicacin obligatoria en los Servicios de Laboratorio
Clnico ubicados en los Centros Asistenciales de la Red de Salud Otuzco.
V.
RESPONSABILIDAD:
Son responsables del cumplimiento y aplicacin del presente Manual de
Procedimientos:
Directores de los Centros Asistenciales de la Red de Salud Otuzco
Jefe de Oficina de Ayuda al Diagnstico del Hospital Elpidio Berovides
Prez
Coordinador del Servicio de Laboratorio Clnico
Profesionales de la Salud que laboran en el Servicio de Laboratorio Clnico.
VI.
CRITERIOS GENERALES
3
6.1
(no usar
anticoagulante,
seco,
mezclando
adecuadamente
con
movimientos rotativos.
e. Lugar de puncin
1) Con lanceta descartable:
Recin nacido en el taln del pie
Nios mayores, y adultos, parte interna de la yema del dedo
medio.
6.2
Anticoagulantes:
La concentracin recomendada del EDTA, es de 1.5 mg/ml de sangre.
Una mayor cantidad de anticoagulante puede producir retraccin celular
con disminucin del hematocrito y un aumento de la concentracin
media de la hemoglobina.
Un exceso de sangre con relacin al anticoagulante produce formacin
de microagregados que puede alterar los resultados El empleo de
tubos al vaco con una gota (50 ul) de EDTA Tripotsica comercial para
5 ml de sangre es de inters practico, dado que es 100 veces ms
soluble facilitando la mezcla de sangre con anticoagulante.
El citrato trisdico, es de eleccin para las pruebas de hemostasia y la
velocidad de sedimentacin. Acta a travs de la precipitacin del
calcio. La concentracin depende de la prueba por realizar. Para las
pruebas de hemostasia en proporcin 1:9 (0.5ml de anticoagulante para
4.5 ml de sangre).
VII.
PROCEDIMIENTOS:
7.1
HEMOGRAMA
7.1.1
DEFINICION.
sobre el Sistema
7.1.2
RECURSOS Y MATERIALES.
7.1.3.1
7.1.3.2
7.1.3.3
7.1.3
EQUIPOS
Microscopio binocular
Contmetro hematolgico
MATERIALES
Aguja descartable 20 G x 1 o
Lanceta descartable
Pipeta automtica de 20 ul y 10 ul
Cmara de Neubauer
Gradillas
Laminillas cubre-cmara
Cronmetro
Papel de filtro
REACTIVOS
Colorante Wright
Agua tamponada
Aceite de inmersin
7.1.3.1
Principio :
Reactivo diluyente
la sangre
respectivamente.
7.1.3.4
Lectura:
7.1.3.5
Clculo:
------------------
N GB X 200
-------------
= N GB X 50
7.1.3.6
Causas de Error:
Errores de Tcnica:
Dilucin inexacta
N corregido =
8
N contado
100
FORMULA LEUCOCITARIA
7.1.4.1
Se
Principio:
utiliza
coloraciones
policrmicas
derivadas
de
Wright.
Mezcla de dos coloraciones:
Posteriormente
es
diluida
con
agua
tamponada
Colorante Wright:
disolver en un mortero
7.1.4.3
Lectura
7.1.4.4
Fuentes de error
7.2
HEMATOCRITO
7.2.1
Principio:
determinando
las
cantidades
relativas
de
hemates
empacados en plasma.
Constituye una prueba para diagnstico de anemia.
7.2.2
Recursos y materiales
7.2.2.1
7.1.3.4
EQUIPOS
Centrfuga para Microhematocrito
MATERIALES
Aguja descartable 20 G x 1 o
Lanceta descartable
Frasco o tubo con anticoagulante EDTA
Capilares con o sin Heparina
Sellador (plastilina )
Tabla lectora de hematocrito
7.2.3
Procedimiento:
MICROMTODO
Homogenizar la muestra con movimientos rotativos suaves.
Llenar con sangre total, partes del capilar
Sellar con plastilina, uno de los extremos del capilar
11
7.2.4
Lectura
7.2.5
7.2.6
Causas de Error
12
7.3
HEMOGLOBINA
7.3.1
Principio:
Potasio.
Produciendo
(Cianometahemoglobina)
de
color
El cianuro de Hemoglobina
rojizo,
de
intensidad
Recursos y Materiales.
7.3.2.1
EQUIPOS
7.3.2.2
7.3.2.3
MATERIALES
Aguja descartable 20 G x 1
Gradillas
Frasco o tubo con anticoagulante EDTA
Pipeta automtica de 20 ul y 10 ul
Puntera de plstico descartable
Tubo de prueba 12 x 75 13 x 100
Gradillas
Cronmetro
REACTIVOS
7.3.3
Reactivo de Hemoglobina
Mtodo
7.3.4 Procedimiento
Homogenizar la muestra antes de procesarla
13
Reactivo de hemoglobina
5 ml.
5 ml.
5 ml.
Estndar de Hemoglobina .
20 ul
------
------
------
20 ul.
------
Muestra
aparato
Hemoglobina.
Estabilidad de la muestra despus de la reaccin final: hasta 24
horas.
13 18 gr/dl
Mujeres:
12 - 16 gr/dl.
7.4
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION
7.4.1
Principio:
14
7.4.2
Tipo de muestra:
7.4.3
Material:
Tubo de Wintrobe
7.4.4
Procedimiento:
MTODO DE WINTROBE
7.4.5
Resultado
Causas de error:
RECUENTO DE PLAQUETAS
7.5.1.1. Principio:
Consiste en contar el nmero de plaquetas por mm3 de
15
Sangre.
7.5.1.4 Procedimiento:
En un tubo de 13 x 100 con la sangre obtenida y el lquido de
dilusin realizar una dilucin de 1 en 20 (20ul de sangre y 380
ul de liq.dilucin), mezclar luego llenar los dos lados de una
cmara de Neubauer y se deja sedimentar durante 20 minutos,
en una caja de petri cuyo fondo est ocupado por un disco
hmedo de papel de filtro
7.5.1.5 Lectura:
Se cuentan las mismas superficies que para glbulos rojos y se
toma el promedio de ambas cuadrculas, Las plaquetas se
presentan como pequeos cuerpos de gran ndice de
refraccin ( objetivo de 40 X y 10 X ).
7.5.1.6 Clculo:
El nmero de plaquetas contadas X 1000.
7.5.2 Mtodo Indirecto (Mtodo de Fonio)
7.5.2.1. Principio:
16
7.5.2.4 Procedimiento:
Luego de haber realizado la extensin o frotis de sangre, con
cualquiera de las formas anteriormente mencionadas se tie
con colorante Wrigth.
Contar la cantidad de plaquetas habidas en 1000 hemates.
A parte realizar el recuento de hemates
7.5.2.5 Resultado
N Plaquetas x mm3 = N Plqtas. Contadas X N hematesxmm3
17
1000
Valores normales 150,000 250,000 /mm3.
7.7 TIEMPO DE COAGULACION DE SANGRE COMPLETA
Mtodo de Lee White:
7.7.1. Principio :
Es el tiempo que requiere una muestra de sangre, colocada en un tubo a
37C, para formar un cogulo firme. Detecta alteraciones del sistema
intrnseco de coagulacin.
7.7.3. Procedimiento:
- Extraer aproximadamente 3 ml. de sangre en tubo seco,
inmediatamente poner en marcha el cronmetro ( hacer por
duplicado )..
- Colocar en bao mara a 37 C..
- Despus de 5 minutos, inclinar el tubo en un ngulo de 45, cada 30
segundos, hasta que la sangre est completamente coagulada.
- En el instante que coagula, parar el cronmetro y verificar el tiempo
transcurrido.
7.7.4. Resultados:
El tiempo de coagulacin es el tiempo registrado en el cronmetro
utilizado para esta prueba.
7.7.5
Valores normales :
De 4 10 minutos.
18
7.8
7.8.2. Procedimiento:
Mtodo de Duke:
- Con una lanceta descartable, se realiza una puncin de 3mm. De
profundidad en la parte inferior del lbulo de la oreja y se pone en
marcha un cronmetro.
- Secar cada 30 segundos con papel de filtro sin tocar la herida hasta
que la sangre deje de salir.
Resultado :
Se registra el tiempo hasta que cese el sangrado.
Valores normales :
de 1 a 4 minutos
identificacin
del
preparacin
de
la
muestra
(centrifugacin,
etc)
-------------conservacin de la muestra.
Anlisis:
seguimiento
del procedimiento.
Material
de
vidrio.
Calibracin de equipos.
Reactivos. Temperatura (Clculos) Controles Standard.
Post
anlisis:
Verificacin
de
controles
ERRORES
1. Error es la diferencia con el valor verdadero o con lo establecido en un
standard o norma.
2. Tipos de errores.
Pre analticos.
Analticos
Pos analtico.
20
Inevitables.
Debidos a:
inestabilidad de
instrumentos
determinados
evitable:
materiales:
Describen
Operaciones
un
error
incorrectas,
incorrectamente,
controles
normales y patolgicos.
Pool de
sueros.
Controles comerciales.
3. Control interno y externo.
4. Control de precisin. Grfica de LEVY - JENNINGS.
Media y desviacin standard.
Tendencia: desvo hacia arriba o debajo de la media.
Desplazamiento: salto repentino a un nuevo promedio.
5. Criterios de la Grfica de Levy - Jennigs.
6. INTERPRETACIN DE LOS PROCESOS DE CONTROL DE CALIDAD
21
22
23
GRFICOS DE CONTROL
Muestra los resultados de los anlisis de un suero control durante un mes cuando
todo los anlisis estn perfectamente bajo control, todo los valores obtenidos
estn dentro de la media + de DE, tambin se comprueba que los valores se
distribuyen casi equitativamente a ambos lados de la media, no hay incremento o
disminucin gradual significativo en los resultados analticos, tampoco hay valores
Juera de la lnea de la media + 3 DE.
24
Muestra los resultados de un suero control durante un mes cuando los anlisis
estn fuera de control. Los valores son errticos y no siguen ninguna rauta.
Muchos resultados no solo estn fuera de la lnea de la media + 2 DE sino
tambin fuera de la lnea media i- 3 DE, esto indica que hay un problema seno con
la precisin de estos anlisis, que podra indicar una prdida de a sensibilidad de
los instrumentos, una cubeta sucia, un error en el clculo de DE. Este tipo de
grfica es bastante infrecuente y estrictamente hipottico.
GRFICOS DE CONTROL
Muestra los anlisis de un suero control en el siguiente hay una tendencia hacia
valores (ms bajos, durante la segunda mitad del mes. Ello puede deberse a un
deterioro del reactivo o a un estndar que se est volviendo ms concentrado por
evaporacin o alguna otra causa. Tambin es posible una tendencia similar a dar
valores ms altos, indicando un deterioro del estndar, una cubeta sucia u otro
problema.
25
Es una grfica de control de calidad que muestra un cambio brusco de los valores
hacia abajo, esto puede deberse por un cambio de reactivos o patrones, este
problema puede corregirse cambiando un nuevo lote de reactivos o haciendo una
calibracin, tambin puede ocurrir un cambio brusco de los valores hacia arriba
indicando un problema similar.
elementales.
Aunque
actualmente
estos
parmetros
26
son
2.
Extraccin de la muestra
El anticoagulante debe ser proporcional a la cantidad de muestra
obtenidas para: hematocrito, hemoglobina, reticulocitos, constantes
corpusculares, fibringeno, velocidad de segmentacin.
Ejemplo: para un hemograma se utilizar 0.2 de EDTA y 3mi. De sangre.
3.
Extensin de lminas
Las lminas deben ser extendidas directamente de la aguja teniendo en
cuenta que el extendido no sea demasiado grueso.
4.
Hemolisis de lminas
5.
6.
27
FASE ANALTICA
En nuestro servicio de hematologa contamos con un equipo automatizado
que es un contador hematolgico. El equipo inicialmente se program de
acuerdo a los limites de control establecidos por las grficas LEVY
JENNINGS (Criterio tes sigma utilizando contratacin la media y desviacin
Estndar).
En hematologa es muy comn el empleo de controles constituidos por
suspensiones de clulas) sanguneas (humanas o de animales) para la
calibracin de los autoanalizadores destinados a la determinacin de los
parmetros bsicos (recuentos de hemoglobina, hematocrito e ndices
eritrocitarios secundarios) Dado que estas muestras control comercial
vienen convencionalmente valoradas, es decir, se conocen el valor de los
parmetros que hay que controlar, son normalmente utilizados para verificar
no solo la precisin sino tambin la exactitud de los autoanalizadores
(calibracin). En nuestro servicio diariamente se corren tres controles
comerciales:
Control bajo
Control normal
Control alto
Una vez verificados nuestros controles proseguimos a correr nuestras
muestras; si en nuestros resultados se encuentran valores bajos o altos,
entonces haremos un recuento manual en caso de leucocitos, hematocrito y
hemoglobina.
28
Tiempo de Protombina
Tiempo Parcial de Tromboplastina
Tiempo de Trombina
Fibrinogeno
Recuento de Plaquetas.
COLORACIN DE LMINAS
Antes de la coloracin de las lminas se hace un control de calidad al agua
temporada, con rojo de fenol y hidrxido de sodio, verificando en el
microscopio una buena coloracin, en la cual se debe observar las tres
series (roja, blanca y plaquetas).
29
REACTIVOS
En cuanto al control de calidad de los reactivos deben controlarse su
caducidad, conservacin y sistema de almacenamiento.
En hematologa tiene especial importancia controlar el reactivo de
DRABKIN empleado en la determinacin de la concentracin de la
hemoglobina, reactivos de Turk para el reencuentro
Asimismo,
cuando
se
utilizan
autoanalizadores
de
leucocitos
deben controlarse
control negativo.
INSTRUMENTOS
Otro aspecto que hay que controlar peridicamente en un laboratorio
hematolgico son los instrumentos que se emplean para determinar las
diferentes determinaciones analticas.
30
mtodo
de
microhematocrito
el
valor
hematocrito
por
La orden tiene que estar bien legible para que as no halla error en la
transcripcin de los nombres.
Los resultados deben ser claros, en nuestro caso que informamos los
resultados en segundos.
Establecer la toma de decisiones cuando el examen cae fuera de control,
por ejemplo cuando vemos que un resultado a salido alterado llmese as
un
tiempo
parcial
de
tromboplastina
un
hematocrito
avisar
31
Informe
caso 2
WBC :
18.5
k/uL
LYM :
1.6
8.4. c/cL
MID
0.7
3.9 c/cM
GRAN:
87.7 c/cG
RBC :
4.69 M/cl
HBC :
12.9 g/dL
HCT :
39.4 c/c
MCV :
84 IL
MCH :
27.5
pg
MCHC:
32.7
g/dL
RDW :
14.8
PLT
556 K/uL
c/c
MPV :
6.7. IL
PCT :
0.37 c/c
PDW :
18.3 10 (GSD)
DIFERENCIA MANUAL
MORFOLOGA ER1TROCITAR1A
Linfocitos:
Anisocitosis.
4.5
Linfocitos atpicos
Monocitos
Poiquilocitosis:
5.0
Microcitosis:
Eosinfdos:
Macrocitosis:
Basfilos:
Policromasia:
Neutrfilos:
81.5
Esferociiosis:
Clulas en diana:
Mielocitos:
Granulacin txica32
Metamielocitos:
Polimorfonucleares hipersegmeniados.
Promielocitos:
Hemates nucleados:
Blastos:
Reticulocitos:
/100WBC
/1000RBC
Punteado basfilo.
Interpretacin:
Accin:
Revisar la extensin para confirmar los resultados.
Comentarios:.
Leucocitosis con linfopetua y neutro filia o desviacin a la izquierda. Ligera
trombocitos.
Informe
Caso 3
WBC:
LYM:
MID:
CRAN:
4.7
2.7
0.6
1.4
k/ul
57.5 cc/L
R3 13.7cc/M
R3 28.8 cc/G
RBC:
HGB:
HCT:
MCV:
MCH:
MCHC:
RDW:
4.16
8.4
28.7
69
20.2
29,3,
17.1
M/ul
g/dL
c/c
fL
pg
g/dL
c/c
33
DIFERENCIAL MANUAL
MORFOLOGA ERITROCITARIA
Linfocitos
Anisocitosis:
57
Linfocitos atpicos
Poiquilocilosis:
Monodias
Microcitosis:
Eosinfilos:
11
Macrociiosis:
Basfilos:
Policromasia:
Neutrfilos:
24
Esferocitosis:
Bandas (Cayado):
Clulas en diana:
Mielocitos:
Granulacin txica:
Metamielocilos:
Polimorfomieleares hipersegmentads.
Promielocitos :
Hemates nucleados:
/100 WBC
Blastos:
Reticulocitos
13/1000 RBC
Punteado basfilo:
Interpretacin:
El Recuento de Leucocitos es bajo. Los Linfocitos. Eosinfilos y Basfilos estn
ligeramente aumentados y los Neutrfilos disminuidos. El Histograma es
anormal, no hay separacin entre las regiones LYM/MID y la regin GRAN est
desplazada a la izquierda y baja rpidamente. EL Histograma y la alarma se
correlacionan con los resultados.
Los resultados para RBC son anormales para todos los parmetros EL MCV
est reducido, el RDW ligeramente aumentado. l histograma se correlaciona
con los datos
El Recuento de Plaquetas est elevado El Histograma es normal, muestra un
valle entre las Plaquetas y los Hemates microcticos que aparecen alrededor
de los 20 fL.
Accin:
Revisar la extensin para confirmar los resultados.
Comentarios:
34
EXACTITUD
PRESION
CONFIABILIDAD
Grado de
reproductividad
Exactitud
+
Precisin
Errores Aleatorios
Errores Sistemticos
35
DESCRIPCIN
ERROR
I
2
5
6
Aleatorio
Sistemtico
4S)
Aleatorio
Sistemtico
Sistemtico
Sistemtico
DESCRIPCIN
Valor fuera de 3 DS (1 - 3S)
ERROR
Aleatorio
36
5
6
Sistemtico
Aleatorio
Sistemtico
Sistemtico
Sistemtico
CAUSAS DE ERROR
1. ERRORES SISTEMTICOS
Causas de Tendencia:
Causas de Desviacin:
Cambio de Temperatura
Problemas
del
instrumento
(ej.
Reactivo
2. ERRORES ALEATORIOS
Causado usualmente por variaciones tcnicas individuales, errores de aspiracin,
u otros factores.
37