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INDICE
TEMA
PGINA
Introduccin
11
16
21
26
31
36
41
46
52
57
62
67
72
77
83
INTRODUCCIN
El siguiente recopilado es un apoyo para el estudiante de Qumica Clnica dentro
del laboratorio de la experiencia de Bioqumica Clnica Enzimtica, con el objetivo
de proporcionar informacin y tcnicas en las pruebas de determinacin de las
enzimas importantes en el ser humano.
Deje limpio y seco el lugar de trabajo. Coloque los bancos junto a las mesas
o invertidos sobre stas.
Bata larga de manga larga, con botones. Se recomienda que sea blanca.
Guantes de ltex
INFORMACION ADICIONAL
Referencias bibliogrficas generales:
PRACTICA No.1
DETERMINACION DE GTP/ALT
1.- INTRODUCCIN
En el hgado se han detectado no menos de 60 reacciones de transaminacin,
pero las nicas transaminasas con valor clnico son la GOT (AST) y la GPT (ALT),
la GPT es exclusivamente citoplasmtica; es una enzima intracelular, se
encuentra principalmente en las clulas del hgado y el rin.
Se observan niveles elevados en enfermedades hepticas como la hepatitis,
enfermedades de los msculos y traumatismos. Cuando se emplean en
conjuncin con la GOT ayuda en el diagnstico de infartos de miocardio, ya que el
valor de la GPT se mantiene dentro de los lmites normales y aumenta en los
niveles de GOT.
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles de la enzima GPT/ALT en suero de pacientes, mediante
lecturas de espectrofotometra y sus respectivos clculos.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
La alanina aminotrasferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutmico
pirvica (GPT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la
alanina al -cetoglutarato con formacin de glutamato y piruvato. El piruvato
producido es reducido a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) y
NADH. La velocidad de disminucin de la concentracin de NADH en el medio,
determinado fotometricamente, es proporcional a la concentracin cataltica de
ALT en la muestra ensayada.
4.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
4.1 Reactivos
NUM.
CLAVE
1
*
2
*
3
*
4
**
5
**
* R1: Tampn
CONC.
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
3
3
2
CANTIDAD
100 mmol/L
500 mmol/L
1200 U/L
15 mmol/L
0,18 mmol/L
4.3 Equipo
NUM.
1
2
CLAVE
9.- PRACTICABILIDAD
El analista puede ser un alumno de qumica clnica supervisado por el docente el
tcnico acadmico.
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Universidad Nacional del Nordeste. Ctedra de Bioqumica. Enzimas.
http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/enzimas.pdf
10.2. Transaminasa Glutmico Pirvica. Disponible en: www.inmedeasimulator.net/med/data/doc/.../p319.html.
10.3. GTP/ALT disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT11%20GPT%20(ALT).pdf
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
10
PRACTICA No.2
DETERMINACION DE GOT/AST
1.- INTRODUCCIN
La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el msculo
del corazn, las clulas del hgado, las clulas del msculo esqueltico y en menor
cantidad en otros tejidos. La GOT est constituida por dos isoenzimas, una
citoplasmtica y otra mitocondrial.
CONC.
CANTIDAD
80 mmol/L
240 mmol/L
600 U/L
600 U/L
12 mmol/L
0.18 mmol/L
11
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
3
3
2
4.3 Equipo
NUM.
1
2
CLAVE
12
9.- PRACTICABILIDAD
El analista puede ser un alumno de qumica clnica supervisado por el docente el
tcnico acadmico.
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Universidad Nacional del Nordeste. Ctedra de Bioqumica. Enzimas.
http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/enzimas.pdf
10.2. GOT/AST disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT11%20GPT%20(ALT).pdf
13
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
14
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
15
PRACTICA No.3
DETERMINACION DE CK (Creatin Quinasa)
1.- INTRODUCCIN
La creatn quinasa es una enzima intracelular. Se encuentra en mayor proporcin
en msculo esqueltico, msculo cardaco (incluyendo infarto al miocardio y
distrofia muscular) y cerebro. Su funcin fisiolgica esta asociada con la
adenosina trifosfato (ATP) producida cuando el msculo se contrae. Un aumento
en la actividad srica, es ndice de lesin celular. La extensin y gravedad de la
lesin determinarn la magnitud de la elevacin.
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles sricos creatin quinasa en pacientes, mediante lecturas de
espectrofotometra y sus respectivos clculos.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de
la fosfocreatina al ADP. Esta reaccin se acopla con otras catalizadas por la
hexoquinasa (HK) y por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH).
La velocidad de formacin de NADPH, determinado fotometricamente, es
proporcional a la concentracin cataltica de CK
4.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
4.1 Reactivos
NUM.
CLAVE
1
*
2
*
3
*
4
*
5
*
6
**
7
* R1: CK Buffer
CONC.
CANTIDAD
30.0 mmol/L
20.0 mmol/L
10.0 mmol/L
2.0 mmol/L
100.0 mmol/L
2.0 mmol/L
5.0 mmol/L
10 mol/L
2.0 mmol/L
2.5 kU/L
1.5 kU/L
20.0 mmol/L
100.0 mmol/L
16
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
3
3
2
4.3 Equipo
NUM.
1
2
CLAVE
17
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Universidad Nacional del Nordeste. Ctedra de Bioqumica. Enzimas.
http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/enzimas.pdf
10.2. Determinacin cuantitativa de creatin quinasa (CK) disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEIS02%20CK%20NAC%202011.pdf
18
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
19
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
20
PRACTICA No.4
DETERMINACION DE CK-MB
1.- INTRODUCCIN
La creatn quinasa es una enzima intramuscular constituida por una subunidad M
(musculo) y otra subunidad B (brain=cerebro) que se combina dando lugar a las
isoenzimas CK-MM (muscular), CK-BB (cerebral) y CK-MB (miocrdica).
CONC.
CANTIDAD
100 mmol/L
20 mmol/L
10 mmol/L
2 mmol/L
2000 U/L
2 mmol/L
5 mmol/L
10 mmol/L
2 mmol/L
2500 U/L
1500 U/L
20 mmol/L
30 mmol/L
21
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
3
3
2
4.3 Equipo
NUM.
1
2
CLAVE
22
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Universidad Nacional del Nordeste. Ctedra de Bioqumica. Enzimas.
http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/enzimas.pdf
10.2. Determinacin cuantitativa de creatin quinasa-MB (CK-MB) disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT04%20CK%20-MB.pdf
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UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
24
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
25
PRACTICA No.5
DETERMINACION DE CK-MB CONTROL
1.- INTRODUCCIN
En el infarto agudo de miocardio (IAM), la creatin quinasa (CK) Total empieza a
elevarse a las 3 a 6 horas despus del inicio de los sntomas, alcanza un valor
mximo entre las 18, 20, 30 horas y retorna a la normalidad hacia el tercer o
cuarto da (de 72 a 96 horas).
La molcula de creatin quinasa (CK) es un dmero compuesto por dos
subunidades monomricas, no idnticas: M y B. Cada una tiene u peso molecular
de 40000 daltons. Estas subunidades M y B, son el producto de dos genes
estructurales distintos, y puesto que la forma activa de la enzima es un dmero,
solamente pueden existir tres pares distintos de subunidades: BB: creatin quinasa
(CK) (Brain), MB: creatin quinasa (CK), MM: creatin quinasa (CK) (Muscle).
La creatin quinasa (CK)-BB, predomina en cerebro, prstata, estmago e
intestino, hgado, vejiga, tero, placenta y tiroides.
La creatin quinasa (CK)-MM, predomina en el msculo esqueltico y cardaco.
La creatin quinasa (CK)-MB, est presente en el msculo cardaco (de 25 a 46%
de la actividad de la creatinquinasa (CK) Total) y tambin, en menor grado, en el
msculo esqueltico (< 5%).
Las tres isoenzimas se encuentran en el citosol celular o asociada con estructuras
miofibrilares. La ventaja de la creatin quinasa (CK)-MB sobre la creatin quinasa
(CK) Total reside en su mejor especificidad de rgano.
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles sricos de CK-MB en una muestra problema, mediante
lecturas de espectrofotometra y sus respectivos clculos.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
El mtodo de determinacin de la creatin quinasa (CK) Total es enzimtico:
Utilizando como substratos, la fosfocreatina y el adenosindifosfato (ADP), y
mediante una serie de reacciones enzimticas acopladas, se mide la velocidad de
formacin de NADPH mediante el aumento de absorbancia, a 340 365 nm. Se
usa N acetilcistena para activar la creatin quinasa (CK).
Los valores normales son menores en la mujer que en el hombre.
26
CONC.
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
3
3
2
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
100 mmol/L
20 mmol/L
10 mmol/L
2 mmol/L
2000 U/L
2 mmol/L
5 mmol/L
10 mmol/L
2 mmol/L
2500 U/L
1500 U/L
20 mmol/L
30 mmol/L
27
http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/enzimas.pdf
10.2. Marcadores sricos bioqumicos cardiacos. Disponible en:
http://www.portalesmedicos.com/publicaciones/articles/715/1/Marcadoressericos-bioquimicos-cardiacos-Creatinfosfoquinasa-serica-total-CPKcreatinquinasa-CK-total-Lactodeshidrogenasa-LDH-Glutamico-oxalaceticotransaminasa-GOT-AST.html
28
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
Para la realizacin de esta tcnica se utiliza un suero con concentracin de CKMB conocida.
RESULTADO: _________
INTERVALO: ____________________
________________________________
Nombre y Firma de quien Reporta.
29
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
30
PRACTICA No.6
DETERMINACION DE LDH
1.- INTRODUCCIN
CONC.
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
3
3
2
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
65 mmol/L
0.6 mmol/L
0.18 mmol/L
31
32
9.- PRACTICABILIDAD
El analista puede ser un alumno de qumica clnica supervisado por el docente el
tcnico acadmico.
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Universidad Nacional del Nordeste. Ctedra de Bioqumica. Enzimas.
http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/enzimas.pdf
10.2. Determinacin cuantitativa de lactato deshidrogenasa (LDH). Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEIS43%20LDH-LQ%20(4-1)X.pdf
33
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FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
34
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
35
PRACTICA No. 7
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PROTEINAS TOTALES
1.- INTRODUCCIN
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles sricos de protenas totales presentes en una muestra
problema, mediante reacciones de punto final.
36
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
15 mmol/L
100 mmol/L
5 mmol/L
19 mmol/L
7 g/dL
CANTIDAD
3
3
2
37
9.- PRACTICABILIDAD
El analista puede ser un alumno de qumica clnica supervisado por el docente el
tcnico acadmico.
10.- BIBLIOGRAFA
10.1. Determinacin cuantitativa de protenas totales. Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BSDTT30%20PROTEINAS%20TOTA
LES.pdf
38
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FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
39
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
40
PRACTICA No. 8
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE ALBUMINA
1.- INTRODUCCIN
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles de albumina presentes en un suero problema, mediante
reacciones colorimtricas y sus respectivos clculos.
41
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CONC.
CANTIDAD
0.2 mmol/L
5 g/dL
CANTIDAD
3
3
2
42
9.- PRACTICABILIDAD
El analista puede ser un alumno de qumica clnica supervisado por el docente el
tcnico acadmico.
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Determinacin cuantitativa de albumina. Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BSDTT02%20ALBUMIN.pdf
43
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
44
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
45
PRACTICA No. 9
DETERMINACIN DE BILIRRUBINA DIRECTA E INDIRECTA
1.- INTRODUCCIN
46
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles de Bilirrubina total y directa presentes en un suero
problema, mediante reacciones colorimtricas y sus respectivos clculos.
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
6
6
4
47
REACTIVO
R1 (D) mL
R2 (T) mL
R3 L
MUESTRA L
BILIRRUBINA TOTAL
BLANCO
MUESTRA
1.5
100
BILIRRUBINA DIRECTA
BLANCO
MUESTRA
1.5
1.5
1.5
50
100
100
50
100
48
9.- PRACTICABILIDAD
El analista puede ser un alumno de qumica clnica supervisado por el docente el
tcnico acadmico.
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Ictericia obstructiva,
Metabolismo
de
la
bilirrubina.
Disponible
en:
http://www.gastrocancerprev.com.mx/Documentos/ictericia/1.pdf
10.2 Determinacin cuantitativa de bilirrubina. Bilirrubina Total y Directa.
Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BSDTT36%20BILIRUBIN%20T-D.pdf
49
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REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
EDAD:
RESULTADO:
BILIRRUBINA TOTAL: ______________
BILIRRUBINA DIRECTA: _____________
BILIRRUBINA INDIRECTA: ____________
V.R. ___________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
50
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
51
PRACTICA No. 10
DETERMINACIN DE FOSFATASA ALCALINA
1.- INTRODUCCIN
Las fosfatasas alcalinas (FAL) es una enzima ampliamente distribuida que
hidroliza el enlace ster fosfrico entre un grupo fosfato y un radical orgnico a pH
bsico (pH ptimo entre 9 y 10) liberando fosfato inorgnico. Est presente en
rin, hgado, intestino y hueso. La medida de niveles anormales de fosfatasa
alcalina en el suero indican la existencia de enfermedades seas degenerativas
(raquitismo, osteomalacia, hiperparatiroidismo secundario, osteosarcoma) o bien
daos hepticos. El aumento fisiolgico de los niveles plasmticos de fosfatasa
alcalina se produce en animales en fase de crecimiento (se est formando tejido
seo) o en hembras gestantes (fosfatasa alcalina de la placenta). Esta enzima,
tambin se utiliza como control de la adecuada pasterizacin de la leche y crema,
dado que la fosfatasa alcalina se inactiva por calentamiento.
2.- OBJETIVOS
Comprobar la aplicacin prctica en el laboratorio de los principios tericos de la
Enzimologa, tales como:
Efecto del tiempo de reaccin en la aparicin de producto
Clculo de la actividad enzimtica a partir de la velocidad inicial de la
reaccin
Efecto de la concentracin de enzima sobre la velocidad de reaccin
Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de reaccin
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Como sustrato de la fosfatasa alcalina se utiliza un compuesto artificial: pNitrofenil-fosfato a pH 10.4 que, al poseer un resto orgnico con un grupo fosfato
unido, puede ser reconocido por la enzima.
El sustrato al ser hidrolizado origina un producto, el p-Nitrofenol, compuesto
coloreado que en solucin alcalina absorbe a una longitud deonda de 405 nm, por
lo que su aparicin
en el transcurso de la reaccin puede seguirse
colorimtricamente. Para detener la reaccin se aadir fosfato, ya que el exceso
de este producto de la reaccin inhibe la actividad enzimtica.
52
* R1: Tampn
** R2: Substrato
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CONC.
CANTIDAD
1 mmol/L
0.5 mmol/L
10 mmol/L
CANTIDAD
3
3
2
53
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Brcena Ruiz JA, Garca Alfonso C, Padilla Pea CA. Caracterizacin
cintica de la fosfatasa alcalina. Departamento de Bioqumica y Biologa
Molecular. Disponible en:
http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biolmol/pdfs/30%20FOSFATASA%20ALCALINA.pdf
10.2 Determinacin cuantitativa de fosfatasa alcalina (FAL). Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT07%20ALP.pdf
54
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
55
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
56
PRACTICA No. 11
DETERMINACIN DE LIPASA
1.- INTRODUCCIN
La lipasa (LPS) es una enzima pancretica necesaria para la absorcin y digestin
de los nutrientes, cataliza la hidrlisis de los esteres de glicerol de los cidos
grasos. La determinacin de la LPS es til para el diagnostico de enfermedades
del pncreas como pancreatitis aguda y obstruccin pancretica.
Presenta mayor sensibilidad (S: 94%) y especificidad (E: 96%) que la amilasa total
srica. Se eleva el primer da y los niveles plasmticos persisten elevados un poco
ms de tiempo que los de amilasa. Se usa para el diagnstico de pancreatitis un
valor de corte del triple del lmite superior del valor normal. Existen aumentos por
debajo de 3 veces el valor normal en la insuficiencia renal grave, roturas de
aneurisma, nefrolitiasis, obstruccin intestinal, quimio o radioterapia. La
determinacin simultnea de amilasa y lipasa tiene una S y E > 95%.
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles presentes de lipasa en un suero problema, mediante la
medicin espectrofotomtrica y sus respectivos clculos para su obtencin.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
La lipasa pancretica en presencia de colipasa, iones calcio y desoxicolato,
hidroliza el sustrato 1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutrico-(6'-metilresorufina)-ester.
La velocidad de formacin de metilresorufina determinado fotometricamente, es
proporcional a la concentracin cataltica de lipasa.
CANTIDAD
40 mmol/L
> 1 mg/L
1.8 mmol/L
7.2 mmol/L
15 mmol/L
> 0.7 mmol/L
0.1 mmol/L
57
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
3
3
2
58
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Etxeberria Lekuona D, Pueyo Royo A. Pancreatitis aguda. Libro electrnico
de Temas de Urgencia. Disponible en:
http://www.cfnavarra.es/salud/PUBLICACIONES/Libro%20electronico%20de
%20temas%20de%20Urgencia/5.Digestivas%20y%20Quirurgicas/Pancreatit
is%20aguda.pdf
10.2 Determinacin cuantitativa de lipasa. Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT19%20LIPASE%20-LQ.pdf
59
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FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
60
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
61
PRACTICA No. 12
DETERMINACIN DE AMILASA
1.- INTRODUCCIN
La alfa-amilasa es una enzima que se encuentra en bacterias y tejidos animales,
cataliza la hidrlisis del almidn y el glucgeno. Las determinaciones de la
actividad de amilasa srica, son de inters clnico en el diagnostico de la funcin
pancretica. Puede reflejar tambin enfermedad de la vescula biliar, algunos
problemas gastrointestinales y otros trastornos.
En la pancreatitis aguda se eleva a las 2-12h de comienzo del dolor y puede
normalizarse en 2-5 das. La amilasa se eleva en muchos procesos intra y
extraabdominales. El grado de hiperamilasemia no se correlaciona con la
gravedad del proceso de pancreatitis aguda (PA), pero a medida que aumentan
las cifras aumenta la sensibilidad y la especificidad. Cifras 5 veces por encima del
valor normal son altamente indicativas de PA.
2.- OBJETIVOS
Determinar los niveles presentes de amilasa en un suero problema, mediante la
medicin espectrofotomtrica y sus respectivos clculos para su obtencin.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
La -amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil--D-maltotrisido (CNPG3) a 2-cloro4-nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil--Dmaltoside (CNPG2), maltotriosa
(G3) y glucosa (G). La velocidad de formacin de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado
fotomtricamente, es proporcional a la concentracin cataltica de - amilasa
4.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
4.1 Reactivos
NUM.
CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO
1
*
MES pH 6.0
2
*
CNPG3
3
*
Cloruro sdico
4
*
Acetato clcico
5
*
Tiocianato potsico
6
*
cida sdica
* RT: Reactivo de Amilasa
CONC.
CANTIDAD
100 mmol/L
2.25 mmol/L
350 mmol/L
6 mmol/L
900 mmol/L
0.95 gr/L
62
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
3
3
2
63
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Etxeberria Lekuona D, Pueyo Royo A. Pancreatitis aguda. Libro electrnico
de Temas de Urgencia. Disponible en:
http://www.cfnavarra.es/salud/PUBLICACIONES/Libro%20electronico%20de
%20temas%20de%20Urgencia/5.Digestivas%20y%20Quirurgicas/Pancreatit
is%20aguda.pdf
10.2 Determinacin cuantitativa de -amilasa (AMS). Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT27%20AMYLASE%20-LQ.pdf
64
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
RESULTADO:
VR: _________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
65
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
66
PRACTICA No. 13
DETERMINACIN DE FOSFATASA CIDA Y FRACCIN PROSTTICA
1.- INTRODUCCIN
Las fosfatasas cidas son enzimas ampliamente distribuidas en la naturaleza y
tienen la propiedad de hidrolizar fosfomonosteres a pH 5,0, liberando como
productos de la reaccin un alcohol y fosfato inorgnico. Se encuentran presentes
en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente altas en prstata,
estmago, hgado, musculo, bazo, eritrocitos y plaquetas.
CONC.
CANTIDAD
50 mmol/L
10 mmol/L
6 mmol/L
2 mmol/L
0.5 mol/L
**** R4
67
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4.3 Equipo
NUM. CLAVE
1
2
CANTIDAD
3
3
2
68
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Emilio Guija, Mercedes Sobern. Mecanismo de accin de las fosfatasas
cidas de bajo peso molecular. An Fac Med Lima 2007; 68(4). Disponible en:
http://www.scielo.org.pe/pdf/afm/v68n4/a11v68n4.pdf
10.2 Determinacin cuantitativa de fosfatasa cida (FAC). Disponible en:
http://www.spinreact.com/uploads/pdf/BEDTT06%20ACP.pdf
10.3 Marcadores Tumorales. Fosfatasa cida prosttica. Disponible en:
http://www.ctv.es/USERS/pasi/labora/marctumor.htm#FOSFATASA%20%C
3%81CIDA%20PROST%C3%81TICA
69
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FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO: ______________________
VR: ____________________
RESULTADO:
FOSFATASA CIDA TOTAL: ______________
FOSFATASA CIDA NO PROSTTICA: _____
FOSFATASA CIDA PROSTTICA: ________
________________________________
Nombre y Firma de quien reporta
70
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
71
PRACTICA No. 14
DETERMINACIN DE CALCULOS BILIARES
1.- INTRODUCCIN
2.- OBJETIVOS
Identificar los componentes presentes en la composicin de los clculos biliares
estudiados.
72
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
CANTIDAD
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
CANTIDAD
2
3
3
73
verde
HEMOGLOBINA
Ac. actico 5%
0.5 ml
Piramidon 5% 0.5
ml
p. de hidrogeno
0.5 ml
azul/morado
BILIRRUBINA
cloruro frrico 0.5
ml
Ac. clorhdrico
0.5 ml
amarillo
http://www.childrenshospital.org/clinicalservices/Site2133/Documents/gallsto
nes_spa.pdf
10.2 Gmez Jaramillo D. Clasificacin y fisiopatologa de los clculos
biliares. Univ. Med. Bogot (Colombia), 50 (1): 91-97, enero-marzo de 2009.
Disponible en:
http://med.javeriana.edu.co/publi/vniversitas/serial/v50n1/pdf/Clasificaci%F3
n%20y%20fisio.pdf
74
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FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
RESULTADO:_____________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
________________________________________________________________.
________________________________
Nombre y Firma de quien Reporta.
75
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
76
PRACTICA No. 15
SINDROME DE MALABSORCIN
1.- INTRODUCCIN
El sndrome de malabsorcin se caracteriza por una absorcin inadecuada de
nutrientes desde el intestino hasta su incorporacin al torrente circulatorio o a la
linfa. La absorcin es la funcin principal del intestino. El intestino delgado de un
individuo adulto supuestamente sano tiene una superficie total de
aproximadamente 2 millones cm2. Esto se logra mediante 3 tipos de diferenciacin
morfolgica: las vlvulas conniventes, las vellosidades intestinales y las
microvellosidades del enterocito.
Se considera que existe malabsorcin cuando existen determinadas alteraciones
en el interior del intestino, en su pared o en el transporte linftico. Bsicamente la
malabsorcin es la consecuencia de la alteracin de al menos una de las
siguientes funciones digestivas:
Digestin intraluminal. En el interior del tubo digestivo las protenas, hidratos de
carbono y grasas se degradan en formas que pueda asimilar el organismo. El
proceso comienza en la boca con la saliva y contina en el estmago, con los
jugos gstricos, aunque la digestin definitiva se produce en el intestino delgado
por la accin de las sales biliares y el jugo pancretico. El dficit en la secrecin
de enzimas pancreticas o de sales biliares produce una hidrlisis incompleta de
las grasas y protenas o una falta de solubilizacin de las grasas de la dieta que
origina diarrea y malabsorcin.
Digestin terminal. La pared mucosa intestinal tiene un borde en cepillo donde se
produce la hidrlisis de hidratos de carbono. La destruccin de este borde puede
producir problemas de malabsorcin.
Transporte transepitelial, en el que los nutrientes, lquidos y electrolitos se
transportan a travs de la pared del intestino delgado para ser distribuidos por el
organismo. Los cidos grasos absorbidos se convierten el triglicridos y, junto con
el colesterol, se acoplan formando quilomicrones para distribuirse por el sistema
linftico intestinal. La lesin de las clulas epiteliales puede provocar la alteracin
del transporte a travs de la clula y alteracin en la formacin de quilomicrones.
El bloqueo de los vasos linfticos impide el transporte de los nutrientes desde la
clula intestinal hasta los rganos donde se llevan a cabo el almacenamiento o el
metabolismo.
Las consecuencias de la malabsoricin afectan a muchos sistemas orgnicos:
77
2.- OBJETIVOS
Identificar en una muestra de paciente, anormalidades o problemas en la
absorcin de nutrientes con ayuda de la determinacin de enzimas y/u otros
componentes presentes en la muestra de estudio.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
La tripsina y la quimiotripsina son enzimas proteolticos. Su funcin es digerir las
protenas en el intestino delgado. Normalmente, sus precursores (las formas
inactivas: tripsingeno y quimiotripsingeno) se sintetizan en el pncreas y se
transportan hasta el intestino delgado. Una vez en el intestino delgado, se activa el
tripsingeno, convirtindose en tripsina por la accin de una enzima situada en la
mucosa intestinal. A continuacin, la tripsina activa el quimiotripsingeno,
convirtindolo en quimiotripsina. Juntos, forman unas potentes sustancias
qumicas responsables de romper las protenas que forman parte de los alimentos
en pequeos fragmentos, llamados pptidos. Si el pncreas funciona
correctamente, se podr detectar tripsina y quimiotripsina en el intestino delgado y
en las heces.
La reaccin de Benedict identifica azcares reductores (aquellos que tienen su OH
anomrico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En
soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que
precipita de la solucin alcalina como Cu2O de color rojo-naranja. El fundamento
de esta reaccin radica en que en un medio alcalino, el ion cprico (otorgado por
el sulfato cprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo Aldehdo del azcar
(CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo
ladrillo correspondiente al xido cuproso (Cu2O).
El medio alcalino facilita que el azcar est de forma lineal, puesto que el azcar
en solucin forma un anillo de piransico o furansico. Una vez que el azcar est
lineal, su grupo aldehdo puede reaccionar con el ion cprico en solucin.
78
CANTIDAD
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 gota.
*** R3: Detec. Grasas
4.2 Material
NUM. CLAVE
1
2
3
4
5
CANTIDAD
2
5
2
3
1
CONC.
79
10.- BIBLIOGRAFA
10.1 Sndrome de malabsorcin. Disponible en:
http://www.cepvi.com/medicina/enfermedades/malabsorcion.shtml
10.2 La dietoterapia en el sndrome de malabsorcin. Revista Cubana Aliment Nutr
1996; 10 (1). Disponible en:
http://bvs.sld.cu/revistas/ali/vol10_1_96/ali11196.htm
80
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE Bioanlisis
REGIN VERACRUZ
HOJA DE RESULTADO
SEXO:
RESULTADO:
PRESENSIA DE TRIPSINA Y QUIMIOTRIPSINA: _____________
INTOLERANCIA A LA LACTOSA: __________________________
DETECCIN DE GRASAS: _______________________________
________________________________
Nombre y Firma de quien Reporta
81
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
82
PRACTICA No. 16
PERFIL HEPATICO COMPLETO
1. INTRODUCCION
En el hgado, se llevan a cabo las principales transformaciones metablicas del
organismo, siendo el rgano encargado de la transformacin bioqumica de los
principios inmediatos ingeridos en la dieta y absorbidos a nivel intestinal, as
como de su distribucin a todo el organismo. Para conseguirlo, lleva a cabo -entre
otras- las siguientes actuaciones:
83
2. OBJETIVO
Determinar e identificar las pruebas correspondientes a un perfil heptico completo
de una muestra problema.
84
3. REPORTE DE RESULTADOS
.
EDAD:
SEXO:
RESULTADO:
PRUEBA
RESULTADO
VALORES DE
REFERENCIA
AMINOTRANSFERASAS
(ALT)
AMINOTRANSFERASAS
(AST)
FOSFATASA ALCALINA
PROTEINAS TOTALES
ALBUMINA
BILIRRUBINA TOTAL
BILIRRUBINA DIRECTA
BILIRRUBINA
INDIRECTA
________________________________
Nombre y Firma de quien Reporta.
85
HOJA DE METACOGNICIN
1. QUE HICE?
3. QUE APRENDI?
86